相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用

本非臨時(shí)申請(qǐng)根據(jù)37cfr§1.53(b)提交，按照35usc§119(e)要求2014年12月18日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)62/093,929、2015年2月2日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)62/110,998和2015年4月2日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)62/142,077的益處，將其全部?jī)?nèi)容通過引用的方式并入本申請(qǐng)。

本文描述了化合物，包括其藥用鹽、溶劑化物、代謝物、前藥；包含所述化合物的藥物組合物；以及使用所述化合物與其他治療劑的組合治療、預(yù)防或診斷雌激素敏感性、雌激素受體依賴性或雌激素受體介導(dǎo)的疾病或病癥的方法。

背景技術(shù)：

雌激素受體(“er”)是一種通過其與內(nèi)源性雌激素的相互作用介導(dǎo)多種生物效應(yīng)的誘導(dǎo)的配體活化的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白。內(nèi)源性雌激素包括17β(beta)-雌二醇和雌酮。已發(fā)現(xiàn)er具有兩種亞型，er-α(alpha)和er-β(beta)。雌激素和雌激素受體牽涉許多疾病或病癥，諸如乳腺癌、肺癌、卵巢癌、結(jié)腸癌、前列腺癌、子宮內(nèi)膜癌、子宮癌以及其他疾病或病癥。需要新的er-α靶標(biāo)藥物，其具有在轉(zhuǎn)移性疾病和獲得抗性的情況下的活性。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明大體上涉及具有雌激素受體調(diào)節(jié)活性或功能的具有式i結(jié)構(gòu)的四氫-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基化合物及其立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體或藥用鹽：

且本申請(qǐng)描述了取代基和結(jié)構(gòu)特征。

本發(fā)明的一方面為式i化合物以及藥用載體、助流劑、稀釋劑或賦形劑的藥物組合物。

本發(fā)明的一方面為制備式i化合物或包含式i化合物的藥物組合物的方法。

本發(fā)明的一方面為治療患者中er相關(guān)疾病或病癥的方法，包括向患有er相關(guān)疾病或病癥的患者給予治療有效量的藥物組合物。

本發(fā)明的一方面為用于治療由雌激素受體介導(dǎo)的病癥的試劑盒，包括：

a)包含式i化合物的藥物組合物；和

b)使用說明。

具體實(shí)施方式

現(xiàn)詳細(xì)說明本發(fā)明的某些實(shí)施方案，即附有結(jié)構(gòu)和化學(xué)式所說明的實(shí)施例。當(dāng)本發(fā)明結(jié)合所列舉的實(shí)施方案描述時(shí)，應(yīng)該理解它們并非意在將本發(fā)明局限于那些實(shí)施方案。相反地，本發(fā)明旨在涵蓋可包括在如權(quán)利要求所定義的本發(fā)明范圍內(nèi)的所有變化、修改和等價(jià)形式。本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)認(rèn)識(shí)到與本申請(qǐng)描述的方法和物質(zhì)類似或等價(jià)的多種方法和物質(zhì)，這些方法和物質(zhì)可用于本發(fā)明的實(shí)踐中。本發(fā)明決不限于所描述的方法和物質(zhì)。如果一篇或多篇引入的文獻(xiàn)、專利和類似材料與本申請(qǐng)(包括但不限于所定義的術(shù)語、術(shù)語的用法、所描述的技術(shù)等)不同或矛盾，以本申請(qǐng)為準(zhǔn)。除非另外定義，否則本文所用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語都具有與由本發(fā)明所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通常所理解相同的含義。盡管與本文所述的那些方法和材料類似或等效的方法和材料可用于實(shí)施或測(cè)試本發(fā)明，但以下描述合適的方法和材料。本申請(qǐng)所提及的所有公開、專利申請(qǐng)、專利和其他參考文獻(xiàn)的全部?jī)?nèi)容通過引用的方式并入本申請(qǐng)。除非另外指示，否則用于本申請(qǐng)中的命名法基于iupac系統(tǒng)命名法。

定義

當(dāng)指示取代基的數(shù)目時(shí)，術(shù)語“一個(gè)或多個(gè)”是指從一個(gè)取代基至最高可能數(shù)目的取代的范圍，即一個(gè)氫由取代基置換直至所有氫都由取代基置換。術(shù)語“取代基”是指替代母體分子上的一個(gè)氫原子的原子或原子的基團(tuán)。術(shù)語“取代的”是指帶有一個(gè)或多個(gè)取代基的特定基團(tuán)。當(dāng)任何基團(tuán)可攜帶多個(gè)取代基且提供多種可能的取代基時(shí)，獨(dú)立選擇所述取代基且不需要相同。術(shù)語“未取代的”是指特定基團(tuán)不帶有取代基。術(shù)語“任選取代的”是指特定基團(tuán)為未取代的或經(jīng)一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立選自可能的取代基組的取代基取代。當(dāng)指示取代基的數(shù)目時(shí)，術(shù)語“一個(gè)或多個(gè)”是指從一個(gè)取代基至最高可能數(shù)目的取代，即一個(gè)氫由取代基置換直至所有氫都由取代基置換。

本申請(qǐng)使用的術(shù)語“烷基”是指具有1-12個(gè)碳原子(c1-c12)的飽和直鏈或支鏈單價(jià)烴基，其中所述烷基可任選獨(dú)立被一個(gè)或多個(gè)下文描述的取代基取代。在另一實(shí)施方案中，烷基具有一至八個(gè)碳原子(c1-c8)，或具有一至六個(gè)碳原子(c1-c6)。烷基的實(shí)例包括，但不限于，甲基(me，-ch3)、乙基(et，-ch2ch3)、1-丙基(n-pr，正丙基，-ch2ch2ch3)、2-丙基(i-pr，異丙基，-ch(ch3)2)、1-丁基(n-bu，正丁基，-ch2ch2ch2ch3)、2-甲基-1-丙基(i-bu，異丁基，-ch2ch(ch3)2)、2-丁基(s-bu，仲丁基，-ch(ch3)ch2ch3)、2-甲基-2-丙基(t-bu，叔丁基，-c(ch3)3)、1-戊基(正戊基，-ch2ch2ch2ch2ch3)、2-戊基(-ch(ch3)ch2ch2ch3)、3-戊基(-ch(ch2ch3)2)、2-甲基-2-丁基(-c(ch3)2ch2ch3)、3-甲基-2-丁基(-ch(ch3)ch(ch3)2)、3-甲基-1-丁基(-ch2ch2ch(ch3)2)、2-甲基-1-丁基(-ch2ch(ch3)ch2ch3)、1-己基(-ch2ch2ch2ch2ch2ch3)、2-己基(-ch(ch3)ch2ch2ch2ch3)、3-己基(-ch(ch2ch3)(ch2ch2ch3))、2-甲基-2-戊基(-c(ch3)2ch2ch2ch3)、3-甲基-2-戊基(-ch(ch3)ch(ch3)ch2ch3)、4-甲基-2-戊基(-ch(ch3)ch2ch(ch3)2)、3-甲基-3-戊基(-c(ch3)(ch2ch3)2)、2-甲基-3-戊基(-ch(ch2ch3)ch(ch3)2)、2,3-二甲基-2-丁基(-c(ch3)2ch(ch3)2)、3,3-二甲基-2-丁基(-ch(ch3)c(ch3)3、1-庚基、1-辛基等。

本申請(qǐng)使用的術(shù)語“烷二基(alkyldiyl)”是指具有1-12個(gè)碳原子(c1-c12)的飽和的直鏈或支鏈二價(jià)烴基，其中所述烷二基可任選獨(dú)立被一個(gè)或多個(gè)下文描述的取代基取代。在另一實(shí)施方案中，烷二基具有一至八個(gè)碳原子(c1-c8)，或具有一至六個(gè)碳原子(c1-c6)。烷二基的實(shí)例包括，但不限于，亞甲基(-ch2-)、亞乙基(-ch2ch2-)、亞丙基(-ch2ch2ch2-)等。烷二基也可稱為“亞烷基”。

術(shù)語“烯基”是指具有2-8個(gè)碳原子(c2-c8)且具有至少一個(gè)不飽和位點(diǎn)(即碳碳sp²雙鍵)的直鏈或支鏈單價(jià)烴基，其中所述烯基可任選獨(dú)立地被本申請(qǐng)所述的一個(gè)或多個(gè)取代基取代，并包括具有“順式”和“反式”取向(或者“e”和“z”取向)的基團(tuán)。實(shí)例包括但不限于乙烯基(ethylenyl或vinyl)(-ch＝ch2)、烯丙基(-ch2ch＝ch2)等。

術(shù)語“亞烯基”或“烯二基”是指具有2-8個(gè)碳原子(c2-c8)且具有至少一個(gè)不飽和位點(diǎn)(即，碳碳sp²雙鍵)的直鏈或支鏈二價(jià)烴基，其中所述烯基可任選獨(dú)立地被本申請(qǐng)所述的一個(gè)或多個(gè)取代基取代，并包括具有“順式”和“反式”取向(或者“e”和“z”取向)的基團(tuán)。實(shí)例包括但不限于亞乙烯基(-ch＝ch-)、亞烯丙基(-ch2ch＝ch-)等。

術(shù)語“炔基”是指具有2-8個(gè)碳原子(c2-c8)且具有至少一個(gè)不飽和位點(diǎn)(即碳碳sp三鍵)的直鏈或支鏈單價(jià)烴基，其中所述炔基可任選獨(dú)立地被本申請(qǐng)所述的一個(gè)或多個(gè)取代基取代。實(shí)例包括但不限于乙炔基(-c≡ch)、丙炔基(炔丙基、-ch2c≡ch)等。

術(shù)語“亞炔基”或“炔二基”是指具有2-8個(gè)碳原子(c2-c8)且具有至少一個(gè)不飽和位點(diǎn)(即碳碳sp三鍵)的直鏈或支鏈二價(jià)烴基，其中所述炔基可任選獨(dú)立地被本申請(qǐng)所述的一個(gè)或多個(gè)取代基取代。實(shí)例包括但不限于亞乙炔基(-c≡c-)、亞丙炔基(亞炔丙基、-ch2c≡c-)等。

術(shù)語“碳環(huán)(carbocycle)”、“碳環(huán)基(carbocyclyl)”、“碳環(huán)(carbocyclicring)”和“環(huán)烴基(cycloalkyl)”是指具有3至12個(gè)碳原子(c3-c12)作為單環(huán)或7至12個(gè)碳原子作為二環(huán)的單價(jià)非芳香性飽和或部分飽和的環(huán)。具有7至12個(gè)原子的二環(huán)碳環(huán)可排列為例如二環(huán)[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]系統(tǒng)，具有9或12個(gè)環(huán)原子的二環(huán)碳環(huán)可排列為二環(huán)[5,6]或[6,6]系統(tǒng)，或排列為橋連系統(tǒng)(bridgedsystem)如二環(huán)[2.2.1]庚烷、二環(huán)[2.2.2]辛烷和二環(huán)[3.2.2]壬烷。螺碳環(huán)基也包括在該定義的范圍內(nèi)。螺碳環(huán)基的實(shí)例包括[2.2]戊基、[2.3]己基和[2.4]庚基。單環(huán)碳環(huán)的實(shí)例包括但不限于環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、1-環(huán)戊-1-烯基、1-環(huán)戊-2-烯基、1-環(huán)戊-3-烯基、環(huán)己基、1-環(huán)己-1-烯基、1-環(huán)己-2-烯基、1-環(huán)己-3-烯基、環(huán)己二烯基、環(huán)庚基、環(huán)辛基、環(huán)壬基、環(huán)癸基、環(huán)十一碳基、環(huán)十二碳基等。碳環(huán)基任選獨(dú)立地被本申請(qǐng)所述的一個(gè)或多個(gè)取代基取代。

術(shù)語“碳環(huán)二基”是指具有3至12個(gè)碳原子(c3-c12)作為單環(huán)或7至12個(gè)碳原子作為二環(huán)的二價(jià)非芳香性飽和或部分飽和的環(huán)。

“芳基”表示通過從母體芳族環(huán)系中的單個(gè)碳原子除去一個(gè)氫原子得到的、具有6-20個(gè)碳原子(c6-c20)的單價(jià)芳族烴基。在示例性結(jié)構(gòu)中一些芳基表示為“ar”。芳基包括含有與飽和、部分不飽和的環(huán)或芳族碳環(huán)稠合的芳族環(huán)的二環(huán)基團(tuán)。典型的芳基包括但不限于由苯(苯基)、取代的苯、萘、蒽、聯(lián)苯、茚基(indenyl)、茚滿基(indanyl)、1,2-二氫萘、1,2,3,4-四氫萘基等得到的基團(tuán)。芳基可任選獨(dú)立地被本申請(qǐng)所述的一個(gè)或多個(gè)取代基取代。

“亞芳基”或“芳二基”表示通過從母體芳族環(huán)系中的兩個(gè)碳原子除去兩個(gè)氫原子得到的、具有6-20個(gè)碳原子(c6-c20)的二價(jià)芳族烴基。在示例性結(jié)構(gòu)中一些芳二基表示為“ar”。芳二基包括含有與飽和、部分不飽和的環(huán)或芳族碳環(huán)稠合的芳族環(huán)的二環(huán)基團(tuán)。典型的芳二基包括但不限于由苯(苯二基)、取代的苯、亞萘基、亞蒽基、亞聯(lián)苯、亞茚基(indenylene)、亞茚滿基(indanylene)、1,2-二氫萘基、1,2,3,4-四氫萘基等得到的基團(tuán)。芳二基也稱為“亞芳基”，且任選取代有本申請(qǐng)所述的一個(gè)或多個(gè)取代基。

術(shù)語“雜環(huán)(heterocycle)”、“雜環(huán)基(heterocyclyl)”和“雜環(huán)(heterocyclicring)”在本申請(qǐng)中可交換使用，是指具有3至約20個(gè)環(huán)原子的飽和或部分不飽和(即在環(huán)中具有一個(gè)或多個(gè)雙鍵和/或三鍵)的碳環(huán)基團(tuán)，其中至少一個(gè)環(huán)原子為選自氮、氧、磷和硫的雜原子，其余環(huán)原子為c，其中一個(gè)或多個(gè)環(huán)原子任選獨(dú)立地被如下所述的一個(gè)或多個(gè)取代基取代。雜環(huán)可以是具有3至7個(gè)環(huán)成員(2至6個(gè)碳原子以及4至1個(gè)選自n、o、p和s中的雜原子)的單環(huán)或具有7至10個(gè)環(huán)成員(4至9個(gè)碳原子以及6至1個(gè)選自n、o、p和s中的雜原子)的二環(huán)，例如二環(huán)[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]系統(tǒng)。雜環(huán)描述在paquette,leoa.；“principlesofmodernheterocyclicchemistry”(w.a.benjamin,newyork,1968),特別是第1、3、4、6、7和9章；“thechemistryofheterocycliccompounds,aseriesofmonographs”(johnwiley&sons,newyork,1950topresent),特別是第13、14、16、19和28卷；和j.am.chem.soc.(1960)82:5566中?！半s環(huán)基”還包括雜環(huán)基團(tuán)與飽和、部分不飽和的環(huán)或芳族碳環(huán)或雜環(huán)稠合的基團(tuán)。雜環(huán)的實(shí)例包括但不限于嗎啉-4-基、哌啶-1-基、哌嗪基、哌嗪-4-基-2-酮、哌嗪-4-基-3-酮、吡咯烷-1-基、硫嗎啉-4-基、s-二氧化硫嗎啉-4-基、氮雜辛-1-基、氮雜環(huán)丁烷-1-基、八氫吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基、[1,4]二氮雜環(huán)庚-1-基、吡咯烷基、四氫呋喃基、二氫呋喃基、四氫噻吩基、四氫吡喃基、二氫吡喃基、四氫噻喃基、哌啶子基、嗎啉代、硫嗎啉代、硫雜氧雜環(huán)己基(thioxanyl)、哌嗪基、高哌嗪基(homopiperazinyl)、氮雜環(huán)丁烷基、氧雜環(huán)丁烷基、硫雜環(huán)丁烷基、高哌啶基(homopiperidinyl)、氧雜環(huán)庚烷基(oxepanyl)、硫雜環(huán)庚烷基(thiepanyl)、氧雜基(oxazepinyl)、二氮雜基(diazepinyl)、硫雜基(thiazepinyl)、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、二氫吲哚基、2h-吡喃基、4h-吡喃基、二氧雜環(huán)己烷基、1,3-二氧雜環(huán)戊基、吡唑啉基、二硫雜環(huán)己基(dithianyl)、二硫雜環(huán)戊基(dithiolanyl)、二氫吡喃基、二氫噻吩基、二氫呋喃基、吡唑烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己烷基、3-氮雜二環(huán)[4.1.0]庚烷基、氮雜二環(huán)[2.2.2]己烷基、3h-吲哚基、喹嗪基、1h-苯并[d]咪唑-2(3h)-酮-5-基和脲基吡啶基(n-pyridylurea)。螺環(huán)部分也包括在本定義的范圍內(nèi)。螺雜環(huán)基部分的實(shí)例包括氮雜螺[2.5]辛基和氮雜螺[2.4]庚基。其中兩個(gè)還原子被氧代(＝o)部分取代的雜環(huán)基的實(shí)例為嘧啶酮基(pyrimidinonyl)和1,1-二氧代-硫嗎啉基。本申請(qǐng)的雜環(huán)基任選獨(dú)立地被本申請(qǐng)所述的一個(gè)或多個(gè)取代基取代。

術(shù)語“雜環(huán)二基”是指具有3至約20個(gè)環(huán)原子的二價(jià)飽和或部分不飽和(即在環(huán)中具有一個(gè)或多個(gè)雙鍵和/或三鍵)的碳環(huán)基團(tuán)，其中至少一個(gè)環(huán)原子為選自氮、氧、磷和硫的雜原子，其余環(huán)原子為c，其中一個(gè)或多個(gè)環(huán)原子任選獨(dú)立地被本申請(qǐng)所述的一個(gè)或多個(gè)取代基取代。

術(shù)語“雜芳基”是指具有5、6或7元環(huán)的單價(jià)芳族基團(tuán)，以及包括具有5-20個(gè)環(huán)原子的稠環(huán)系(其中至少一個(gè)環(huán)是芳族的)，其含有獨(dú)立選自氮、氧和硫中的一個(gè)或多個(gè)雜原子。雜芳基的實(shí)例為吡啶基(包括例如2-羥基吡啶基)、咪唑基、咪唑并吡啶基、嘧啶基(包括例如4-羥基嘧啶基)、吡唑基、三唑基、吡嗪基、四唑基、呋喃基、噻吩基、異噁唑基、噻唑基、噁二唑基、噁唑基、異噻唑基、吡咯基、喹啉基、異喹啉基、四氫異喹啉基、吲哚基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、噌啉基、吲唑基、吲嗪基、酞嗪基、噠嗪基、三嗪基、異吲哚基、蝶啶基、嘌呤基、噁二唑基、三唑基、噻二唑基、噻二唑基、呋咱基、苯并呋咱基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、喹唑啉基、喹喔啉基、二氮雜萘基和呋喃并吡啶基。本申請(qǐng)的雜芳基任選獨(dú)立地被一個(gè)或多個(gè)本申請(qǐng)所述的取代基取代。

術(shù)語“雜芳二基”是指具有5、6或7元環(huán)的二價(jià)芳族基團(tuán)，以及包括具有5-20個(gè)環(huán)原子的稠環(huán)系(其中至少一個(gè)環(huán)是芳族的)，其含有獨(dú)立選自氮、氧和硫中的一個(gè)或多個(gè)雜原子。

雜環(huán)或雜芳基在適當(dāng)連接時(shí)可以是碳連接的(碳聯(lián)的)或氮連接的(氮聯(lián)的)。通過舉例而非限制，碳連接的雜環(huán)或雜芳基在以下位置進(jìn)行連接：吡啶的2、3、4、5或6位；噠嗪的3、4、5或6位；嘧啶的2、4、5或6位；吡嗪的2、3、5或6位；呋喃、四氫呋喃、噻吩(thiofuran或thiophen)、吡咯或四氫吡咯的2、3、4或5位；噁唑、咪唑或噻唑的2、4或5位；異噁唑、吡唑或異噻唑的3、4或5位；氮丙啶的2或3位；氮雜環(huán)丁烷的2、3或4位；喹啉的2、3、4、5、6、7或8位；或異喹啉的1、3、4、5、6、7或8位。

通過舉例而非限制，氮連接的雜環(huán)或雜芳基在以下位置進(jìn)行連接：氮丙啶、氮雜環(huán)丁烷、吡咯、吡咯烷、2-吡咯啉、3-吡咯啉、咪唑、咪唑烷、2-咪唑啉、3-咪唑啉、吡唑、吡唑啉、2-吡唑啉、3-吡唑啉、哌啶、哌嗪、吲哚、二氫吲哚、1h-吲唑的1位；異吲哚或異二氫吲哚的2位；嗎啉的4位；和咔唑或β-咔啉的9位。

術(shù)語“治療(treat)”和“治療(treatment)”是指治療性處置，其中目的是減緩(減輕)不期望的生理學(xué)變化或障礙如關(guān)節(jié)炎或癌癥的發(fā)展或擴(kuò)散。出于本發(fā)明的目的，有益的或期望的臨床結(jié)果包括但不限于緩解癥狀、減小病變程度、穩(wěn)定(即，并非惡化)疾病狀態(tài)、延遲或減緩疾病進(jìn)展、改善或緩和疾病狀態(tài)以及好轉(zhuǎn)(部分好轉(zhuǎn)或完全好轉(zhuǎn))，無論這些結(jié)果是可檢測(cè)的還是不可檢測(cè)的?！爸委煛边€可表示與未接受治療的預(yù)期存活相比延長(zhǎng)的存活。需要治療的對(duì)象包括已經(jīng)患有病癥或障礙的對(duì)象。

短語“治療有效量”表示(i)治療本申請(qǐng)描述的具體疾病、病癥或障礙的本發(fā)明化合物的量，(ii)削弱、改善或消除本申請(qǐng)描述的具體疾病、病癥或障礙中的一種或多種癥狀的本發(fā)明化合物的量，或(iii)預(yù)防或延遲本申請(qǐng)描述的具體疾病、病癥或障礙中的一種或多種癥狀的發(fā)作的本發(fā)明化合物的量。在癌癥的情況中，治療有效量的藥物可降低癌細(xì)胞的數(shù)量；減小腫瘤尺寸；抑制(即在一定程度上減慢以及優(yōu)選停止)癌細(xì)胞滲入周圍器官(peripheralorgan)中；抑制(即在一定程度上減慢以及優(yōu)選停止)腫瘤轉(zhuǎn)移；在一定程度上抑制腫瘤生長(zhǎng)；和/或在一定程度上緩解與癌癥相關(guān)的一種或多種癥狀。如果藥物可達(dá)到預(yù)防現(xiàn)存的癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和/或殺死現(xiàn)存的癌細(xì)胞程度，則其可以是細(xì)胞生長(zhǎng)抑制性的(cytostatic)和/或細(xì)胞毒性的。對(duì)于癌癥治療而言，可例如通過評(píng)價(jià)疾病進(jìn)展時(shí)間(ttp)和/或確定應(yīng)答率(rr)來測(cè)量功效。

術(shù)語“癌癥(cancer)”是指哺乳動(dòng)物中特征通常為未調(diào)節(jié)的細(xì)胞生長(zhǎng)的生理?xiàng)l件或描述所述生理?xiàng)l件?！澳[瘤”包含一種或多種癌細(xì)胞。癌癥的實(shí)例包括但不限于癌(carcinoma)、淋巴瘤、母細(xì)胞瘤、肉瘤以及白血病(leukemia)或淋巴樣惡性腫瘤(lymphoidmalignancy)。所述癌癥的更具體的實(shí)例包括鱗狀細(xì)胞癌(例如上皮鱗狀細(xì)胞癌)；肺癌，包括小細(xì)胞肺癌、非小細(xì)胞肺癌(“nsclc")、肺腺癌(adenocarcinomaofthelung)和肺鱗狀細(xì)胞癌(squamouscarcinomaofthelung)；腹膜癌；肝細(xì)胞癌；胃癌(gastricorstomachcancer)，包括胃腸癌；胰腺癌；成膠質(zhì)細(xì)胞瘤；子宮頸癌；卵巢癌；肝癌(livercancer)；膀胱癌；肝細(xì)胞瘤(hepatoma)；乳腺癌(breastcancer)；結(jié)腸癌；直腸癌；結(jié)腸直腸癌；子宮內(nèi)膜癌或子宮癌；唾液腺癌；腎癌或腎癌；前列腺癌；外陰癌(vulvalcancer)；甲狀腺癌；肝臟癌(hepaticcarcinoma)；肛門癌；陰莖癌；以及頭頸癌。

"血液惡性腫瘤"是影響血液、骨髓和淋巴結(jié)的癌癥類型。由于以上三者經(jīng)免疫系統(tǒng)直接相連，所以影響三者中一者的疾病也將會(huì)影響其他兩者：盡管淋巴瘤是淋巴結(jié)的疾病，但是其通常擴(kuò)散至骨髓，進(jìn)而影響血液。血液惡性腫瘤是惡性腫瘤("癌癥")，且其通常經(jīng)血液學(xué)和/或腫瘤學(xué)的專家治療。在某些中心，"血液學(xué)/腫瘤學(xué)"為內(nèi)科學(xué)的單一附屬專業(yè)，而在其他中心，它們被認(rèn)為是分開的學(xué)科(它們也為外科和放射腫瘤科)。并非所有血液學(xué)病癥都是惡性的("癌性")；這些其他血液病癥也可由血液病學(xué)家處置。血液惡性腫瘤可衍生自兩種主要血細(xì)胞譜系中的任一者：骨髓和淋巴細(xì)胞系。骨髓細(xì)胞系通常產(chǎn)生粒細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板、巨噬細(xì)胞和肥大細(xì)胞；淋巴細(xì)胞系產(chǎn)生b、t、nk和漿細(xì)胞。淋巴瘤、淋巴細(xì)胞性白血病和骨髓瘤來自淋巴系，而急性和慢性髓細(xì)胞性白血病、骨髓增生異常綜合征和骨髓組織增生性疾病源自骨髓。白血病包括急性成淋巴細(xì)胞性白血病(all)、急性骨髓性白血病(aml)、慢性淋巴細(xì)胞性白血病(cll)、慢性髓細(xì)胞性白血病(cml)、急性單核細(xì)胞性白血病(amol)和小淋巴細(xì)胞性淋巴瘤(sll)。淋巴瘤包括霍奇金淋巴瘤(所有四種亞型)和非霍奇金淋巴瘤(nhl，所有亞型)。

“化療藥物”是可用于治療癌癥的化合物，而與其作用機(jī)理無關(guān)。化療藥物包括，但是不限于：烷化劑、抗代謝藥、紡絲體毒植物生物堿(spindlepoisonplantalkaloids)、細(xì)胞毒性/抗腫瘤抗生素(cytotoxic/antitumorantibiotics)、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑(topoisomeraseinhibitors)、抗體、光敏性藥物和激酶抑制劑?；熕幬锇ㄔ凇鞍邢虔煼ā焙统Ｒ?guī)化學(xué)療法中使用的化合物。化療藥物的實(shí)例包括：依魯替尼(imbruvica^tm,apci-32765,pharmacyclicsinc./janssenbiotechinc.；casreg.no.936563-96-1,us7514444)、艾德昔布(cal-101,gs1101,gs-1101,gileadsciencesinc.；casreg.no.1146702-54-6)、厄洛替尼(genentech/osipharm.)、多西他賽(sanofi-aventis)、5-fu(氟尿嘧啶，5-氟尿嘧啶,casreg.no.51-21-8)、吉西他濱(lilly)、pd-0325901(casno.391210-10-9,pfizer)、順鉑((sp-4-2)-順二氯化二氨亞鉑(ii),順-二胺,二氯化鉑(ii),casno.15663-27-1)、卡鉑(casno.41575-94-4)、紫杉醇(bristol-myerssquibboncology,princeton,n.j.)、曲妥單抗(genentech)、替莫唑胺(4-甲基-5-氧代-2,3,4,6,8-五氮雜二環(huán)[4.3.0]壬-2,7,9-三烯-9-甲酰胺,casno.85622-93-1,scheringplough)、他莫昔芬((z)-2-[4-(1,2-二苯基丁-1-烯基)苯氧基]-n,n-二甲基-乙基胺,)和多柔比星(casno.23214-92-8)、akti-1/2,hppd和雷帕霉素。

化療藥物包括b細(xì)胞受體靶標(biāo)諸如btk、bcl-2的抑制劑和jak抑制劑。

化療藥物的其它實(shí)例包括：奧沙利鉑(sanofi)、硼替佐米(millenniumpharm.)、舒尼替尼(su11248,pfizer)、來曲唑(novartis)、甲磺酸伊馬替尼(novartis)、xl-518(mek抑制劑,exelixis,wo2007/044515)、arry-886(mek抑制劑,azd6244,arraybiopharma,astrazeneca)、sf-1126(pi3k抑制劑,semaforepharmaceuticals)、bez-235(pi3k抑制劑,novartis)、xl-147(pi3k抑制劑,exelixis)、ptk787/zk222584(novartis)、氟維司群(astrazeneca)、甲酰四氫葉酸(亞葉酸)、雷帕霉素(西羅莫司,wyeth)、拉帕替尼(gsk572016,glaxosmithkline)、洛那法尼(sarasar^tm,sch66336,scheringplough)、索拉非尼(bay43-9006,bayerlabs)、吉非替尼(astrazeneca)、伊立替康(cpt-11,pfizer)、替吡法尼(zarnestra^tm,johnson&johnson)、abraxane^tm(無克列莫佛)、紫杉醇的白蛋白工程化納米微粒制劑(americanpharmaceuticalpartners,schaumberg,il)、凡德他尼(rinn,zd6474,astrazeneca)、苯丁酸氮芥、ag1478、ag1571(su5271；sugen)、坦羅莫司(wyeth)、帕唑帕尼(glaxosmithkline)、canfosfamide(telik)、塞替派和環(huán)磷酰胺()；磺酸烷基酯如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡烷基；氮丙啶如benzodopa、卡波醌、meturedopa和uredopa；乙撐亞胺(ethylenimine)和甲基氨基吖啶(methylamelamine)，包括六甲蜜胺、三亞胺嗪(triethylenemelamine)、三亞乙基磷酰胺(triethylenephosphoramide)、三亞乙基硫化磷酰胺(triethylenethiophosphoramide)和trimethylomelamine；番荔枝內(nèi)酯(acetogenin)(尤其是布拉它辛(bullatacin)和布拉它辛酮(bullatacinone))；喜樹堿(包括合成性類似物托泊替康(topotecan))；苔蘚抑素(bryostatin)；callystatin；cc-1065(包括其阿多來新(adozelesin)、卡折來新(carzelesin)和比折來新(bizelesin)合成性類似物)；cryptophycins(特別是cryptophycin1和cryptophycin8)；多拉司他汀(dolastatin)；duocarmycin(包括合成性類似物kw-2189和cb1-tm1)；艾榴塞洛素(eleutherobin)；pancratistatin；sarcodictyin；spongistatin；氮芥如苯丁酸氮芥、萘氮芥、氯磷酰胺(chlorophosphamide)、雌莫司汀、異環(huán)磷酰胺、雙氯乙基甲胺(mechlorethamine)、鹽酸氧氮芥(mechlorethamineoxidehydrochloride)、美法侖、新氮芥(novembichin)、苯芥膽甾醇(phenesterine)、潑尼莫司汀(prednimustine)、曲磷胺(trofosfamide)、尿嘧啶氮芥(uracilmustard)；硝基脲如卡莫司汀、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫斯汀和雷莫司??；抗生素如烯二炔(enediyne)抗生素(例如刺孢霉素(calicheamicin)，刺孢霉素γ1i、刺孢霉素ωi1(angewchem.intl.ed.engl.(1994)33:183-186)；蒽環(huán)類抗生素(dynemicin)，dynemicina；二膦酸鹽(bisphosphonate)如氯膦酸鹽(clodronate)；埃斯培拉霉素(esperamicin)；以及新抑癌蛋白生色團(tuán)(neocarzinostatinchromophore)和相關(guān)色蛋白烯二炔抗生素生色團(tuán)(enediyneantibioticchromophore)、aclacinomysin、放線菌素(actinomycin)、authramycin、偶氮絲氨酸(azaserine)、博來霉素、放線菌素c(cactinomycin)、carabicin、去甲柔紅霉素(carminomycin)、嗜癌素(carzinophilin)、色霉素(chromomycin)、放線菌素d(dactinomycin)、柔紅霉素(daunorubicin)、地拖比星(detorubicin)、6-重氮基-5-氧代-l-正亮氨酸(6-diazo-5-oxo-l-norleucine)、嗎啉代-多柔比星、氰基嗎啉代-多柔比星、2-吡咯啉子基-多柔比星和去氧多柔比星、表柔比星(epirubicin)、依索比星、伊達(dá)比星、麻西羅霉素(marcellomycin)、絲裂霉素如絲裂霉素c、麥考酚酸(mycophenolicacid)、諾拉霉素(nogalamycin)、橄欖霉素(olivomycins)、培洛霉素(peplomycin)、泊非霉素(porfiromycin)、嘌羅霉素(puromycin)、三鐵阿霉素(quelamycin)、羅多比星(rodorubicin)、鏈黑霉素(streptonigrin)、鏈佐星(streptozocin)、殺結(jié)核菌素(tubercidin)、烏苯美司(ubenimex)、凈司他丁(zinostatin)、佐柔比星；抗代謝物如甲氨喋呤和5-氟尿嘧啶(5-fu)；葉酸類似物如二甲葉酸、甲氨喋呤、喋羅呤(pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤類似物如氟達(dá)拉濱(fludarabine)、6-巰嘌呤、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫鳥嘌呤(thioguanine)；嘧啶類似物如安西他濱(ancitabine)、阿扎胞苷(azacytidine)、6-氮鳥苷(6-azauridine)、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、二脫氧尿苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、伊諾他濱(enocitabine)、氟尿苷(floxuridine)；雄激素如卡普睪酮(calusterone)、丙酸甲雄烷酮(dromostanolonepropionate)、環(huán)硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睪內(nèi)酯(testolactone)；抗腎上腺素(anti-adrenal)如氨魯米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)；葉酸補(bǔ)充劑(folicacidreplenisher)如亞葉酸(frolinicacid)；醋葡醛內(nèi)酯(aceglatone)；醛磷酰胺糖苷(aldophosphamideglycoside)；氨基乙酰丙酸(aminolevulinicacid)；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶(amsacrine)；bestrabucil；比生群(bisantrene)；伊達(dá)曲殺(edatraxate)；地磷酰胺(defofamine)；秋水仙胺(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；elfornithine；依利醋銨(elliptiniumacetate)；埃坡霉素(epothilone)；依托格魯(etoglucid)；硝酸鎵(galliumnitrate)；羥基脲(hydroxyurea)；香菇多糖(lentinan)；氯尼達(dá)明(lonidainine)；美登醇(maytansinoid)如美登素(maytansine)和安絲菌素(ansamitocin)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；mopidanmol；根瘤菌劑(nitraerine)；噴司他丁(pentostatin)；蛋氨氮芥(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；鬼臼酸(podophyllinicacid)；2-乙基肼；丙卡巴肼(procarbazine)；多糖復(fù)合物(jhsnaturalproducts,eugene,or)；雷佐生(razoxane)；根霉素(rhizoxin)；西佐喃(sizofiran)；鍺螺胺(spirogermanium)；細(xì)交鏈孢菌酮酸(tenuazonicacid)；三亞胺醌(triaziquone)；2,2',2"-三氯三乙胺；單端孢菌毒素(trichothecene)(尤其是t-2毒素、verracurina、桿孢菌素a和anguidine)；烏拉坦；長(zhǎng)春地辛；達(dá)卡巴嗪(dacarbazine)；甘露莫司汀(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴衛(wèi)矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；gacytosine；阿糖胞苷(arabinoside)(“ara-c”)；環(huán)磷酰胺；塞替派；6-硫代鳥嘌呤；巰嘌呤；甲氨喋呤；鉑類似物如順鉑和卡鉑；長(zhǎng)春堿；依托泊苷(vp-16)；異環(huán)磷酰胺；米托蒽醌；長(zhǎng)春新堿；長(zhǎng)春瑞濱諾消靈(novantrone)；替尼泊苷(teniposide)；伊達(dá)曲殺(edatrexate)；柔紅霉素；氨基喋呤；卡培他濱(roche)；伊班膦酸鹽(ibandronate)；cpt-11；拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑rfs2000；二氟甲基鳥氨酸(difluoromethylornithine,dmfo)；類視黃醇(retinoid)如視黃酸(retinoicacid)；以及上述任何物質(zhì)的可藥用鹽、酸和衍生物。

