本發(fā)明涉及用于癌癥療法中的改進的藥物性能并且展示較低毒性的Pt(IV)親脂性衍生物，以及包含其的納米載體。
背景技術(shù)：
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ecanoic)(十一(undecylic))酸、十二烷(月桂)酸、十三烷(tridecanoic)(十三(tridecylic))酸、十四烷(肉豆蔻)酸、十五烷(pentadecanoic)(十五(pentadecylic))酸、十六烷(棕櫚)酸、十七烷(珠光脂)酸、十八烷(硬脂)酸、十九烷(nonadecanoic)(十九(nonadecylic))酸、二十烷(花生)酸、二十一烷(heneicosanoic)(二十一(heneicosylic))酸以及二十二烷(山崳)酸。在其他實施方案中，B是C2-C7脂肪酸。在某些實施方案中，B選自：丙酸(初油酸)、丁酸(酪酸)、戊酸(纈草酸)、己酸(羊油酸)、以及庚酸(毒水芹酸)。本發(fā)明的化合物可以被定義為“鉑(Pt)絡(luò)合物”，其中鉑原子可以與多個配體締合并且可以采取不同的化合價的值。在某些實施方案中，鉑原子是鉑(III)、鉑(IV)、鉑(V)、或鉑(VI)。每個配體原子或基團(原子團，例如共價連接的)L可以通過任何化學(xué)的或物理的結(jié)合(連接)，例如保持Pt原子和至少一個配體原子在一起的共價鍵、離子鍵、范德華力或配位鍵，與Pt原子締合。典型地，鉑原子通過配位鍵與配體締合。與Pt原子締合的配體L的數(shù)目n(在形式“L(n)”中，整數(shù)n表示與Pt原子締合的1個、2個、3個、或4個配體L)也可以被定制，以便修改化合物的一個或更多個參數(shù)。在某些實施方案中，n是1。在某些實施方案中，n是2。在某些實施方案中，n是3。在某些實施方案中，n是4。配體L可以是單齒配體，即通過Pt原子和配體L的單個原子之間的單鍵締合。配體L也可以是多齒配體，其具有在絡(luò)合物中可以與Pt原子直接締合(或連接、配位)的多于一個原子。在某些實施方案中，化合物具有至少一個單齒配體。在某些實施方案中，化合物具有至少一個多齒配體。在某些實施方案中，至少一個多齒配體是雙齒配體。在某些實施方案中，至少一個多齒配體是三齒配體。在某些實施方案中，至少一個多齒配體是四齒配體。當(dāng)本發(fā)明的化合物是Pt絡(luò)合物時，它們可以呈現(xiàn)任何結(jié)構(gòu)異構(gòu)化、立體異構(gòu)化或光學(xué)異構(gòu)化。在某些實施方案中，化合物是順式異構(gòu)體。在某些實施方案中，化合物是反式異構(gòu)體。在某些實施方案中，化合物是經(jīng)式異構(gòu)體(mer-isomer)。在某些實施方案中，化合物是面式異構(gòu)體(fac-isomer)。在某些實施方案中，至少一個配體L是選自以下的鹵化物：F、Cl、Br、以及I。在這樣的實施方案中，鹵化物可以是Cl。在某些其他實施方案中，至少一個其他配體是胺。在某些實施方案中，化合物具有式(II)，其中L如上文所定義并且p是配體部分的數(shù)目，其為0、1或2。術(shù)語“L(p)”表示用于另外的L配體至Pt原子的可用的附接點的數(shù)目。在某些實施方案中，p是0。在某些實施方案中，p是1。在某些實施方案中，p是2。在其他實施方案中，至少一個配體L是胺，其可以選自：氨、伯胺、仲胺、非平面雜環(huán)脂肪族胺或雜環(huán)芳香族胺。根據(jù)某些實施方案，伯胺選自：甲胺、乙胺、正丙胺、異丙胺、正丁胺、正己胺、正庚胺以及正壬胺。根據(jù)其他實施方案，仲胺選自：二甲胺、二乙胺、二丙胺以及二丁胺。根據(jù)某些其他實施方案，非平面雜環(huán)脂肪族胺選自：哌嗪、2-甲基哌嗪、哌啶、2-羥基哌啶、3-羥基哌啶或4-羥基哌啶、4-哌啶基-哌啶、吡咯烷、4-(2-羥基乙基)哌嗪以及3-氨基吡咯烷。根據(jù)另外的實施方案，雜環(huán)芳香族胺選自：吡啶、2-氨基吡啶、3-氨基吡啶或4-氨基吡啶、2-皮考啉、3-皮考啉或4-皮考啉、喹啉、3-氨基喹啉或4-氨基喹啉、噻唑、咪唑、3-吡咯啉、吡嗪、2-甲基吡嗪、4-氨基喹哪啶以及噠嗪。在另外的實施方案中，n是2、3或4，并且其中至少2個配體L是相同的。在某些實施方案中，L是鹵化物或胺。在某些這樣的實施方案中，化合物可以選自式(III)和式(IV)的化合物：其中L如上文所定義并且p是配體部分的數(shù)目，其為0、1或2。在其他實施方案中，至少2個配體L是鹵化物并且其他配體L是胺。在另外的實施方案中，至少2個配體L是胺并且剩余配體是鹵化物。根據(jù)某些實施方案，化合物可以具有式(V)或式(VI)：如上文已經(jīng)注明，本發(fā)明的化合物包含脂肪酸部分A、脂肪酸部分B(A和B可以是相同的或不同的)，并且可以還包含至少一個配體L。在某些實施方案中，至少一個配體L選自本文中被指定為L1至L5的配體。L1是配體：其中i是0和5之間的整數(shù)；其中配體通過氧原子與Pt締合。L2是配體：其中j是0和2之間的整數(shù)，m是0和6之間的整數(shù)，并且Ra選自氫、被取代的或未被取代的烷基、被取代的或未被取代的環(huán)烷基、被取代的或未被取代的環(huán)烯基、被取代的或未被取代的環(huán)炔基、被取代的或未被取代的雜環(huán)基、被取代的或未被取代的芳基、被取代的或未被取代的雜芳基、被取代的或未被取代的雜環(huán)基、被取代的或未被取代的烯基、被取代的或未被取代的炔基、鹵素、被取代的或未被取代的-NR1R2、被取代的或未被取代的-OR3、被取代的或未被取代的-SR4、被取代的或未被取代的-S(O)R5、被取代的或未被取代的亞烷基-COOH、被取代的或未被取代的酯、OH、-SH、以及-NH、苯基、羥基；其中配體通過氧原子與Pt締合。