本發(fā)明涉及用作CCK2/胃泌素受體拮抗劑的新的苯并二氮雜*衍生物，它們的制備和它們在治療或預(yù)防與CCK2/胃泌素受體相關(guān)的疾病，由高胃泌素血癥引起或相關(guān)的疾病以及與胃酸相關(guān)疾病中的用途。技術(shù)背景胃泌素是由單個基因產(chǎn)生的肽激素并由前體肽前胃泌素合成，其通過順序酶切加工成各種大小的前胃泌素和胃泌素肽段。胃泌素有三種主要形式：胃泌素34(G34或“大胃泌素”)，胃泌素17(G17或“小胃泌素”)和胃泌素14(G14或“迷你胃泌素”)。所有胃泌素具有C-末端酰胺化的四肽(Trp-Met-Asp-Phe-NH2)，其在胃和中樞及外周神經(jīng)系統(tǒng)中作用于特異性G蛋白偶聯(lián)胃泌素受體(也稱為CCK2受體；以前稱為CCKB受體)。胃泌素在結(jié)構(gòu)和功能上與另一種肽激素，膽囊收縮素(CCK)相關(guān)，其也由單個基因產(chǎn)生并通過順序酶切加工成幾種分子形式。CCK在血液和組織中的主要形式是CCK-58,CCK-33和CCK-8。所有片段在其羧基末端具有八肽Asp-Tyr(SO3H)-Met-Gly-Trp-Met-Asp-Phe-NH2，其刺激胰腺腺泡細(xì)胞、膽囊平滑肌、小腸中的迷走神經(jīng)傳入神經(jīng)元以及中樞神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞上的特異性G蛋白偶聯(lián)的CCK1受體。C-末端四肽(Trp-Met-Asp-Phe-NH2)與胃泌素相同。結(jié)果是CCK具有弱的胃泌素樣活性，胃泌素具有弱的CCK樣活性。因為CCK的抗體可能與胃泌素交叉反應(yīng)，常見的C末端四肽阻礙了對CCK1或CCK2受體的選擇性拮抗劑的研發(fā)，并且使CCK的分析混亂。胃泌素通過涉及激活胃泌素(CCK2)受體的機(jī)制刺激胃酸分泌。胃泌素還引起胃上皮細(xì)胞的增殖、遷移和分化，并上調(diào)各種基因，如嗜鉻粒蛋白A(CgA)、組氨酸脫羧酶(HDC)、囊泡單胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2(VMAT2)、基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)、蛋白Reg1A，并刺激旁分泌級聯(lián)(cascade)，包括細(xì)胞因子、生長因子如三葉因子和前列腺素。胃酸分泌通過至少三種信號傳導(dǎo)途徑由內(nèi)分泌，旁分泌和神經(jīng)分泌機(jī)制調(diào)節(jié)：胃泌素-組胺(興奮)，CCK1/生長抑素(抑制)和神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)(興奮和抑制)。根據(jù)情況，抑制或主導(dǎo)不同的途徑。在以下情況下循環(huán)胃泌素增加：由于自身免疫性慢性萎縮性胃炎(CAG)或幽門螺桿菌誘導(dǎo)的胃炎引起的胃酸減少；卓-艾綜合征(ZES)患者胃泌素瘤；和通過組胺H2-受體拮抗劑、質(zhì)子泵抑制劑(PPIs)、鉀競爭性酸抑制劑或迷走神經(jīng)切斷術(shù)的酸抑制。CAG高胃泌素血癥導(dǎo)致ECL細(xì)胞增生，并且導(dǎo)致在一些患者中胃類癌(1型神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤)的發(fā)展，其大多是良性的但可以變成惡性。表現(xiàn)為惡性貧血(萎縮性胃炎可能的臨床表現(xiàn)之一)的患者患上胃癌的風(fēng)險增加了近7倍。ZES高胃泌素血癥導(dǎo)致胃酸過多、消化性潰瘍和胃類癌(2型神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤)，其惡性的可能性更大，特別是在具有多發(fā)性內(nèi)分泌腫瘤1型基因的患者中。幽門螺旋桿菌感染是消化性潰瘍病和胃癌的主要危險因素。PPI誘導(dǎo)的高胃泌素血癥導(dǎo)致：腸嗜鉻細(xì)胞樣(ECL)細(xì)胞增生；壁細(xì)胞增生；胃底腺息肉；骨丟失，骨質(zhì)量受損和骨折；和在某些患者中可能的惡性ECL細(xì)胞腫瘤。PPI戒斷導(dǎo)致反彈性過酸，并導(dǎo)致一些人消化不良。胃泌素受體也在胰腺癌，結(jié)腸癌，甲狀腺髓樣癌和巴雷特食管細(xì)胞上表達(dá)。PPI誘導(dǎo)的高胃泌素血癥與巴雷特氏食管的晚期瘤形成有關(guān)。因此，存在各種潛在的胃泌素/CCK2受體拮抗劑的臨床適應(yīng)癥。已知的1,4-苯并二氮雜-衍生的CCK2受體拮抗劑是L-365,260，其具有對CCK2受體的納摩爾親和力，并且相對于CCK1受體的合理的選擇性(140倍)。然而，口服L-365,260在健康男性中僅產(chǎn)生適度且短暫持續(xù)的抑制胃泌素-刺激的酸分泌，并且在限制患者的驚恐發(fā)作中是無效的，該結(jié)果是由于L-365,260的水溶性低，且口服生物利用度差(Murphy等ClinPharmacolTher1993；54:533–39以及Kramer等BiolPsychiatry1995；37:462–466)。另一種已知的基于1,4-苯并二氮雜的CCK2受體拮抗劑是YM022。YM022顯示對大鼠腦CCK2受體的亞納摩爾的親和力，這比YM022顯示的對大鼠胰腺CCK1受體的亞納摩爾親和力高兩個數(shù)量級。然而，YM022的水溶性低，并且必須配制成固體分散體以實現(xiàn)足夠的口服生物利用度(Yano等ChemPharmBull(東京)1996；44:2309–2313)。隨后，開發(fā)了YF476，其具有與YM022相似的對CCK2受體的結(jié)合親和力，但對CCK2受體的選擇性比對CCK1受體的選擇性高5倍(Semple等JMedChem1997；40:331–341)。作為CCK2受體拮抗劑的苯并二氮雜衍生物的實施例還在美國專利4,820,834和歐洲專利0628033B1和歐洲專利1342719B1中給出。盡管三十年來制藥公司付出了相當(dāng)大的努力，但是沒有CCK2/胃泌素受體拮抗劑被開發(fā)成藥物，主要是由于效力、CCK1和CCK2受體之間的選擇性、激動劑活性、溶解性和口服生物利用度的問題。因此，仍然需要有效的CCK2/胃泌素受體拮抗劑，其可以成功地用于藥物組合物中，以在藥代動力學(xué)方面提供有益的性質(zhì)、改善生物利用度、避免需要與食物一起給藥以及盡可能減少制劑所需加工步驟等。已經(jīng)確定，當(dāng)YF476以結(jié)晶形式向健康受試者給藥時，YF476的血清濃度極低并且非常易變。可以通過制備和給予無定形YF476的制劑來改善生物利用度，但是這需要穩(wěn)定化，例如通過噴霧干燥來以羥丙基甲基纖維素的固體分散體的形式。即使使用這種處理，YF476的生物利用度仍然很低。因為在健康受試者中食物使YF476的生物利用度增加1.6倍，所以在患者研究中與食物一起給藥。然而，宜提供不需要與食物一起給藥的CCK2/胃泌素受體拮抗劑。本發(fā)明人現(xiàn)在確定了一類化合物，其表現(xiàn)出有利于成功用作CCK2/胃泌素受體拮抗劑的性質(zhì)，并且如果以藥物組合物的形式向患者給藥，則解決了先前妨礙CCK2/胃泌素受體拮抗劑成功開發(fā)為藥物的問題。技術(shù)實現(xiàn)要素：在第一方面，本發(fā)明提供了一種藥物組合物，其包含式(A)的化合物或者藥學(xué)上可接受的鹽、酯、硫酯、酯或硫酯的鹽或其前藥：其中，R1和R2各自獨(dú)立地為H，C1–3脂族基團(tuán)，鹵素或C1–3鹵代脂族基團(tuán)，或其中R1和R2與與它們鍵合的間隔碳原子一起形成C3–6碳環(huán)部分；L是鍵或C1–3亞烷基；R3是-OR6或-SR6；W和X獨(dú)立地是氫，鹵素，C1–8烷基或C1–8烷氧基；R4和R5均獨(dú)立地是單環(huán)芳基或雜芳基，其任選被一個或多個獨(dú)立地選自下組的基團(tuán)取代：鹵素、羥基、氨基、硝基、羧基、甲酰胺基、氰基、-SO3H，和任選取代的C1–8烷基，C1–8烷氧基，C1–8烷基氨基或二(C1–8烷基)氨基；和R6是氫或烷基(優(yōu)選甲基)；和任選的一種或多種藥學(xué)上可接受的賦形劑。在一些實施方式中，R4和R5中的至少一個是未取代的或取代的苯基或吡啶基。R4和R5中的至少一個可以是未取代的、單取代，或二取代的苯基，或未取代的、單取代、或二取代的2-，3-或4-吡啶基。R4和R5可以獨(dú)立地選自未取代或取代的苯基或吡啶基。其中R4和/或R5被任選取代的C1–8烷基、C1–8烷氧基、C1–8烷基氨基或二(C1–8烷基)氨基取代，所述C1–8烷基、C1–8烷氧基、C1–8烷基氨基或二(C1–8烷基)氨基上的任選取代基包括任何如本文所述的用于脂族基團(tuán)上的取代基的取代基，例如鹵素、-NO2、-CN、氨基、C1–8烷基氨基、二(C1–8烷基)氨基、-S(O)H或-CO2H。在一些實施方式中，R5是具有間位取代基的苯基，所述間位取代基選自：NHMe、NMeEt、NEt2、F、Cl、Br、OH、OCH3、NH2、NMe2、NO2、Me、(CH2)n-CO2H、CN、CH2NMe2、NHCHO和(CH2)n-SO3H，其中n為0-2；未取代的苯基或任選地具有選自F、Cl、CH3和CO2H的取代基的2-，3-或4-吡啶基；和R4是2-、3-或4-吡啶基或苯基。在任何上述實施方式中，W和X可以獨(dú)立地為H、鹵素、C1–3烷基或C1–3烷氧基。優(yōu)選地，W和X都是H。式(A)的化合物可以是式(B)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、硫酯、酯或硫酯的鹽，或其前藥：其中，R1，R2，L，R3和R6如式(A)所定義。在式(A)或(B)的任何上述實施方式中，R1和R2與與它們鍵合的間隔碳原子一起形成碳環(huán)部分，所述碳環(huán)部分可以是C3–4碳環(huán)部分。在式(A)或者式(B)的任何上述實施方式中，R1和R2可各自獨(dú)立地為H或C1–2烷基，L可為鍵或C1–3亞烷基，R3可為-OH或-SH。在一些實施方式中，R1和R2可各自獨(dú)立地為H或C1–2烷基，L可為C1亞烷基(-CH2-)，且R3可為-OH或-SH。在式(A)或(B)的任何上述實施方式中，R1和R2可各自獨(dú)立地為C1–2烷基，L可為C1–3亞烷基且R3可為-OH。在一些實施方式中，R1和R2可各自獨(dú)立地為C1–2烷基，L可為C1亞烷基(-CH2-)且R3可為-OH。式(A)和(B)的化合物包含在以下標(biāo)記*的位置的手性中心：并且可以以對映異構(gòu)體的形式存在：化合物可以以對映異構(gòu)體的外消旋混合物、對映異構(gòu)體的非外消旋混合物提供，或以光學(xué)純形式的單一對映異構(gòu)體(例如標(biāo)*的R-對映異構(gòu)體)提供。式(A)或(B)的化合物可以是，例如，選自以下的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽，酯，硫酯，酯或硫酯的鹽或其前藥：在一些實施方式中，所述化合物可以選自是以下化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、硫酯、酯或硫酯的鹽或其前藥：在優(yōu)選的實施方式中，式(A)或(B)的化合物是化合物(TR)或其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、酯的鹽或其前藥：化合物(TR)含有手性中心，因此以兩種對映異構(gòu)體存在，記為(TR2)(R-對映異構(gòu)體)和(TR3)(S-對映異構(gòu)體)。在本發(fā)明的組合物中，TR可以以對映異構(gòu)體(TR2)和(TR3)的外消旋混合物，對映異構(gòu)體(TR2)和(TR3)的非外消旋混合物提供或以光學(xué)純形式的單一對映異構(gòu)體(TR2或TR3)提供。(TR2)和(TR3)的外消旋混合物在本文中記為“(TR1)”。在一些實施方式中，所述組合物包含本文所述任何實施方式的式(A)、(B)或(TR)化合物的酯或硫酯、或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中R3是-OH或-SH，并且R3的H被-C(O)R替代，其中R是任選取代的脂族、雜脂族、芳族或雜芳族部分。因此，所述組合物可包含式(A)或(B)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中R3為-OR6、-SR6、-OC(O)R7或–SC(O)R7，R6是氫或烷基(優(yōu)選甲基)，并且R7是任選取代的脂族、雜脂族、芳族或雜芳族部分。例如，組合物可以包含式(C)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽：其中，R1，R2，L，W，X，R4，R5如在本文任何實施方式中對式(A)，(B)或(TR)化合物所定義；Y是-O-或-S-；和R7是任選取代的脂族、雜脂族、芳族或雜芳族部分。式(C)的化合物可以是式(D)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽：其中R1，R2，L，Y和R7如上所定義。在一些實施方式中，R7是任選取代的脂族部分，例如R7是取代或未取代的C1–6脂族基團(tuán)，優(yōu)選取代或未取代的C1–3脂族基團(tuán)，更優(yōu)選甲基。在一些實施方式中，Y是–O–。式(C)或(D)的化合物可以是下式化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽：在優(yōu)選的實施方式中，式(C)或(D)的化合物是化合物(TR-A)或其藥學(xué)上可接受的鹽：化合物(TR-A)可以以對映異構(gòu)體(TR2-A)(R-對映異構(gòu)體)和(TR3-A)(S-對映異構(gòu)體)的外消旋混合物(TR1-A)，對映體(TR2-A)和(TR3-A)的非外消旋混合物或以光學(xué)純形式的單一對映異構(gòu)體(TR2-A)或(TR3-A)提供。本發(fā)明所述組合物可以以口服劑型或舌下劑型提供，例如以片劑或者膠囊提供。在其他實施方式中，本發(fā)明所述組合物可以以胃腸外劑型提供，例如以可注射溶液或懸浮液或長效制劑提供。本發(fā)明所述組合物還可以任選地進(jìn)一步包含一種或多種額外的活性劑。額外的活性劑可以是例如組胺H2-受體拮抗劑、PPI、鉀-競爭性酸抑制劑或任何其它胃酸抑制劑。組胺H2-受體拮抗劑可以是例如競爭性組胺H2-受體拮抗劑，例如西咪替丁、法莫替丁、尼扎替丁、羅沙替丁或雷尼替??；或難以超越(insurmountable)的組胺H2-受體拮抗劑，例如洛克替丁(loxtidine)或拉米替啶(lamitidine)。PPI可以是例如艾美拉唑、奧美拉唑、蘭索拉唑、右蘭索拉唑、泮托拉唑、雷貝拉唑或艾普拉唑。鉀-競爭性酸抑制劑可以是例如瑞伐拉贊或TAK-438。在其它實施方式中，額外的活性劑可以是細(xì)胞毒性劑或腫瘤特異性抗體。在其它實施方式中，額外的活性劑可以是止痛劑，例如阿片類物質(zhì)或雙氫可待因。第二方面，本發(fā)明提供了式(C)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽:其中R1和R2各自獨(dú)立地為H、C1–3脂族基團(tuán)、鹵素或C1–3鹵代脂族基團(tuán)，或其中R1和R2與與它們鍵合的間隔碳原子一起形成C3–6碳環(huán)部分；L是鍵或C1–3亞烷基；Y是–O–或–S–；W和X獨(dú)立地是氫、鹵素、C1–8烷基或C1–8烷氧基；R4和R5均獨(dú)立地是單環(huán)芳基或雜芳基，其任選地被一個或多個獨(dú)立地選自以下基團(tuán)的取代基取代：鹵素、羥基、氨基、硝基、羧基、甲酰胺基、氰基、-SO3H、和任選取代的C1–8烷基、C1–8烷氧基、C1–8烷基氨基或二(C1–8烷基)氨基；和R7是任選取代的脂族、雜脂族、芳族或雜芳族部分。