一種從長春花中提取長春堿的新方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種從長春花中提取長春堿的新方法，其處理步驟包括：將長春花去除雜質(zhì)后粉碎，過50目篩，加入乙醇溶液，加酸調(diào)節(jié)PH為2~3，1h后加入生物酶，于雙頻超聲裝置中酶解，過濾，濾液用濃氨水調(diào)PH10.0，乙酸乙酯萃取，收集有機(jī)相，無水硫酸鈉干燥，過濾，減壓濃縮至干，少量乙醇溶解，經(jīng)硅膠柱層析純化，得高純度的長春堿。本發(fā)明具有工藝簡單、提取率高、純度高的優(yōu)點(diǎn)，適宜工業(yè)化生產(chǎn)。
【專利說明】一種從長春花中提取長春堿的新方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種從長春花中提取長春堿的新方法，尤其涉及一種利用生物酶-雙頻超聲波相結(jié)合提取長春堿的方法，屬于天然藥物【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002]長春花又名雁來紅、日日新、四時(shí)春、三萬花，是夾竹桃科植物長春花的全草。長春花中含有大量的生物堿，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，熱穩(wěn)定性差，且含量甚微。長春堿是其中最主要的一種，為針狀晶體，不溶于水、石油醚，溶于乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿、甲醇，味苦，有引濕性，遇光或熱色漸變黃，mp2lf216°C，具有抗腫瘤活性，可用于治療何杰金氏病和絨毛上皮癌、淋巴肉瘤和卵巢癌等。
[0003]目前長春堿的提取方法主要有浸泡法、滲漉法、回流法等傳統(tǒng)中藥提取方法，但這些方法提取效率較低、操作繁瑣。近年來也有用超聲波提取和微波提取的方法，但單頻超聲波容易產(chǎn)生駐波，而微波溫度較高易破壞熱不穩(wěn)定成分，從而影響長春堿的提取。本發(fā)明利用酶解破壞細(xì)胞壁和雙頻超聲的空化效應(yīng)，在低溫下即可得到高的提取率，為熱不穩(wěn)定物質(zhì)的提取提供了一種新的強(qiáng)化方法。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供了一種反應(yīng)條件溫和、提取率高、純度高的提取分離長春堿的新方法。
[0005]本發(fā)明包括以下步驟:
a.將長春花去除雜質(zhì)后粉碎，過50目篩，得粉末；
b.取粉末，加入5、倍的70?80%的乙醇溶液，加硫酸調(diào)節(jié)PH為2.0^3.0, Ih后加入長春花重量0.02、.05%的生物酶，放入雙頻超聲裝置中，超聲頻率分別為20Hz、40Hz，超聲功率為300?400W，于40?50°C酶解5?6h ；
c.酶解液過濾，濾液用濃氨水調(diào)PH10.0，乙酸乙酯萃取，收集有機(jī)相，無水硫酸鈉干燥，過濾，減壓濃縮至干，得濃縮物；
d.將步驟c中的濃縮物用少量乙醇溶解，經(jīng)硅膠柱層析，以V(二氯甲烷)與V (甲醇)為18:1洗脫劑進(jìn)行純化，收集洗脫液，濃縮，得高純度的長春堿。
[0006]步驟b中所述的生物酶為纖維素酶、半纖維素酶與果膠酶以0.5:0.2:0.3混合的復(fù)合酶。
[0007]步驟b中所述的超聲功率為雙頻超聲作用時(shí)總功率(20KHz與40KHz各取一半)。
[0008]本發(fā)明選用纖維素酶、半纖維素酶來水解結(jié)構(gòu)致密的植物細(xì)胞壁，有利于胞內(nèi)物質(zhì)的溶出；而果膠酶能將長春花中的果膠質(zhì)等不溶物水解。再結(jié)合雙頻超聲波振動(dòng)的空化作用，減少駐波，在低溫下即可得到較高的提取率，避免了高溫使長春堿的分解氧化。該方法工藝簡單、成本低、反應(yīng)條件溫和、提取率高、純度高，適于工業(yè)化生產(chǎn)。
