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一種脊尾白蝦線粒體基因組拷貝數(shù)的定量檢測(cè)方法與流程

文檔序號(hào):12109130閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種脊尾白蝦線粒體基因組拷貝數(shù)的定量檢測(cè)方法,包括如下步驟:1)選擇脊尾白蝦細(xì)胞核基因組中的腺苷酸轉(zhuǎn)移酶基因(ANT)和線粒體基因組中ATP6基因作為各自基因組的單拷貝基因;2)分別設(shè)計(jì)細(xì)胞核基因組和線粒體基因組單拷貝基因的熒光實(shí)時(shí)定量PCR擴(kuò)增反應(yīng)的引物和Taqman熒光探針;3)分別制作核基因組、線粒體基因組單拷貝基因的實(shí)時(shí)定量PCR反應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品及標(biāo)準(zhǔn)曲線;4)分別以待檢DNA樣本和核基因組、線粒體基因組單拷貝基因標(biāo)準(zhǔn)品為實(shí)時(shí)定量PCR反應(yīng)的模板,進(jìn)行TaqMan熒光定量PCR反應(yīng),根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,進(jìn)一步根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算待檢樣本中細(xì)胞核基因組單拷貝基因和線粒體基因組單拷貝基因的拷貝數(shù);5)根據(jù)如下公式獲得待檢樣本組織每個(gè)細(xì)胞中的平均線粒體基因組拷貝數(shù):線粒體基因組拷貝數(shù)/細(xì)胞=2×線粒體單拷貝基因拷貝數(shù)/核基因組單拷貝基因拷貝數(shù)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種脊尾白蝦線粒體基因組拷貝數(shù)的定量檢測(cè)方法,其特征在于選擇的單拷貝基因分別是脊尾白蝦的細(xì)胞核基因組中的腺苷酸轉(zhuǎn)移酶基因(ANT)和線粒體基因組中的ATP6基因。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種脊尾白蝦線粒體基因組拷貝數(shù)的定量檢測(cè)方法,其特征在于所選取的單拷貝基因用于熒光實(shí)時(shí)定量PCR分析的引物對(duì)分別為:ANT基因的正向引物(ANT-F)序列為5’-GGGTTGAAAGAGGGAATG-3’,反向引物(ANT-R)序列為5’-CAAGCATTATATTTTGTACAGAC-3’;ATP6基因的正向引物(ATP6-F)序列為5’-TGCATGGTCCTCTCTCACGCT-3’,反向引物(ATP6-R)序列為5’-AGTGAGACGAAGACAAGGGTGCC-3’。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種脊尾白蝦線粒體基因組拷貝數(shù)的定量檢測(cè)方法,其特征在于所選取的單拷貝基因用于熒光實(shí)時(shí)定量PCR分析的Taqman探針分別為:ANT為5’-CTTACTACAGGGCATGTCGCTCC-3’、ATP6為5’-CCTTTTAGGGCCAGCCAACC-3’;并分別在探針的5’末端經(jīng)FAM修飾、3’末端經(jīng)TAMRA修飾。

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