一種清除管路殘留蛋白的生物洗滌劑的制備和使用方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種可有效清除管路殘存蛋白質(zhì)的生物洗滌劑制備及其使用方法，主要內(nèi)容為，在pH2～3、溫度30℃～40℃的鹽酸溶液中加入胃蛋白酶，配置成生物洗滌劑，此時(shí)胃蛋白酶的催化活性最大，即水解蛋白質(zhì)的能力最強(qiáng)。本發(fā)明步驟簡(jiǎn)單，使用快捷、方便，易于日常工作；且能快速、安全地清除試劑過(guò)濾裝置燒結(jié)濾頭分子篩微孔中和生物設(shè)備管路中殘留的蛋白質(zhì)成分。
【專利說(shuō)明】一種清除管路殘留蛋白的生物洗滌劑的制備和使用方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種清除管路殘留蛋白的生物洗滌劑的制備和使用方法?！颈尘凹夹g(shù)】
[0002]在生物醫(yī)學(xué)、化學(xué)、藥劑學(xué)等領(lǐng)域的工作中，溶劑過(guò)濾裝置和生物樣本測(cè)量設(shè)備是使用頻率較高的儀器設(shè)備之一。溶劑過(guò)濾裝置主要應(yīng)用于溶劑分離、液體純化、過(guò)濾等操作中；生物樣本測(cè)量設(shè)備主要應(yīng)用于生物樣本、生物制劑的測(cè)量，他們的共同特點(diǎn)是都會(huì)接觸生物樣本。眾所周知，生物樣本中含有大量的蛋白質(zhì)成分，蛋白質(zhì)具有一定的空間結(jié)構(gòu)有較強(qiáng)的吸附性，容易附著在試劑過(guò)濾裝置燒結(jié)濾頭不規(guī)則微孔內(nèi)或生物設(shè)備管路的內(nèi)壁上，并且堵塞孔徑的蛋白質(zhì)不易被去除。如果這些設(shè)備在使用后不能迅速清除殘存的蛋白質(zhì)，在日積月累的使用過(guò)程中就會(huì)越積越多，而且還會(huì)滋生各類細(xì)菌。輕者會(huì)降低溶劑過(guò)濾裝置的使用效率、使生物樣本測(cè)量設(shè)備吸液/放液不順暢，嚴(yán)重時(shí)會(huì)堵塞燒結(jié)濾頭的微孔使之無(wú)法正常使用、使生物樣本測(cè)量設(shè)備測(cè)量結(jié)果不準(zhǔn)確。因此，制備一種能有效清除蛋白質(zhì)的生物洗滌劑對(duì)保證溶劑過(guò)濾裝置和生物樣本測(cè)量設(shè)備是十分必要的。
[0003]目前，去除溶劑過(guò)濾裝置管路殘存蛋白質(zhì)的方法有很多，如:“一種醫(yī)療器械用生物酶清洗劑及其制備方法”的專利公開了一種采用配制5種不同的生物酶清洗劑來(lái)清洗醫(yī)療器械的技術(shù)方案，其配方較復(fù)雜，使用步驟較繁瑣，不適于日常工作。其他去除蛋白質(zhì)的方法也有各種缺陷:比如應(yīng)用活性炭吸附的原理去除蛋白質(zhì)的方法不適用于溶劑過(guò)濾裝置微孔和生物設(shè)備管路的清洗；利用弱酸清洗法去除蛋白質(zhì)的效果不明顯；利用弱堿清晰、超聲波清洗等方法會(huì)對(duì)儀器設(shè)備的一些重要部件造成物理或化學(xué)損傷等。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種可有效清除微孔、管路殘存蛋白質(zhì)的生物洗滌劑制備方法及其使用方法。
[0005]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下:一種可有效清除管路殘存蛋白質(zhì)的生物洗滌劑，通過(guò)以下步驟制得:
[0006]步驟1.秤去一定量的去離子水，在30°C~40°C恒溫環(huán)境下孵育30分鐘；
[0007]步驟2.往經(jīng)步驟I處理后的去離子水中加入濃度為重量百分比為36%~38%的濃鹽酸溶液，配制成0.01mol/L的鹽酸溶液；
[0008]步驟3.將步驟2制得的0.01mol/L的鹽酸溶液攪拌3分鐘后，放入30°C~40°C恒溫環(huán)境下孵育待用；
[0009]步驟4.向步驟3制得的0.01mol/L的鹽酸溶液中加入胃蛋白酶試劑并攪拌5~6分鐘，使溶液中胃蛋白酶的催化活性濃度達(dá)到800-1500U/L ；
[0010]步驟5.將步驟4制得的生物洗滌劑放入30°C~40°C恒溫環(huán)境下孵育，并在3小時(shí)內(nèi)使用。[0011]所述步驟1、步驟3和步驟5中的孵育溫度優(yōu)選為36°C。
[0012]所述步驟4中加入的胃蛋白酶試劑酶活力大于1200.0U/g。