以下物質(zhì)也包括在“化療藥物”的定義中：(i)用于調(diào)節(jié)或抑制激素對(duì)腫瘤的作用的抗激素藥物，如抗雌激素藥物(anti-estrogen)和選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑(selectiveestrogenreceptormodulator,serm)，包括例如他莫昔芬(包括枸櫞酸他莫昔芬)、雷洛昔芬、屈洛昔芬、4-羥基他莫昔芬、曲沃昔芬(trioxifene)、雷洛西芬(keoxifene)、ly117018、奧那司酮(onapristone)和(枸櫞酸托米芬(toremifinecitrate))和選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑(serd)諸如氟維司群(astrazeneca)；(ii)抑制芳香酶(調(diào)節(jié)腎上腺中雌激素產(chǎn)生)的芳香酶抑制劑，例如4(5)-咪唑、氨魯米特、(醋酸甲地孕酮(megestrolacetate))、(依西美坦(exemestane)；pfizer)、formestanie、法倔唑(fadrozole)、(伏氯唑(vorozole))、(來曲唑；novartis)和(阿那曲唑(anastrozole)；astrazeneca)；(iii)抗雄激素藥物(anti-androgen)，如氟他胺、尼魯米特(nilutamide)、比卡魯胺(bicalutamide)、醋酸亮丙瑞林(leuprolide)和戈舍瑞林(goserelin)以及曲沙他濱(troxacitabine)(1,3-二氧戊環(huán)核苷胞嘧啶類似物)；(iv)蛋白激酶抑制劑，例如mek抑制劑諸如考比替尼(wo2007/044515)；(v)脂質(zhì)激酶抑制劑諸如他塞利昔布(gdc-0032,genentechinc.)；(vi)反義寡核苷酸，特別是抑制異常細(xì)胞增殖中所涉及的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中的基因表達(dá)的反義寡核苷酸，例如pkc-α、raf和h-ras，如oblimersen(gentainc.)；(vii)核酶如vegf表達(dá)抑制劑(例如)和her2表達(dá)抑制劑；(viii)疫苗如基因治療疫苗，例如和ril-2；拓?fù)洚悩?gòu)酶1抑制劑如rmrh；(ix)抗血管生成藥物如貝伐單抗(genentech)；以及上述任何物質(zhì)的可藥用鹽、酸和衍生物。

還包括在“化療藥物”定義中的有治療性抗體，比如阿侖珠單抗(alemtuzumab，campath)、貝伐珠單抗(genentech)；西妥昔單抗(imclone)；帕木單抗(panitumumab，amgen)、利妥昔單抗(genentech/biogenidec)、培妥珠單抗(pertuzumab，2c4,genentech)、曲妥單抗(genentech)、曲妥單抗恩坦辛(genentechinc.)和托西莫單抗單抗(bexxar,corixia)。

“代謝物”是通過具體化合物或其鹽在體內(nèi)的代謝而產(chǎn)生的產(chǎn)物。可使用本領(lǐng)域已知的常規(guī)技術(shù)鑒定化合物的代謝物，并使用如本申請(qǐng)所述的試驗(yàn)確定它們的活性。所述產(chǎn)物可起因于例如所給藥的化合物的氧化、還原、水解、酰胺化、脫酰胺化、酯化、脫酯化、酶法裂解等。因此，本發(fā)明包括本發(fā)明化合物的代謝物，包括由以下方法產(chǎn)生的化合物，所述方法包括使本發(fā)明的式i化合物與哺乳動(dòng)物接觸足以產(chǎn)生其代謝產(chǎn)物的一段時(shí)間。

術(shù)語“包裝說明書”是指通常包括在治療產(chǎn)品的市售包裝中的說明書，其含有關(guān)于適應(yīng)癥、用法、劑量、給藥、禁忌癥和/或注意事項(xiàng)的信息，這些信息涉及上述治療產(chǎn)品的使用。

術(shù)語“手性”是指具有鏡像配偶體(mirrorimagepartner)不可重疊性質(zhì)的分子，而術(shù)語“非手性”是指可與其鏡像配偶體重疊的分子。

術(shù)語“立體異構(gòu)體”是指具有相同化學(xué)組成但原子或基團(tuán)的取向在空間上的排列不同的化合物。

“非對(duì)映異構(gòu)體”是指具有兩個(gè)或更多手性中心并且其分子不互為鏡像的立體異構(gòu)體。非對(duì)映異構(gòu)體具有不同的物理性質(zhì)，如熔點(diǎn)、沸點(diǎn)、光譜性質(zhì)和反應(yīng)性。非對(duì)映異構(gòu)體的混合物可通過高分辨分析操作如電泳和色譜來分離。

“對(duì)映異構(gòu)體”是指互為不可重疊鏡像的化合物的兩種立體異構(gòu)體。

本申請(qǐng)使用的立體化學(xué)定義和常規(guī)通常遵循s.p.parker,ed.,mcgraw-hilldictionaryofchemicalterms(1984)mcgraw-hillbookcompany,newyork；andeliel,e.andwilen,s.,“stereochemistryoforganiccompounds”,johnwiley&sons,inc.,newyork,1994。本發(fā)明化合物可含有不對(duì)稱或手性中心，因此以不同立體異構(gòu)形式存在。預(yù)期的是，本發(fā)明化合物的所有立體異構(gòu)形式，包括但不限于非對(duì)映異構(gòu)體、對(duì)映異構(gòu)體和阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體(atropisomers)及它們的混合物如外消旋混合物，形成了本發(fā)明的部分。許多有機(jī)化合物以光學(xué)活性形式存在，即它們具有旋轉(zhuǎn)平面偏振光的平面的能力。在描述有光學(xué)活性的化合物時(shí)，使用前綴d和l或者r和s來表示分子關(guān)于其一個(gè)或多個(gè)手性中心的絕對(duì)構(gòu)型。前綴d和l或者(+)和(-)用于指定平面偏振光由化合物引起的旋轉(zhuǎn)的符號(hào)，其中(-)或l表示化合物是左旋的。前綴為(+)或d的化合物是右旋的。對(duì)于給定的化學(xué)結(jié)構(gòu)而言，除了這些立體異構(gòu)體互為鏡像外，這些立體異構(gòu)體是相同的。具體的立體異構(gòu)體也可稱為對(duì)映異構(gòu)體，所述異構(gòu)體的混合物通常稱作對(duì)映異構(gòu)混合物。對(duì)映異構(gòu)體的50:50混合物稱為外消旋混合物或外消旋體，當(dāng)化學(xué)反應(yīng)或方法中沒有立體選擇性或立體專一性時(shí)可出現(xiàn)這種情況。術(shù)語“外消旋混合物”和“外消旋體”是指兩種對(duì)映異構(gòu)物質(zhì)的等摩爾混合物，其沒有光學(xué)活性。對(duì)映異構(gòu)體可由外消旋混合物分離，其通過手性分離方法諸如超臨界流體色譜(sfc)。在分離的對(duì)映異構(gòu)體中的手性中心處的構(gòu)型指定可為推測(cè)的，且針對(duì)示例性目的描繪于表1結(jié)構(gòu)中，而立體化學(xué)最終由諸如x射線晶體學(xué)數(shù)據(jù)確立。

術(shù)語“互變異構(gòu)體”或“互變異構(gòu)形式”是指可通過低能壘(lowenergybarrier)互相轉(zhuǎn)化的不同能量的結(jié)構(gòu)異構(gòu)體。例如，質(zhì)子互變異構(gòu)體(protontautomer)(也稱為質(zhì)子移變互變異構(gòu)體(prototropictautomer))包括通過質(zhì)子遷移進(jìn)行的互相轉(zhuǎn)化，如酮-烯醇異構(gòu)化和亞胺-烯胺異構(gòu)化。價(jià)鍵互變異構(gòu)體(valencetautomer)包括通過一些成鍵電子的重組進(jìn)行的互相轉(zhuǎn)化。

術(shù)語“藥用鹽”是指不會(huì)在生物學(xué)或其他方面不期望的鹽。藥用鹽包括酸和堿加成鹽。短語“藥用”是指物質(zhì)或組合物必須與構(gòu)成制劑的其他成分和/或正用其治療的哺乳動(dòng)物在化學(xué)上和/或毒理學(xué)上相容。

術(shù)語“藥用酸加成鹽”表示與以下形成的藥用鹽：無機(jī)酸，諸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、碳酸、磷酸；及選自脂族、環(huán)脂族、芳族、芳脂族、雜環(huán)、羧酸及磺酸類有機(jī)酸的有機(jī)酸，諸如甲酸、乙酸、丙酸、乙醇酸、葡萄糖酸、乳酸、丙酮酸、草酸、蘋果酸、順丁烯二酸、丙二酸、丁二酸、反丁烯二酸、酒石酸、檸檬酸、天冬氨酸、抗壞血酸、谷氨酸、鄰氨基苯甲酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、雙羥萘酸、苯乙酸、甲磺酸“甲磺酸鹽”、乙磺酸、對(duì)甲苯磺酸及水楊酸。

術(shù)語“藥用堿加成鹽”表示與有機(jī)堿或無機(jī)堿形成的那些藥用鹽?？山邮艿臒o機(jī)堿的實(shí)例包括鈉鹽、鉀鹽、銨鹽、鈣鹽、鎂鹽、鐵鹽、鋅鹽、銅鹽、錳鹽及鋁鹽。衍生自藥用有機(jī)無毒堿的鹽包括以下的鹽：伯胺、仲胺及叔胺、經(jīng)取代的胺(包括天然存在的經(jīng)取代的胺)、環(huán)胺及堿性離子交換樹脂，諸如異丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、2-二乙基氨基乙醇、氨基丁三醇、二環(huán)己胺、賴氨酸、精氨酸、組氨酸、咖啡因、普魯卡因、哈胺、膽堿、甜菜堿、乙二胺、葡糖胺、甲基葡糖胺、可可堿、嘌呤、哌嗪、哌啶、n-乙基哌啶及聚胺樹脂。

“溶劑化物”是指一或多個(gè)溶劑分子與本發(fā)明化合物的締合物或復(fù)合物。形成溶劑化物的溶劑的實(shí)例包括(但不限于)水、異丙醇、乙醇、甲醇、dmso、乙酸乙酯(etoac)、乙酸(acoh)及乙醇胺。

術(shù)語“ec50”為半數(shù)最大有效濃度且表示體內(nèi)獲得特定作用最大值的50％所需的特定化合物的血漿濃度。

術(shù)語“ki”為抑制常數(shù)且表示特定抑制劑對(duì)受體的絕對(duì)結(jié)合親和力。其使用競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合測(cè)定來測(cè)量，且等于不存在競(jìng)爭(zhēng)配體(例如放射性配體)時(shí)特定抑制劑占據(jù)50％受體的濃度。ki值可對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)化成pki值(-logki)，其中較高值指示按指數(shù)形式增大的效能。

術(shù)語“ic50”為半數(shù)最大抑制濃度且表示獲得體外生物過程50％抑制所需的特定化合物濃度。ic50值可對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)化為pic50值(-logic50)，其中較大值指示按指數(shù)形式增大的效能。ic50值不為絕對(duì)值而是取決于實(shí)驗(yàn)條件，例如所用濃度，且可使用cheng-prusoff方程式(biochem.pharmacol.(1973)22:3099)轉(zhuǎn)化為絕對(duì)抑制常數(shù)(ki)?？捎?jì)算其他抑制參數(shù)％，諸如ic70、ic90等。

術(shù)語“本發(fā)明化合物”和“式i化合物”包括式i化合物及其立體異構(gòu)體、幾何異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、溶劑化物、代謝物及藥用鹽及前藥。

本文所給定的任何式或結(jié)構(gòu)(包括式i化合物)也意欲表示所述化合物的水合物、溶劑化物及多晶型物及其混合物。

本文所給定的任何式或結(jié)構(gòu)(包括式i化合物)也意欲表示化合物的未標(biāo)記形式以及同位素標(biāo)記形式。經(jīng)同位素標(biāo)記的化合物具有由本文給出的式所描繪的結(jié)構(gòu)，不同之處在于一或多個(gè)原子由具有所選原子質(zhì)量或質(zhì)量數(shù)的原子置換?？刹⑷氡景l(fā)明的化合物中的同位素的實(shí)例包括氫、碳、氮、氧、磷、氟及氯的同位素，諸如(但不限于)2h(氘，d)、3h(氚)、11c、13c、14c、15n、18f、31p、32p、35s、36cl及125i。本發(fā)明的經(jīng)各種同位素標(biāo)記的化合物，例如并入諸如3h、13c及14c的放射性同位素的化合物。所述經(jīng)同位素標(biāo)記的化合物可適用于代謝研究、反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研究、檢測(cè)或成像技術(shù)(諸如正電子發(fā)射斷層攝影法(pet)或單光子發(fā)射電腦斷層攝影法(spect)，包括藥物或底物組織分布測(cè)定)或用于患者的放射性治療。本發(fā)明的經(jīng)氘標(biāo)記或取代的治療性化合物可具有改善的dmpk(藥物代謝及藥物動(dòng)力學(xué))特性，所述特性與分布、代謝及排泄(adme)相關(guān)。用諸如氘的較重同位素取代可得到某些由更大代謝穩(wěn)定性產(chǎn)生的治療優(yōu)勢(shì)，例如增加的體內(nèi)半衰期或降低的劑量需求。經(jīng)18f標(biāo)記的化合物可適用于pet或spect研究。本發(fā)明的經(jīng)同位素標(biāo)記的化合物及其前藥一般可通過進(jìn)行下文所述的方案中或?qū)嵤├爸苽渲兴_的操作通過用易于得到的經(jīng)同位素標(biāo)記的試劑取代未經(jīng)同位素標(biāo)記的試劑來制備。此外，用較重的同位素，尤其氘(即，2h或d)取代可得到由較大代謝穩(wěn)定性產(chǎn)生的某些治療優(yōu)勢(shì)，例如體內(nèi)半衰期增加或劑量需求降低或治療指數(shù)改善。應(yīng)了解，在此情形下氘視為式(i)化合物的取代基?？赏ㄟ^同位素富集因子來限定所述較重同位素(尤其氘)的濃度。在本發(fā)明化合物中，不特定指定特定同位素的任何原子意欲表示該原子的任何穩(wěn)定同位素。除非另外陳述，否則當(dāng)位置被特定指定為“h”或“氫”時(shí)，應(yīng)了解該位置在其天然豐度同位素組成中具有氫。因此，在本發(fā)明化合物中，特定稱為氘(d)的任何原子意謂表示氘。

雌激素受體

雌激素受體α(er-α；nr3a1)和雌激素受體β(er-β；nr3a2)是類固醇激素受體，它們是大核受體超家族的成員。核受體具有相同的模塊結(jié)構(gòu)，該結(jié)構(gòu)至少包括dna結(jié)合域(dbd)和配體結(jié)合域(lbd)。類固醇激素受體是可溶性的細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)，其作為配體調(diào)節(jié)的轉(zhuǎn)錄因子起作用。脊椎動(dòng)物含有5種密切相關(guān)的類固醇激素受體(雌激素受體、雄激素受體、孕酮受體、糖皮質(zhì)激素受體、鹽皮質(zhì)激素受體)，它們調(diào)節(jié)大范圍的生殖、代謝和發(fā)育活性。通過包括17β-雌二醇和雌酮在內(nèi)的內(nèi)源性雌激素的結(jié)合來控制er的活性。

er-α基因位于6q25.1上并且編碼595個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)。er-β基因位于染色體14q23.3上并且產(chǎn)生530個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)。然而，由于可變剪接和翻譯起始位點(diǎn)，這些基因中的每一個(gè)可產(chǎn)生多個(gè)同工型。除了dna結(jié)合域(稱為c域)和配體結(jié)合域(e域)以外，這些受體還含有n-末端(a/b)域、連接c域和e域的鉸鏈(d)域以及c-末端延伸(f域)(gronemeyer和laudet；proteinprofile2:1173-1308,1995)。er-α和er-β的c域和e域非常保守(分別具有95％和55％的氨基酸同一性)，而a/b、d域和f域的保守性較差(低于30％的氨基酸同一性)。兩種受體都參與女性生殖道的調(diào)節(jié)和發(fā)育，但是也在中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)和骨代謝中發(fā)揮不同的作用。

類固醇激素受體的配體結(jié)合袋深埋在配體結(jié)合域內(nèi)。在結(jié)合后，配體變成該域的疏水核心的一部分。因此大部分類固醇激素受體在不存在激素的情況下不穩(wěn)定，并且為了保持激素結(jié)合能力需要伴侶蛋白如hsp90的幫助。與hsp90的相互作用也控制這些受體的核轉(zhuǎn)位。配體結(jié)合穩(wěn)定了受體，并且啟動(dòng)連續(xù)的構(gòu)象變化，該構(gòu)象變化釋放伴侶蛋白，改變各個(gè)受體結(jié)構(gòu)域之間的相互作用并重建允許這些受體轉(zhuǎn)位到核內(nèi)的蛋白質(zhì)相互作用表面，結(jié)合dna并參與同染色質(zhì)重建復(fù)合物的相互作用和轉(zhuǎn)錄機(jī)制。盡管er能夠與hsp90相互作用，但是激素結(jié)合不需要這種相互作用，并且取決于細(xì)胞環(huán)境，apo-er既可以是細(xì)胞質(zhì)的，也可以是細(xì)胞核的。生物物理學(xué)研究表明，是dna結(jié)合而不是配體結(jié)合對(duì)受體的穩(wěn)定性作出貢獻(xiàn)(greenfieldetal.,biochemistry40:6646-6652,2001)。

er能夠通過結(jié)合到被稱為雌激素應(yīng)答元件(ere)的特定dna基序而直接地與dna相互作用(經(jīng)典途徑)，也可以通過蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用而間接地與dna相互作用(非經(jīng)典途徑)(welborenetal.,endocrine-relatedcancer16:1073-1089,2009)。在非經(jīng)典途徑中，已證明er栓系到包括sp-1、ap-1和nf-κb在內(nèi)的其它轉(zhuǎn)錄因子上。這些相互作用似乎在er調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖和分化的能力中起關(guān)鍵作用。

兩種類型的erdna相互作用都可以導(dǎo)致基因激活或抑制，這取決于由各自的er-ere復(fù)合物募集的轉(zhuǎn)錄共調(diào)節(jié)劑(klinge,steroid65:227-251,2000)。共調(diào)節(jié)劑的募集主要由兩種蛋白質(zhì)相互作用表面即af2和af1來介導(dǎo)。af2位于ere-域中，其構(gòu)象由配體直接調(diào)節(jié)(brzozowskietal.,nature389:753-758,1997)。完全激動(dòng)劑似乎促進(jìn)共激活劑的募集，而弱激動(dòng)劑和拮抗劑則促進(jìn)協(xié)阻遏物的結(jié)合。關(guān)于af1對(duì)蛋白質(zhì)的調(diào)節(jié)知之甚少，但是它可以通過絲氨酸磷酸化來控制(wardandweigel,biofactors35:528-536,2009)。一個(gè)有關(guān)的磷酸化位點(diǎn)(s118)似乎在拮抗劑如他莫昔芬的存在下控制er的轉(zhuǎn)錄活性，它在乳腺癌的治療中起重要作用。完全激動(dòng)劑似乎將er阻滯于某些構(gòu)象，而弱激動(dòng)劑傾向于使er在不同構(gòu)象之間保持平衡，從而允許共調(diào)節(jié)劑所有組成成分中依賴于細(xì)胞的差別以依賴于細(xì)胞的方式調(diào)節(jié)er的活性(tamrazietal.,mol.endocrinol.17:2593-2602,2003)。er與dna的相互作用是動(dòng)態(tài)的，包括但不限于蛋白酶體對(duì)er的降解(reidetal.,molcell11:695-707,2003)。配體對(duì)er的降解提供了一種具有吸引力的、針對(duì)雌激素敏感的和/或?qū)捎玫目辜に刂委熅哂锌剐缘募膊』虿“Y的治療策略。er信號(hào)傳導(dǎo)對(duì)于包括乳房、排卵和子宮內(nèi)膜增厚在內(nèi)的女性生殖器官的發(fā)育和保持至關(guān)重要。er信號(hào)傳導(dǎo)還在骨量、脂類代謝、癌癥等中具有作用。大約70％的乳腺癌表達(dá)er-α(er-α陽性)，并且其生長(zhǎng)和存活依賴于雌激素。其它癌癥的生長(zhǎng)和存活也被認(rèn)為依賴于er-α信號(hào)傳導(dǎo)，例如卵巢癌和子宮內(nèi)膜癌。er-α拮抗劑他莫昔芬已經(jīng)用于治療絕經(jīng)前和絕經(jīng)后婦女中的早期和晚期er-α陽性乳腺癌。氟維司群(astrazeneca)，一種基于類固醇的er拮抗劑，用于治療盡管用他莫昔芬治療但仍然進(jìn)展的婦女中的乳腺癌(howella.(2006)endocrrelatcancer；13:689–706；us6774122；us7456160；us8329680；us8466139)。甾類和非甾類芳香酶抑制劑也用于治療人類的癌癥。在一些實(shí)施方案中，甾類和非甾類芳香酶抑制劑阻斷絕經(jīng)后婦女中由雄烯二酮和睪酮生成雌激素，從而阻斷了癌癥中的er依賴性生長(zhǎng)。除了這些抗激素劑以外，在有些情況下還用多種其它化療劑，例如，蒽環(huán)類、鉑類、紫杉烷類，來治療進(jìn)行性的er陽性乳腺癌。在一些情況下，用單克隆抗體曲妥珠單抗(genentechinc.)或小分子全-erb-b抑制劑拉帕替尼(glaxosmithklinecorp.)治療具有erb-b/her2酪氨酸激酶受體的基團(tuán)擴(kuò)增的er陽性乳腺癌。盡管進(jìn)行了這一系列抗激素、化學(xué)治療及基于小分子和抗體的靶向治療，但是許多er-α陽性乳腺癌婦女仍發(fā)展為進(jìn)行性轉(zhuǎn)移性疾病，因而需要新的療法。重要的是，對(duì)于大多數(shù)在現(xiàn)有的抗激素以及其它治療下仍然進(jìn)展的er陽性腫瘤，認(rèn)為其生長(zhǎng)和存活仍然依賴于er-α。因此，需要在轉(zhuǎn)移性疾病和獲得抗性的情況下具有活性的新的er-α靶向劑。在一個(gè)方面，本申請(qǐng)描述了作為選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑(serm)的化合物。在特定實(shí)施方案中，本申請(qǐng)描述的serm是選擇性雌激素受體降解劑(serd)。在一些實(shí)施方案中，在基于細(xì)胞的試驗(yàn)中，本申請(qǐng)所述的化合物導(dǎo)致穩(wěn)態(tài)er-α水平的降低(即er降解)，并且可用于治療雌激素敏感的疾病或病癥和/或已發(fā)展了針對(duì)抗激素治療的抗性的疾病或病癥。

大多數(shù)乳腺癌患者用阻斷雌激素合成(例如芳香酶抑制劑；ai)或經(jīng)由競(jìng)爭(zhēng)性er結(jié)合拮抗雌二醇的作用(例如他莫昔芬)的藥物治療(puhallas,etalmoloncol2012；6(2):222-236)。盡管這些藥物在疾病的各種階段中的治療效用有充分記錄，但多種er+乳腺癌復(fù)發(fā)且患者最終死亡。近年來，下一代全基因組及標(biāo)靶測(cè)序已在來自患有晚期乳腺癌的已進(jìn)行內(nèi)分泌療法(主要芳香酶抑制劑)的患者的多達(dá)20％的腫瘤中鑒別到esr1(雌激素受體α基因)突變(lis,etal.cellrep(2013)；4(6):1116-1130；merenbakh-lamink,etal.cancerres(2013)；73(23):6856-6864；robinsondr,etal.natgenet(2013)；45(12):1446-1451；toyw,etal.natgenet(2013)；45(12):1439-1445；jeselsohnr,etal.clincancerres(2014)；20:1757-1767)。這些配體結(jié)合域(lbd)突變賦予apo-受體的高基礎(chǔ)活性，從而使其配體獨(dú)立，因此在低雌二醇情況下具有活性。需要在ai或他莫昔芬治療后的進(jìn)行性疾病情況(包括含有esr1突變腫瘤的患者的亞組)下以穩(wěn)固活性靶向er信號(hào)傳導(dǎo)的療法。

在一些實(shí)施方案中，將本文所揭示的式i化合物用于治療特征為esr1基因具有突變的患者的激素抗性雌激素受體(er)陽性乳腺癌的方法中，所述方法包括給予治療有效量的式i化合物。在一些實(shí)施例中，esr1基因突變產(chǎn)生er多肽，其在選自氨基酸位置seqidno：2的6、118、269、311、341、350、380、392、394、433、463、503、534、535、536、537、538和555的位置處具有氨基酸取代。在一些實(shí)施方案中，突變產(chǎn)生er多肽，其具有選自h6y、s118p、r269c、t311m、s341l、a350e、e380q、v392i、r394h、s433p、s463p、r503w、v534e、p535h、l536r、l536p、l536q、y537n、y537c、y537s、d538g和r555c的氨基酸取代。在一些實(shí)施方案中，患者的esr1基因具有兩個(gè)或兩個(gè)以上突變。

鑒于er-α在乳腺癌發(fā)展和進(jìn)展中的核心作用，本申請(qǐng)公開的化合物可以單獨(dú)地或與其它能夠調(diào)節(jié)乳腺癌中其它關(guān)鍵途徑的藥物聯(lián)合地用于乳腺癌的治療，所述其它藥物包括但不限于靶向igf1r、egfr、erb-b2和3、pi3k/akt/mtor軸、hsp90、parp或組蛋白脫乙酰酶的藥物。

鑒于er-α在乳腺癌發(fā)展和進(jìn)展中的核心作用，本申請(qǐng)公開的式i化合物可以單獨(dú)地或與其它用來治療乳腺癌的藥物聯(lián)合地用于乳腺癌的治療，該其它藥物包括但不限于芳香酶抑制劑、蒽環(huán)類、鉑類、氮芥烷化劑、紫杉烷類。用來治療乳腺癌的示例性藥物包括但不限于pi3k抑制劑諸如他塞利昔布(gdc-0032,genentechinc.)、紫杉醇、阿那曲唑、依西美坦、環(huán)磷酰胺、表柔比星、氟維司群、來曲唑(novartis、corp.)、吉西他濱、曲妥單抗、聚乙二醇非格司亭、非格司亭、他莫昔芬、多西他賽、托瑞米芬、長(zhǎng)春瑞濱、卡培他濱(roche)、伊沙匹隆以及本申請(qǐng)所述的其它藥物。

er-相關(guān)疾病或病癥包括與癌癥(骨癌、乳腺癌、肺癌、結(jié)直腸癌、子宮內(nèi)膜癌、前列腺癌、卵巢癌和子宮癌)相關(guān)的er-α功能障礙、中樞神經(jīng)系統(tǒng)(cns)缺陷(酒精中毒、偏頭痛)、心血管系統(tǒng)缺陷(主動(dòng)脈瘤、心肌梗死易感性、主動(dòng)脈瓣硬化、心血管疾病、冠狀動(dòng)脈疾病、高血壓)、血液系統(tǒng)缺陷(深靜脈血栓形成)、免疫及炎癥疾病(格雷夫斯病、關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化、硬化)、感染易感性(乙型肝炎、慢性肝病)、代謝缺陷(骨密度、膽汁淤積、尿道下裂、肥胖癥、骨關(guān)節(jié)炎、骨質(zhì)減少、骨質(zhì)疏松癥)、神經(jīng)缺陷(阿爾茨海默病、帕金森病、偏頭痛、眩暈)、精神缺陷(神經(jīng)性厭食、注意力缺陷多動(dòng)障礙(adhd)、癡呆、嚴(yán)重抑郁障礙、精神病)和生殖缺陷(月經(jīng)初潮年齡、子宮內(nèi)膜異位癥、不育癥)。

在一些實(shí)施方案中，本申請(qǐng)公開的化合物用于治療哺乳動(dòng)物中的雌激素受體依賴的或雌激素受體介導(dǎo)的疾病或病癥。

在一些實(shí)施方案中，本申請(qǐng)公開的化合物用于治療哺乳動(dòng)物中的癌癥。在一些實(shí)施方案中，該癌癥是乳腺癌、卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌、前列腺癌或子宮癌。在一些實(shí)施方案中，該癌癥是乳腺癌、肺癌、卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌、前列腺癌或子宮癌。在一些實(shí)施方案中，該癌癥是乳腺癌。在一些實(shí)施方案中，該癌癥是激素依賴性癌癥。在一些實(shí)施方案中，該癌癥是雌激素受體依賴性癌癥。在一些實(shí)施方案中，該癌癥是雌激素敏感的癌癥。在一些實(shí)施方案中，該癌癥對(duì)于抗激素治療具有抗性。在一些實(shí)施方案中，該癌癥是對(duì)于抗激素治療具有抗性的雌激素敏感的癌癥或雌激素受體依賴的癌癥。在一些實(shí)施方案中，該癌癥是對(duì)于抗激素治療具有抗性的激素敏感的癌癥或激素受體依賴的癌癥。在一些實(shí)施方案中，抗激素治療包括使用至少一種選自他莫昔芬、氟維司群、甾類芳香酶抑制劑和非甾類芳香酶抑制劑的藥物進(jìn)行的治療。

在一些實(shí)施方案中，本申請(qǐng)公開的化合物用來治療在抗雌激素治療后疾病進(jìn)展的絕經(jīng)后婦女中的激素受體陽性轉(zhuǎn)移性乳腺癌。

在一些實(shí)施方案中，本申請(qǐng)公開的化合物用來治療哺乳動(dòng)物中乳房或生殖道的激素依賴性良性或惡性疾病。在一些實(shí)施方案中，該良性或惡性疾病是乳腺癌。

在一些實(shí)施方案中，本申請(qǐng)所述的任一種方法中使用的化合物是雌激素受體降解劑；是雌激素受體拮抗劑；具有最低的或可忽略的雌激素受體激動(dòng)劑活性；或是其組合。

在一些實(shí)施方案中，用本申請(qǐng)所述的化合物進(jìn)行治療的方法包括一種治療方案，其包括向哺乳動(dòng)物給予放射療法。

在一些實(shí)施方案中，用本申請(qǐng)所述的化合物進(jìn)行治療的方法包括在手術(shù)之前或之后給予該化合物。

在一些實(shí)施方案中，用本申請(qǐng)所述的化合物進(jìn)行治療的方法包括向哺乳動(dòng)物給予至少一種另外的抗癌劑。

在一些實(shí)施方案中，本申請(qǐng)公開的化合物用來治療哺乳動(dòng)物中的癌癥，其中該哺乳動(dòng)物是未經(jīng)化療的。

在一些實(shí)施方案中，本申請(qǐng)公開的化合物用于哺乳動(dòng)物中癌癥的治療。在一些實(shí)施方案中，本申請(qǐng)公開的化合物用來治療哺乳動(dòng)物中的癌癥，其中所述哺乳動(dòng)物正在用至少一種抗癌劑治療癌癥。在一個(gè)實(shí)施方案中，該癌癥是激素難治性癌癥。

