本發(fā)明屬于抗癌藥物領域，具體涉及一種具有抗癌活性的吡唑官能團化的氮雜環(huán)卡賓釕化合物。
背景技術：
：金屬化合物在抗腫瘤藥物領域里具有非常大的應用價值，例如最早被批準運用于臨床的順鉑類金屬化合物，如今已作為化療藥物用來治療癌癥。但是順鉑類藥物在使用過程會有劑量限制性毒性和使癌細胞產(chǎn)生耐藥性。為了克服這些缺點，就需要尋找更多更新穎的金屬化合物。氮雜環(huán)卡賓金屬化合物因其具有穩(wěn)定的配位能力、合成方便、結構多變，在生物化學領域得到了廣泛的應用。其中氮雜環(huán)卡賓金、銀、鉑、釕具有抗腫瘤活性，顯示出了潛在的藥用價值。因此，開發(fā)一類具有抗癌活性的氮雜環(huán)卡賓釕化合物在抗癌藥物研發(fā)方面具有重要意義。技術實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是提供一種新的具有抗癌活性的吡唑官能團化的氮雜環(huán)卡賓釕化合物及其制備方法和應用。一種吡唑官能團化的氮雜環(huán)卡賓釕化合物，結構通式為[LRu(p-cymene)Cl]+(X)-，其中陽離子[LRu(p-cymene)Cl]+的結構式如下：其中，R1和R2獨立地選自C1～C5烷基、取代或者未取代的芐基、取代或者未取代的苯基；所述的芐基或苯基上的取代基選自一個或多個C1～C5烷基、鹵素、三氟甲基。該類化合物以吡唑官能團化的氮雜環(huán)卡賓化合物為配體，其中心原子為二價釕金屬離子，分別與一個吡唑碳原子、一個卡賓碳原子，一個氯離子和一個p-cymene基團配位。其中吡唑官能團化的氮雜環(huán)卡賓配體的結構如下：作為優(yōu)選，所述的R1和R2獨立地選自甲基、乙基、異丙基、芐基、2,4,6-三甲基苯基、2,6-二異丙基苯基、4-叔丁基芐基、4-三氟甲基芐基、2,3,4,5,6-五甲基芐基或2,3,4,5,6-五氟芐基。作為優(yōu)選，所述的氮雜環(huán)卡賓釕化合物的陰離子X-為六氟磷酸根離子，四氟硼酸根離子或鹵素離子。本發(fā)明還提供了一種所述的氮雜環(huán)卡賓釕化合物的制備方法，包括：(1)以乙腈為溶劑，加入吡唑官能化的咪唑鹽配體和氧化銀，避光反應4-6小時，得到中間反應液；其中，咪唑鹽配體的結構如下：(2)向步驟(1)得到的中間反應液中加入[Ru(p-cymene)Cl2]2，繼續(xù)反應2-4小時，經(jīng)過后處理得到所述的氮雜環(huán)卡賓釕化合物。步驟(1)中，咪唑鹽配體和氧化銀的摩爾比為2：1，反應溫度為40～60℃。其中，原料咪唑鹽配體采用如下方法制備得到：以5-甲基-1-氫-吡唑甲酸乙酯為起始化合物，通過烷基化、還原、氯化、與取代咪唑反應得到吡唑官能化的咪唑鹽配體。步驟(2)中，咪唑鹽配體與[Ru(p-cymene)Cl2]2的摩爾比為2：1，反應溫度為室溫。所述的后處理包括：對反應液進行過濾，濾液濃縮，加入乙醚，重結晶得到吡唑官能化的氮雜環(huán)卡賓釕化合物。本發(fā)明還提供了一種所述的氮雜環(huán)卡賓釕化合物在制備抗癌藥物中的應用。作為優(yōu)選，所述的抗癌藥物用于預防或/和抑制乳腺癌細胞(Bcap-37)、腸癌細胞(LoVo)、胃癌細胞(SCG7901)和耐順鉑胃癌細胞(SCG7901-R)本發(fā)明合成的新型吡唑官能化的氮雜環(huán)卡賓釕化合物，其中吡唑環(huán)上的取代基和咪唑環(huán)上的取代基容易改變、易于合成、性能穩(wěn)定、環(huán)境友好，在空氣中能長期穩(wěn)定存在。在乳腺癌細胞(Bcap-37)、腸癌細胞(LoVo)、胃癌細胞(SCG7901)和耐順鉑胃癌細胞(SCG7901-R)的細胞毒性實驗中，表現(xiàn)出非常理想的生物活性，能有效抑制癌細胞分裂繁殖。具體實施方式通過下述實施例將有助于理解本發(fā)明，但不限制本發(fā)明的內(nèi)容。