烷基?n?乙酰氨基葡萄糖苷的制造方法
【專利摘要】提供一種以低成本且簡便、高效地獲得作為雜質的N?乙酰葡萄糖胺的含量少的烷基?N?乙酰氨基葡萄糖苷的方法。一種烷基?N?乙酰氨基葡萄糖苷的制造方法，包括通過使烷基?N?乙酰氨基葡萄糖苷和N?乙酰葡萄糖胺的混合物與強堿性陰離子交換樹脂接觸來降低N?乙酰葡萄糖胺的含量的工序。
【專利說明】
烷基-N-乙酰氨基葡萄糖苷的制造方法
技術領域
[0001] 本發(fā)明涉及一種對于皮膚外用劑、腸道雙歧桿菌的生長等有用的物質的、以下述 式（1)(式中，R表示碳原子數為1-4的烷基)表示的烷基-N-乙酰氨基葡萄糖苷的制造方法。 進一步具體的，涉及一種通過簡便且工業(yè)上有利的方法來獲得作為雜質的N-乙酰葡萄糖胺 的含量少的、以下述式（1)(式中，R表示碳原子數為1-4的烷基)表示的烷基-N-乙酰氨基葡 萄糖苷的方法。
[0002]

【背景技術】
[0003] N-乙酰葡萄糖胺是葡萄糖的2位上的羥基被乙酰氨基取代的單糖，在動物界廣泛 分布存在。人們認為N-乙酰葡萄糖胺具有各種各樣的生理作用，據說具有促進透明質酸產 生的效果、皮膚保濕效果、改善關節(jié)疼痛的效果等。
[0004]已知通過本發(fā)明制造的將N-乙酰葡萄糖胺的1位上的羥基取代為烷氧基的烷基_ N-乙酰氨基葡萄糖苷是具有各種活性的有用的物質。作為其活性，例如，已知有腸道細菌的 雙歧桿菌的生長作用(非專利文獻1)、抑制幽門螺桿菌繁殖的效果(專利文獻1)、促進透明 質酸產生的效果(專利文獻2)等。
[0005] 作為烷基-N-乙酰氨基葡萄糖苷的制造方法，已知有使用酸催化劑使N-乙酰葡萄 糖胺和烷基醇直接縮合的方法，作為所使用的酸催化劑，可列舉為質子酸、酸性離子交換樹 月旨、三氟化硼二乙醚絡合物等(非專利文獻2、專利文獻3、專利文獻4、專利文獻5)。
[0006] 另外，還已知有使乙酰鹵素(acetohalogen)衍生物和醇類縮合后去除保護基來制 造的方法(非專利文獻3)、使由N-乙酰葡萄糖胺衍生的惡唑啉衍生物在酸催化劑的存在下 與醇類縮合的方法(專利文獻6)。但是，這些方法從工序數量、成本方面來看，并不一定能夠 在工業(yè)上廉價地制造。
[0007] 另外，還提出了將N-乙酰葡萄糖胺的低聚物、聚合物作為原料，通過幾丁質酶等的 酶在烷基醇中糖轉移的方法(專利文獻7)。在上述那樣的制造方法中，經常出現(xiàn)未反應的N-乙酰葡萄糖胺的殘存成為問題的情況。根據作為目標的活性，為了有效獲得該活性，需要盡 可能減少未反應的N-乙酰葡萄糖胺。并且，由于其容易引起著色，為了抑制配合的制品的著 色，期望極力降低其含量。N-乙酰葡萄糖胺的減少，雖然可以通過硅膠柱色譜法等的精制方 法來實現(xiàn)，但是并不一定就能說是在工業(yè)上適用的方法，現(xiàn)狀是目前尚未開發(fā)出以工業(yè)上 可行的方法來分離烷基-N-乙酰氨基葡萄糖苷和N-乙酰葡萄糖胺的有效手段。
[0008] 另一方面，雖然有使用陰離子交換樹脂來精制烷基-N-乙酰氨基葡萄糖苷的報告 (非專利文獻4)，但是該報告是通過α體和β體的分離來進行的精制，對于烷基-N-乙酰氨基 葡萄糖苷和Ν-乙酰葡萄糖胺的分離沒有任何記載。
[0009] 現(xiàn)有技術文獻
[0010] 非專利文獻
[0011] 非專利文獻 1 Archives of Biochemistry and Biophysics ,54,392,（1955)
[0012] 非專利文獻2 Methods in Carbohydrate Chemistry，vol ·2，ρ·83,Whistler and ffolform,Eds.,Academic Press,New York,(1963)