在一些實(shí)施方案中，本申請(qǐng)公開的化合物用于治療或預(yù)防哺乳動(dòng)物中子宮的疾病或病癥。在一些實(shí)施方案中，所述子宮的疾病或病癥是平滑肌瘤、子宮平滑肌瘤、子宮內(nèi)膜增生或子宮內(nèi)膜異位癥。在一些實(shí)施方案中，所述子宮的疾病或病癥是子宮的癌性疾病或病癥。在一些其它實(shí)施方案中，所述子宮的疾病或病癥是子宮的非癌性疾病或病癥。

在一些實(shí)施方案中，本申請(qǐng)公開的化合物用于哺乳動(dòng)物中的子宮內(nèi)膜異位癥的治療。

在一些實(shí)施方案中，本申請(qǐng)公開的化合物用于哺乳動(dòng)物中的平滑肌瘤的治療。在一些實(shí)施方案中，所述平滑肌瘤是子宮平滑肌瘤、食管平滑肌瘤、皮膚平滑肌瘤或小腸平滑肌瘤。在一些實(shí)施方案中，本申請(qǐng)公開的化合物用于哺乳動(dòng)物中纖維瘤的治療。在一些實(shí)施方案中，本申請(qǐng)公開的化合物用于哺乳動(dòng)物中的子宮纖維瘤的治療。

本發(fā)明的另一實(shí)施方案涉及本申請(qǐng)公開的化合物，其用作治療活性物質(zhì)。

本發(fā)明的另一實(shí)施方案涉及本申請(qǐng)公開的化合物，其用于治療er相關(guān)疾病或病癥。

本發(fā)明的另一實(shí)施方案涉及本申請(qǐng)公開的化合物在治療er相關(guān)疾病或病癥中的用途。

本發(fā)明的另一實(shí)施方案涉及本申請(qǐng)公開的化合物在制備用于治療er相關(guān)疾病或病癥的藥物中的用途。

四氫-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基化合物

本發(fā)明提供式i包括式ia-if的四氫-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基化合物，及其藥物制劑，其潛在地用于治療由雌激素受體α(era)調(diào)節(jié)的疾病、病癥和/或障礙。

式i化合物及其立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體或藥用鹽具有結(jié)構(gòu)：

其中：

y¹為cr^b或n；

y²為-(ch2)-、-(ch2ch2)-或nr^a；

y³為nr^a或c(r^b)2；

其中y¹、y²和y³中的一個(gè)為n或nr^a；

r^a選自h、c1-c6烷基、c2-c8烯基、炔丙基、c3-c6環(huán)烷基和c3-c6雜環(huán)基，其任選取代有一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立選自以下的基團(tuán)：f、cl、br、i、cn、oh、och3和so2ch3；

r^b獨(dú)立選自h、-o(c1-c3烷基)、c1-c6烷基、c2-c8烯基、炔丙基、-(c1-c6烷二基)-(c3-c6環(huán)烷基)、c3-c6環(huán)烷基和c3-c6雜環(huán)基，其任選取代有一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立選自以下的基團(tuán)：f、cl、br、i、cn、-ch2f、-chf2、-cf3、-ch2cf3、-ch2chf2、-ch2ch2f、oh、och3和so2ch3；

r^c選自h、c1-c6烷基、烯丙基、炔丙基，其任選取代有一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立選自以下的基團(tuán)：f、cl、br、i、cn、oh、och3和so2ch3；

z¹選自cr^ar^b、c(o)和鍵；

cy選自c6-c20芳二基、c3-c12碳環(huán)二基、c2-c20雜環(huán)二基和c1-c20雜芳二基；

z²選自o、s、nr^a、c1-c6烷二基、c1-c6氟烷二基、o-(c1-c6烷二基)、o-(c1-c6氟烷二基)、c(o)和鍵；

r¹、r²、r³和r⁴獨(dú)立選自h、f、cl、br、i、-cn、-ch3、-ch2ch3、-ch(ch3)2、-ch2ch(ch3)2、-ch2oh、-ch2och3、-ch2ch2oh、-c(ch3)2oh、-ch(oh)ch(ch3)2、-c(ch3)2ch2oh、-ch2ch2so2ch3、-ch2op(o)(oh)2、-ch2f、-chf2、-ch2nh2、-ch2nhso2ch3、-ch2nhch3、-ch2n(ch3)2、-cf3、-ch2cf3、-ch2chf2、-ch(ch3)cn、-c(ch3)2cn、-ch2cn、-co2h、-coch3、-co2ch3、-co2c(ch3)3、-coch(oh)ch3、-conh2、-conhch3、-conhch2ch3、-conhch(ch3)2、-con(ch3)2、-c(ch3)2conh2、-nh2、-nhch3、-n(ch3)2、-nhcoch3、-n(ch3)coch3、-nhs(o)2ch3、-n(ch3)c(ch3)2conh2、-n(ch3)ch2ch2s(o)2ch3、-no2、＝o、-oh、-och3、-och2ch3、-och2ch2och3、-och2ch2oh、-och2ch2n(ch3)2、-op(o)(oh)2、-s(o)2n(ch3)2、-sch3、-s(o)2ch3、-s(o)3h、環(huán)丙基、環(huán)丙基酰胺、環(huán)丁基、氧雜環(huán)丁烷基、氮雜環(huán)丁烷基、1-甲基氮雜環(huán)丁烷-3-基)氧基、n-甲基-n-氧雜環(huán)丁烷-3-基氨基、氮雜環(huán)丁烷-1-基甲基、芐基氧基苯基、吡咯烷-1-基、吡咯烷-1-基-甲酮、哌嗪-1-基、嗎啉代甲基、嗎啉代-甲酮和嗎啉代；

r⁵選自h、c1-c9烷基、c3-c9環(huán)烷基、c3-c9雜環(huán)、c6-c9芳基、c6-c9雜芳基、-(c1-c6烷二基)-(c3-c9環(huán)烷基)、-(c1-c6烷二基)-(c3-c9雜環(huán))、c(o)r^b、c(o)nr^a、so2r^a和so2nr^a，其任選取代有一個(gè)或多個(gè)鹵素、cn、or^a、n(r^a)2、c1-c9烷基、c3-c9環(huán)烷基、c3-c9雜環(huán)、c6-c9芳基、c6-c9雜芳基、c(o)r^b、c(o)nr^a、so2r^a和so2nr^a；

r⁶選自f、cl、br、i、-cn、-ch3、-ch2ch3、-ch(ch3)2、-ch2ch(ch3)2、-ch2oh、-ch2och3、-ch2ch2oh、-c(ch3)2oh、-ch(oh)ch(ch3)2、-c(ch3)2ch2oh、-ch2ch2so2ch3、-ch2op(o)(oh)2、-ch2f、-chf2、-ch2nh2、-ch2nhso2ch3、-ch2nhch3、-ch2n(ch3)2、-cf3、-ch2cf3、-ch2chf2、-ch(ch3)cn、-c(ch3)2cn、-ch2cn、-co2h、-coch3、-co2ch3、-co2c(ch3)3、-coch(oh)ch3、-conh2、-conhch3、-conhch2ch3、-conhch(ch3)2、-con(ch3)2、-c(ch3)2conh2、-nh2、-nhch3、-n(ch3)2、-nhcoch3、-n(ch3)coch3、-nhs(o)2ch3、-n(ch3)c(ch3)2conh2、-n(ch3)ch2ch2s(o)2ch3、-no2、＝o、-oh、-och3、-och2ch3、-och2ch2och3、-och2ch2oh、-och2ch2n(ch3)2、-op(o)(oh)2、-s(o)2n(ch3)2、-sch3、-s(o)2ch3、-s(o)3h、環(huán)丙基、環(huán)丙基酰胺、環(huán)丁基、氧雜環(huán)丁烷基、氮雜環(huán)丁烷基、1-甲基氮雜環(huán)丁烷-3-基)氧基、n-甲基-n-氧雜環(huán)丁烷-3-基氨基、氮雜環(huán)丁烷-1-基甲基、芐基氧基苯基、吡咯烷-1-基、吡咯烷-1-基-甲酮、哌嗪-1-基、嗎啉代甲基、嗎啉代-甲酮和嗎啉代；且

m選自0、1、2、3和4；

其中烷二基、氟烷二基、芳二基、碳環(huán)二基、雜環(huán)二基和雜芳二基任選取代有一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立選自以下的基團(tuán)：f、cl、br、i、-cn、-ch3、-ch2ch3、-ch(ch3)2、-ch2ch(ch3)2、-ch2oh、-ch2och3、-ch2ch2oh、-c(ch3)2oh、-ch(oh)ch(ch3)2、-c(ch3)2ch2oh、-ch2ch2so2ch3、-ch2op(o)(oh)2、-ch2f、-chf2、-cf3、-ch2cf3、-ch2chf2、-ch2ch2f、-ch(ch3)cn、-c(ch3)2cn、-ch2cn、-ch2nh2、-ch2nhso2ch3、-ch2nhch3、-ch2n(ch3)2、-co2h、-coch3、-co2ch3、-co2c(ch3)3、-coch(oh)ch3、-conh2、-conhch3、-con(ch3)2、-c(ch3)2conh2、-nh2、-nhch3、-n(ch3)2、-nhcoch3、-n(ch3)coch3、-nhs(o)2ch3、-n(ch3)c(ch3)2conh2、-n(ch3)ch2ch2s(o)2ch3、-no2、＝o、-oh、-och3、-och2ch3、-och2ch2och3、-och2ch2oh、-och2ch2n(ch3)2、-op(o)(oh)2、-s(o)2n(ch3)2、-sch3、-s(o)2ch3、-s(o)3h、環(huán)丙基、環(huán)丙基酰胺、環(huán)丁基、氧雜環(huán)丁烷基、氮雜環(huán)丁烷基、1-甲基氮雜環(huán)丁烷-3-基)氧基、n-甲基-n-氧雜環(huán)丁烷-3-基氨基、氮雜環(huán)丁烷-1-基甲基、芐基氧基苯基、吡咯烷-1-基、吡咯烷-1-基-甲酮、哌嗪-1-基、嗎啉代甲基、嗎啉代-甲酮和嗎啉代。

式ia-k化合物具有結(jié)構(gòu)：

其中r⁷為f、cl、br、i、-cn、-ch3、-ch2ch3、-ch(ch3)2、-ch2ch(ch3)2、-ch2oh、-ch2och3、-ch2ch2oh、-c(ch3)2oh、-ch(oh)ch(ch3)2、-c(ch3)2ch2oh、-ch2ch2so2ch3、-ch2op(o)(oh)2、-ch2f、-chf2、-ch2nh2、-ch2nhso2ch3、-ch2nhch3、-ch2n(ch3)2、-cf3、-ch2cf3、-ch2chf2、-ch(ch3)cn、-c(ch3)2cn、-ch2cn、-co2h、-coch3、-co2ch3、-co2c(ch3)3、-coch(oh)ch3、-conh2、-conhch3、-conhch2ch3、-conhch(ch3)2、-con(ch3)2、-c(ch3)2conh2、-nh2、-nhch3、-n(ch3)2、-nhcoch3、-n(ch3)coch3、-nhs(o)2ch3、-n(ch3)c(ch3)2conh2、-n(ch3)ch2ch2s(o)2ch3、-no2、＝o、-oh、-och3、-och2ch3、-och2ch2och3、-och2ch2oh、-och2ch2n(ch3)2、-op(o)(oh)2、-s(o)2n(ch3)2、-sch3、-s(o)2ch3、-s(o)3h、環(huán)丙基、環(huán)丙基酰胺基團(tuán)、氧雜環(huán)丁烷基、氮雜環(huán)丁烷基、1-甲基氮雜環(huán)丁烷-3-基)氧基、n-甲基-n-氧雜環(huán)丁烷-3-基氨基、氮雜環(huán)丁烷-1-基甲基、芐基氧基苯基、吡咯烷-1-基、吡咯烷-1-基-甲酮、哌嗪-1-基、嗎啉代甲基、嗎啉代-甲酮和嗎啉代；且

n選自0、1、2、3和4；

其中r⁸為h或-ch3；

式i化合物的示例性實(shí)施方案包括其中y¹為cr^b且y³為nr^a。

式i化合物的示例性實(shí)施方案包括其中y¹為n且y³為c(r^b)2。

式i化合物的示例性實(shí)施方案包括其中y²為-(ch2)-。

式i化合物的示例性實(shí)施方案包括其中y²為-(ch2ch2)-。

式i化合物的示例性實(shí)施方案包括其中r^c為h。

式i化合物的示例性實(shí)施方案包括其中cy為c6-c20芳二基，c6-c20芳二基為苯二基，且苯二基取代有一個(gè)或多個(gè)f。

式i化合物的示例性實(shí)施方案包括其中r¹和r²為h。

式i化合物的示例性實(shí)施方案包括其中r³為h，且r⁴為-ch3。

式i化合物的示例性實(shí)施方案包括其中r⁵為c1-c6氟烷基。

式i化合物的示例性實(shí)施方案包括其中m為0。

本發(fā)明還提供式xi包括式xia的四氫-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基化合物，及其藥物制劑，其潛在地用于治療由雌激素受體α(era)調(diào)節(jié)的疾病、病癥和/或障礙。

在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明化合物具有以下式(xi)結(jié)構(gòu)：

其中：

z¹和z²獨(dú)立選自-o-、-(ch2)-、-c(o)-或鍵；

cy為c6-c20芳基、c3-c12碳環(huán)基、c2-c20雜環(huán)基或c1-c20雜芳基；

x為-(ch2)-或-(ch2ch2)-；

r¹選自h、f、cl、-cn、-ch2oh、-ch(ch3)oh、-c(ch3)2oh、-ch(cf3)oh、-ch2f、-chf2、-ch2chf2、-cf3、-ch3、-c(o)nh2、-c(o)nhch3和-c(o)n(ch3)2；

每個(gè)r²獨(dú)立選自鹵素、-cn、-or¹⁰、-nr¹³r¹⁴、c1-c6烷基、c3-c8碳環(huán)基、-c1-c6烷基-oh、c3-c8碳環(huán)基-oh、-oc2-c6烷基-oh、c1-c6氟烷基、c3-c8氟碳環(huán)基、-c(＝o)or¹²、-nhc(＝o)r¹¹、-c(＝o)nhr¹²、-so2r¹¹、-nhso2r¹¹和-so2nhr¹²；

r⁴和r⁵各自獨(dú)立選自c1-c6烷基、c3-c8碳環(huán)基、-c1-c6烷基-oh、c3-c8碳環(huán)基-oh、c1-c6氟烷基、c3-c8氟碳環(huán)基、-c(＝o)or¹²；

r⁹獨(dú)立選自c1-c6烷基、c3-c8碳環(huán)基、-c1-c6烷基-oh、c3-c8碳環(huán)基-oh、c1-c6氟烷基、c3-c8氟碳環(huán)基、c2-c9雜環(huán)基、c6-c10芳基和c1-c10雜芳基；

r¹⁹獨(dú)立選自h、c1-c6烷基、c3-c8碳環(huán)基、-c1-c6烷基-oh、c3-c8碳環(huán)基-oh、c1-c6氟烷基、c3-c8氟碳環(huán)基、-c(＝o)or¹²、-c(＝o)nhr¹²、-so2r¹¹、-nhso2r¹¹、-so2nhr¹²、c6-c10芳基和c1-c10雜芳基；

每個(gè)r¹⁰獨(dú)立選自h、c1-c4烷基和c1-c4氟烷基；

每個(gè)r¹¹獨(dú)立選自c1-c4烷基和c1-c4氟烷基；

每個(gè)r¹²獨(dú)立選自h、c1-c4烷基和c1-c4氟烷基；

每個(gè)r¹³且每個(gè)r¹⁴獨(dú)立選自h和c1-c4烷基；且

m為0、1、2或3；

或其藥用鹽、溶劑化物或前藥。

在一些實(shí)施方案中，式(xi)化合物具有式(xia)結(jié)構(gòu)：

其中r^2a獨(dú)立為h或f，n為0、1或2，且r⁴和r⁵獨(dú)立為h或甲基。

在一些實(shí)施方案為式(xi)化合物，其中z¹為鍵。在一些實(shí)施方案為式(xi)化合物，其中z¹為-o-。在一些實(shí)施方案為式(xi)化合物，其中z¹為-(ch2)-。在一些實(shí)施方案為式(xi)化合物，其中z¹為-c(o)-。在一些實(shí)施方案為式(xi)化合物，其中z²為鍵。在一些實(shí)施方案為式(xi)化合物，其中z²為-o-。在一些實(shí)施方案為式(xi)化合物，其中z²為-(ch2)-。在一些實(shí)施方案為式(xi)化合物，其中z²為-c(o)-。在一些實(shí)施方案為式(xi)化合物，其中cy為c6-c20芳基。在一些實(shí)施方案為式(xi)化合物，其中cy為苯基。在一些實(shí)施方案為式(xi)化合物，其中cy為c3-c12碳環(huán)基。在一些實(shí)施方案為式(xi)化合物，其中cy為環(huán)己基。在一些實(shí)施方案為式(xi)化合物，其中cy為c2-c20雜環(huán)基。在一些實(shí)施方案為式(xi)化合物，其中cy為吡嗪基。在一些實(shí)施方案為式(xi)化合物，其中cy為哌啶基。在一些實(shí)施方案為式(xi)化合物，其中cy為c1-c20雜芳基。在一些實(shí)施方案為式(xi)化合物，其中cy為噻唑基。在一些實(shí)施方案為式(xi)化合物，其中cy為噁唑基。在一些實(shí)施方案為式(xi)化合物，其中cy為吡啶基。在一些實(shí)施方案為式(xi)化合物，其中r¹為h。在一些實(shí)施方案為式(xi)化合物，其中r¹為-ch3。在一些實(shí)施方案為式(xi)化合物，其中x為-(ch2)-。在一些實(shí)施方案為式(xi)化合物，其中x為-(ch2)-且r¹為h。在一些實(shí)施方案為式(xi)化合物，其中x為-(ch2ch2)-。在一些實(shí)施方案為式(xi)化合物，其中x為-(ch2ch2)-且r¹為h。在一些實(shí)施方案為式(xi)化合物，其中x為-(ch2ch2)-且r¹為-ch3。

在一些實(shí)施方案為式(xi)化合物，其中z¹為鍵，z²為-o-，cy為苯基，x為-(ch2)-，且r¹為h。在一些實(shí)施方案為式(xi)化合物，其中z¹為鍵，z²為-o-，cy為苯基，x為-(ch2ch2)-，且r¹為h。在一些實(shí)施方案為式(xi)化合物，其中z¹為鍵，z²為-o-，cy為苯基，x為-(ch2ch2)-且r¹為-ch3。

生物學(xué)評(píng)價(jià)

式i化合物作為酶活性(或其他生物活性)的抑制劑的相對(duì)效能可通過確定每個(gè)化合物以預(yù)定程度抑制活性的濃度、然后比較結(jié)果來建立。典型地，優(yōu)選的確定為在生物化學(xué)測(cè)定中抑制50％活性的濃度，即50％抑制濃度或“ic50”。ic50值的確定可使用本領(lǐng)域已知的常規(guī)技術(shù)來完成。一般地，ic50可通過在一定范圍的濃度的所研究的抑制劑的存在下測(cè)量給定酶的活性來確定。然后將通過實(shí)驗(yàn)獲得的酶活性值針對(duì)所用的抑制劑濃度來繪制曲線。顯示50％酶活性(相比于不存在任何抑制劑下的活性)的抑制劑濃度作為ic50值。類似地，其他抑制濃度可通過適當(dāng)?shù)幕钚源_定來定義。例如，在一些情況下，理想的是建立90％抑制濃度，即ic90等。

式i化合物的細(xì)胞增殖、細(xì)胞毒性和細(xì)胞存活可通過發(fā)光細(xì)胞存活力測(cè)定(promegacorp.)來測(cè)量。發(fā)光細(xì)胞存活力測(cè)定是一種基于對(duì)存在的atp定量而用于確定培養(yǎng)物中存活細(xì)胞數(shù)量的均相方法，這表示代謝活性細(xì)胞的存在。測(cè)定設(shè)計(jì)用于多孔板格式，使其對(duì)于自動(dòng)化高通量篩選(hts)、細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性測(cè)定而言是理想的。均相測(cè)定操作涉及將單一試劑(試劑)直接添加至在補(bǔ)充有血清的培養(yǎng)基中培養(yǎng)的細(xì)胞中。不需要細(xì)胞清洗、去除培養(yǎng)基或多個(gè)移液步驟。在添加試劑和混合后的10分鐘內(nèi)，系統(tǒng)在384孔格式中檢測(cè)到少至15個(gè)細(xì)胞/孔。

制備表1和2中的所有示例性式i化合物并通過具有檢測(cè)母離子的lcms[m+h]⁺(液相色譜-質(zhì)譜)表征。表1和2中的所有示例性式i化合物根據(jù)實(shí)施例901-907的測(cè)定、程序和操作針對(duì)與era(雌激素受體α)的結(jié)合和生物學(xué)活性進(jìn)行測(cè)試。表1中的er-αmcf7hcssinf(％)值通過實(shí)施例901的乳腺癌細(xì)胞era高含量熒光成像降解測(cè)定來測(cè)量。表1和2中的er-αmcf7hcsec50(μm)值通過實(shí)施例902和903中所述的體外細(xì)胞增殖測(cè)定來測(cè)量。實(shí)施例906和907的大鼠子宮濕重測(cè)定允許快速確定在er響應(yīng)組織(未成熟的大鼠子宮)中的化合物拮抗劑活性而競(jìng)爭(zhēng)天然er配體雌二醇，即拮抗劑模式(ashby,j.；etal(1997)regulatorytoxicologyandpharmacology:rtp,25(3):226-31)。表1和2的示例性式i化合物具有以下結(jié)構(gòu)、相應(yīng)命名(chembiodraw,version12.0.2,cambridgesoftcorp.,cambridgema)和生物活性。當(dāng)多于一種命名與式i化合物或中間體相關(guān)時(shí)，化學(xué)結(jié)構(gòu)應(yīng)當(dāng)定義該化合物。

表1

表2

式i的化合物的給藥

本發(fā)明化合物可通過適于待治療的病癥的任何途徑給藥。合適的途徑包括口服、腸胃外(包括皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、皮內(nèi)、鞘內(nèi)和硬膜外)、經(jīng)皮、直腸、經(jīng)鼻、局部(包括口腔和舌下)、陰道、腹膜內(nèi)、肺內(nèi)和鼻內(nèi)。對(duì)于局部免疫抑制治療而言，化合物可通過損傷區(qū)給藥(包括灌注或在移植前使移植物與抑制劑接觸)來給藥。應(yīng)該理解的是優(yōu)選的途徑可隨例如受體的條件而變化。當(dāng)口服給藥化合物時(shí)，可將其與藥用載體或賦形劑配制成丸劑、膠囊劑、片劑等。當(dāng)化合物腸胃外給藥時(shí)，可將其與藥用腸胃外媒介物一起配制，并且呈如下文詳述的單位劑量可注射形式。

治療人類患者的劑量可為約10毫克至約1000毫克的式i化合物。典型的劑量可為約100毫克至約300毫克化合物。劑量可每日一次(qid)、每日兩次(bid)或更頻繁給藥，這取決于藥物代謝動(dòng)力學(xué)和藥效學(xué)性質(zhì)，包括具體化合物的吸收、分布、代謝和排泄。此外，毒性因素可能影響劑量和給藥方案。當(dāng)口服給藥時(shí)，在指定時(shí)間期限內(nèi)，丸劑、膠囊劑或片劑可每日服用，或以更低的頻率服用。所述方案可重復(fù)多個(gè)治療周期。

用式i化合物治療的方法

本發(fā)明的式i化合物適用于治療如下人類或動(dòng)物，其患有由異常細(xì)胞生長(zhǎng)、與usp7相關(guān)的功能或行為引起的疾病或病癥，諸如免疫病癥、心血管疾病、病毒感染、發(fā)炎、代謝/內(nèi)分泌病癥或神經(jīng)病癥，因此可通過包括向其給予如上文所定義的本發(fā)明化合物的方法治療?；加邪┌Y的人類或動(dòng)物患者也可通過包括向其給予如上文所定義的本發(fā)明化合物的方法治療。從而患者的病癥可改善或緩解。

本發(fā)明的方法也包括治療如下癌癥，其選自乳腺癌、卵巢癌、子宮頸癌、前列腺癌、睪丸癌、泌尿生殖道癌、食道癌、喉癌、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、胃癌、皮膚癌、角化棘皮瘤、肺癌、表皮樣癌瘤、大細(xì)胞癌、非小細(xì)胞肺癌(nsclc)、小細(xì)胞癌瘤、肺腺癌、骨癌、結(jié)腸癌、腺瘤、胰腺癌、腺癌、甲狀腺癌、濾泡癌瘤、未分化癌瘤、乳頭狀癌瘤、精原細(xì)胞瘤、黑色素瘤、肉瘤、膀胱癌瘤、肝癌瘤及膽道癌、腎臟癌瘤、胰腺癌、骨髓病癥、淋巴瘤、毛細(xì)胞癌、口腔癌、鼻咽癌、咽癌、唇癌、舌癌、口癌、小腸癌、結(jié)腸-直腸癌、大腸癌、直腸癌、腦癌及中樞神經(jīng)系統(tǒng)癌癥、霍奇金病、白血病、支氣管癌、甲狀腺癌、肝癌及肝內(nèi)膽管癌、肝細(xì)胞癌、胃癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤/成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、子宮內(nèi)膜癌、黑色素瘤、腎癌及腎盂癌、膀胱癌、子宮體癌、子宮頸癌、多發(fā)性骨髓瘤、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、淋巴細(xì)胞性白血病、慢性淋巴性白血病(cll)、骨髓白血病、口腔及咽癌、非霍奇金淋巴瘤、黑色素瘤及絨毛狀結(jié)腸腺瘤。

藥物制劑

為了使用本發(fā)明化合物用于對(duì)哺乳動(dòng)物(包括人)進(jìn)行治療性處置，通常根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)藥學(xué)實(shí)踐將其配制為藥物組合物。根據(jù)本發(fā)明的這一方面，其提供了藥物組合物，其包含本發(fā)明化合物，以及結(jié)合有藥用稀釋劑或載體。

典型的制劑通過將本發(fā)明化合物與載體、稀釋劑或賦形劑混合來制備。合適的載體、稀釋劑和賦形劑是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的，并且包括以下物質(zhì)，如碳水化合物、蠟、水溶性聚合物和/或水可溶脹聚合物(swellablepolymer)、親水性物質(zhì)或疏水性物質(zhì)、明膠、油、溶劑、水等。所用的具體載體、稀釋劑或賦形劑將取決于應(yīng)用本發(fā)明化合物的方式和目的。通?；诒绢I(lǐng)域技術(shù)人員認(rèn)為給予哺乳動(dòng)物安全的溶劑(gras)來選擇溶劑。一般而言，安全溶劑為無毒性含水溶劑如水和可在水中溶解或混溶的其它無毒性溶劑。合適的含水溶劑包括水、乙醇、丙二醇、聚乙二醇(例如，peg400、peg300)等及其混合物。制劑還可包括以下物質(zhì)中的一種或多種：緩沖劑、穩(wěn)定劑、表面活性劑、潤(rùn)濕劑、潤(rùn)滑劑、乳化劑、助懸劑、防腐劑、抗氧化劑、遮光劑(opaquingagent)、助流劑、加工助劑(processingaid)、著色劑、增甜劑、芳香劑、矯味劑和提供藥物(即本發(fā)明化合物或其藥物組合物)的優(yōu)質(zhì)外觀或輔助制造藥物產(chǎn)品(即藥物)的其它已知添加劑。

制劑可使用常規(guī)溶出和混合操作制備。例如，將大塊的藥品(即，本發(fā)明化合物或化合物的經(jīng)穩(wěn)定形式(例如，與環(huán)糊精衍生物或其它已知復(fù)合劑(complexationagent)的復(fù)合物))在一種或多種上述的賦形劑存在下溶于合適的溶劑中。通常將本發(fā)明化合物配制成提供容易可控制藥物的劑量且使患者能夠依從所給出的方案的藥物劑型。

取決于用于給藥藥物的方法，用于施用的藥物組合物(或制劑)可按多種方式包裝。一般地，用于分配的物品包括容器，容器內(nèi)存放有適當(dāng)形式的藥物制劑。合適的容器是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的，并且包括以下物質(zhì)，如瓶(塑料的和玻璃的)、小袋(sachet)、安瓿、塑料袋、金屬圓筒等。容器還可包括防止不慎重取得包裝中的內(nèi)含物的的防干擾裝置(tamper-proofassemblage)。此外，在容器上具有描述容器中的內(nèi)含物的標(biāo)簽。所述標(biāo)簽還可包括適當(dāng)?shù)淖⒁馐马?xiàng)。

可制備本發(fā)明化合物的藥物制劑用于多種給藥途徑和類型。例如，具有期望的純度的式i的化合物可任選與藥用稀釋劑、載體、賦形劑或穩(wěn)定劑(remington'spharmaceuticalsciences(1980)16thedition,osol,a.ed.)以凍干制劑、磨細(xì)的粉末劑或水溶液劑形式混合。配制可如下進(jìn)行：在環(huán)境溫度在適當(dāng)?shù)膒h以及在適當(dāng)?shù)募兌扰c生理學(xué)可接受的載體(即在采用的劑量和濃度下對(duì)受體是無毒性的載體)混合。制劑的ph主要取決于具體用途和化合物的濃度，但范圍可為約3至約8。在乙酸鹽緩沖液中ph為5的制劑是合適的實(shí)施方案。

化合物通?？蓛?chǔ)存為固體組合物、凍干制劑或水溶液劑。

本發(fā)明的藥物組合物將按照與良好醫(yī)學(xué)實(shí)踐一致的方式(即量、濃度、時(shí)間表、過程、媒介物和給藥途徑)來配制、確定劑量和給藥。在此背景下考慮的因素包括所治療的具體病癥、所治療的具體哺乳動(dòng)物、個(gè)體患者的臨床情況、病癥的起因、藥物的遞送位點(diǎn)、給藥方法、給藥的時(shí)間表和醫(yī)學(xué)實(shí)踐者已知的其它因素。所給藥的化合物的“治療有效量”將由這些考慮因素控制，并且是預(yù)防、改善或治療過度增殖性病癥所需的最小量。

作為通常的建議，每劑量腸胃外給藥的初始藥學(xué)有效量的抑制劑為約每日0.01-100毫克/kg，即約0.1至20毫克/kg患者體重，所使用的化合物的典型的最初范圍為0.3至15毫克/kg/日。

可接受的稀釋劑、載體、賦形劑和穩(wěn)定性在所用的劑量和濃度下對(duì)受體是無毒性的，并且包括緩沖劑如磷酸鹽、枸櫞酸鹽和其它有機(jī)酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸和蛋氨酸(methionine)；防腐劑(如十八烷基二甲基芐基氯化銨；氯化六甲雙銨(hexamethoniumchloride)；苯扎氯銨、芐索氯胺；苯酚、丁醇或芐醇；對(duì)羥基苯甲酸烷基酯，如對(duì)羥基苯甲酸甲酯或?qū)αu基苯甲酸丙酯；兒茶酚；間苯二酚(resorcinol)；環(huán)己醇；3-戊醇和間甲酚)；低分子量(少于約10個(gè)殘基)多肽；蛋白質(zhì)，如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、組氨酸、精氨酸或賴氨酸；單糖、二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，如edta；糖如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成鹽的抗衡離子，如鈉；金屬絡(luò)合物(例如，zn-蛋白質(zhì)絡(luò)合物)；和/或非離子型表面活性劑，如tween^tm、pluronics^tm或聚乙二醇(peg)。活性藥物成分還可包埋在通過例如凝聚技術(shù)或通過界面聚合制備的微膠囊中，例如在膠體藥物遞送系統(tǒng)(例如脂質(zhì)體、白蛋白微球、微乳液、納米顆粒和納米膠囊(nanocapsules))中或在巨乳液(macroemulsion)中，分別為羥基甲基纖維素或明膠微膠囊和聚-(甲基丙烯酸甲酯)微膠囊。所述技術(shù)披露于remington'spharmaceuticalsciences16thedition,osol,a.ed.(1980)中。

可制備式i化合物的緩釋制劑。緩釋制劑的合適實(shí)例包括含有式i化合物的的固態(tài)疏水性聚合物的半滲透性基質(zhì)，其中基質(zhì)以成形的物品形式(例如薄膜或微膠囊)存在。緩釋基質(zhì)的實(shí)例包括聚酯、水凝膠(例如，聚(甲基丙烯酸2-羥基乙酯)或聚(乙烯醇))、聚交酯(us3773919)、l-谷氨酸和γ-乙基-l-谷氨酸的共聚物、非降解性乙烯-乙酸乙烯酯、降解性乳酸-羥乙酸共聚物如luprondepot^tm(由乳酸-羥乙酸共聚物和醋酸亮丙瑞林組成的可注射微球)和聚-d-(-)-3-羥基丁酸。

所述制劑包括適于本申請(qǐng)?jiān)斒龅慕o藥途徑的制劑。制劑可適宜地以單位劑量形式存在并可通過藥學(xué)領(lǐng)域公知的任何方法制備。技術(shù)和制劑通常參見remington'spharmaceuticalsciences(mackpublishingco.,easton,pa)。所述方法包括使活性成分與構(gòu)成一種或多種助劑(accessoryingredient)的載體結(jié)合的步驟。通常制劑如下制備：使活性成分與液態(tài)載體或微細(xì)分散的固態(tài)載體或與這兩種載體同時(shí)均勻和緊密的結(jié)合，然后必要時(shí)，對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行成型。

