本發(fā)明涉及微生物發(fā)酵領(lǐng)域，具體地說，涉及一種在谷物培養(yǎng)基中添加中藥組分促進(jìn)益生菌生長的方法。
背景技術(shù)：
：益生菌是一類定植于人體腸道、生殖系統(tǒng)內(nèi)，能產(chǎn)生確切健康功效從而改善宿主微生態(tài)平衡，對人體健康有重要作用的活的微生物的總稱，廣泛應(yīng)用于食品、保健品和藥品生產(chǎn)中。LGG（ATCC53103）是一種專利的鼠李糖乳桿菌，八十年代初由兩位美國教授從健康人體內(nèi)分離而得，也是目前全球研究最多的益生菌之一。大量的體外實(shí)驗(yàn)、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、人體實(shí)驗(yàn)和流行病學(xué)調(diào)查研究充分證明了LGG的安全性。功能性方面，LGG具有顯著的平衡和改善腸道菌群、預(yù)防和治療腹瀉、提高機(jī)體免疫力、預(yù)防過敏、結(jié)合并排除毒素、預(yù)防齲齒等功能。此外，作為一種益生菌，LGG還具有一些自身的優(yōu)勢：比如耐胃酸、耐膽汁、可定殖于人體腸道、最終產(chǎn)品（酸奶、牛奶等）保質(zhì)期內(nèi)活菌數(shù)保持恒定等(王世賓，劉金杰，喬嵐，程琳，益生菌LGG的研究，廣州食品工業(yè)科技[J],2003,s1,55-58)。研究發(fā)現(xiàn)，益生菌在人體腸道內(nèi)的數(shù)量對益生菌發(fā)揮保健和治療功效起到?jīng)Q定性作用。除了益生菌在體內(nèi)增殖，在加工過程中和貯藏期間保證其存活和保持生物活性等因素外，足量的活菌數(shù)是益生菌補(bǔ)充劑產(chǎn)品發(fā)揮其有效性的必要前提。植物性谷物原料為培養(yǎng)基，作為發(fā)酵底物，谷物不但可以為益生菌的生長提供必要的碳源和氮源、降低發(fā)酵成本；經(jīng)過發(fā)酵后的谷物可以明顯提高其營養(yǎng)價(jià)值和功能特性，發(fā)酵后產(chǎn)生的乳酸、乙酸乙酯、乙醛等芳香成分可改善谷物制品的風(fēng)味和香氣。趙麗娜以10%的燕麥芽-燕麥粉（燕麥芽粉：燕麥粉=2:1）和1%的脫脂乳粉為培養(yǎng)基，發(fā)酵9h可以使植物乳桿菌和嗜酸乳桿菌的活菌數(shù)達(dá)到8.75LogCFU/mL（趙麗娜，燕麥芽益生菌飲料的研制[D]，西北農(nóng)林科技大學(xué)，2015）。周小莉研究了七株供試乳酸菌在燕麥糊基質(zhì)中的生長情況，結(jié)果表明七株菌均可在燕麥中生長。且當(dāng)加入麥芽后，瑞士乳桿菌在谷物基質(zhì)中生長10小時(shí)后的活菌數(shù)為2.29×108cfu/ml（周小莉，乳酸菌在燕麥基質(zhì)中生長特性研究[D]，江南大學(xué)，2012）。駱超超等將釀酒酵母、嗜酸乳桿菌、保加利亞乳桿菌接種到玉米汁中，發(fā)現(xiàn)這三株菌可以玉米為發(fā)酵底物進(jìn)行繁殖發(fā)酵（駱超超，盧志勇等.幾種益生菌發(fā)酵谷物飲料制作工藝研究.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào).2011.42(5):127~129）。有專利文獻(xiàn)報(bào)道一種谷物培養(yǎng)基發(fā)酵增殖益生菌的方法，是以玉米、燕麥、大豆經(jīng)酶解等處理后培養(yǎng)兩歧雙歧桿菌、短雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌和保加利亞乳桿菌，38℃發(fā)酵22小時(shí)，發(fā)酵液pH可下降到4，并可獲得增殖的雙歧桿菌（中國專利申請?zhí)枺?00810015537.X）。