1.一種分析Igκ基因二次重排中間產(chǎn)物的方法，該方法采用lm-pcr方法捕獲在Igκ基因二次重排中被替換掉的初次重排片段VκJκ-intron-RS，該方法包括：骨髓B淋巴細(xì)胞的流式分選，B淋巴細(xì)胞基因組DNA的提取，linker的制備，基因組DNA與linker的連接反應(yīng)，lm-pcr擴(kuò)增，瓊脂糖凝膠電泳并回收目標(biāo)片段，克隆測序驗(yàn)證目標(biāo)片段。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述lm-pcr的模板是連接有l(wèi)inker的基因組DNA，linker由人工合成的寡聚脫氧核苷酸鏈BW-1和BW-2制備而成，linker的制備條件是：分別取2nmoles BW-1和BW-2于PH值為7.7、濃度為250mM的Tris溶液中，定容為100ul，將混合物置于PCR儀上，90℃5min，60℃5min，常溫冷卻，-20℃冰箱保存。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于所述的連接有l(wèi)inker的基因組DNA是將從B淋巴細(xì)胞中提取得到的基因組DNA與制備好的linker進(jìn)行連接反應(yīng)所得，反應(yīng)體系為：基因組DNA 30μl，linker 2μl，10×ligase Buffer 4μl，T4DNAligase 1.5μl，ddH2O 2.5μl，共40μl；上述反應(yīng)體系在4℃過夜反應(yīng)，-20℃冰箱保存。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述lm-pcr能靈敏和特異性地捕獲VκJκ-intron-RS基因片段。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于lm-pcr中特異性擴(kuò)增下游引物JκBW-LCH的3’端含有TSACAC六個(gè)堿基，這六個(gè)堿基與重組信號序列RS中的保守序列互補(bǔ)，增強(qiáng)了lm-pcr的靈敏性和特異性；下游引物JκBW-LCH序列為：JκBW-LCH actgacgtgg aatcgccaga ccacast；其中兼并堿基為：S＝G/C。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于lm-pcr中特異性擴(kuò)增上游引物包括Vκout和Vκin，Vκout和Vκin均與Vκ基因片段的框架區(qū)2互補(bǔ)，Vκout的互補(bǔ)區(qū)位于Vκin的外側(cè)，兩者均為兼并引物，能夠與同一Vκ基因家族中的不同Vκ基因片段結(jié)合并進(jìn)行擴(kuò)增，從而提高了lm-pcr反應(yīng)的靈敏性和特異性；上游引物序列為：
Vκ4Aout caacctggct tctggagtcc c；Vκ4Ain gctcgcttca gtggcagtgg；
Vκ4C out ytggctyctg gagtccc；Vκ4C in tcgcttcagt ggcagtggg；
Vκ19Aout tggagtccct gatcgcttca c；Vκ19Ain ggcagtggat ctgggrcagat；
Vκ23Aout ctctgggatc ccctccagg；Vκ23Ain tggcagtggatcagggacag；
Vκ12out tctcctcagc tcctgrtctat；Vκ12in aggttcagtg gcagtggatc；
VκRF out ggatccactt tgcaatctgg aattcc；VκRF in tcaaggttca gtggcagtgg atc；
其中兼并堿基為：Y＝C/T。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于由于連接有l(wèi)inker的基因組DNA中含有的Igκ基因二次重排中間產(chǎn)物量比較少，lm-pcr包括兩次擴(kuò)增即lm-pcr1和lm-pcr2，lm-pcr1的模板是連接有l(wèi)inker的基因組DNA，上下游引物分別為Vκout和JκBW-LCH，lm-pcr2的模板是lm-pcr1的擴(kuò)增產(chǎn)物，上下游引物分別為Vκin和JκBW-LCH，lm-pcr1是對基因組中的模板量進(jìn)行擴(kuò)充，lm-pcr2是保證特異性兼大量擴(kuò)增Igκ基因二次重排中間產(chǎn)物。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于lm-pcr1和lm-pcr2均使用熱啟動酶，以及采用兩步循環(huán)法，lm-pcr1反應(yīng)體系為：ligated genomic DNA 100-200ng、Vκout 1.5μl、JκBW-LCH 1.5μl、GoTaqG2HotStartPolymerase 0.125μl、5×Buffer 5μl、2.5mM dNTP Mix 2μl、MgCL22μl和ddH2O 11μl，總體系為25μl；PCR程序設(shè)置為：95℃2min，95℃3min，95℃45s，66℃或68℃3min，循環(huán)12—15次，72℃10min，4℃forever；
Lm-pcr2反應(yīng)體系為：lm-pcr1products 4μl、Vκin 3μl、JκBW-LCH 3μl、GoTaqG2HotStartPolymerase 0.25μl、5×Buffer 10μl、2.5mM dNTPMix 4μl、MgCL24μl和ddH2O 22μl，總體系為50μl；PCR程序設(shè)置為：95℃2min，95℃3min，95℃45s，66℃或68℃3min，循環(huán)35—38次，72℃10min，4℃forever。
9.一種分析Igκ基因二次重排中間產(chǎn)物的試劑盒，該試劑盒包含制備linker所需的寡核苷酸鏈BW-1和BW-2，其序列如SEQ ID NO 1和SEQ ID NO 2所示；lm-pcr的上游引物：Vκ4Aout、Vκ4Ain、Vκ4C out、Vκ4C in、Vκ19Aout、Vκ19Ain、Vκ23Aout、Vκ23Ain、Vκ12out、Vκ12in、VκRF out和VκRF in，其序列如SEQ ID NO 4-15所示；lm-pcr的下游引物JκBW-LCH，其序列如SEQ ID NO 3所示。