適于口服給藥的式i的化合物的制劑可制備為離散的單位，如各自含有預(yù)定量的式i的化合物的丸劑、膠囊劑、扁囊劑或片劑。壓制片可如下制備：在合適的機(jī)器中對(duì)自由流動(dòng)形式(如粉末或顆粒)的活性成分以及任選混合的粘合劑、潤(rùn)滑劑、惰性稀釋劑、防腐劑、表面活性劑或分散劑進(jìn)行壓制。模制片可如下制備：在合適的機(jī)器中對(duì)用惰性液態(tài)稀釋劑潤(rùn)濕的粉末狀活性成分的混合物進(jìn)行模制。可任選對(duì)片劑進(jìn)行包衣或刻痕，并任選進(jìn)行配制以提供活性成分從其中緩慢或控制釋放?？芍苽淦瑒?、含片(troche)、糖錠、水性混懸劑或油性混懸劑、可分散粉末劑或可分散顆粒劑、乳劑、硬膠囊劑或軟膠囊劑例如明膠膠囊、糖漿劑或酏劑，以用于口服。預(yù)期用于口服的式i的化合物的制劑可根據(jù)制備藥物組合物的領(lǐng)域已知的任何方法制備，所述組合物可含有一種或多種試劑，包括增甜劑、矯味劑、著色劑和防腐劑，以提供適口的制劑。含有活性成分以及混合有適于制造片劑的無毒性生理學(xué)可接受的賦形劑的片劑是可接受的。這些賦形劑可以是，例如，惰性稀釋劑，如碳酸鈣或碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣或磷酸鈉；成粒劑和崩解劑(granulatinganddisintegratingagent)，如玉米淀粉或海藻酸；粘合劑，如淀粉、明膠或阿拉伯膠；以及潤(rùn)滑劑，如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石。片劑可以是未包衣的或可通過已知技術(shù)(包括微膠囊化)包衣，以延遲在胃腸道的崩解和吸收，由此在較長(zhǎng)的時(shí)間提供持續(xù)的作用。例如，可采用定時(shí)延遲物質(zhì)，如單獨(dú)的或與蠟結(jié)合的單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。

對(duì)于治療眼部或其它外部組織如嘴和皮膚而言，所述制劑優(yōu)選應(yīng)用為局部軟膏劑(ointment)或乳膏劑(cream)，其含有的活性成分的量為例如，0.075至20％w/w。當(dāng)配制成軟膏劑時(shí)，活性成分可與石蠟(paraffinic)或可與水混溶的軟膏基質(zhì)一起使用?？晒┻x擇地，活性成分可與水包油性乳膏基質(zhì)一起配制成乳膏。如果期望的話，乳膏基質(zhì)的水相可包括多元醇，即，具有兩個(gè)或更多個(gè)羥基的醇，如丙二醇、丁-1,3-二醇、甘露醇、山梨醇、甘油和聚乙二醇(包括peg400)及這些醇的混合物。局部制劑可預(yù)期包括增強(qiáng)活性成分通過皮膚或其它作用區(qū)域吸收或滲透的化合物。所述皮膚滲透增強(qiáng)劑的實(shí)例包括二甲基亞砜和相關(guān)類似物。本發(fā)明的乳劑的油相可由已知成分以已知方式構(gòu)成。當(dāng)所述相可僅包含乳化劑時(shí)，預(yù)期其包含至少一種乳化劑與脂肪或油或與脂肪和油兩者的混合物。優(yōu)選地，包括親水性乳化劑以及作為穩(wěn)定劑的親脂性乳化劑。其還優(yōu)選同時(shí)包括油和脂肪。同時(shí)，含有或不含有穩(wěn)定劑的乳化劑構(gòu)成了所謂的乳化蠟(emulsifyingwax)，所述蠟和油和脂肪一起構(gòu)成了形成軟膏制劑的油性分散相的所謂乳化軟膏基質(zhì)。適用于本發(fā)明制劑的乳化劑和乳化穩(wěn)定劑包括60、80、十八醇/十六醇(cetostearylalcohol)、芐醇、肉豆蔻醇、單硬脂酸甘油酯和月桂基硫酸鈉。

式i化合物的水性混懸劑含有活性物質(zhì)以及混合有適于制備水性混懸劑的賦形劑。所述賦形劑包括助懸劑，如羧甲基纖維素鈉、交聯(lián)羧甲基纖維素、聚維酮、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、海藻酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮、西黃蓍膠和阿拉伯膠，以及分散或潤(rùn)濕劑(dispersingorwettingagent)，如天然存在的磷脂(例如，卵磷脂)、烯化氧與脂肪酸的縮合產(chǎn)物(例如，聚氧乙烯硬脂酸酯)、環(huán)氧乙烷與長(zhǎng)鏈脂肪醇的縮合產(chǎn)物(例如，十七亞乙氧基十六醇(heptadecaethyleneoxycetanol))、環(huán)氧乙烷與衍生自脂肪酸和己糖醇脫水物(hexitolanhydride)的偏酯的縮合產(chǎn)物(例如，聚氧乙烯脫水山梨糖醇單油酸酯(polyoxyethylenesorbitanmonooleate))。水性混懸劑還可含有一種或多種防腐劑如對(duì)羥基苯甲酸乙酯或?qū)αu基苯甲酸正丙酯、一種或多種著色劑、一種或多種矯味劑和一種或多種增甜劑如蔗糖或糖精。

式i的化合物的藥物組合物可呈無菌注射制劑，如無菌注射水性混懸劑或油性混懸液制劑形式存在。該混懸液可使用上文已提及的合適的分散劑或潤(rùn)濕劑和助懸劑根據(jù)本領(lǐng)域已知方法配制。無菌注射制劑還可以是于無毒性的腸胃外可接受的稀釋劑或溶劑中的無菌注射溶液或混懸液，如于1,3-丁二醇中的溶液，或制備為凍干粉末?？墒褂玫目山邮苊浇槲锖腿軇┌ㄋ⒘指袷先芤?ringer'ssolution)和等張氯化鈉溶液。此外，無菌不揮發(fā)性油(sterilefixedoil)通常可用作溶劑或助懸介質(zhì)。出于該目的，可采用任何溫和的不揮發(fā)性油，包括合成性甘油一酯或甘油二酯。此外，脂肪酸如油酸同樣可用于制備注射劑。

可與載體物質(zhì)結(jié)合以產(chǎn)生單一劑量形式的活性成分的量將隨著所治療的宿主和具體的給藥模式而變化。例如，意在對(duì)人類口服給藥的定時(shí)釋放制劑可含有約1至1000毫克活性物質(zhì)，以及混合有適當(dāng)和適宜量的載體物質(zhì)，所述載體其可占總組合物(重量:重量)的約5至約95％。可制備藥物組合物以提供給藥時(shí)容易測(cè)量的量。例如，意在用于靜脈輸注的水溶液每毫升溶液可含有約3至500μg活性成分，從而合適體積的輸注以約30毫升/hr的速率出現(xiàn)。

適于腸胃外給藥的制劑包括水性和非水性無菌注射溶液劑，其可含有抗氧化劑、緩沖劑、抑菌劑和使得制劑與預(yù)期受體的血液等張的溶質(zhì)；以及水性和非水性無菌混懸劑，其可包括助懸劑和增稠劑。

適于局部給藥至眼部的制劑還包括滴眼劑，其中將活性成分溶于或懸浮于合適的載體(尤其是活性成分的含水溶劑)中。在所述制劑中存在的活性成分的濃度優(yōu)選為約0.5至20％w/w，例如約0.5至10％w/w，例如約1.5％w/w。

適于在口內(nèi)局部給藥的制劑包括糖錠(lozenge)，其含有于矯味基質(zhì)(通常是蔗糖和阿拉伯膠或西黃蓍膠)中的活性成分；錠劑(pastille)，其含有于惰性基質(zhì)(如明膠和甘油，或蔗糖和阿拉伯膠)中的活性成分；以及漱口劑，其包含于液態(tài)載體中的活性成分。

適于直腸給藥的制劑可呈現(xiàn)為栓劑形式，其具有合適基質(zhì)(其包含例如可可脂或水楊酸酯)。

適于肺內(nèi)或經(jīng)鼻給藥的制劑具有例如為0.1至500微米的粒度(包括在0.1和500微米之間，增量為例如0.5、1、30微米、35微米等的粒度)，其通過鼻道經(jīng)快速吸入給藥或通過口經(jīng)吸入給藥，以便到達(dá)肺泡囊(alveolarsacs)。合適的制劑包括活性成分的水性或油性溶液劑。適于氣霧劑或干粉給藥的制劑可根據(jù)常規(guī)方法制備，并可與其它治療藥物(如迄今用于治療或預(yù)防下文所述的病癥的化合物)一起遞送。

適于陰道給藥的制劑可呈現(xiàn)為陰道栓劑、棉塞(tampon)、乳膏劑、凝膠劑、糊劑、泡沫或噴霧制劑，這些制劑除了活性成分外還含有本領(lǐng)域已知為適當(dāng)?shù)妮d體。

制劑可包裝在單位劑量或多劑量容器例如密封安瓿或小瓶中，并且可在冷凍干燥(凍干)條件下儲(chǔ)存，在立即使用前僅需要加入無菌液態(tài)載體例如水，用于注射。即時(shí)注射溶液劑(extemporaneousinjectionsolutionsandsuspension)和混懸劑從前述種類的無菌粉末、顆粒和片劑制備。優(yōu)選的單位劑量制劑是含有本申請(qǐng)上文所述的日劑量或單位日亞劑量(sub-dose)或其適當(dāng)分?jǐn)?shù)的活性成分的制劑。

本發(fā)明還提供了獸用組合物(veterinarycomposition)，由此其含有上文定義的至少一種活性成分以及獸用載體。獸用載體是用于給藥所述組合物目的的物質(zhì)，并可為固態(tài)、液態(tài)或氣態(tài)物質(zhì)，這些物質(zhì)在獸醫(yī)領(lǐng)域要么是惰性的要么是可接受的，并且與活性成分相容。這些獸用組合可經(jīng)腸胃外、口服或經(jīng)任何其它期望的途徑給藥。

聯(lián)用治療

式i化合物可單獨(dú)或與其他治療劑組合用于治療本文所述的疾病或病癥，諸如炎癥或過度增殖性病癥(例如癌癥)。在某些實(shí)施方案中，式i化合物與具有抗炎或抗過度增殖特性或適用于治療炎癥、免疫反應(yīng)病癥或過度增殖性病癥(例如癌癥)的另一第二治療性化合物一起組合于藥物組合制劑或組合療法形式的給藥方案中。另一治療劑可為bcl-2抑制劑、jak抑制劑、pi3k抑制劑、mtor抑制劑、抗炎劑、免疫調(diào)節(jié)劑、化學(xué)治療劑、細(xì)胞凋亡增強(qiáng)劑、親神經(jīng)因子、治療心血管疾病的藥物、治療肝病的藥物、抗病毒劑、治療血液病癥的藥物、治療糖尿病的藥物及治療免疫缺陷病癥的藥物。第二治療劑可為nsaid抗炎劑。第二治療劑可為化學(xué)治療劑。藥物組合制劑或給藥方案的第二化合物優(yōu)選具有對(duì)式i化合物的補(bǔ)充活性，使得其不會(huì)不利地彼此影響。所述化合物適合以有效用于所欲目的的量存在于組合中。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物包含式i化合物或其立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、溶劑化物、代謝物或藥用鹽或前藥與諸如nsaid的治療劑的組合。

組合療法可以同時(shí)或依序方案給予。當(dāng)依序給予時(shí)，該組合可分兩次或兩次以上給藥來給予。組合給予包括使用分開的制劑或單一藥物制劑共給予及以任一次序連續(xù)給予，其中優(yōu)選存在兩種(或所有)活性劑同時(shí)發(fā)揮其生物活性的時(shí)段。

以上共同給予藥物中的任一者的適合劑量為當(dāng)前所用劑量且可由于新鑒別藥物及其他治療劑或療法的組合作用(協(xié)同作用)而降低。

組合療法可提供“協(xié)同作用”且證明“協(xié)同性”，即當(dāng)活性成分一起使用時(shí)所達(dá)成的作用大于由分別使用化合物所產(chǎn)生的作用的總和。協(xié)同作用可在活性成分如下時(shí)獲得：(1)于組合的單位劑量制劑中同時(shí)共同配制及給予或遞送；(2)以分開的制劑形式交替或同時(shí)遞送；或(3)一些其他方案。當(dāng)以交替療法遞送時(shí)，在依序給予或遞送化合物，例如通過用分開的注射器進(jìn)行不同注射、通過分開的丸劑或膠囊或利用分開的輸注時(shí)，可獲得協(xié)同作用。一般而言，在交替療法期間，依序(即連續(xù))給予有效劑量的各活性成分，而在組合療法中，一起給予有效劑量的兩種或兩種以上活性成分。

在療法的具體實(shí)施方案中，式i化合物或其立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、溶劑化物、代謝物或藥用鹽或前藥可與其他治療劑、激素或抗體藥物(諸如本文所述的藥物)組合以及與外科療法及放射療法組合。因此，本發(fā)明的組合療法包括給予至少一種式i化合物或其立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、溶劑化物、代謝物或藥用鹽或前藥，及使用至少一種其他癌癥治療方法。式i化合物及其他藥物活性治療劑的量及相對(duì)給予時(shí)序經(jīng)選擇以達(dá)成所要組合治療作用。

在一些實(shí)施方案中，式i化合物或其藥用鹽與以下組合使用：芳香酶抑制劑、磷酸肌醇3-激酶(pi3k)/mtor途徑抑制劑、cdk4/6抑制劑、her-2抑制劑、egfr抑制劑、pd-1抑制劑、聚adp-核糖聚合酶(parp)抑制劑、組蛋白去乙?；?hdac)抑制劑、hsp90抑制劑、vegfr抑制劑、akt抑制劑、化學(xué)療法或其任何組合。

在一些實(shí)施方案中，包含式i化合物或其藥用鹽的藥物組合物與選自以下的治療劑組合給予：紫杉醇、阿那曲唑、依西美坦、環(huán)磷酰胺、表柔比星、氟維司群、來曲唑、吉西他濱、曲妥單抗(genentech)、曲妥單抗恩坦辛(genentech)、聚乙二醇非格司亭、非格司亭、他莫昔芬、多西他賽、托瑞米芬、長(zhǎng)春瑞濱、卡培他濱和伊沙匹隆。

在一些實(shí)施方案中，式i化合物或其藥用鹽與激素阻斷療法、化學(xué)療法、放射療法、單克隆抗體或其組合組合使用。

激素阻斷療法包括使用阻斷雌激素產(chǎn)生或阻斷雌激素受體的藥物。在一些實(shí)施例中，激素阻斷療法包括使用雌激素受體調(diào)節(jié)劑及/芳香酶抑制劑。雌激素受體調(diào)節(jié)劑包括三苯乙烯衍生物(例如他莫昔芬、托瑞米芬、曲洛昔芬、3-羥基他莫昔芬、艾多昔芬、tat-59(4-羥基他莫昔芬的磷酸化衍生物)及gw5638(他莫昔芬的甲酸衍生物))；非類固醇雌激素受體調(diào)節(jié)劑(例如雷洛昔芬、ly353381(serm3)和ly357489)；類固醇雌激素受體調(diào)節(jié)劑(例如ici-182,780)。芳香酶抑制劑包括類固醇芳香酶抑制劑及非類固醇芳香酶抑制劑。類固醇芳香酶抑制劑包括(但不限于)該依西美坦。非類固醇芳香酶抑制劑包括(但不限于)阿那曲唑及來曲唑。

在一些實(shí)施方案中，式i化合物或其藥用鹽與cdk4/6抑制劑組合給予。在一些實(shí)施方案中，所述cdk4/6抑制劑為帕泊昔布(pd-0332991)、瑞泊昔布(lee011)或ly283519。在一些實(shí)施方案中，所述cdk4/6抑制劑為lee011。在一些實(shí)施方案中，以每天約10mg至每天約1000mg的劑量給予瑞泊昔布(lee011)。在一些實(shí)施方案中，以每天約400mg、每天約500mg或每天約600mg的劑量給予。在一些實(shí)施方案中，經(jīng)口給予該日劑量的lee011。在一些實(shí)施方案中，一天經(jīng)口給予該日劑量的瑞泊昔布(lee011)一次歷時(shí)三周，繼而為不給予瑞泊昔布(lee011)的一周停藥期。

在一些實(shí)施方案中，式i化合物或其藥用鹽與磷酸肌醇3-激酶(pi3k)/mtor途徑抑制劑組合給予。在一些實(shí)施方案中，所述磷酸肌醇3-激酶(pi3k)/mtor途徑抑制劑為依維莫司、坦羅莫司、bez235(達(dá)妥昔布)、byl719(艾培昔布)、gdc0032(他塞利昔布)、bkm120(布帕昔布)、bgt226、gdc0068(依巴替布)、gdc-0980(阿托昔布)、gdc0941(匹克昔布)、ink128(mln0128)、ink1117、osi-027、cc-223、azd8055、sar245408、sar245409、pf04691502、wye125132、gsk2126458、gsk-2636771、bay806946、pf-05212384、sf1126、px866、amg319、zstk474、cal101(艾德昔布)、pwt33597、cu-906、azd-2014或cudc-907。在一些實(shí)施方案中，所述磷酸肌醇3-激酶(pi3k)/mtor途徑抑制劑為依維莫司。在一些實(shí)施方案中，以每天約1mg至每天約20mg的劑量給予依維莫司。在一些實(shí)施方案中，以每天約2.5mg、每天約5mg或每天約10mg的劑量給予依維莫司。在一些實(shí)施方案中，一天給予該日劑量的依維莫司一次。在一些實(shí)施方案中，所述磷酸肌醇3-激酶(pi3k)/mtor途徑抑制劑為bkm120(布帕昔布)。在一些實(shí)施方案中，以每天約5mg至每天約500mg的劑量給予bkm120(布帕昔布)。在一些實(shí)施方案中，以每天約50mg至每天約100mg的劑量給予bkm120。在一些實(shí)施方案中，以每天約100mg的劑量給予bkm120。在一些實(shí)施方案中，一天給予該日劑量的bkm120一次。在一些實(shí)施方案中，所述磷酸肌醇3-激酶(pi3k)/mtor途徑抑制劑為byl719。在一些實(shí)施方案中，以每天約25mg至每天約1000mg的劑量給予byl719。在一些實(shí)施方案中，以每天約250mg或每天約350mg的劑量給予byl719。在一些實(shí)施方案中，一天給予該日劑量的byl719一次。

式i化合物的代謝物

本申請(qǐng)描述的式i的體內(nèi)代謝產(chǎn)物也落入本發(fā)明的范圍內(nèi)。所述產(chǎn)物可以是由例如所給藥的化合物的氧化、還原、水解、酰胺化、脫酰胺化、酯化、脫脂化、酶法裂解等而引起的。因此，本發(fā)明包括式i化合物的代謝物，包括由以下方法產(chǎn)生的化合物，所述方法包括使本發(fā)明化合物與哺乳動(dòng)物接觸足以產(chǎn)生其代謝產(chǎn)物的一段時(shí)間。

代謝產(chǎn)物通常如下鑒定：制備本發(fā)明化合物的放射標(biāo)記的(例如，¹⁴c或³h)同位素，將其以可檢測(cè)的劑量(例如，大于約0.5毫克/kg)腸胃外給藥至動(dòng)物，如大鼠、小鼠、豚鼠、猴或給藥至人，允許足夠發(fā)生代謝的時(shí)間(通常約30秒至30小時(shí))，然后將其轉(zhuǎn)化產(chǎn)物與尿、血樣或其它生物試樣分離。這些產(chǎn)物容易分離，因?yàn)樗鼈冞M(jìn)行了標(biāo)記(其它的通過使用能夠與代謝物中存活的抗原表位結(jié)合的抗體來分離)。代謝物結(jié)構(gòu)以常規(guī)方式，例如通過ms、lc/ms或nmr分析確定。一般而言，代謝物的分析以與本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的常規(guī)藥物代謝研究中相同的方式完成。所述代謝產(chǎn)物，只要它們不是在體內(nèi)另外存在的，就用于本發(fā)明化合物的治療劑量的診斷測(cè)定。

制品

在本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，其提供了含有用于治療上文描述的疾病和病癥的物質(zhì)的制品和“試劑盒”。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述試劑盒包含容器，所述容器包含式i的化合物其立體異構(gòu)體、幾何異構(gòu)體、互變異構(gòu)體或藥用鹽。所述試劑盒還可包含附在容器上或容器中的標(biāo)簽或包裝說明書。術(shù)語“包裝說明書”用來指通常包括在治療產(chǎn)品的市售包裝中的說明書，其含有關(guān)于適應(yīng)癥、用法、劑量、給藥、禁忌癥和/或注意事項(xiàng)的信息，這些信息涉及所述治療產(chǎn)品的使用。合適的容器包括，例如，瓶、小瓶、注射器、發(fā)泡包裝(blisterpack)等。容器可從多種材料(如玻璃或塑料)形成。容器可裝有有效治療所述病癥的式i的化合物或其制劑，并可具有無菌入口(例如，容器可為靜脈注射溶液袋或具有可由皮下注射針頭刺穿的塞子的小瓶)。在組合物中至少一種活性藥物是式i的化合物。標(biāo)簽或包裝說明書指示所述組合物用于治療選擇的病癥如癌癥。此外，標(biāo)簽或包裝說明書可指示待治療的患者是患有病癥如過度增殖性病癥、神經(jīng)變性、心臟肥大、疼痛、偏頭痛或神經(jīng)創(chuàng)傷性疾病或事件的患者。在一個(gè)實(shí)施方案中，標(biāo)簽或包裝說明書指示包含式i的化合物的組合物可用于治療起因于異常細(xì)胞生長(zhǎng)的病癥。標(biāo)簽或包裝說明書還可指示所述組合物可用于治療其它病癥?？晒┻x擇地或另外地，所述制品還可包含第二種容器，所述容器包含藥用緩沖液，如抑菌性注射用水(bwfi)、磷酸鹽緩沖生理鹽水、林格氏溶液和葡萄糖溶液。試劑盒還可包括從商業(yè)和使用者角度看是期望的其它物質(zhì)，包括其它緩沖液、稀釋劑、濾器、針頭和注射器。

試劑盒還可包含給藥式i的化合物以及第二種藥物制劑(如果存在)的說明。例如，若試劑盒包含第一種組合物(含有式i的化合物)和第二種藥物制劑，則試劑盒還可包含將第一種和第二種藥物組合物同時(shí)、先后或分開給予需要所述制劑的患者的說明。

在另一實(shí)施方案中，試劑盒適于遞送固態(tài)口服形式的式i的化合物，如片劑或膠囊劑。這樣的試劑盒優(yōu)選包括多個(gè)單位劑量。所述試劑盒可以包括針對(duì)預(yù)期用途為目的的劑量卡片。這樣的試劑盒的一個(gè)實(shí)例是“泡罩包裝”。泡罩包裝在包裝工業(yè)中是公知的，并且廣泛用于包裝藥物單位劑量形式。如果期望的話，可提供記憶輔助裝置(memoryaid)，其可呈例如數(shù)字、字母或其它標(biāo)記形式，或具有日歷插入物，所述記憶輔助裝置指定在可對(duì)所述劑量進(jìn)行給藥的治療時(shí)間表中的天數(shù)。

根據(jù)一實(shí)施方案，試劑盒可包含(a)在其中含有式i的化合物的第一個(gè)容器；以及任選地(b)在其中含有第二種藥物制劑的第二個(gè)容器，其中所述第二種藥物制劑包含具有抗過度增殖活性的第二種化合物?？晒┻x擇地或另外地，所述試劑盒還可包含第三個(gè)容器，其包含藥用緩沖液，如抑菌性注射用水(bwfi)、磷酸鹽緩沖生理鹽水、林格氏溶液和葡萄糖溶液。其還可包括從商用和使用者角度來看是期望的其它物質(zhì)，包括其它緩沖液、稀釋劑、濾器、針頭和注射器。

在試劑盒包含式i和第二種治療藥物的組合物的某些其它實(shí)施方案中，所述試劑盒可包含用于容納分開的組合物的容器，如分開的瓶或分開的箔包裝(foilpacket)，然而，分開的組合物還可容納在單一的未分開的容器中。典型地，試劑盒包含給藥分開的組分的說明。當(dāng)分開的組分優(yōu)選以不同劑量形式(例如口服和腸胃外)給藥時(shí)，當(dāng)以不同劑量間隔給藥時(shí)，或當(dāng)對(duì)聯(lián)用的單獨(dú)組分進(jìn)行滴定對(duì)主治醫(yī)師是期望之時(shí)，試劑盒形式是特別有益的。

式i化合物的制備

式i化合物可通過包括與化學(xué)領(lǐng)域公知的方法所類似的方法的合成途徑，特別是根據(jù)本申請(qǐng)所包含的說明書來合成，以及針對(duì)描述于以下的雜環(huán)的那些：comprehensiveheterocyclicchemistryii,editorskatritzkyandrees,elsevier,1997,e.g.volume3；liebigsannalenderchemie,(9):1910-16,(1985)；helveticachimicaacta,41:1052-60,(1958)；arzneimittel-forschung,40(12):1328-31,(1990)，在此將這些文獻(xiàn)清楚地引入作為參考。起始物質(zhì)一般獲自商業(yè)來源諸如aldrichchemicals(milwaukee,wi)或使用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法容易地制備(例如經(jīng)一般描述于louisf.fieserandmaryfieser,reagentsfororganicsynthesis,v.1-23,wiley,n.y.(1967-2006ed.)或beilsteinshandbuchderorganischenchemie,4,aufl.ed.springer-verlag,berlin,包括附錄(也可由beilstein在線數(shù)據(jù)庫(kù)獲得)的方法)。

用于合成式i化合物的合成化學(xué)轉(zhuǎn)換和保護(hù)基方法學(xué)(保護(hù)與脫保護(hù))以及必要的試劑和中間體是本領(lǐng)域已知的，并且包括，例如描述于r.larock,comprehensiveorganictransformations,vchpublishers(1989)；t.w.greeneandp.g.m.wuts,protectivegroupsinorganicsynthesis,3^rded.,johnwileyandsons(1999)；andl.paquette,ed.,encyclopediaofreagentsfororganicsynthesis,johnwileyandsons(1995)及其后續(xù)版本中的那些。

式i的化合物可單獨(dú)制備或作為包含至少2種，例如5至1,000種或10至100種化合物的化合物庫(kù)來制備。式i的化合物庫(kù)可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的操作，使用溶液相或固相化學(xué)，通過組合的“分裂和混合(splitandmix)”途徑來制備，或通過多平行合成(multipleparallelsyntheses)來制備。由此根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方法，其提供了含有至少2種化合物或其藥用鹽的化合物庫(kù)。

實(shí)施例提供了制備式i化合物的示例性方法。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解，可使用其它合成途徑來合成式i化合物。盡管在附圖和實(shí)施例中描述和討論了具體原料和試劑，但是可容易地替換為其它原料和試劑，從而提供多種衍生物和/或反應(yīng)條件。此外，通過下文描述的方法制備的許多示例化合物可根據(jù)本公開使用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的常規(guī)化學(xué)來進(jìn)一步修飾。

在制備式i化合物時(shí)，對(duì)中間體的遠(yuǎn)距離官能團(tuán)(例如，伯胺或仲胺)的保護(hù)可能是必要的。對(duì)所述保護(hù)的需要將隨著遠(yuǎn)距離官能團(tuán)(remotefunctionality)的性質(zhì)和制備方法的條件而變化。合適的氨基保護(hù)基包括乙?；⑷阴；?、叔丁氧基羰基(boc)、芐基氧基羰基(cbz)和9-芴基甲氧基羰基(fmoc)。對(duì)所述保護(hù)的需要由本領(lǐng)域技術(shù)人員容易地確定。對(duì)于保護(hù)基及其用途的一般描述，參見t.w.greene,protectivegroupsinorganicsynthesis,johnwiley&sons,newyork,1991。

在制備式i化合物的方法中，將反應(yīng)產(chǎn)物彼此分離和/或與原料分離可能是有益的。通過本領(lǐng)域常見技術(shù)將每步或多步中期望的產(chǎn)物分離和/或純化為期望的同質(zhì)性程度。通常所述分離涉及多相萃取、從溶劑或溶劑混合物中結(jié)晶、蒸餾、升華或色譜法。色譜法可涉及任何數(shù)目的方法，包括例如：反相和正相；尺寸排阻(sizeexclusion)；離子交換；高、中和低壓液相色譜方法和裝置；小規(guī)模分析；模擬移動(dòng)床(smb)和制備性薄層或厚層色譜，以及小規(guī)模薄層和快速色譜技術(shù)。

另一類分離方法涉及用所選擇的試劑處理混合物，從而與期望的產(chǎn)物、未反應(yīng)的原料、反應(yīng)副產(chǎn)物等結(jié)合或使得期望的產(chǎn)物、未反應(yīng)的原料、反應(yīng)副產(chǎn)物等分離。所述試劑包括吸附劑(adsorbent)或吸收劑(absorbent)，如活性炭、分子篩、離子交換介質(zhì)等?？晒┻x擇地，所述試劑可以是酸(在堿性物質(zhì)的情況下)，堿(在酸性物質(zhì)的情況下)，結(jié)合劑如抗體、結(jié)合蛋白，選擇性螯合劑如冠醚，液/液離子交換試劑(lix)等。對(duì)適當(dāng)?shù)姆蛛x方法的選擇依賴于所涉及的物質(zhì)的性質(zhì)。例如，沸點(diǎn)和分子量(在蒸餾和升華中)、存在或不存在極性官能團(tuán)(在色譜法中)、在酸性和堿性介質(zhì)中物質(zhì)的穩(wěn)定性(在多相萃取中)等等。

可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法(如色譜法和/或分級(jí)結(jié)晶)，基于非對(duì)映異構(gòu)體的物理化學(xué)差別，將非對(duì)映異構(gòu)混合物分離為其單獨(dú)的非對(duì)映異構(gòu)體。對(duì)映異構(gòu)體可通過以下方式分離：通過使對(duì)映異構(gòu)體混合物與適當(dāng)?shù)墓鈱W(xué)活性的化合物(例如，手性助劑如手性醇或mosher's酰氯)反應(yīng)將其轉(zhuǎn)化為非對(duì)映異構(gòu)混合物，分離非對(duì)映異構(gòu)體，然后將單獨(dú)的非對(duì)映異構(gòu)體轉(zhuǎn)化(例如，水解)為相應(yīng)的純的對(duì)映異構(gòu)體。此外，一些本發(fā)明化合物可以是阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體(例如，取代的聯(lián)芳(biaryl))并視為本發(fā)明的部分。對(duì)映異構(gòu)體也可通過使用手性hplc柱分離。

單一的立體異構(gòu)體，例如，基本上不含其立體異構(gòu)體的對(duì)映異構(gòu)體，可通過以下方式獲得：使用諸如形成非對(duì)映異構(gòu)體的方法，用光學(xué)活性的拆分劑來拆分外消旋混合物(eliel,e.andwilen,s.“stereochemistryoforganic化合物,”johnwiley&sons,inc.,newyork,1994；lochmuller,c.h.,(1975)j.chromatogr.,113(3):283-302)。本發(fā)明的手性化合物的外消旋混合物可通過任何合適的方法分開和離析，所述方法包括：(1)與手性化合物形成離子性非對(duì)映異構(gòu)的鹽，然后通過分級(jí)結(jié)晶或其它方法分離，(2)與手性衍生試劑形成非對(duì)映異構(gòu)的化合物，分離所述非對(duì)映異構(gòu)體，然后轉(zhuǎn)化為純的立體異構(gòu)體，(3)在手性條件下直接分離基本上純的或富含的立體異構(gòu)體。參見：“drugstereochemistry,analyticalmethodsandpharmacology,”irvingw.wainer,ed.,marceldekker,inc.,newyork(1993)。

在條件(1)的情況下，非對(duì)映異構(gòu)的鹽可通過以下方式形成：使對(duì)映異構(gòu)純的手性堿如馬錢子堿(brucine)、奎寧、麻黃堿、番木鱉堿(strychnine)、α-甲基-β-苯基乙胺(安非他明)等與帶有酸性官能團(tuán)的不對(duì)稱化合物如羧酸和磺酸反應(yīng)。可通過分級(jí)結(jié)晶或離子色譜法誘導(dǎo)非對(duì)映異構(gòu)體的鹽分離。對(duì)于氨基化合物的光學(xué)異構(gòu)體的分離而言，加入手性羧酸或磺酸如樟腦磺酸、酒石酸、扁桃酸或乳酸可引起非對(duì)映異構(gòu)體的鹽的形成。

可供選擇地，通過方法(2)，使待拆分的底物與手性化合物的一種對(duì)映異構(gòu)體反應(yīng)，形成非對(duì)映異構(gòu)對(duì)(e.andwilen,s.“stereochemistryoforganiccompounds”,johnwiley&sons,inc.,1994,p.322)。非對(duì)映異構(gòu)化合物可通過以下方式形成：使不對(duì)稱化合物與對(duì)映異構(gòu)純的手性衍生試劑如薄荷基衍生物反應(yīng)，接著分離非對(duì)映異構(gòu)體，然后水解得到純的或富集的對(duì)映異構(gòu)體。確定光學(xué)純度的方法涉及制備外消旋混合物的手性酯，如在堿的存在下制備薄荷基酯例如(-)氯甲酸薄荷基酯，或mosher酯，乙酸α-甲氧基-α-(三氟甲基)苯基酯(jacobiii.j.org.chem.(1982)47:4165)，然后就兩種阻轉(zhuǎn)異構(gòu)的對(duì)映異構(gòu)體或非對(duì)映異構(gòu)體的存在而分析¹hnmr光譜。阻轉(zhuǎn)異構(gòu)化合物的穩(wěn)定的非對(duì)映異構(gòu)體可遵循分離阻轉(zhuǎn)異構(gòu)的萘基-異喹啉(wo96/15111)的方法通過正相和反相色譜分開和離析。通過方法(3)，兩種對(duì)映異構(gòu)體的外消旋混合物可使用手性固定相通過色譜來分離(“chiralliquidchromatography”(1989)w.j.lough,ed.,chapmanandhall,newyork；okamoto,j.chromatogr.,(1990)513:375-378)。富集的或純化的對(duì)映異構(gòu)體可通過用于區(qū)分帶有不對(duì)稱碳原子的其它手性分子的方法(如旋光性或圓二色性)來區(qū)分。