有專利文獻(xiàn)報(bào)道一種以糯玉米培養(yǎng)基發(fā)酵益生菌的方法，將糯玉米去種皮打漿后如發(fā)酵罐，按1:1接種乳酸菌種L041和L042高效發(fā)酵劑28℃緩速發(fā)酵70-80h，發(fā)酵終端pH為2.9-3.3（中國專利申請?zhí)枺?00510047702.6）。谷物作為益生菌發(fā)酵基質(zhì)可以為其提供生長必須營養(yǎng)物質(zhì)，有效增殖益生菌，但這些谷物培養(yǎng)基在進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)之前均需進(jìn)行復(fù)雜的預(yù)處理，包括去種皮、蒸煮、酶解等復(fù)雜處理工藝。谷物膨化粉是經(jīng)高溫、高壓膨化制得，熟化過程中可以最大限度降低營養(yǎng)的損耗。經(jīng)膨化產(chǎn)生的高溫高壓、高剪切力可以使谷物中的淀粉顆粒膨化并精華，打開淀粉分子連接，增加食糜顆粒的表面積、提高淀粉的消化吸收率；同時(shí)膨化使蛋白質(zhì)肽鏈裂解為肽和氨基酸，大大提高蛋白質(zhì)的吸收率。使用膨化谷物可以有效簡化發(fā)酵工藝、縮短發(fā)酵周期，從而降低發(fā)酵成本。當(dāng)前提高益生菌活菌總數(shù)的研究方向主要集中在發(fā)酵工藝的優(yōu)化和復(fù)合菌高密度發(fā)酵。向發(fā)酵培養(yǎng)基中添加有益物質(zhì)不但能提高益生菌的活菌數(shù)，發(fā)酵乳還能兼具有益物質(zhì)的功能。林瑩等將菊粉、大豆低聚糖和低聚果糖等益生素添加到酸奶中進(jìn)行發(fā)酵，結(jié)果表明，益生素對雙歧桿菌的增殖有顯著影響，其中又以大豆低聚糖對雙歧桿菌的增殖最有效，活菌數(shù)量從0.49×108cfu/ml有效增殖到1.2×108cfu/ml（林瑩，梁世中．益生菌保健酸奶發(fā)酵劑配制和益生素對菌體數(shù)量影響的研究[J]．廣州食品工業(yè)科技，2003:41-43）。有專利文獻(xiàn)報(bào)道一種提高益生菌活菌數(shù)的方法，是將北蟲草提取物加入到常規(guī)的乳酸菌培養(yǎng)基中，能夠使乳酸菌活菌數(shù)從1.5×108cfu/ml提高到1.3×109cfu/ml(中國專利申請?zhí)枺?00910038553.5)。劉成國等將益生菌菌種接種到添加有紫薯漿的發(fā)酵牛乳基質(zhì)中進(jìn)行發(fā)酵，能夠顯著提高益生菌發(fā)酵乳中益生菌的活菌數(shù)，得到的益生菌發(fā)酵乳的最大活菌數(shù)從109-1010cfu/ml提高到1010-1012cfu/ml。脫脂乳中添加大豆蛋白水解物和酵母膏復(fù)合劑對嗜熱鏈球菌和保加利亞乳桿菌生長具有顯著的促進(jìn)作用，添加增殖復(fù)合劑可使乳酸菌數(shù)量比脫脂乳培養(yǎng)基提高1-2個(gè)數(shù)量級。(白鳳翎，曲玲童，張柏林等.大豆蛋白水解物促乳酸菌增殖發(fā)酵的研究[J].食品工業(yè)科技，2012，33(16):209-212)。李慧靜等研究了添加黃芪之后嗜酸乳桿菌的生長狀況的變化，她們把制備的黃芪提取液添加到改良的MRS培養(yǎng)基中，研究不同濃度黃芪提取液對嗜酸乳桿菌生長的影響，結(jié)果表明：當(dāng)添加黃芪提取液濃度為0.032g/mL時(shí)，對嗜酸乳桿菌生長有明顯的促進(jìn)作用，48hOD從0.6升高到0.8（李慧靜，嗜酸乳桿菌與黃芪相關(guān)性研究[D]，安徽工程大學(xué)，2013）。趙玉萍等研究不同濃度的甘草多糖和黨參多糖對鼠李糖乳桿菌的影響，發(fā)現(xiàn)1.5%(m/v)的黨參多糖對鼠李糖乳桿菌的增殖影響最大，其活菌數(shù)最大可達(dá)到3.29×109cfu/mL，提高了3倍左右，并且能夠使其提前2～3h達(dá)到最大產(chǎn)酸量，縮短發(fā)酵時(shí)間，較好地提高其耐酸、耐膽鹽及耐高溫的能力(趙玉萍，賈建波，中藥多糖對鼠李糖乳桿菌性質(zhì)的影響[J]，食品科技，200,8,P13-15)。