[0013]所述步驟4制得溶液中胃蛋白酶的催化活性濃度優(yōu)選為1000U/L。
[0014]一種使用上述生物洗滌劑去除燒結(jié)濾頭分子篩微孔中蛋白質(zhì)的方法，包括以下步驟:
[0015]步驟I，將燒結(jié)濾頭完全浸入盛有生物洗滌劑的燒杯中，將燒杯放入35°C~37 °C恒溫水浴箱中孵育I~2小時(shí)；
[0016]步驟2，取出燒結(jié)濾頭用自來(lái)水沖洗3~4次，用去離子水浸泡I~2小時(shí)后，再用去尚子水沖洗6~8次晾干待用。
[0017]一種使用上述生物洗滌劑去除生物樣本測(cè)量設(shè)備管路中蛋白質(zhì)的方法，包括以下步驟:
[0018]步驟I，把預(yù)熱到30°C~40°C的生物洗滌劑灌注到管路中，浸泡0.5小時(shí)~I小時(shí)；
[0019]步驟2，將管路中的生物洗滌劑排空，用去離子水沖洗管路6~8次。
[0020]本發(fā)明具有以下有益效果:(1)能快速、安全地清除試劑過(guò)濾裝置燒結(jié)濾頭分子篩微孔中和生物設(shè)備管路中殘留的蛋白質(zhì)成分；(2)清除蛋白質(zhì)效果明顯；(3)對(duì)玻璃材質(zhì)的燒結(jié)濾頭無(wú)腐蝕性，不會(huì)影響到生物設(shè)備管路的完整性；(4)使用快捷、方便，易于日常工作；(5)可生物降解，屬于環(huán)保生態(tài)型清洗液，稀釋后可直接排入污水中。
【具體實(shí)施方式】
[0021]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。
[0022]胃蛋白酶是一種非限制性水解酶，其主要功能是水解各種生物大分子蛋白質(zhì)中的肽鍵，使之生成各種小分子的游離肽甚至氨基酸殘基，這些蛋白殘基不易再次凝結(jié)、聚合形成蛋白附著物附著在管壁、微孔壁堵塞管路、微孔通路。胃蛋白酶等生物酶制劑在不同的溫度、pH條件下催化活性不同，適宜的pH、溫度會(huì)增加酶的活性。在pH2~3、溫度30°C~45°C時(shí)胃蛋白酶的催化活性最大，即水解蛋白質(zhì)的能力最強(qiáng)。另一方面，蛋白質(zhì)本身具有兩性電離特點(diǎn)，由于各類生物蛋白具有不同的等電點(diǎn)(pH多為5.0左右)，加入強(qiáng)酸時(shí)，蛋白質(zhì)的解離會(huì)發(fā)生改變，以離子形式存在的蛋白質(zhì)增加，在胃蛋白酶等水解酶作用下，這類蛋白質(zhì)被水解的速度和量會(huì)明顯增加，使胃蛋白酶溶解管壁、微孔壁殘存蛋白的效果明顯增強(qiáng)。
[0023]易于以上原理，一種可有效清除管路殘存蛋白質(zhì)的生物洗滌劑，通過(guò)以下步驟制得:
[0024]步驟1.在試劑瓶中加入約600ml去離子水后放入已加熱到36°C的501型超級(jí)恒溫器內(nèi)孵育30分鐘；
[0025]步驟2.在1000ml的燒杯內(nèi)加入0.5ml濃度為36%~38%的濃鹽酸試劑，用A級(jí)容量瓶準(zhǔn)確量取500ml已孵育好的去離子水輕輕貼壁倒入燒杯中，配制成0.01mol/L的鹽酸溶液；
[0026]步驟3.加入攪拌轉(zhuǎn)子在81-2型恒溫磁力攪拌器上混勻3分鐘，放入已加熱到36°C的501型超級(jí)恒溫器中孵育待用；
[0027]步驟4.用賽多利斯天平精確稱量酶活力大于1200.0U/g的胃蛋白酶試劑4.5g~5.5g，溶解在預(yù)溫至30°C~40°C的500mL 0.01mol/L的鹽酸溶液中，加入攪拌轉(zhuǎn)子在81_2型恒溫磁力攪拌器上混勻5~6分鐘；
[0028]步驟5.將步驟4制得的生物洗滌劑放入已加熱到36°C的501型超級(jí)恒溫器中，3小時(shí)內(nèi)使用。[0029]通過(guò)上述步驟制得的生物洗滌劑，去除燒結(jié)濾頭分子篩微孔中蛋白質(zhì)的方法，包括以下步驟:
[0030]步驟1，將燒結(jié)濾頭完全浸入盛有生物洗滌劑的燒杯中，將燒杯放入35°C~37°C恒溫水浴箱中孵育I~2小時(shí)；
[0031]步驟2，取出燒結(jié)濾頭用自來(lái)水沖洗3~4次，用去離子水浸泡I~2小時(shí)后，再用去尚子水沖洗6~8次晾干待用。
[0032]通過(guò)上述步驟制得的生物洗滌劑，去除燒結(jié)濾頭分子篩微孔中蛋白質(zhì)的方法，包括以下步驟:
[0033]一種使用上述生物洗滌劑去除生物樣本測(cè)量設(shè)備管路中蛋白質(zhì)的方法，包括以下步驟:
[0034]步驟I，把預(yù)熱到30°C~40°C的生物洗滌劑灌注到管路中，浸泡0.5小時(shí)~I小時(shí)；
[0035]步驟2，將管路中的生物洗滌劑排空，用去離子水沖洗管路6~8次。
[0036]通過(guò)以上步驟制備的生物洗滌劑并按提出的清洗方法清洗過(guò)濾100ml混合血清使用的試劑過(guò)濾裝置的燒結(jié)濾頭分子篩微孔中殘存的蛋白質(zhì)后，采用瓦里安CarylOO紫外/可見分光光度計(jì)在(200nm~800nm)波長(zhǎng)范圍內(nèi)分別測(cè)量清洗前后生物洗滌劑的吸收峰后，在不同波長(zhǎng)下(280nm，260nm, 275nm)依次測(cè)量生物洗滌劑浸泡前后的吸光度值并計(jì)算差值，通過(guò)公式“蛋白質(zhì)濃度(g/L) =1.45*A280-0.74*A26Q”計(jì)算出生物洗滌劑清除的分子篩微孔中的蛋白質(zhì)含量(g/L)。
[0037]為了與酸性洗液等一般清洗方式的清洗效果進(jìn)行比較，同時(shí)采用酸溶液進(jìn)行相同的處理和數(shù)據(jù)分析。將兩種清洗方法的相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行比較如下(見表1 )，通過(guò)清洗燒結(jié)濾頭前后的生物洗滌劑吸光度測(cè)量結(jié)果和清洗燒結(jié)濾頭前后的酸溶液吸光度測(cè)量結(jié)果，依據(jù)公式蛋白質(zhì)濃度(g/L) =1.45*A28(1-0.74*A26(i可計(jì)算出蛋白質(zhì)含量(g/L)。
[0038]表1
[0039]
結(jié)果 280nm 260nm 275nm 項(xiàng) 11___
清洗燒結(jié)清洗前吸光度0.77760.69760.8158
濾頭的生清洗后吸光度0.83440.74890.8743
物洗洚劑清洗后吸光度-清 0.0568__0.0513__0.0585
[0040]
【權(quán)利要求】
1.一種可有效清除管路殘存蛋白質(zhì)的生物洗滌劑，通過(guò)以下步驟制得: 步驟1.秤去一定量的去離子水，在30°c~40°C恒溫環(huán)境下孵育30分鐘； 步驟2.往經(jīng)步驟I處理后的去離子水中加入濃度為重量百分比為36%~38%的濃鹽酸溶液，配制成0.01mol/L的鹽酸溶液； 步驟3.將步驟2制得的0.01mol/L的鹽酸溶液攪拌3分鐘后，放入30°C~40°C恒溫環(huán)境下孵育待用； 步驟4.向步驟3制得的0.01mol/L的鹽酸溶液中加入胃蛋白酶試劑并攪拌5~6分鐘，使溶液中胃蛋白酶的催化活性濃度達(dá)到800-1500U/L ； 步驟5.將步驟4制得的生物洗滌劑放入30°C~40°C恒溫環(huán)境下孵育，并在3小時(shí)內(nèi)使用。
2.如權(quán)利要求1所述的一種可有效清除管路殘存蛋白質(zhì)的生物洗滌劑，其特征在于步驟1、步驟3和步驟5中的孵育溫度為36°C。
3.如權(quán)利要求1所述的一種可有效清除管路殘存蛋白質(zhì)的生物洗滌劑，其特征在于步驟4中加入的胃蛋白酶試劑酶活力大于1200.0U/g。
4.如權(quán)利要求1所述的一種可有效清除管路殘存蛋白質(zhì)的生物洗滌劑，其特征在于步驟4制得溶液中胃蛋白酶的催化活性濃度優(yōu)選為1000U/L。
5.一種使用權(quán)力要求I制備的生物洗滌劑去除燒結(jié)濾頭分子篩微孔中蛋白質(zhì)的方法，包括以下步驟: 步驟1，將燒結(jié)濾頭完全浸入盛有生物洗滌劑的燒杯中，將燒杯放入35°C~37°C恒溫水浴箱中孵育I~2小時(shí)； 步驟2，取出燒結(jié)濾頭用自來(lái)水沖洗3~4次，用去離子水浸泡I~2小時(shí)后，再用去離子水沖洗6~8次晾干待用。
6.一種使用權(quán)力要求I制備的生物洗滌劑去除生物樣本測(cè)量設(shè)備管路中蛋白質(zhì)的方法，包括以下步驟: 步驟I，把預(yù)熱到30°C~40°C的生物洗滌劑灌注到管路中，浸泡0.5小時(shí)~I小； 步驟2，將管路中的生物洗滌劑排空，用去離子水沖洗管路6~8次。
【文檔編號(hào)】C11D7/42GK103540451SQ201210245617
【公開日】2014年1月29日 申請(qǐng)日期:2012年7月16日 優(yōu)先權(quán)日:2012年7月16日
【發(fā)明者】陳寶榮, 胡濱, 邵燕, 孫慧穎, 李月玲, 陳琦 申請(qǐng)人:北京航天總醫(yī)院