式i化合物可通過方案1-7的一般操作來制備。

方案1:

方案1顯示了對(duì)羥基苯甲醛中間體1與3-碘氮雜環(huán)丁烷-1-羧酸叔丁酯反應(yīng)得到示例性3-(4-甲?；窖趸?氮雜環(huán)丁烷-1-羧酸叔丁酯中間體2。示例性中間體1為2,6-二氟-4-羥基苯甲醛。將2用二環(huán)胺3環(huán)化得到三環(huán)四氫-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基氮雜環(huán)丁烷中間體4。將4酸性脫保護(hù)并將5烷基化得到三環(huán)四氫-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基氮雜環(huán)丁烷中間體6。

方案2:

方案2顯示了將對(duì)碘苯甲醛中間體7諸如2,6-二氟-4-碘苯甲醛用二環(huán)胺3環(huán)化得到三環(huán)四氫-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基碘苯基中間體8。8與醇9反應(yīng)得到三環(huán)四氫-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基中間體10。

方案3:

方案3顯示胺11與烷化劑(其中離去基團(tuán)可為碘或溴或三氟甲磺酸酯基團(tuán))的反應(yīng)得到中間體12?？蛇x擇地，胺11也可經(jīng)還原胺化反應(yīng)與醛或酮反應(yīng)得到中間體12。將中間體12用醛縮合，然后得到中間體13。然后經(jīng)pd-或cu-催化的ullman或buchwald或heck反應(yīng)可將cy的x¹基團(tuán)上的碘或溴與醇或胺或硫化物或烯烴偶聯(lián)，得到靶標(biāo)14?？蛇x擇地，基團(tuán)cy上的經(jīng)保護(hù)的苯酚(op)可脫保護(hù)，并且所得的苯酚可進(jìn)一步與醇經(jīng)mitsunobu反應(yīng)偶聯(lián)?？蛇x擇地，也可將苯酚用碘化物、溴化物、氯化物、三氟甲磺酸酯或甲磺酸酯烷基化，得到三環(huán)四氫-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基中間體14。

方案4:

方案4顯示將胺11用醛進(jìn)行pictet-spengler環(huán)化得到中間體15，其中x¹為碘或溴。胺15與酰氯的反應(yīng)得到酰胺16。然后可經(jīng)pd-或cu-催化的ullman或buchwald或heck反應(yīng)將cy上的碘或溴x¹基團(tuán)與醇或胺或硫化物或烯烴偶聯(lián)，得到中間體17?？蛇x擇地，可將16的基團(tuán)cy上的經(jīng)保護(hù)的苯酚(op)脫保護(hù)，并且可將所得的苯酚進(jìn)一步與醇經(jīng)mitsunobu反應(yīng)偶聯(lián)，得到17.可選擇地，苯酚(oh)可用碘化物、溴化物、氯化物、三氟甲磺酸酯或甲磺酸酯烷基化，得到三環(huán)四氫-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基酰胺中間體17。

方案5:

方案5顯示胺15可與磺酰氯反應(yīng)得到磺酰胺18，其可經(jīng)pd-或cu-催化的ullman、buchwald或heck反應(yīng)或經(jīng)mitsunobu或烷基化反應(yīng)轉(zhuǎn)化為三環(huán)四氫-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基磺酰胺中間體19。

方案6:

方案6顯示胺15可與烷化劑(r⁵-x)反應(yīng)得到中間體13?？蛇x擇地，胺15可與醛或酮以及還原劑諸如氰基硼氫化鈉反應(yīng)得到中間體13。

方案7

方案7顯示色胺23的一般合成途徑。將經(jīng)取代的吲哚20在vilsmeier反應(yīng)條件下轉(zhuǎn)化為醛21。將醛21用硝基乙烷進(jìn)行aldol反應(yīng)得到化合物22。然后將22用氫化鋁鋰還原得到色胺23。

實(shí)施例

實(shí)施例101(1r,3r)-1-(2,6-二氟-4-((1-(3-氟丙基)氮雜環(huán)丁烷-3-基)氧基)苯基)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氫-1h-吡啶并[3,4-b]吲哚101

步驟1:3-(3,5-二氟-4-甲?；?苯氧基)-氮雜環(huán)丁烷-1-羧酸叔丁酯101c

在氬氣下向2,6-二氟-4-羥基-苯甲醛101a(casno.:532967-21-8,600mg,3.79mmol)在n,n-二甲基甲酰胺(25ml)中的溶液中加入碳酸銫(3.09g,9.48mmol)和1-boc-3-碘氮雜環(huán)丁烷101b(casno.:254454-54-1,2.68g,9.48mmol)。將所得的混合物在150℃在微波加熱下加熱1h。將反應(yīng)混合物冷卻至環(huán)境溫度，將固體經(jīng)濾過移去，將濾餅用甲苯洗滌并將濾液真空濃縮。將殘留物在etoac和水之間分配，分離有機(jī)相，用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，濾過并真空濃縮。將粗產(chǎn)物吸附于hmn硅藻土(biotage)并經(jīng)硅膠色譜純化(流動(dòng)相：環(huán)己烷/乙酸乙酯,梯度0％至30％)得到101c，其為黃色油狀物(1.10g,93％).¹hnmr(300mhz,cdcl3):δ10.20(s,1h),6.35(m,2h),4.94-4.86(m,1h),4.34(ddd,j＝1.1,6.4,9.8hz,2h),4.05-3.98(m,2h),1.45(s,9h).

步驟2:(2-氟-2-甲基-丙基)-[(r)-2-(1h-吲哚-3-基)-1-甲基-乙基]-胺101d

化合物101d根據(jù)wo2014/191726,第78頁制備。

步驟3:3-{3,5-二氟-4-[(1r,3r)-2-(2-氟-2-甲基-丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氫-1h-β-咔啉-1-基]-苯氧基}-氮雜環(huán)丁烷-1-羧酸叔丁酯101e

在氬氣下向(2-氟-2-甲基-丙基)-[(r)-2-(1h-吲哚-3-基)-1-甲基-乙基]-胺101d(根據(jù)wo2014/191726,第78頁制備，540mg,2.17mmol)在甲苯(8ml)中的溶液中加入3-(3,5-二氟-4-甲?；?苯氧基)-氮雜環(huán)丁烷-1-羧酸叔丁酯101c(818mg,2.61mmol)和乙酸(249μl,4.34mmol)。將混合物在80℃在密封管中避光加熱4h。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫(rt)并真空濃縮。將殘留物在乙酸乙酯(etoac)和飽和碳酸氫鈉溶液之間分配。分離有機(jī)相，用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，濾過并真空濃縮。將粗產(chǎn)物吸附于hmn硅藻土并經(jīng)硅膠色譜純化(流動(dòng)相：環(huán)己烷/乙酸乙酯,梯度0％至20％)得到101e，其為灰白色固體(1.10g,90％).¹hnmr(300mhz,cdcl3):δ7.54-7.49(m,1h),7.39(s,1h),7.25-7.19(m,1h),7.15-7.05(m,2h),6.28-6.21(m,2h),5.20(s,1h),4.84-4.76(m,1h),4.33-4.24(m,2h),4.02-3.94(m,2h),3.69-3.61(m,1h),3.12-3.02(m,1h),2.84(dd,j＝15.1,20.0hz,1h),2.65-2.56(m,1h),2.38(dd,j＝14.9,24.7hz,1h),1.45(s,9h),1.28-1.08(m,9h)；lcms:544.5[m+h]⁺.

步驟4:(1r,3r)-1-[4-(氮雜環(huán)丁烷-3-基氧基)-2,6-二氟-苯基]-2-(2-氟-2-甲基-丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氫-1h-β-咔啉101f

在氬氣下向3-{3,5-二氟-4-[(1r,3r)-2-(2-氟-2-甲基-丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氫-1h-β-咔啉-1-基]-苯氧基}-氮雜環(huán)丁烷-1-羧酸叔丁酯101e(840mg,1.54mmol)在二氯甲烷(10ml)中的混合物中逐滴加入tfa(1.75ml,23.1mmol)并將混合物在rt避光攪拌3h。將反應(yīng)混合物真空濃縮并使用scx-2柱純化(流動(dòng)相：二氯甲烷/甲醇1:1，然后2n氨水/甲醇)。合并適當(dāng)?shù)酿s分并蒸發(fā)得到101f，其為灰白色固體(54mg,8％).¹hnmr(300mhz,cdcl3):δ7.54-7.49(m,1h),7.41(s,1h),7.25-7.20(m,1h),7.13-7.07(m,2h),6.30-6.22(m,2h),5.19(s,1h),4.96-4.90(m,1h),3.97-3.91(m,2h),3.83-3.78(m,2h),3.71-3.60(m,1h),3.12-3.03(m,1h),2.85(dd,j＝15.1,19.6hz,1h),2.64-2.55(m,1h),2.38(dd,j＝15.1,25.2hz,1h),1.82(br.s,1h),1.27-1.07(m,9h)；lcms:442.5[m-h]^-.

步驟5:在氬氣下向(1r,3r)-1-[4-(氮雜環(huán)丁烷-3-基氧基)-2,6-二氟-苯基]-2-(2-氟-2-甲基-丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氫-1h-β-咔啉101f(54mg,0.12mmol)在n,n-二甲基甲酰胺(2ml)中的混合物中加入1-溴-3-氟丙烷(16μl,0.16mmol；casno.352-91-0)和乙基二異丙基胺(12μl,0.24mmol)。將反應(yīng)混合物在rt避光攪拌48h。將反應(yīng)混合物倒入至乙酸乙酯和水的混合物中。分離有機(jī)層，用水和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，濾過，并將濾液減壓濃縮。將粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠色譜純化(流動(dòng)相：二氯甲烷/甲醇,梯度0％to5％)，然后使用c18柱純化(乙腈、水、甲酸)。合并適當(dāng)?shù)酿s分并蒸發(fā)得到101，其為黃色固體(27mg,8％).¹hnmr(400mhz,cdcl3):δ11.12(brs.,1h),8.27(s,1.3h,甲酸),7.53-7.47(m,2h),7.24-7.20(m,1h),7.13-7.08(m,2h),6.31-6.25(m,2h),5.20(s,1h),4.96-4.89(m,1h),4.56(dd,j＝5.6,5.6hz,1h),4.44(dd,j＝5.6,5.6hz,1h),4.33-4.24(m,2h),3.64(dd,j＝4.8,11.1hz,1h),3.49-3.47(m,1h),3.07-2.97(m,3h),2.84(dd,j＝15.0,20.3hz,1h),2.64-2.58(m,1h),2.38(dd,j＝15.0,24.5hz,1h),1.99-1.83(m,2h),1.27-1.08(m,9h)；lcms:504.3[m+h]⁺.

實(shí)施例102(1r,3r)-1-(2,6-二氟-4-(2-(3-(氟甲基)氮雜環(huán)丁烷-1-基)乙氧基)苯基)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氫-1h-吡啶并[3,4-b]吲哚102

步驟1:(1r,3r)-1-(2,6-二氟-4-碘-苯基)-2-(2-氟-2-甲基-丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氫-1h-β-咔啉102b

在氬氣下向(2-氟-2-甲基-丙基)-[(r)-2-(1h-吲哚-3-基)-1-甲基-乙基]-胺101d(根據(jù)wo2014/191726,第78頁制備，50mg,0.20mmol)在甲苯(170μl)中的溶液中加入2,6-二氟-4-碘-苯甲醛102a(casno.:1160573-10-3,65mg,0.24mmol)，隨后加入乙酸(23μl,0.40mmol)。將所得的混合物在密封管中在80℃攪拌5h，然后冷卻至rt。將混合物在scx-2柱上純化(流動(dòng)相：二氯甲烷/甲醇9:1，然后2n氨水/甲醇)。合并適當(dāng)?shù)酿s分，蒸發(fā)并將粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠色譜純化(流動(dòng)相：環(huán)己烷/乙酸乙酯,梯度0％至30％)得到102b，其為黃色固體(89mg,89％).¹hnmr(400mhz,cdcl3):δ7.54-7.50(m,1h),7.39(s,1h),7.25-7.21(m,3h),7.16-7.08(m,2h),5.26(s,1h),3.67-3.60(m,1h),3.06(ddd,j＝1.5,4.9,15.2hz,1h),2.86(dd,j＝15.2,21.5hz,1h),2.61(ddd,j＝1.5,4.4,15.2hz,1h),2.39(dd,j＝15.2,24.0hz,1h),1.29-1.15(m,6h),1.10(d,j＝6.4hz,3h)；lcms:497.0[m-h]^-.

步驟2:將(1r,3r)-1-(2,6-二氟-4-碘-苯基)-2-(2-氟-2-甲基-丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氫-1h-β-咔啉102b(82mg,0.16mmol)、2-(3-氟甲基-氮雜環(huán)丁烷-1-基)-乙醇102c(根據(jù)wo2013/090836,第124頁制備，44mg,0.33mmol；casno.:1443984-69-7,wo2013/090836)、碘化亞銅(6.2mg,0.03mmol)和碳酸鉀(68mg,0.49mmol)在丁腈(600μl)中的混合物用三次真空/氬氣循環(huán)脫氣。將反應(yīng)混合物在135℃加熱24h，冷卻至室溫并用乙酸乙酯稀釋。將固體經(jīng)硅藻土濾過由反應(yīng)混合物除去并將固體用乙酸乙酯洗滌。將合并的濾液用水(三次)和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，濾過，并減壓濃縮。將粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠色譜純化(流動(dòng)相：0-7％甲醇/二氯甲烷)。收集適當(dāng)?shù)酿s分并蒸發(fā)得到102，其為黃色固體(17.2mg,21％).¹hnmr(400mhz,dmso-d6):δ10.51(s,1h),7.39(d,j＝7.3hz,1h),7.18(d,j＝7.8hz,1h),7.01-6.91(m,2h),6.64(d,j＝11.2hz,2h),5.11(s,1h),4.56(d,j＝5.9hz,1h),4.44(d,j＝5.4hz,1h),3.92(s,2h),3.54-3.47(m,2h),3.06-2.66(m,6h),2.59-2.53(m,2h,部分經(jīng)dmso-d6),2.40-2.27(m,2h),1.25-1.09(m,6h),1.04(d,j＝6.4hz,3h)；lcms:502.3[m-h]^-.

實(shí)施例1031-((1r,3r)-1-(2,6-二氟-4-(2-(3-(氟甲基)氮雜環(huán)丁烷-1-基)乙氧基)苯基)-3-甲基-3,4-二氫-1h-吡啶并[3,4-b]吲哚-2(9h)-基)-2-甲基丙-1-酮103

步驟1:(1r,3r)-1-(2,6-二氟-4-碘苯基)-3-甲基-2,3,4,9-四氫-1h-吡啶并[3,4-b]吲哚103b

向微波小瓶中加入(2r)-1-(1h-吲哚-3-基)丙-2-胺103a(710mg,3.67mmol)，隨后加入2,6-二氟-4-碘-苯甲醛(1.1g,4.03mmol)和乙腈(2.6ml)。將反應(yīng)混合物置于氮?dú)鈿夥障虏⒓尤雝fa(0.5ml,7.0mmol)，然后將反應(yīng)混合物在微波中加熱至130℃且保持1h，然后用飽和碳酸氫鈉水溶液淬滅。將混合物用dcm萃取(3x100ml)，用硫酸鎂干燥，濾過并濃縮。將粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠快速柱色譜純化(0-100％etoac/己烷)得到103b(450mg,29％).¹hnmr(400mhz,氘代氯仿-d):δ7.60–7.48(m,2h),7.27(d,j＝7.3hz,2h),7.17–7.08(m,2h),5.63(s,1h),3.45(dq,j＝12.7,6.2hz,1h),2.99(ddd,j＝15.5,4.6,1.3hz,1h),2.52(ddd,j＝15.5,7.3,1.8hz,1h),1.29(d,j＝6.5hz,3h).

步驟2:1-((1r,3r)-1-(2,6-二氟-4-碘苯基)-3-甲基-3,4-二氫-1h-吡啶并[3,4-b]吲哚-2(9h)-基)-2-甲基丙-1-酮103c

向圓底燒瓶(rbf)中加入(1r,3r)-1-(2,6-二氟-4-碘-苯基)-3-甲基-2,3,4,9-四氫-1h-吡啶并[3,4-b]吲哚103b(50mg,0.12mmol)，隨后加入碳酸氫鈉(50mg,0.59mmol)和氯仿(0.8ml)。加入2-甲基丙酰氯(31mg,0.2947mmol)并將反應(yīng)混合物加熱至45℃且保持1h(小時(shí))。加入二異丙基乙基胺(許尼希堿,0.1ml,0.59mmol)并將反應(yīng)混合物攪拌直到lc-ms指示起始物質(zhì)消耗。加入碳酸氫鈉飽和水溶液(10ml)。然后將反應(yīng)混合物用dcm(3x50ml)萃取，經(jīng)硫酸鎂干燥，濾過并濃縮。將粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠快速柱色譜純化(0-100％etoac/己烷)得到103c(51mg,88％).¹hnmr(400mhz,dmso-d6):δ10.74(s,1h),7.46(d,j＝7.8hz,1h),7.39(d,j＝9.2hz,2h),7.24(dt,j＝8.0,1.0hz,1h),7.01(dddd,j＝26.4,8.0,7.0,1.2hz,2h),6.10(s,1h),4.88–4.71(m,1h),3.17(dd,j＝14.9,5.6hz,1h),3.03(p,j＝6.6hz,1h),2.84(d,j＝15.2hz,1h),1.12(d,j＝6.5hz,2h),1.06–0.92(m,6h).

步驟3:向5ml微波小瓶中加入1-[(1r,3r)-1-(2,6-二氟-4-碘-苯基)-3-甲基-1,3,4,9-四氫吡啶并[3,4-b]吲哚-2-基]-2-甲基-丙-1-酮103c(51mg,0.10mmol)，隨后加入2-[3-(氟甲基)氮雜環(huán)丁烷-1-基]乙醇102c(根據(jù)wo2013/090836,第124頁制備，27mg,0.21mmol)、碘化亞銅(8mg,0.04mmol)、碳酸鉀(43mg,0.31mmol)。密封小瓶并加入丁腈(0.7ml)。然后將反應(yīng)混合物加熱至135℃過夜，然后冷卻至室溫。然后將反應(yīng)混合物經(jīng)硅藻土濾過(用etoac洗脫)。然后將合并的濾液濃縮并經(jīng)反相hplc純化得到103(16mg,31％).¹hnmr(400mhz,dmso-d6):δ10.48(s,1h),7.51–7.39(m,1h),7.32–7.22(m,1h),7.09–6.90(m,2h),6.51(d,j＝11.0hz,2h),6.11(s,1h),4.89–4.71(m,1h),4.55(d,j＝6.1hz,1h),4.43(d,j＝6.0hz,1h),3.94(q,j＝5.4hz,2h),3.59–3.38(m,2h),3.24–3.18(m,2h),3.04–2.97(m,2h),2.87–2.74(m,4h),1.12(d,j＝6.4hz,3h),0.98(dd,j＝10.3,6.7hz,6h)；lcms:500.3[m+h]⁺

實(shí)施例1041-((1r,3r)-1-(2,6-二氟-4-(2-(3-(氟甲基)氮雜環(huán)丁烷-1-基)乙氧基)苯基)-3-甲基-3,4-二氫-1h-吡啶并[3,4-b]吲哚-2(9h)-基)-2-氟-2-甲基丙-1-酮104

步驟1:1-((1r,3r)-1-(2,6-二氟-4-碘苯基)-3-甲基-3,4-二氫-1h-吡啶并[3,4-b]吲哚-2(9h)-基)-2-氟-2-甲基丙-1-酮104a

向圓底燒瓶中加入(1r,3r)-1-(2,6-二氟-4-碘-苯基)-3-甲基-2,3,4,9-四氫-1h-吡啶并[3,4-b]吲哚103b(100mg,0.24mmol)，隨后加入2-氟-2-甲基-丙酰氯(0.59ml，1mchcl3溶液，由相應(yīng)的酸與草酰氯的反應(yīng)制備)、碳酸氫鈉(99mg,1.2mmol)和氯仿(1.6ml)，然后將反應(yīng)混合物加熱至45℃且保持1h，然后加入許尼希堿(0.2ml,1.2mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌直到經(jīng)lc-ms監(jiān)測(cè)反應(yīng)指示所有起始物質(zhì)消耗。將反應(yīng)混合物用碳酸氫鈉飽和水溶液淬滅。然后將混合物用dcm(3x50ml)萃取，用硫酸鎂干燥，濾過并濃縮。將所得的粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱色譜純化(0-100％etoac/己烷)得到104a(95mg,79％).¹hnmr(400mhz,dmso-d6):δ7.54–7.31(m,3h),7.28–7.21(m,1h),7.04(ddd,j＝8.1,7.1,1.3hz,1h),6.98(td,j＝7.5,7.0,1.1hz,1h),6.08(s,1h),5.14(s,1h),3.14(dd,j＝15.4,4.6hz,1h),2.81(d,j＝15.2hz,1h),1.51(dd,j＝35.4,21.8hz,6h),1.17(dt,j＝3.1hz,3h)；lcms:513.0[m+h]⁺.

步驟2:向5ml微波小瓶中加入1-[(1r,3r)-1-(2,6-二氟-4-碘-苯基)-3-甲基-1,3,4,9-四氫吡啶并[3,4-b]吲哚-2-基]-2-氟-2-甲基-丙-1-酮104a(29mg,0.056mmol)，隨后加入2-[3-(氟甲基)氮雜環(huán)丁烷-1-基]乙醇(15mg,0.11mmol)、碘化亞銅(4mg.,0.023mmol)、碳酸鉀(24mg,0.17mmol)和丁腈(0.37ml)。將溶液脫氣5min，然后加熱至135℃過夜。當(dāng)由lc-ms監(jiān)測(cè)反應(yīng)時(shí)，指示所有起始物質(zhì)消耗，將粗混合物冷卻至室溫，經(jīng)濾過。將硅藻土填料進(jìn)一步用etoac洗滌，并將合并的濾液濃縮并經(jīng)反相hplc純化得到104(9mg,31％).¹hnmr(400mhz,dmso-d6,350k):δ10.69(s,1h),7.54–7.38(m,1h),7.31–7.17(m,1h),7.00(dtd,j＝24.8,7.1,1.2hz,2h),6.55(d,j＝12.0hz,1h),6.03(s,1h),5.21–5.05(m,1h),4.54(d,j＝6.2hz,1h),4.42(d,j＝6.2hz,1h),3.87(t,j＝5.4hz,2h),3.30–3.25(m,2h),3.15(dd,j＝15.3,4.7hz,1h),2.96(t,j＝6.5hz,2h),2.79(d,j＝15.1hz,1h),2.75–2.62(m,3h),1.55(d,j＝21.8hz,2h),1.45(d,j＝21.8hz,2h),1.15(d,j＝6.4hz,2h)；lcms:518.2[m+h]⁺.

實(shí)施例105(1r,3r)-1-(4-(2-(3-(二氟甲基)氮雜環(huán)丁烷-1-基)乙氧基)-2,6-二氟苯基)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氫-1h-吡啶并[3,4-b]吲哚105

步驟1:乙酸2-(3,5-二氟-4-甲酰基苯氧基)乙酯105a

將2,6-二氟-4-羥基-苯甲醛(casno.:532967-21-8,300mg,1.89mmol)和2-溴-乙酸乙酯(casno.:927-68-4,0.22ml,2mmol)在乙腈(5ml)和n,n-二甲基甲酰胺(1ml)中的溶液在80℃加熱24h。加入另一份2-溴-乙酸乙酯(0.11ml,1mmol)，并繼續(xù)在80℃加熱額外的30h。將反應(yīng)混合物冷卻至環(huán)境溫度。將殘留物在etoac和飽和碳酸氫鈉溶液之間分配。將水層用另一份etoac萃取。分離合并的有機(jī)層，經(jīng)硫酸鎂干燥，濾過并真空濃縮。將粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱色譜純化(流動(dòng)相：環(huán)己烷/乙酸乙酯,梯度0％至33％)得到105a，其為白色粉末(213mg,45％).¹hnmr(300mhz,cdcl3):δ10.20(s,1h),6.51(d,j＝10.4hz,2h),4.44(t,j＝4.7hz,2h),4.22(t,j＝4.7hz,2h),2.11(s,3h).

步驟2:乙酸2-(3,5-二氟-4-((1r,3r)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氫-1h-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯氧基)乙酯105b

在氬氣下向(2-氟-2-甲基-丙基)-[(r)-2-(1h-吲哚-3-基)-1-甲基-乙基]-胺101d(213mg,0.86mmol)和乙酸2-(3,5-二氟-4-甲?；窖趸?乙酯105a(210mg,0.86mmol)在甲苯(1ml)中的溶液中加入冰醋酸(0.1ml,1.72mmol)。密封容器，并將反應(yīng)混合物在80℃加熱16h。將反應(yīng)混合物冷卻至環(huán)境溫度。將殘留物在二氯甲烷和飽和碳酸氫鈉溶液之間分配。將水層用另一份二氯甲烷萃取。分離合并的有機(jī)層，經(jīng)硫酸鎂干燥，濾過并真空濃縮。將粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠色譜純化(流動(dòng)相：環(huán)己烷/乙酸乙酯,梯度0％至20％)得到105b，其為白色泡沫(323mg,80％).¹hnmr(300mhz,cdcl3):δ7.54-7.49(m,1h),7.38(s,1h),7.24-7.19(m,1h),7.14-7.07(m,2h),6.42(dd,j＝13,3hz,2h),5.19(s,1h),4.40(t,j＝4.7hz,2h),4.12(t,j＝4.7hz,2h),3.70-3.62(m,1h),3.13-3.04(m,1h),2.92-2.79(dd,j＝19,15hz,1h),2.65-2.55(m,1h),2.46-2.31(dd,j＝25.0,15.0hz,1h),2.10(s,3h),1.24(d,j＝11.0hz,3h),1.17(d,j＝11.3hz,3h),1.1(d,j＝6.5hz,3h).

步驟3:2-(3,5-二氟-4-((1r,3r)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氫-1h-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯氧基)乙醇105c

向乙酸2-(3,5-二氟-4-((1r,3r)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氫-1h-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯氧基)乙酯105b(320mg,0.675mmol)在thf/meoh(2/1,6ml)中的溶液中加入氫氧化鈉(1n,4ml)。將反應(yīng)混合物在70℃加熱45min。將反應(yīng)混合物冷卻至環(huán)境溫度，并將溶劑真空除去。將殘留物在二氯甲烷和水之間分配。分離有機(jī)層，經(jīng)硫酸鎂干燥，濾過并真空濃縮，得到105c，其為白色泡沫(264mg,91％).lcms:431.2[m-h]^-.

步驟4:(1r,3r)-1-(4-(2-溴乙氧基)-2,6-二氟苯基)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氫-1h-吡啶并[3,4-b]吲哚105d

向2-(3,5-二氟-4-((1r,3r)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氫-1h-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯氧基)乙醇105c(130mg,0.3mmol)在dcm(2.5ml)中的溶液中加入三苯基膦(94mg,0.36mmol)和四溴化碳(120mg,0.36mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?h，然后將溶劑真空除去。將粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱色譜純化(流動(dòng)相：環(huán)己烷/乙酸乙酯,梯度0％至20％)得到105d，其為白色泡沫(142mg,95％).¹hnmr(300mhz,cdcl3):δ7.54–7.49(m,1h),7.38(s,1h),7.25–7.19(m,1h),7.15–7.07(m,2h),6.42(dd,j＝13.0,3.0hz,2h),5.20(s,1h),4.24(t,j＝4.7hz,2h),3.72–3.59(m,3h),3.12–3.03(m,1h),2.92–2.79(dd,j＝19.4,15.0hz,1h),2.64–2.56(m,1h),2.46–2.31(dd,j＝25.0,15.0hz,1h),1.24(d,j＝12.1hz,3h),1.17(d,j＝12hz,3h),1.10(d,j＝6.5hz,3h).

步驟5:向(1r,3r)-1-(4-(2-溴乙氧基)-2,6-二氟苯基)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氫-1h-吡啶并[3,4-b]吲哚105d(62mg,0.125mmol)在乙腈(1ml)中的溶液中加入n,n-二異丙基乙基胺(0.064ml,0.375mmol)和3-(二氟甲基)氮雜環(huán)丁烷鹽酸鹽(cas1354792-76-9,27mg,0.187mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?h，然后在45℃攪拌4h。將反應(yīng)混合物冷卻至環(huán)境溫度。將殘留物在etoac和水之間分配。將水層用另一份etoac萃取。分離合并的有機(jī)層，經(jīng)硫酸鎂干燥，濾過并真空濃縮。將粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱色譜純化(流動(dòng)相：二氯甲烷/甲醇,梯度0％至2.5％)得到105，其為灰白色固體(40mg,62％).¹hnmr(300mhz,cdcl3):δ7.54-7.49(m,1h),7.38(s,1h),7.24-7.19(m,1h),7.14-7.06(m,2h),6.38(dd,j＝13.3,3hz,2h),6.17-5.76(dt,j＝56.0,5.1hz,1h),5.18(s,1h),3.90(t,j＝5.3hz,2h),3.71-3.63(m,1h),3.46(t,j＝7.8hz,2h),3.27(t,j＝6.7hz,2h),3.13-3.04(m,1h),2.92-2.79(m,3h),2.64-2.55(m,1h),2.45-2.30(dd,j＝25.6,14.9hz,1h),1.23(d,j＝10.3hz,3h),1.16(d,j＝12hz,3h),1.09(d,j＝6.5hz,3h)；lcms:520.4[m-h]^-.

化合物106-125按照本申請(qǐng)所述的操作制備并經(jīng)lcms表征[m+h]⁺:

實(shí)施例126(1r,3r)-1-(2,6-二氟-4-(2-(3-(氟甲基)氮雜環(huán)丁烷-1-基)乙氧基)苯基)-3-甲基-2-(甲基磺?；?-2,3,4,9-四氫-1h-吡啶并[3,4-b]吲哚126

步驟1:(1r,3r)-1-(2,6-二氟-4-碘苯基)-3-甲基-2-(甲基磺酰基)-2,3,4,9-四氫-1h-吡啶并[3,4-b]吲哚

向50-ml圓底燒瓶中加入(1r,3r)-1-(2,6-二氟-4-碘-苯基)-3-甲基-2,3,4,9-四氫-1h-吡啶并[3,4-b]吲哚(50mg,0.12mmol)和氯仿(0.15m,0.8ml)，然后先后加入n,n-二異丙基乙基胺(0.06ml,0.35mmol)和甲磺酰氯(0.014ml,0.18mmol)。然后將反應(yīng)混合物加熱至45℃并監(jiān)測(cè)直到lcms指示起始物質(zhì)完全消耗。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，通過加入飽和nh4cl水溶液淬滅，用dcm(3x50ml)萃取，經(jīng)硫酸鎂干燥，濾過并濃縮。將粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠快速柱色譜純化(用0-50％iproac/庚烷洗脫)得到標(biāo)題化合物(40mg,68％收率).¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.78(s,1h),7.54(d,j＝7.9hz,2h),7.44(d,j＝7.8hz,1h),7.22(d,j＝8.1hz,1h),7.05(ddd,j＝8.2,7.1,1.2hz,1h),7.02–6.95(m,1h),6.18(s,1h),4.43(q,j＝5.6,5.0hz,1h),3.09–2.99(m,1h),2.83(s,4h),1.31(d,j＝6.6hz,3h).lcms:503.0[m+h]⁺.

步驟2:向5ml小瓶中加入(1r,3r)-1-(2,6-二氟-4-碘-苯基)-3-甲基-2-甲基磺?；?1,3,4,9-四氫吡啶并[3,4-b]吲哚(40mg,0.08mmol)、2-[3-(氟甲基)氮雜環(huán)丁烷-1-基]乙醇(21mg,0.16mmol)、碘化亞銅(6mg,0.032mmol)、碳酸鉀(33mg,0.24mmol)和丁腈(0.5ml)。將溶液脫氣5min，然后加熱至135℃過夜。一旦經(jīng)lcms監(jiān)測(cè)反應(yīng)指示反應(yīng)完成，將反應(yīng)混合物經(jīng)硅藻土濾過(用etoac洗脫)。將濾液濃縮并經(jīng)反相hplc純化得到126(6mg,15％收率).¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.74(s,1h),7.43(d,j＝7.7hz,1h),7.24–7.20(m,1h),7.04(ddd,j＝8.2,7.0,1.4hz,1h),6.97(td,j＝7.4,1.1hz,1h),6.73–6.64(m,2h),6.15(s,1h),4.55(d,j＝6.2hz,1h),4.45–4.35(m,2h),3.93(t,j＝5.4hz,2h),3.30–3.28(m,2h),3.03–2.95(m,3h),2.77(s,3h),2.74–2.65(m,4h),1.33(dd,j＝6.8,2.1hz,3h).lcms:508.2[m+h]⁺.

實(shí)施例145n-(3,5-二氟-4-((1r,3r)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氫-1h-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)-1-(3-氟丙基)氮雜環(huán)丁烷-3-胺145

步驟1:(1r,3r)-1-(4-溴-2,6-二氟苯基)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氫-1h-吡啶并[3,4-b]吲哚

向(r)-n-(1-(1h-吲哚-3-基)丙-2-基)-2-氟-2-甲基丙-1-胺(500mg,2.01mmol)在甲苯(6ml)中的溶液中加入4-溴-2,6-二氟苯甲醛(490mg,2.21mmol)和乙酸(0.58ml,10.2mmol)。將反應(yīng)混合物在80℃攪拌16小時(shí)。在冷卻至室溫后，將溶液濃縮并將殘留物用etoac(40ml)稀釋，用飽和碳酸氫鈉水溶液(10ml)和水(20ml)洗滌。將有機(jī)層經(jīng)無水硫酸鈉干燥并濃縮。將殘留物經(jīng)硅膠色譜純化(溶劑梯度:0-6％etoac/石油醚)得到標(biāo)題化合物(800mg,88％)，其為淺黃色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.53(d,j＝7.2hz,1h),7.41(s,1h),7.24(d,j＝7.2hz,1h),7.16-7.09(m,2h),7.06(d,j＝8.0hz,2h),5.27(s,1h),3.73-3.54(m,1h),3.09-3.05(m,1h),2.95-2.76(m,1h),2.64-2.60(m,1h),2.47-2.33(m,1h),1.30-1.17(m,6h),1.11(d,j＝6.4hz,3h).