[0013] 非專利文獻3 Chemische Berichte,86,1331，（1953)
[0014] 非專利文獻4 Journal of Biochemistry ,54,109,（1963)
[0015] 專利文獻
[0016] 專利文獻1日本特許第4811953號公報
[0017] 專利文獻2日本特許第4589865號公報
[0018] 專利文獻3日本特公昭35-15780號公報
[0019]專利文獻4 US4,152,513
[0020] 專利文獻5日本特公昭40-7886號公報
[0021] 專利文獻6日本特許第4599505號公報
[0022] 專利文獻7日本特開平5-244975號公報

【發(fā)明內容】

[0023]本發(fā)明要解決的問題
[0024]本發(fā)明的目的在于提供一種以低成本且簡便、高效地獲得作為雜質的N-乙酰葡萄 糖胺的含量少的烷基-N-乙酰氨基葡萄糖苷的方法。
[0025]解決問題的手段
[0026]本發(fā)明的發(fā)明人對于從烷基-N-乙酰氨基葡萄糖苷和N-乙酰葡萄糖胺的混合物中 分離精制烷基-N-乙酰氨基葡萄糖苷的方法，是否可以使用各種吸附劑，特別是合成吸附樹 月旨，進一步的離子交換樹脂而進行了潛心研究。雖然烷基-N-乙酰氨基葡萄糖苷和N-乙酰葡 萄糖胺都不是在水溶液中離子化的構造，但是令人意外的是，在與強堿性陰離子交換樹脂 接觸時，發(fā)現(xiàn)僅吸附N-乙酰葡萄糖胺而不吸附烷基-N-乙酰氨基葡萄糖苷的現(xiàn)象，從而完成 本發(fā)明。
[0027]于是，本發(fā)明提供以下內容。
[0028] (1) 一種烷基-N-乙酰氨基葡萄糖苷的制造方法，包括通過使烷基-N-乙酰氨基葡 萄糖苷和N-乙酰葡萄糖胺的混合物與強堿性陰離子交換樹脂接觸來降低N-乙酰葡萄糖胺 的含量的工序(其中，烷基是指碳原子數為1-4的烷基）。
[0029] (2)根據（1)所述的烷基-N-乙酰氨基葡萄糖苷的制造方法，烷基-N-乙酰氨基葡萄 糖苷和N-乙酰葡萄糖胺的混合物是使N-乙酰葡萄糖胺、幾丁質或幾丁質低聚糖在酸的存在 下與烷基醇反應而得到的混合物。
[0030] (3)根據（1)所述的烷基-N-乙酰氨基葡萄糖苷的制造方法，烷基-N-乙酰氨基葡萄 糖苷和N-乙酰葡萄糖胺的混合物是使幾丁質或幾丁質低聚糖在烷基醇與水的混合溶液中 通過具有N-乙酰氨基己糖苷酶活性的酶進行糖轉移反應而得到的混合物。
[0031] (4)根據(3)所述的烷基-N-乙酰氨基葡萄糖苷的制造方法，其特征在于，異構體比 為 β:α = 100:0-90:10。
[0032] 發(fā)明效果
[0033] 根據本發(fā)明，能夠以低成本且簡便、高效地制造作為雜質的N-乙酰葡萄糖胺的含 量少的烷基-N-乙酰氨基葡萄糖苷。
【具體實施方式】
[0034] 以下，對本發(fā)明的實施方式進行說明。
[0035]在本發(fā)明中，包括使烷基-N-乙酰氨基葡萄糖苷和N-乙酰葡萄糖胺的混合物與強 堿性陰離子交換樹脂接觸的步驟，但烷基-N-乙酰氨基葡萄糖苷和N-乙酰葡萄糖胺的混合 物可以使用通過任意方法得到的混合物。這樣的烷基-N-乙酰氨基葡萄糖苷和N-乙酰葡萄 糖胺的混合物例如可以通過使N-乙酰葡萄糖胺、幾丁質或幾丁質低聚糖在烷基醇中在酸或 酶的存在下糖基化來得到。
[0036] N-乙酰葡萄糖胺是葡萄糖的2位上的羥基被乙酰氨基取代的單糖，是在市場上能 夠容易地入手的化合物。