實施例15-甲基-1-氫-吡唑甲酸乙酯(30.8g，200mmol)溶于200mL干燥四氫呋喃溶液中，在冰浴條件下緩慢加入去油氫化鈉(4.8g，200mmol)，完全加入氫化鈉后升溫至50℃攪拌1小時，冷卻至室溫。然后將碘甲烷(28.2g，200mmol)溶于100mL四氫呋喃中，緩慢滴加到反應中，滴加完畢，加熱至50℃繼續(xù)攪拌2小時。反應完全后，冷卻至室溫，減壓除去四氫呋喃，然后加入100mL水，用乙酸乙酯萃取(100mL×3),合并有機層，干燥，減壓除去乙酸乙酯得到5-甲基-1-甲基-吡唑甲酸乙酯26.6g，85％。在干燥的三頸燒瓶中加入氫化鋁鋰(3.8g，100mmol)，200mL干燥的四氫呋喃，然后將5-甲基-1-甲基-吡唑甲酸乙酯(16.8g，100mmol)溶于100mL干燥的四氫呋喃中，緩慢滴加到三頸燒瓶中，滴加完畢繼續(xù)攪拌4小時。還原完畢，滴加無水乙醇除去剩余的四氫鋁鋰，減壓除去四氫呋喃后加入500mL甲醇，調(diào)節(jié)pH至中性，加熱回流6小時，抽濾，濾液濃縮后溶于100mL二氯甲烷，過濾，并用50mL飽和氯化鈉水溶液洗滌兩次,有機層干燥后濃縮得到5-甲基-1-甲基-吡唑甲醇8.8g，70％。將5-甲基-1-甲基-吡唑甲醇(6.3g，50mmol)溶于20mL二氯甲烷溶液中，緩慢滴加二氯亞砜(6g，50mmol)，滴加完畢繼續(xù)攪拌2小時，反應完全后緩慢加入飽和碳酸氫鈉水溶液調(diào)節(jié)pH至中性，然后加入200mL二氯甲烷萃取，有機層合并、干燥、濃縮、后得到3-氯甲基-1-甲基-5-甲基吡唑6.5g，90％。在50mL圓底燒瓶中加入3-氯甲基-1-甲基-5-甲基吡唑(1.44g，10mmol)和N-(2,4,6-三甲基苯基)咪唑(1.86g，10mmol)，乙腈20mL，加熱回流6小時，冷卻至室溫，減壓蒸除溶劑，將得到的固體溶于水，過濾，濾液中滴加飽和六氟磷酸銨水溶液，析出固體，干燥后得到3.8g咪唑鹽配體(HL1PF6)，產(chǎn)率88％。在50℃溫度下，將配體HL1PF6，440mg(1mmol),乙腈10mL，氧化銀116mg(0.5mmol)，反應4小時，然后加入[Ru(p-cymene)Cl2]2306mg(0.5mmol)室溫繼續(xù)反應2小時，離心過濾，濾液濃縮至2mL，加入乙醚析出黃色固體，將黃色固體用乙醚洗滌2次，再用乙腈溶解，緩慢加入乙醚，重結晶得到355mg氮雜環(huán)卡賓配體配位的釕化合物1，產(chǎn)率50％。1HNMR(CD3CN):7.51(s,1H),7.20(s,1H),7.16(s,1H),7.00(s,1H),6.34(s,1H),5.88,5.76,5.41,5.32(bothd,4H),5.30,4.96(bothd,2H),3.82(s,3H),2.50(s,3H),2.38(s,3H),2.24(s,3H),2.00(s,3H),1.99-1.97(m,1H),1.62(s,3H),1.12,0.60(bothd,6H).13CNMR(CD3CN):175.8(Ru-C),145.8,144.3,144.1,140.2,138.8,137.5,136.8,130.0,128.6,125.2,121.2,108.4,90.5,88.5,48.8,46.2,31.6,24.0,21.0,19.8,19.6,17.8,15.4,11.1ppm。實施例2配體HL2PF6參照實施例1方法合成，溴乙烷代替碘甲烷。在50℃溫度下，加入配體HL2PF6，454mg(1mmol)，乙腈10mL，氧化銀116mg(0.5mmol)，反應4小時，然后加入[Ru(p-cymene)Cl2]2306mg(0.5mmol)室溫繼續(xù)反應2小時，離心過濾，濾液濃縮至2mL，加入乙醚析出黃色固體，將黃色固體用乙醚洗滌2次，再用乙腈溶解，緩慢加入乙醚，重結晶得到333mg氮雜環(huán)卡賓配體配位的釕化合物2，產(chǎn)率46％。