在一些實施方式中，R4和R5中的至少一個是未取代的或取代的苯基或吡啶基。R4和R5中的至少一個可以是未取代的、單取代或二取代的苯基，或未取代的、單取代或二取代的2-，3-或4-吡啶基。R4和R5可以獨(dú)立地選自未取代或取代的苯基或吡啶基。如果R4和/或R5被任選取代的C1–8烷基、C1–8烷氧基、C1–8烷基氨基或者二(C1–8烷基)氨基取代，C1–8烷基、C1–8烷氧基、C1–8烷基氨基和二(C1–8烷基)氨基上任選的取代基包括本文所述的在脂族基團(tuán)上的任何取代基，例如，鹵素、–NO2、–CN、氨基、C1–8烷基氨基、二(C1–8烷基)氨基、–S(O)H或–CO2H。在一些實施方式中，R5是具有間位取代基的苯基，所述間位取代基選自NHMe、NMeEt、NEt2、F、Cl、Br、OH、OCH3、NH2、NMe2、NO2、Me、(CH2)n-CO2H、CN、CH2NMe2、NHCHO和(CH2)n-SO3H，其中n是0–2；未取代的苯基或任選地具有選自F、Cl、CH3和CO2H的取代基的2-、3-或4-吡啶基；以及R4是2-、3-或4-吡啶基或苯基。在任意上述實施方式中，W和X可以獨(dú)立地為H、鹵素、C1–3烷基或C1–3烷氧基。優(yōu)選地，W和X均是H。式(C)化合物可以是式(D)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽:其中R1,R2,L,Y和R7如式(C)所定義。在式(C)或(D)的任意上述實施方式中，R1和R2與與它們鍵合的間隔碳原子一起形成碳環(huán)部分，所述碳環(huán)部分可以是C3–4碳環(huán)部分。在式(C)或(D)的任意上述實施方式中，R1和R2可以各自獨(dú)立地為H或C1–2烷基，L可以是鍵或C1-3亞烷基。在一些實施方式中，R1和R2可以各自獨(dú)立地為H或C1–2烷基，L可以是C1亞烷基(-CH2-)。在式(C)或(D)的任意上述實施方式中，R1和R2可以各自獨(dú)立地為C1–2烷基，L可以為C1–3亞烷基以及Y可以為–O–。在一些實施方式中，R1和R2可以各自獨(dú)立地為C1–2烷基，L可以為C1亞烷基(-CH2-)，Y可以為–O–。在式(C)或(D)的任意上述實施方式中，R7可以為任選取代的脂族基團(tuán)，例如R7可以是取代的或未取代的C1–6脂族基團(tuán)，優(yōu)選取代的或未取代的C1–3脂族基團(tuán)，更優(yōu)選甲基。式(C)或(D)化合物可以是例如下式化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽：式(C)或(D)化合物可以是式(E)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽：其中R8選自下組：其中R7如以上式(C)或(D)的任意實施方式所定義。在一些實施方式中，式(E)化合物可以是式(F)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽：優(yōu)選地，R8選自下組：其中R7如以上式(C)或(D)的任意實施方式所定義。在一個優(yōu)選的實施方式中，式(C)或(D)化合物是化合物(TR-A)或其藥學(xué)上可接受的鹽：在一些實施方式中，化合物(TR-A)是(TR2-A)或(TR3-A)。在第三方面，本發(fā)明提供根據(jù)本發(fā)明第一方面任意實施方式的藥物組合物或根據(jù)本發(fā)明第二方面任意實施方式的化合物，用于治療。在第四方面，本發(fā)明提供根據(jù)本發(fā)明第一方面任意實施方式的藥物組合物，或根據(jù)本發(fā)明第二方面任意實施方式的化合物，用于治療或預(yù)防與CCK2/胃泌素受體相關(guān)的疾病、由高胃泌素血癥引起的或相關(guān)的疾病或與胃酸相關(guān)的疾病。在一些實施方式中，本發(fā)明的藥物組合物或化合物可用于治療或預(yù)防與CCK2受體攜帶細(xì)胞相關(guān)的疾病或涉及胃泌素的生理功能喪失或功能障礙的疾病。因此，本發(fā)明的藥物組合物或化合物可用于治療或預(yù)防的疾病的實例包括但不限于任意一種或多種以下疾?。何负褪改c潰瘍，非甾體抗炎藥(NSAID)誘導(dǎo)的胃潰瘍，消化不良，胃食管反流性疾病(GORD)，巴雷特氏(Barrett)食管，ZES，由PPI或其它酸抑制劑誘導(dǎo)的高胃泌素血癥(包括戒斷的效果)和由高胃泌素血癥導(dǎo)致的病癥(例如骨丟失，骨質(zhì)量受損和骨折)，胃炎(包括幽門螺桿菌誘發(fā)的胃炎和自身免疫性慢性萎縮性胃炎的并發(fā)癥，例如胃類癌和ECL細(xì)胞增生)，神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤(不限于胃類癌)，壁細(xì)胞增生，胃基底腺息肉，胃癌，結(jié)腸直腸癌，甲狀腺髓樣癌，胰腺癌和小細(xì)胞肺癌?？商峁┍景l(fā)明的藥物組合物或化合物用于治療包括具有CCK2受體攜帶細(xì)胞的腫瘤(例如，胰腺腫瘤、胃腫瘤、結(jié)腸腫瘤或甲狀腺髓樣瘤，或其他CCK2受體攜帶腫瘤)。還可以提供本發(fā)明的藥物組合物或化合物用于預(yù)防和/或治療由中樞或外周CCK2受體相關(guān)的失去生理功能所引起的疾病，例如焦慮，傷害感受，疼痛，藥物成癮，鎮(zhèn)痛依賴和鎮(zhèn)痛戒斷反應(yīng)。所述藥物組合物或化合物可以與額外的活性劑(如細(xì)胞毒性劑或腫瘤特異性抗體)一起給藥使用?？梢砸詥我坏膭┬徒o藥或以分開的劑型同時、依次或分別給藥。在一些實施方式中，提供本發(fā)明的藥物組合物或化合物通過與組胺H2-受體拮抗劑、PPI、鉀-競爭性酸抑制劑或任何其它胃酸抑制劑一起聯(lián)合給藥用于治療或預(yù)防酸相關(guān)的疾病(例如胃和十二指腸潰瘍、胃炎、NSAID‐誘導(dǎo)的胃潰瘍、GORD、巴雷特氏食管、ZES或消化不良)。可以以單一的劑型給藥或以分開的劑型同時、依次或分別給藥。在一些實施方式中，提供本發(fā)明的藥物組合物或化合物通過與細(xì)胞毒性治療劑或腫瘤特異性抗體一起聯(lián)合給藥來治療胰腺腫瘤、胃腫瘤、結(jié)腸腫瘤或甲狀腺髓樣瘤，或其他CCK2受體攜帶腫瘤?？梢砸詥我坏膭┬徒o藥或以分開的劑型同時、依次或分別給藥。在一些實施方式中，提供本發(fā)明的藥物組合物或化合物通過與止痛劑一起聯(lián)合給藥來治療疼痛。可以以單一的劑型給藥或以分開的劑型同時、依次或分別給藥。在一些實施方式中，提供本發(fā)明的藥物組合物或化合物通過將本發(fā)明的藥物組合物或化合物單獨(dú)給藥或?qū)⒈景l(fā)明的藥物組合物或化合物與PPI、組胺H2-受體拮抗劑、鉀-競爭性酸抑制劑或任何其它胃酸抑制劑一起聯(lián)合給藥來治療或預(yù)防高胃泌素血癥導(dǎo)致的骨疾病(例如骨丟失，骨質(zhì)量受損和骨折)?？梢砸詥我坏膭┬徒o藥或以分開的劑型同時、依次或分別給藥。在第五方面，本發(fā)明提供一種在有需要的對象中治療或預(yù)防與CCK2/胃泌素受體相關(guān)的疾病、由高胃泌素血癥引起的或相關(guān)的疾病或與胃酸相關(guān)的疾病的方法，所述方法包括向所述對象給予治療有效量的根據(jù)本發(fā)明第一方面任意實施方式的藥物組合物，或根據(jù)本發(fā)明第二方面任意實施方式的化合物。這樣的疾病包括與CCK2受體攜帶細(xì)胞相關(guān)的疾病或涉及胃泌素的生理功能喪失或功能障礙的疾病。因此，可以用本發(fā)明的方法治療和/或預(yù)防的疾病包括但不限于以下任意一種或多種疾?。何负褪改c潰瘍、NSAID-誘導(dǎo)的胃潰瘍、消化不良、GORD、巴雷特氏食管、ZES、由PPI或其它酸抑制劑誘導(dǎo)的高胃泌素血癥(包括戒斷的效果)和由高胃泌素血癥引起的病癥(例如骨丟失，骨質(zhì)量受損和骨折)、胃炎(包括幽門螺桿菌誘發(fā)的胃炎和自身免疫性慢性萎縮性胃炎的并發(fā)癥，例如胃類癌和ECL細(xì)胞增生)、神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤(不限于胃類癌)、壁細(xì)胞增生、胃基底腺息肉、胃癌、結(jié)腸直腸癌、甲狀腺髓樣癌、胰腺癌和小細(xì)胞肺癌?？梢杂帽景l(fā)明方法治療的疾病包括具有CCK2受體攜帶細(xì)胞的腫瘤(例如，胰腺腫瘤、胃腫瘤、結(jié)腸腫瘤或甲狀腺髓樣瘤，或其他CCK2受體攜帶腫瘤)?？梢杂帽景l(fā)明方法治療的疾病還包括由中樞或外周CCK2受體控制的生理功能的功能障礙相關(guān)的疾病，例如焦慮、傷害感受、疼痛、藥物成癮、鎮(zhèn)痛依賴和鎮(zhèn)痛戒斷反應(yīng)。相應(yīng)地，在一些實施方式中，本發(fā)明提供一種在有需要的對象中治療或預(yù)防由中樞或外周CCK2受體控制的生理功能的功能障礙相關(guān)的疾病(例如焦慮、傷害感受、疼痛、藥物成癮、鎮(zhèn)痛依賴或鎮(zhèn)痛戒斷反應(yīng))的方法，所述方法包括向所述對象給予治療有效量的根據(jù)本發(fā)明第一方面任意實施方式的藥物組合物，或根據(jù)本發(fā)明第二方面任意實施方式的化合物。在一些實施方式中，本發(fā)明提供一種在有需要的對象中治療或預(yù)防酸相關(guān)的疾病(例如胃和十二指腸潰瘍、胃炎、NSAID-誘導(dǎo)的胃潰瘍、GORD、巴雷特氏食管、ZES或消化不良)的方法，所述方法包括將治療有效量的本發(fā)明的藥物組合物，或根據(jù)本發(fā)明第二方面任意實施方式的化合物與組胺H2-受體拮抗劑、PPI、鉀-競爭性酸抑制劑或任何其它胃酸抑制劑一起聯(lián)合給藥?？梢砸詥我坏膭┬徒o藥或以分開的劑型同時、依次或分別給藥。在一些實施方式中，本發(fā)明提供一種在有需要的對象中治療胰腺腫瘤、胃腫瘤、結(jié)腸腫瘤或甲狀腺髓樣瘤，或其他CCK2受體攜帶腫瘤的方法，所述方法包括將治療有效量的本發(fā)明的藥物組合物或化合物與細(xì)胞毒性治療劑或腫瘤特異性抗體一起聯(lián)合給藥?？梢砸詥我坏膭┬徒o藥或以分開的劑型同時、依次或分別給藥。在一些實施方式中，本發(fā)明提供一種在有需要的對象中治療疼痛的方法，所述方法包括將治療有效量的本發(fā)明的藥物組合物或化合物與止痛劑一起聯(lián)合給藥可以以單一的劑型給藥或以分開的劑型同時、依次或分別給藥。在一些實施方式中，本發(fā)明提供一種在有需要的對象中治療或預(yù)防由高胃泌素血癥導(dǎo)致的骨疾病(例如骨丟失，骨質(zhì)量受損和骨折)的方法，所述方法包括將治療有效量的本發(fā)明的藥物組合物或化合物單獨(dú)給藥或?qū)⒅委熡行Я康谋景l(fā)明的藥物組合物或化合物與PPI、組胺H2-受體拮抗劑、鉀-競爭性酸抑制劑或任何其它胃酸抑制劑一起聯(lián)合給藥?？梢砸詥我坏膭┬徒o藥或以分開的劑型同時、依次或分別給藥。在第六方面，本發(fā)明提供如本發(fā)明第一方面所定義的式(A)或(B)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、硫酯、酯或硫酯的鹽或其前藥在制備用于治療或預(yù)防通過CCK2/胃泌素受體介導(dǎo)的疾病、由高胃泌素血癥引起的或相關(guān)的疾病或與胃酸相關(guān)的疾病的藥物中的用途。在一些實施方式中，所述化合物是本發(fā)明第一和第二方面所定義的式(C)或(D)化合物。優(yōu)選地，式(A)或(B)化合物是化合物(TR)或其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、酯的鹽或其前藥：例如式(TR-A)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽：在第七方面，本發(fā)明提供如本發(fā)明第一方面所定義的用作藥物的式(A)或(B)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、硫酯、酯或硫酯的鹽或其前藥。在一些實施方式中，所述化合物是本發(fā)明第一或第二方面所定義的式(C)或(D)化合物。優(yōu)選地，式(A)或(B)化合物是化合物(TR)或其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、酯的鹽或其前藥，其用作藥物：例如，所述化合物可以是式(TR-A)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽：所述藥物可用于預(yù)防或治療通過CCK2/胃泌素受體介導(dǎo)的疾病、由高胃泌素血癥引起的或相關(guān)的疾病或與胃酸相關(guān)的疾病，如本文所述。在第八方面，本發(fā)明提供如本發(fā)明第一方面所定義的分離的式(A)或(B)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、硫酯、酯或硫酯的鹽或其前藥。優(yōu)選地，所述分離的(A)或(B)化合物是分離的化合物(TR)或其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、酯的鹽或其前藥:在本發(fā)明的任意方面，式(A),(B),(C),(D)或(E)化合物可以對映異構(gòu)體的外消旋混合物、對映異構(gòu)體的非外消旋混合物提供或以光學(xué)純形式的單一對映異構(gòu)體提供。在本發(fā)明的任意方面，(TR)可以對映異構(gòu)體(TR2)和(TR3)的外消旋混合物，對映異構(gòu)體(TR2)和(TR3)的非外消旋混合物提供，或以光學(xué)純形式的單一對映異構(gòu)體(TR2或TR3)提供。在本發(fā)明的任意方面，(TR-A)可以對映異構(gòu)體(TR2-A)和(TR3-A)的外消旋混合物(TR1-A)，對映異構(gòu)體(TR2-A)和(TR3-A)的非外消旋混合物提供，或以光學(xué)純形式的單一對映異構(gòu)體(TR2-A)或(TR3-A)提供。在第九方面，本發(fā)明提供一種用于制備式(A-iii)化合物的方法：所述方法包括將式(A-i)化合物與式(A-ii)化合物偶聯(lián)以形成式(A-iii)化合物；其中R1、R2、L、W和X如本發(fā)明第一和第二方面所定義，R3是-OR6,-SR6,-OC(O)R7或–SC(O)R7，R6是氫或烷基(優(yōu)選甲基)，R7是任選取代的脂族、雜脂族、芳族或雜芳族部分；R4’和R5’獨(dú)立地是單環(huán)芳基或雜芳基，所述單環(huán)芳基或雜芳基任選地被一個或多個獨(dú)立地選自以下基團(tuán)的取代基取代：鹵素、羥基、氨基、硝基、羧基、甲酰胺基、氰基、-SO3H和任選取代的C1–8烷基、C1–8烷氧基、C1–8烷基氨基或二(C1-8烷基)氨基；或其保護(hù)形式。偶聯(lián)可以在有機(jī)非質(zhì)子溶劑的存在下進(jìn)行。所述溶劑可以是例如二氯甲烷、乙腈、丙酮、四氫呋喃、乙酸乙酯、二甲基甲酰胺或二甲亞砜，或它們的混合物。應(yīng)理解，與本發(fā)明第一和第二方面的R4和R5相關(guān)的本發(fā)明所述實施方式已做必要的修改，適用于R4’和R5’。在一些實施方式中，所述方法包括將式(C-i)化合物與式(A-ii)化合物偶聯(lián)以形成式(C-iii)化合物。其中R4’和/或R5’以受保護(hù)的形式提供，所述方法可包括對式(A-iii)或(C-iii)化合物脫保護(hù)的額外步驟，以形成式(A)或(C)化合物：其中，R1和R2各自獨(dú)立地是H、C1–3脂族基團(tuán)、鹵素或C1–3鹵代脂族基團(tuán)，或者R1和R2與與它們鍵合的間隔碳原子一起形成C3–6碳環(huán)部分；L是鍵或C1–3亞烷基；R3是-OR6、-SR6、-OC(O)R7或–SC(O)R7；W和X獨(dú)立地是氫、鹵素、C1–8烷基或C1–8烷氧基；R4和R5獨(dú)立地是單環(huán)芳基或雜芳基，其任選地被一個或多個獨(dú)立地選自以下基團(tuán)的取代基取代：鹵素、羥基、氨基、硝基、羧基、甲酰胺基、氰基、-SO3H、和任選取代的C1–8烷基、C1–8烷氧基、C1–8烷基氨基或二(C1–8烷基)氨基；R6是氫或烷基(優(yōu)選甲基)；以及R7是任選取代的脂族、雜脂族、芳族或雜芳族部分。