[0037]幾丁質是N-乙酰葡萄糖胺通過β_1，4鍵而聚合的化合物，是節(jié)肢動物、甲殼類的外 骨骼即外皮、軟體動物的殼皮的表面這類的覆蓋大多數無脊椎動物的體表的角質層、蘑菇 等菌類的細胞壁等的主成分。據啟示稱可期待幾丁質具有強化免疫、改善高脂血癥等的效 果，被認為是很有前景的保健原料。并且，實際上其已經作為保健原料而廣泛普遍流通，在 市場上能夠容易地入手。
[0038] 幾丁質低聚糖是使幾丁質化學地或酶促地部分水解而得到的物質，是以Ν-乙酰葡 萄糖胺作為組成糖、包括從單糖(Ν-乙酰葡萄糖胺）到十幾糖的聚合物的多種鏈長的低聚 糖。雖然可期待幾丁質上述那樣的生理作用，但是由于溶解性較差而存在難以利用的缺點。 于是，將幾丁質水解使其容易利用的幾丁質低聚糖也在市場上普遍流通。幾丁質低聚糖在 水、低級脂肪族醇等的溶劑中的溶解、分散性較好，且容易操作。
[0039] 可在本發(fā)明中使用的Ν-乙酰葡萄糖胺、幾丁質或幾丁質低聚糖如上所述，可以使 用市售品。
[0040] 可在本發(fā)明中使用的烷基醇，可示例為甲醇、乙醇、丙醇、丁醇等。其中，特別優(yōu)選 乙醇。
[0041 ]在使用酸催化劑進行糖基化的情況下，在存在或不存在溶劑的情況下，以Ν-乙酰 葡萄糖胺、幾丁質或幾丁質低聚糖為1質量份計，使用0.01-05質量份的對甲苯磺酸、樟腦磺 酸、酸性離子交換樹脂、硫酸、磷酸、三氟化硼等作為酸催化劑，以Ν-乙酰葡萄糖胺、幾丁質 或幾丁質低聚糖為1質量份計，使用1-100質量份的烷基醇，以20-120°C反應0.5-100小時， 可得到烷基-N-乙酰氨基葡萄糖苷和N-乙酰葡萄糖胺的混合物。在本反應中，雖然也可以通 過延長反應時間來降低原料的N-乙酰葡萄糖胺的殘存量，但是在這種情況下，生成的烷基-N-乙酰氨基葡萄糖苷由于異構化而成為β體和α體的混合物的情況較多。另一方面，如果在 初期階段結束反應，就能得到純度比較高的β體，但是在這種情況下，會殘存未反應的原料。 優(yōu)選一邊確認反應生成物一邊決定反應時間。
[0042]在使用酶進行糖基化的情況下，作為酶可以使用幾丁質酶等的具有Ν-乙酰氨基己 糖苷酶活性的各種酶。所使用的酶，可以使用從動植物、微生物分離的酶，但也可以使用市 售品，例如可列舉為Yatalase(注冊商標，TaKaRa Bio Inc .制造）、Sumizyme(注冊商標） NAH25(新日本化學工業(yè)公司制造）、幾丁質酶(SIGMA公司制造）、幾丁質酶(和光純藥公司制 造 ）、Akon CHL(洛東化成工業(yè)公司制造）、Denazyme(注冊商標）CBB_Pl(Nagase ChemteX Corporation制造）、Denazyme(注冊商標）CET-P1 (Nagase ChemteX Corporation制造）、 Glyko(注冊商標，Cosmo Bio Co.，Ltd.制造）、卵清溶菌酶(丘比公司制造）、卵清溶菌酶FG (Nagase ChemteX Corporation制造)等，這些酶可以單獨使用或兩種以上并用。
[0043] 所使用的酶的量，雖然也取決于作為原料的幾丁質或幾丁質低聚糖的聚合度、溶 劑、酶的活性，但是以幾丁質或幾丁質低聚糖為1質量份計，可示例為通常為0.001-10質量 份，優(yōu)選為0.01-0.5質量份。烷基醇的使用量，以幾丁質或幾丁質低聚糖為1質量份計，使用 1-100質量份，并且，作為反應溫度及反應時間，雖然也取決于酶最適溫度，但是通過以0-80 °C反應1小時-5日左右，就可以得到烷基-N-乙酰氨基葡萄糖苷和N-乙酰葡萄糖胺的混合 物。作為反應溶劑，優(yōu)選為水，但也可以在水中混合各種有機溶劑。并且，還可以添加磷酸緩 沖液等調節(jié)pH。