1HNMR(400MHz,CD3CN):7.54(s,1H),7.16(s,1H),7.14(s,1H),6.99(s,1H),6.36(s,1H),5.86,5.78,5.43,5.34(bothd,4H),5.31,4.96(bothd,2H),4.86-4.69(m,2H),2.48(s,3H),2.36(s,3H),2.25(s,3H),2.02(s,3H),1.98-1.96(m,1H),1.60(s,3H),1.40(t,3H),1.14,0.58(bothd,6H)ppm。13CNMR(CD3CN):173.8(Ru-C),146.8,146.3,146.1,140.1,138.7,136.5,136.4,129.9,128.8,126.2,124.2,107.4,89.5,87.5,47.8,46.1,31.5,23.9,20.7,19.7,19.6,18.0,17.9,15.4,12.2ppm。實施例3配體HL3PF6參照實施例1方法合成，異丙基溴代替碘甲烷。在50℃溫度下，加入配體HL3PF6，468mg(1mmol),乙腈10mL，氧化銀116mg(0.5mmol)，反應4小時，然后加入[Ru(p-cymene)Cl2]2306mg(0.5mmol)室溫繼續(xù)反應2小時，離心過濾，濾液濃縮至2mL，加入乙醚析出黃色固體，將黃色固體用乙醚洗滌2次，再用乙腈溶解，緩慢加入乙醚，重結晶得到353mg氮雜環(huán)卡賓配體配位的釕化合物3，產(chǎn)率53％。1HNMR(CD3CN):7.50(s,1H),7.22(s,1H),7.18(s,1H),6.80(s,1H),6.30(s,1H),5.82,5.72,5.41,5.30(bothd,4H),5.26,4.86(bothd,CH2,2H),4.04(m,1H),2.42(s,CH3,3H),2.34(s,3H),2.26(s,3H),2.12(s,3H),1.98-1.92(m,1H),1.62(s,3H),1.56(d,6H),1.16,0.60(bothd,6H)ppm。13CNMR(CD3CN):171.8(Ru-C),145.8,145.3,144.1,141.1,139.7,136.5,136.4,128.9,128.0,125.2,123.2,108.4,90.5,88.5,48.8,46.1,32.5,24.1,21.7,19.0,18.8,18.0,15.9,13.4,11.2ppm。實施例4配體HL4PF6參照實施例1方法合成，芐基溴代替碘甲烷。在50℃溫度下，加入配體HL4PF6，516mg(1mmol),乙腈10mL，氧化銀116mg(0.5mmol)，反應4小時，然后加入[Ru(p-cymene)Cl2]2306mg(0.5mmol)室溫繼續(xù)反應2小時，離心過濾，濾液濃縮至2mL，加入乙醚析出黃色固體，將黃色固體用乙醚洗滌2次，再用乙腈溶解，緩慢加入乙醚，重結晶得到472mg氮雜環(huán)卡賓配體配位的釕化合物4，產(chǎn)率60％。1HNMR(CD3CN):7.54(s,1H),7.16(s,1H),7.16(s,1H),7.14-7.12(m,3H),7.06(s,2H),7.07(s,1H),6.99(s,1H),6.36(s,1H),5.86,5.78,5.43,5.34(bothd,4H),5.31(d,2H),4.69(d,2H),2.48(s,3H),2.36(s,3H),2.25(s,3H),2.02(s,3H),1.98-1.96(m,1H),1.60(s,3H),1.14,0.58(bothd,6H)ppm。13CNMR(CD3CN):177.0(Ru-C),147.1,146.8,146.6,142.1,140.7,138.5,138.4,138.3,129.9,129.1,128.8,128.7,126.2,125.6,124.0,110.4,88.5,86.5,48.8,47.1,32.5,25.9,22.7,19.8,19.2,18.2,18.0,13.2ppm。