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用于生物合成生產(chǎn)的重組宿主細(xì)胞的制作方法

文檔序號(hào):9528956閱讀:440來源:國知局
用于生物合成生產(chǎn)的重組宿主細(xì)胞的制作方法
【專利說明】用于生物合成生產(chǎn)的重組宿主細(xì)胞 發(fā)明領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及一種細(xì)胞,該細(xì)胞包括編碼一種多酶復(fù)合體的異源多核苷酸,該多酶 復(fù)合體參與苯丙烷代謝途徑,并且涉及其在香草素或其羥基苯甲醛前體的生物合成中用 途。
【背景技術(shù)】
[0002] 香草醛是在食品、飲料、香料和藥物中的最重要的芳香風(fēng)味化合物之一。從蘭科扁 葉香果蘭(Vanillaplanifolia)豆中提取的天然香草醛是相當(dāng)昂貴的。香草豆的生產(chǎn)是 一個(gè)漫長的過程,其高度依賴于適合的土壤和氣候條件。在4-5年的栽培后豆子出現(xiàn)并且 該芳香在需要6個(gè)月的所謂的"固化"的長時(shí)間過程后在水果中發(fā)育出。消費(fèi)者對(duì)天然香 草醛的需求高度超過對(duì)通過植物源提取的香草醛的量。少于5%的全世界香草醛生產(chǎn)來自 天然香草。由于天然香草提取物的稀缺和費(fèi)用,長期以來已經(jīng)存在合成制備其主要成分的 關(guān)注。香草醛(4-羥基-3-甲氧基苯甲-醛)是香草風(fēng)味的主要感官成分。
[0003] 因?yàn)閷?duì)香草醛的需求高于可從蘭科扁葉香果蘭豆中提取的,所以其余部分通過可 替代的方式產(chǎn)生?;瘜W(xué)合成是香草醛的最重要來源。香草醛首先是從發(fā)現(xiàn)于丁子香的油中 的丁香酚合成的并且后來從包含亞硫酸鹽液體的木質(zhì)素中合成的,該木質(zhì)素是一種在紙張 生產(chǎn)中木漿加工的副產(chǎn)物。盡管一些香草醛仍然由木質(zhì)素廢棄物制備,現(xiàn)今大部分合成的 香草醛以一個(gè)兩步法從石油化學(xué)的前體:愈創(chuàng)木酚和乙醛酸合成。香草醛也可通過姜黃素、 丁香酚或胡椒堿的分子斷裂化學(xué)地產(chǎn)生。
[0004] 天然和合成的香草醛的價(jià)格之間的大差異、增加的消費(fèi)者導(dǎo)向的對(duì)"天然的"和 "健康的"香料需求、以及對(duì)"天然的"市場(chǎng)要求的服務(wù)已經(jīng)導(dǎo)致對(duì)香料工業(yè)日益增長的關(guān)注 以從其他天然來源通過生物轉(zhuǎn)化 1'2'3'4'5產(chǎn)生天然香草醛。微生物細(xì)胞和其他的酶在精細(xì)化 學(xué)品的合成中作為生物催化劑的使用已經(jīng)在綠色化學(xué)和白色生物技術(shù)中備受關(guān)注。由于歐 洲社會(huì)法律,此類生物轉(zhuǎn)化的產(chǎn)物被認(rèn)為是天然的(包含在術(shù)語"天然產(chǎn)物"下通過活細(xì)胞 或它們的酶從生物源產(chǎn)生的產(chǎn)物。