R1、R2、R3、R4以及R5如上文所定義。L3是配體：其中k是0和2之間的整數(shù)，m是0和6之間的整數(shù)，并且Rb選自氫、被取代的或未被取代的烷基、被取代的或未被取代的環(huán)烷基、被取代的或未被取代的環(huán)烯基、被取代的或未被取代的環(huán)炔基、被取代的或未被取代的雜環(huán)基、被取代的或未被取代的芳基、被取代的或未被取代的雜芳基、被取代的或未被取代的雜環(huán)基、被取代的或未被取代的烯基、被取代的或未被取代的炔基、鹵素、被取代的或未被取代的-NR1R2、被取代的或未被取代的-OR3、被取代的或未被取代的-SR4、被取代的或未被取代的-S(O)R5、被取代的或未被取代的亞烷基-COOH、被取代的或未被取代的酯、OH、-SH、以及-NH、苯基、羥基；其中配體通過胺部分與Pt締合。R1、R2、R3、R4以及R5如上文所定義。L4是配體：其中配體通過胺部分與Pt締合。L5是配體：其中配體通過胺部分與Pt締合。在某些實施方案中，在根據(jù)式(I)的化合物中，L是L1或L2或L3或L4或L5或其任何組合。在其中n大于1的某些實施方案中，每個L獨立地選自L1至L5。在某些實施方案中，在其中n大于1的式(I)的化合物中，兩個配體是相同的并且其余的配體獨立地是L1或L2或L3或L4或L5。在某些實施方案中，至少一個配體L是L1并且化合物具有式(VII)：其中L如上文所定義并且p是配體部分的數(shù)目，其為0、1或2。在式(VII)的化合物的實施方案中，L可以是-NR1R2，其中R1和R2如本文所定義。在其他實施方案中，至少一個配體L是L4并且化合物具有式(VIII)：其中L如上文所定義并且p是配體部分的數(shù)目，其為0、1或2。在某些實施方案中，n是2，一個配體是L1并且另一個配體是L4。在這樣的實施方案中，本發(fā)明的化合物可以是式(IX)的化合物：在其中至少一個配體是L1或L2的其他實施方案中，至少一個其他配體L是鹵化物或胺。根據(jù)某些實施方案，n是2、3或4，至少一個配體是L1并且至少一個其他配體是鹵化物或胺。根據(jù)其他實施方案，n是2、3或4，至少一個配體是L4并且至少一個其他配體是鹵化物或胺。根據(jù)另外的實施方案，n是3或4，至少一個配體是L1或L4并且其他配體中的至少2個是相同的并且選自鹵化物和胺。在某些實施方案中，至少一個配體L通過選自以下的至少一個雜原子被結(jié)合至鉑原子：氮、氧和硫。在這樣的實施方案中，鉑原子和雜原子之間的鍵中的一些可以是共價的并且鍵中的一些可以是配位鍵。根據(jù)某些實施方案，本發(fā)明的化合物可以選自：其中在有關(guān)時，L如上文所定義并且p是配體部分的數(shù)目，其為0、1或2。在其他實施方案中，化合物具有在下文被示出的式(Va)或式(IXa)，其中C1-6烷基選自：–C1烷基、–C2烷基、–C3烷基以及–C4烷基。在某些實施方案中，化合物具有式(Va)或式(IXa)，其中C1-6烷基是甲基。在其他實施方案中，化合物具有式(Vb)或式(IXb)：在某些其他實施方案中，化合物具有式(Vc)或式(IXc)：在某些實施方案中，本發(fā)明的化合物是式(Va)或式(IXa)，其中C1-6烷基是甲基。在某些實施方案中，化合物是乙酸棕櫚酸奧沙利鉑，其在本文被稱為OXA-PAL-ACT(OPA)，是在圖1A中被指定為化合物B的化合物。因此，本發(fā)明提供式(I)的化合物OXA-PAL-ACT(OPA)、包含其的組合物、其用途以及其包封形式或顆粒形式。在本發(fā)明的另一方面中，提供式(I)的化合物，其包含與一個或更多個C8-22脂肪酸基團締合的鉑原子，條件是，所述脂肪酸不是C6-C9支鏈的烷基脂肪酸。在又一方面中，本發(fā)明提供與一個或更多個C8-22脂肪酸基團締合的Pt抗癌劑，條件是，所述脂肪酸不是C6-C9支鏈的烷基脂肪酸。在另一方面中，提供包含與一個或更多個C8-22脂肪酸基團締合的鉑原子的化合物，該化合物在辛醇/水混合物中具有約2和9之間的logP值，條件是，所述脂肪酸不是C6-C9支鏈的烷基脂肪酸。在本發(fā)明的另一方面中，提供在辛醇/水的雙溶劑體系中具有至少2的logP值的如所定義的式(I)的化合物。在某些實施方案中，本發(fā)明的化合物在辛醇/水溶劑體系中具有至少7的logP值。在其他實施方案中，本發(fā)明的化合物在辛醇/水中具有約2和約9之間的logP值。在其他實施方案中，本發(fā)明的化合物在辛醇/水中具有約2和4之間的logP值。值得注意的是，logP值是在化合物以游離的藥物形式或并入到載體內(nèi)而被注射到血流中之后穿過細胞膜的化合物可滲透性的量度。如本文所使用，“烷基”、“烯基”和“炔基”碳鏈，如果未被具體指定，則包含從1個至20個碳、或從2個至16個碳，并且是直鏈的或支鏈的。在某些實施方案中，碳鏈包含1個至10個碳原子。在其他實施方案中，碳鏈包含1個至6個碳原子。在某些其他實施方案中，碳鏈包含2個至6個碳原子。從2個至20個碳的烯基碳鏈，其在某些實施方案中包含1個至8個雙鍵；2個至16個碳的烯基碳鏈，在某些實施方案中，包含1個至5個雙鍵。