本發(fā)明涉及一種提煉方法，尤其涉及一種木瓜蛋白酶的提煉方法。

背景技術(shù)：

木瓜蛋白酶簡(jiǎn)稱木瓜酶，又稱為木瓜酵素，是利用未成熟的番木瓜果實(shí)中的乳汁，采用現(xiàn)代生物工程技術(shù)提煉而成的純天然生物酶制品，它是一類含巰基(～SH)蛋白酶，具有蛋白酶和酯酶的活性，其廣泛的特異性對(duì)動(dòng)植物蛋白、多肽、酯、酰胺等有較強(qiáng)的水解能力，能催化各種蛋白質(zhì)，水解成一系列長(zhǎng)短不一的短肽或氨基酸，還能把蛋白水解物合成為類蛋白質(zhì)，由于它的熱穩(wěn)定性好及天然衛(wèi)生安全等特點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于食品、皮革、紡織、日化和制藥行業(yè)，提高產(chǎn)品質(zhì)量與檔次，降低成本。

目前，木瓜蛋白酶的提取純化主要是采用沉淀法，但是這種方法工藝繁瑣，產(chǎn)品中仍然混有其它的蛋白酶，純度不高，不能達(dá)到制藥工業(yè)的需求。隨著人們對(duì)純度和安全性提出進(jìn)一步的要求，色譜技術(shù)應(yīng)用于木瓜蛋白酶的純化，如離子交換色譜、親和色譜，該類填料特異性高，純化倍數(shù)高，但分離速度受粒間擴(kuò)散和低的軸向速率限制，壓降大，分離時(shí)間長(zhǎng)，處理量小，不能使用高的加料速度。而膜分離是一種根據(jù)分子的大小進(jìn)行分離的技術(shù)，特點(diǎn)是表面積大、擴(kuò)散路徑短、操作壓低、處理量大，但傳統(tǒng)膜分離技術(shù)只有分離相對(duì)分子質(zhì)量相差10倍以上的物系，不能滿足生化分離的需要。

因此，為解決上述問(wèn)題，特提供一種新的技術(shù)方案。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供一種木瓜蛋白酶的提煉方法。

本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：

一種木瓜蛋白酶的提煉方法，包括以下步驟：

a、將尼龍膜先在鹽酸中進(jìn)行水解，然后浸入甲醛溶液，加入磷酸，待反應(yīng)完全后，浸入到殼聚糖溶液中，室溫反應(yīng)后進(jìn)行烘干，最后用醋酸和去離子水洗滌；

b、利用超聲波粉碎木瓜，然后再用步驟a中的尼龍膜進(jìn)行粗酶分離；

c、利用聚乙二醇和磷酸鉀或甲基纖維素和葡聚糖進(jìn)行雙水相萃取，提純精酶。

優(yōu)選地，所述步驟a中鹽酸水解溫度為20-23℃，水解的時(shí)間控制在15-20小時(shí)之間。

優(yōu)選地，所述步驟a中甲醛溶液、磷酸、殼聚糖溶液的質(zhì)量比為20:0.5：10。

優(yōu)選地，所述步驟a中醋酸與去離子水的質(zhì)量比為1:1。

優(yōu)選地，所述步驟a烘干的溫度控制在40-50℃之間。

本發(fā)明的有益效果是：進(jìn)行粗酶的分離，省去了反復(fù)沉淀步驟，使活力回收大大提高，由于原料本身不含有害物質(zhì)，在操作過(guò)程中也沒(méi)有引人有害雜質(zhì)，得到的木瓜酶制品可以直接用于食品的深加工。

具體實(shí)施方式

為了加深對(duì)本發(fā)明的理解，下面將結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳述，該實(shí)施例僅用于解釋本發(fā)明，并不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的保護(hù)范圍的限定。

實(shí)施例1

一種木瓜蛋白酶的提煉方法，包括以下步驟：

a、將尼龍膜先在鹽酸中進(jìn)行水解，鹽酸水解溫度為20℃，水解的時(shí)間控制在15小時(shí)，然后浸入20ml甲醛溶液，加入0.5ml磷酸，待反應(yīng)完全后，浸入到10ml殼聚糖溶液中，室溫反應(yīng)后進(jìn)行烘干，烘干的溫度控制在40℃，最后用50ml醋酸和50ml去離子水洗滌；

b、利用超聲波粉碎木瓜，然后再用步驟a中的尼龍膜進(jìn)行粗酶分離；

c、利用聚乙二醇和磷酸鉀或甲基纖維素和葡聚糖進(jìn)行雙水相萃取，提純精酶。

實(shí)施例2

一種木瓜蛋白酶的提煉方法，包括以下步驟：

a、將尼龍膜先在鹽酸中進(jìn)行水解，鹽酸水解溫度為22℃，水解的時(shí)間控制在17小時(shí)，然后浸入20ml甲醛溶液，加入0.5ml磷酸，待反應(yīng)完全后，浸入到10ml殼聚糖溶液中，室溫反應(yīng)后進(jìn)行烘干，烘干的溫度控制在45℃，最后用50ml醋酸和50ml去離子水洗滌；

b、利用超聲波粉碎木瓜，然后再用步驟a中的尼龍膜進(jìn)行粗酶分離；

c、利用聚乙二醇和磷酸鉀或甲基纖維素和葡聚糖進(jìn)行雙水相萃取，提純精酶。

實(shí)施例3

一種木瓜蛋白酶的提煉方法，包括以下步驟：

a、將尼龍膜先在鹽酸中進(jìn)行水解，鹽酸水解溫度為23℃，水解的時(shí)間控制在20小時(shí)，然后浸入20ml甲醛溶液，加入0.5ml磷酸，待反應(yīng)完全后，浸入到10ml殼聚糖溶液中，室溫反應(yīng)后進(jìn)行烘干，烘干的溫度控制在50℃，最后用50ml醋酸和50ml去離子水洗滌；

b、利用超聲波粉碎木瓜，然后再用步驟a中的尼龍膜進(jìn)行粗酶分離；

c、利用聚乙二醇和磷酸鉀或甲基纖維素和葡聚糖進(jìn)行雙水相萃取，提純精酶。

本發(fā)明的有益效果是：進(jìn)行粗酶的分離，省去了反復(fù)沉淀步驟，使活力回收大大提高，由于原料本身不含有害物質(zhì)，在操作過(guò)程中也沒(méi)有引人有害雜質(zhì)，得到的木瓜酶制品可以直接用于食品的深加工。

以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并非是對(duì)本發(fā)明作任何其他形式的限制，而依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實(shí)質(zhì)所作的任何修改或等同變化，仍屬于本發(fā)明所要求保護(hù)的范圍。