[0005] 用于生產(chǎn)的可替代的基于生物技術(shù)的方法是基于木質(zhì)素、二苯乙烯型酚、異丁子 香酚、丁香酚、阿魏酸或芳香族氨基酸的生物轉(zhuǎn)化,并且基于從頭生物合成、應(yīng)用真菌、細(xì) 菌、植物細(xì)胞或基因工程微生物。雖然經(jīng)由異丁子香酚的轉(zhuǎn)化的香草醛生產(chǎn)已經(jīng)在各種 微生物中廣泛被報(bào)道,包括黑曲霉 6;克雷白氏菌屬、腸桿菌屬和沙雷氏菌屬的菌株7;玫 瑰色紅球菌8;枯草芽孢桿菌B2 梭形芽孢桿菌,枯草芽孢桿菌HS8n;硝基還原假單胞 菌12;惡臭假單胞菌13;綠針假單胞菌 14;短小芽孢桿菌15;以及伊文思諾卡氏菌(Nocardia iowensis)16。最近描述了使用代謝工程化酵母菌株從葡萄糖從頭合成17。
[0006] 釀酒酵母是一種有用的細(xì)胞,工廠依賴其生產(chǎn)高價(jià)值工業(yè)生物技術(shù)產(chǎn)品。它非常 適合于生物精煉工藝,歸因于其細(xì)胞-再利用發(fā)酵和其對(duì)抗各種壓力(諸如低pH、高溫和各 種抑制劑1S)的非凡耐受性的能力。此外,釀酒酵母是一種被極好地表征的促進(jìn)代謝工程19 的模式生物,2°歸因于全基因組序列的可得性和代謝途徑的詳細(xì)表征21。
[0007]US6372461B1描述了香草醛通過需要五種由重組微生物提供的酶的微生物-催 化轉(zhuǎn)化步驟從碳源的合成以及酶-催化的還原步驟以通過芳基-醛脫氫酶還原香草酸。
[0008]EP2388333A2描述了一種能夠生產(chǎn)香草醛的微生物細(xì)胞,包括至少三種異源酶 活性,即3-脫氫莽草酸脫水酶、芳香族羧酸還原酶和30-甲基轉(zhuǎn)移酶活性。
[0009]W0 2011124693A1描述了通過部分同源的體內(nèi)重組產(chǎn)生基因嵌合體的方法,由此 可以構(gòu)建在自然界中不存在的代謝途徑。
[0010] US2003/070188A1描述了香草醛的生物合成途徑,該生物合成途徑包括P-香豆 酸向P-羥基苯甲醛的轉(zhuǎn)化以及在具有改善的香草醛生產(chǎn)的經(jīng)培養(yǎng)的扁葉香果蘭(Vanilla planifolia)或轉(zhuǎn)基因細(xì)胞和植物中的香草醛生產(chǎn)。
[0011] 漢森(Hansen)等人(《應(yīng)用與環(huán)境微生物學(xué)》(ApplEnvironMicrobiol.) 2009 ; 75(9):2765-2774)描述了香草酸在裂殖酵母(粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe))和面包酵母((Saccharmomycescerevisiae))中的從頭生物合成。這些工程化途 徑用去氫莽草酸作為底物起始。
[0012] 迪吉奧亞(DiGioia)等人(《生物技術(shù)雜志》(J.Biotechnol. ) 2011 ; 156:309-316)描述了焚光假單胞菌(Pseudomonasfluorescens)用于從阿魏酸生產(chǎn)香草 醛的代謝工程。
[0013]布羅查多(Brochado)等人(微生物細(xì)胞工廠(MicrobialCellFactories) 2010; 9:84)描述了通過計(jì)算機(jī)模擬設(shè)計(jì)改善的香草醛在面包酵母中的生產(chǎn)。