從2個至20個碳的炔基碳鏈，在某些實施方案中包含1個至8個三鍵，并且在又某些其他實施方案中，可以包含1個至5個三鍵。本文示例性烷基、烯基和炔基包括但不限于甲基、乙基、丙基、異丙基、異丁基、正丁基、仲丁基、叔丁基、異己基、烯丙基(丙烯基)和炔丙基(丙炔基)。如本文所使用，“環(huán)烷基”指的是飽和的單環(huán)或多環(huán)環(huán)體系，在某些實施方案中具有3個至10個碳原子，在其他實施方案中具有3個至6個碳原子；環(huán)烯基和環(huán)炔基指的是分別地包含至少一個雙鍵和至少一個三鍵的單環(huán)或多環(huán)環(huán)體系。環(huán)烯基和環(huán)炔基在某些實施方案中可以包含3個至10個碳原子。在其他實施方案中，環(huán)烯基包含4個至7個碳原子，并且環(huán)炔基在又另外的實施方案中，包含8個至10個碳原子。環(huán)烷基、環(huán)烯基和環(huán)炔基的環(huán)體系可以包含可以以稠合的、橋接的或螺連接的方式被連接在一起的一個環(huán)或兩個或更多個環(huán)。如本所使用，“芳基”指的是包含從6個至10個碳原子的芳香族的單環(huán)或多環(huán)基團。芳基包括但不限于，諸如未被取代的或被取代的芴基、未被取代的或被取代的苯基、以及未被取代的或被取代的萘基的基團。如本文所使用，“雜芳基”指的是單環(huán)或多環(huán)芳香族環(huán)體系，在某些實施方案中具有約5個至約15個成員，其中環(huán)體系中的原子中的一個或更多個(在一個實施方案中為1個至3個)是雜原子，即不同于碳的元素，包括但不限于氮、氧或硫。雜芳基可以任選地被稠合至苯環(huán)。雜芳基包括但不限于呋喃基、咪唑基、嘧啶基、四唑基、噻吩基、吡啶基、吡咯基、噻唑基、異噻唑基、噁唑基、異噁唑基、三唑基、喹啉基以及異喹啉基。如本文所使用，“雜環(huán)基”指的是在一個實施方案中3元至10元，在另一個實施方案中4元至7元，在另外的實施方案中5元至6元的飽和的單環(huán)或多環(huán)環(huán)體系，其中環(huán)體系中的原子中的一個或更多個(在某些實施方案中1個至3個)是雜原子，即除了碳之外的元素，包括但不限于氮、氧或硫。在其中雜原子是氮的實施方案中，氮任選地被烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)基烷基、?；?、胍取代，或氮可以被季銨化以形成其中取代基如上文被選擇的銨基。術(shù)語“被取代的”指的是在如上文所定義的配體的至少一個原子上的取代。在某些實施方案中，取代基選自：烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、環(huán)炔基、芳基、雜芳基、雜環(huán)基、鹵素、–NR1R2、-OR3、–SR4、–S(O)R5、亞烷基-COOH、酯、-OH、-SH以及-NH。在某些實施方案中，(在某個配體上)取代基的數(shù)目是1個或2個或3個或4個或5個或6個或7個或8個或9個或10個取代基。根據(jù)某些實施方案，本發(fā)明的化合物呈鹽形式，典型地呈藥學(xué)上可接受的鹽形式。術(shù)語“鹽形式”表示包含本發(fā)明的化合物(即帶電荷的絡(luò)合物)和至少一種反離子的游離堿或游離酸形式。“藥學(xué)上可接受的鹽”指的是對于在哺乳動物(例如人類)中的藥物用途是安全的且有效的并且具有期望的生物活性的鹽。在某些實施方案中，鹽選自：鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、硝酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、酸式磷酸鹽、異煙酸鹽、乙酸鹽、乳酸鹽、水楊酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、泛酸鹽、酒石酸氫鹽、抗壞血酸鹽、琥珀酸鹽、馬來酸鹽、龍膽酸鹽、富馬酸鹽、葡糖酸鹽、葡糖醛酸鹽、蔗糖鹽、甲酸鹽、苯甲酸鹽、谷氨酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽以及雙羥萘酸鹽。本發(fā)明的化合物中合適的其他陰離子例如在Berge等人,"PharmaceuticalSalts,"J.ofPharmaceuticalScience,66:1-19(1977)中被描述。在本發(fā)明的方面中的另一個中，本發(fā)明提供包含如本文所描述的至少一種化合物的納米載體。在某些實施方案中，納米載體可以選自：納米顆粒、納米膠囊或其混合物。如本文所使用，本發(fā)明的“納米載體”是顆粒物質(zhì)，其是生物相容的并且對化學(xué)的和/或物理的破壞是足夠抗性的，使得足夠量的納米載體在施用到人類或動物身體內(nèi)之后大體上保持完整并持續(xù)足以能夠到達期望的靶組織(器官)的時間。通常，納米載體在形狀上是球形的，具有多達700nm的平均直徑。當(dāng)納米載體的形狀不是球形的時候，直徑指的是納米載體的最長尺寸。取決于與本發(fā)明的化合物有關(guān)的多種參數(shù)(例如溶解度、分子量、極性、電荷、反應(yīng)性、化學(xué)穩(wěn)定性、生物活性及其他)，化合物可以被包含(包封)在納米膠囊(NC)內(nèi)和/或被嵌入組成納米顆粒(NP)的基質(zhì)(matrixmaking-upnanoparticle)內(nèi)。