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高產(chǎn)乙酰氨基葡萄糖的重組枯草芽孢桿菌及其構(gòu)建方法與流程

文檔序號(hào):11808653閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種高產(chǎn)乙酰氨基葡萄糖的重組枯草芽孢桿菌,其特征在于:由木糖誘導(dǎo)型啟動(dòng)子PxylA調(diào)控枯草芽孢桿菌中的葡萄糖激酶編碼基因glck表達(dá)和磷酸葡糖異構(gòu)酶編碼基因pgi表達(dá)得到。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高產(chǎn)乙酰氨基葡萄糖的重組枯草芽孢桿菌,其特征在于:由木糖誘導(dǎo)型啟動(dòng)子PxylA替代枯草芽孢桿菌中的葡萄糖激酶編碼基因glck啟動(dòng)子序列和磷酸葡糖異構(gòu)酶編碼基因pgi啟動(dòng)子序列而得到。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的高產(chǎn)乙酰氨基葡萄糖的重組枯草芽孢桿菌,其特征在于:所述葡萄糖激酶編碼基因glck如NCBI-Gene ID:938206所示,所述磷酸葡糖異構(gòu)酶編碼基因pgi如NCBI-Gene ID:937165所示。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的高產(chǎn)乙酰氨基葡萄糖的重組枯草芽孢桿菌,其特征在于:所使用的枯草芽孢桿菌通過(guò)以B.subtilis 168Δ nagPΔ gamPΔ gamAΔ nagAΔ nagBΔ ldhΔ pta::lox72為宿主,分別以啟動(dòng)子PxylA、P43控制glmS、GNA1的重組表達(dá)而得到。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的高產(chǎn)乙酰氨基葡萄糖的重組枯草芽孢桿菌,其特征在于:通過(guò)pP43-GNA1質(zhì)粒游離表達(dá)GNA1基因,通過(guò)pM7Z6M-PxylA-glmS質(zhì)粒整合表達(dá)glmS基因。

6.一種如權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述的高產(chǎn)乙酰氨基葡萄糖的重組枯草芽孢桿菌的構(gòu)建方法,其特征在于,包括以下步驟:

(1)構(gòu)建包括木糖誘導(dǎo)型啟動(dòng)子PxylA的葡萄糖激酶編碼基因glck啟動(dòng)子替換框,通過(guò)同源重組將所述glck啟動(dòng)子替換框中的木糖誘導(dǎo)型啟動(dòng)子PxylA替換枯草芽孢桿菌中的葡萄糖激酶編碼基因glck啟動(dòng)子序列;

(2)構(gòu)建包括木糖誘導(dǎo)型啟動(dòng)子PxylA的磷酸葡糖異構(gòu)酶編碼基因pgi啟動(dòng)子替換框,通過(guò)同源重組將所述pgi啟動(dòng)子替換框中的木糖誘導(dǎo)型啟動(dòng)子PxylA替換步驟(1)中得到的枯草芽孢桿菌中的磷酸葡糖異構(gòu)酶編碼基因pgi啟動(dòng)子序列,得到所述高產(chǎn)乙酰氨基葡萄糖的重組枯草芽孢桿菌。

7.根據(jù)權(quán)利要求6-8中任一項(xiàng)所述的重組枯草芽孢桿菌的構(gòu)建方法,其特征在于:所使用的枯草芽孢桿菌通過(guò)以B.subtilis 168Δ nagPΔ gamPΔ gamAΔnagAΔ nagBΔ ldhΔ pta::lox72為宿主,分別以啟動(dòng)子PxylA、P43控制glmS、GNA1的重組表達(dá)而得到。

8.根據(jù)權(quán)利要求6-8中任一項(xiàng)所述的重組枯草芽孢桿菌的構(gòu)建方法,其特征在于:所述葡萄糖激酶編碼基因glck啟動(dòng)子替換框的序列如SEQ ID NO.1所示。

9.根據(jù)權(quán)利要求6-8中任一項(xiàng)所述的重組枯草芽孢桿菌的構(gòu)建方法,其特征在于:所述磷酸葡糖異構(gòu)酶編碼基因pgi啟動(dòng)子替換框的序列如SEQ ID NO.2所示。

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