[0014] 普里費(fèi)爾(Priefert)等人(《應(yīng)用微生物生物技術(shù)》(Appl.Microbiol. Biotechnol. )2001 ;56:296_314)描述了香草醛的生物技術(shù)生產(chǎn)和基于木質(zhì)素、二苯乙稀 型酚、異丁子香酚、丁香酚、阿魏酸或芳香族氨基酸的生物轉(zhuǎn)化的不同生物合成途徑。
[0015] 考爾(Kaur)等人(《應(yīng)用生物化學(xué)與微生物》(Appl.Biochem.Microbiol.) 2013; 169:1353-1372)提供了用于香草醛生產(chǎn)的生物技術(shù)和分子方法的綜述。
[0016] 發(fā)明概沐
[0017] 本發(fā)明的目的是引入一種酶或途徑至宿主細(xì)胞中通過在宿主細(xì)胞中的生物合成 提供一種增強(qiáng)的或新的香草醛形成能力。
[0018] 該目的通過本發(fā)明的主體來解決。
[0019] 根據(jù)本發(fā)明,提供了一種細(xì)胞,該細(xì)胞包括編碼一種多酶復(fù)合體的異源多核苷酸, 該多酶復(fù)合體參與苯丙烷代謝途徑和香草素或其羥基苯甲醛前體的生物合成,該多酶復(fù)合 體包括用于香豆酸和巴豆酸酶的生物合成的酶。在此,香豆酸被具體地理解為P-香豆酸。
[0020] 具體而言,本發(fā)明提供一種細(xì)胞,該細(xì)胞包括編碼一種多酶復(fù)合體的異源多核苷 酸,該多酶復(fù)合體參與苯丙烷代謝途徑和香草素或其羥基苯甲醛前體的生物合成,該多酶 復(fù)合體包括用于香豆酸的生物合成的以下各項(xiàng)酶,這些酶包括苯丙氨酸氨解酶(PAL)、酪氨 酸氨解酶(TAL)或苯丙氨酸/酪氨酸氨解酶(PAL/TAL)中的任一種,以及任選地一種或多 種另外的酶以將芳香族氨基酸轉(zhuǎn)化為香豆酸,其中該多酶復(fù)合體進(jìn)一步包括將香豆酸轉(zhuǎn)化 為香草醛或其羥基苯甲醛前體的酶,包括巴豆酸酶。
[0021] 該香草素或羥醛前體可以在商業(yè)上如此使用,例如作為終端產(chǎn)物,或作為中間體 例如以使用該中間體作為前體進(jìn)一步產(chǎn)生衍生物或終端產(chǎn)物。
[0022] 根據(jù)一個(gè)具體方面,該多酶復(fù)合體包括至少所有如用于使用香豆酸作為前體的香 草醛生物合成所必要的酶,或如香草醛的生物合成或來自碳源的香草醛生物合成途徑的中 間體或代謝物的所有酶,例如轉(zhuǎn)化為香草醛所必要的那些酶,例如在此所述的那些酶。
[0023] 根據(jù)另外的具體方面,該多酶復(fù)合體包括至少所有使用芳香族氨基酸作為前體用 于香豆酸的生物合成的酶,至少用于轉(zhuǎn)化為香豆酸所必要的那些,例如在此所述的那些。
[0024] 具體地,該多酶復(fù)合體包括苯丙氨酸氨解酶(PAL)、肉桂酸羥化酶(C4H)、細(xì)胞色 素P450還原酶(CPR)、輔酶A連接酶、巴豆酸酶、3-單加氧酶和甲基轉(zhuǎn)移酶。
[0025] 根據(jù)一個(gè)另外的具體方面,該多酶復(fù)合體包括酪氨酸氨解酶(TAL)、輔酶A連接 酶、巴豆酸酶、3-單加氧酶和甲基轉(zhuǎn)移酶。
[0026] 根據(jù)另一個(gè)具體方面,該多酶復(fù)合體包括苯丙氨酸/酪氨酸氨解酶(PAL/TAL)、肉 桂酸羥化酶(C4H)、細(xì)胞色素P450還原酶(CPR)、輔酶A連接酶、巴豆酸酶、3-單加氧酶和甲 基轉(zhuǎn)移酶。