步驟2:3-((3,5-二氟-4-((1r,3r)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氫-1h-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)氨基)氮雜環(huán)丁烷-1-羧酸叔丁酯

將(1r,3r)-1-(4-溴-2,6-二氟苯基)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氫-1h-吡啶并[3,4-b]吲哚(來自步驟1,800.0mg,1.77mmol)、binap(110.4mg,0.18mmol)、pd2(dba)3(162.3mg,0.18mmol)、t-buona(511.0mg,5.32mmol)和3-氨基氮雜環(huán)丁烷-1-羧酸叔丁酯(457.9mg,2.66mmol)在甲苯(10ml)中的混合物在110℃在氮?dú)鈿夥障聰嚢?6小時(shí)。將反應(yīng)混合物濃縮并用硅膠柱純化(0-5％甲醇/dcm)得到標(biāo)題化合物(900mg,94％)，其為棕色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.51(d,j＝6.4hz,1h),7.43(s,1h),7.22(d,j＝8.0hz,1h),7.13-7.05(m,2h),5.97(d,j＝11.2hz,2h),5.14(s,1h),4.37-4.21(m,3h),4.20-4.01(m,1h),3.78-3.60(m,3h),3.12-3.07(m,1h),2.96-2.77(m,1h),2.63-2.57(m,1h),2.48-2.33(m,1h),1.45(s,9h),1.25-1.17(m,6h),1.10(d,j＝6.0hz,3h)

步驟3:n-(3,5-二氟-4-((1r,3r)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氫-1h-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)氮雜環(huán)丁烷-3-胺

在-20℃向3-((3,5-二氟-4-((1r,3r)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氫-1h-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)氨基)氮雜環(huán)丁烷-1-羧酸叔丁酯(來自步驟2,0.9g,1.66mmol)在dcm(5ml)中的混合物中加入tfa(1.8ml,24.88mmol)。將所得的混合物在0℃攪拌16小時(shí)。將nahco3水溶液(80ml)緩慢加入至反應(yīng)混合物，然后將反應(yīng)混合物用dcm(100ml×2)萃取。將合并的有機(jī)層經(jīng)無水硫酸鈉干燥，濾過并濃縮得到標(biāo)題化合物(700mg,95％)，其為棕色固體。將粗產(chǎn)物無需進(jìn)一步純化即可用于下一步。

步驟4:向n-(3,5-二氟-4-((1r,3r)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氫-1h-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)氮雜環(huán)丁烷-3-胺(來自步驟3,700.0mg,1.58mmol)和n,n-二異丙基乙基胺(613.3mg,4.75mmol)在n,n-二甲基甲酰胺(10ml)中的混合物中加入1-溴-3-氟丙烷(223.0mg,1.58mmol)并將反應(yīng)混合物在10℃攪拌16小時(shí)。將反應(yīng)混合物經(jīng)柱色譜純化(0-10％meoh/dcm)并進(jìn)一步經(jīng)反相色譜純化(乙腈66-96％/0.05％nh4oh/水)得到145(280mg,35％)，其為白色固體。¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.38(d,j＝7.6hz,1h),7.17(d,j＝7.6hz,1h),7.03-6.88(m,2h),6.07(d,j＝11.6hz,2h),5.10(s,1h),4.54-4.36(m,2h),4.03-4.01(m,1h),3.79-3.71(m,2h),3.69-3.65(m,1h),3.04-3.00(m,1h),2.97-2.91(m,2h),2.87-2.85(m,1h),2.62(t,j＝7.6hz,2h),2.58-2.55(m,1h),2.48-2.32(m,1h),1.83-1.67(m,2h),1.20-1.11(m,6h),1.08(d,j＝6.8hz,3h).

實(shí)施例154(s)-3-((1r,3r)-1-(2,6-二氟-4-(2-(3-(氟甲基)氮雜環(huán)丁烷-1-基)乙氧基)苯基)-3-甲基-3,4-二氫-1h-吡啶并[3,4-b]吲哚-2(9h)-基)-2-氟-2-甲基丙-1-醇154

步驟1:2-氟-2-甲基丙二酸二甲酯

向500-ml烘箱干燥的圓底燒瓶中加入氫化鈉(1.15當(dāng)量,21mmol)。將反應(yīng)混合物置于氮?dú)鈿夥障虏⒗鋮s至0℃，然后加入thf(63ml)。向該混合物中逐滴加入2-甲基丙二酸二甲酯(5.0g,34.2mmol)并將反應(yīng)混合物攪拌30min，然后加入一份正氟苯磺酰亞胺(1.05當(dāng)量,19.2mmol)。將反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝夭⒎磻?yīng)混合物固化，由此加入額外的50mlthf。1.5h后，將反應(yīng)混合物用aq.2nhcl淬滅，用etoac(500ml)稀釋并用3x200ml2nhcl洗滌。分離有機(jī)相，用硫酸鎂干燥，濾過，并濃縮。然后將白色粗固體吸收于200ml庚烷，超聲并經(jīng)硅藻土濾過。然后將濾過的固體用3x200ml庚烷洗滌。然后將合并的濾液濃縮得到粗的期望產(chǎn)物(3g,53％收率)，其為黃色油狀物。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ3.32(s,6h),1.18(d,j＝6.3hz,3h).

步驟2:2-氟-2-甲基丙-1,3-二醇

向500-ml烘箱干燥的圓底燒瓶中加入2-氟-2-甲基-丙二酸二甲酯(3g,18.3mmol)和thf(90ml)。將反應(yīng)混合物置于氮?dú)鈿夥障?，然后冷卻至0℃，然后逐滴加入氫化鋁鋰溶液(1m在thf中,2.75當(dāng)量,50.3mmol)并歷時(shí)1h將反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝?。然后將反?yīng)混合物再次冷卻至0℃并通過加入水(2ml)、隨后加入15％naoh水溶液(2ml)和水(4ml)淬滅。將漿液攪拌15min，濾過并濃縮得到粗產(chǎn)物(1.4g,71％收率).¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ4.85(t,j＝5.9hz,2h),3.45(d,j＝5.9hz,2h),3.41(d,j＝5.9hz,2h),1.22–1.15(d,3h).

步驟3:3-(叔丁基二苯基甲硅烷基氧基)-2-氟-2-甲基丙-1-醇

向500-ml烘箱干燥的圓底燒瓶中加入2-氟-2-甲基-丙烷-1,3-二醇(1.47g,1.25當(dāng)量,13.6mmol)，隨后加入咪唑(1.11g,1.5當(dāng)量,16.4mmol)、叔丁基氯二苯基甲硅烷(3.0g,10.9mmol)和氯仿(136ml)。將反應(yīng)混合物攪拌過夜并通過加入飽和nh4cl溶液(100ml)淬滅。將混合物用dcm(100ml)萃取，用硫酸鎂干燥，濾過并濃縮。將粗混合物經(jīng)快速硅膠柱色譜純化(0-100％iproac/庚烷)得到預(yù)期產(chǎn)物(1.26g,33％收率).¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.68–7.60(m,4h),7.51–7.40(m,6h),4.97(t,j＝5.8hz,1h),3.70(dd,j＝19.4,1.9hz,2h),3.52(ddd,j＝18.5,5.8,1.8hz,2h),1.28(d,j＝21.8hz,3h),1.01(s,9h).

步驟4:三氟甲磺酸3-(叔丁基二苯基甲硅烷基氧基)-2-氟-2-甲基丙酯

在氮?dú)鈿夥障孪?00-ml烘箱干燥的圓底燒瓶中加入3-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基-2-氟-2-甲基-丙-1-醇(1.3g,3.8mmol)、二氯甲烷(63ml)。然后將反應(yīng)混合物冷卻至0℃并逐滴加入三氟甲磺酸酐(1.27g,1.2當(dāng)量,4.5mmol)。然后將反應(yīng)混合物攪拌2h，然后用2nhcl、然后飽和nahco3溶液洗滌。分離有機(jī)層，然后用硫酸鎂干燥，并經(jīng)硅膠填料濾過(用dcm洗脫)，然后將濾液濃縮至干得到粗的預(yù)期產(chǎn)物(1.8g,100％收率)并且無需進(jìn)一步純化即可用于下一步。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.66–7.58(m,4h),7.56–7.41(m,6h),5.07–4.81(m,2h),3.88–3.68(m,2h),1.40(d,j＝21.6hz,3h),1.01(s,9h).

步驟5:n-((r)-1-(1h-吲哚-3-基)丙-2-基)-3-(叔丁基二苯基甲硅烷基氧基)-2-氟-2-甲基丙-1-胺

向250-ml烘箱干燥的圓底燒瓶中加入(2r)-1-(1h-吲哚-3-基)丙-2-胺(600mg,3.1mmol)、n,n-二異丙基乙基胺(0.81ml,1.5當(dāng)量,4.65mmol)和1,4-二噁烷(6ml)并將反應(yīng)混合物置于氮?dú)鈿夥障?，然后加入三氟甲磺酸[3-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基-2-氟-2-甲基-丙基]酯(1.95g,1.25當(dāng)量,3.9mmol)并將反應(yīng)混合物加熱至90℃。當(dāng)lc-ms指示起始物質(zhì)消耗，將反應(yīng)混合物用飽和aqnahco3淬滅并將混合物用etoac(3x200ml)萃取。將合并的有機(jī)層用硫酸鎂干燥，濾過并濃縮。經(jīng)快速硅膠柱色譜純化(0-100％etoac/己烷)得到標(biāo)題化合物(1.2g,77％收率).lcms:503.3[m+h]⁺.

步驟6:3-((r)-1-(1h-吲哚-3-基)丙-2-基氨基)-2-氟-2-甲基丙-1-醇

將3-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基-2-氟-n-[(1r)-2-(1h-吲哚-3-基)-1-甲基-乙基]-2-甲基-丙-1-胺(1.2g,2.4mmol)加入至250-ml烘箱干燥的圓底燒瓶中，然后加入thf(9.6ml)和四丁基氟化銨水合物(3ml1m在thf中的溶液)。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢柚钡絣c-ms指示起始物質(zhì)完全消耗。將反應(yīng)混合物通過加入水淬滅并用25％ipa/dcm5x100ml萃取。然后將合并的有機(jī)相用硫酸鎂干燥，濾過，并濃縮。經(jīng)快速硅膠柱色譜純化(0-30％2nnh3/meoh/dcm)得到標(biāo)題化合物(332mg,53％收率).lcms:265.1[m+h]⁺.

步驟7:3-((1r,3r)-1-(2,6-二氟-4-碘苯基)-3-甲基-3,4-二氫-1h-吡啶并[3,4-b]吲哚-2(9h)-基)-2-氟-2-甲基丙-1-醇

向100-ml圓底燒瓶中加入2-氟-3-[[(1r)-2-(1h-吲哚-3-基)-1-甲基-乙基]氨基]-2-甲基-丙-1-醇(332mg,1.26mmol)、2,6-二氟-4-碘-苯甲醛(370mg,1.1當(dāng)量,1.38mmol)和甲苯(5.5ml)。將反應(yīng)混合物置于氮?dú)鈿夥障虏⒓尤胍宜?2m)，然后將反應(yīng)混合物加熱至90℃且保持48h。然后將反應(yīng)混合物用飽和nahco3水溶液淬滅并用iproac(5x100ml)劇烈萃取。然后將有機(jī)物用硫酸鎂干燥，濾過并濃縮。經(jīng)快速硅膠柱色譜純化(0-100％iproac/庚烷)得到標(biāo)題化合物(475mg,74％收率).lcms:515.1[m+h]⁺.

步驟8:向20-ml微波小瓶中加入3-[(1r,3r)-1-(2,6-二氟-4-碘-苯基)-3-甲基-1,3,4,9-四氫吡啶并[3,4-b]吲哚-2-基]-2-氟-2-甲基-丙-1-醇(400mg,0.78mmol)、2-[3-(氟甲基)氮雜環(huán)丁烷-1-基]乙醇(518mg,5當(dāng)量,3.9mmol)、碘化亞銅(74mg,0.5當(dāng)量,0.39mmol)和碳酸鉀(644mg,6當(dāng)量,4.7mmol)。封蓋小瓶并將混合物置于氮?dú)鈿夥障?，然后加入丁?5.2ml)并將混合物脫氣10min，然后將反應(yīng)混合物加熱至135℃且保持16h，經(jīng)硅藻土濾過并經(jīng)手性反相hplc純化得到兩個(gè)非對(duì)映異構(gòu)體。154為第二個(gè)洗脫出的非對(duì)映異構(gòu)體(90mg,22％收率)。154:¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.48(s,1h),7.39(dd,j＝7.4,1.3hz,1h),7.17(dd,j＝7.6,1.2hz,1h),6.96(dtd,j＝20.1,7.2,1.3hz,2h),6.72–6.55(m,2h),5.08(s,1h),4.84(t,j＝5.6hz,1h),4.56(d,j＝6.2hz,1h),4.44(d,j＝6.2hz,1h),3.92(t,j＝5.4hz,2h),3.55(q,j＝6.0,5.4hz,1h),3.03–2.83(m,4h),2.72(dt,j＝13.0,5.6hz,3h),2.61–2.51(m,2h),2.45–2.30(m,1h),1.15–0.96(m,6h)。2個(gè)質(zhì)子被水峰掩蔽。手性sfc:柱oxupc2,等度25％meoh與0.1％nh4oh2.5min。保留時(shí)間1.35min.lcms:520.3[m+h]⁺.

實(shí)施例155(2r)-3-[(1r,3r)-1-[2,6-二氟-4-[2-[3-(氟甲基)氮雜環(huán)丁烷-1-基]乙氧基]苯基]-3-甲基-1,3,4,9-四氫吡啶并[3,4-b]吲哚-2-基]-2-氟-2-甲基-丙-1-醇155

按照實(shí)施例154的操作，155為第一個(gè)洗脫出的非對(duì)映異構(gòu)體(110mg,27％收率)。155:¹hnmr(400mhz,dmso-d6):δ10.52(s,1h),7.42–7.34(m,1h),7.21–7.14(m,1h),6.96(dtd,j＝20.9,7.1,1.2hz,2h),6.69–6.58(m,2h),5.12(s,1h),4.81(t,j＝5.8hz,1h),4.56(d,j＝6.2hz,1h),4.44(d,j＝6.2hz,1h),3.93(t,j＝5.4hz,2h),3.46(ddd,j＝18.2,11.9,5.7hz,2h),3.14(ddd,j＝20.4,11.9,5.9hz,2h),3.03–2.78(m,4h),2.78–2.64(m,3h),2.58–2.51(m,2h),2.47–2.36(m,1h),1.11(d,j＝22.0hz,3h),1.04(d,j＝6.5hz,3h)。2個(gè)質(zhì)子被水峰掩蔽。手性sfc:柱oxupc2,等度25％meoh與0.1％nh4oh2.5min。保留時(shí)間0.55min.lcms:520.2[m+h]⁺.

實(shí)施例174(1r,3r)-1-[2,6-二氟-4-[2-[3-(氟甲基)氮雜環(huán)丁烷-1-基]乙氧基]苯基]-3-甲基-2-(2,2,2-三氟乙基)-1,3,4,9-四氫吡啶并[3,4-b]吲哚174

步驟1:(r)-1-(1h-吲哚-3-基)-n-(2,2,2-三氟乙基)丙-2-胺

將(2r)-1-(1h-吲哚-3-基)丙-2-胺(100mg,0.574mmol)、三氟甲磺酸2,2,2-三氟乙酯(151mg,0.6313mmol)和n,n-二異丙基乙基胺(371mg,2.87mmol)在1,4-二噁烷(3.8261ml)中的混合物在50℃加熱6h。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，用水稀釋，用etoac萃取(2x)。將合并的有機(jī)層干燥(na2so4),濾過并濃縮。將粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠快速色譜純化(0-50％iproac/庚烷)得到標(biāo)題化合物(89mg,60.5％收率)，其為無色油狀物。¹hnmr(氯仿-d)δ:8.10–7.92(m,1h),7.62–7.56(m,1h),7.33(dt,j＝8.1,0.9hz,1h),7.23–7.16(m,1h),7.15–7.08(m,1h),7.02–6.98(m,1h),3.21–3.09(m,3h),2.83(dd,j＝6.6,0.8hz,2h),1.12(d,j＝6.2hz,3h).lcms(esi)m/z257[m+h⁺].

步驟2:(1r,3r)-1-(2,6-二氟-4-碘苯基)-3-甲基-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,9-四氫-1h-吡啶并[3,4-b]吲哚

將(2r)-1-(1h-吲哚-3-基)-n-(2,2,2-三氟乙基)丙-2-胺(54mg,0.211mmol)、2,6-二氟-4-碘-苯甲醛(62mg,0.232mmol)和乙酸(110mg,1.84mmol)在甲苯(1ml)中的混合物在90℃加熱5h。然后將混合物濃縮。將殘留物在之etoac和飽和nahco3間分配。將水層用etoac萃取(2x)。將合并的有機(jī)層干燥(na2so4)，濾過并濃縮得到標(biāo)題化合物，其為白色固體，其無需純化即可使用。lcms(esi)m/z507[m+h⁺].

步驟3:將(1r,3r)-1-(2,6-二氟-4-碘-苯基)-3-甲基-2-(2,2,2-三氟乙基)-1,3,4,9-四氫吡啶并[3,4-b]吲哚(107mg,0.211mmol)、2-[3-(氟甲基)氮雜環(huán)丁烷-1-基]乙醇(84mg,0.632mmol)、cui(16mg,0.0843mmol)和k2co3(87mg,0.632mmol)在丁腈(1.4ml)中的混合物在微波中小瓶用氮?dú)鈨艋?min，然后密封并在135℃加熱23h。將混合物經(jīng)硅藻土濾過濃縮并經(jīng)制備新hplc純化得到174(51mg,47％收率)，其為黃色固體。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.61(s,1h),7.45–7.35(m,1h),7.20(dt,j＝8.0,0.9hz,1h),7.05–6.90(m,2h),6.71–6.59(m,2h),5.20(s,1h),4.50(dd,j＝47.6,6.2hz,2h),3.94(t,j＝5.4hz,2h),3.57–3.35(m,2h),3.31–3.22(m,2h),2.97(dt,j＝16.8,7.9hz,3h),2.84(ddd,j＝15.3,4.9,1.2hz,1h),2.77–2.66(m,3h),2.64–2.56(m,1h),1.12(d,j＝6.6hz,3h).lcms(esi)m/z512[m+h⁺].

實(shí)施例2863-[(1r,3r)-1-[2,6-二氟-4-[2-[3-(氟甲基)氮雜環(huán)丁烷-1-基]乙氧基]苯基]-3-甲基-1,3,4,9-四氫吡啶并[3,4-b]吲哚-2-基]-2,2-二氟-丙-1-醇286

步驟1:3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2,2-二氟丙-1-醇

在冰浴上向2,2-二氟丙烷-1,3-二醇(200mg,1.78mmol)在thf(4ml)中的攪拌溶液中加入nah(60％在礦物油中,71mg,1.78mmol)并將反應(yīng)混合物攪拌30分鐘。將tbdpscl(490mg,1.78mmol)逐滴加入至反應(yīng)混合物，然后將反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?0℃并繼續(xù)攪拌3小時(shí)。將水(10ml)緩慢加入至反應(yīng)混合物并將所得的混合物用etoac(10ml×2)洗滌。將合并的有機(jī)層經(jīng)無水硫酸鈉干燥，濾過并濃縮。將粗殘留物經(jīng)硅膠柱色譜純化(20％石油醚/etoac)得到標(biāo)題化合物(450mg,1.28mmol,72％收率)，其為淺黃色油狀物。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.71-7.64(m,4h),7.44-7.36(m,6h),3.96-3.84(m,4h),1.86(s,1h),1.06(s,9h).

步驟2:三氟甲磺酸3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2,2-二氟丙酯

在冰浴上向3-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基-2,2-二氟-丙-1-醇(來自步驟1,400mg,1.14mmol)和2,6-二甲基吡啶(0.39ml,3.42mmol)在dcm(8ml)中的攪拌溶液中逐滴加入tf2o(0.38ml,2.28mmol)。將反應(yīng)混合物在20℃攪拌2小時(shí)。然后將反應(yīng)混合物緩慢倒入冰水(20ml)上，并將混合物用dcm(20ml×2)萃取。將合并的有機(jī)層用1nhcl(20ml)、飽和nahco3(20ml)和鹽水洗滌。將有機(jī)層經(jīng)無水硫酸鈉干燥，濾過并濃縮。將粗殘留物經(jīng)硅膠柱色譜純化(10％石油醚/etoac)得到預(yù)期產(chǎn)物(500mg,1.04mmol,91％)，其為淺黃色油狀物。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.66-7.64(m,4h),7.47-7.41(m,6h),4.76(t,j＝7.6hz,2h),3.89(t,j＝7.6hz,2h),1.08(s,9h).

步驟3:(r)-n-(1-(1h-吲哚-3-基)丙-2-基)-3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2,2-二氟丙-1-胺

將三氟甲磺酸[3-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基-2,2-二氟-丙基]酯(來自步驟2,8.31g,17.22mmol)、dipea(6.1ml,34.44mmol)和(2r)-1-(1h-吲哚-3-基)丙-2-胺(3g,17.22mmol)在二噁烷(60ml)中的混合物在90℃攪拌12小時(shí)。冷卻至室溫后，將反應(yīng)混合物用水(100ml)稀釋并用etoac(100ml×2)洗滌。將合并的有機(jī)層經(jīng)無水硫酸鈉干燥，濾過并濃縮。將粗殘留物經(jīng)硅膠柱色譜純化(20％etoac/石油醚)得到標(biāo)題化合物(7.6g,87％)，其為黃色油狀物.lcms:507.2[m+h]⁺.

步驟4:(r)-3-((1-(1h-吲哚-3-基)丙-2-基)氨基)-2,2-二氟丙-1-醇

向(r)-n-(1-(1h-吲哚-3-基)丙-2-基)-3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2,2-二氟丙-1-胺(來自步驟3,7.6g,15mmol)在thf(100ml)中的攪拌溶液中加入tbaf(1.0m在thf中,30ml,30mmol)。將反應(yīng)混合物在25℃攪拌4小時(shí)，然后用水(200ml)稀釋并用etoac(200ml×3)萃取。將合并的有機(jī)層經(jīng)無水硫酸鈉干燥，濾過并濃縮。將粗殘留物經(jīng)硅膠柱色譜純化(70％etoac/石油醚)得到標(biāo)題化合物(3.5g,87％)，其為淺黃色油狀物。lcms:268.9[m+h]⁺.

步驟5:3-((1r,3r)-1-(2,6-二氟-4-碘苯基)-3-甲基-3,4-二氫-1h-吡啶并[3,4-b]吲哚-2(9h)-基)-2,2-二氟丙-1-醇

將(r)-3-((1-(1h-吲哚-3-基)丙-2-基)氨基)-2,2-二氟丙-1-醇(來自步驟4,2g,7.45mmol)、hoac(1.29ml,22.36mmol)和2,6-二氟-4-碘-苯甲醛(2g,7.45mmol)在甲苯(30ml)中的混合物在90℃攪拌12小時(shí)。冷卻至室溫后，將反應(yīng)混合物用水(50ml)稀釋，用etoac(50ml×2)洗滌。將合并的有機(jī)層經(jīng)無水硫酸鈉干燥，濾過并濃縮。將粗殘留物經(jīng)硅膠柱色譜純化(20％石油醚/etoac)得到標(biāo)題化合物(2.8g,73％)，其為淺黃色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.53–7.49(m,2h),7.30–7.22(m,3h),7.18–7.13(m,2h),5.25(s,1h),3.72–3.68(m,3h),3.24–3.06(m,3h),2.85–2.75(m,1h),2.70–2.66(m,1h),1.18(d,j＝6.8hz,3h).

步驟6:將3-((1r,3r)-1-(2,6-二氟-4-碘苯基)-3-甲基-3,4-二氫-1h-吡啶并[3,4-b]吲哚-2(9h)-基)-2,2-二氟丙-1-醇(來自步驟5,1.5g,2.89mmol)、2-[3-(氟甲基)氮雜環(huán)丁烷-1-基]乙醇(1.93g,14.47mmol)、cui(1.65g,8.68mmol)和k2co3(1.2g,8.68mmol)在n-prcn(20ml)中的混合物在氮?dú)鈿夥障略?35℃攪拌3小時(shí)。冷卻至室溫后，將反應(yīng)混合物用水(50ml)稀釋，用dcm(50ml×2)洗滌。將合并的有機(jī)層經(jīng)無水硫酸鈉干燥，濾過并濃縮。將所得的殘留物經(jīng)反相色譜純化(乙腈50-80％/0.05％nh4oh/水)得到286(170mg,11％)，其為白色固體。¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.41(d,j＝8.0hz,1h),7.19(d,j＝8.0hz,1h),7.03-6.94(m,2h),6.54(d,j＝11.2hz,2h),5.24(s,1h),4.49(dd,j＝47.6,6.0hz,2h),4.00-3.98(m,2h),3.83-3.72(m,1h),3.63-3.45(m,4h),3.22-3.13(m,3h),3.02-2.60(m,6h),1.17(d,j＝6.0hz,3h).lcms:524.1[m+h]⁺.

實(shí)施例303(1r,3r)-2-(2,2-二氟乙基)-1-[2,6-二氟-4-[1-(3-氟丙基)氮雜環(huán)丁烷-3-基]氧基-苯基]-3-甲基-1,3,4,9-四氫吡啶并[3,4-b]吲哚303

按照實(shí)施例305的操作制備303。lcms:494.2[m+h]⁺.

實(shí)施例304n-(3,5-二氟-4-((1r,3r)-3-甲基-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,9-四氫-1h-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)-1-(3-氟丙基)氮雜環(huán)丁烷-3-胺304

步驟1:(r)-1-(1h-吲哚-3-基)-n-(2,2,2-三氟乙基)丙-2-胺

向(2r)-1-(1h-吲哚-3-基)丙-2-胺(10.0g,57.39mmol)在1,4-二噁烷(100ml)中的溶液中加入三氟甲磺酸2,2,2-三氟乙酯(13.3g,57.39mmol)和dipea(22.2g,172.18mmol)。將所得的混合物在80℃攪拌15小時(shí)。將反應(yīng)混合物濃縮并經(jīng)柱色譜純化(用0-30％etoac/己烷洗脫)得到標(biāo)題化合物(14g,95.2％)，其為淺黃色油狀物。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.02(br.s.,1h),7.60(d,j＝8.0hz,1h),7.37(d,j＝8.0hz,1h),7.21(t,j＝8.0hz,1h),7.16-7.09(m,1h),7.05(s,1h),3.24-3.11(m,3h),2.84(d,j＝6.4hz,2h),1.14(d,j＝6.4hz,3h).

步驟2:(1r,3r)-1-(4-溴-2,6-二氟苯基)-3-甲基-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,9-四氫-1h-吡啶并[3,4-b]吲哚

將(r)-1-(1h-吲哚-3-基)-n-(2,2,2-三氟乙基)丙-2-胺(來自步驟1,14.0g,54.63mmol)、4-溴-2,6-二氟苯甲醛(11.5g,51.9mmol)和乙酸(6.25ml,109.26mmol)在甲苯(150ml)中的混合物在90℃攪拌16小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至25℃，濃縮并經(jīng)硅膠柱色譜純化(0-5％etoac/石油醚)得到標(biāo)題化合物及其順式異構(gòu)體(24g,95.7％收率)(反式:順式＝4:1)，其為黃色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.52(d,j＝8.4hz,1h),7.24(d,j＝8.0hz,1h),7.19-7.05(m,4h),5.69(s,0.2h),5.31(s,0.8h),3.64-3.50(m,1h),3.45-3.17(m,1h),3.10-3.06(m,1h),2.98-2.81(m,1h),2.78-2.59(m,1h),1.41(d,j＝6.4hz,0.6h),1.18(d,j＝6.4hz,2.4h).

步驟3:3-((3,5-二氟-4-((1r,3r)-3-甲基-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,9-四氫-1h-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)氨基)氮雜環(huán)丁烷-1-羧酸叔丁酯

將(1r,3r)-1-(4-溴-2,6-二氟苯基)-3-甲基-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,9-四氫-1h-吡啶并[3,4-b]吲哚(反式:順式＝4:1)(來自步驟2,23.0g,50.08mmol)、pd2(dba)3(4.59g,5.01mmol)、3-氨基氮雜環(huán)丁烷-1-羧酸叔丁酯(12.9g,75.12mmol)、xantphos(5.8g,10.02mmol)和cs2co3(48.9g,150.25mmol)在1,4-二噁烷(250ml)中的混合物在115℃在氮?dú)鈿夥障聰嚢?6小時(shí)。將反應(yīng)混合物經(jīng)硅藻土濾過并將濾液濃縮并經(jīng)柱色譜純化(0-30％etoac/石油醚)得到標(biāo)題化合物(25g,90.7％收率)(反式:順式＝4:1)，其為淺棕色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.56-7.37(m,1h),7.24-7.19(m,1h),7.15-7.06(m,2h),6.04-5.94(m,2h),5.57(s,0.2h),5.21(s,0.8h),4.50-4.38(m,1h),4.31-4.21(m,2h),3.74-3.72(m,2h),3.61-3.47(m,1h),3.35-3.17(m,1h),3.10-3.07(m,1h),3.02-2.78(m,1h),2.77-2.55(m,1h),1.44(s,9h),1.39(d,j＝6.4hz,0.6h),1.16(d,j＝6.4hz,2.4h).

步驟4:n-(3,5-二氟-4-((1r,3r)-3-甲基-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,9-四氫-1h-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)氮雜環(huán)丁烷-3-胺

在0℃向3-((3,5-二氟-4-((1r,3r)-3-甲基-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,9-四氫-1h-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)氨基)氮雜環(huán)丁烷-1-羧酸叔丁酯(來自步驟3,10.0g,18.16mmol)(反式:順式＝4:1)在1,4-二噁烷(120ml)中的溶液中加入硫酸(4.87ml,90.82mmol)。將反應(yīng)混合物在0℃攪拌0.5小時(shí)。將反應(yīng)混合物倒入飽和碳酸氫鈉水溶液(250ml)并將混合物用etoac(200ml×2)萃取。將合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮得到標(biāo)題化合物(8g,97.8％收率)(反式:順式＝4:1)，其為黃色固體。粗化合物直接用于下一步。

步驟5:向n-(3,5-二氟-4-((1r,3r)-3-甲基-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,9-四氫-1h-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)氮雜環(huán)丁烷-3-胺(來自步驟4,反式:順式＝4:1,8.0g,17.76mmol)和dipea(8.83ml,53.28mmol)在dmf(80ml)中的混合物中逐滴加入1-氟-3-碘丙烷(3.34g,17.76mmol)。將反應(yīng)混合物在20℃攪拌16小時(shí)。將反應(yīng)混合物用etoac(400ml)稀釋，用鹽水(200ml×5)洗滌。將合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥，濾過，濃縮并經(jīng)柱色譜純化(10-40％etoac/dcm)得到預(yù)期產(chǎn)物(7g,77.2％收率)，其為棕色固體。將該產(chǎn)物與另一批(12.3g總計(jì))合并并經(jīng)制備性hplc純化(phenomenexsynergimax-rp250*80mm*10um乙腈50-80/10mmnh4hco3/水)得到10g產(chǎn)物(反式:順式＝4:1,在hplc上不可分)，其為白色固體。然后將該產(chǎn)物(反式:順式＝4:1)進(jìn)一步經(jīng)sfc純化(ad(250mm*30mm,10um)堿-etoh40％)得到純的304(5.9g,59％收率)，其為白色固體。¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.40(d,j＝7.6hz,1h),7.20(d,j＝7.6hz,1h),7.05-6.91(m,2h),6.09(d,j＝12hz,2h),5.22(s,1h),4.58-4.35(m,2h),4.07-4.02(m,1h),3.77(t,j＝7.6hz,2h),3.62-3.50(m,1h),3.39-3.32(m,1h),3.06-2.90(m,4h),2.66-2.55(m,3h),1.87-1.66(m,2h),1.17(d,j＝6.4hz,3h).

實(shí)施例305(1r,3r)-2-(2,2-二氟乙基)-1-[2,6-二氟-4-[2-[3-(氟甲基)氮雜環(huán)丁烷-1-基]乙氧基]苯基]-3-甲基-1,3,4,9-四氫吡啶并[3,4-b]吲哚305

步驟1:(r)-n-(2,2-二氟乙基)-1-(1h-吲哚-3-基)丙-2-胺

將(2r)-1-(1h-吲哚-3-基)丙-2-胺(4.2g,24.1mmol)、三氟甲磺酸2,2-二氟乙酯(5.16g,24.1mmol)和二異丙基胺(8.41ml,48.2mmol)的混合物加熱至80℃且保持3小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，用iproac(150ml)稀釋并用水、鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，濾過并濃縮。將粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠快速柱色譜純化(用0-5％meoh/dcm洗脫)得到標(biāo)題化合物(5.6g,97％收率)。¹hnmr(400mhz,氯仿-d)δ8.03(s,1h),7.63–7.54(m,1h),7.36(dt,j＝8.1,0.9hz,1h),7.27–7.17(m,1h),7.12(ddd,j＝8.0,7.1,1.1hz,1h),5.78(tdd,j＝56.6,4.7,4.1hz,1h),3.11–2.76(m,5h),1.12(d,j＝6.2hz,3h)；lcms:239.15[m+h]⁺.