徐海燕等研究低聚木糖對乳桿菌、雙歧桿菌及腸道菌群生長的影響。結(jié)果1%的低聚木糖對植物乳桿菌、鼠李糖乳桿菌、長雙歧桿菌和青春雙歧桿菌有明顯的增殖作用。（徐海燕，辛國芹，曹銀生，武香玉，汪孟娟，谷巍，低聚木糖對益生菌及人腸道菌群的影響，藥學(xué)研究2013第9期P500-503）當(dāng)前益生菌增殖技術(shù)取得了一定成果，向發(fā)酵培養(yǎng)基中添加有益物質(zhì)是一種高效、簡便的提高益生菌的活菌數(shù)的方法。不但能降低發(fā)酵生產(chǎn)成本，在某些情況甚至能夠縮短發(fā)酵周期。但是更多的具備特殊功能的添加劑的研究還不是很多。許多食物即藥物，它們之間并無絕對的分界線。山藥，性甘平，具有健脾補(bǔ)肺固腎、益氣養(yǎng)陰固精的功效。葛根，性辛甘而涼，既疏散肌腠經(jīng)絡(luò)之邪氣，又鼓舞脾胃清陽之氣上行，而生津止渴、升陽止瀉。玉竹，甘潤而補(bǔ)、平而少偏，入肺經(jīng)滋肺陰而能潤肺止咳；入胃經(jīng)養(yǎng)胃陰而能生津止渴。白蕓豆，味甘微溫，既能健脾化濕，又能化濕和中而消暑，還能解酒毒。黃芪，甘溫升補(bǔ)，主以扶正氣，兼能除水邪，既善補(bǔ)中氣、升舉清陽，又善補(bǔ)肺氣、益衛(wèi)固表。黃芩，苦寒清泄而燥，善清肺與大腸之火，除上中焦?jié)駸?；兼入血分而涼血止血。葡萄籽提取物（GSE），屬多酚類物質(zhì)，又稱原花青素。20世紀(jì)80年代以來，人們對其進(jìn)行了大量生化、藥理活性等研究。結(jié)果表明GSE是清除自由基能力最強(qiáng)的抗氧化劑，是迄今為止所發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)的有效氧自由基清除劑和脂質(zhì)過氧化抑制劑，能夠防治80多種因自由基引起的疾病，包括心臟病、癌癥及關(guān)節(jié)炎等病癥（趙超英,姚小曼.葡萄籽提取物原花青素的營養(yǎng)保健功能(綜述)[J].中國食品衛(wèi)生雜志,2000,12(6):38-41.）。因其資源豐富、療效確切、副作用小等特點(diǎn)，在歐洲、日本備受青睞，近年來又風(fēng)靡美國。桑葉含有多種活性化學(xué)成分，具有降血糖、降血脂、抗炎、抗衰老、抗病毒等功效（歐陽臻,陳鈞.桑葉的化學(xué)成分及其藥理作用研究進(jìn)展[J].江蘇大學(xué)學(xué)報(bào)自然科學(xué)版,2003,24(6):39-44.）。冬蟲夏草作為我國傳統(tǒng)的名貴藥材已經(jīng)有很長的歷史，蟲草多糖作為蟲草的主要活性成分之一，具有多種藥理活性。人工發(fā)酵蟲草多糖具有抗腫瘤、降血糖、抗氧化和提高免疫能力等多種藥理活性。但是經(jīng)過益生菌發(fā)酵的蟲草多糖的研究尚較少見。但是，當(dāng)前關(guān)于中藥組分對益生菌具有增殖作用的研究尚沒有文獻(xiàn)報(bào)道，添加中藥組分的微生態(tài)制劑也未見報(bào)道。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：為了解決現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本發(fā)明的目的是提供一種提高益生菌活菌數(shù)的方法。為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明提供了一種體外培養(yǎng)促進(jìn)益生菌生長和提高益生菌活菌數(shù)的方法，所述方法為：將益生菌菌種接種到添加有中藥組分溶液的培養(yǎng)基中，進(jìn)行益生菌的增殖發(fā)酵。