[0044] 在上述酶反應中，優(yōu)先獲得烷基-N-乙酰氨基葡萄糖苷的β體。更具體的，雖然因使 用的基質、反應條件的不同而不同，但是作為生成的烷基-Ν-乙酰氨基葡萄糖苷的異構體 比，可示例為β:α = 100:0-90:10的范圍內。
[0045]在本發(fā)明中，使按照上述方法得到的烷基-N-乙酰氨基葡萄糖苷和N-乙酰葡萄糖 胺的混合物與強堿性陰離子交換樹脂接觸。通過該工序，僅N-乙酰葡萄糖胺吸附在強堿性 陰離子交換樹脂上。此時，烷基-N-乙酰氨基葡萄糖苷未吸附在強堿性陰離子交換樹脂上， 仍然溶解在溶劑中。通過利用這樣的吸附性能的差異，能夠得到去除或減少了N-乙酰葡萄 糖胺的烷基-N-乙酰氨基葡萄糖苷溶液。
[0046]作為可使用的強堿性陰離子交換樹脂，并沒有特別限制，但可示例為DIAI0N(注冊 商標）SA10A、SA12A、SA11A、NSA100、UBA120、SA20A、PA306S、PA308、PA312、PA316、PA318L、 ?八408、？4412、？4418、冊六25以以上為三菱化學公司制造）^11^64^6(注冊商標）11^-400、 IRA-400J、IRA-401、IRA-402、IRA-402BL、IRA-404J、IRA-410、IRA-410J、IRA-411、IRA-910CT、IRA-900、IRA-900J、IRA-904、IRA-910、IRA-958、IRA-458RF(以上為Oregano Corporation 制造)等。
[0047]烷基-N-乙酰氨基葡萄糖苷和N-乙酰葡萄糖胺的混合物與強堿性陰離子交換樹脂 的接觸工序可以是批量式、柱式中的任一種，但是在工業(yè)化生產規(guī)模中一般為柱式，作為處 理條件，可示例為使烷基-N-乙酰氨基葡萄糖苷和N-乙酰葡萄糖胺的混合物的水溶液以空 間速度(SV) =0.1-20/小時左右、優(yōu)選為0.5-10/小時進行通液。
[0048]所使用的強堿性陰離子交換樹脂的量，雖然還因交換容量、處理方法、處理時間等 的不同而不同，但是每lmeq交換容量的強堿性陰離子交換樹脂可以處理O.lSmmol-0.25mmol左右的N-乙酰葡萄糖胺。
[0049] 處理后的強堿性陰離子交換樹脂可以通過使用酸溶液、水、堿溶液等的常規(guī)方法 進行清洗來重復再生使用。
[0050] 通過對烷基-N-乙酰氨基葡萄糖苷和N-乙酰葡萄糖胺的混合物進行上述那樣的強 堿性陰離子交換樹脂處理，作為烷基-N-乙酰氨基葡萄糖苷與N-乙酰葡萄糖胺的比例，能夠 將處理前40-60:60-40左右的比例范圍變?yōu)?0-10:100-0左右的范圍。
[00511按照以上方式得到的、N-乙酰葡萄糖胺的含量少的烷基-N-乙酰氨基葡萄糖苷溶 液可以直接以水溶液的形態(tài)使用，也可以經過濾、溶劑的蒸餾去除、乙醇提取、活性炭處理 等的精制工序制成濃縮物。進一步的，可以在濃縮前或濃縮后，單獨或兩種以上混合地添加 水、乙醇、丙醇、乙二醇、丙二醇、二丙二醇、1，3_ 丁二醇、甘油、己二醇、苯甲酸芐酯、檸檬酸 三乙酯、鄰苯二甲酸二乙酯、氫化松香酸甲酯(Hercolyn)、中鏈脂肪酸甘油三酯等的稀釋劑 來制劑化。另外，還可以根據期望在上述濃縮前或濃縮后，添加脂肪酸單甘油酯、脂肪酸二 甘油酯、脂肪酸三甘油酯、丙二醇脂肪酸酯、蔗糖脂肪酸酯、聚甘油脂肪酸酯、卵磷脂、改性 淀粉、失水山梨醇脂肪酸酯、皂樹提取物、阿拉伯膠、黃蓍膠、瓜爾膠、刺梧桐樹膠、黃原膠、 果膠、海藻酸及其鹽類、卡拉膠、明膠、酪蛋白、糊精、環(huán)糊精、單糖類、二糖類、多元醇等的表 面活性劑、賦形劑，或者可以不添加而是通過采用噴霧干燥、真空干燥、冷凍干燥等的適宜 的干燥手段進行干燥制成粉末狀。