當(dāng)所述方法形成式(A)化合物，其中R3是-OC(O)R7或–SC(O)R7，或形成式(C)化合物時，所述方法可任選地包括通過暴露于酸或堿將-OC(O)R7或–SC(O)R7轉(zhuǎn)化為–OH或–SH的額外步驟。例如，該步驟可包括暴露于K2CO3的甲醇和水溶液。在一些實施方式中，式(C-i)化合物是式(C-i-2)化合物，其可以與式(A-ii)化合物偶聯(lián)以形成式(C-iii-2)化合物：在一些實施方式中，式(A-i)化合物是式(A-i-a)化合物(例如式(A-i-b)化合物)，優(yōu)選式(A-i-c)化合物：在一些實施方式中，式(C-i)化合物是式(C-i-a)化合物(例如式(C-i-b)化合物)，優(yōu)選式(C-i-c)化合物，更優(yōu)選式(C-i-d)化合物：在一些實施方式中，式(A-ii)化合物是式(A-ii-a)化合物：其中PG是保護(hù)基團(tuán)，優(yōu)選Boc保護(hù)基團(tuán)。將式(C-i-a)或(C-i-d)化合物與式(A-ii-a)化合物偶聯(lián)、接著脫保護(hù)，分別產(chǎn)生式(TR-A)或(TR2-A)的化合物。將式(A-i-a)化合物與式(A-ii-a)化合物偶聯(lián)、接著脫保護(hù)，產(chǎn)生式(TR)化合物。在一些實施方式中，當(dāng)式(C-i)化合物是式(C-i-2)化合物時，所述方法可包括對其對應(yīng)異構(gòu)體混合物(例如外消旋混合物)形式的式(C-i)化合物進(jìn)行手性拆分，以提供式(C-i-2)化合物，其中手性拆分在溶劑中采用手性酸進(jìn)行。在手性拆分中，手性酸可以是例如R-扁桃酸、R-樟腦-10-磺酸、或二苯甲?；鵇-酒石酸，優(yōu)選為R-扁桃酸。所述溶劑可以是例如乙腈、異丙醇或乙酸乙酯，優(yōu)選為乙腈。例如，所述方法可包括拆分外消旋的(C-i-a)以形成(C-i-b)，之后將(C-i-d)與式(A-ii-a)化合物偶聯(lián)以形成式(TR2-A)化合物的步驟。手性拆分可包括通過在溶劑中將式(C-i)化合物暴露于手性酸來形成式(C-i-2)化合物的相應(yīng)手性酸鹽。這之后可以將所述鹽轉(zhuǎn)化為式(C-i-2)的游離堿化合物，例如使用NaHCO3進(jìn)行。應(yīng)理解也可以通過相應(yīng)的手性拆分制備(S)-對映異構(gòu)體。應(yīng)理解式(A-i),(A-iii),(C-i),(C-iii),(A-i-a),(A-i-c),(C-i-a)和(C-i-c)化合物可以對映異構(gòu)體的外消旋混合物、對映異構(gòu)體的非外消旋混合物提供或以光學(xué)純形式的單一對映異構(gòu)體提供。與本發(fā)明第一和第二方面的式(A),(B),(C),(D),(E),(F),(TR)和(TR-A)化合物的R1,R2,R3,L,W,X,R4,R5,R6和R7相關(guān)的本發(fā)明所述實施方式已做必要的修改，適用于本發(fā)明的第九方面。在第十方面，本發(fā)明提供如本發(fā)明第九方面所定義的式(A-i),(C-i)或(C-i-2)的中間體。在一些實施方式中，所述中間體是式(A-i-a),(A-i-b),(A-i-c),(C-i-a),(C-i-b),(C-i-c)或(C-i-d)化合物。在第十一方面，本發(fā)明提供用于制備式(C-i-2)化合物的方法，所述方法包括手性拆分其對映異構(gòu)體混合物(例如外消旋混合物)形式的式(C-i)化合物，所述手性拆分包括在溶劑中將所述式(C-i)化合物暴露于手性酸。在一些實施方式中，所述方法包括手性拆分化合物(C-i-a)以產(chǎn)生化合物(C-i-b)。優(yōu)選地，所述方法包括手性拆分化合物(C-i-c)以產(chǎn)生化合物(C-i-d)。所述手性酸可以是例如R-扁桃酸、R-樟腦-10-磺酸、或二苯甲?；鵇-酒石酸，優(yōu)選為R-扁桃酸。所述溶劑可以是例如乙腈、異丙醇或乙酸乙酯，優(yōu)選為乙腈。手性拆分可包括通過在溶劑中將式(C-i)化合物暴露于手性酸來形成式(C-i-2)化合物的相應(yīng)手性酸鹽。這之后可以將所述鹽轉(zhuǎn)化為式(C-i-2)的游離堿化合物，例如使用NaHCO3進(jìn)行。應(yīng)理解也可以通過相應(yīng)的手性拆分制備(S)-對映異構(gòu)體。附圖說明圖1顯示將(TR2-A)劑量與五肽胃泌素輸注給藥后的H+濃度均值與時間的圖。發(fā)明詳述下面將解釋在本申請的說明書中使用的術(shù)語的含義，并且將詳細(xì)描述本發(fā)明。本文所用的術(shù)語“脂族”是指取代或未取代的直鏈、支鏈或環(huán)狀烴，其是完全飽和的或含有一個或多個非芳族的不飽和單元。脂族基團(tuán)包括取代或未取代的直鏈、支鏈或環(huán)狀烷基、烯基、炔基及其雜化物，例如(環(huán)烷基)烷基、(環(huán)烯基)烷基或(環(huán)烷基)烯基。在各種實施方式中，脂族基團(tuán)具有1至12個、1至8個、1至6個或1至3個碳。例如，C1–3脂族基團(tuán)包括直鏈和支鏈C1–3烷基、烯基和炔基以及環(huán)丙基。術(shù)語“雜脂族”是指其中一個或多個碳原子被雜原子代替的脂族基團(tuán)。術(shù)語“雜原子”是指氮(N)、氧(O)或硫(S)。術(shù)語“亞烷基”是指二價烷基。“亞烷基”是亞甲基或聚亞甲基，即-(CH2)n-，其中n是正整數(shù)。亞烷基可以是取代的或未取代的。取代的亞烷基是其中一個或多個亞甲基氫原子被取代基替代的亞烷基。合適的取代基包括以下對取代的脂族基團(tuán)描述的那些。亞烷基鏈還可以在一個或多個位置被脂族基團(tuán)或取代的脂族基團(tuán)取代。術(shù)語“碳環(huán)部分”是指環(huán)狀脂族基團(tuán)并且包括例如環(huán)烷基部分。術(shù)語“芳基”是指包含一至三個環(huán)的C6–14(優(yōu)選C6–10)芳族烴，其各自是任選取代的。芳基包括但不限于苯基、萘基、和蒽基。在一些實施方式中，芳環(huán)上的兩個相鄰取代基與間隔環(huán)原子一起形成任選取代的稠合的5-至6-元芳族或4-至8-元非芳族環(huán)，其具有0-3個選自N，O和S的環(huán)雜原子。因此，如本文所用的術(shù)語“芳基”包括其中芳環(huán)與一個或多個雜芳族環(huán)、脂環(huán)族環(huán)或雜環(huán)稠合的基團(tuán)，其中連接的基團(tuán)或連接點(diǎn)在芳環(huán)上。術(shù)語“雜芳基”和“雜芳基-”是指具有5至14個環(huán)原子，優(yōu)選5、6、9或10個環(huán)原子并且除了碳原子外還具有一至四個雜原子作為環(huán)原子的芳族基團(tuán)。術(shù)語“雜原子”是指N，O或S。在一些實施方式中，雜芳基上的兩個相鄰取代基與間隔環(huán)原子一起形成任選取代的稠合的5-至6-元芳族環(huán)或4-至8-元具有0-3個選自N，O和S的環(huán)雜原子的非芳環(huán)。因此，本文所用的術(shù)語“雜芳基”和“雜芳基-”還包括其中雜芳環(huán)與一個或多個芳族環(huán)、脂環(huán)族環(huán)或雜環(huán)稠合的基團(tuán)，其中連接的基團(tuán)或連接點(diǎn)在雜芳環(huán)上。本文所用的“鹵素”指的是氟、氯、溴和碘。本文所用的“鹵代脂肪族”是指上述定義的被一個或多個鹵素部分取代的脂族部分。本文所用的“烷氧基”是指-O-烷基部分。烷基如本文所定義，并且因此，可如本文中對脂肪族部分的任選取代基所定義的那樣被任選地取代。本文所用的“甲酰胺基”是指-C(O)NR2部分，其中，每個R獨(dú)立地為H或脂族基團(tuán)，優(yōu)選H。本文所用的“氨基”是指-NH2，“烷基氨基”是指-NH烷基，“二烷基氨基”是指-N(烷基)2，其中每個烷基可以相同或不同。如本文所使用的，術(shù)語“包括”是指“包括但不限于”。本文所用的術(shù)語“取代的”是指特定部分的氫基被指定取代基的基團(tuán)取代，條件是該取代產(chǎn)生穩(wěn)定或化學(xué)上可行的化合物。本文所用的短語“一個或多個取代基”是指取代基數(shù)量等于一個至最大可能的取代基數(shù)量，基于可成鍵位點(diǎn)的數(shù)量。除非另有說明，當(dāng)存在多個取代基時，取代基可以相同或不同。芳基或雜芳基可以任選被取代。在芳基或雜芳基的不飽和碳原子上的合適的取代基包括：鹵素、-NO2、-CN、-R’、-C(R’)＝C(R’)2、-C≡C-R’、-OR’、-SR’、-S(O)R’、-SO2R’、-SO3R’、-SO2N(R’)2、-N(R’)2、-NR’C(O)R’、-NR’C(O)N(R’)2、-NR’CO2R’、-NR’SO2R’、-NR’SO2N(R’)2、-O-C(O)R’、-O-CO2R’、-OC(O)N(R’)、-C(O)R’、-CO2R’、-C(O)N(R’)2、-P(O)(R’)2、-P(O)(OR’)2、-O-P(O)-OR’，其中R'獨(dú)立地為氫或任選取代的脂族、雜脂族、芳族或雜芳族部分，或兩次出現(xiàn)的R'與它們的間隔原子一起形成任選取代的5-7元芳族環(huán)、雜芳族環(huán)、脂環(huán)族環(huán)或雜環(huán)。脂族或雜脂族基團(tuán)(包括碳環(huán)或雜環(huán))可以是“任選取代的”。除非另有定義，任選取代的脂族或雜脂族基團(tuán)的飽和碳上的合適取代基選自上文針對芳基或雜芳基的不飽和碳所列舉的取代基，并且所述合適的取代基還包括以下：＝O、＝S、＝C(R”)2,其中R”是氫或任選取代的C1–6脂族基團(tuán)。除了上述定義的取代基外，非芳族雜環(huán)的氮上的任選取代基還包括并通常選自R’、-N(R’)2、-C(O)R’、-C(O)OR’、-S(O)2R’、-S(O)2N(R’)2，其中每個R'如上所定義。雜芳基或非芳族雜環(huán)的環(huán)氮原子也可以被氧化以形成相應(yīng)的N-羥基或N-氧化物化合物。如本文所用，化合物的“保護(hù)形式”是指其中功能部分被保護(hù)基團(tuán)保護(hù)的化合物。要保護(hù)的官能部分可以是羥基、羧基、氨基或烷基氨基。因此，本文使用的受保護(hù)形式可以包含受保護(hù)的羥基、受保護(hù)的羧基或受保護(hù)的氨基或烷基氨基部分。保護(hù)包括暫時封閉所述部分，使得反應(yīng)可以選擇性地在多官能化合物中的另一個反應(yīng)位點(diǎn)進(jìn)行。受保護(hù)的氨基或烷基氨基可以被選自以下保護(hù)基團(tuán)的保護(hù)基團(tuán)保護(hù)，所述保護(hù)基團(tuán)包括但不限于：氨基甲酸酯(包括氨基甲酸甲酯，氨基甲酸乙酯和取代的氨基甲酸乙酯(例如Troc)，芐氧羰基(Cbz)，叔丁氧羰基(BOC)，9-芴基甲氧基羰基(FMOC)，對甲氧基芐氧基羰基(Moz或MeOZ)，乙?；?Ac)，苯甲?；?Bz)，芐基(Bn)，對甲氧基芐基(PMB)，3,4-二甲氧基芐基(DMPM)，對甲氧基苯基(PMP)，琥珀?；?Suc)，甲氧基琥珀?；?MeOSuc)，甲酰基，氨基甲酸酯保護(hù)基團(tuán)，甲苯磺酰基(Ts)，其它磺酰胺(例如Nosyl和Nps)。例如，在某些實施方式中，如本文所詳述的，使用某些示例性的氧保護(hù)基團(tuán)。受保護(hù)的羥基或羧基可以被選自以下保護(hù)基團(tuán)的氧保護(hù)基保護(hù)，所述保護(hù)基團(tuán)包括但不限于乙?；?Ac)、苯甲?；?Bz)、芐基(Bn)、新戊?；?Piv)、甲基醚，取代的甲基醚(例如MOM(甲氧基甲基醚)、β-甲氧基乙氧基甲基醚(MEM)、MTM(甲基硫代甲基醚)、BOM(芐氧基甲基醚)、對甲氧基芐基(PMB)、PMBM(對甲氧基芐氧基甲基醚))、取代的乙基醚、乙氧基乙基醚、取代的芐基醚、甲氧基三苯甲基(MMT)、四氫吡喃基(THP)、三苯甲基(Tr)、甲硅烷基醚(例如TMS(三甲基甲硅烷基醚)、TES(三乙基甲硅烷基醚)、TIPS(三異丙基甲硅烷基醚)、TBDMS(叔丁基二甲基甲硅烷基醚)、三芐基甲硅烷基醚、TBDPS(叔丁基二苯基甲硅烷基醚、TOM(三異丙基甲硅烷氧基甲基))、酯(例如甲酸酯、乙酸酯、苯甲酸酯(Bz)、三氟乙酸酯、二氯乙酸酯)、碳酸酯、環(huán)狀縮醛和縮酮。應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明不旨在限于這些保護(hù)基團(tuán)；而是，可以使用上述標(biāo)準(zhǔn)容易地鑒定各種另外的等效保護(hù)基團(tuán)并且在本發(fā)明中使用。另外，各種保護(hù)基團(tuán)描述于“有機(jī)合成中的保護(hù)基團(tuán)(ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis)”第三版，Greene，T.W，和Wuts，P.G.，Eds.，JohnWiley&Sons，紐約：1999，其全部內(nèi)容通過引用并入本文。根據(jù)本領(lǐng)域的標(biāo)準(zhǔn)術(shù)語，本文中使用的“有機(jī)非質(zhì)子溶劑”是指不能用作質(zhì)子供體的有機(jī)溶劑。非質(zhì)子溶劑包括但不限于二氯甲烷、四氫呋喃、乙酸乙酯、乙腈、二甲基甲酰胺、二甲亞砜、丙酮、己烷、戊烷、苯、甲苯、1,4-二噁烷、乙醚和氯仿。如本文所述，式(A),(B),(C),(D),(E),(F),(TR),(TR2),(TR-A)和(TR2-A)化合物是CCK2/胃泌素受體拮抗劑。本發(fā)明的藥物組合物和化合物可用于預(yù)防和/或治療與CCK2/胃泌素受體相關(guān)的疾病、由高胃泌素血癥引起或相關(guān)的疾病或與胃酸相關(guān)的疾病。這樣的疾病包括與CCK2受體-攜帶細(xì)胞相關(guān)的疾病或涉及胃泌素的生理功能喪失或功能障礙的疾病。因此，可以治療和/或預(yù)防的疾病的實例包括但不限于以下任意一種或多種疾病：胃和十二指腸潰瘍、NSAID誘導(dǎo)的胃潰瘍、消化不良、GORD、巴雷特氏食管、ZES、由PPI或其它酸抑制劑誘導(dǎo)的高胃泌素血癥(包括戒斷的效果)和由高胃泌素血癥導(dǎo)致的病癥(例如骨丟失，骨質(zhì)量受損和骨折)、胃炎(包括幽門螺桿菌誘發(fā)的胃炎和自身免疫性慢性萎縮性胃炎的并發(fā)癥，例如胃類癌和ECL細(xì)胞增生)、神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤(不限于胃類癌)、壁細(xì)胞增生、胃基底腺息肉、胃癌、結(jié)腸直腸癌、甲狀腺髓樣癌、胰腺癌和小細(xì)胞肺癌。本發(fā)明的藥物組合物還可用于預(yù)防和/或治療由中樞或外周CCK2受體控制的生理功能的功能障礙所引起的疾病，例如焦慮、傷害感受、疼痛、藥物成癮、鎮(zhèn)痛依賴和鎮(zhèn)痛戒斷反應(yīng)。當(dāng)用于預(yù)防或治療疾病時，本發(fā)明的組合物可以以“有效量”給藥?！坝行Я俊笔侵浮爸委熡行Я俊?，即與沒有治療的情況下所預(yù)期的相比，在單劑量或多劑量給藥時足以引起疾病嚴(yán)重程度可檢測的降低、防止疾病進(jìn)展或緩解疾病癥狀的化合物的量。本發(fā)明的治療方法治療的對象優(yōu)選為人對象。本發(fā)明的組合物可用于降低任何上述需要治療的疾病的癥狀的嚴(yán)重性。本發(fā)明的組合物還可用于向任何上述疾病的易感患者、處于任何上述疾病風(fēng)險中的患者或罹患任何上述疾病的患者給藥。