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用于生產(chǎn)蛋白質(zhì)的經(jīng)改進(jìn)的宿主細(xì)胞的制作方法

文檔序號(hào):12070519閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.用于生產(chǎn)目的重組肽、多肽或蛋白質(zhì)的宿主細(xì)胞,其中所述宿主細(xì)胞包含至少2個(gè)拷貝的編碼毒物蛋白的核酸序列,條件是所述至少2個(gè)拷貝在與編碼針對(duì)所述毒物蛋白的解毒劑蛋白的核酸序列不同的復(fù)制子中。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的宿主細(xì)胞,其中所述毒物蛋白是由SEQ ID NO:1或與SEQ ID NO:1具有至少75%同一性的任意核酸序列編碼的CcdB。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求2所述的宿主細(xì)胞,其中所述細(xì)胞還包含至少1個(gè)拷貝的編碼針對(duì)所述毒物蛋白的所述解毒劑蛋白的核酸序列。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的宿主細(xì)胞,其中所述解毒劑蛋白是由SEQ ID NO:13或與SEQ ID NO:13具有至少75%同一性的任意核酸序列編碼的CcdA。

5.根據(jù)權(quán)利要求3或權(quán)利要求4所述的宿主細(xì)胞,其中編碼所述解毒劑蛋白的所述核酸序列由質(zhì)粒攜帶,所述質(zhì)粒還包含插入有或能夠插入有編碼目的重組肽、多肽或蛋白質(zhì)的核酸序列的表達(dá)系統(tǒng)。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的宿主細(xì)胞,其中所述表達(dá)系統(tǒng)包含選自包括T7啟動(dòng)子、Ptrc、Para和Plac的組的啟動(dòng)子。

7.根據(jù)權(quán)利要求5或6中任一項(xiàng)所述的宿主細(xì)胞,其中所述表達(dá)系統(tǒng)包含T7啟動(dòng)子,并且所述宿主細(xì)胞還包含T7 RNA聚合酶基因,所述T7 RNA聚合酶基因優(yōu)選地插入在其基因組中,更優(yōu)選地插入在T7表達(dá)系統(tǒng)中。

8.根據(jù)權(quán)利要求5至7中任一項(xiàng)所述的宿主細(xì)胞,其中所述表達(dá)系統(tǒng)包含T7啟動(dòng)子,并且所述宿主細(xì)胞還包含插入在其基因組中的經(jīng)遺傳修飾噬菌體,優(yōu)選地所述噬菌體限定為以下噬菌體,其中:

-插入T7表達(dá)系統(tǒng),

-S、R和/或Q基因失活,并且

-Int和/或Xis基因失活。

9.根據(jù)權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)所述的宿主細(xì)胞,其是細(xì)菌,優(yōu)選革蘭氏陰性細(xì)菌,更優(yōu)選腸桿菌科(Enterobacteriacea),甚至更優(yōu)選大腸桿菌(E.coli)。

10.根據(jù)權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)所述的宿主細(xì)胞,其還包含基因tonA、galK、araB、araA、lon、ompT、rcsA、hsdR、mrr、endA和recA中至少一個(gè)基因的失活。

11.根據(jù)權(quán)利要求1至10中任一項(xiàng)所述的宿主細(xì)胞,其還包含至少一個(gè)額外拷貝的gyrA基因。

12.一種試劑盒,其包含根據(jù)權(quán)利要求1至11中任一項(xiàng)所述的宿主細(xì)胞和載體,所述載體包含至少一個(gè)拷貝的編碼解毒劑蛋白的核酸序列和至少一個(gè)拷貝的表達(dá)系統(tǒng),其中所述表達(dá)系統(tǒng)插入有或能夠插入有編碼目的重組肽、多肽或蛋白質(zhì)的核酸序列。

13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的試劑盒,其中編碼目的重組肽、多肽或蛋白質(zhì)的所述核酸序列在選自包括T7啟動(dòng)子、Ptrc、Para和Plac的組的啟動(dòng)子控制之下。

14.一種用于生產(chǎn)目的重組肽、多肽或蛋白質(zhì)的方法,其中所述方法包括培養(yǎng)根據(jù)權(quán)利要求1至11中任一項(xiàng)所述的宿主細(xì)胞并回收所述目的肽、多肽或蛋白質(zhì)。

15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的用于生產(chǎn)目的重組肽、多肽或蛋白質(zhì)的方法,其中所述重組蛋白是分泌蛋白、跨膜蛋白或?qū)?xì)菌菌株具有毒性的蛋白質(zhì)。

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