[0052]根據本發(fā)明得到的烷基-N-乙酰氨基葡萄糖苷可以在各種飲食品、保健食品、化妝 品、醫(yī)藥品等中使用。
[0053]接著，列舉實施例進一步具體地對本發(fā)明進行說明。
[0054] 實施例
[0055]在以下的實施例中，以下述測定條件進行高效液相色譜法(HPLC)分析。
[0056] 柱:Asahipack NH2P-50 4E(昭和電工公司制造，4.6X250mm)
[0057] 移動相:75 %乙腈水溶液 [0058]流速:0.4mL/分鐘 [0059]溫度：35Γ
[0060] 檢測:UV210nm(N-乙?；奈眨?br>[0061] (實施例1)甲基-N-乙酰氨基葡萄糖苷的制造
[0062]向100mL的反應燒瓶中加入5.4g的N-乙酰葡萄糖胺（東京化成工業(yè)公司制造）、 54.0g的甲醇及0.3g的對甲苯磺酸，在加熱回流下反應8小時。反應后，HPLC分析的結果是， 甲基-N-乙酰-α-氨基葡萄糖苷、甲基-N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷、N-乙酰葡萄糖胺的面積％ 分別為 16.3%、32· 5%、14.5%。
[0063] 將約100g(約200mL，約1.3meq/mL)離子交換樹脂DIAI0N(注冊商標）SA10A(0H型） (三菱化學公司制造)填充到內徑為4cm的柱中（作為樹脂，內徑為4cm X 16cm)。將上述反應 液以SV (空間速度）=5/小時從柱的上部進行通液。在全部反應液從柱中的樹脂的上端流入 到樹脂中后，從樹脂的上端連續(xù)供給水，使從柱下端的流出不會停止地進行。采集從柱下端 流出的溶液1200mL。在減壓濃縮、減壓干燥得到的溶液時，得到4.3g結晶物。對該結晶物用 HPLC進行分析的結果是，甲基-N-乙酰-α-氨基葡萄糖苷、甲基-N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷的 面積％分別為30.6 %、60.9 %。并且，沒有檢測出Ν-乙酰葡萄糖胺。收率為76 %。
[0064](實施例2)正丁基-Ν-乙酰氨基葡萄糖苷的制造
[0065]向100mL的反應燒瓶中加入5.4g的Ν-乙酰葡萄糖胺（東京化成工業(yè)公司制造）、 54.0g的1-丁醇及0.3g的對甲苯磺酸，以60 °C反應8小時，接著以100 °C反應2小時。反應后， HPLC分析的結果是，正丁基-N-乙酰-α-氨基葡萄糖苷、正丁基-N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷、N-乙酰葡萄糖胺的面積％分別為37.7 %、16.9 %、8.2 %。
[0066] 將約100g(約200mL，約1.3meq/mL)離子交換樹脂DIAI0N(注冊商標）SA10A(0H型） (三菱化學公司制造)填充到內徑為4cm的柱中（作為樹脂，內徑為4cm X 16cm)。將上述反應 液以SV (空間速度）=5/小時從柱的上部進行通液。在全部反應液從柱中的樹脂的上端流入 到樹脂中后，從樹脂的上端供給l〇〇mL的乙醇后，連續(xù)供給水，使從柱下端的流出不會停止 地進行。采集1200mL從柱下端流出的溶液。在減壓濃縮、減壓干燥得到的溶液時，得到5.9g 結晶物。對該結晶物用HPLC進行分析的結果是，正丁基-N-乙酰-α-氨基葡萄糖苷、正丁基-Ν-乙酰-β-氨基葡萄糖苷的面積％分別為61.9%、24.8%。并且，沒有檢測出Ν-乙酰葡萄糖 胺。收率為87 %。