[0027] 根據(jù)一個(gè)具體實(shí)施例,該多酶復(fù)合體包括輔酶A連接酶,優(yōu)選4-香豆酸-輔酶A 連接酶(4CL)。
[0028] 根據(jù)另一個(gè)具體實(shí)施例,該多酶復(fù)合體包括3-單加氧酶,優(yōu)選酚羥化酶(PheA)和 黃素還原酶(FLARED)或羥基苯甲酸羥化酶(ΗΒΗ)。
[0029] 根據(jù)另一個(gè)具體實(shí)施例,該多酶復(fù)合體包括甲基轉(zhuǎn)移酶,優(yōu)選0-甲基轉(zhuǎn)移酶,優(yōu) 選3-0-甲基轉(zhuǎn)移酶或4-0-甲基轉(zhuǎn)移酶,優(yōu)選咖啡酸0-甲基轉(zhuǎn)移酶(C0MT)。
[0030] 根據(jù)另一個(gè)具體實(shí)施例,該巴豆酸酶是烯酰-輔酶Α水合酶(ECH)。
[0031] 根據(jù)一個(gè)具體方面,該巴豆酸酶是一種負(fù)責(zé)p-香豆酰輔酶A和/或阿魏酰輔酶A 的鏈還原反應(yīng)的ECH。
[0032] 根據(jù)一個(gè)具體方面,該巴豆酸酶是一種將p-香豆酰輔酶A轉(zhuǎn)化為4-羥基苯甲醛 的ECH。
[0033] 根據(jù)一個(gè)另外的具體方面,該巴豆酸酶是一種將阿魏酰輔酶A轉(zhuǎn)化為香草醛的 ECH〇
[0034] 根據(jù)一個(gè)具體方面,該細(xì)胞進(jìn)一步包括
[0035] a) -種編碼羧基還原酶(CAR)的異源多核苷酸,任選地連同一種編碼磷酸泛酰巰 基乙胺基轉(zhuǎn)移酶(PPTase)的多核苷酸;和/或
[0036] b) -種編碼醇氧化酶、優(yōu)選地香草醇氧化酶的異源多核苷酸(VA0)。
[0037] 根據(jù)一個(gè)具體實(shí)施例,這些多核苷酸編碼一系列由單個(gè)多順反子操縱子表達(dá)的 酶,或編碼一系列的由分離的啟動(dòng)子表達(dá)的酶。
[0038] 優(yōu)選地,這些多核苷酸被穩(wěn)定地整合至細(xì)胞基因組中。
[0039] 該細(xì)胞可以是一種真核細(xì)胞或原核細(xì)胞,優(yōu)選地選自下組,該組由以下各項(xiàng)組成: 酵母、哺乳動(dòng)物、昆蟲、植物和細(xì)菌的細(xì)胞。
[0040] 具體而言,該細(xì)胞是一種DNA修復(fù)缺陷型細(xì)胞,包括在錯(cuò)配修復(fù)(MMR)中的任何細(xì) 胞缺陷或在DNA修復(fù)中的任何其他缺陷;或是一種生產(chǎn)細(xì)胞,包括在DNA修復(fù)缺陷型細(xì)胞中 拼接的多核苷酸簇。
[0041] 具體地,這些多核苷酸源自至少兩種不同的物種。
[0042] 根據(jù)一個(gè)具體方面,這些酶中的至少一個(gè)是一種嵌合酶。
[0043] 根據(jù)本發(fā)明,具體地提供了這樣一種細(xì)胞,該細(xì)胞包括一種包含編碼參與苯丙烷 代謝途徑和香草素或其羥基苯甲醛前體的生物合成的至少五種酶、優(yōu)選地至少六種酶、優(yōu) 選地至少七種酶的異源多核苷酸的多酶復(fù)合體,其中這些酶中的至少一個(gè)是一種嵌合酶。
[0044] 在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中,該嵌合酶優(yōu)選地是
[0045]a)由不同多核苷酸片段構(gòu)成的核苷酸序列編碼的,這些片段被拼接成一種嵌合核 苷酸序列;和/或
