一種東南亞普通野生稻自交系胚性愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)基的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種誘導(dǎo)培養(yǎng)基和誘導(dǎo)方法，具體涉及一種東南亞普通野生稻自交系 胚性愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)基和誘導(dǎo)方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 植物脫分化與分化受到多種因素的影響，如基因型、外植體選擇、培養(yǎng)基類(lèi)型以及 它們之間的互作，但是至今為止，并沒(méi)有能夠建立一種適應(yīng)所有基因型的"萬(wàn)能培養(yǎng)基" (Bolibok，2006)。但是野生稻的基因組和栽培稻基因組相差較大，因此適用于栽培稻的培 養(yǎng)體系不能對(duì)所有的野生稻產(chǎn)生同樣的積極作用。如藥用野生稻的離體培養(yǎng)就受到基因型 的限制，較難獲得藥用野生稻的胚性愈傷組織(丁玉梅，2003);高桿野生稻葉誘導(dǎo)愈傷的效 率較低（倪文津，2007);然而從普通野生稻的冷凍保存的愈傷中能夠分化成成熟植株 (Zeliang，2010)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)存在的不足之處而提供了一種東南亞普通野生 稻自交系胚性愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)基和誘導(dǎo)方法。
[0004] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，所采取的技術(shù)方案：一種東南亞普通野生稻胚性愈傷組織的誘 導(dǎo)培養(yǎng)基，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基包括以下濃度的組分：

[0007]所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基的pH為5.4。
[0008]本發(fā)明誘導(dǎo)培養(yǎng)基是在N6D培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上通過(guò)比較不同激素對(duì)東南亞普通野生 稻自交系胚性愈傷組織的影響后得到的。
[0009]本發(fā)明提供了一種東南亞普通野生稻自交系胚性愈傷組織的誘導(dǎo)方法，所述方法 是將脫殼的東南亞普通野生稻自交系種子接種于上述所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng) 的。
[0010] 優(yōu)選地，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)溫度為25~28 °C。
[0011]優(yōu)選地，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)時(shí)間為12~18天。
[0012]優(yōu)選地，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)是在光照下進(jìn)行的。
[0013] 優(yōu)選地，所述光照強(qiáng)度為300001X，光照時(shí)間為16h/d。
[0014] 優(yōu)選地，在將脫殼的東南亞普通野生稻種子接種于所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基之前，對(duì)所述 東南亞普通野生稻種子進(jìn)行消毒處理。
[0015] 優(yōu)選地，所述消除處理包括以下步驟:將所述東南亞普通野生稻自交系種子先用 75 %乙醇溶液浸泡2min，然后用20 %NaC10溶液振蕩消毒50min，再用無(wú)菌水沖洗6~7次，最 后吹干所述東南亞普通野生稻自交系種子。所述75%乙醇溶液是指質(zhì)量濃度為75%的乙醇 水溶液，所述20%NaC10溶液是指質(zhì)量濃度為20%的NaCIO水溶液。
[0016] 本發(fā)明的有益效果在于:本發(fā)明提供了一種東南亞普通野生稻自交系胚性愈傷組 織的誘導(dǎo)培養(yǎng)基，在該培養(yǎng)基上誘導(dǎo)培養(yǎng)能夠提高出愈率，增加愈傷直徑，提高愈傷質(zhì)量。
【附圖說(shuō)明】
[0017] 圖1為本發(fā)明實(shí)施例1中所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基上誘導(dǎo)東南亞普通野生稻自交系產(chǎn)生胚 性愈傷的形態(tài)圖。
【具體實(shí)施方式】
[0018] 為更好的說(shuō)明本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)，下面將結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明 作進(jìn)一步說(shuō)明。
[0019] 實(shí)施例1
[0020] 1、材料和方法
[0021] 1.1、材料
[0022]東南亞普通野生稻自交系，現(xiàn)保存于國(guó)家種質(zhì)南寧野生稻圃內(nèi)，采取池栽方式進(jìn) 行異位種植管理。
[0023] 1.2、東南亞普通野生稻自交系胚性愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)基如表1 [0024] 表1誘導(dǎo)培養(yǎng)基組成

[0027]所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基的pH為5.4。
[0028] 對(duì)照培養(yǎng)基:將上述培養(yǎng)基中的NAA、IAA和KT去掉后的培養(yǎng)基。
[0029] 1.3、試劑
[0030] IAA、NAA、2，4-D、6-BA、KT與各類(lèi)組織培養(yǎng)所用化學(xué)試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。
[0031] 1.4、東南亞普通野生稻自交系胚性愈傷組的誘導(dǎo)培養(yǎng)方法
[0032]將新收獲的東南亞普通野生稻自交系種子放入烘箱35°C烘干24h，將烘干的野生 稻自交系種子脫殼，然后用75 %乙醇浸泡2min，再用20 %NaC10振蕩消毒50min，無(wú)菌水沖洗 6~7次，然后置于無(wú)菌濾紙上吸干水分，于超凈臺(tái)中吹干30min并分別接種在愈傷組織誘導(dǎo) 培養(yǎng)基(表1)和對(duì)照培養(yǎng)基上，每皿放置20粒作為1個(gè)重復(fù)，每種培養(yǎng)基設(shè)置3個(gè)重復(fù)。于28 °C條件下進(jìn)行光照培養(yǎng)，光照強(qiáng)度為300001X，光照時(shí)間為16h/d。接種15d后計(jì)算出愈率，出 愈率=長(zhǎng)出愈傷組織的種子數(shù)/接種種子數(shù)X 100%。