實施例5配體HL5PF6參照實施例1方法合成，(2,4,6-三甲基)芐氯代替碘甲烷。在50℃溫度下，加入配體HL5PF6，558mg(1mmol),乙腈10mL，氧化銀116mg(0.5mmol)，反應4小時，然后加入[Ru(p-cymene)Cl2]2306mg(0.5mmol)室溫繼續(xù)反應2小時，離心過濾，濾液濃縮至2mL，加入乙醚析出黃色固體，將黃色固體用乙醚洗滌2次，再用乙腈溶解，緩慢加入乙醚，重結晶得到356mg氮雜環(huán)卡賓配體配位的釕化合物5，產(chǎn)率43％。1HNMR(CD3CN):7.50(s,CH,1H),7.10(s,CH,1H),7.14-6.90(m,4H),6.36(s,1H),5.60-5.43,(m,4H),5.31,4.99(bothd,2H),4.90(s,2H),2.47(s,3H),2.38(s,3H),2.35(s,6H),2.30(s,3H),2.28(s,3H),2.02(s,3H),1.98-1.96(m,1H),1.60(s,3H),1.10-0.80(m,6H)ppm。13CNMR(CD3CN):169.8(Ru-C),148.8,147.3,145.1,141.1,139.7,137.5,137.4,135.2,136.7,129.5,128.6,126.0,124.0,107.2,89.3,87.2,47.5,46.0,31.3,24.7,23.5,20.2,19.7,19.6,18.4,18.0,17.9,12.8ppm。實施例6配體HL6PF6參照實施例1方法合成，(4-叔丁基)芐氯代替碘甲烷。在50℃溫度下，加入配體HL6PF6，572mg(1mmol),乙腈10mL，氧化銀116mg(0.5mmol)，反應4小時，然后加入[Ru(p-cymene)Cl2]2306mg(0.5mmol)室溫繼續(xù)反應2小時，離心過濾，濾液濃縮至2mL，加入乙醚析出黃色固體，將黃色固體用乙醚洗滌2次，再用乙腈溶解，緩慢加入乙醚，重結晶得到354mg氮雜環(huán)卡賓配體配位的釕化合物6，產(chǎn)率42％。1HNMR(CD3CN):7.45(s,1H),7.34(d,2H)7.20(s,1H),7.15(d,2H),7.14(s,1H),6.99(s,1H),6.35(s,1H),5.66,5.40(bothd,4H),5.30,4.95(bothd,CH2,2H),4.84(m,2H),2.48(s,3H),2.36(s,3H),2.26(s,3H),2.04(s,3H),1.98-1.96(m,1H),1.60(s,3H),1.40(s,9H),1.14,0.60(bothd,6H)ppm。13CNMR(CD3CN):170.0(Ru-C),148.6,146.4,146.2,146.0,140.2,138.5,136.4,136.3,136.2,129.9,128.9,126.9,126.0,124.8,124.0,107.2,89.6,87.4,47.5,46.0,34.0,31.1,31.0,23.9,20.5,19.8,19.5,18.0,17.6,12.0ppm。實施例7配體HL7PF6參照實施例1方法合成，(4-三氟甲基)芐氯代替碘甲烷。在50℃溫度下，加入配體HL7PF6，584mg(1mmol),乙腈10mL，氧化銀116mg(0.5mmol)，反應4小時，然后加入[Ru(p-cymene)Cl2]2306mg(0.5mmol)室溫繼續(xù)反應2小時，離心過濾，濾液濃縮至2mL，加入乙醚析出黃色固體，將黃色固體用乙醚洗滌2次，再用乙腈溶解，緩慢加入乙醚，重結晶得到461mg氮雜環(huán)卡賓配體配位的釕化合物7，產(chǎn)率54％。