前述方法具體技術(shù)方案包括以下步驟：（1）中藥組分溶液的制備：準(zhǔn)確稱量各種中藥組分配置成中藥組分的濃溶液，攪拌至溶解，115℃滅菌30min；（2）增菌培養(yǎng)基的配置：將步驟（1）制備得到的中藥組分濃溶液加至滅菌后的改良MRS培養(yǎng)基或谷物培養(yǎng)基中；同時(shí)準(zhǔn)備一個(gè)未添加中藥組分的對照組（3）益生菌種子液的制備：將保存到的益生菌菌株，經(jīng)復(fù)蘇、擴(kuò)大后制成種子液；（4）益生菌的增菌培養(yǎng)：將步驟（3）得到的益生菌種子液，接種到步驟（2）得到的增菌培養(yǎng)基中進(jìn)行增菌發(fā)酵培養(yǎng)。（5）活菌數(shù)的測定：對初始發(fā)酵培養(yǎng)基澄清無沉淀等渾濁現(xiàn)象的發(fā)酵液采用常規(guī)OD600光密度計(jì)數(shù)法。發(fā)酵的過程從0h開始，每間隔一段時(shí)間測定一次活菌數(shù)，最終獲得該益生菌的最大活菌數(shù)。同時(shí)，使用了流式細(xì)胞計(jì)數(shù)儀，對不能進(jìn)行光密度檢測的混濁發(fā)酵體系進(jìn)行活菌數(shù)檢測。較優(yōu)地，所述步驟（1）中，黃芩、山藥、葛根、玉竹、白蕓豆、葡萄籽、綠茶、黃芪以100mg/mL的濃度配置成中藥組分的DMSO濃溶液。DMSO溶液可以提高中藥組分的溶解性，且按之后的比例加入到增菌培養(yǎng)體系，DMSO并不會抑制益生菌的生長增殖。桑葉提取物、蟲草多糖（50%）以100mg/mL的濃度配置成中藥組分的水濃溶液。較優(yōu)地，所述步驟（2）中，步驟（1）中所得中藥組分溶液按一定體積加至增菌發(fā)酵培養(yǎng)基中，使中藥終濃度為0.1mg/mL至5mg/mL。所述的改良乳酸菌培養(yǎng)基（改良MRS）配置好后于115℃、0.1Mpa下滅菌30min。改良MRS配方如下：成分用量（g）蛋白胨20.0牛肉膏10.0酵母膏5.0檸檬酸氫二銨[（NH4）2HC6H5O7]4.0葡萄糖(C6H12O6·H2O)20.0吐溫-803.0mL乙酸鈉（CH3COONa·3H2O）5.0磷酸氫二鉀（K2HPO4·3H2O）2.0硫酸鎂（MgSO4·7H2O）0.25硫酸錳（MnSO4·H2O）0.05瓊脂18.0蒸餾水1000mLpH7.0所述的谷物培養(yǎng)基配方如下：8種80～100目的谷物膨化粉（燕麥、蕎麥、高粱米、粟米、薏米、綠豆、黑豆、黃豆）按照8%的總固含量配置成發(fā)酵培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中各種谷物組分含量相等。配置好的谷物培養(yǎng)基115℃、0.1Mpa下滅菌25-30min。較優(yōu)地，所述步驟（3）中，將益生菌（植物乳桿菌、保加利亞乳桿菌、干酪乳桿菌、糞腸球菌、唾液乳桿菌、鼠李糖乳桿菌、發(fā)酵乳桿菌）菌種凍存液，分別以1%(v/v)的比例加入到改良MRS培養(yǎng)基中，37℃靜止培養(yǎng)12小時(shí)進(jìn)行菌種的復(fù)蘇；按10%～20%(v/v)的比例將復(fù)蘇菌液接種到改良MRS培養(yǎng)基中，37℃靜止培養(yǎng)12小時(shí)進(jìn)行益生菌種子液的制備。較優(yōu)地，將步驟3)得到的益生菌種子液按照3%(v/v)的比例接種到步驟2)得到的增菌培養(yǎng)基中進(jìn)行增菌培養(yǎng)。當(dāng)混菌發(fā)酵時(shí)，多種菌種子液的總添加量為發(fā)酵體系的3%(v/v)。增菌培養(yǎng)溫度為37oC，增菌培養(yǎng)時(shí)間為16–24h。本發(fā)明以益生菌為發(fā)酵菌種，通過在增菌培養(yǎng)基中添加經(jīng)處理的中藥組分溶液，在適宜溫度下，顯著提高了增菌培養(yǎng)過程中益生菌的生長和活菌數(shù)，從而為之后制備益生菌微生態(tài)制劑提供大量活益生菌菌體。另外，如在微生態(tài)制劑中加入適量的中藥組分，不僅可以促進(jìn)人體胃腸道內(nèi)部分益生菌的生長，還可以起到其他保健作用。本發(fā)明還綜合利用了低成本的中藥組分資源，并發(fā)現(xiàn)了中藥組分在提高益生菌活菌數(shù)中的作用，并且對部分種屬的益生菌有明顯的增殖效果。