[0033] 2、結(jié)果
[0034] 通過(guò)對(duì)比不同培養(yǎng)基上誘導(dǎo)的愈傷率，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基的出愈 率為19.00 %，比對(duì)照組培養(yǎng)基的出愈率高5 %。
[0035]通過(guò)比較不同培養(yǎng)基上誘導(dǎo)的胚性愈傷的直徑，結(jié)果發(fā)現(xiàn)本發(fā)明所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基 上生長(zhǎng)的愈傷直徑達(dá)到0 · 25cm，而對(duì)照培養(yǎng)基的愈傷直徑為0 · 23cm〇 [0036]在胚性愈傷質(zhì)量方面，對(duì)照培養(yǎng)基培養(yǎng)的愈傷，色澤乳白，疏松膨大，有顆粒狀突 起;本發(fā)明所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的愈傷，色澤偏黃，質(zhì)地緊密，顆粒突起較多（如圖1所 示）。說(shuō)明本發(fā)明誘導(dǎo)培養(yǎng)基能夠改善愈傷健康情況，提高愈傷質(zhì)量。
[0037] 另外，本發(fā)明發(fā)現(xiàn)誘導(dǎo)培養(yǎng)的優(yōu)選溫度為25_28°C，并且培養(yǎng)12天就可觀察到愈 傷。
[0038] 最后所應(yīng)當(dāng)說(shuō)明的是，以上實(shí)施例僅用以說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案而非對(duì)本發(fā)明保 護(hù)范圍的限制，盡管參照較佳實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作了詳細(xì)說(shuō)明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng) 理解，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì) 和范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種東南亞普通野生稻自交系胚性愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)基，其特征在于，所述誘導(dǎo) 培養(yǎng)基包括以下濃度的組分： KNO^ 2830mg/L (NH4)2S〇4 463 mg/L MgS04,7H20 185 mg/L CaCl?/2H20 166 mg/L KH2P〇4 400 mg/L Na2EDTA 37.3 mg/L FeS〇4 · 7H20 27.8 mg/L MnS〇4*4H20 4,4 mg/L ZnS04,7H20 1.5 mg/L KI 0.6 mg/L H,B〇^ 1.6 mg/L 酪蛋白氨基酸 200 mg/L 甘氨酸 2.0 mg/L L-脯氨酸 2800 mg/L 肌醇 100 mg/L 煙酸 0.5 mg/L 鹽酸維生素 B6: 0.5 mg/L 維生素 B1 1.0 mg/L 2, 4-D 2.0 mg/L NAA 2.0 mg/L IAA 1.5 mg/L KT 0.5 mg/L 植物凝膠 2500 mg/L 蔗糖 30000 mg/L; 所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基的pH為5.4。2. -種東南亞普通野生稻自交系胚性愈傷組織的誘導(dǎo)方法，其特征在于，所述方法是 將脫殼的東南亞普通野生稻自交系種子接種于如權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進(jìn)行誘導(dǎo) 培養(yǎng)的。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的誘導(dǎo)方法，其特征在于，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)溫度為25~28°C。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的誘導(dǎo)方法，其特征在于，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)時(shí)間為12~18天。5. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的誘導(dǎo)方法，其特征在于，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)是在光照下進(jìn)行的。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的誘導(dǎo)方法，其特征在于，所述光照強(qiáng)度為300001X，光照時(shí)間為 16h/d〇7. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的誘導(dǎo)方法，其特征在于，在將脫殼的東南亞普通野生稻自交系 種子接種于所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基之前，對(duì)所述東南亞普通野生稻種子進(jìn)行消毒處理。8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的誘導(dǎo)方法，其特征在于，所述消除處理包括以下步驟:將所述 東南亞普通野生稻自交系種子先用75%乙醇溶液浸泡2min，然后用20%NaC10溶液振蕩消 毒50min，再用無(wú)菌水沖洗6~7次，最后吹干所述東南亞普通野生稻自交系種子。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明提供了一種東南亞普通野生稻自交系胚性愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)基，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基是在N6D培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加特定濃度的特定激素得到的，在該培養(yǎng)基上誘導(dǎo)培養(yǎng)能夠提高出愈率，增加愈傷直徑，提高愈傷質(zhì)量。
【IPC分類(lèi)】A01H4/00
【公開(kāi)號(hào)】CN105613290
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201511018196
【發(fā)明人】潘英華, 梁云濤, 徐志健, 黃娟
【申請(qǐng)人】廣西壯族自治區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)院水稻研究所
【公開(kāi)日】2016年6月1日
【申請(qǐng)日】2015年12月29日