[0046] b)由親本多核苷酸中的一種或多種核苷酸的插入、缺失和/或替代而獲得核苷酸 序列編碼的。
[0047] 具體地,編碼該嵌合酶的多核苷酸是由不同多核苷酸的片段構(gòu)成的,優(yōu)選地具有 至少30%的序列一致性,其片段被拼接成一種嵌合的核苷酸序列。此外,這些片段可以任選 地被誘變以包括衍生自一種或多種多核苷酸的突變序列,例如通過插入、缺失和/或替代 一種或多種核苷酸來突變。
[0048] 可替代地,編碼該嵌合酶的多核苷酸是衍生自僅一個(gè)親本多核苷酸及一個(gè)例如通 過誘變、或通過插入、缺失和/或替代一種或多種核苷酸而獲得的基因嵌合體。
[0049] 根據(jù)本發(fā)明,進(jìn)一步提供了一種通過將編碼參與苯丙烷代謝途徑和香草素或其羥 基苯甲醛前體的生物合成的多酶復(fù)合體的異源多核苷酸引入至該細(xì)胞基因組中來工程化 本發(fā)明的細(xì)胞的方法,該方法包括
[0050]a)提供編碼個(gè)體酶的多核苷酸,任選地,其中這些多核苷酸中的至少一個(gè)是由不 同多核苷酸的片段構(gòu)成的,其片段被拼接為一種嵌合的核苷酸序列;
[0051] b)將這些多核苷酸拼接至簇中并且優(yōu)選地通過體內(nèi)重組將所述簇整合至該細(xì)胞 基因組中;并且
[0052] c)任選地工程化一種生產(chǎn)細(xì)胞,其中將所述簇穩(wěn)定地整合至該生產(chǎn)細(xì)胞基因組 中。
[0053] 具體地,至少兩種不同的編碼個(gè)體酶的多核苷酸以全長多核苷酸或其片段被提 供,優(yōu)選地具有至少30%的序列一致性,并且這些多核苷酸通過部分同源的體內(nèi)重組被拼 接和重組,從而產(chǎn)生一種具有至少一個(gè)交叉的嵌合的核苷酸序列,優(yōu)選地一種基因嵌合體。
[0054] 根據(jù)一個(gè)具體實(shí)施例,在一個(gè)單獨(dú)的步驟程序中
[0055]a)將該細(xì)胞用所述全長的多核苷酸或片段的混合物進(jìn)行轉(zhuǎn)化;并且
[0056]b)將該嵌合的核苷酸序列在該細(xì)胞基因組的整合位點(diǎn)進(jìn)行重組,
[0057] 其中
[0058]i)所述多核苷酸的5'-末端序列具有一種側(cè)翼的靶序列,該靶序列正錨定到所述 整合位點(diǎn)的3' -端,并且
[0059] ii)所述多核苷酸的3' -末端序列具有一種側(cè)翼的靶序列,該靶序列正錨定到所 述整合位點(diǎn)的5' -端,
[0060] 并且
[0061] c)選擇包括一個(gè)基因嵌合體的克隆。
[0062] 具體地,提供了一種方法,其中這些多核苷酸中的至少一個(gè)是由不同多核苷酸的 片段構(gòu)成的,其片段在一個(gè)單獨(dú)的步驟程序中被拼接為一種嵌合的核苷酸序列,其中
[0063]a)將該細(xì)胞用所述多核苷酸進(jìn)行轉(zhuǎn)化;并且
[0064] b)將該嵌合的核苷酸序列在該細(xì)胞基因組的整合位點(diǎn)進(jìn)行重組,
[0065] 其中
[0066] i)所述多核苷酸的5'-末端序列具有一種側(cè)翼的靶序列,該靶序列正錨定到所述 整合位點(diǎn)的3' -端;并且
[0067] ii)所述多核苷酸的3' -末端序列具有一種側(cè)翼的靶序列,該靶序列正錨定到所 述整合位點(diǎn)的5'-端;