用于預(yù)防上述疾病的組合物不需要在所有情況下絕對預(yù)防疾病的發(fā)生，但是當(dāng)向易患該疾病或處于疾病風(fēng)險中的患者給藥時可以預(yù)防或延遲所述病癥的發(fā)生。一種或多種上述疾病可能在對象中組合存在，因此，本發(fā)明的藥物組合物可以組合治療一種或多種上述疾病。本文所述的式(A),(B),(C),(D),(E),(F),(TR)和(TR-A)化合物及其實施方式具有至少一個手性碳原子，并且可以具有超過一個手性碳原子。本發(fā)明包括任何光學(xué)純度水平的任何對映異構(gòu)體形式及其混合物，包括外消旋和非外消旋混合物。因此，本文公開的化合物的所有立體異構(gòu)形式形成本發(fā)明的一部分。例如，化合物(TR)具有手性碳原子，并且本發(fā)明被理解為同時包括任何光學(xué)純度水平的兩種對映異構(gòu)體形式及其混合物，包括外消旋和非外消旋混合物。本文所述的光學(xué)純形式的對映異構(gòu)體具有至少90％、優(yōu)選至少95％、更優(yōu)選至少98％、甚至更優(yōu)選至少99％的對映異構(gòu)體過量(ee)。ee可以例如通過手性HPLC評估。本文公開的化合物可以以非溶劑化形式以及溶劑化形式存在(例如與藥學(xué)上可接受的溶劑例如水，乙醇等的溶劑化形式)，并且意圖是本發(fā)明包括溶劑化和非溶劑化形式。式(A),(B),(C),(D),(E),(F),(TR),(TR2),(TR-A)和(TR2-A)化合物和本文所述的實施方式，其對映異構(gòu)體及其混合物可以游離化合物或其合適的鹽或水合物形式提供。鹽應(yīng)該是藥學(xué)上可接受的鹽，并且鹽和水合物可以通過常規(guī)方法制備，例如使本發(fā)明的化合物與其抗衡離子不干擾化合物的預(yù)期用途的酸或堿接觸。藥學(xué)上可接受的鹽的實例包括氫鹵酸鹽、無機(jī)酸鹽、有機(jī)羧酸鹽、有機(jī)磺酸鹽、氨基酸鹽、季銨鹽、堿金屬鹽、堿土金屬鹽等。堿性化合物可以與各種無機(jī)酸和有機(jī)酸形成無毒的酸加成鹽，即含有藥理學(xué)上可接受的陰離子的鹽，包括但不限于蘋果酸鹽、草酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、酸式磷酸鹽、異煙酸鹽、乙酸鹽、乳酸鹽、水楊酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、油酸鹽、單寧酸鹽、泛酸鹽、酒石酸氫鹽、抗壞血酸鹽、琥珀酸鹽、馬來酸鹽、龍膽酸鹽、富馬酸鹽、葡萄糖酸鹽、葡糖二酸鹽、糖酸鹽、甲酸鹽、苯甲酸鹽、谷氨酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、苯磺酸鹽、甲苯磺酸鹽和雙羥萘酸鹽。酸性化合物可與各種藥理學(xué)上可接受的陽離子形成鹽，包括堿金屬或堿土金屬鹽，特別是鈣、鎂、鈉、鋰、鋅、鉀和鐵鹽。包括堿性或酸性部分的化合物也可以與各種氨基酸形成藥學(xué)上可接受的鹽。術(shù)語“前藥”是指通過各種機(jī)制，例如通過酯酶、酰胺酶、磷酸酶、氧化和/或還原性代謝，在體內(nèi)轉(zhuǎn)化以產(chǎn)生所公開的化合物或藥學(xué)上可接受的鹽的化合物。式(A),(B)或(TR)的化合物的酯或硫酯是其中R3(-OH或-SH)的H被部分-C(O)R替代的化合物，其中R是任選取代的脂族、雜脂族、芳族或雜芳族部分。前藥還可以通過用基團(tuán)諸如-P(O)(OH)2、-P(O)(O(C1–6)烷基)2、烷基羰基氧基烷基(例如，(C1–6)烷基羰基氧基甲基)、1-甲基-1-((C1–6)烷基羰基氧基)乙基、(C1–6)烷基羰基氧基甲基)、N-(C1–6)烷氧基羰基氨基甲基、琥珀酰基或α-氨基烷基羰基(例如，天然存在的L-氨基酸)替換R3的-OH或-SH基團(tuán)的氫原子形成。前藥可以由胺官能團(tuán)形成，例如，通過產(chǎn)生酰胺或氨基甲酸酯、N-烷基羰基氧基烷基衍生物、(氧代二氧雜環(huán)戊烯基)甲基衍生物，N-曼尼西堿(N-Mannichbase)、亞胺或烯胺形成。本發(fā)明包括提供基本上無定形或基本上結(jié)晶形式的本文所述的化合物。例如，本發(fā)明包括基本上無定形或基本上結(jié)晶形式的化合物(TR2-A)。“基本上結(jié)晶的”和“基本上無定形的”是指其可以分別為至少特定重量百分比的結(jié)晶或無定形化合物。在一些實施方式中，基本上結(jié)晶或基本上無定形是指分別為至少70％、至少80％、至少90％或至少95％結(jié)晶或無定形的化合物。本發(fā)明的藥物組合物可另外包含一種或多種藥學(xué)上可接受的賦形劑，例如藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑、防腐劑、增溶劑、穩(wěn)定劑、崩解劑、粘合劑、潤滑劑、潤濕劑、乳化劑、甜味劑、著色劑、著嗅劑、鹽、緩沖劑、包衣劑和抗氧化劑。用于配制藥物組合物的合適的賦形劑和技術(shù)是本領(lǐng)域熟知的(參見例如Remington:(藥劑科學(xué)和實踐)TheScienceandPracticeofPharmacy,第20版，A.Gennaro,LippincottWilliams&Wilkins,2000)。合適的賦形劑包括但不限于藥物級淀粉、甘露醇、乳糖、玉米淀粉、硬脂酸鎂、硬脂酸、海藻酸、糖精鈉、滑石、纖維素、纖維素衍生物(例如羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素)、葡萄糖、蔗糖(或其他糖)、碳酸鈉、碳酸鈣、碳酸鎂、磷酸鈉、磷酸鈣、明膠、瓊脂、果膠、液體石蠟油、橄欖油、醇、洗滌劑、乳化劑或水(優(yōu)選無菌)。藥物組合物可以進(jìn)一步包含佐劑和/或一種或多種另外的治療活性劑。藥物組合物可以以單位劑型提供，通常在密封容器中提供，并且可以作為試劑盒的一部分提供。這種試劑盒將通常(雖然不必需)包括使用說明。其可包括多種所述的單位劑型。藥物組合物可適于通過任何合適的途徑給藥，例如通過口服、口腔或舌下途徑或腸胃外途徑給藥，包括皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)和皮內(nèi)、直腸和局部給藥和吸入給藥。這樣的組合物可以通過藥學(xué)領(lǐng)域中已知的任何方法制備，例如通過在無菌條件下將活性成分與賦形劑混合。適合于口服給藥的藥物組合物可以以離散單元，例如膠囊或片劑；以粉末或顆粒；以溶液、糖漿或懸浮液(在水性或非水性液體中；或以可食用泡沫或可打發(fā)體(whips)；或以乳液)存在。用于片劑或硬明膠膠囊的合適的賦形劑包括乳糖、玉米淀粉或其衍生物、硬脂酸或其鹽。與軟明膠膠囊一起使用的合適的賦形劑包括例如水或油(例如植物油、液體石蠟油或橄欖油)、蠟、脂肪、半固體或液體多元醇等。對于溶液和糖漿的制備，可以使用的賦形劑包括例如水、多元醇和糖。對于懸浮液的制備，油(例如植物油)可用于提供水包油或油包水懸浮液。適于通過吸入給藥的藥物組合物包括細(xì)顆粒粉劑或霧劑，其可通過各種類型的計量劑量的加壓氣溶膠、噴霧器或吹入器產(chǎn)生。適用于腸胃外給藥(例如皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi))的藥物組合物包括水性和非水性無菌注射溶液，其可含有抗氧化劑、緩沖劑、抑菌劑和使制劑與預(yù)期接受者的血液基本等滲的溶質(zhì)；和水性和非水性無菌懸浮液，所述懸浮液可以包括懸浮劑、增稠劑和潤濕劑。可用于注射溶液的賦形劑包括例如水，醇，多元醇，甘油和植物油。合適的水性載體包括林格氏溶液和等滲氯化鈉。水性懸浮液可以例如包括懸浮劑，例如纖維素衍生物，藻酸鈉，黃蓍膠，聚乙烯吡咯烷酮和潤濕劑例如卵磷脂。組合物可以存在于單位劑量或多劑量容器中，例如密封的安瓿和小瓶中，并且可以以冷凍干燥(凍干)條件儲存，只需要加入無菌液體載體，例如用于注射的水，立即使用?？捎蔁o菌粉末劑、顆粒劑和片劑制備臨時注射溶液劑和混懸劑。在一些實施方式中，本發(fā)明的藥物組合物是長效制劑，其配制成在例如數(shù)周或數(shù)月的期間內(nèi)提供受控的藥物釋放到血流中，這取決于確切的制劑。長效制劑可以是例如包含式(A),(B),(C),(D),(E),(F),(TR),(TR2),(TR-A)或(TR2-A)化合物或如本文所述的任何實施方式的納米顆粒以及一種或多種賦形劑，例如表面穩(wěn)定劑，填充劑或載體的納米顆粒制劑，或包含包封在膠束納米顆粒中的式(A),(B),(C),(D),(E),(F),(TR),(TR2),(TR-A)或(TR2-A)化合物或如本文所述的任何其實施方式的制劑。制劑通常是皮下或肌肉注射，以在肌肉或皮膚下產(chǎn)生藥物儲庫。長效制劑通常是固體或油基的。當(dāng)用于預(yù)防或治療疾病時，本發(fā)明的組合物可以“有效量”給藥。對于用作單一療法，“有效量”是指“治療有效量”，即與沒有治療的情況下所預(yù)期的相比，在單劑量或多劑量給藥時，所述化合物的量足以引起疾病嚴(yán)重程度的可檢測的降低，以防止疾病的發(fā)展或者減輕疾病的癥狀。在本發(fā)明與另一種藥劑組合使用的情況下，與沒有治療的情況或單獨(dú)使用第二藥劑治療的情況下所預(yù)期的相比，“有效量”是指當(dāng)與另一種藥劑組合通過單次或多次劑量給藥時，該量足以引起疾病嚴(yán)重程度的可檢測的降低，以防止疾病的發(fā)展或減輕疾病癥狀。當(dāng)用作單一治療時，“有效量”可以與與第二藥劑組合使用時相同或不同。本發(fā)明物質(zhì)的劑量可以在寬范圍內(nèi)變化，這取決于多種因素，包括待治療的疾病或病癥，要治療的個體的年齡、體重和狀況，給藥途徑等。由藥師最終確定使用的合適劑量。然而，通常，當(dāng)給予本發(fā)明化合物時，對于每種給藥途徑采用的每日劑量(以一次劑量或多次分劑量給藥)將為0.001至5,000毫克/天，通常為1至1,000毫克/天，更多通常為2-200毫克/天，更通常為2-50毫克/天。典型的劑量可以為在0.01μg/kg和50mg/kg之間，優(yōu)選在10μg/kg和10m/kg之間，例如在100μg/kg和2mg/kg之間，以劑量/單位體重表示。以下實施例描述了本發(fā)明的示例性化合物(TR)，其包括光學(xué)純形式的對映異構(gòu)體(TR2)和(TR3)或這些對映異構(gòu)體的任何混合物和(TR2-A)。這些化合物被證明是CCK2/胃泌素受體拮抗劑，與成功用作藥物的YF476相比顯示出有利的性質(zhì)。這些性質(zhì)包括改善的溶解性、生物利用度、無定形形式的穩(wěn)定性和對CCK2受體的選擇性(超過CCK1受體)。實施例縮寫DCM二氯甲烷DIPEAN,N’-二異丙基乙胺DMFN,N’-二甲基甲酰胺DMS硫酸二甲酯GC氣相色譜HPLC高效液相色譜MeI甲基碘MTBE甲基叔丁基醚THF四氫呋喃TLC薄層層析UV紫外線氣相色譜在ShimadzuGC2014上進(jìn)行。HPLC在安捷倫/HP1100逆相HPLC系統(tǒng)上進(jìn)行。在具有QNP(1H/13C/19F/31P/冷凍器)的400MzBrukerAvance111光譜儀或500Mz雙重(1H/13C)BrukerAvance111HD光譜儀上記錄NMR光譜。在ExeterAnalyticalCE-440元素分析儀上進(jìn)行元素分析(CHN)。XPRD光譜在PanalyticalX'pertPro衍射儀上獲得。提供本發(fā)明的以下實施例以幫助理解本發(fā)明，但不應(yīng)被認(rèn)為是限制本發(fā)明的范圍。除非另有說明，試劑可以是市售的或根據(jù)文獻(xiàn)中的方法制備。實施例1：(TR1)的合成(TR1)根據(jù)以下方案1合成。應(yīng)當(dāng)理解，通過適當(dāng)改變起始材料3、4和7，該方案通?？梢赃m用于合成式(A)和(B)的化合物。根據(jù)以下方案2、3和4合成用于合成(TR1)的試劑3、4和7：4-羥基-3,3-二甲基-2-丁酮(1)將3-甲基-2-丁酮(250mL，201.3g，2.34摩爾)，多聚甲醛(84.2g，2.80摩爾)和三氟乙酸(365mL，4.77摩爾)的混合物在氮?dú)鈿夥障略?0℃加熱7小時(h)。將所得溶液冷卻至0-5℃，并用2M氫氧化鈉溶液中和，同時保持溫度在0-5℃?；旌衔镉枚燃淄?3×1L)萃取。合并的萃取液用無水硫酸鈉干燥，在真空下仔細(xì)汽提除去溶劑，得到油狀物(260g)。將粗產(chǎn)物在90℃/50mmHg下通過15cmFenski填充柱蒸餾，得到兩個主要餾分。包含的餾分1為71.5克，經(jīng)氣相色譜(GC)檢測純度為89.7％，包含的餾分2為75.7克，經(jīng)GC純度檢測純度為95.6％。餾分2用于下一步驟。1-溴-4-羥基-3,3-二甲基-2-丁酮(2)化合物1(75.7克，652毫摩爾)在無水甲醇(400mL)中溶解，并在氮?dú)鈿夥障吕鋮s至-10℃。將溴(104.1克，652毫摩爾)在黑暗中在30分鐘內(nèi)緩慢加入，同時保持-10℃的溫度。然后將混合物在0℃下攪拌1小時。GC顯示幾乎所有的起始材料已經(jīng)被消耗，并且95％的產(chǎn)品組分已經(jīng)形成。加入乙酸乙酯(600毫升)，并用冷水(600毫升)洗滌混合物。水層用氯化鈉飽和，并用乙醚(4×300mL)萃取。合并的乙酸乙酯和乙醚萃取液用10％碳酸鈉溶液(300mL)洗滌，并用無水硫酸鈉干燥。在40℃的真空下除去溶劑，得到淺橙色/棕色的油狀物(118.6g)。1-溴-4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-3,3-二甲基-2-丁酮(3)將咪唑(43.0g，631毫摩爾)在二氯甲烷(530mL)中的溶液冷卻至-15℃至-20℃，同時在氮?dú)鈿夥障聰嚢?。加入化合?(102.7g，527毫摩爾)，得到澄清溶液。緩慢加入叔丁基-二甲基-甲硅烷基氯化物(91.1g，604毫摩爾)，同時保持溫度在-15℃至-20℃。然后將混合物在該溫度下攪拌2.5小時。少量水淬樣品的GC表明所有化合物2已經(jīng)消耗。加入水(500mL)，除去下層有機(jī)層，用更多的水(2×500mL)洗滌。將合并的水層用乙醚(2×800mL)重新萃取。合并的二氯甲烷和乙醚層用硫酸鈉干燥，在真空下汽提除去溶劑，得到油狀物(187g)。通過硅膠(3kg)色譜，在1％三乙胺的己烷溶液中漿料填充，用3％乙酸乙酯的己烷溶液作洗脫劑，得到產(chǎn)物。在真空下汽提除去良好餾分的溶劑，得到幾乎無色的油(113.8g，經(jīng)GC測定為94.2％A)。純度較差的餾分也汽提除去溶劑，再得到33g(經(jīng)GC測定為85％A)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ4.24(s,2H)；3.55(s,2H)；1.17(s,6H)；0.86(s,9H)；0.02(s,6H)。2-(2-氨基苯甲?；?吡啶(4)將2-溴吡啶(307.6g，1.95摩爾)溶解在甲苯(1.2L)中并在氮?dú)鈿夥障吕鋮s至低于-60℃。緩慢加入正丁基鋰(1.6M，在己烷中；1190mL，1.91摩爾)，同時保持溫度低于-60℃。將混合物在該溫度下攪拌15分鐘。少量淬滅樣品的GC表明大部分2-溴吡啶已被消耗。在20分鐘內(nèi)緩慢加入2-氨基芐腈(100g，0.85摩爾)的甲苯(590mL)溶液，同時保持溫度低于-60℃。使混合物升溫至室溫過夜。將混合物倒入3M鹽酸(1.9L)中，并在室溫下攪拌1小時。除去有機(jī)層并用1M鹽酸萃取。合并的水層用甲苯(500mL)洗滌。然后將酸性溶液用25％氨溶液堿化至pH＝9，同時，保持溫度在約0-5℃。將混合物在該溫度下攪拌1小時。將所得沉淀物過濾，用水洗滌并干燥，得到黃色/棕色粉末(171g，GC＝95.7％(總未校正面積％)，具有鄰近的4.3％A的后峰(after-peak))。將其直接用于下一步驟。3-叔丁氧基羰基氨基-苯甲酸甲酯(5)在氮?dú)鈿夥障聦⒍妓岫宥□?56g，257毫摩爾)加入到3-氨基苯甲酸甲酯(19.4g，128毫摩爾)和N,N-二異丙基乙胺(33.2g，257毫摩爾)的乙腈(150mL)溶液中。