[0009]下面將結(jié)合【具體實(shí)施方式】進(jìn)一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于下列實(shí)施方式。
[0010]【具體實(shí)施方式】:
實(shí)施例1:
將長春花去除雜質(zhì)后粉碎，過50目篩，取500g粉末，加入8倍的70%的乙醇溶液，加硫酸調(diào)節(jié)PH為2.0, Ih后加入長春花重量0.02%的生物酶(纖維素酶:半纖維素酶:果膠酶為0.5:0.2:0.3)，放入雙頻超聲裝置中，超聲頻率分別為20Hz、40Hz，超聲功率為300W，于40°C酶解5h，酶解液過濾，濾液用濃氨水調(diào)PH10.0,乙酸乙酯萃取，收集有機(jī)相，無水硫酸鈉干燥，過濾，減壓濃縮至干，將濃縮物用少量乙醇溶解，經(jīng)硅膠柱層析，以V (二氯甲烷)與
V(甲醇)為18:1洗脫劑進(jìn)行純化，收集洗脫液，濃縮，得長春堿0.18g，純度為96.1%。
[0011]實(shí)施例2:
將長春花去除雜質(zhì)后粉碎，過50目篩，取500g粉末，加入6倍的80%的乙醇溶液，加硫酸調(diào)節(jié)PH為2.5，Ih后加入長春花重量0.04%的生物酶(纖維素酶:半纖維素酶:果膠酶為0.5:0.2:0.3)，放入雙頻超聲裝置中，超聲頻率分別為20Hz、40Hz，超聲功率為400W，于45°C酶解6h，酶解液過濾，濾液用濃氨水調(diào)PH10.0,乙酸乙酯萃取，收集有機(jī)相，無水硫酸鈉干燥，過濾，減壓濃縮至干，將濃縮物用少量乙醇溶解，經(jīng)硅膠柱層析，以V (二氯甲烷)與
V(甲醇)為18:1洗脫劑進(jìn)行純化，收集洗脫液，濃縮，得長春堿0.24g，純度為98.8%。
[0012]實(shí)施例3:
將長春花去除雜質(zhì)后粉碎，過50目篩，取500g粉末，加入5倍的75%的乙醇溶液，加硫酸調(diào)節(jié)PH為3.0, Ih后加入長春花重量0.05%的生物酶(纖維素酶:半纖維素酶:果膠酶為0.5:0.2:0.3)，放入雙頻超聲裝置中，超聲頻率分別為20Hz、40Hz，超聲功率為350W，于50°C酶解5.5h，酶解液過濾，濾液用濃氨水調(diào)PH10.0,乙酸乙酯萃取，收集有機(jī)相，無水硫酸鈉干燥，過濾，減壓濃縮至干，將濃縮物用少量乙醇溶解，經(jīng)硅膠柱層析，以V (二氯甲烷)與V (甲醇)為18:1洗脫劑進(jìn)行純化，收集洗脫液，濃縮，得長春堿0.19g，純度為97.5%。
【權(quán)利要求】
1.一種從長春花中提取長春堿的新方法，其特征在于，包括以下步驟:將長春花去除雜質(zhì)后粉碎，過50目篩，加入5、倍的70?80%的乙醇溶液，加硫酸調(diào)節(jié)PH為2.0^3.0，Ih后加入長春花重量0.02、.05%的生物酶，放入雙頻超聲裝置中，超聲頻率分別為20Hz、40Hz，超聲功率為30(T400W，于4(T50°C酶解5飛h，過濾，濾液用濃氨水調(diào)PH10.0,乙酸乙酯萃取，收集有機(jī)相，無水硫酸鈉干燥，過濾，減壓濃縮至干，少量乙醇溶解，經(jīng)硅膠柱層析，以V (二氯甲烷)與V (甲醇)為18:1洗脫劑進(jìn)行純化，收集洗脫液，濃縮，得高純度的長春堿。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從長春花中提取長春堿的新方法，其特征在于，所述的生物酶為纖維素酶、半纖維素酶與果膠酶以0.5:0.2:0.3混合的復(fù)合酶。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從長春花中提取長春堿的新方法，其特征在于，所述的超聲功率為雙頻超聲作用時(shí)總功率(20KHz與40KHz各取一半)。
【文檔編號(hào)】C07D519/04GK104230961SQ201410445812
【公開日】2014年12月24日 申請(qǐng)日期:2014年9月4日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月4日
【發(fā)明者】張金芳, 楊存 申請(qǐng)人:南京標(biāo)科生物科技有限公司