對于所選擇的應(yīng)用，納米載體因此可以呈芯/殼(在下文中還被稱為納米膠囊)的形式，具有聚合物殼和包含至少一種本發(fā)明的化合物的芯。可選擇地，納米顆?？梢跃哂写篌w上均勻的組成，不具有明顯的芯/殼結(jié)構(gòu)特征。這些納米載體在本文被稱為納米顆粒(NP)。在某些實施方案中，納米載體的平均直徑在約100nm和200nm之間。在其他實施方案中，平均直徑在約200nm和300nm之間。在另外的實施方案中，平均直徑在約300nm和400nm之間，平均直徑在400nm和500nm之間。在另外的實施方案中，平均直徑在約600nm和700nm之間。在某些其他實施方案中，納米載體的平均直徑在約50nm和700nm之間。在其他實施方案中，平均直徑在約50nm和500nm之間。在其他實施方案中，平均直徑在約50nm和400nm之間。在另外的實施方案中，平均直徑在約50nm和300nm之間。在另外的實施方案中，平均直徑在約50nm和200nm之間。在另外的實施方案中，平均直徑在約50nm和100nm之間。納米載體可以各自大體上具有相同的形狀和/或尺寸。在某些實施方案中，納米載體具有直徑的分布，使得不多于0.01百分數(shù)至10百分數(shù)的顆粒具有比上文提及的平均直徑高或低大于10百分數(shù)的直徑，并且在某些實施方案中，使得不多于0.1百分數(shù)、0.2百分數(shù)、0.4百分數(shù)、0.6百分數(shù)、0.8百分數(shù)、1百分數(shù)、2百分數(shù)、3百分數(shù)、4百分數(shù)、5百分數(shù)、6百分數(shù)、7百分數(shù)、8百分數(shù)、或9百分數(shù)的納米載體具有比上文提及的平均直徑高或低大于10百分數(shù)的直徑。用于形成納米載體、納米膠囊和/或納米顆粒的示例性合適的材料是聚酯，包括聚乳酸(PLA)、聚乙醇酸(PGA)、聚羥基丁酸酯和聚己內(nèi)酯、聚(原酸酯)、聚酸酐、聚氨基酸、聚(氰基丙烯酸烷基酯)、聚磷腈、(PLA/PGA)和天冬氨酸酯的共聚物或聚環(huán)氧乙烷(PEO)。在某些實施方案中，納米載體是納米顆粒，所述納米顆粒包括第一基質(zhì)，其中所述至少一種本發(fā)明的化合物被嵌入所述基質(zhì)內(nèi)。在其他實施方案中，納米載體是納米膠囊，所述納米膠囊包括包封所述至少一種本發(fā)明的化合物或包含至少一種本發(fā)明的化合物的組合物的第一殼。納米載體中的每個可以被另一個包封層進一步封裝，從而形成雙層保護。因此，在某些實施方案中，納米載體還被包封在第二殼層內(nèi)，所述第二殼層可以包含與第一殼層的材料相同的或不同的材料。在其他實施方案中，納米載體還被嵌入第二基質(zhì)內(nèi)，第一和第二基質(zhì)可以包含相同的或不同的材料。為了增加到達靶器官的活性化合物的量，有時期望的是，提供包含多個被包裝在單個外殼內(nèi)的納米載體的產(chǎn)品。因此，在另一方面中，提供包含多個本發(fā)明的納米載體的納米膠囊或微米膠囊。另一個方面提供包含多個本發(fā)明的納米載體的納米顆?；蛭⒚最w粒。此類納米顆?；蛭⒚最w粒當(dāng)被腸胃外地施用時可以賦予長效劑型(long-actingdosageform)，或可以被用作用于本發(fā)明的化合物的口服、吸入或肺部遞送的粉劑。在某些實施方案中，包含多個本發(fā)明的納米載體的納米顆?；蛭⒚最w粒可以由疏水性聚合物形成。在這樣的實施方案中，多個納米載體可以(i)通過疏水性交聯(lián)蛋白例如人血清白蛋白(HSA)被包封(即形成雙納米包封)或(ii)被嵌入基質(zhì)例如由疏水性聚合物摻合物形成的基質(zhì)內(nèi)。此類疏水性聚合物摻合物可以是Eudragit:HPMC摻合物，其中Eudragit具有pH依賴性溶解度，而HPMC是水溶性的，不管pH怎樣。在本發(fā)明的方面中的另一個中，本發(fā)明提供包含如本文描述的化合物、納米載體、納米膠囊或微米膠囊、或納米顆粒或微米顆粒的組合物。典型地，組合物是藥物組合物。如本文所使用，“藥物組合物”包含治療有效量的本發(fā)明的化合物連同合適的稀釋劑、防腐劑、增溶劑、乳化劑、佐劑和/或載體。此類組合物是液體或凍干的或以其他方式干燥的制劑并且包括具有多種緩沖劑內(nèi)容物(例如，Tris-HCl、乙酸鹽、磷酸鹽)、pH和離子強度的稀釋劑、添加劑例如防止吸附至表面的白蛋白或明膠、洗滌劑(例如Tween20(吐溫20)、Tween80(吐溫80)、PluronicF68、膽汁酸鹽)、增溶劑(例如甘油、聚乙二醇)、抗氧化劑(例如抗壞血酸、焦亞硫酸鈉)、防腐劑(例如硫柳汞、芐醇、對羥基苯甲酸酯類)、膨脹物質(zhì)(bulkingsubstance)或張力改性劑(例如乳糖、甘露醇)、聚合物例如聚乙二醇至蛋白質(zhì)的共價附接、與金屬離子的絡(luò)合、或材料至聚合物化合物例如聚乳酸、聚乙醇酸、水凝膠等等的顆粒制劑中或至該顆粒制劑上的并入、或材料至帶負電荷或帶正電荷的脂質(zhì)體、微乳劑、膠束、單層或多層囊泡、紅細胞血影、或原生質(zhì)球或納米乳劑上的并入。此類組合物將影響物理狀態(tài)、溶解度、穩(wěn)定性、體內(nèi)釋放速率、以及體內(nèi)清除速率?？蒯尰蚓忈尳M合物包括在親脂性儲庫(lipophilicdepot)(例如脂肪酸、蠟、油)中的制劑。