1.一種尖鋤蚌F型線粒體基因組全序列擴(kuò)增的方法,其特征是包括以下步驟:
(1)基因組DNA提取;
(2)普通PCR擴(kuò)增及測(cè)序:使用三對(duì)引物如下:
COIP1: GGT CAA CAA ATC ATA AAG ATA TTG G
COIP2: TAA ACT TCA GGG TGA CCA AAA AAT CA
16SP1: CGC CTG TTT ATC AAA AAC AT
16SP2: CCG GTC TGA ACT CAG ATC ACG T
ND1P1: TGGCAGAAAAGTGCATCAGATTAAAGC
ND1P2: CCTGCTTGGAAGGCAAGTGTACT
(3)設(shè)計(jì)長(zhǎng)片段引物:設(shè)計(jì)的三對(duì)長(zhǎng)片段引物如下:
F COI-16sP1: TTCAGCCACTAAGCCAGGAG
F COI-16sP2:CTTGTTGGTTCCGAGATTGC
F 16s-ND1 P1:CAACCGCTATGAAAGGACAG
F 16s-ND1 P2:GGGTTAGAATAAACGGAAGGT
F ND1-COI P1:TGCCGAGGGCGAATCAGA
F ND1-COI P2: TTGGTGGAAAGTGGTGTTGGA
(4)LA-PCR擴(kuò)增及測(cè)序;
(5)序列拼接;
(6)基因注釋。