將混合物在70℃下加熱65小時(整個周末)。薄層層析(TLC；洗脫液50％乙酸乙酯的己烷溶液)表明幾乎所有的3-氨基苯甲酸甲酯(Rf＝0.65)已被消耗，并且形成了新的組分(Rf＝0.8)。在真空下汽提混合物以除去乙腈和N,N-二異丙基乙胺，得到橙色油狀物。將粗產(chǎn)物在己烷(3體積)中溶解/研磨。將混合物在4℃(冰箱)下靜置1小時，同時固體完全形成。將混合物過濾并用少量冷己烷洗滌。將固體在己烷(100mL)中漿料化1小時，然后重新過濾。將產(chǎn)物真空干燥過夜，得到淺黃色/乳霜狀固體(19.5g)。3-(N-叔丁氧基羰基-N-甲基-氨基)-苯甲酸(6)向化合物5(19.4g，77.2毫摩爾)的無水N，N-二甲基甲酰胺(250mL)溶液中分批加入氫化鈉(60％分散在油中；7.72g，193毫摩爾)，同時保持溫度低于10℃。然后將混合物加熱至室溫并攪拌1小時。將混合物再冷卻至5℃，并在該溫度下在30分鐘內(nèi)滴加甲基碘(35.6g，251毫摩爾)。然后將混合物加熱至室溫并攪拌2小時。TLC(洗脫液：20％乙酸乙酯的己烷溶液)表明反應(yīng)完成。經(jīng)TLC，化合物5和甲基化產(chǎn)物具有相同的Rf＝0.55。然而，當(dāng)用茚三酮顯影時，僅化合物5產(chǎn)生有色斑點(diǎn)。在高真空下除去大部分N，N-二甲基甲酰胺，殘余物分配在乙酸乙酯(700mL)和5％碳酸氫鈉溶液(250mL)之間。然后用水(5×100mL)洗滌有機(jī)層，然后用無水硫酸鈉干燥并汽提，得到油狀物(21.7g)。將油狀物溶于甲醇(420mL)中并冷卻至5℃，然后加入1M氫氧化鋰水溶液(78mL，78毫摩爾)。然后將混合物在室溫下攪拌過夜。再加入1M氫氧化鋰溶液(38mL，38毫摩爾)，將混合物攪拌1小時。在加入更多的水(400mL)并用33％乙酸乙酯的己烷溶液(150mL，然后75mL)洗滌之前，在真空下除去大部分甲醇。使用校準(zhǔn)的pH計非常小心地將攪拌的溶液調(diào)節(jié)至pH＝4.0，并緩慢滴加5M鹽酸(過酸化可導(dǎo)致除去BOC基團(tuán))。用乙酸乙酯(2x10mL)萃取混合物。合并的有機(jī)層用鹽水(200mL)洗滌，用無水硫酸鈉干燥，然后汽提成油狀物(19.3g)。將油狀物從5％乙酸乙酯的己烷溶液(170mL)中結(jié)晶，同時在0℃下攪拌1小時。將產(chǎn)物過濾并用少量冷的己烷洗滌，然后在30℃真空干燥過夜，得到乳白色粉末(15.5g)。TLC(洗脫液50％甲苯、40％乙酸乙酯、10％甲酸溶液)表明水解產(chǎn)物的Rf＝0.60，而甲基化酯中間體的Rf＝0.75。3-[N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-氨基]苯基異氰酸酯(7)在氮?dú)鈿夥障?，向化合?(15.2g，60.5毫摩爾)的丙酮(120mL)溶液中加入三乙胺(7.05g，69.7毫摩爾)，將所得溶液冷卻至0-5℃。滴加氯甲酸乙酯(8.19g，75.5毫摩爾)的丙酮(20mL)溶液，同時保持溫度在0-5℃。將混合物在該溫度下攪拌30分鐘，在此期間形成沉淀。逐滴加入疊氮化鈉(5.9g，90.6毫摩爾)的水(20mL)溶液，同時保持溫度在0-5℃。將混合物在該溫度下攪拌1小時。TLC(洗脫液50％甲苯，40％乙酸乙酯，10％甲酸溶液)表明所有的化合物16(Rf＝0.60)已經(jīng)轉(zhuǎn)化為中間體有機(jī)疊氮化物(Rf＝0.75)。將溶液倒入甲苯(150mL)和水(300mL)的攪拌混合物中。去除甲苯層并用鹽水洗滌，然后用無水硫酸鈉干燥。注意不讓溶液蒸發(fā)導(dǎo)致更高的濃度，因為有機(jī)疊氮化物可能劇烈熱不穩(wěn)定。在氮?dú)鈿夥障聦⒏稍锏募妆饺芤杭訜嶂粱亓?約105℃)2小時。約70℃的溫度時注意到氣體逸出。TLC表明所有中間體有機(jī)疊氮化物已經(jīng)被消耗。在高真空下將溶液汽提得到黃色油狀物(13.8g，GC純度＝96.9％A)。使用前，將該濕敏材料在4℃下在氮?dú)庵袃Υ妗?HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.27-7.17(位于CHCl3峰下方,m)；7.08(1H,d)；7.02(1H,s)；6.89(1H,m)；3.24(3H,s)；1.46(9H,s)ppm。2-(苯并三唑-1-基)-2-(芐氧基羰基氨基)-乙酸(8)將氨基甲酸芐酯(82.1g，0.54mol)、乙醛酸一水合物(50g，0.54mol)和苯并三唑(64.7g，0.54mol)在甲苯(2.5L)中的混合物用迪安-斯塔克(DeanandStark)水去除裝置加熱回流2小時。在第一小時內(nèi)收集總共23mL的水，然后停止水蒸發(fā)。使混合物冷卻至室溫，過濾所得固體，用乙醚(200mL)洗滌。將濕濾餅在40℃/50mmHg下干燥過夜，得到乳白色粉末(134.9g)。芐基-(苯并三唑-1-基-[2-(吡啶-2-羰基)-苯基氨基甲?；鵠-甲基)-氨基甲酸酯(9)在氮?dú)鈿夥障聦⒒衔?(16.39g，82.7毫摩爾)和化合物8(35.97g，110.2毫摩爾)在二氯甲烷(300mL)中的混合物冷卻至0℃。向混合物中加入4-二甲基氨基吡啶(1.2g，9.8毫摩爾)，然后加入1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(23g，120.0毫摩爾)。將混合物在0℃下攪拌10分鐘，然后加熱至室溫，再攪拌10分鐘。TLC(洗脫液：50％乙酸乙酯的己烷溶液)表明所有化合物4(Rf＝0.60)已經(jīng)被消耗，形成新產(chǎn)物(Rf＝0.20)。在真空下汽提混合物除去溶劑，然后分配在乙酸乙酯(300mL)和飽和碳酸氫鈉溶液(300mL)之間。有機(jī)層用鹽水(100mL)洗滌，用無水硫酸鈉干燥，然后汽提，得到油狀物(65g)。該粗物質(zhì)直接用于下一步驟。3-(芐氧羰基)氨基-2,3-二氫-5-(2-吡啶基)-1H-1,4-苯并二氮雜-2-酮(10)將粗化合物9(65g)溶于氨飽和的甲醇(710mL)中并在室溫下攪拌1小時。TLC(洗脫液：50％乙酸乙酯的己烷溶液)表明化合物9(Rf＝0.20)已被消耗，所需產(chǎn)物(Rf＝0.15)與副產(chǎn)物(Rf＝0.5)一起形成。在真空下汽提溶液除去溶劑(和氨)并溶解在乙酸(450mL)中。將該溶液在室溫下攪拌4小時。在真空下汽提混合物以除去大部分乙酸，然后分配在氯仿(300mL)和1M氫氧化鈉溶液(200mL)之間。有機(jī)層用鹽水(200mL)洗滌，然后用無水硫酸鈉干燥，并在真空下汽提，得到油狀物。將粗油狀物溶于乙酸乙酯(100mL)中并使其結(jié)晶過夜。將混合物過濾并用少量冰冷的乙酸乙酯和己烷(100mL)洗滌。將產(chǎn)物在40℃真空干燥過夜，得到棕褐色固體(15.9g)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.67(1H,brs)；8.61(1H,d,J＝4.1Hz)；8.10(1H,d,J＝7.5Hz)；7.84(1H,dt,J＝7.5Hz和1.4Hz),7.5-7.25(8H,m)；7.20(1H,t,J＝7.5Hz)；6.99(1H,d,J＝7.5Hz)；6.65(1H,d,J＝8.2Hz)；5.37(1H,d,J＝8.2Hz)；5.16(2H,d,J＝2.7Hz)ppm。3-(芐氧基羰基)氨基-1-[4-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-3,3-二甲基-2-氧代-丁基]-2,3-二氫-5-(2-吡啶基)-1H-1,4-苯并二氮雜-2-酮(11)將化合物10(14.6克，37.8毫摩爾)溶于無水N,N-二甲基甲酰胺(150毫升)中并在氮?dú)鈿夥障吕鋮s至0℃。分批加入氫化鈉(60％油分散體；1.96克，49.0毫摩爾)，同時保持溫度在0-5℃。然后將混合物加熱至室溫并攪拌1小時。在此期間形成懸浮液。將混合物再冷卻至0-5℃，緩慢加入化合物3(33.9克，109.6毫摩爾)，同時保持溫度低于10℃。然后將混合物加熱至室溫并攪拌1小時。形成接近澄清的溶液。少量淬滅樣品的TLC(洗脫液：50％乙酸乙酯的己烷溶液)表明化合物10(Rf＝0.15)已被消耗以形成新化合物(Rf＝0.55)。將混合物倒入飽和碳酸氫鈉溶液(100mL)中，然后在高真空下汽提以除去大部分二甲基甲酰胺(和水)。將殘余物溶于二氯甲烷(150mL)中，并用飽和碳酸氫鈉溶液(5×150mL)洗滌。有機(jī)層用無水硫酸鈉干燥，汽提得到油狀物。通過硅膠(500g)層析，用1％三乙胺的己烷溶液漿料填充，使用20％-50％乙酸乙酯的己烷溶液作為洗脫液，得到產(chǎn)物。在真空下汽提良好餾分除去溶劑，得到淺黃色固體。將產(chǎn)物在己烷中研磨，過濾并干燥，得到粉末(19.2g)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.62(1H,d,J＝4.8Hz)；8.15(1H,d,J＝8.2Hz)；7.81(1H,t,J＝7.5Hz)；7.47(1H,t,J＝7.5Hz)；7.42-7.27(6H,m)；7.24(partlyunderCHCl3,m)；7.10(1H,d,J＝8.2Hz)；6.73(1H,d,J＝8.2Hz)；5.49(1H,d,J＝8.2Hz)；5.20-5.10(3H,m)；4.46(1H,d,J＝17.7Hz)；3.67(2H,s)；1.24(2H,s)；1.19(3H,s)；0.90(9H,s)；0.08(3H,s)；0.05(3H,s)ppm。3-氨基-1-(4-羥基-3,3-二甲基-2-氧代-丁基)-2,3-二氫-5-(2-吡啶基)-1H-1,4-苯并二氮雜-酮(12)化合物11(19.0克，30.90毫摩爾)溶解于無水二氯甲烷(400mL)中，并在氮?dú)鈿夥障吕鋮s至-10℃。將溶液用溴化氫氣體緩慢飽和，同時保持溫度在-10℃至0℃之間?；旌衔镅杆俪鲇筒⒄吃跓康膫?cè)壁。然后將混合物在0℃下攪拌2小時。TLC(洗脫液：10％甲醇的二氯甲烷溶液)表明化合物11(Rf＝0.9)已消耗，形成新的組分(Rf＝0.40)。向混合物中加入水，攪拌5分鐘，然后使層分離。除去水層，用飽和碳酸氫鈉溶液堿化至pH＝8。將溶液用氯化鈉飽和，然后用氯仿(3×750mL)萃取。合并的氯仿萃取液用無水硫酸鈉干燥并汽提得到油狀物。在高真空下，油形成玻璃狀泡沫固體(11.6g)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.62(1H,d,J＝4.1Hz)；8.14(1H,d,J＝8.2Hz)；7.72(1H,t,J＝7.5Hz)；7.54(1H,t,J＝7.8Hz)；7.37(2H,m),7.3-7.15(部分位于CHCl3下方,m)；5.03(1H,d,J＝17.7Hz)；4.71(1H,s)；4.45(1H,d,J＝17.7Hz)；3.64(2H,q,J＝12Hz)；2.85(3H,brs)；1.24(3H,s)；1.23(3H,s)ppm。13CNMR(100MHz,CDCl3)δ209.1(q),169.7(q),155.6(q),148.9(CH),142.3(q),136.8(CH),132.1(CH),130.5(CH),128.7(q),124.7(CHx2),124.3(CH),122.0(CH),70.6(CH2),70.2(CH),56.0(CH2),49.5(q),21.0(CH3),20.7(CH3)ppm。通過正離子電噴霧的質(zhì)譜M+H＝367.1764m/z(對于組成C20H23N4O3的理論值：367.1765m/z)1-[1-(4-羥基-3,3-二甲基-2-氧代-丁基)-2-氧代-5-吡啶-2-基-2,3-二氫-1H-1,4-苯并二氮雜-3-基]-3-(3-甲基氨基-苯基)-脲(TR1)在氮?dú)鈿夥障聦⒒衔?2(3.41g，9.31毫摩爾)的二氯甲烷(28mL)溶液冷卻至-10℃。緩慢加入化合物7(1.74g，7.01毫摩爾，由于化合物12的純度低，僅為0.75摩爾當(dāng)量)的二氯甲烷(10mL)溶液，同時保持溫度在-5至-10℃之間，攪拌混合物20分鐘。將混合物加熱至0℃，再攪拌20分鐘，然后進(jìn)一步加熱至20℃，最后攪拌30分鐘。TLC(洗脫液：10％甲醇的二氯甲烷溶液)表明化合物12(Rf＝0.40)和化合物7(Rf＝0.8)已被消耗，形成化合物13(Rf＝0.55)。在Rf＝0.60和0.90處可以看到其他較小的TLC組分。在25℃下減壓汽提混合物除去溶劑，然后重新溶于乙酸乙酯(35mL)中。將混合物冷卻至0℃，緩慢加入水(20mL)，然后緩慢加入鹽酸(32％；17mL)，同時保持溫度低于5℃。將混合物緩慢加熱至20℃，并在該溫度下攪拌3小時。TLC(洗脫液：10％甲醇的二氯甲烷溶液)表明化合物18(Rf＝0.55)已被消耗，形成化合物19(Rf＝0.50)。在Rf＝0.60和0.90處可以看到其他較小的TLC組分。除去乙酸乙酯層，水層用更多的乙酸乙酯(20mL)洗滌。將二氯甲烷(100mL)加入到水層中，并用20％氫氧化鈉溶液將pH調(diào)節(jié)至10，同時保持溫度在0-5℃。二氯甲烷層用鹽水(30mL)洗滌，用無水硫酸鈉干燥，然后真空除去溶劑，得到泡沫狀玻璃狀固體(4.90g)。粗產(chǎn)物通過硅膠(100g)快速色譜純化，用2％甲醇的二氯甲烷溶液洗脫，直到除去TLC測定的Rf＝0.6的組分，然后用5％甲醇的二氯甲烷溶液洗脫。合并良好餾分，并汽提得到黃色泡沫/固體(3.56g)。將固體溶于熱的異丙醇(20mL)中，并且當(dāng)其冷卻至室溫時使其緩慢結(jié)晶。將混合物過濾并用少量冷異丙醇洗滌。將產(chǎn)物在35℃/0.1mmHg下在干燥槍中真空干燥3天，得到1.68g白色固體。將固體與較小試驗反應(yīng)的產(chǎn)物混合，得到2.03g白色粉末。1HNMR(400MHz,CD3CN)δ8.57(1H,dd,J＝4.4和2.4Hz)；8.08(1H,d,J＝8.2Hz)；7.89(1H,dt,J＝7.4和2.0Hz)；7.59(1H,dt,J＝8.2和1.4Hz)；7.47-7.42(3H,m)；7.32-7.25(2H,m)；7.00(1H,t,J＝8.2Hz)；6.79(1H,t,J＝2.0Hz)；6.67(1H,d,J＝7.5Hz)；6.57(1H,dd,J＝8.2和2.0Hz)；6.24(1H,dd,J＝8.2和2.0Hz)；5.45(1H,d,J＝8.2Hz)；4.87,4.97(2H,AB系統(tǒng),JAB＝18.1Hz)；4.34(1H,brs)；3.57(2H,d,J＝6.1Hz)；3.18(1H,t,J＝5.8Hz)；2.70(3H,s)；1.14(3H,s)；1.13(3H,s)ppm。通過正離子電噴霧質(zhì)譜法得到的精確質(zhì)譜M+H＝515.2418m/z(對于組成C20H23N4O3的理論值：515.2407m/z)。通過手性HPLC色譜分離外消旋混合物(TR1)，得到純的對映異構(gòu)體(TR2)和(TR3)柱：ChiralcelOD250mm×20mm,5μm模式：超臨界流體(SFC)洗脫劑：甲醇40％，無改性劑流速：50mL/分鐘運(yùn)行時間：4分鐘TR2的停留時間：2.2分鐘TR3的停留時間：2.8分鐘通過置信水平為100％的視覺圓二色譜(VCD)確定(TR2)和(TR3)的絕對構(gòu)型(如上所示)。(TR2)的X-射線粉末衍射(XRPD)確認(rèn)化合物是無定形的。實施例2：TR2和TR2-A的手性合成根據(jù)以下方案5合成(TR2)和(TR2-A)。應(yīng)當(dāng)理解，通過適當(dāng)改變起始材料7和10，該方案通?？梢赃m用于合成如本文所述的本發(fā)明化合物。化合物7和10按照實施例1所述方法進(jìn)行合成。