通過添加中藥組分也可以顯著提高谷物發(fā)酵體系中的活菌數(shù)，同時(shí)增加谷物發(fā)酵制品的營養(yǎng)組分，增加了對人體健康的多方面調(diào)節(jié)作用。附圖說明圖1是不同濃度桑葉提取物對鼠李糖乳桿菌體外增殖的的作用。圖2是不同濃度蟲草多糖（50%）對鼠李糖乳桿菌體外增殖的的作用。圖3是流式細(xì)胞儀檢測谷物發(fā)酵體系中益生菌的活菌及死菌數(shù)量。圖4是添加中藥組分對谷物發(fā)酵培養(yǎng)基中益生菌的增殖作用。具體實(shí)施方式以下實(shí)施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例11)中藥組分溶液的制備：將桑葉提取物或蟲草多糖（50%）分別以100mg/mL的濃度加入蒸餾水中配置成中藥組分的水濃溶液，攪拌至溶解，115℃滅菌30min。2)增菌培養(yǎng)基的配置：將步驟(1)制備得到的中藥組分溶液按一定濃度加至改良MRS培養(yǎng)基中，使中藥組分終濃度為分別為0.5mg/mL、1mg/mL、5mg/mL。所述的改良乳酸菌培養(yǎng)基（改良MRS）配置好后于115℃、0.1Mpa下滅菌30min，滅菌后自然冷卻。配方如下：成分用量（g）蛋白胨20.0牛肉膏10.0酵母膏5.0檸檬酸氫二銨[（NH4）2HC6H5O7]4.0葡萄糖(C6H12O6·H2O)20.0吐溫-803.0mL乙酸鈉（CH3COONa·3H2O）5.0磷酸氫二鉀（K2HPO4·3H2O）2.0硫酸鎂（MgSO4·7H2O）0.25硫酸錳（MnSO4·H2O）0.05瓊脂18.0蒸餾水1000mLpH7.03)益生菌種子液的制備：將保存的鼠李糖乳桿菌菌株，經(jīng)復(fù)蘇擴(kuò)大后制成種子液。將鼠李糖乳桿菌種以1%(v/v)的比例加入到改良MRS培養(yǎng)基中，37℃靜止培養(yǎng)12小時(shí)進(jìn)行菌種的復(fù)蘇；按10%(v/v)的比例將復(fù)蘇菌液接種到改良MRS培養(yǎng)基中，37℃靜止培養(yǎng)12小時(shí)進(jìn)行鼠李糖乳桿菌種子液的制備。4)益生菌的增菌培養(yǎng)：將步驟(3)得到的益生菌種子液接種到步驟(2)得到的增菌培養(yǎng)基中進(jìn)行增菌。種子液按照3%(v/v)的比例加至增菌培養(yǎng)基。增菌培養(yǎng)溫度為37℃，增菌培養(yǎng)時(shí)間為16h。5）活菌數(shù)的測定：發(fā)酵的過程從0h開始，采用常規(guī)10倍稀釋平板厭氧培養(yǎng)計(jì)數(shù)法每間隔一段時(shí)間測定一次活菌數(shù)，最終獲得該益生菌的最大活菌數(shù)。實(shí)施例21)中藥組分溶液的制備：將黃芩、山藥、葛根、玉竹、白蕓豆、葡萄籽、綠茶、黃芪加入DMSO中，攪拌至溶解，115℃滅菌30min。所述中藥組分以100mg/mL的濃度配置成中藥組分的DMSO濃溶液。2)增菌培養(yǎng)基的配置：將步驟(1)制備得到的中藥組分溶液按一定濃度加至谷物培養(yǎng)基中，使中藥組分終濃度為0.1mg/mL。所述的谷物培養(yǎng)基配置方法為：將8種80～100目的谷物膨化粉（燕麥、蕎麥、高粱米、粟米、薏米、綠豆、黑豆、黃豆）按照8%的總固含量配置成發(fā)酵培養(yǎng)基，其中谷物培養(yǎng)基中各種谷物組分含量相等。配置好的谷物培養(yǎng)基115℃、0.1Mpa下滅菌25-30min。3)益生菌種子液的制備：將保存的益生菌菌株（植物乳桿菌、保加利亞乳桿菌、干酪乳桿菌、糞腸球菌、唾液乳桿菌、鼠李糖乳桿菌、發(fā)酵乳桿菌），經(jīng)復(fù)蘇擴(kuò)大后制成種子液。將鼠李糖乳桿菌種以1%(v/v)的比例加入到改良MRS培養(yǎng)基中，37℃靜止培養(yǎng)12小時(shí)進(jìn)行菌種的復(fù)蘇；按10%(v/v)的比例將復(fù)蘇菌液接種到改良MRS培養(yǎng)基中，37℃靜止培養(yǎng)12小時(shí)進(jìn)行益生菌菌種子液的制備。