1HNMR(CD3CN):7.54-7.50(m,3H),7.16-7.15(m,3H),7.00-6.99(m,2H),6.06(s,1H),5.80,5.38(bothd,4H),5.30,4.98(bothd,2H),4.60(m,2H),2.50(s,3H),2.39(s,3H),2.28(s,3H),2.07(s,3H),1.99-1.96(m,1H),1.66(s,3H),1.10,0.66(bothd,6H)ppm。13CNMR(CD3CN):168.8(Ru-C),146.6,146.6,146.0,140.2,138.5,136.3,136.6,129.8,128.4,126.7,125.7,127.5,124.2,107.7,89.5,87.2,47.5,46.4,31.6,23.8,20.7,19.5,19.4,18.8,17.4,11.1ppm。實施例8配體HL8PF6參照實施例1方法合成，(五氟甲基)芐氯代替碘甲烷。在50℃溫度下，加入配體HL8PF6，606mg(1mmol),乙腈10mL，氧化銀116mg(0.5mmol)，反應4小時，然后加入[Ru(p-cymene)Cl2]2306mg(0.5mmol)室溫繼續(xù)反應2小時，離心過濾，濾液濃縮至2mL，加入乙醚析出黃色固體，將黃色固體用乙醚洗滌2次，再用乙腈溶解，緩慢加入乙醚，重結晶得到534mg氮雜環(huán)卡賓配體配位的釕化合物8，產(chǎn)率61％。1HNMR(CD3CN):7.51(s,1H),7.12(s,1H),7.10(s,1H),6.98(s,1H),6.35(s,1H),5.84,5.76,5.41,5.32(bothd,4H),5.31,4.96(bothd,2H),4.82(s,2H),2.46(s,3H),2.35(s,3H),2.26(s,3H),2.03(s,3H),1.99-1.96(m,1H),1.61(s,3H),1.15,0.60(bothd,6H)ppm。13CNMR(CD3CN):168.3(Ru-C),146.4,146.3,146.3,144.5,140.3,140.3,138.5,138.3,136.5,136.4,129.9,128.8,126.2,124.2,110.5,107.4,89.5,87.5,47.8,46.1,31.5,23.9,20.6,19.7,19.5,18.0,17.1,15.0,12.2ppm。實施例9配體HL9PF6參照實施例1方法合成，N-(芐基)咪唑代替N-(2,4,6-三甲基)咪唑。在反應溫度為50℃條件下，加入配體HL9PF6，426mg(1mmol),乙腈10mL，氧化銀116mg(0.5mmol)，反應4小時，然后加入[Ru(p-cymene)Cl2]2306mg(0.5mmol)室溫繼續(xù)反應2小時，離心過濾，濾液濃縮至2mL，加入乙醚析出黃色固體，將黃色固體用乙醚洗滌2次，再用乙腈溶解，緩慢加入乙醚，結晶得到299mg氮雜環(huán)卡賓配體配位的釕化合物9，產(chǎn)率43％。1HNMR(CD3CN):7.51(s,1H),7.33(s,2H),7.26(s,1H),7.23(s,2H),7.11(s,1H),6.35(s,1H),5.88,5.74,5.41,5.35(s,4H),5.31,4.98(s,CH2,2H),4.84(s,2H),4.67(s,2H),2.12(s,3H),1.98-1.96(m,1H),1.60(s,3H),1.40(s,3H),1.00,0.88(s,6H)ppm。13CNMR(CD3CN):170.8(Ru-C),149.3,145.4,140.7,138.7,136.5,135.6,128.7,128.5,126.9,126.7,126.0,117.8,106.6,54.2,53.0.48.5,33.2,23.3,21.3,15.6,11.1ppm。