(1-[4-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-3,3-二甲基-2-氧代-丁基]-2-氧代-5-吡啶-2-基-2,3-二氫-1H-苯并[e][1,4]二氮雜-3-基)-氨基甲酸芐酯(11)在氮?dú)鈿夥障略?-5℃下將化合物10(300g,776毫摩爾)在四氫呋喃(3.0L)中漿料化。以小份添加叔丁醇鉀(113.3g)，同時將溫度保持在0-5℃。短暫形成澄清溶液后形成另一固體?；旌衔锛訜嶂良s20℃1小時，然后重新冷卻至0-5℃。緩慢加入化合物3(600.4g,1.94摩爾)，同時將溫度保持在0-5℃?；旌衔锛訜嶂良s20℃，并再攪拌2小時。TLC(洗脫液：50％乙酸乙酯的己烷溶液)表明仍存在一些化合物10?；旌衔锛訜嶂?0℃，并再攪拌1小時。TLC表明反應(yīng)完成。將混合物倒入水(8L)中，并用乙酸乙酯萃取(8L，然后3L)。使用5％鹽水(5L)洗滌合并的有機(jī)萃取液，然后用無水硫酸鈉干燥。蒸發(fā)溶液得到粘性橙色油狀物(895g)。將油狀物緩慢倒入攪拌中的己烷(3L)。攪拌得到的化合物2小時，形成細(xì)漿料。過濾混合物并用己烷(2×1L)洗滌。在約25℃下空氣干燥產(chǎn)物過夜，得到棕褐色固體(448g,94％產(chǎn)量)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.63(1H,d,J＝4.8Hz),8.15(1H,d,J＝8.2Hz),7.81(1H,t,J＝7.5Hz),7.47(1H,t,J＝7.5Hz),7.42–7.28(6H,m),7.23(1H,t,J＝7.5Hz),7.10(1H,d,J＝8.2Hz),6.73(1H,d,J＝8.2Hz),5.49(1H,d,J＝8.2Hz),5.20–5.10(3H,m),4.45(1H,d,J＝17.7Hz),3.67(2H,s),1.24(3H,s),1.19(3H,s),0.90(9H,s),0.08(3H,s),0.05(3H,s)。3-氨基-1-(3,3-二甲基-2-氧代-丁基)-5-吡啶-2-基-1,3-二氫苯并[e][1,4]二氮雜-2-酮(12)化合物11(448g,729毫摩爾)溶解在二氯甲烷(15L)中，并在氮?dú)鈿夥障吕鋮s至-10至-5℃。將溴化氫氣體鼓泡通入混合物，直至其飽和。溶液變渾濁，然后形成油狀物。在0℃下將該混合物攪拌2小時。TLC(洗脫液：10％甲醇的二氯甲烷溶液)表明反應(yīng)完成。加入水(4L)，將混合物攪拌5分鐘。除去二氯甲烷層，水層用更多的二氯甲烷(500mL)洗滌水層。用固體碳酸氫鈉將水層調(diào)節(jié)至pH＝8，然后用二氯甲烷(3×2L)萃取。合并的二氯甲烷層用無水硫酸鈉干燥，然后在真空下部分蒸發(fā)，得到厚漿料。過濾漿料并用乙醚(300mL)洗滌。在室溫下空氣干燥，得到白色固體(220g,82％產(chǎn)率)。HPLC純度為97.7％。3-氨基-1-(4-乙酰氧基-3,3-二甲基-2-氧代-丁基)-5-吡啶-2-基-1,3-二氫-苯并[e][1,4]二氮雜-2-酮(13-A)將化合物12(50g,136.5毫摩爾)溶解在飽和(約1.5摩爾)的氯化氫的乙酸(500mL)溶液中，在約20℃攪拌2小時。TLC(洗脫液：10％甲醇的二氯甲烷溶液)表明反應(yīng)完成。在真空下蒸發(fā)溶液，得到琥珀色油狀物。油狀物溶解在水(500mL)中，用固體碳酸氫鈉調(diào)節(jié)至pH＝8?；旌衔镉枚燃淄?2×300mL)萃取。用水洗滌合并的二氯甲烷層并用無水硫酸鈉干燥。在真空下蒸發(fā)溶液，得到琥珀色泡沫化(foamed-up)玻璃體。將該玻璃體溶解于熱乙酸乙酯(250mL)。冷卻過程中發(fā)生結(jié)晶。過濾混合物并用略微冰冷的乙酸乙酯(50mL)洗滌濾餅。在30℃真空干燥產(chǎn)物，得到灰白色固體(48.7g,87％產(chǎn)率)。(R)-3-氨基-1-(4-乙酰氧基-3,3-二甲基-2-氧代-丁基)-5-吡啶-2-基-1,3-二氫-苯并[e][1,4]二氮雜-2-酮(R)-扁桃酸鹽(14-AR-扁桃酸鹽)在20℃將化合物13-A(28g,68.7毫摩爾)在乙腈(178mL)中漿料化。加入R-扁桃酸(6.27g,41.1毫摩爾)，攪拌混合物直至形成澄清溶液。加入乙醚(59mL)，之后緩慢冷卻混合物至-5℃。過濾混合物并用冰冷的30％乙醚的乙腈溶液(40mL)洗滌。在40℃真空干燥產(chǎn)物，得到接近白色的固體(20.3g,43％ee通過手性HPLC得到的R-異構(gòu)體)。在約45℃條件下將粗產(chǎn)物溶解在乙腈(89mL)中，使其緩慢冷卻至20℃，靜置2小時。緩慢形成纖維狀晶體。過濾混合物并用冷(-18℃)乙腈(20mL)洗滌，接著用乙醚(40mL)洗滌。在35℃真空干燥產(chǎn)物，得到白色固體(8.2g,21％產(chǎn)率，98.8％ee通過手性HPLC得到的R-異構(gòu)體)。(R)-3-氨基-1-(4-乙酰氧基-3,3-二甲基-2-氧代-丁基)-5-吡啶-2-基-1,3-二氫-苯并[e][1,4]二氮雜-2-酮(14A)將化合物14-AR-扁桃酸鹽(8.2g,14.63毫摩爾)溶解于二氯甲烷(100mL)并用飽和的碳酸氫鈉溶液(2×75mL)洗滌。有機(jī)層用無水硫酸鈉干燥并在真空下蒸發(fā)，得到泡沫化玻璃體(5.3g,89％產(chǎn)率)。(R)-1-[1-(4-乙酰氧基-3,3-二甲基-2-氧代-丁基)-2-氧代-5-吡啶-2-基-2,3-二氫-1H-苯并[e][1,4]二氮雜-3-基]-3-(3-叔丁氧基羰基-甲基氨基-苯基)-脲(18A)化合物14-A(6.83g,16.72毫摩爾)溶解在二氯甲烷(50mL)中，并在氮?dú)鈿夥障吕鋮s至-5至-10℃。在20分鐘時間內(nèi)緩慢加入化合物7(5.46g粗,22.0毫摩爾)的二氯甲烷(10mL)溶液，同時保持溫度在-5至-10℃。將化合物加熱至0℃，攪拌20分鐘，之后再進(jìn)一步加熱至20℃30分鐘。TLC(洗脫液：10％甲醇的二氯甲烷溶液)表明僅有少量14-A殘留。在30℃真空蒸發(fā)混合物，得到玻璃狀泡沫。粗產(chǎn)物通過硅膠(250g)色譜純化，用1％-3％甲醇的二氯甲烷溶液洗脫。真空蒸發(fā)良好的產(chǎn)品餾分，得到泡沫化玻璃體(6.42g,58％產(chǎn)率,96.8％HPLC純度,98.9％eeR-異構(gòu)體手性HPLC純度)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.60(1H,d,J＝4.1Hz),8.15(1H,d,J＝7.5Hz),7.79(1H,dt,J＝8.0,2.0Hz),7.51(1H,dt,J＝8.0,1.3Hz),7.41–7.32(3H,m),7.26(t,部分位于CHCl3峰下方),7.18(1H,t,J＝7.5Hz),7.11(1H,d,J＝8.2Hz),7.06(1H,d,J＝8.2Hz),6.93(1H,d,J＝8.2Hz),6.81–6.75(1H,m),5.70(1H,d,J＝7.5Hz),5.02(1H,d,J＝18.0Hz),4.52(1H,d,J＝18.0Hz),4.16(2H,q,J＝8.0Hz),3.21(3H,s),2.06(3H,s),1.45(9H,s),1.29(3H,s),1.25(3H,s)ppm。(R)-1-[1-(4-乙酰氧基-3,3-二甲基-2-氧代-丁基)-2-氧代-5-吡啶-2-基-2,3-二氫-1H-苯并[e][1,4]二氮雜-3-基]-3-(3-甲基氨基-苯基)-脲(TR2-A)將化合物18-A(5.18g,7.89毫摩爾)溶解在飽和(約1.5摩爾)的氯化氫的乙酸(50mL)溶液中，在約20℃攪拌3小時。TLC(洗脫液：10％甲醇的二氯甲烷溶液)表明反應(yīng)完成。真空蒸發(fā)溶液，去除大部分乙酸。油狀物溶解在水(50mL)中，用固體碳酸氫鈉調(diào)節(jié)至pH＝8?；旌衔镉枚燃淄?2×50mL)萃取。用水洗滌合并的二氯甲烷層并用無水硫酸鈉干燥。在真空下蒸發(fā)溶液，得到琥珀色泡沫化玻璃體(3.79g,86％粗產(chǎn)率)。部分粗產(chǎn)物(1.78g)通過硅膠(100g)色譜純化，用1％-3％甲醇的二氯甲烷溶液洗脫。真空蒸發(fā)良好的產(chǎn)品餾分，得到泡沫化玻璃體(1.39g,78％回收率)。96.2％HPLC純度,98.3％eeR-異構(gòu)體手性HPLC純度。通過正離子電噴霧質(zhì)譜得到的精確質(zhì)譜：M+H＝557.2510m/z(對于組成C30H32O6N5理論值：557.2512)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.60(1H,d,J＝4.8Hz),8.15(1H,d,J＝8.2Hz),7.78(1H,dt,J＝8.0,2.0Hz),7.50(1H,dt,J＝8.0,2.0Hz),7.40–7.31(2H,m),7.25(t,部分位于CHCl3峰下方),7.10(1H,d,J＝7.5Hz),7.03(1H,t,J＝8.2Hz),6.91(1H,d,J＝8.2Hz),6.84(1H,s),6.76(1H,t,J＝2.0Hz),6.53(1H,dd,J＝8.2,2.0Hz),6.29(1H,dd,J＝8.2,2.0Hz),5.72(1H,d,J＝8.2Hz),4.98(1H,d,J＝17.7Hz),4.50(1H,d,J＝17.7Hz),4.14(2H,q,J＝8.0Hz),3.75(1H,brs),2.78(3H,s),2.05(3H,s),1.28(3H,s),1.24(3H,s)ppm。(R)-1-[1-(4-羥基-3,3-二甲基-2-氧代-丁基)-2-氧代-5-吡啶-2-基-2,3-二氫-1H-苯并[e][1,4]二氮雜-3-基]-3-(3-甲基氨基-苯基)-脲(TR2)將TR2-A(2.01g,3.61mmol)的甲醇(26mL)溶液加入碳酸鉀(1.0g,7.23mmol)的水(12mL)溶液中，并在20℃攪拌2小時。TLC(洗脫液：10％甲醇的二氯甲烷溶液)表明水解完成。減壓蒸發(fā)掉大部分甲醇。殘留物再用水(20mL)稀釋，并萃取到二氯甲烷中(2×40mL)。蒸發(fā)合并的萃取液得到玻璃狀泡沫(1.82g)。粗產(chǎn)物通過硅膠(100g)色譜純化，用1％-3％甲醇的二氯甲烷溶液洗脫。真空蒸發(fā)良好的產(chǎn)品餾分，得到淺黃色泡沫化玻璃體(1.45g,78％產(chǎn)率)。97.1％HPLC純度,95.0％eeR-異構(gòu)體手性HPLC純度)。正離子電噴霧質(zhì)譜得到的精確質(zhì)譜為M+H＝515.2398m/z(對于組成C28H30O6N4的理論值為515.2407)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.60(1H,d,J＝4.8Hz),8.12(1H,d,J＝7.5Hz),7.78(1H,dt,J＝7.5,2.0Hz),7.52(1H,dt,J＝7.5,1.4Hz),7.39–7.32(2H,m),7.26(t,部分位于CHCl3峰下方),7.20(1H,d,J＝8.2Hz),7.04(1H,t,J＝8.0Hz),6.94–6.85(2H,m),6.76(1H,t,J＝1.4Hz),6.55(1H,dd,J＝8.2,2.0Hz),6.30(1H,dd,J＝8.2,2.0Hz),5.70(1H,d,J＝8.2Hz),4.90(1H,d,J＝17.7Hz),4.49(1H,d,J＝17.7Hz),3.58(2H,q,J＝8.2Hz),3.16(1H,brs),2.78(3H,s),1.21(3H,s),1.20(3H,s)ppm。實施例3:通過(3-氨基苯基)甲基氨基氨基甲酸叔丁酯(N4)合成(TR2-A)的替代方法(TR2)和(TR2-A)可根據(jù)以下方案6進(jìn)行合成：化合物14-A根據(jù)以下方案7進(jìn)行合成：化合物11根據(jù)以下方案8進(jìn)行合成：化合物N4根據(jù)以下方案9進(jìn)行合成：4-羥基-3,3-二甲基-2-丁酮(1)將多聚甲醛(465g,15.48mol)和3-甲基-2-丁酮(1111g,12.90mol)加入三氟乙酸(6.0L)，在油浴中在1小時內(nèi)將混合物緩慢加熱至90℃。在約50℃多聚甲醛全部溶解。油浴冷卻至75℃(向油中加入干冰)。一旦燒瓶內(nèi)容物溫度降低至85℃，加入多聚甲醛(465g,15.48mol)和3-甲基-2-丁酮(1111g,12.90mol)的另一進(jìn)料。混合物緩慢放熱至約92℃(油浴仍為75℃)。一旦燒瓶內(nèi)容物溫度降低至85℃，加入多聚甲醛(465g,15.48mol)和3-甲基-2-丁酮(1111g,12.90mol)的最后進(jìn)料。放熱結(jié)束之后，在90℃再攪拌混合物8小時，之后冷卻至室溫過夜。GC(少量樣品加入水中并用于氫氧化鈉調(diào)節(jié)至pH＝14然后萃取至DCM)表明約2％3-甲基-2-丁酮和86％產(chǎn)物。將產(chǎn)物溶液倒入冰(16kg；來自冷凍器的超冷室)和固體氫氧化鈉(3kg)的攪拌中的混合物中。加入氫氧化鈉(約260g)的另一進(jìn)料，將pH剛好調(diào)節(jié)至14。GC表明水解完成。水性溶液用氯化鈉(加入約3kg)飽和，然后立刻用DCM(3×8L)萃取。使用飽和鹽水(3L)洗滌合并的DCM層，然后用無水硫酸鈉干燥。真空蒸發(fā)溶液，得到淺棕色液體(約3.7kg)。粗產(chǎn)物通過20cmVigreux蒸餾柱(約95℃/45mmHg)蒸餾(前段被去除，蒸餾之后仍保留一些殘留物)得到接近無色的產(chǎn)物(2.85kg,63％產(chǎn)率,GC純度＝98％)。1-溴-4-羥基-3,3-二甲基-2-丁酮(2)化合物1(2566g,22.09mol)溶解在甲醇(13L)中并在20℃攪拌。覆蓋反應(yīng)燒瓶以避光。在15分鐘內(nèi)加入溴(200g,1.25mol)。在短暫的導(dǎo)入期之后，反應(yīng)脫色并發(fā)生輕微放熱。一旦混合物脫色，將其冷卻至0-5℃。在2小時內(nèi)緩慢加入溴(3300g,20.65mol)，同時保持溫度為0-5℃(現(xiàn)在快速脫色)。GC表明約94％產(chǎn)物和<1％的起始材料。通過GC可以看到幾個小的后峰。立刻將混合物倒入飽和鹽水溶液(20L)和冰(4kg)中，然后用DCM(4×8L)萃取。使用飽和鹽水(2×5L)洗滌合并的DCM萃取液，然后用無水硫酸鈉干燥。在40℃下真空蒸發(fā)溶液，得到淺黃色/棕色液體(4191g,97％產(chǎn)率,GC純度91％)。1-溴-4-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-3,3-二甲基-2-丁酮(3)將咪唑(645g,9.47mol)加入DCM(8.5L)中并在氮?dú)鈿夥障吕鋮s至-15至-20℃。在-15至-20℃下加入化合物2(1650g,8.46mol)，得到透明溶液。緩慢加入叔丁基-二甲基甲硅烷基氯化物(1365g,9.06mol)，保持溫度為15至-20℃。在該溫度下再攪拌混合物3小時。GC表明78％的產(chǎn)物，小于1％的起始物和14％的殘留叔丁基-二甲基甲硅烷基氯化物。將反應(yīng)混合物倒入冷水(7.5L)中。去除水層并再用DCM(2L)再次萃取。合并的DCM層用水(2×2L)洗滌，接著用飽和鹽水(2×3L)洗滌，之后用無水硫酸鈉干燥。在40℃下真空蒸發(fā)溶液，得到黃色油狀物(2559g,97％產(chǎn)率,GC純度約75％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ4.24(s,2H)；3.55(s,2H)；1.17(s,6H)；0.86(s,9H)；0.02(s,6H)。2-(2-氨基苯甲?；?吡啶(4)將2-溴吡啶(1075g,6.80mol)的甲苯(4.2L)溶液冷卻至<-65℃，同時在氮?dú)鈿夥障聰嚢?。?小時內(nèi)加入正丁基鋰(1.6M，己烷中；4160mL,6.66mol)，同時保持溫度<-60℃。