適于口服施用的制劑可以由以下組成：(a)液體溶液，例如溶解在稀釋劑例如水、鹽水、或橙汁中的有效量的化合物；(b)膠囊、小袋、片劑、錠劑、以及糖錠，每個包含預(yù)定量的作為固體或粒劑的活性成分；(c)粉劑；(d)在適合的液體中的懸浮液；以及(e)合適的乳液或自乳化制劑。液體制劑可以包括稀釋劑，例如水和醇，例如乙醇、芐醇、以及聚乙烯醇，添加或不添加藥學(xué)上可接受的表面活性劑、懸浮劑或乳化劑。膠囊形式可以是普通的硬殼或軟殼的明膠類型，包含例如，表面活性劑、潤滑劑以及惰性填充劑。片劑形式可以包括以下中的一種或更多種：乳糖、蔗糖、甘露醇、玉米淀粉、馬鈴薯淀粉、海藻酸、微晶纖維素、阿拉伯膠、明膠、瓜爾膠、膠體二氧化硅、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、滑石、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、硬脂酸鋅、硬脂酸，以及其他賦形劑、著色劑、稀釋劑、緩沖劑、崩解劑、潤濕劑、防腐劑、調(diào)味劑、以及藥理學(xué)上相容的載體。錠劑形式可以包括調(diào)味料通常地蔗糖和阿拉伯膠或黃蓍膠中的活性成分，以及包含惰性基質(zhì)(例如明膠和甘油，或蔗糖和阿拉伯膠、乳劑、凝膠)中的活性成分的軟錠劑，以及除了活性成分之外還包含如本領(lǐng)域已知的此類載體的類似物。適于腸胃外施用的制劑包括無菌的納米乳劑、可以包含抗氧化劑、緩沖劑、抑菌劑、和致使制劑與所意圖的接受者的血液等滲的溶質(zhì)的含水和非含水的等滲無菌注射溶液、以及包含懸浮劑、增溶劑、增稠劑、穩(wěn)定劑、和防腐劑的含水和非含水的無菌懸浮液?；衔锟梢砸运幬镙d體中的生理學(xué)上可接受的稀釋劑例如無菌的液體或液體的混合物被施用，所述無菌液體包括：水、鹽水、含水右旋糖和有關(guān)的糖溶液，諸如乙醇、異丙醇、或十六醇的醇，諸如丙二醇或聚乙二醇的二醇類，諸如2,2-二甲基-1,3-二氧戊環(huán)-4-甲醇的甘油縮酮類(glycerolketals)，諸如聚(乙二醇)400的醚類，油，脂肪酸，脂肪酸酯或甘油酯，或乙酰化的脂肪酸甘油酯，添加或不添加藥學(xué)上可接受的表面活性劑例如皂或洗滌劑、懸浮劑、例如果膠、卡波姆(carbomer)、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、或羧甲基纖維素、或乳化劑以及其他藥物佐劑。可以在腸胃外制劑中被使用的油包括石油、動物油、植物油、或合成油。油的特定的實例包括花生油、豆油、芝麻油、棉籽油、玉米油、橄欖油、礦脂、以及礦物油。用于腸胃外制劑的合適的脂肪酸包括油酸、硬脂酸、以及異硬脂酸。本發(fā)明的化合物可以被制成可注射制劑。對用于可注射組合物的有效藥物載體的要求是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的。見PharmaceuticsandPharmacyPractice,J.B.LippincottCo.,Philadelphia,Pa.,Banker和Chalmers,編輯,第238-250頁(1982),以及ASHPHandbookonInjectableDrugs,Toissel,第4版,第622-630頁(1986)。另外，本發(fā)明的化合物通過與多種基質(zhì)例如乳化基質(zhì)或水溶性基質(zhì)混合，可以被制成栓劑。適于陰道施用的制劑可以作為除了活性成分之外還包含如本領(lǐng)域已知的合適的此類載體的陰道栓、止血栓、乳膏、凝膠、糊劑、泡沫或噴霧制劑被呈遞。在某些實施方案中，組合物適于口服施用。在其他實施方案中，組合物適于靜脈內(nèi)施用。在某些其他實施方案中，組合物呈納米乳劑形式。乳劑可以包括但不限于形式O/W、W/O、W/O/W、O/W/O、W/O1/O2、W/O2/O1、O1/W/O2、O1/O2/W、O2/O1/W、O2/W/O1以及這些形式與連續(xù)相或雙連續(xù)相的組合。本發(fā)明的另一方面提供用于治療增殖性紊亂或延遲增殖性紊亂的進展的如本文描述的化合物、納米載體、納米膠囊或微米膠囊、或納米顆?；蛭⒚最w粒。在又另一方面中，提供如本文描述的化合物、納米載體、納米膠囊或微米膠囊、或納米顆?；蛭⒚最w粒用于制備用于治療增殖性紊亂或延遲增殖性紊亂的進展的藥劑的用途。本發(fā)明的另外的方面提供用于治療增殖性紊亂或延遲或預(yù)防增殖性紊亂的進展的方法，該方法包括向需要其的受試者施用有效量的如本文描述的化合物、納米載體、納米膠囊或微米膠囊、或納米顆?；蛭⒚最w粒。術(shù)語“增殖性紊亂”涵蓋影響細胞生長、分化或增殖過程的疾病或紊亂。在某些實施方案中，增殖紊亂是癌癥。如本文所使用，術(shù)語“癌癥”涵蓋特征是引起惡性生長或腫瘤的異常的且不受控制的細胞分裂的任何贅生性疾病。如本文所使用，癌癥可以指的是實體腫瘤或腫瘤轉(zhuǎn)移。癌癥的非限制性實例是卵巢癌；以及胰腺癌；鱗狀細胞癌(例如上皮鱗狀細胞癌)；肺癌，其包括小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺的腺癌以及肺的鱗狀癌；腹膜癌；肝細胞癌；胃部(gastric)癌或胃(stomach)癌，其包括胃腸道癌；胰腺癌；惡性膠質(zhì)瘤；宮頸癌；卵巢癌；肝癌；膀胱癌；肝細胞瘤；乳腺癌；結(jié)腸癌；直腸癌；結(jié)腸直腸癌；子宮內(nèi)膜癌或子宮癌；唾液腺癌；腎臟癌或腎癌；前列腺癌；外陰癌；甲狀腺癌；肝惡性腫瘤；肛門癌；陰莖癌；以及頭頸癌。