本發(fā)明涉及一種保護(hù)和穩(wěn)定病毒RNA的采血管。

背景技術(shù)：

自然界的病毒種類數(shù)不勝數(shù)，其中絕大多數(shù)為RNA病毒，如艾滋病病毒，乙肝肝炎病毒，SARS 病毒，MERS病毒，埃博拉病毒（EBV），丙肝肝炎病毒，甲型H1N1流感病毒，禽流感病毒等。病毒體積非常微小，結(jié)構(gòu)及其簡單，但具有高度的寄生性，完全依賴宿主細(xì)胞的能量和代謝系統(tǒng)。當(dāng)它接觸到宿主細(xì)胞時，便脫去蛋白質(zhì)外套，它的核酸(基因)侵入宿主細(xì)胞內(nèi)，借助后者的復(fù)制系統(tǒng)，按照病毒基因的指令復(fù)制新的病毒，最后造成宿主細(xì)胞死亡。

人被病毒感染后，病毒借著人的細(xì)胞的能量和代謝系統(tǒng)，進(jìn)行大量的繁殖。當(dāng)宿主細(xì)胞破裂后，病毒就暴露在細(xì)胞外，故可通過對血液進(jìn)行核酸提取，再對核酸進(jìn)行相關(guān)病毒檢測便可確認(rèn)是否感染了病毒，以及感染的病毒類型。所以，血液病毒RNA的檢測及其在基因診斷等方面的應(yīng)用對于RNA病毒等的診斷和監(jiān)測具有十分重要的意義。

但在血液中的病毒RNA濃度非常低，而血液中RNA酶含量多，病毒RNA在沒有保護(hù)的狀態(tài)下很容易被RNA酶降解。在臨床上，大多數(shù)是采用采血管采集人的血液，再對血液進(jìn)行檢測。

而目前，市面上存在著各種各樣的采血管，這些采血管大多數(shù)都只是起到防止血液凝固的作用，而沒有起到保護(hù)病毒RNA的作用。而且在臨床過程中，由于條件或時間的限制，常常無法在得到血液后第一時間就進(jìn)行病毒RNA的提取。細(xì)胞破裂，產(chǎn)生更多的RNA酶，在短短的幾個小時內(nèi)就將大部分的病毒RNA降解了，對后續(xù)實驗造成極大的障礙，實驗結(jié)果容易產(chǎn)生假陰性，從而無法為臨床提供有價值的信息。

因此，一種可以保護(hù)和穩(wěn)定病毒RNA的采血管是很有必要的。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于制備一種保護(hù)和穩(wěn)定病毒RNA的采血管，該采血管不僅能防止血液凝固，而且能夠保護(hù)和穩(wěn)定、富集其中病毒的RNA。該采血管是由試管、密封膠塞和保護(hù)劑組成的。將血液采集到管中后，上下顛倒10次充分混合均勻。在室溫下，血液中的病毒RNA可保存3天，-20℃至-80℃可長期保存。

本發(fā)明的目的可以通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)：

一種保護(hù)和穩(wěn)定病毒RNA的采血管，其特征在于，所述的試管是由疏水性質(zhì)的聚對苯二甲酸醇酯材質(zhì)制造而成，所述的密封膠塞是由丁基橡膠材質(zhì)制造而成。

一種病毒RNA保護(hù)劑，其特征在于，所述保護(hù)劑是由EDTA-3K、IDU、bestain、glycine、AEBSF、核糖核苷復(fù)合物、異硫氰酸胍、磁珠按照一定的比例溶解于DEPC水，再進(jìn)行凍干而成，其中各組分在所述溶液中的濃度分別為：EDTA-3K（20g-80g/L）、IDU（250-700g/L）、bestain（0.06-0.38g/L）、glycine（15-68g/L）、AEBSF（0.01-0.34g/L）、核糖核苷復(fù)合物（0.2ml-1ml/L）、異硫氰酸胍（30-100g/L）、磁珠（0.5-4mg/ml）。

作為優(yōu)選，本發(fā)明所述的病毒RNA保護(hù)劑的EDTA-3K、IDU、bestain、glycine、AEBSF、核糖核苷復(fù)合物、異硫氰酸胍、磁珠的濃度分別為55g/L、600g/L、0.31g/L、45g/L、0.262g/L、0.2ml/L、40g/L、1mg/ml。

附圖說明

圖1為全血樣本于本發(fā)明所述的一種保護(hù)和穩(wěn)定病毒RNA的采血管中分別保存0、1、2、3天后進(jìn)行核酸提取，提取得到的核酸進(jìn)行HIV基因?qū)崟r熒光PCR的檢測結(jié)果。

圖2為全血樣本于常規(guī)EDTA-Na₂采血管中分別保存0、1、2、3天后進(jìn)行核酸提取，提取得到的核酸進(jìn)行HIV基因?qū)崟r熒光PCR的檢測結(jié)果。

具體實施方法

以下實施案例僅用于解釋本發(fā)明，而不用于限制本發(fā)明。

實例：

隨機(jī)抽取4份感染HIV的人全血樣本，分別按5ml/人份分成8人份，其中4人份為1組，分成2組。其中1組置于常規(guī)EDTA-Na₂采血管中，另1組置于本發(fā)明所述的保護(hù)病毒RNA的采血管中，分別常溫放置0天、1天、2天、3天后進(jìn)行核酸提取（Qiagen公司的RNeasy Mini Kit (50) -貨號74104試劑盒），以提取的核酸為樣本進(jìn)行人HIV基因的實時熒光PCR檢測。

檢測結(jié)果：

置于常規(guī)EDTA-Na₂采血管和本發(fā)明所述的保護(hù)病毒RNA采血管的中的感染了HIV的全血樣本，在常溫放置不同時間后，分別進(jìn)行核酸提取，提取的核酸進(jìn)行HIV基因的實時熒光PCR檢測，其檢測結(jié)果的Ct值如表1。

表1

由表1可知，本發(fā)明所述的保護(hù)病毒RNA采血管能夠在3天內(nèi)有效地保護(hù)血液中病毒RNA，只有極其輕微的降解；而常規(guī)EDTA-Na₂采血管對病毒RNA的穩(wěn)定性維持時間不到1天且降解情況比較嚴(yán)重。

圖1~圖2為表1對應(yīng)的HIV基因的實時熒光PCR檢測結(jié)果圖，其中圖1為全血置于本文所述的保護(hù)病毒RNA的采血管中保存不同時間后進(jìn)行核酸提取，提取得到的核酸進(jìn)行HIV基因?qū)崟r熒光PCR的檢測結(jié)果圖，由圖可知，在0~3天的檢測時間內(nèi)，所有檢測樣本都被正確檢出，且穩(wěn)定性良好，血液中病毒RNA得到了有效的保護(hù)；圖2為全血置于常規(guī)EDTA-Na₂采血管中保存不同時間后進(jìn)行核酸提取，提取得到的核酸進(jìn)行HIV基因?qū)崟r熒光PCR的檢測結(jié)果圖，檢測結(jié)果顯示，常規(guī)EDTA-Na₂采血管中的病毒RNA連1天的穩(wěn)定性都不能維持，降解情況十分嚴(yán)重。

本發(fā)明所述保護(hù)病毒RNA的采血管是一種能夠高效保護(hù)病毒RNA的試劑。