實施例10配體HL10PF6參照實施例1方法合成，N-((2,4,6-三甲基)芐基)咪唑代替N-(2,4,6-三甲基)咪唑。在50℃溫度下，加入配體HL10PF6，468mg(1mmol),乙腈10mL，氧化銀116mg(0.5mmol)，反應4小時，然后加入[Ru(p-cymene)Cl2]2306mg(0.5mmol)室溫繼續(xù)反應2小時，離心過濾，濾液濃縮至2mL，加入乙醚析出黃色固體，將黃色固體用乙醚洗滌2次，再用乙腈溶解，緩慢加入乙醚，重結晶得到339mg氮雜環(huán)卡賓配體配位的釕化合物10，產(chǎn)率46％。1HNMR(CD3CN):7.48(s,1H),7.26(s,1H),6.79(s,1H),6.16(s,1H),5.18,5.15(bothd,4H),4.67,4.57(bothd,2H),3.86(m,2H),2.87(m,1H),2.48(s,3H),2.41(s,3H),2.34(s,6H),2.32(s,3H),1.29(3,H)1.20(s,6H)ppm。13CNMR(CD3CN):170.8(Ru-C),149.3,146.1,145,4,140.8,140.7,136.2,135.6,134.5,128.7,127.7,126.0,53.7,49.2,48.5,33.2,23.3,21.9,21.3,19.4,15.8,11.3ppm。實施例11配體HL11PF6參照實施例1方法合成，N-(對叔丁基芐基)咪唑代替N-(2,4,6-三甲基)咪唑。在50℃溫度下，加入配體HL11PF6，482mg(1mmol),乙腈10mL，氧化銀116mg(0.5mmol)，反應4小時，然后加入[Ru(p-cymene)Cl2]2306mg(0.5mmol)室溫繼續(xù)反應2小時，離心過濾，濾液濃縮至2mL，加入乙醚析出黃色固體，將黃色固體用乙醚洗滌2次，再用乙腈溶解，緩慢加入乙醚，重結晶得到310mg氮雜環(huán)卡賓配體配位的釕化合物11，產(chǎn)率42％。1HNMR(CD3CN):7.49(s,1H),7.38(s,2H),7.22(s,1H),7.20(s,2H),6.05(s,1H),5.86,5.44,(s,4H),5.30,4.78(s,CH2,2H),4.83(s,2H),4.66(s,2H),2.10(s,3H),1.99-1.95(m,1H),1.62(s,3H),1.39(s,3H),1.33(s,9H),1.00,0.90(s,6H)ppm。13CNMR(CD3CN):169.0(Ru-C),149.8,145.0,140.9,138.6,136.8,135.6,128.8,128.7,126.6,126.8,126.3,118.8,106.7,54.1,53.2.48.6,34.3,33.4,31.5,23.7,21.5,16.4,11.0ppm。實施例12配體HL12PF6參照實施例1方法合成，N-(對三氟甲基芐基)咪唑代替N-(2,4,6-三甲基)咪唑。在50℃溫度下，加入配體HL12PF6，494mg(1mmol),乙腈10mL，氧化銀116mg(0.5mmol)，反應4小時，然后加入[Ru(p-cymene)Cl2]2306mg(0.5mmol)室溫繼續(xù)反應2小時，離心過濾，濾液濃縮至2mL，加入乙醚析出黃色固體，將黃色固體用乙醚洗滌2次，再用乙腈溶解，緩慢加入乙醚，重結晶得到330mg氮雜環(huán)卡賓配體配位的釕化合物12，產(chǎn)率44％。1HNMR(CD3CN):7.51(s,1H),7.33(s,2H),7.26(s,1H),7.23(s,2H),6.35(s,1H),5.88,5.74,5.41,5.35(s,4H),5.31,4.98(s,CH2,2H),4.84(s,2H),4.67(s,2H),2.12(s,3H),1.98-1.96(m,1H),1.60(s,3H),1.40(s,3H),1.00,0.88(s,6H)ppm。