實體癌癥以許多形式出現(xiàn)，例如乳腺癌、前列腺癌、肉瘤、以及皮膚癌。皮膚癌的一種形式是黑素瘤。在某些實施方案中，癌癥選自：肺癌、結(jié)腸癌、胰腺癌以及卵巢癌。如本文所用，術(shù)語“治療”指的是施用治療量的、對減輕與疾病相關(guān)的不期望的癥狀有效的本發(fā)明的組合物，以在此類癥狀發(fā)生之前預(yù)防它們的表現(xiàn)，以減緩疾病的進展(本文還被稱為“延遲進展”)、減緩癥狀的惡化，以增強緩解期的開始、減緩在疾病的進展慢性階段引起的不可逆的損害，以延遲所述進展階段的開始，以減輕嚴重程度或治愈疾病，以改進存活率或更迅速的恢復(fù)，或以防止疾病發(fā)作或以上兩種或更多種的組合。如本文所使用，術(shù)語“有效量”通過如可以是本領(lǐng)域已知的此類考量來確定。量必須對實現(xiàn)如上文描述的期望的治療效果是有效的，其尤其取決于將被治療的疾病的類型和嚴重程度和治療方案。有效量典型地在合適地設(shè)計的臨床試驗(劑量范圍研究)中被確定并且本領(lǐng)域技術(shù)人員將了解如何適當(dāng)?shù)剡M行此類試驗以確定有效量。如眾所周知的，有效量取決于多種因素，包括配體與受體的親和力、其在體內(nèi)的分布概況、多種藥理學(xué)參數(shù)例如在體內(nèi)的半衰期，取決于不期望的副作用(如果有的話)，取決于例如年齡和性別的因素等等。在某些實施方案中，有效量的化合物通過以下途徑中的一種或更多種被施用：口服的、直腸的、經(jīng)粘膜的、經(jīng)鼻的、腸道的、腸胃外的、肌內(nèi)的、皮下的、髓內(nèi)注射、鞘內(nèi)的、直接心室內(nèi)的、靜脈內(nèi)的、腹膜內(nèi)的、鼻內(nèi)的、或眼內(nèi)的注射。本發(fā)明的另外的方面提供包含如本文描述的組合物和使用說明書的試劑盒。在另一方面中，本發(fā)明提供作為前藥的本發(fā)明的化合物。如本文所使用，術(shù)語“前藥”指的是通過某些生理化學(xué)過程在體內(nèi)被轉(zhuǎn)化成母體藥物(活性成分)的劑(例如，在生理條件下被轉(zhuǎn)化成期望的藥物形式的前藥)。本發(fā)明的前藥是有用的，因為其可以比母體藥物更易于施用，其是較小毒性的并且提供改進的生物利用度。在施用之后，前藥酶促地或化學(xué)地被裂解以在血液或組織中遞送活性藥物。在某些實施方案中，前藥在生理pH(7.4)中釋放活性劑(活化的)。在某些實施方案中，前藥在低于生理pH的pH下被活化。在某些實施方案中，前藥在約6的pH下被活化。附圖簡述為了更好地理解本文公開的主題并且為了例示主題可以如何在實踐中進行，現(xiàn)在將參照附圖通過僅非限制性實施例的方式描述實施方案，在附圖中：圖1A是OXA-PAL-ACT的合成的描述；圖1B示出OXA-PAL-ACTNP構(gòu)建體的示意圖。用于在人類癌細胞內(nèi)釋放活性奧沙利鉑的Pt(IV)前藥細胞內(nèi)還原的化學(xué)結(jié)構(gòu)。圖2A示出OXA-PAL-ACT1H-NMR光譜；圖2B示出OXA-PAL-ACT195Pt-NMR光譜：1589ppm。圖3A-C示出OXA-PAL-ACTNP的TEM圖像。圖4A-B示出OXA-PAL-ACTNP的SEM圖像：(圖4A)SE模式和(圖4B)BSE模式。圖5示出OXA-PAL-ACTNP的尺寸的代表性測量。圖6A示出OXA-PAL-ACTNP在SKOV-3細胞系內(nèi)的細胞毒性的體外評估；圖6B示出OXA-PAL-ACTNP在SKOV-3-luc細胞系內(nèi)的細胞毒性的體外評估。圖7A-B示出奧沙利鉑衍生物對PC-3細胞系的細胞毒性作用：(A)全部濃度范圍；(B)0-5μg/ml。圖8A-D示出(圖8A)奧沙利鉑衍生物對代表前列腺癌的PC-3luc細胞系單層的細胞毒活性；(圖8B)奧沙利鉑衍生物對BxPC-3細胞系的細胞毒活性；(圖8C)奧沙利鉑衍生物對代表卵巢癌的ovcar-8細胞系單層的細胞毒活性；以及(圖8D)奧沙利鉑衍生物對代表卵巢癌的SKOV-3細胞系單層的細胞毒活性。圖9示出用于奧沙利鉑和OXA-PAL-ACT(SKOV-3細胞系)的MTT板。圖10A-B示出奧沙利鉑和OXA-PAL-ACT對代表卵巢癌的(圖10A)A2780-cisR細胞系和(圖10B)A2780細胞系的細胞毒性作用。圖11示出OXA-PAL-ACT對非癌癥細胞系的細胞毒性作用。在HaCaT和RASM中的治療比率分別高于1.8和2。HaCaT細胞系單層代表人類角質(zhì)細胞，RASM系單層代表大鼠主動脈平滑肌細胞。圖12A-C示出SKOV-3細胞凋亡。在SKOV-3細胞中的凋亡細胞死亡通過使用膜聯(lián)蛋白V和碘化丙啶(PI)雙染色的流式細胞儀分析來評估。將細胞用5μg/ml(圖12B)和50μg/ml(圖12C)OXA-PAL-ACT處理持續(xù)24h。對照在圖12A中被示出。凋亡細胞是[膜聯(lián)蛋白V(+)PI(+)細胞和膜聯(lián)蛋白V(+)PI(-)細胞]。圖13A-B示出用變化的藥物濃度溫育之后，在SKOV-3-luc細胞中暴露24h之后如通過ICP-MS測量的全細胞Pt累積(細胞攝取)。值是平均值±標(biāo)準偏差(n＝3)：(圖13A)24h處理SKOV-3-luc之后，體外Pt累積/細胞；(圖13B)24h處理SKOV-3-luc之后，體外Pt累積/蛋白質(zhì)。