所述的改良乳酸菌培養(yǎng)基（改良MRS）配置好后于115℃、0.1Mpa下滅菌30min，滅菌后自然冷卻。配方如下：成分用量（g）蛋白胨20.0牛肉膏10.0酵母膏5.0檸檬酸氫二銨[（NH4）2HC6H5O7]4.0葡萄糖(C6H12O6·H2O)20.0吐溫-803.0mL乙酸鈉（CH3COONa·3H2O）5.0磷酸氫二鉀（K2HPO4·3H2O）2.0硫酸鎂（MgSO4·7H2O）0.25硫酸錳（MnSO4·H2O）0.05瓊脂18.0蒸餾水1000mLpH7.04)益生菌的增菌培養(yǎng)：將步驟(3)得到的益生菌種子液接種到步驟(2)得到的增菌培養(yǎng)基中進(jìn)行增菌。種子液按照3%(v/v)的比例加至增菌培養(yǎng)基。增菌培養(yǎng)溫度為37℃，增菌培養(yǎng)時(shí)間為20h。5）活菌數(shù)的測定：采用流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)法測定發(fā)酵液中益生菌菌數(shù)，獲得谷物發(fā)酵液中益生菌的活菌數(shù)與死菌數(shù)。流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)法的具體操作如下所述：a.樣品準(zhǔn)備，將取出的發(fā)酵液進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂專勾龣z測菌液樣品中活菌數(shù)的數(shù)量范圍在5.5×105～6.5×105CFU/mL。稀釋后的發(fā)酵液樣品經(jīng)300目紗網(wǎng)過濾，取稀釋后的待檢樣品200μL加入到1.5mL的EP管中，于37℃恒溫培養(yǎng)箱溫浴3分鐘。b.樣品染色，待檢樣品200μL中加入2μL100×SybrGreenI和2μL100×PI，37℃避光染色10分鐘。SybrGreenI和PI(PropidiumIodide)是兩種常見的DNA熒光染料。SybrGreenI能穿透活細(xì)胞和死細(xì)胞的細(xì)胞膜，而PI不能很好地穿透活細(xì)胞的細(xì)胞膜。利用SybrGreenI和PI染色細(xì)菌，可將細(xì)菌分為三群：SybrGreenI(+)PI(-)的活細(xì)菌，SybrGreenI(+)PI(+)的死細(xì)菌，以及處于兩群之間的損傷細(xì)菌。c.C6Accuri絕對計(jì)數(shù)，C6Accuri流式細(xì)胞儀分析樣品，閾值設(shè)為FSC-H大于10000，流速選擇慢速，采樣量設(shè)置為60μL，進(jìn)行絕對計(jì)數(shù)檢測。d.以FL1-H為橫坐標(biāo)，F(xiàn)L2-A為縱坐標(biāo)，畫細(xì)胞密度圖。通過分析水樣密度圖、菌液以及加熱后的菌液，根據(jù)這些樣品的細(xì)胞分群，圈設(shè)門計(jì)數(shù)。根據(jù)本發(fā)明得到的益生菌谷物發(fā)酵液的最大活菌數(shù)可達(dá)到4.1×108CFU/mL，與未添加中藥組分成分的發(fā)酵液獲得的最大活菌數(shù)1.4×108CFU/mL相比，有顯著的提高。雖然，上文中己經(jīng)用一般性說明及具體實(shí)施方案對本發(fā)明作了詳盡的描述，但在本發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對之作一些修改或改進(jìn)，這對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進(jìn)，均屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。當(dāng)前第1頁1 2 3