13CNMR(CD3CN):171.1(Ru-C),149.3,145.4,140.7,138.7,136.5,135.6,128.7,128.5,126.9,126.7,126.0,117.8,106.6,54.2,53.0.48.5,34.2,33.2,23.3,21.3,15.6,11.1ppm。實施例13配體HL13PF6參照實施例1方法合成，N-(五氟甲基芐基)咪唑代替N-(2,4,6-三甲基)咪唑。在50℃溫度下，加入配體HL13PF6，516mg(1mmol),乙腈10mL，氧化銀116mg(0.5mmol)，反應4小時，然后加入[Ru(p-cymene)Cl2]2306mg(0.5mmol)室溫繼續(xù)反應2小時，離心過濾，濾液濃縮至2mL，加入乙醚析出黃色固體，將黃色固體用乙醚洗滌2次，再用乙腈溶解，緩慢加入乙醚，重結晶得到409mg氮雜環(huán)卡賓配體配位的釕化合物13，產(chǎn)率52％。1HNMR(CD3CN):7.51(s,1H),7.26(s,1H),6.35(s,1H),5.88,5.74,5.41,5.35(s,4H),5.31,4.98(s,CH2,2H),4.84(s,2H),4.67(s,2H),2.12(s,3H),1.98-1.96(m,1H),1.60(s,3H),1.40(s,3H),1.00,0.88(s,6H)ppm。13CNMR(CD3CN):168.8(Ru-C),149.3,145.4,144.8,141.3,140.7,136.2,135.6,128.7,126.0,117.8,115.2,106.6,54.2,53.0.48.5,40.6,33.2,23.3,21.3,15.6,11.1ppm實施例14將實施例1-13得到的吡唑官能團化的氮雜環(huán)卡賓釕化合物通過體外細胞毒性實驗闡明本發(fā)明所述氮雜環(huán)卡賓釕化合物的抗癌生物活性：取生長期癌細胞(Bcap-37、LoVo、SCG7901、SCG7901-R)，胰酶消化后，種板(96孔板，5×103個細胞/孔)，37℃孵育24h使細胞貼壁，加入不同濃度的實施例1-13中制備的吡唑官能團化的氮雜環(huán)卡賓釕化合物(100μL/孔)，培養(yǎng)48h后，每孔加入30μL噻唑藍(MTT，5mg/mL)，繼續(xù)培養(yǎng)4h后去除上清，每孔加入100μL二甲基亞砜(DMSO)，振蕩，使結晶產(chǎn)物充分溶解，492nm處于酶標儀上檢測各孔吸光度，繪制出細胞存活曲線，并計算各組納米粒對細胞的半抑制濃度(IC50)值?？鼓[瘤藥物脂質(zhì)體對各種腫瘤細胞的體外毒性結果見表1。表1：實施例1-13中氮雜環(huán)卡賓釕化合物對癌細胞的IC50(μM)IC50Bcap-37LoVoSCG7901SCG7901-R112.6±0.26.0±0.67.2±0.68.7±0.9211.2±0.89.2±0.52.9±0.55.8±0.433.8±0.27.1±0.87.4±0.67.0±0.245.7±0.56.4±0.36.1±0.110.2±0.859.2±2.45.4±1.99.2±0.412±169.6±0.84.3±0.58.7±0.716±574.3±0.54.1±12.9±0.69.2±2.485.0±0.33.4±0.11.3±0.17.4±1.798.5±0.25.3±0.98.8±1.311.1±1.7107.8±1.66.2±0.49.2±1.410.9±0.9118.8±1.27.7±1.510.4±1.48.2±1124.5±0.26.3±0.61.5±0.94.9±0.9133.9±0.96.1±0.32.4±0.35.1±1順鉑8.5±0.94.1±0.210.5±0.683.1±14.5當前第1頁1 2 3