圖14A-B示出用變化的藥物濃度溫育之后，在SKOV-3細胞中暴露24h之后如通過ICP-MS測量的全細胞Pt累積(細胞攝取)。值是平均值±標(biāo)準偏差(n＝3)：(圖14A)24h處理SKOV-3之后，體外Pt累積/細胞；(圖14B)24h處理SKOV-3之后，體外Pt累積/蛋白質(zhì)。圖15示出在SKOV-3細胞中暴露24h之后如通過ICP-MS測量的DNA鉑化(DNAplatination)的程度。值是平均值±標(biāo)準偏差(n＝7)。統(tǒng)計學(xué)分析使用SPSS進行并且揭示，觀察到的DNA鉑化值的差異是顯著的(**P<0.01,ANOVA以及**P<0.01,克魯斯卡爾-沃利斯檢驗(Kruskal-WallisTest))。事后分析示出，OXA和OXA-PAL-ACT溶液/NP之間存在顯著性差異(**P<0.01,Tukey)。圖16A示出通過生物發(fā)光熒光素酶成像測定的在活體小鼠中的SKOV-3luc腫瘤生長的縱向檢測(longitudinaldetection)和定量。統(tǒng)計學(xué)分析使用SPSS進行并且揭示，觀察到的差異是顯著的(單向ANOVA**P<0.01)。使用Dunnett檢測(2-側(cè))的事后分析示出，在對照組和每個OPA治療組之間存在顯著性差異(**P<0.01)。圖16B示出從腫瘤細胞注射當(dāng)天直到死亡(根據(jù)批準的倫理委員會安樂死要求。該研究在第93天時終止)的卡普蘭-邁耶存活曲線(Kaplan-Meiersurvivalcurve)。圖17示出從腫瘤接種(第0天)開始貫穿全部研究時間段直到安樂死的體重跟蹤。變化被記錄為在腫瘤細胞注射之前一天觀察到的初始體重的百分數(shù)(在第0天時是100％)。結(jié)果作為平均值±SD被提供，直到最后存活的動物(根據(jù)批準的倫理委員會安樂死要求)。圖18A通過生物發(fā)光熒光素酶成像測定的、在SCID-bg活體小鼠(n＝7-9)中從細胞注射開始(第0天直至第47天)的BxPC-3-luc2腫瘤生長的縱向檢測和定量。結(jié)果作為平均值±SEM被提供。統(tǒng)計學(xué)分析使用SPSS進行并且揭示，觀察到的組之間的差異是顯著的(單向ANOVA**P<0.01)。圖18B示出從腫瘤接種(第0天)開始貫穿全部研究時間段直到安樂死的體重跟蹤。結(jié)果作為平均值±SD被提供，直到最后存活的動物(根據(jù)批準的倫理委員會安樂死要求)。圖19通過生物發(fā)光熒光素酶成像測定的、在SCID-bg活體小鼠(n＝9-10)中從細胞注射(第0天直至第33天)的HCT-116-luc2腫瘤生長的縱向檢測和定量。結(jié)果作為平均值±SEM被提供。統(tǒng)計學(xué)分析使用SPSS進行并且揭示，觀察到的組之間的差異是顯著的(單向ANOVA**P<0.01)。具體實施方式材料和方法材料奧沙利鉑從AKScientific,Inc.USA獲得。棕櫚酸、噻唑藍溴化四唑、氯甲酸乙酯以及半胱氨酸購自Sigma-Aldrich。油酸(FisherScientific)和PLGA50KDa、RG504H(BoehringerIngelheim批號1035006)。LipoidE80(LipoidGmbH-Germany，批號1031157)。所有有機溶劑是HPLC級別的并且購自J.TBaker(Deventer,Holland)。乙酸棕櫚酸奧沙利鉑(OXA-PAL-ACT，圖1A中的化合物B)合成OXA-ACT-OH(A)的合成將100mg(0.252mmol)的奧沙利鉑溶解在20mL乙酸中并且向其添加1μL的30％H2O2。將混合物在室溫下攪拌直到所有奧沙利鉑完全溶解(4-5小時)。將過量的乙酸通過真空蒸發(fā)除去并且將產(chǎn)生的白色固體用二乙醚和丙酮洗滌并且通過真空蒸發(fā)干燥。將化合物通過195PtNMR和1HNMR表征。收率：51％。OXA-PAL-ACT(B)的合成棕櫚酸酐的合成將500mg棕櫚酸(1.95mmol)溶解在20mL二氯甲烷中并且向其添加201.2mgN,N'-二環(huán)己基碳二亞胺(0.5當(dāng)量，0.975mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌持續(xù)12h。反應(yīng)的進程通過用乙酸乙酯作為流動相的TLC來檢測。將形成的N,N'-二環(huán)己基脲從反應(yīng)混合物中濾去并且將過量的二氯甲烷通過蒸發(fā)除去。在除去二氯甲烷之后，將獲得的白色固體重新溶解在小量的二氯甲烷中并且將沉淀的N,N'-二環(huán)己基脲濾去。將此過程重復(fù)四次以完全除去N,N'-二環(huán)己基脲。形成的棕櫚酸酐通過1HNMR來表征。收率：89％。OXA-PAL-ACT的合成將50mgOXA-ACT-OH(0.106mmol)溶解在5mLDMF中并且向其添加78.4mg棕櫚酸酐(1.5當(dāng)量，0.159mmol)。將反應(yīng)混合物在400℃下攪拌持續(xù)12h(過夜)。反應(yīng)的完成通過195PtNMR來檢查(在+1390ppm處的峰的消失以及在+1589ppm處的新的峰的形成)。將未反應(yīng)的酸酐從反應(yīng)混合物中濾去并且將DMF通過真空蒸發(fā)除去，產(chǎn)生粘至圓底燒瓶的壁的淺黃色固體。