[0068] 并且
[0069] c)選擇包括一個(gè)基因嵌合體的克隆。
[0070] 具體地,編碼一系列至少兩種酶的多核苷酸以全長多核苷酸或不同起源的片段被 提供,其中
[0071]-該5' -末端序列是編碼該系列中的第一個(gè)酶的多核苷酸的;并且
[0072]-該3' -末端序列是編碼該系列中的最后一個(gè)酶的多核苷酸的。
[0073] 具體地,這些多核苷酸編碼一系列酶并且這些全長多核苷酸或片段中的至少一個(gè) 是一種重組分子,該重組分子包括
[0074] a)-個(gè)5' -部分,其包括該系列中的第一個(gè)酶的核苷酸序列;
[0075] b)-個(gè)3' -部分,其包括該系列中的第二個(gè)酶的核苷酸序列;以及
[0076] c)在該5' -部分和該3' -部分之間的一個(gè)終止子序列和一個(gè)啟動(dòng)子序列。
[0077] 具體地,提供了至少兩種重組分子,其中第一個(gè)重組分子的3' -部分與第二個(gè)重 組分子的5' -部分具有至少30%的序列同源性。
[0078] 根據(jù)本發(fā)明,進(jìn)一步提供了一種重組分子,該重組分子包括
[0079]a)-個(gè)5' -部分,其包括多酶復(fù)合體的一系列酶中的第一個(gè)酶的核苷酸序列;
[0080]b)-個(gè)3' -部分,其包括該系列中的第二個(gè)酶的核苷酸序列;并且
[0081]c)在該5' -部分和該3' -部分之間的一個(gè)終止子序列和一個(gè)啟動(dòng)子序列。
[0082] 第一個(gè)和第二個(gè)酶可以是按照連續(xù)的酶促反應(yīng)的順序或不是,例如按照不同的順 序。
[0083] 根據(jù)一個(gè)具體方面,該方法進(jìn)一步包括生產(chǎn)細(xì)胞譜系,其在編碼嵌合酶的基因嵌 合體中彼此不同。
[0084] 根據(jù)本發(fā)明,進(jìn)一步提供了包括通過本發(fā)明的方法可獲得的譜系的細(xì)胞文庫,優(yōu) 選的是包括至少100個(gè)不同的克隆、優(yōu)選地至少200、300、400、500、1. 000、2. 000、3. 000、 4. 000、5. 000,或至少10. 000個(gè)克隆的文庫。
[0085] 根據(jù)本發(fā)明,進(jìn)一步提供了本發(fā)明的方法,該方法進(jìn)一步包括產(chǎn)生包括苯丙烷、羥 基苯甲醛、香草素和/或香草醛生物合成的中間體的芳香族化合物的譜系。
[0086] 根據(jù)本發(fā)明,進(jìn)一步提供了產(chǎn)生一種芳香族化合物文庫的方法,該芳香族化合物 文庫包括苯丙烷、羥基苯甲醛、香草素和/或其羥醛前體和/或香草醛生物合成的中間體, 該方法包括
[0087]-提供本發(fā)明的一種文庫,具體地是一種克隆的文庫和/或一種芳香族化合物的 文庫,
[0088]-在初始前體化合物或一種或多種中間體前體化合物存在的情況下,培養(yǎng)所述文 庫以產(chǎn)生作為代謝物的多種芳香族化合物。
[0089] 根據(jù)本發(fā)明,進(jìn)一步提供了一種芳香族化合物文庫,該芳香族化合物文庫包括多 種通過本發(fā)明的方法可獲得的代謝物,其中至少一種代謝物是人工的代謝物或非天然發(fā)生 的代謝物。
[0090] 根據(jù)本發(fā)明,進(jìn)一步提供了本發(fā)明的細(xì)胞用于代謝物的異源生物合成的用途。具 體地,該產(chǎn)物是香草素或其羥基苯甲醛前體,優(yōu)選地