[0067](實施例3)乙基-Ν-乙酰-β-氨基葡萄糖苷的制造
[0068]向3L的反應燒瓶中加入1500g離子交換水、4.4g乙酸鈉、1.3g冰醋酸及200g的99% 乙醇，用溫水浴加熱至內溫為50°C。在等溫下，添加10g(45.2mmol)的幾丁質（甲陽化學公司 制造）及2 · 0g的Denazyme(注冊商標）CET-P1 (Nagase ChemteX Corporation制造），以50°C 攪拌反應20小時。反應后，用HPLC定量（內部標準法）的結果是，分別以23%的收率生成了乙 基-N-乙酰氨基葡萄糖苷（僅檢測出β體），以26%的收率生成了N-乙酰葡萄糖胺。在常壓下 加熱反應液，蒸餾去除乙醇。以塔頂溫度為80°C開始乙醇的餾出，之后持續(xù)蒸餾直至塔頂溫 度達到100 °C。
[0069] 之后，冷卻溶液，通過抽濾去除不溶物。在減壓下將水從得到的濾液中蒸餾出去， 使總量為561.7g。向其中加入36g的離子交換樹脂DIAI0N(注冊商標)SK1B(H型）（三菱化學 公司制造），進行乙酸鈉的中和，通過過濾去除樹脂。此時，用HPLC對得到的濾液(參考品1) 進行定量（內部標準法）的結果是，與反應后的結果相比較，乙基-N-乙酰氨基葡萄糖苷與N-乙酰葡萄糖胺的組成比未見變化。
[0070] 接著，加入83g離子交換樹脂DIAI0N(注冊商標）SA10A(0H型）（三菱化學公司制 造），在室溫下攪拌1小時。用HPLC分析上清液，確認能夠減少N-乙酰葡萄糖胺后，過濾，得到 清澈的濾液。使用旋轉蒸發(fā)儀濃縮濾液。
[0071] 向得到的濃縮殘渣中添加600g的99%乙醇攪拌0.5小時后，過濾，去除不溶物。在 減壓下將濾液中的溶劑蒸餾出去后，減壓干燥，得到2.2g結晶物(本發(fā)明品1)。本發(fā)明品1中 含有的乙基-N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷為2. lg(8.4mmol)，N-乙酰葡萄糖胺為0. lg (0.5mmol)。收率為 20%。
[0072] (實施例4)樹脂的研究
[0073]進行以下操作，測定在工序S1-S3的各階段的N-乙酰葡萄糖胺的殘存率。將O.lg市 售的N-乙酰葡萄糖胺(東京化成工業(yè)公司制造)溶解于10g水中，加入l.Og表1所示的樹脂， 攪拌30分鐘（S1)。接著，進一步追加4.0g的同一樹脂攪拌30分鐘（S2)。進一步的，就這樣靜 置樹脂懸濁液16小時（S3)。對于工序S1-S3的各階段，通過HPLC測定上清液中的N-乙酰葡萄 糖胺濃度，算出殘存率。將使用的樹脂的種類、結構、S1-S3中的N-乙酰葡萄糖胺的殘存率表 示在表1中。
[0074]表 1
[0075]
[0076] 如表1所示，確認強酸性陽離子交換樹脂及弱堿性陰離子交換樹脂完全不吸附N-乙酰葡萄糖胺，而強堿性陰離子交換樹脂均吸附N-乙酰葡萄糖胺。在強堿性陰離子交換樹 脂之中，DIAI0N(注冊商標)SA10A(三菱化學公司制造)和DIAI0N(注冊商標)PA306S(三菱化 學公司制造)吸附得最多。
[0077](實施例5)樹脂量的研究
[0078]通過與實施例3同樣的方法，制備389g的乙基-N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷濃度為 2.7%、Ν-乙酰葡萄糖胺濃度為2.8%的水溶液(參考品1)，用于以下研究。