步驟2:(1r,3r)-2-(2,2-二氟乙基)-1-(2,6-二氟-4-碘-苯基)-3-甲基-1,3,4,9-四氫吡啶并[3,4-b]吲哚

向(r)-n-(2,2-二氟乙基)-1-(1h-吲哚-3-基)丙-2-胺(5.0g,21mmol)和2,6-二氟-4-碘苯甲醛(5.2g,19mmol)在甲苯(70ml)中的溶液中加入乙酸(2.4ml)并將混合物在90℃在氮?dú)鈿夥障录訜?0h。將反應(yīng)混合物冷卻并濃縮。將殘留物溶于iproac并用飽和碳酸氫鈉溶液、水、鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮。經(jīng)快速色譜純化(硅膠,0-15％iproac/庚烷)得到標(biāo)題化合物(7.8g,76％)，其為反式:順式異構(gòu)體的3:1混合物。lcms:489.0[m+h]⁺。將混合物如原樣用于下一步。

步驟3:將(1r,3r)-2-(2,2-二氟乙基)-1-(2,6-二氟-4-碘-苯基)-3-甲基-1,3,4,9-四氫吡啶并[3,4-b]吲哚(8.0g,16.4mmol)、2-[3-(氟甲基)氮雜環(huán)丁烷-1-基]乙醇(2.62g,19.7mmol)、碘化亞銅(0.94g,4.9mmol)、碳酸鉀(4.5g,32.8mmol)和丁腈(33ml)的混合物脫氣5min，然后加熱至140℃過夜。將反應(yīng)混合物經(jīng)硅藻土濾過(用iproac洗脫)。將濾液濃縮并經(jīng)反相hplc純化并將順式:反式異構(gòu)體經(jīng)手性sfc分離得到305(3.77g,44％收率).¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.59(s,1h),7.40(dd,j＝7.9,1.3hz,1h),7.22–7.14(m,1h),7.04–6.88(m,2h),6.66(d,j＝11.1hz,2h),6.05–5.61(m,1h),5.17(d,j＝1.7hz,1h),4.50(dd,j＝47.6,6.2hz,2h),3.94(t,j＝5.3hz,2h),3.41–3.32(m,2h),3.15–2.90(m,3h),2.90–2.52(m,7h),1.09(d,j＝6.5hz,3h)..lcms:494.2[m+h]⁺.

實(shí)施例306(1s,3r)-2-(2,2-二氟乙基)-1-[2,6-二氟-4-[2-[3-(氟甲基)氮雜環(huán)丁烷-1-基]乙氧基]苯基]-3-甲基-1,3,4,9-四氫吡啶并[3,4-b]吲哚306

按照實(shí)施例305的操作制備306。lcms:494.2[m+h]⁺.

實(shí)施例3403-[(1r,3r)-1-[2,6-二氟-4-[[1-(3-氟丙基)氮雜環(huán)丁烷-3-基]氨基]苯基]-3-甲基-1,3,4,9-四氫吡啶并[3,4-b]吲哚-2-基]-2,2-二氟-丙-1-醇340

步驟1:(r)-n-(1-(1h-吲哚-3-基)丙-2-基)-3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2,2-二氟丙-1-胺

將(2r)-1-(1h-吲哚-3-基)丙-2-胺(29g,166.44mmol)、三氟甲磺酸[3-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基-2,2-二氟-丙基]酯(80.31g,166.44mmol)和dipea(55.01ml,332.87mmol)在1,4-二噁烷(600ml)中的混合物在90℃攪拌12小時(shí)。將反應(yīng)混合物稀釋于水(600ml)中并用etoac(600ml×2)萃取。將合并的有機(jī)層經(jīng)無水硫酸鈉干燥，濾過并濃縮。將粗殘留物經(jīng)硅膠柱色譜純化(40％etoac/石油醚)得到標(biāo)題化合物(69g,82％)，其為淺黃色油狀物。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.88(s,1h),7.66(d,j＝7.2hz,4h),7.60(d,j＝8.0hz,1h),7.48-7.33(m,7h),7.22-7.08(m,2h),7.01(s,1h),3.86-3.79(m,2h),3.23-3.09(m,3h),2.86-2.80(m,2h),1.13(d,j＝6.4hz,3h),1.05(s,9h).ms:[m+h]⁺507.1.

步驟2:(r)-3-((1-(1h-吲哚-3-基)丙-2-基)氨基)-2,2-二氟丙-1-醇

向(r)-n-(1-(1h-吲哚-3-基)丙-2-基)-3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2,2-二氟丙-1-胺(來自步驟1,69g,136.18mmol)在thf(690ml)中的攪拌溶液中加入1mtbaf(272.35ml,272.35mmol)在thf中的溶液。將混合物在25℃攪拌4小時(shí)。將反應(yīng)混合物用水(800ml)稀釋并用etoac(800ml×3)萃取。將合并的有機(jī)層濃縮并將粗殘留物經(jīng)硅膠柱色譜純化(50％etoac/石油醚)得到標(biāo)題化合物(29g,79％)，其為淺黃色油狀物。

步驟3:3-((1r,3r)-1-(4-溴-2,6-二氟苯基)-3-甲基-3,4-二氫-1h-吡啶并[3,4-b]吲哚-2(9h)-基)-2,2-二氟丙-1-醇

將(r)-3-((1-(1h-吲哚-3-基)丙-2-基)氨基)-2,2-二氟丙-1-醇(來自步驟2,20g,74.54mmol)、乙酸(12.91ml,223.63mmol)和4-溴-2,6-二氟苯甲醛(16.47g,74.54mmol)在甲苯(400ml)中的混合物在90℃攪拌12小時(shí)。將反應(yīng)混合物用水(500ml)稀釋并用etoac(500ml×2)萃取。將合并的有機(jī)層經(jīng)無水硫酸鈉干燥，濾過并濃縮。將粗殘留物經(jīng)硅膠柱色譜純化(20％etoac/石油醚)得到標(biāo)題化合物(24.8g,71％,反式/順式＝20/1)，其為淺黃色固體。ms:[m+h]⁺470.9.

步驟4:3-((4-((1r,3r)-2-(2,2-二氟-3-羥基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氫-1h-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)-3,5-二氟苯基)氨基)氮雜環(huán)丁烷-1-羧酸叔丁酯

將3-((1r,3r)-1-(4-溴-2,6-二氟苯基)-3-甲基-3,4-二氫-1h-吡啶并[3,4-b]吲哚-2(9h)-基)-2,2-二氟丙-1-醇(來自步驟3,24.8g,52.62mmol)、pd2(dba)3(4.82g,5.26mmol)、xantphos(6.09g,10.52mmol)、cs2co3(51.44g,157.86mmol)和3-氨基氮雜環(huán)丁烷-1-羧酸叔丁酯(13.59g,78.93mmol)在1,4-二噁烷(300ml)中的混合物在110℃在氮?dú)鈿夥障聰嚢?小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至25℃并用水(500ml)稀釋，用etoac(500ml×2)萃取。將合并的有機(jī)層經(jīng)無水硫酸鈉干燥，濾過并濃縮。將粗殘留物經(jīng)硅膠柱色譜純化(20％石油醚/etoac)得到標(biāo)題化合物(20.5g,69％,反式/順式＝20/1)，其為黃色固體.ms:[m+h]⁺563.0.

步驟5:3-((1r,3r)-1-(4-(氮雜環(huán)丁烷-3-基氨基)-2,6-二氟苯基)-3-甲基-3,4-二氫-1h-吡啶并[3,4-b]吲哚-2(9h)-基)-2,2-二氟丙-1-醇

在冰浴上向3-((4-((1r,3r)-2-(2,2-二氟-3-羥基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氫-1h-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)-3,5-二氟苯基)氨基)氮雜環(huán)丁烷-1-羧酸叔丁酯(來自步驟4,20.5g,36.44mmol)在1,4-二噁烷(194ml)中的溶液中逐滴加入硫酸(19.42ml,364.38mmol)。將反應(yīng)混合物在25℃攪拌0.5小時(shí)。然后將反應(yīng)混合物倒入飽和碳酸氫鈉水溶液溶液(800ml)并用etoac(600ml×2)萃取。將合并的有機(jī)層經(jīng)無水硫酸鈉干燥，濾過并濃縮得到標(biāo)題化合物(18g,粗的,反式/順式＝20/1)，其為黃色固體.將粗殘留物直接用于下一步。ms:[m+h]⁺463.0.

步驟6:將3-((1r,3r)-1-(4-(氮雜環(huán)丁烷-3-基氨基)-2,6-二氟苯基)-3-甲基-3,4-二氫-1h-吡啶并[3,4-b]吲哚-2(9h)-基)-2,2-二氟丙-1-醇(來自步驟5,18g,38.92mmol)、dipea(19.3ml,116.76mmol)和1-氟-3-碘丙烷(7.32g,38.92mmol)在dmf(180ml)中的混合物在25℃攪拌12小時(shí)。將反應(yīng)混合物用etoac(500ml)稀釋并用鹽水(500ml×3)洗滌。將合并的有機(jī)層經(jīng)無水硫酸鈉干燥，濾過并濃縮。將粗殘留物經(jīng)硅膠柱色譜純化(10％meoh/dcm)得到預(yù)期產(chǎn)物(7.1g,85％純度)，其為黃色油狀物。將所得的殘留物進(jìn)一步經(jīng)反相色譜純化(乙腈40-75/0.05％nh4oh/水)和經(jīng)手性sfc純化(ad250mm*50mm,10um；超臨界co2/etoh(0.1％nh3h2o)＝40/40，200ml/min)得到340(2.85g,14％)，其為淺黃色固體。¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.39(d,j＝7.2hz,1h),7.19(d,j＝8.0hz,1h),7.01-6.93(m,2h),6.11(d,j＝12.0hz,2h),5.16(s,1h),4.52-4.38(m,2h),4.05-4.03(m,1h),3.80-3.74(m,3h),3.63-3.42(m,2h),3.20-3.10(m,1h),2.96-2.92(m,3h),2.82-2.71(m,1h),2.64-2.58(m,3h),1.81-1.68(m,2h),1.14(d,j＝6.4hz,3h)；ms:[m+h]⁺523.2.

實(shí)施例3653-((1r,3r)-1-(2,6-二氟-4-((1-(3-氟丙基)氮雜環(huán)丁烷-3-基)氨基)苯基)-6-氟-3-甲基-1,3,4,9-四氫-2h-吡啶并[3,4-b]吲哚-2-基)-2,2-二氟丙-1-醇365

步驟1:([3-(叔丁基-二苯基-甲硅烷基氧基)-2,2-二氟-丙基]-[2-(5-氟-1h-吲哚-3-基)-1-甲基-乙基]-胺

將三氟甲磺酸[3-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基-2,2-二氟-丙基]酯(來自實(shí)施例286,步驟2,43.22g,89.6mmol)、dipea(19.5ml,112.0mmol)和2-(5-氟-1h-吲哚-3-基)-1-甲基-乙基胺(casno.:712-08-3,14.7g,74.7mmol)在二噁烷(140ml)中的混合物在90℃攪拌3小時(shí)。將混合物冷卻至室溫，用etoac稀釋并用水(x2)和鹽水洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，濾過并濃縮。將粗殘留物經(jīng)硅膠柱色譜純化(流動(dòng)相：dcm)得到標(biāo)題化合物(32.8g,96％)，其為黃色油狀物。1hnmr(400mhz,cdcl3):δ7.89(s,1h),7.69-7.61(m,4h),7.48-7.34(m,6h),7.26-7.19(m,2h),7.03-7.02(m,1h),6.93(dt,j＝2.5,9.0hz,1h),3.88-3.78(m,2h),3.22-3.03(m,3h),2.84-2.70(m,2h),1.11(d,j＝6.2hz,3h),1.04(s,9h).lcms:525.3[m+h]⁺.

步驟2:2-[3-(叔丁基-二苯基-甲硅烷基氧基)-2,2-二氟-丙基]-1-(2,6-二氟-4-碘-苯基)-6-氟-3-甲基-2,3,4,9-四氫-1h-β-咔啉

向[3-(叔丁基-二苯基-甲硅烷基氧基)-2,2-二氟-丙基]-[2-(5-氟-1h-吲哚-3-基)-1-甲基-乙基]-胺(32.8g,62.5mmol)在甲苯(65ml)中的溶液中加入4-碘-2,6-二氟苯甲醛(20.1g,75.0mmol)和乙酸(7.2ml,125.0mmol)。加入完成時(shí)，將反應(yīng)混合物在90℃攪拌14小時(shí)。將混合物冷卻至室溫，用etoac稀釋，用飽和碳酸氫鈉水溶液(x3)和鹽水洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥并濃縮。將殘留物經(jīng)硅膠色譜純化(流動(dòng)相：甲苯/環(huán)己烷,梯度10-50％)得到標(biāo)題化合物(34.9g,72％)，其為灰白色泡沫。¹hnmr(400mhz,cdcl3):δ7.65-7.60(m,4h),7.46-7.33(m,7h),7.21-7.08(m,4h),6.90-6.84(m,1h),5.27(s,1h),3.99-3.88(m,1h),3.65-3.54(m,2h),3.33-3.20(m,1h),2.93(ddd,j＝1.4,4.9,15.2hz,1h),2.81-2.69(m,1h),2.56-2.51(m,1h),1.14(d,j＝6.6hz,3h),1.05(s,9h).lcms:775.2[m+h]⁺.

步驟3:3-(4-{2-[3-(叔丁基-二苯基-甲硅烷基氧基)-2,2-二氟-丙基]-6-氟-3-甲基-2,3,4,9-四氫-1h-β-咔啉-1-基}-3,5-二氟-苯基氨基)-氮雜環(huán)丁烷-1-羧酸叔丁酯

將2-[3-(叔丁基-二苯基-甲硅烷基氧基)-2,2-二氟-丙基]-1-(2,6-二氟-4-碘-苯基)-6-氟-3-甲基-2,3,4,9-四氫-1h-β-咔啉(30.8g,39.8mmol)、xantphos(4.60g,7.9mmol)、pd2(dba)3(3.64g,4.0mmol)、cs2co3(25.9g,79.4mmol)和3-氨基氮雜環(huán)丁烷-1-羧酸叔丁酯(10.3g,59.6mmol)在1,4-二噁烷(192ml)中的混合物在115℃在密封容器中在氬氣下攪拌1.5小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，將殘留的固體經(jīng)填料濾過除去并將濾液濃縮。將所得的殘留物經(jīng)快速硅膠色譜純化(流動(dòng)相：etoac/dcm,梯度0-5％)得到標(biāo)題化合物(27.9g,76％)，其為米色泡沫。¹hnmr(400mhz,cdcl3):δ7.67-7.58(m,4h),7.48-7.32(m,6h),7.15-7.06(m,2h),6.88-6.80(m,1h),5.88-5.80(m,2h),5.15(s,1h),4.26-4.09(m,2h),4.03-3.91(m,2h),3.69-3.50(m,3h),3.26-3.14(m,1h),2.95-2.90(m,1h),2.83-2.70(m,1h),2.50(dd,j＝3.3,15.1hz,1h),1.44(s,9h),1.13(d,j＝6.5hz,3h),1.04(s,9h).lcms:819.4[m+h]⁺.

步驟4:氮雜環(huán)丁烷-3-基-(4-{2-[3-(叔丁基-二苯基-甲硅烷基氧基)-2,2-二氟-丙基]-6-氟-3-甲基-2,3,4,9-四氫-1h-β-咔啉-1-基}-3,5-二氟-苯基)-胺

在氮?dú)庀略谑覝貙饬蛩?9.1ml,170.2mmol)在二噁烷(100ml)中的預(yù)混的冰冷溶液緩慢加入至3-(4-{2-[3-(叔丁基-二苯基-甲硅烷基氧基)-2,2-二氟-丙基]-6-氟-3-甲基-2,3,4,9-四氫-1h-β-咔啉-1-基}-3,5-二氟-苯基氨基)-氮雜環(huán)丁烷-1-羧酸叔丁酯(27.9g,34.0mmol)在二噁烷(275ml)中的溶液中。一旦加入完成，將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)。加入etoac和水并通過加入固體na2co3將水相的ph調(diào)節(jié)為9。分離有機(jī)層，用鹽水(x3)洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，濾過并真空濃縮得到標(biāo)題化合物((r,r)&(s,s)非對(duì)映異構(gòu)體混合物)，其為淡橙色泡沫(26.6g,～定量)。lcms:719.4[m+h]⁺.

步驟5:(4-{2-[3-(叔丁基-二苯基-甲硅烷基氧基)-2,2-二氟-丙基]-6-氟-3-甲基-2,3,4,9-四氫-1h-β-咔啉-1-基}-3,5-二氟-苯基)-[1-(3-氟-丙基)-氮雜環(huán)丁烷-3-基]-胺

標(biāo)題化合物由氮雜環(huán)丁烷-3-基-(4-{2-[3-(叔丁基-二苯基-甲硅烷基氧基)-2,2-二氟-丙基]-6-氟-3-甲基-2,3,4,9-四氫-1h-β-咔啉-1-基}-3,5-二氟-苯基)-胺(26.6g,34.0mmol)和1-碘-3-氟丙烷(9.60g,51.1mmol；casno.:462-40-8)按照針對(duì)制備實(shí)施例101闡述的操作制備。將粗產(chǎn)物純化并經(jīng)硅膠色譜純化(流動(dòng)相：二氯甲烷/甲醇,梯度0％至5％)得到標(biāo)題化合物，其為淡棕色泡沫(14.9g,56％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3):δ7.69-7.56(m,4h),7.50(s,1h),7.47-7.30(m,6h),7.16-7.01(m,2h),6.87-6.81(m,1h),5.92-5.78(m,2h),5.14(s,1h),4.54(t,j＝6.0hz,1h),4.42(t,j＝6.0hz,1h),4.18(d,j＝7.0hz,1h),4.06-3.86(m,2h),3.74-3.47(m,4h),3.30-3.10(m,1h),3.00–2.70(m,3h),2.56(t,j＝7.2hz,2h),2.53–2.45(m,1h),1.85–1.50(m,3h),1.12(d,j＝6.5hz,3h),1.04(s,9h).lcms:779.4[m+h]⁺.

步驟6:3-(1-{2,6-二氟-4-[1-(3-氟-丙基)-氮雜環(huán)丁烷-3-基氨基]-苯基}-6-氟-3-甲基-1,3,4,9-四氫-β-咔啉-2-基)-2,2-二氟-丙-1-醇

在氬氣下向(4-{2-[3-(叔丁基-二苯基-甲硅烷基氧基)-2,2-二氟-丙基]-6-氟-3-甲基-2,3,4,9-四氫-1h-β-咔啉-1-基}-3,5-二氟-苯基)-[1-(3-氟-丙基)-氮雜環(huán)丁烷-3-基]-胺(12.1g,15.5mmol)在thf(150ml)中的混合物中加入1mtbaf在thf中的溶液(23.3ml)，并將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)。將反應(yīng)混合物用etoac稀釋并用水(x4)洗滌。將有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥，濾過，并真空濃縮。將粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠色譜純化(流動(dòng)相：2m氨水/甲醇/tbme,梯度0.5％至5％)得到(r,r)和(s,s)3-(1-{2,6-二氟-4-[1-(3-氟-丙基)-氮雜環(huán)丁烷-3-基氨基]-苯基}-6-氟-3-甲基-1,3,4,9-四氫-β-咔啉-2-基)-2,2-二氟-丙-1-醇的混合物。將非對(duì)映異構(gòu)體對(duì)經(jīng)手性hplc分離(chiralpakib,15％etoh/庚烷+0.1％二乙胺)。365為經(jīng)手性hplc分離的第二個(gè)峰:(1.90g,23％)。峰2rt＝15min.¹hnmr(400mhz,cdcl3):δ7.46(s,1h),7.16-7.08(m,2h),6.86(dt,j＝2.5,9.0hz,1h),6.08-6.00(m,2h),5.09(s,1h),4.54(t,j＝5.9hz,1h),4.43(t,j＝5.9hz,1h),4.38(d,j＝6.7hz,1h),4.07-3.97(m,1h),3.80-3.56(m,6h),3.28-3.16(m,1h),3.11-3.02(m,1h),2.97-2.82(m,3h),2.64-2.55(m,3h),1.82-1.67(m,2h),1.16(d,j＝6.5hz,3h).lcms:541.4[m+h]⁺.

實(shí)施例3663-((1s,3s)-1-(2,6-二氟-4-((1-(3-氟丙基)氮雜環(huán)丁烷-3-基)氨基)苯基)-6-氟-3-甲基-1,3,4,9-四氫-2h-吡啶并[3,4-b]吲哚-2-基)-2,2-二氟丙-1-醇366

按照實(shí)施例365的操作，經(jīng)手性hplc分離的第一給峰為366:(1.95g,24％).峰1rt＝12min.¹hnmr(400mhz,cdcl3):δ7.46(s,1h),7.16-7.08(m,2h),6.86(dt,j＝2.5,9.0hz,1h),6.08-6.00(m,2h),5.09(s,1h),4.54(t,j＝5.9hz,1h),4.43(t,j＝5.9hz,1h),4.38(d,j＝6.7hz,1h),4.07-3.97(m,1h),3.80-3.56(m,6h),3.28-3.16(m,1h),3.11-3.02(m,1h),2.97-2.82(m,3h),2.64-2.55(m,3h),1.82-1.67(m,2h),1.16(d,j＝6.5hz,3h).lcms:541.4[m+h]⁺.

實(shí)施例3683-((1r,3r)-1-(2,6-二氟-4-((1-(3-氟丙基)氮雜環(huán)丁烷-3-基)氧基)苯基)-6-氟-3-甲基-1,3,4,9-四氫-2h-吡啶并[3,4-b]吲哚-2-基)-2-氟-2-甲基丙-1-醇368

步驟1:[3-(叔丁基-二苯基-甲硅烷基氧基)-2-氟-2-甲基-丙基]-[2-(5-氟-1h-吲哚-3-基)-1-甲基-乙基]-胺

在氬氣下向2-(5-氟-1h-吲哚-3-基)-1-甲基-乙基胺(casno.:712-08-3,3.61g,18.7mmol)和dipea(4.9ml,28.1mmol)在二噁烷(43ml)中的溶液中加入三氟-甲磺酸3-(叔丁基-二苯基-甲硅烷基氧基)-2-氟-2-甲基-丙酯，中間體xx(3.09g,9.48mmol)。將所得的混合物在90℃攪拌6h。將反應(yīng)混合物在etoac和水之間分配。分離有機(jī)相并進(jìn)一步用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，濾過并真空濃縮。將粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠色譜純化(流動(dòng)相：二氯甲烷/甲醇,梯度0％至5％)得到標(biāo)題化合物的非對(duì)映異構(gòu)體的混合物，其為黃色油狀物(8.0g,82％).¹hnmr(300mhz,cdcl3):δ7.82(br.s,1h),7.68–7.63(m,4h),7.52–7.38(m,6h),7.25–7.18(m,2h),7.02–6.98(m,1h),6.92(dt,j＝2.4,9.1hz,1h),3.82-3.57(m,5h),3.02–2.65(m,6h),1.33(d,j＝22.0hz,3h),1.1–1.0(m,9h)；lcms:521.3[m+h]⁺.

步驟2:3-(4-{2-[3-(叔丁基-二苯基-甲硅烷基氧基)-2-氟-2-甲基-丙基]-6-氟-3-甲基-2,3,4,9-四氫-1h-β-咔啉-1-基}-3,5-二氟-苯氧基)-氮雜環(huán)丁烷-1-羧酸叔丁酯

標(biāo)題化合物由[3-(叔丁基-二苯基-甲硅烷基氧基)-2-氟-2-甲基-丙基]-[2-(5-氟-1h-吲哚-3-基)-1-甲基-乙基]-胺,中間體1a(8g,15.3mmol)和3-(3,5-二氟-4-甲?；?苯氧基)-氮雜環(huán)丁烷-1-羧酸叔丁酯101c(5.6g,18.1mmol)按照針對(duì)制備中間體101e闡述的操作制備。將粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠色譜純化(流動(dòng)相：環(huán)己烷/乙酸乙酯,梯度0％至20％)得到標(biāo)題化合物的非對(duì)映異構(gòu)體的混合物，其為白色泡沫(8.0g,64％)。¹hnmr(300mhz,cdcl3):δ7.65-7.54(m,4h),7.47-7.30(m,7h),7.17-7.08(m,2h),6.84(dt,j＝2.4,9.0hz,1h),6.23–6.07(m,2h),5.16(s,1h),4.71-4.63(m,1h),4.29-4.18(m,2h),3.99-3.88(m,2h),3.79(dd,j＝11.5,16.8hz,1h),3.64-3.54(m,1h),3.50-3.29(m,1h),3.10–2.83(m,2h),2.69-2.39(m,2h),1.54(s,3h),1.46-1.40(m,9h),1.29–0.98(m,12h)；lcms:816.5[m+h]⁺.

步驟3:1-[4-(氮雜環(huán)丁烷-3-基氧基)-2,6-二氟-苯基]-2-[3-(叔丁基-二苯基-甲硅烷基氧基)-2-氟-2-甲基-丙基]-6-氟-3-甲基-2,3,4,9-四氫-1h-β-咔啉

在氬氣下在0℃向3-(4-{2-[3-(叔丁基-二苯基-甲硅烷基氧基)-2-氟-2-甲基-丙基]-6-氟-3-甲基-2,3,4,9-四氫-1h-β-咔啉-1-基}-3,5-二氟-苯氧基)-氮雜環(huán)丁烷-1-羧酸叔丁酯,中間體2a(8.0g,9.80mmol)在二噁烷(80ml)中的混合物中逐滴加入濃硫酸(2.62ml,49.0mmol)在二噁烷(27ml)中的溶液并將避光的混合物溫?zé)嶂羠t并攪拌3.5h。將反應(yīng)混合物用etoac和飽和nahco3稀釋，攪拌10min并分離各層。將有機(jī)層進(jìn)一步用飽和nahco3、鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，濾過，并真空濃縮得到標(biāo)題化合物的非對(duì)映異構(gòu)體的混合物，其為淡黃色泡沫(7.05g,～當(dāng)量)。¹hnmr(300mhz,cdcl3):¹hnmr(300mhz,cdcl3):δ7.66-7.54(m,4h),7.47-7.30(m,7h),7.17-7.06(m,2h),6.84(dt,j＝2.4,9.0hz,1h),6.25–6.09(m,2h),5.16(s,1h),4.86-4.76(m,1h),3.94-3.65(m,3h),3.63-3.54(m,1h),3.49-3.24(m,1h),3.11–2.83(m,2h),2.69-2.39(m,2h),1.54(s,3h),1.27-1.12(m,3h),1.11–0.98(m,12h)；lcms:716.4[m+h]⁺.

步驟4:2-[3-(叔丁基-二苯基-甲硅烷基氧基)-2-氟-2-甲基-丙基]-1-{2,6-二氟-4-[1-(3-氟-丙基)-氮雜環(huán)丁烷-3-基氧基]-苯基}-6-氟-3-甲基-2,3,4,9-四氫-1h-β-咔啉

標(biāo)題化合物由1-[4-(氮雜環(huán)丁烷-3-基氧基)-2,6-二氟-苯基]-2-[3-(叔丁基-二苯基-甲硅烷基氧基)-2-氟-2-甲基-丙基]-6-氟-3-甲基-2,3,4,9-四氫-1h-β-咔啉,中間體3a(7.05g,9.84mmol)和1-碘-3-氟丙烷(2.77g,14.7mmol；casno.:462-40-8)按照針對(duì)制備實(shí)施例101闡述的操作制備。將粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠色譜純化(流動(dòng)相：二氯甲烷/甲醇,梯度0％至3％)得到標(biāo)題化合物，其為白色泡沫(5.7g,75％).lcms:776.4[m+h]⁺.

步驟5:外消旋3-(1-{2,6-二氟-4-[1-(3-氟-丙基)-氮雜環(huán)丁烷-3-基氧基]-苯基}-6-氟-3-甲基-1,3,4,9-四氫-β-咔啉-2-基)-2-氟-2-甲基-丙-1-醇

在氬氣下向2-[3-(叔丁基-二苯基-甲硅烷基氧基)-2-氟-2-甲基-丙基]-1-{2,6-二氟-4-[1-(3-氟-丙基)-氮雜環(huán)丁烷-3-基氧基]-苯基}-6-氟-3-甲基-2,3,4,9-四氫-1h-β-咔啉中間體4a(5.17g,6.66mmol)在thf(80ml)中的混合物中加入1mtbaf在thf中的溶液(10ml)并將反應(yīng)混合物在rt攪拌24h。將反應(yīng)混合物倒入至水和鹽水的混合物中，并用etoac萃取。將水層進(jìn)一步用etoac萃取并將合并的有機(jī)層進(jìn)一步用水和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，濾過，并真空濃縮。將粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠色譜純化(流動(dòng)相：二氯甲烷/甲醇,梯度0％至6％)得到兩對(duì)非對(duì)映異構(gòu)體(非對(duì)映異構(gòu)體1和非對(duì)映異構(gòu)體2)。將非對(duì)映異構(gòu)體1的對(duì)進(jìn)一步經(jīng)手性hplc純化(chiralpakic,25％ipa/庚烷0.1％二乙胺)。分離的第一個(gè)峰(rt＝8.2mins)＝分離的368，其為白色固體(467mg,13％).¹hnmr(400mhz,cdcl3):7.32(brs.,1h),7.17-7.09(m,2h),6.89-6.83(m,1h),6.38-6.33(m,2h),5.03(s,1h),4.76-4.69(m,1h),4.55(t,1h,j＝5.9hz),4.47-4.41(m,2h),4.00(t,1h,j＝4.9hz),3.83-3.76(m,2h),3.60(q,1h,j＝10.3hz),3.46-3.34(m,1h),3.23-3.09(m,4h),2.67-2.57(m,4h),1.84-1.69(m,2h),1.14-1.08(m,6h)；lcms:538.3[m+h]⁺.

實(shí)施例3693-((1s,3s)-1-(2,6-二氟-4-((1-(3-氟丙基)氮雜環(huán)丁烷-3-基)氧基)苯基)-6-氟-3-甲基-1,3,4,9-四氫-2h-吡啶并[3,4-b]吲哚-2-基)-2-氟-2-甲基丙-1-醇369

按照實(shí)施例368的操作，經(jīng)手性hplc分離的第二個(gè)峰(rt＝15.5mins)＝分離的369，其為白色固體(480mg,13.5％).

實(shí)施例3703-((1r,3r)-1-(2,6-二氟-4-((1-(3-氟丙基)氮雜環(huán)丁烷-3-基)氧基)苯基)-6-氟-3-甲基-1,3,4,9-四氫-2h-吡啶并[3,4-b]吲哚-2-基)-2-氟-2-甲基丙-1-醇370

按照實(shí)施例368的操作，將非對(duì)映異構(gòu)體2的對(duì)經(jīng)手性hplc分離(chiralpakic,35％ipa/庚烷0.1％二乙胺)。將分離的第一個(gè)峰進(jìn)一步經(jīng)手性hplc純化(chiralpakia,25％ipa/庚烷0.1％二乙胺):分離的第一個(gè)峰(rt＝8.5mins)＝分離的370，其為白色固體(165mg,5％).¹hnmr(400mhz,cdcl3):7.53(br.s,1h),7.16-7.12(m,2h),6.90-6.84(m,1h),6.33-6.28(m,2h),5.35(s,1h),4.76-4.68(m,1h),4.55(t,1h,j＝5.9hz),4.45-4.41(m,1h),3.85-3.54(m,6h),3.16-2.92(m,4h),2.79(t,1h,j＝15.7hz),2.68-2.56(m,3h),1.77(tdd,j＝6.7,19.3,19.3hz,2h),1.23-1.15(m,6h)；lcms:538.3[m+h]⁺.

實(shí)施例3713-((1s,3s)-1-(2,6-二氟-4-((1-(3-氟丙基)氮雜環(huán)丁烷-3-基)氧基)苯基)-6-氟-3-甲基-1,3,4,9-四氫-2h-吡啶并[3,4-b]吲哚-2-基)-2-氟-2-甲基丙-1-醇371

按照實(shí)施例368的操作，將非對(duì)映異構(gòu)體2的對(duì)經(jīng)手性hplc分離(chiralpakic,35％ipa/庚烷0.1％二乙胺)。分離的第二個(gè)峰(rt＝14mins)＝分離的371，其為白色固體(180mg,5％).

表2a中進(jìn)一步示例性式i化合物具有以下結(jié)構(gòu)、相應(yīng)的命名(chembiodraw,version12.0.2,cambridgesoftcorp.,cambridgema)和生物活性。當(dāng)多于一個(gè)命名涉及式i化合物或中間體時(shí)，化學(xué)結(jié)構(gòu)應(yīng)限定該化合物。

表2a

實(shí)施例431(r)-3-((1r,3r)-1-(2,6-二氟-4-((1-(3-氟丙基)氮雜環(huán)丁烷-3-基)氨基)苯基)-6-氟-3-甲基-1,3,4,9-四氫-2h-吡啶并[3,4-b]吲哚-2-基)-2-氟-2-甲基丙-1-醇431

步驟1:3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2-氟-n-(1-(5-氟-1h-吲哚-3-基)丙-2-基)-2-甲基丙-1-胺

向冰浴冷卻的1-(5-氟-1h-吲哚-3-基)丙-2-胺(5.30g,26.2mmol,95％,按照yeung,etal,j.med.chem.2010,53,5155-5164制備)在1,4-二噁烷(105ml)中的溶液中加入n,n-二異丙基乙基胺(6.85ml)，隨后加入三氟甲磺酸[3-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基-2-氟-2-甲基-丙基]酯(13.80g,28.8mmol)在二噁烷(10ml)中的溶液(按照實(shí)施例154,步驟5)。將混合物在90℃(浴)加熱18h。將混合物濃縮。加入稀na2co3。將內(nèi)容物用dcm(2x)萃取。將合并的萃取物干燥(na2so4)并濃縮。將粗物質(zhì)用快速色譜純化(0-50％iproac/庚烷與1％tea)得到產(chǎn)物(10.38g,76％).