[0091] -其中所述香草素選自下組,該組由以下各項(xiàng)組成:香草醛、香草酸、乙基-香草 醛、香草醇和香草醛-糖苷;和/或
[0092] -其中所述羥基苯甲醛前體選自下組,該組由以下各項(xiàng)組成:原兒茶醛、原兒茶 酸、兒茶醇、4-羥醛、4-羥基苯甲酸、4-羥基芐醇和咖啡酸。
[0093] 根據(jù)本發(fā)明,進(jìn)一步提供了一種通過利用參與苯丙烷代謝途徑和香草素或其羥基 苯甲醛前體的生物合成的多酶復(fù)合體轉(zhuǎn)化一種前體化合物進(jìn)行的香草素或其羥基苯甲醛 前體的異源生物合成的方法,該多酶復(fù)合體包括用于香豆酸和巴豆酸酶的生物合成的酶, 優(yōu)選地使用香豆酸作為前體用于香草醛的生物合成的至少所有酶,該方法包括
[0094] -提供一種本發(fā)明的細(xì)胞;
[0095] -在該前體化合物存在的情況下,在細(xì)胞培養(yǎng)物中培養(yǎng)所述細(xì)胞;
[0096] -累積生物合成的產(chǎn)物;并且
[0097] -從該細(xì)胞培養(yǎng)基分離所述產(chǎn)物。
[0098] 具體地,該多酶復(fù)合體包括
[0099] a)PAL、C4H、CPR、輔酶A連接酶、巴豆酸酶、3-單加氧酶和甲基轉(zhuǎn)移酶;或者
[0100] b)TAL、輔酶A連接酶、巴豆酸酶、3-單加氧酶和甲基轉(zhuǎn)移酶;或者
[0101] C)PAL/TAL、C4H、CPR、輔酶A連接酶、巴豆酸酶、3-單加氧酶和甲基轉(zhuǎn)移酶。
[0102] 具體地,本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種如在此所定義的分離的多酶復(fù)合體,特別是一 種包括以下項(xiàng)的多酶復(fù)合體
[0103] a)PAL、C4H、CPR、輔酶A連接酶、巴豆酸酶、3-單加氧酶和甲基轉(zhuǎn)移酶;或者
[0104] b)TAL、輔酶A連接酶、巴豆酸酶、3-單加氧酶和甲基轉(zhuǎn)移酶;或者
[0105] c)PAL/TAL、C4H、CPR、輔酶A連接酶、巴豆酸酶、3-單加氧酶和甲基轉(zhuǎn)移酶。
[0106] 具體地,所述前體化合物是一種天然氨基酸,諸如苯丙氨酸、酪氨酸或色氨酸,優(yōu) 選苯丙氨酸或酪氨酸。
[0107] 具體地,所述前體化合物是單糖,優(yōu)選地選自下組,該組由以下各項(xiàng)組成:葡萄糖、 半乳糖或阿拉伯糖。
[0108] 具體地,所述產(chǎn)物是一種
[0109] -香草素,選自下組,該組由以下各項(xiàng)組成:香草醛、香草酸、乙基-香草醛、香草醇 和香草醛-糖苷;或者
[0110] -羥基苯甲醛前體,選自下組,該組由以下各項(xiàng)組成:原兒茶醛、原兒茶酸、兒茶 醇、4-羥醛、4-羥基苯甲酸、4-羥基芐醇、肉桂酸、香豆酸、咖啡酸和阿魏酸。
[0111] 根據(jù)一個(gè)具體方面,所述產(chǎn)物是香草醛或香草醛的一種前體,優(yōu)選地通過生物合 成(諸如通過體內(nèi)反應(yīng))或化學(xué)反應(yīng)(諸如通過體外反應(yīng))的酶
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