在<-60℃條件下攪拌混合物30分鐘，之后通過GC檢查是否存在2-溴吡啶。在30分鐘內(nèi)將2-氨基芐腈(350g,2.96mol)的甲苯(2.3L)溶液(可能需要稍微加熱以使其溶解)緩慢加入，并保持溫度<-60℃。使混合物緩慢加熱至室溫，同時攪拌過夜。將混合物小心地倒入冷的鹽酸溶液(1.96L32％鹽酸,3L水和2kg并)，同時攪拌。再攪拌混合物1小時，之后使其分層。去除下層水層，用鹽酸溶液(350mL32％鹽酸和3L水)萃取上層有機(jī)層。向合并的酸性水層中加入冰(4kg)，之后用35％氨溶液(約6.5L)調(diào)節(jié)至pH＝10。按需要加入更多的冰，使最終溫度為0–5℃。在0-5℃再攪拌漿料30分鐘。過濾漿料并用水洗滌直至無氨。在50℃的循環(huán)空氣烘箱中干燥產(chǎn)物(直至達(dá)到恒重)，得到黃色/橙色固體(558g,95％產(chǎn)率，87％GC純度)。2-(苯并三唑-1-基)-2-(芐氧基羰基氨基)-乙酸(8)將劇烈攪拌的苯并三唑(512g,4.30mol)、氨基甲酸芐酯(650g,4.30mol)和乙醛酸一水合物(396g,4.30mol)在甲苯(12L)中的混合物加熱至回流，用迪安斯塔克裝置去除水。調(diào)節(jié)加熱速率以保持不起泡(foamingdown)。在收集約150mL水之后停止水蒸發(fā)。攪拌的混合物中同時形成固體。在回流下再加熱混合物1小時，之后使其緩慢冷卻過夜。將固體過濾和硬拉下來(pulldownhard)30分鐘，之后用MTBE(2×1L)洗滌。在40℃對產(chǎn)物進(jìn)行空氣干燥(直至達(dá)到恒重)，得到接近白色的固體(1330g,95％產(chǎn)率,經(jīng)TLC確定單一斑點(diǎn))。(苯并三唑-1-基-[2-(吡啶-2-羰基)-芐基氨基甲?；鵠-甲基)-氨基甲酸芐酯(9)在60L反應(yīng)容器中將粗化合物4(2000g,10.09mol)和化合物8(3620g,11.09mol)在DCM(36L)中的混合物冷卻至0–5℃。一次性加入4-二甲基氨基吡啶(148g,1.21mol)。在30分鐘內(nèi)以小量逐份加入鹽酸1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺(2417g,12.61mol)，同時保持溫度為0-5℃。在0-5℃下再攪拌混合物1小時，得到透明的深棕色溶液。TLC(洗脫液：50％乙酸乙酯的己烷溶液)表明所有的化合物4(Rf＝0.7黃色斑點(diǎn))已被消耗，形成化合物9(Rf＝0.35)。加入飽和碳酸氫鈉溶液(20L)并將混合物攪拌5分鐘。去除水層，用無水硫酸鈉干燥有機(jī)層，之后真空蒸發(fā)，得到厚的油狀物(約150g,140％粗產(chǎn)率)。(2-氧代-5-吡啶-2-基-2,3-二氫-1H-苯并[e][1,4]二氮雜-3-基)–氨基甲酸芐酯(10)將粗化合物9(約7.15kg)溶解在甲醇(10L)中并在室溫下攪拌。一次性加入用氨(10L)飽和的甲醇溶液。在室溫下攪拌混合物1小時。TLC(洗脫液：50％乙酸乙酯的己烷溶液)表明化合物9(Rf＝0.35)使苯并三唑(Rf＝0.5)減少，得到未環(huán)化的中間體(Rf＝0.1)。首先將混合物加熱至約30℃，然后使其攪拌過夜，同時冷卻至室溫。在攪拌的混合物中形成固體。TLC(洗脫液：50％乙酸乙酯的己烷溶液)表明未環(huán)化的中間體(Rf＝0.1)環(huán)化形成化合物10(Rf＝0.15)。過濾漿料并用冷甲醇(1L)洗滌濾餅，接著用乙酸乙酯(3L)、最后用乙烷(2L)洗滌。將濾液汽提至其原始體積的大約一半，使其靜置2天。過濾掉形成的第二產(chǎn)物(如果形成的話)，并用冷甲醇、乙酸乙酯和己烷洗滌。合并的良好產(chǎn)物在40-50℃下在循環(huán)空氣櫥中空氣干燥，得到灰白色固體(1785g)。所述物質(zhì)在2倍體積的DCM中漿料化，過濾并重新干燥，以改進(jìn)純度(如果需要的話)。使用上述方法由114.4kg粗化合物9制得總共27.6kg(92％HPLC純度)粗化合物10。DCM漿料降低產(chǎn)量至25.9kg(98％HPLC純度；42％產(chǎn)率，經(jīng)過化合物4的兩步驟)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.67(1H,s),8.61(1H,d,J＝4.1Hz),8.10(1H,d,J＝7.5Hz),7.84(1H,dtJ＝1.4,7.5Hz),7.50-7.28(8H,m),7.20(1H,t,J＝7.5Hz),6.99(1H,d,J＝7.5Hz),6.65(1H,d,J＝8.2Hz),5.37(1H,d,J＝8.2Hz),5.15(2H,d,J＝2.7Hz)。(1-[4-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-3,3-二甲基-2-氧代-丁基]-2-氧代-5-吡啶-2-基-2,3-二氫-1H-苯并[e][1,4]二氮雜-3-基)-氨基甲酸芐酯(11)在氮?dú)鈿夥障略?-5℃將化合物10(1040g,2.69摩爾)漿料化在四氫呋喃(10.4L)中。一次性加入叔丁醇鉀(423g,3.77mol)，得到10℃放熱。大體形成接近透明的溶液，之后形成另一固體。將混合物再冷卻至0-5℃。在30分鐘內(nèi)緩慢加入粗化合物3(2080g,粗產(chǎn)物6.72mol，含5.04mol活性成分)，同時保持溫度為0-5℃。再攪拌30分鐘。將混合物加熱至20-25℃，再攪拌1小時。TLC(洗脫液：50％乙酸乙酯的己烷溶液)表明形成化合物12(Rf＝0.55)，但仍有化合物10(Rf＝0.15)。還可以看到甲硅烷基副產(chǎn)物斑點(diǎn)。一次性加入叔丁醇鉀(78g,0.70mol)的另一進(jìn)料，在20分鐘內(nèi)攪拌混合物。偶爾TLC檢查表明所有化合物10已被消耗。如果TLC表明仍有一些化合物10，加入額外的粗化合物3(200g,0.65mol)攪拌10分鐘。加入額外的叔丁醇鉀(78g,0.70mol)并攪拌20分鐘?，F(xiàn)在反應(yīng)應(yīng)該完全，但可以重復(fù)該步驟直至化合物10被消耗。再攪拌混合物1小時，然后使其在室溫下靜置過夜。將反應(yīng)混合物倒入5％鹽水溶液(20L)并用乙酸乙酯(10L，然后5L)萃取。合并的有機(jī)萃取液用5％鹽水溶液(5L)萃取，然后用無水硫酸鈉干燥。真空蒸發(fā)溶液，得到粘性油狀物(有時包含一些晶體)。將油狀物緩慢倒入己烷(15L)，放置一段時間以形成固體。將得到的漿料攪拌2小時以形成細(xì)漿料。過濾混合物并用己烷(2×3L)洗滌。在循環(huán)空氣櫥中20-30℃空氣干燥濾餅得到茶色固體(1291g,78％產(chǎn)率,97.6％HPLC純度)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.63(1H,d,J＝4.8Hz),8.15(1H,d,J＝8.2Hz),7.81(1H,t,J＝7.5Hz),7.47(1H,t,J＝7.5Hz),7.42–7.28(6H,m),7.23(1H,t,J＝7.5Hz),7.10(1H,d,J＝8.2Hz),6.73(1H,d,J＝8.2Hz),5.49(1H,d,J＝8.2Hz),5.20-5.10(3H,m),4.45(1H,d,J＝17.7Hz),3.67(2H,s),1.24(3H,s),1.19(3H,s),0.90(9H,s),0.08(3H,s),0.05(3H,s)。(3-硝基苯基)-氨基甲酸叔丁酯(N2)將三乙胺(915g,9.04mol)和4-(二甲基氨基)-吡啶(30g,0.25mol)在室溫下加入3-硝基苯胺(833g,6.03mol)的四氫呋喃(6.1L)溶液。將混合物加熱至回流，然后關(guān)閉外部加熱。以保持回流的速率加入二碳酸二叔丁酯(1448g,6.63mol)的四氫呋喃(2.2L)溶液。再采用外部加熱將混合物加熱至回流2小時。TLC(洗脫液：33％乙酸乙酯的己烷溶液)表明所有的3-硝基苯胺(Rf＝0.6)已被消耗，形成化合物N2(Rf＝0.85)?；旌衔锢鋮s至室溫過夜。真空蒸發(fā)溶劑，將殘留物溶解在DCM(15L)中。用水洗滌(2×8L)混合物，然后用無水硫酸鈉過夜。將DCM溶液通過硅膠柱(1kg)，用更多的DCM(5L)洗滌以去除殘留的4-(二甲基氨基)-吡啶。真空蒸發(fā)溶液得到厚漿料。加入己烷(4L)，使混合物冷卻過夜。過濾混合物并用己烷(3L)洗滌。在循環(huán)空氣櫥中干燥濾餅過夜，得到茶色固體(1205g,84％產(chǎn)率,經(jīng)TLC確定單一斑點(diǎn))。甲基-(3-硝基苯基)-氨基甲酸叔丁酯(N3)在氮?dú)鈿夥障聦?3-硝基苯基)-氨基甲酸叔丁酯(904g,3.79mol)的四氫呋喃(11.25L)溶液冷卻至0-5℃。在1小時內(nèi)以小份逐次加入叔丁醇鉀(555g,4.95mol)，同時保持溫度<10℃。然后在約10℃攪拌混合物90分鐘，之后重新冷卻至0–5℃。在1小時內(nèi)緩慢加入硫酸二甲酯(622g,4.93moles)，同時保持溫度<10℃。使混合物加熱至室溫，同時攪拌過夜。TLC(洗脫液：10％乙酸乙酯的己烷溶液)表明所有的N2(Rf＝0.35)已被消耗，形成N3(Rf＝0.45)。將混合物小心地倒入稀氨溶液(3L33％w/w氨溶液和10L水)并攪拌1小時。將混合物萃取至DCM(3×5L)。合并的有機(jī)萃取液用水(5L)然后用鹽水(5L)洗滌，之后用無水硫酸鈉干燥。真空干燥混合物以得到紅色/棕色油狀物(943g,98％產(chǎn)率,98.5％GC純度)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.14(1H,t,J＝2.1Hz),7.98(1H,dd,J＝8.1,2.0Hz),7.61(1H,d,J＝8.1Hz),7.47(1H,t,J＝8.1Hz),3.31(3H,s),1.46(9H,s)。(3-氨基苯基)-甲基-氨基甲酸叔丁酯(N4)將三乙胺(30mL)加入甲基-(3-硝基苯基)-氨基甲酸叔丁酯(500g,1.98mol)的甲醇(2.5L)溶液中。在氮?dú)鈿夥障滦⌒牡丶尤胩驾d鈀(5％w/w；JohnsonMatthey型87L糊料,50％水；50g)，使用帕爾搖瓶在50psi氫氣壓力下氫化混合物?？焖贁z取氫氣，混合物從20℃放熱至75℃。放熱結(jié)束之后氫化持續(xù)1小時。TLC(洗脫液：89％氯仿、10％甲醇和1％氨溶液)表明N3(Rf＝0.75)已被消耗，并形成N4(Rf＝0.55)。將混合物小心地過濾通過GF-F纖維墊頂部的硅藻土床。真空蒸發(fā)濾液至干燥。得到的固體殘余物在己烷(1000mL)中漿料化1小時。過濾混合物并用己烷(500mL)洗滌。在40℃真空烘箱中干燥產(chǎn)物，得到茶色固體(429g,97％產(chǎn)率)。98.6％GC純度，熔點(diǎn)范圍＝100–102℃。(該氫化也在常壓下進(jìn)行)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.09(1H,t,J＝7.9Hz),6.65–6.56(2H,m),6.5(1H,dd,J＝8.1,2.0Hz),3.65(2H,brs),3.22(3H,s),1.45(9H,s).3-氨基-1-(4-乙酰氧基-3,3-二甲基-2-氧代-丁基)-5-吡啶-2-基-1,3-二氫苯并[e][1,4]二氮雜-2-酮(13-A)45％w/v溴化氫的乙酸(2080mL,11.6mol)溶液用更多的乙酸(11L)稀釋并在室溫下攪拌。一次性加入化合物11(2230g,3.63mol)(伴有4℃放熱)。加熱混合物至35-40℃持續(xù)2小時。TLC(少量樣品用碳酸氫鈉中和，并萃取至二氯甲烷，洗脫液是5％甲醇的二氯甲烷溶液)表明所有的化合物11(Rf＝0.95)已被消耗，僅殘留少量Cbz保護(hù)的中間體(Rf＝0.45)。真空蒸發(fā)混合物(75℃/<100毫巴)以去除大部分乙酸。在<10℃的溫度下將厚殘留物溶解在冷水(20L)中，用二氯甲烷(2x8L)洗滌以去除芐基溴化物和甲硅烷基副產(chǎn)物。各二氯甲烷洗滌液重新用水(3L)萃取。向水溶液中加入新鮮二氯甲烷(10L)。向攪拌的混合物中加入固體碳酸氫鈉直至停止冒泡且pH＝8。去除二氯甲烷層，用更多的二氯甲烷(5L)萃取水層。合并的二氯甲烷層用無水硫酸鈉干燥并真空蒸發(fā)得到厚油狀物。將乙酸乙酯(5L)加入油中，但仍在旋轉(zhuǎn)Rotavap燒瓶中。油溶解并結(jié)晶出固體。將漿料冷卻至室溫并過濾。用冷乙酸乙酯充分洗滌濾餅。蒸發(fā)母液以得到進(jìn)一步產(chǎn)物。在35℃在循環(huán)空氣櫥中干燥產(chǎn)物，得到灰白色粉末(1250g,84％產(chǎn)率,98.6％HPLC純度)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.62(1H,d,J＝3.9Hz),8.17(1H,d,7.8Hz),7.81(1H,dt,J＝2.0,7.8Hz),7.49(1H,dt,J＝2.0,7.8Hz),7.42–7.33(2H,m),7.23(1H,dt,J＝1.0,7.8Hz),7.09(1H,d,J＝8.3Hz),5.10(1H,d,J＝18.0Hz),4.67(1H,s),4.43(1H,d,J＝18.0Hz),4.18(2H,q,J＝10Hz),3.65(2H,brs),2.47(1H,brs),2.08(3H,s),1.32(3H,s),1.28(3H,s)。(R)-3-氨基-1-(4-乙酰氧基-3,3-二甲基-2-氧代-丁基)-5-吡啶-2-基-1,3-二氫苯并[e][1,4]二氮雜-2-酮(R)-扁桃酸鹽(14-AR-扁桃酸鹽)在20℃將化合物13-A(1266g,3.10mol)在乙腈(8050mL)中漿料化。似乎約一半固體溶解。向攪拌中的混合物中加入R-扁桃酸(283g,1.86mol,0.6摩爾當(dāng)量)。緩慢加入剩余固體，形成透明的黃色溶液。加入乙醚(2660mL)。溶液在20℃保持透明。在30分鐘內(nèi)將混合物緩慢冷卻至-5℃。隨著溫度降至低于5℃，向溶液中加入之前制備的R-扁桃酸鹽(>99％ee，手性HPLC)作為晶種。形成極稠厚的懸浮液(幾乎凝固)，緩慢地變稀薄，同時再攪拌2小時。過濾(緩慢)混合物并用冷(-18℃)50％乙腈的乙醚(1.5L)溶液洗滌，再僅用乙醚(2.5L)洗滌。產(chǎn)物在循環(huán)空氣櫥中在35℃干燥過夜，得到接近白色的固體(1022g略潮)。如果在空氣干燥過程中仍殘留任何乙腈，固體可能略粘。手性HPLC顯示所述鹽由約69％R-異構(gòu)體和32％S-異構(gòu)體組成。在約45℃將粗產(chǎn)物(1022g)溶解在乙腈(4.1L)中。加熱直至剛好變成溶液，然后立刻自然冷卻，僅偶爾攪拌。延長加熱或過度加熱似乎會造成產(chǎn)物分解。一旦溫度降低至低于35℃，向溶液中加入之前制得的R-扁桃酸鹽作為晶種。在4小時內(nèi)緩慢冷卻混合物至約20℃，偶爾攪拌。過濾稠厚的混合物并用冷(約-10℃)乙腈(1L)洗滌，接著用乙醚2L)洗滌。在35℃循環(huán)空氣櫥中干燥產(chǎn)物過夜，得到白色晶體狀固體(461g,手性HPLC確定99.5％eeR-異構(gòu)體，26.5％產(chǎn)率)。加入上述步驟或在實施例2中制備的R-扁桃酸鹽作為晶種可以用來加速結(jié)晶，但不是必須的。(R)-3-氨基-1-(4-乙酰氧基-3,3-二甲基-2-氧代-丁基)-5-吡啶-2-基-1,3-二氫苯并[e][1,4]二氮雜-2-酮(14-A)將化合物14-AR-扁桃酸鹽(4474g,7.98mol)溶解在飽和碳酸氫鈉(25L)和二氯甲烷(25L)的攪拌中的混合物中，攪拌10分鐘。去除水層并用二氯甲烷(5L)再次萃取。合并的二氯甲烷層用更多的飽和碳酸氫鈉溶液(10L)洗滌。新的水層用二氯甲烷(5L)再次萃取。合并的二氯甲烷萃取液用無水硫酸鈉干燥。