步驟2-5:n-(4-(2-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2-氟-2-甲基丙基)-6-氟-3-甲基-2,3,4,9-四氫-1h-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)-3,5-二氟苯基)-1-(3-氟丙基)氮雜環(huán)丁烷-3-胺

化合物以與實(shí)施例145相似的方式制備。

步驟6:外消旋3-(1-(2,6-二氟-4-((1-(3-氟丙基)氮雜環(huán)丁烷-3-基)氨基)苯基)-6-氟-3-甲基-1,3,4,9-四氫-2h-吡啶并[3,4-b]吲哚-2-基)-2-氟-2-甲基丙-1-醇

向n-[4-[(1r,3r)-2-[3-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基-2-氟-2-甲基-丙基]-6-氟-3-甲基-1,3,4,9-四氫吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基]-3,5-二氟-苯基]-1-(3-氟丙基)氮雜環(huán)丁烷-3-胺(2.231g,2.879mmol)在thf(14.4ml)中的溶液中加入tbaf/thf(1.0m,4.6ml)。將混合物在50℃加熱24h。將混合物濃縮。用iproac稀釋，將內(nèi)容物用稀na2co3(2x)和鹽水洗滌，干燥(na2so4)并濃縮。將粗物質(zhì)用快速色譜純化(0-60％b/a,a:dcm,b:20％2mnh3/meoh/dcm)。將收集的產(chǎn)物進(jìn)行手性分離。表2中的化合物431-434的立體化學(xué)是未知且任意的。

階段1:分離對(duì)映異構(gòu)體1和4。對(duì)映異構(gòu)體2和3保留在混合物中。chiralpakad(250x30.0,5um),32.5％等度0.1％nh4oh/異丙醇，150g/min.,uv-254nm,bpr100bar,溫度40℃,循環(huán)時(shí)間5min,總體時(shí)間200min。階段2:對(duì)映異構(gòu)體2和3的拆分。chiralpakox(150x30.0,5um),30％等度0.1％nh4oh/甲醇，150g/min,uv-250nm,bpr100bar,溫度40℃,循環(huán)時(shí)間3min,總體時(shí)間48min?；衔?31-434如下表征。對(duì)映異構(gòu)體1:324.8mg.¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.59(s,1h),7.19–7.08(m,2h),6.85–6.75(m,1h),6.68(d,j＝6.9hz,1h),6.17–6.06(m,2h),5.01(s,1h),4.81(t,j＝5.8hz,1h),4.51(t,j＝6.1hz,1h),4.39(t,j＝6.0hz,1h),4.33(d,j＝4.2hz,0h),3.99–3.87(m,1h),3.82–3.72(m,0h),3.67–3.56(m,2h),3.55–3.40(m,2h),3.19–3.05(m,1h),2.95–2.68(m,4h),1.74–1.56(m,2h),1.14–0.99(m,6h).lcms:537.3[m+h]⁺。對(duì)映異構(gòu)體2:251.7mg.¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.59(s,1h),7.20–7.07(m,2h),6.86–6.75(m,1h),6.68(d,j＝6.8hz,1h),6.11(d,j＝12.1hz,2h),5.01(s,1h),4.81(t,j＝5.8hz,1h),4.51(t,j＝6.1hz,1h),4.39(t,j＝6.0hz,1h),4.00–3.87(m,1h),3.68–3.57(m,2h),3.55–3.41(m,2h),3.20–3.06(m,1h),2.95–2.69(m,4h),1.73–1.56(m,2h),1.17–0.96(m,6h).lcms:537.3[m+h]⁺。對(duì)映異構(gòu)體3:105.5mg.¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.55(s,1h),7.17–7.08(m,2h),6.84–6.75(m,1h),6.67(d,j＝6.8hz,1h),6.14–6.05(m,2h),4.98(s,1h),4.84(t,j＝5.7hz,1h),4.51(t,j＝6.0hz,1h),4.39(t,j＝6.0hz,1h),3.99–3.87(m,1h),3.67–3.57(m,2h),3.57–3.47(m,1h),2.92–2.79(m,2h),2.77–2.69(m,2h),1.73–1.56(m,2h),1.13–0.96(m,6h).lcms:537.3[m+h]⁺。對(duì)映異構(gòu)體4:151.1mg.¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.55(s,1h),7.18–7.07(m,2h),6.84–6.75(m,1h),6.67(d,j＝7.0hz,1h),6.10(d,j＝12.1hz,2h),4.97(s,1h),4.84(t,j＝5.7hz,1h),4.51(t,j＝6.1hz,1h),4.39(t,j＝6.1hz,1h),3.98–3.89(m,1h),3.66–3.58(m,2h),3.57–3.48(m,1h),2.93–2.79(m,2h),2.79–2.69(m,2h),1.74–1.57(m,2h),1.12–0.96(m,6h).lcms:537.3[m+h]⁺.

實(shí)施例432(s)-3-((1s,3s)-1-(2,6-二氟-4-((1-(3-氟丙基)氮雜環(huán)丁烷-3-基)氨基)苯基)-6-氟-3-甲基-1,3,4,9-四氫-2h-吡啶并[3,4-b]吲哚-2-基)-2-氟-2-甲基丙-1-醇432

按照實(shí)施例431的操作，分離對(duì)映異構(gòu)體432。

實(shí)施例433(s)-3-((1r,3r)-1-(2,6-二氟-4-((1-(3-氟丙基)氮雜環(huán)丁烷-3-基)氨基)苯基)-6-氟-3-甲基-1,3,4,9-四氫-2h-吡啶并[3,4-b]吲哚-2-基)-2-氟-2-甲基丙-1-醇433

按照實(shí)施例431的操作，分離對(duì)映異構(gòu)體433。

實(shí)施例434(r)-3-((1r,3s)-1-(2,6-二氟-4-((1-(3-氟丙基)氮雜環(huán)丁烷-3-基)氨基)苯基)-6-氟-3-甲基-1,3,4,9-四氫-2h-吡啶并[3,4-b]吲哚-2-基)-2-氟-2-甲基丙-1-醇434

按照實(shí)施例431的操作，分離對(duì)映異構(gòu)體434。

實(shí)施例901:乳腺癌細(xì)胞era高含量熒光成像降解測(cè)定

在第1天將mcf7乳腺癌細(xì)胞以10,000個(gè)細(xì)胞/孔的密度在50ul/孔的含有l(wèi)-谷氨酰胺的rpmi(無酚紅)、10％fbs(活性炭處理)中接種于384孔聚賴氨酸涂覆的組織培養(yǎng)板(greiner#t-3101-4)中。在第2天，將化合物以2個(gè)化合物源濃度在labcyte低死體積板(lowdeadvolumeplate)中以10ul/孔制備：100um和1um(最終得到2個(gè)重疊的滴定曲線)，且在指定孔中的10uldmso用于回填(backfill)，以及在指定孔中的5um氟維司群(對(duì)照化合物)。使用labcyteecho聲音分配器分配化合物和對(duì)照，從而分配具有預(yù)定連續(xù)稀釋(1.8x,10個(gè)點(diǎn),一式兩份)的化合物和適當(dāng)?shù)幕靥詈蛯?duì)照化合物(轉(zhuǎn)移的最終總體積為417.5nl且化合物分配體積范圍為2.5nl至417.5nl；0.84％dmso(v/v)最終)，最終產(chǎn)生0.05nm至835nm的濃度范圍。將細(xì)胞板在37℃孵育4小時(shí)。如下使用biotekel406板洗滌器和分配器進(jìn)行固定和透化。通過使用biotekel406上的振動(dòng)泵5ul盒將15ul16％多聚甲醛(electronmicroscopysciences#15710-s)直接加入至每孔50ul細(xì)胞培養(yǎng)基中來固定細(xì)胞(甲醛的最終濃度為3.7％w/v)。將樣品孵育30分鐘。吸出孔內(nèi)容物并將50ul/孔的含有0.5％w/v牛血清白蛋白、0.5％v/vtritonx-100(抗體稀釋緩沖液)的磷酸鹽緩沖鹽水(pbs)加入至每孔中。將樣品孵育30分鐘。吸出孔內(nèi)容物并用100ul/孔的pbs洗滌3次。如下使用biotekel406板洗滌器和分配器進(jìn)行雌激素受體α(esr1)的免疫熒光染色。由孔吸出孔上清液并且分配在抗體稀釋緩沖液中以1:1000稀釋的25ul/孔的抗-esr1mab(f10)(santacruzsc-8002)。將樣品在室溫孵育2小時(shí)。將樣品用100ul/孔的pbs洗滌4次。將以1:1000稀釋的25ul/孔的二抗溶液(alexafluor488綴合物抗-小鼠igg(lifetechnologies#a21202)和稀釋于抗體稀釋緩沖液中的hoechst333421ug/ml分配于各孔中。將樣品在室溫孵育2小時(shí)。使用biotekel406將樣品用100ul/孔的pbs洗滌3次。使用cellomicsarrayscanv(thermo)進(jìn)行esr1的定量熒光成像。使用cellomicsvtiarrayscan使用bioapplication“隔室分析”(其使用針對(duì)兩通道設(shè)置為25％靶標(biāo)飽和度的自動(dòng)-暴露(基于dmso對(duì)照孔)設(shè)置“峰值靶標(biāo)百分位數(shù)”)獲取樣品的熒光成像(通道1:xf53hoechst(dna染色)；通道2:xf53fitc(esr1染色))。通道1(dna染色)用于確定核區(qū)(circ)。對(duì)“mean_circavgintch2”(其為核區(qū)內(nèi)的alexafluor488熒光強(qiáng)度(esr1))的測(cè)量基于每個(gè)細(xì)胞進(jìn)行測(cè)量并且對(duì)所有測(cè)量的細(xì)胞取平均值。使用genedatascreener軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，其中用dmso和5nm氟維司群處理的樣品用于確定esr1的0％和100％變化。“robustfit”方法用于確定曲線的擴(kuò)張點(diǎn)(ec50)和最大平臺(tái)效應(yīng)(sinf)。針對(duì)示例性式i化合物的降解數(shù)據(jù)報(bào)道為表1中的er-αmcf7hcssinf(％)值。

實(shí)施例902體外細(xì)胞增殖測(cè)定

雌激素受體調(diào)節(jié)劑化合物和化學(xué)治療化合物的功效通過采用以下方案進(jìn)行細(xì)胞增殖測(cè)定來測(cè)量(mendozaetal(2002)cancerres.62:5485-5488)。

發(fā)光細(xì)胞存活力測(cè)定是一種基于對(duì)存在的atp定量而用于確定培養(yǎng)物中存活細(xì)胞數(shù)量的均相方法，這表示代謝活性細(xì)胞的存在。測(cè)定設(shè)計(jì)用于多孔板格式，使其對(duì)于自動(dòng)化高通量篩選(hts)、細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性測(cè)定而言是理想的。均相測(cè)定操作涉及將單一試劑(試劑)直接添加至在補(bǔ)充有血清的培養(yǎng)基中培養(yǎng)的細(xì)胞中。不需要細(xì)胞清洗、去除培養(yǎng)基或多個(gè)移液步驟。cell發(fā)光細(xì)胞存活力測(cè)定包括試劑和方案是可商購(gòu)得到的(promegacorp.,madison,wi,technicalbulletintb288)。

該測(cè)定評(píng)估化合物進(jìn)入細(xì)胞和抑制細(xì)胞增殖的能力。測(cè)定原理基于通過定量存在于均相測(cè)定中的atp來確定存在的存活細(xì)胞的數(shù)目，其中添加cell試劑導(dǎo)致細(xì)胞裂解并通過熒光素酶反應(yīng)產(chǎn)生發(fā)光信號(hào)。發(fā)光信號(hào)與存在的atp的量成比例。

操作：第1天-接種細(xì)胞板(來自falcon#353962的384孔黑色、透明底部、微透明、有蓋tc板)，收獲細(xì)胞，以1000個(gè)細(xì)胞/54μl/孔接種細(xì)胞至384孔細(xì)胞板中以用于3天測(cè)定。細(xì)胞培養(yǎng)基：rpmi或dmem高葡萄糖、10％胎牛血清、2mml-谷氨酰胺,p/s。在37℃,5％co2孵育o/n(過夜)。

第2天-向細(xì)胞添加藥物，化合物稀釋，dmso板(連續(xù)稀釋1:2,9個(gè)點(diǎn))。在96孔板的第二列加入20μl10mm的化合物。使用來自nunc(cat.#249946)的precisionmediaplates96孔圓底聚丙烯板，跨板(10μl+20μl100％dmso)進(jìn)行連續(xù)稀釋1:2共9個(gè)點(diǎn)(1:50稀釋)。向所有孔中添加147μl培養(yǎng)基。使用(caliper,aperkin-elmerco.)將dmso板中每個(gè)孔的3μldmso+化合物轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)基板上每個(gè)相應(yīng)的孔中。對(duì)于2種藥物組合研究，使用rapidplate將dmso板中每個(gè)孔的一種藥物1.5μldmso+化合物轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)基板上每個(gè)相應(yīng)的孔中。然后，轉(zhuǎn)移另一種藥物1.5μl至培養(yǎng)基板。

添加藥物至細(xì)胞，細(xì)胞板(1:10稀釋)：直接添加6μl培養(yǎng)基+化合物至細(xì)胞(在細(xì)胞上已經(jīng)有54μl培養(yǎng)基)。在不會(huì)經(jīng)常打開的培養(yǎng)箱中在37℃，5％co2孵育3天。

第5天-鋪板，在室溫解凍celltiterglo緩沖液：從37℃移去細(xì)胞板并平衡至室溫約30分鐘。添加cell緩沖液至cell底物(瓶到瓶)。向每個(gè)孔的細(xì)胞中添加30μlcellreagent(promegacat.#g7572)。在板振蕩器上放置約30分鐘。在analystht板閱讀器上讀取發(fā)光(每孔半秒)。

細(xì)胞存活力測(cè)定和組合測(cè)定：歷經(jīng)16小時(shí)將細(xì)胞以1000-2000個(gè)細(xì)胞/孔接種在384孔板中。在第二天，在96孔板中在dmso中制備9個(gè)連續(xù)稀釋的1:2化合物稀釋液。使用自動(dòng)化設(shè)備(zymarkcorp.,hopkinton,ma)將化合物進(jìn)一步稀釋至生長(zhǎng)培養(yǎng)基中。然后將稀釋的化合物一式四份添加至384孔細(xì)胞板的孔中，并在37℃和5％co2下孵育。4天后，根據(jù)制造商的說明書使用cell(promega)通過發(fā)光測(cè)量存活細(xì)胞的相對(duì)數(shù)目，并在wallacmultilabel(perkinelmer,fostercity)上讀取。使用4.0software(graphpad,sandiego)計(jì)算ec50值。組合測(cè)定中的藥物以4xec50濃度開始給藥。如果在藥物的ec50>2.5μm的情況下，使用的最高濃度為10μm。在所有測(cè)定中同時(shí)添加或分隔4小時(shí)添加(一個(gè)接一個(gè))雌激素受體調(diào)節(jié)劑化合物和化學(xué)治療劑。

另外的示例性體外細(xì)胞增殖測(cè)定包括以下步驟：

1.將培養(yǎng)基中含有約10⁴個(gè)細(xì)胞(對(duì)于細(xì)胞系和腫瘤類型參見表3)的100μl細(xì)胞培養(yǎng)物的等分試樣沉積在384孔不透明壁板的每個(gè)孔中。

2.準(zhǔn)備含有培養(yǎng)基和無細(xì)胞的對(duì)照孔。

3.將化合物添加至實(shí)驗(yàn)孔中并孵育3-5天。

4.將板平衡至室溫約30分鐘。

5.添加與每個(gè)孔中存在的細(xì)胞培養(yǎng)基的體積相等的體積的試劑。

6.將內(nèi)容物在定軌振蕩器上混合2分鐘以誘導(dǎo)細(xì)胞裂解。

7.將板在室溫孵育10分鐘以穩(wěn)定發(fā)光信號(hào)。

8.記錄發(fā)光并在圖中報(bào)告為rlu＝相對(duì)發(fā)光單位。

9.使用chou和talalay聯(lián)合方法并使用軟件(biosoft,cambridge,uk)的劑量-效應(yīng)分析進(jìn)行分析，以獲得聯(lián)合指數(shù)(combinationindex)。

可選擇地，將細(xì)胞以最佳密度接種在96孔板中并在測(cè)試化合物存在的情況下孵育4天。隨后將alamarblue^tm添加至測(cè)定培養(yǎng)基中，并將細(xì)胞孵育6小時(shí)，然后在544nm激發(fā)、590nm發(fā)射讀取。使用s形劑量響應(yīng)曲線擬合計(jì)算ec50值。

可選擇地，使用cell試劑(promegainc.,madison,wi)在藥物治療48小時(shí)后分析增殖/存活力。在所有存活力測(cè)定中dmso處理用作對(duì)照。使用xl擬合軟件(idbs,alameda,ca)計(jì)算ic50值。

細(xì)胞系獲自atcc(americantypeculturecollection,manassas,va)或dsmz(deutschesammlungvonmikroorganismenundzellkulturengmbh,braunschweig,de)。將細(xì)胞在補(bǔ)充有10％胎牛血清、100單位/ml青霉素、2mml-谷氨酰胺和100mg/ml鏈霉素(lifetechnology,grandisland,ny)的rpmi1640培養(yǎng)基中在37℃在5％co2培養(yǎng)。

實(shí)施例903mcf7體外細(xì)胞增殖測(cè)定

用pbs洗滌mcf7細(xì)胞，以25,000個(gè)細(xì)胞/毫升，40微升/孔涂布于聚賴氨酸涂布的384孔組織培養(yǎng)板(greiner)中的rpmi1640(gibco11835-030[-苯酚+谷氨酰胺])及10％經(jīng)活性炭處理的fbs(gibco12676-029)中且孵育過夜。通過使用biomek-fx用dmso連續(xù)稀釋制備最終所要濃度500倍的化合物且用rpmi1640稀釋50倍。也以類似方式制備對(duì)照化合物氟維司群及陰性對(duì)照二甲亞砜。將5ul各個(gè)化合物濃度及各對(duì)照化合物轉(zhuǎn)移至該細(xì)胞板。將氟維司群以100nm的最終濃度添加至對(duì)照孔中。將dmso添加至陰性對(duì)照孔中(0.2v/v％)。將五微升(5μl)1nm雌二醇(于無酚紅rpmi1640(gibco11835-030)中)添加至細(xì)胞板的各孔中(除無雌二醇對(duì)照孔外)。孵育細(xì)胞72小時(shí)，隨后使用celltiterglo試劑(promega#g7572)(40微升/孔)溶解，且在envision(perkinelmer)板讀取器上測(cè)量發(fā)光。使用genedatascreener軟件分析數(shù)據(jù)，其中使用dmso及氟維司群處理樣品來定義0％及100％抑制，且使用曲線擬合使用robust法計(jì)算ec50值。

實(shí)施例904era輔激活因子肽拮抗劑測(cè)定

用dmso制備1mm的測(cè)試化合物，且使用biomekfx于12點(diǎn)1至3倍滴定中于384孔透明v形底聚丙烯板(greiner目錄號(hào)781280)中連續(xù)稀釋。通過將1ml各濃度的化合物連續(xù)稀釋液與32.3mltr-fret共調(diào)節(jié)劑緩沖劑e(lifetechnologiespv4540)混合制備3×化合物中間物稀釋液。使用biomekfx將2ml3×化合物中間物稀釋液轉(zhuǎn)移至1536孔(aurorabiotechnologiesmako1536黑色板，#00028905)中。使用bioraptr(beckmancoulter)分配：2毫升/孔“3×era溶液”：22nmera(人類雌激素受體α，經(jīng)gst標(biāo)記的esr1配體結(jié)合域，跨越殘基s282-v595，野生型序列或含有突變：y537s或d538g)于含有7.5mm二硫蘇糖醇(dtt)的tr-fret共調(diào)節(jié)劑緩沖劑e中的溶液；及2ml3×測(cè)定混合物(750nm螢光素-pgc1a肽序列；lifetechnologiespv4421)，12nm雌二醇，15nm抗gsttb標(biāo)記抗體于tr-fret共調(diào)節(jié)劑緩沖劑e(含有7.5mmdtt)中的溶液。“無受體”對(duì)照孔接受緩沖劑，其中無gst-era蛋白質(zhì)。將培養(yǎng)板在v-spin離心機(jī)中在1800rpm離心20秒且在室溫在蓋上培養(yǎng)板的情況下孵育2小時(shí)。使用perkinelmerenvision螢光讀取器使用tr-fret裝置(頂鏡：perkinelmerlance/delfia雙重發(fā)射(pe#2100-4160)；激發(fā)濾光片：perkinelmeruv(tfr)340nm(pe#2100-5010)；發(fā)射濾光片：chroma495nm/10nm及520nm/25nm(對(duì)于lanthascreen，為chroma#pv003濾光片，對(duì)于envision，25mm直徑；)激發(fā)光：100％；延遲：100us；窗口時(shí)間：200；連續(xù)窗數(shù)目：1；閃光之間的時(shí)間：2000us；閃光數(shù)目：100；閃光數(shù)目(第2檢測(cè)器)：100)進(jìn)行測(cè)量。相對(duì)于無化合物(僅dmso)對(duì)照及“無era對(duì)照”計(jì)算抑制值百分比。使用genedatascreener軟件進(jìn)行曲線擬合及ic50計(jì)算。

實(shí)施例905體內(nèi)小鼠腫瘤異種移植物功效

小鼠：雌性嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷小鼠(foxchasec.b-17/icrhsd,harlan)或裸鼠(taconicfarms,harlan)為8至9周齡，在研究的第0天的bw范圍為15.1至21.4克。對(duì)動(dòng)物隨意飼喂水(反滲透，1ppmcl)以及由18.0％粗蛋白、5.0％粗脂肪和5.0％粗纖維組成的nih31改良和輻照實(shí)驗(yàn)室飲食(modifiedandirradiatedlab)。將小鼠安置在21-22℃(70-72°f)和40-60％濕度、以12小時(shí)光照循環(huán)的靜態(tài)微隔離器(staticmicroisolator)中經(jīng)輻照的實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物墊料(laboratoryanimalbedding)上。prc特別遵守“實(shí)驗(yàn)動(dòng)物護(hù)理和使用指南(guideforcareanduseoflaboratoryanimals)”關(guān)于約束、飼養(yǎng)、手術(shù)操作、飼料和流體調(diào)節(jié)以及獸醫(yī)護(hù)理的建議。prc的動(dòng)物護(hù)理和使用計(jì)劃由實(shí)驗(yàn)動(dòng)物護(hù)理國(guó)際評(píng)估和認(rèn)證協(xié)會(huì)(theassociationforassessmentandaccreditationoflaboratoryanimalcareinternational)(aaalac)認(rèn)證，確保遵守關(guān)于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物護(hù)理和使用的公認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)。

腫瘤植入：用癌細(xì)胞啟動(dòng)異種移植。將細(xì)胞在補(bǔ)充有10％胎牛血清、2mm谷氨酰胺、100單位/ml青霉素、100μg/ml硫酸鏈霉素和25μg/ml慶大霉素的rpmi1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)。在指數(shù)生長(zhǎng)期間收集細(xì)胞，并根據(jù)細(xì)胞系的倍增時(shí)間以5x10⁶或10x10⁶個(gè)細(xì)胞/ml的濃度重新混懸于磷酸鹽緩沖鹽水(pbs)中。將腫瘤細(xì)胞皮下植入右肋腹，并且當(dāng)平均大小接近100至150mm³的目標(biāo)范圍時(shí)監(jiān)測(cè)腫瘤生長(zhǎng)。在腫瘤植入后21天(指定為研究的第0天)，將小鼠置于四組中，每組由10只小鼠組成，所述小鼠具有75-172mm³的單個(gè)腫瘤體積和120-121mm³的組平均腫瘤體積(參見附錄a)。使用下式計(jì)算體積：

腫瘤體積(mm³)＝(w²xl)/2，其中w＝腫瘤的寬度且l＝腫瘤的長(zhǎng)度(以mm為單位)。假設(shè)1mg等于1mm³的腫瘤體積，可估計(jì)腫瘤重量。

治療劑：雌激素受體調(diào)節(jié)劑化合物和化學(xué)治療劑通常由干粉制備，在室溫儲(chǔ)存，并且免受光照。在去離子水(“媒介物”)中的0.5％甲基纖維素:0.2％吐溫80中每周制備藥物劑量并在4℃儲(chǔ)存。媒介物(+)為具有0.1mg/kg的乙炔基雌二醇(乙炔雌二醇,ee2)的溶劑/緩沖劑。媒介物(-)為不具有乙炔雌二醇的溶劑/緩沖劑。在給藥的每一天通過用無菌鹽水(0.9％nacl)稀釋儲(chǔ)備液的等分試樣來制備化合物的劑量。配制所有劑量以每20克體重0.2ml的體積(10ml/kg)遞送所述mg/kg劑量。

治療：將所有劑量按比例調(diào)整至單個(gè)動(dòng)物的體重并通過所示的途徑提供。

終末點(diǎn)：以2維(長(zhǎng)度和寬度)使用ultracaliv卡尺(model5410111；fredv.fowlercompany)如下測(cè)量腫瘤體積：腫瘤體積(mm³)＝(長(zhǎng)度x寬度²)×0.5并使用excelversion11.2(microsoftcorporation)進(jìn)行分析。使用線性混合效應(yīng)(lme)建模方法分析來自同一動(dòng)物的腫瘤體積隨時(shí)間的重復(fù)測(cè)量(pinheiroj,etal.nlme:linearandnonlinearmixedeffectsmodels.rpackageversion3.192.2009；tann,etal.clin.cancerres.2011；17(6):1394–1404)。該方法解決了由于在研究結(jié)束之前動(dòng)物的任何非治療相關(guān)的死亡所導(dǎo)致的重復(fù)測(cè)量和適度退出(dropout)。使用三次回歸樣條(cubicregressionspline)在每個(gè)劑量水平將非線性分布擬合為log2腫瘤體積的時(shí)程。然后，這些非線性分布與混合模型內(nèi)的劑量相關(guān)。使用下式將作為媒介物對(duì)照的百分比的腫瘤生長(zhǎng)抑制(％tgi)計(jì)算為針對(duì)相應(yīng)劑量組/天相對(duì)于媒介物的擬合曲線下面積(auc)的百分比：％tgi＝100×(1-aucdose/aucveh)。使用該式，tgi值為100％表示腫瘤停滯，tgi值＞1％但＜100％表示腫瘤生長(zhǎng)延遲，且tgi值>100％表示腫瘤消退。將動(dòng)物的部分響應(yīng)(pr)定義為腫瘤消退＞50％的起始腫瘤體積但＜100％的起始腫瘤體積。將完全響應(yīng)(cr)定義為在研究過程的任一天100％腫瘤消退(即，無可測(cè)量的腫瘤)。

毒性：在研究的前五天每天稱重動(dòng)物，然后每周兩次稱重。使用adventurerav812量表(ohauscorporation)測(cè)量動(dòng)物體重。重量變化百分比計(jì)算如下：體重變化(％)＝[(重量新的一天-重量第0天)/重量第0天]×100。頻繁觀察小鼠并在觀察時(shí)記錄任何不良的、治療相關(guān)的副作用的明顯體征和臨床毒性體征。將可接受的毒性定義為在研究期間小于20％的組平均體重(bw)減輕，并且在10只治療的動(dòng)物中有不超過一只治療相關(guān)的(tr)死亡。導(dǎo)致更大毒性的任何給藥方案被認(rèn)為高于最大耐受劑量(mtd)。若可歸因于由臨床體征和/或尸體剖檢所證明的治療副作用，則將死亡歸類為tr，或者若歸因于給藥期期間或最后一次給藥的10天內(nèi)的未知原因，則也可將死亡歸類為tr。若沒有證據(jù)表明死亡與治療副作用相關(guān)，則將死亡歸類為ntr。

體內(nèi)異種移植物乳腺癌模型；(mcf-7；他莫昔芬-敏感性)：將含有0.72mg17-β雌二醇的延時(shí)釋放丸粒皮下植入nu/nu小鼠中。使mcf-7細(xì)胞在5％co2、37℃含有10％fbs的rpmi中生長(zhǎng)。將胰蛋白酶化細(xì)胞?；乙?×10⁷個(gè)細(xì)胞/毫升再懸浮于50％rpmi(不含血清)及50％基質(zhì)膠中。在丸粒移植后2-3天將mcf-7細(xì)胞皮下注射(100微升/動(dòng)物)于右側(cè)腹。每?jī)芍鼙O(jiān)測(cè)腫瘤體積(長(zhǎng)度×寬度²/2)。當(dāng)腫瘤達(dá)到約200mm³的平均體積時(shí)，將動(dòng)物隨機(jī)分組且開始處理。每天用媒介物或化合物處理動(dòng)物歷時(shí)4周。在整個(gè)研究中每?jī)芍鼙O(jiān)測(cè)腫瘤體積及體重。

體內(nèi)異種移植物乳腺癌模型；(他莫昔芬-抵抗性模型)：用經(jīng)口管飼他莫昔芬(檸檬酸鹽)處理帶有mcf-7腫瘤(平均腫瘤體積200mm³)的雌性nu/nu小鼠(補(bǔ)充有17-β雌二醇丸粒；0.72mg；60天緩慢釋放)。每周兩次監(jiān)測(cè)腫瘤體積(長(zhǎng)度×寬度²/2)及體重。在腫瘤體積保持靜態(tài)的顯著抗腫瘤反應(yīng)之后，在處理約100天首次觀察到明顯腫瘤生長(zhǎng)。在處理的120天，將他莫昔芬劑量增加。認(rèn)為快速生長(zhǎng)的腫瘤具有他莫昔芬耐受性且選用于在新宿主動(dòng)物中進(jìn)行體內(nèi)傳代。將來自他莫昔芬耐受性腫瘤的腫瘤片段(約100立方毫米/動(dòng)物)皮下植入雌性nu/nu小鼠的右側(cè)腹(具有17-β雌二醇丸粒(0.72mg；60天緩慢釋放))。將傳代的腫瘤維持在恒定他莫昔芬選擇下，且每周監(jiān)測(cè)腫瘤體積(長(zhǎng)度×寬度²/2)。在腫瘤體積達(dá)到約150-250mm³時(shí)，將動(dòng)物隨機(jī)分于處理組(平均腫瘤體積200mm³)中且終止他莫昔芬處理。每天用媒介物或化合物處理動(dòng)物歷時(shí)4周。在研究期間，每周兩次監(jiān)測(cè)腫瘤體積及體重。

實(shí)施例906不成熟子宮濕重測(cè)定

處理雌性不成熟cd-igs大鼠(到達(dá)時(shí)21天齡)三天。每天對(duì)動(dòng)物給藥歷時(shí)三天。對(duì)于拮抗模式，經(jīng)口通過管飼法給予媒介物或測(cè)試化合物，15分鐘后給予0.1mg/kg經(jīng)口劑量的乙炔基雌二醇。對(duì)于激動(dòng)模式，經(jīng)口通過管飼法給予媒介物或測(cè)試化合物。在第四天，在給藥之后24小時(shí)，收集血漿以進(jìn)行藥物動(dòng)力學(xué)分析。在血漿收集后即刻將動(dòng)物安樂死且移出子宮并稱重。

將來自每組2只動(dòng)物的子宮及卵巢固定于10％中性經(jīng)緩沖福爾馬林(formalin)中，且石蠟包埋，切片且染色以用于h&e(sdpath)。分析經(jīng)染色組織且由委員會(huì)鑒定的病理學(xué)家讀取。將來自每組4只動(dòng)物的子宮及卵巢快速冷凍于液氮中進(jìn)行轉(zhuǎn)錄分析，檢查通過雌激素受體調(diào)節(jié)的所選組的基因。

用式i化合物(1r,3r)-1-(2,6-二氟-4-((1-(3-氟丙基)氮雜環(huán)丁烷-3-基)氧基)苯基)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氫-1h-吡啶并[3,4-b]吲哚101和(1r,3r)-1-(2,6-二氟-4-(2-(3-(氟甲基)氮雜環(huán)丁烷-1-基)乙氧基)苯基)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氫-1h-吡啶并[3,4-b]吲哚102、他莫昔芬、氟維司群、azd9496(wo2014/191726,實(shí)施例1,第74頁；us9155727)和兩種對(duì)照，即媒介物以及媒介物+乙炔基雌二醇(ee)處理小鼠。所有化合物經(jīng)口給與，一天一次×3。計(jì)算子宮濕重(uww)：體重的比率。通過組織學(xué)測(cè)量子宮橫截面的平均子宮內(nèi)膜高度。使用滑動(dòng)檢視器由基底膜至頂端(內(nèi)腔)表面以20×放大倍數(shù)測(cè)量子宮內(nèi)膜細(xì)胞高度。避免斜切區(qū)域。在激動(dòng)模式uww測(cè)定中，式i化合物101及102為拮抗劑，而azd9496為部分激動(dòng)劑。

實(shí)施例907成熟子宮濕重-10天測(cè)定

購(gòu)買雌性cd-igs大鼠(69日齡，charlesriverlaboratories)且分組。第1組在供應(yīng)商(charlesriverlaboratories)處在60日齡時(shí)切除卵巢且在手術(shù)之后2周開始研究，而第2-8組完整。經(jīng)口給予媒介物或測(cè)試化合物10天。在第10天及最后一劑之后兩小時(shí)，進(jìn)行心臟穿刺且收集血清以進(jìn)行藥物動(dòng)力學(xué)及雌二醇分析。在血清收集之后立即將動(dòng)物安樂死且移出子宮及卵巢并稱重。

盡管為了清楚理解的目的通過說明和實(shí)施例的方式相當(dāng)詳細(xì)地描述了前述發(fā)明，但是描述和實(shí)施例不應(yīng)被解釋為限制本發(fā)明的范圍。通過引用的方式將本申請(qǐng)引用的所有專利和科學(xué)文獻(xiàn)的公開內(nèi)容明確地整體并入本申請(qǐng)。