[0079] 將約100g(約200mL，約1.3meq/mL)離子交換樹脂DIAI0N(注冊商標）SA10A(0H型） (三菱化學公司制造)填充到內徑為4cm的柱中（作為樹脂，內徑為4cmX 16cm)。將上述水溶 液以SV(空間速度）=5/小時從柱的上部進行通液。在溶出前端到達柱底部后，對從柱下端 流出的水溶液按照每l〇〇mL進行劃分，采集餾分1-12。再有，在參考品1全部從柱中的樹脂的 上端流入到樹脂中后，從樹脂的上端連續(xù)供給水，使從柱下端的流出不會停止地進行。對餾 分1-12用HPLC測定乙基-N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷及N-乙酰葡萄糖胺的濃度。
[0080] 餾分1-6完全僅流出乙基-Ν-乙酰-β-氨基葡萄糖苷，而從餾分7確認到Ν-乙酰葡萄 糖胺的流出。在餾分8之前的累計中，乙基-Ν-乙酰-β-氨基葡萄糖苷的回收率為98.0%，乙 基-Ν-乙酰-β-氨基葡萄糖苷:Ν-乙酰葡萄糖胺=99.5:0.5。
[0081] 由上述結果可以認為，雖然使用的強堿性陰離子交換樹脂的量因交換容量、處理 方法、處理時間等而不同，但是每lmeq的陰離子交換樹脂足可以處理0.18mmol-〇. 25mmol左 右的N-乙酰葡萄糖胺。
[0082](實施例6)制劑化
[0083]向在實施例5中得到的餾分8之前的約800g回收液（乙基-N-乙酰-β-氨基葡萄糖 苷:Ν-乙酰葡萄糖胺=99.5:0.5)中溶解30.9g丙二醇，減壓濃縮，得到51.5g濃縮物。以90 °C 對濃縮物進行10分鐘的加熱殺菌后，冷卻，填充在容器中，得到含有20質量％的乙基-N-乙 酰-β_氨基葡萄糖苷的本發(fā)明品2。
【主權項】
1. 一種烷基-N-乙酰氨基葡萄糖苷的制造方法，包括通過使烷基-N-乙酰氨基葡萄糖苷 和N-乙酰葡萄糖胺的混合物與強堿性陰離子交換樹脂接觸來降低N-乙酰葡萄糖胺的含量 的工序，其中，烷基是指碳原子數為1-4的烷基。2. 根據權利要求1所述的烷基-N-乙酰氨基葡萄糖苷的制造方法，其特征在于，烷基-N-乙酰氨基葡萄糖苷和N-乙酰葡萄糖胺的混合物是使N-乙酰葡萄糖胺、幾丁質或幾丁質低聚 糖在酸的存在下與烷基醇反應而得到的混合物。3. 根據權利要求1所述的烷基-N-乙酰氨基葡萄糖苷的制造方法，其特征在于，烷基-N-乙酰氨基葡萄糖苷和N-乙酰葡萄糖胺的混合物是使幾丁質或幾丁質低聚糖在烷基醇與水 的混合溶液中通過具有N-乙酰氨基己糖苷酶活性的酶進行糖轉移反應而得到的混合物。4. 根據權利要求3所述的烷基-N-乙酰氨基葡萄糖苷的制造方法，其特征在于，異構體 比為 β:α = 100:0-90:10。
【文檔編號】C07H15/04GK106068270SQ201580011258
【公開日】2016年11月2日
【申請日】2015年1月15日 公開號201580011258.4, CN 106068270 A, CN 106068270A, CN 201580011258, CN-A-106068270, CN106068270 A, CN106068270A, CN201580011258, CN201580011258.4, PCT/2015/50865, PCT/JP/15/050865, PCT/JP/15/50865, PCT/JP/2015/050865, PCT/JP/2015/50865, PCT/JP15/050865, PCT/JP15/50865, PCT/JP15050865, PCT/JP1550865, PCT/JP2015/050865, PCT/JP2015/50865, PCT/JP2015050865, PCT/JP201550865
【發(fā)明人】高林幸子, 小黑大地
【申請人】長谷川香料株式會社