蒸發(fā)游離堿溶液至體積降至15L。認(rèn)為該溶液含3260g(7.98mol)化合物14-A。在下一步驟中直接使用該溶液。99.6％HPLC純度,99.3％eeR-異構(gòu)體手性HPLC純度。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.62(1H,d,J＝4.1Hz),8.17(1H,d,J＝7.5Hz),7.82(1H,dt,J＝1.3,8.1Hz),7.50(1H,dt,J＝2.0,7.8Hz),7.42–7.33(2H,m),7.23(1H,t,J＝6.8Hz),7.09(1H,d,J＝8.2Hz),5.10(1H,d,J＝18.0Hz),4.67(1H,s),4.43(1H,d,J＝18.0Hz),4.18(2H,q,J＝10Hz),2.48(1H,brs),2.08(3H,s),1.56(2H,brs),1.32(3H,s),1.28(3H,s)。(R)-1-[1-(4-乙酰氧基-3,3-二甲基-2-氧代-丁基)-2-氧代-5-吡啶-2-基-2,3-二氫-1H-苯并[e][1,4]二氮雜-3-基]-3-(3-叔丁氧基羰基-甲基氨基-苯基)-脲(18-A)將1,1’-羰基二咪唑(421g,2.60mol)的DCM(3260mL)漿料冷卻至0-5℃，同時在氮?dú)鈿夥障聰嚢琛Ｔ?0分鐘內(nèi)緩慢加入化合物N4(577g,2,60mol)的DCM(1630mL)溶液，同時保持溫度為0-5℃。在加入過程中，1,1’-羰基二咪唑緩慢溶解形成淺橙色溶液。在0-5℃再攪拌溶液1小時，之后加熱至15-20℃，再攪拌1小時。在30分鐘內(nèi)緩慢加入21.73％w/v化合物14A(3751mL,含815g,2.00mol)的DCM溶液，同時保持溫度為15-20℃。在該溫度下再攪拌混合物2小時。TLC(少量樣品淬滅至飽和碳酸氫鈉溶液，洗脫液是乙酸乙酯)表明所有的化合物14A(Rf＝0.1)已被消耗，形成化合物18A(Rf＝0.35)。用飽和碳酸氫鈉溶液(2×6L)洗滌混合物。各洗滌液用DCM(2L)重新萃取。合并的DCM層用無水硫酸鈉干燥，真空蒸發(fā)，得到厚的油狀物(2020g,仍略含溶劑-濕)。加入乙酸乙酯(5L)，持續(xù)蒸發(fā)以從混合物中去除殘留DCM。用乙酸乙酯使混合物體積至7.25L(粗濃度約25％w/v)。85.8％HPLC純度，含有兩種前期運(yùn)行組分(6.9％和0.8％)和兩種后期運(yùn)行組分(3.9％和0.6％)?；衔?8-A的純化色譜柱濕填充有3kg在79％乙酸乙酯、20％己烷和1％三乙胺(僅在柱填充時使用三乙胺)中的硅膠。用乙酸乙酯將約1000mL化合物18A溶液(含約250g粗產(chǎn)物)稀釋至2000mL，然后緩慢加入己烷(500mL)，同時攪拌。向柱中加入該澄清溶液。用20％己烷的乙酸乙酯溶液(需要約35L)洗脫柱直至去除極性較小的雜質(zhì)，然后用乙酸乙酯(需要約35L)洗脫直至去除化合物18A。真空蒸發(fā)良好餾分以去除溶劑。停止蒸發(fā)，產(chǎn)物油仍可移動，之后形成厚非焦油/玻璃物。HPLC純度96.8％。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.61(1H,d,J＝4.1Hz),8.15(1H,d,J＝7.5Hz),7.79(1H,dt,J＝2.0,7.5Hz),7.51(1H,t,J＝7.9Hz),7.42–7.30(3H,m),7.26(1H,t,J＝7.5Hz),7.19(1H,t,J＝8.1Hz),7.13–7.05(2H,m),6.93(1H,d,J＝7.5Hz),6.86(1H,brs),6.75(1H,d,J＝8.1Hz),5.70(1H,d,J＝7.5Hz),5.03(1H,d,J＝18.4Hz),4.52(1H,d,J＝18.4Hz),4.16(2H,q,J＝11.0,6.0Hz),3.21(3H,s),2.07(3H,s),1.45(9H,s),1.29(3H,s),1.26(3H,s)。(R)-1-[1-(4-乙酰氧基-3,3-二甲基-2-氧代-丁基)-2-氧代-5-吡啶-2-基-2,3-二氫-1H-苯并[e][1,4]二氮雜-3-基]-3-(3-甲基氨基-苯基)-脲(TR2-A)將化合物18-A(1046g)溶解在用氯化氫(11L)飽和的乙酸(約1.5摩爾)中，得到淺橙色溶液?；衔镉?5℃放熱至23℃。在室溫下攪拌混合物3小時。TLC(少量樣品用碳酸氫鈉中和并萃取至DCM；洗脫液是乙酸乙酯)表明所有的18-A(Rf＝0.35)已轉(zhuǎn)化為TR2-A(Rf＝0.20)。將氮?dú)夤呐萃ㄟ^該溶液1小時，以降低氯化氫含量。在真空(65℃/<60mmHg)下去除大部分乙酸，得到厚琥珀狀油。將產(chǎn)物溶解在DCM(10L)中，倒入攪拌的飽和的碳酸氫鈉溶液(15L)。加入更多的固體碳酸氫鈉，直至停止冒泡并且pH＝8。(不使用除碳酸氫鹽之外的強(qiáng)堿。即使碳酸鹽也會去除乙酸酯基團(tuán))。去除DCM層，用DCM(2×2L)重新萃取水層。合并的DCM萃取液用無水硫酸鈉干燥，過濾通過硅藻土床。真空蒸發(fā)DCM溶液，得到泡沫化油狀物。向材料中加入乙酸乙酯(5.5L)，但仍在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)燒瓶中，關(guān)閉真空。油狀物溶解，緩慢形成固體。使混合物冷卻至室溫，同時靜置過夜。過濾混合物并用乙酸乙酯(4L)洗滌。硬拉下濾餅，然后在35℃真空烘箱中干燥過夜。打散固體并過篩，之后在35℃進(jìn)一步真空干燥2天(第二和第三天干燥之間無重量變化)，得到灰白色粉末(740g)。如果需要的話，可用乙酸乙酯對TR2-A重結(jié)晶。使用上述方法由約5234g化合物18-A制得總共3711g(84％產(chǎn)率,98.2％HPLC純度,99.9％eeR-異構(gòu)體手性HPLC純度)化合物TR2-A。1HNMR(500MHz,CDCl3)δ8.60(1H,d,J＝4.9Hz),8.15(1H,d,J＝7.9Hz),7.77(1H,dt,J＝1.8,7.9Hz),7.49(1H,dt,J＝1.8,7.9Hz),7.38(1H,dd,J＝1.8,7.9Hz),7.33(1H,ddd,J＝1.2,4.9,7.3Hz),7.25(具有CHCl3峰,t,J＝7.3Hz),7.10(1H,d,J＝7.3Hz),7.03–6.93(3H,m),6.75(1H,t,J＝2.1Hz),6.52(1H,dd,J＝1.8,7.3Hz),6.28(1H,dd,J＝1.8,7.9Hz),5.72(1H,d,J＝7.9Hz),4.96(1H,d,J＝18.0Hz),4.50(1H,d,J＝18.0Hz),4.14(2H,q,J＝10.6Hz),3.73(1H,brs),2.77(3H,s),2.05(3H,s),1.26(3H,s),1.23(3H,s)。實施例4:溶解度研究溶解度研究確認(rèn)(TR1)和(TR2-A)在水性溶液中比YF476溶解度更高；(TR2-A)在水性溶液中比(TR1)溶解度更高。在透明玻璃小瓶中對測試化合物(2.5mg固體；n＝1)稱重，加入伯瑞坦-羅賓森(Britton-Robinson’s)緩沖液(0.5mL)(pH2.01,pH3.06,pH4.06,pH5.08,pH5.99,pH6.98和pH8.16)。使用瓶輥體系在環(huán)境溫度下攪拌溶液過夜，然后過濾(0.45μm孔徑；未預(yù)飽和)。從濾液中取兩等份(50μL)樣品，用1體積0.1N氯化氫和甲醇(1:1v/v)稀釋，之后用HPLC-UV分析。以10mg/mL(n＝1)在DMSO中制備標(biāo)樣，然后在0.1N氯化氫和甲醇(1:1v/v)中稀釋10倍，得到1mg/mL溶液。對濾液中測試化合物相對于濃度標(biāo)樣的濃度進(jìn)行定量。采用梯度HPLC-UV系統(tǒng)進(jìn)行分析，總循環(huán)時間為6分鐘。使用光電二極管陣列檢測器進(jìn)行220nm-300nm的UV檢測。(TR1)和(TR2-A)相對于YF476的溶解度優(yōu)勢在pH4-6時特別明顯，這是小腸–十二指腸至末端空腸或中髂骨(midilium)部分(大部分藥物吸收在此發(fā)生)的pH范圍。該增加的溶解度表示(TR1),(TR2),(TR3)和(TR2-A)可能更容易被生物利用，因此與YF476相比是更好的藥物候選物。以上表中所列數(shù)值對針對結(jié)晶YF476和(TR2-A)以及無定形(TR1)的。結(jié)晶(TR2-A)與無定形(TR2-A)的溶解度曲線幾乎相同，因此可能具有相當(dāng)?shù)目诜锢枚?。這是令人驚訝的，因為結(jié)晶YF476的生物利用度差且必須轉(zhuǎn)化為無定形形式(噴霧干燥的分散體)，以增加溶解度和口服生物利用度。這對于(TR2-A)而言不是必須的。實施例5:形態(tài)研究與YF476不同，研究表明(TR1)和純的對映異構(gòu)體(TR2)和(TR3)與結(jié)晶狀態(tài)相比，優(yōu)選無定形狀態(tài)。最初嘗試結(jié)晶(TR2)和(TR3)是不成功的，表示優(yōu)選無定形狀態(tài)。確實，(TR2)的XRPD分析確認(rèn)無定形狀態(tài)。對于合適的藥物組合物的制劑，這表明相對于YF476的優(yōu)點(diǎn)。YF476是結(jié)晶的，具有差的溶解度和生物利用度?？墒褂脽o定形YF476來增加生物利用度，但需要對其穩(wěn)定化，這可通過噴霧干燥在羥丙基甲基纖維素上形成固體分散體來實現(xiàn)。(TR)(外消旋、非外消旋或?qū)τ钞悩?gòu)體純形式)(其優(yōu)選無定形狀態(tài))的制劑避免了穩(wěn)定化的需要。實施例6:CCK受體拮抗采用以下評價標(biāo)準(zhǔn)在CCK1和CCK2受體功能試驗中將(TR2)和(TR3)與YF476和YM022進(jìn)行比較：HTRF:時間分辨的均一熒光cAMP:環(huán)狀腺苷一磷酸鹽CHO:中華倉鼠卵巢實驗結(jié)果示于下表：(TR2)和(TR3)是有效的CCK2受體拮抗劑，效力較差的CCK1受體拮抗劑。在CCK2實驗中，有利地將(TR2)與YF476和YM022進(jìn)行比較：(TR2)與YF476和YM022相比效力僅差約5倍；雖然(TR2)對CCK2受體的親合性與YF476對CCK2受體的親合性相比低約5倍，但它是YM022對CCK2受體的親合性的兩倍。此外，(TR2)對CCK2受體相對于CCK1受體的選擇性比YF476的選擇性高30％。拮抗劑的效力表示為IC50，即導(dǎo)致對照激動劑響應(yīng)的一半最大抑制的拮抗劑濃度。拮抗劑對受體的親合性表示為KB，即平衡時占據(jù)50％受體的拮抗劑濃度。實施例7:受體結(jié)合篩選在一組80種受體中測試(TR2)和(TR3)結(jié)合其他細(xì)胞受體和核受體的可能性。實驗使用放射標(biāo)記的受體配體(激動劑或拮抗劑，取決于受體)，采用閃爍計計數(shù)來測量測試化合物抑制配體結(jié)合的能力。未發(fā)現(xiàn)明顯的受體結(jié)合(除CCK2和CCK1以外)。實施例8:臨床前研究:細(xì)胞的體外增殖在穩(wěn)定轉(zhuǎn)染了人胃泌素/CCK2受體基因(AGSGR)人胃腺癌細(xì)胞系中進(jìn)行的磺酰羅丹明B(SRB)增殖實驗中測試(TR2)和(TR3)的效力。SRB是結(jié)合蛋白的熒光染料，因此具有高速蛋白合成的細(xì)胞(增殖細(xì)胞)在SRB實驗中顯示高水平熒光。胃泌素片段G17具有對AGSGR細(xì)胞的抗增殖效果。因此，當(dāng)用G17處理時，在SRB實驗中細(xì)胞顯示較低的熒光水平。將(TR2)和(TR3)與陽性對照YF476和YM022進(jìn)行比較。濃度為100nM的(TR2)、YF476和YM022都完全抑制G17(10nM)的抗增殖效果。濃度為500nM的(TR3)具有同樣的效果。在不存在G17的情況下，測試化合物不影響AGSGR細(xì)胞增殖。實施例9:臨床前研究:胃瘺大鼠在有知覺的慢性胃瘺大鼠中測試皮下注射YF476、(TR2)和(TR3)對五肽胃泌素刺激的胃酸分泌的影響。所有治療均劑量依賴性地抑制酸分泌響應(yīng)。YF476、(TR2)和(TR3)的ED50值分別為0.012,0.03和0.3μmol/kg。實施例10:健康對象的藥代動力學(xué)在最初實驗中，健康志愿者以膠囊形式服用單次口服劑量100mg(TR2)作為活性藥物成分。測試血漿濃度。單次口服劑量100mg活性藥物成分之后(AUC＝439.1)(TR2)血漿濃度曲線下方的區(qū)域為單次口服劑量YF476100mg(AUC＝198.5)的類似制劑的大約兩倍。因此，觀察到(TR2)與YF476相比生物利用度更高。在進(jìn)一步的臨床研究中，健康志愿者(n＝8)以膠囊形式服用單次口服劑量5,15,50和100mg(TR2)作為活性藥物成分(API)。(膠囊制劑：TR2粉末(API)在硬明膠膠囊中，無賦形劑、未加工)。測試血漿濃度。在單次口服劑量100mgAPI(AUC0–24h(ng.h/mL)＝241.5)之后(TR2)的血漿濃度曲線(AUC)下方的平均面積是單次口服劑量YF476100mg(AUC0–24h＝81.3；n＝10)的類似制劑(YF476粉末(結(jié)晶)在硬明膠膠囊中，無賦形劑、未加工API)的大約三倍。因此，觀察到(TR2)與YF476相比在健康對象中具有更好的口服生物利用度。健康志愿者(n＝8)服用膠囊形式的單次口服劑量5,15,25和50mg(TR2-A)作為API(TR2-A(結(jié)晶)在硬明膠膠囊中，無賦形劑、未加工)。測試(TR2)和(TR2-A)的血漿濃度。在單次口服劑量50mgof(TR2-A)API(AUC0–24h＝212.5)之后(TR2)血漿濃度的曲線下方的面積與單次口服劑量(TR2)100mg(AUC0–24h＝241.5)的類似制劑大致相同。因此，觀察到(TR2-A)與(TR2)相比在健康對象中具有更好的口服生物利用度。此外，(TR2-A)的血漿濃度低(AUC0–24h<10),表明(TR2-A)用作(TR2)的前藥。實施例11:臨床研究:健康對象中的藥效五肽胃泌素誘導(dǎo)胃酸分泌，從而增加胃液中的H+濃度。在最初研究中，在健康志愿者中觀察到，與給予相應(yīng)劑量的YF476和五肽胃泌素輸注觀察到的結(jié)果相比，單次口服劑量5,25和100mg的(TR2)與五肽胃泌素輸注組合給藥對靜脈輸注五肽胃泌素誘導(dǎo)的胃反流液中的H+濃度增加產(chǎn)生類似的劑量依賴性抑制。因此，在健康對象中，(TR2)作為CCK2受體拮抗劑的效力與YF476類似。在進(jìn)一步臨床研究中，在健康志愿者中單次口服劑量5,15,50和100mg的(TR2)或5,15,25和50mg(TR2-A)與五肽胃泌素輸注組合給藥(i.v.劑量0.6μg/kg/h，2h)。(TR2-A)給藥后平均H+濃度曲線示于圖1。與給予YF476和五肽胃泌素輸注觀察到的結(jié)果相比，(TR2)和(TR2-A)均觀察到對靜脈輸注五肽胃泌素誘導(dǎo)的胃反流液中的H+濃度增加類似的劑量依賴性的抑制。與給予100mgYF476觀察到的結(jié)果相比，100mg(TR2)和50mg(TR2-A)對靜脈輸注五肽胃泌素誘導(dǎo)的胃反流液中的H+濃度增加產(chǎn)生類似的抑制。因此，在健康對象中，(TR2)作為CCK2受體拮抗劑的效力與YF476類似，并且(TR2-A)的效力大于(TR2)和YF476。觀察到的結(jié)果顯示(TR2)以劑量依賴性方式抑制五肽胃泌素的效果，并且對于完全抑制所需的(TR2-A)的劑量與(TR2)相比較低。本發(fā)明的實施方式已用實施例進(jìn)行描述，這些實施方式應(yīng)認(rèn)為是示例性而非限制性的。應(yīng)理解可以在不脫離本發(fā)明真實范圍的情況下作出形式和細(xì)節(jié)上的變化，這也是所附權(quán)利要求所限定的。當(dāng)前第1頁1 2 3 當(dāng)前第1頁1 2 3