OXA-PAL-ACT的純化在DMF的蒸發(fā)之后，將1mL甲醇添加至獲得的固體并且將混合物充分地振搖(以通過甲醇溶解雜質(zhì)和未反應(yīng)的棕櫚酸酐)。將不溶性白色沉淀通過離心收集并且用小量的甲醇洗滌兩次并且在真空中干燥。然后，將產(chǎn)物使用HPLC進一步純化。將獲得的化合物通過195PtNMR和1HNMR表征。收率：31％。LogP確定OXA-PAL-ACT的分配系數(shù)(Pow)在正辛醇和水中通過搖瓶法被確定，并且LogP被如下計算：體外研究細胞系和細胞溫育條件體外實驗在肺癌(A549)、前列腺癌(DU145和PC-3)、胰腺癌(BxPC-3)和卵巢癌(SKOV-3和OVCAR-8)的細胞系中進行。A549細胞、BxPC-3細胞和OVCAR-8細胞在補充有10％牛胎兒血清(Gibco)、1％L-谷氨酰胺、100U/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素以及0.13％w/w慶大霉素的RPMI培養(yǎng)基中生長。PC-3細胞在DMEM加10％牛胎兒血清、1％L-谷氨酰胺、100U/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素以及1％丙酮酸鹽中培養(yǎng)。DU145細胞在補充有10％牛胎兒血清、100U/ml青霉素、以及100μg/ml鏈霉素的RPMI1640培養(yǎng)基中生長。SKOV-3細胞在補充有10％牛胎兒血清、100U/ml青霉素、以及100μg/ml鏈霉素的McCoy’s5A培養(yǎng)基中培養(yǎng)。將細胞系保持在37℃下在5％CO2下。所有細胞培養(yǎng)產(chǎn)品從BiologicalIndustries(BeitHaEmek,Israel)獲得。將藥物溶解在DMSO中并且添加至合適的培養(yǎng)基。在絕不會使細胞暴露至大于0.5％DMSO即50μg/ml最大濃度的范圍內(nèi)選擇藥物濃度；將0.5mg的OXA-PAL-ACT溶解在50μlDMSO中并且然后添加至10ml細胞培養(yǎng)基。體外細胞毒性測定為了評估多種藥物的效力，將細胞接種在無菌24孔板中并且在藥物的存在下在37℃、5％CO2下溫育持續(xù)72h/120h。使用(3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5二苯基溴化四唑)(MTT)測定法定量活細胞數(shù)。將細胞用MTT溫育持續(xù)2h，添加DMSO以溶解晶體并且將板在540nm下測量。相對于每個測定的對照，構(gòu)建生活力(％)圖。將數(shù)據(jù)在圖中標(biāo)繪，線將點連接，并且值從內(nèi)推的圖中被確定。在細胞中的鉑含量的確定將SKOV-3細胞和SKOV-3LUC細胞一式三份地接種在24孔板中(50×103個細胞/孔)，允許達到80％-90％細胞覆蓋(confluence)，并且用奧沙利鉑、OXA-PAL-ACT和OXA-PAL-ACTNP5μg/ml、15μg/ml、25μg/ml處理持續(xù)24h(37℃)。在溫育之后，將包含藥物的培養(yǎng)基除去，并且將細胞用冷的PBS沖洗兩次，胰蛋白酶化并且離心成沉淀物(4400rpm,5min)。將500μl的硝酸添加至細胞沉淀物，并且在70℃下溫育過夜。通過使用0.1％SDS和1％硝酸裂解溶液稀釋來制備樣品，并且通過ICP-MS分析Pt含量。用DNeasy血液和組織試劑盒(Qiagen)從細胞系中分離并且純化DNA。OXA-PAL-ACT納米顆粒的制備OXA-PAL-ACT的納米球通過溶劑沉積法(納米沉淀)來制備。典型地，將7mgOXA-PAL-ACT、14mgPLGA50KDa、7mglipoidE80和1.5mgOCA溶解在4ml(1:20)乙醇/丙酮混合物中。將有機相添加至2.5ml的包含0.1％w/vHS15的水溶液。將懸浮液在900rpm下攪拌超過15min，并且然后使用空氣流通過溶劑的蒸發(fā)濃縮至2.5ml的最終體積，隨后在4400rpm下離心持續(xù)10min。結(jié)果和討論OXA-PAL-ACT合成和表征OXA-PAL-ACT使用1H-NMR、195Pt-NMR、HPLC(圖2A-2B)和元素分析(表1)來鑒定。表1：OXA-PAL-ACT的元素分析值CHN理論值(％)43.876.803.94分析結(jié)果(％)43.696.613.89觀察到的LogP值是2.76±0.14(n＝5)，而計算值(CLogP)是8.57(通過Chemdraw軟件)。OXA-PAL-ACTNP的制備和表征在合成OXA-PAL-ACT化合物之后，獲得它的球形納米顆粒。TEM、SEM和AFM被用于表征OXA-PAL-ACTNP的形態(tài)學(xué)和尺寸。結(jié)果示出，其全部采取球形形狀，其平均直徑在從150nm至230nm的范圍內(nèi)，還通過MalvernZetasizer(MalvernInstruments,MalvernUK)確定。ζ電勢值在從-45mV至-50mV的范圍內(nèi)。此外，注意到，獲得OXA-APL-ACT的高包封收率(encapsulationyield)(>95％)，并且在NP內(nèi)的OXA-APL-ACT的并入在21.5％w/w至22.7％w/w的范圍內(nèi)。(圖3-5和表2)表2：OXA-PAL-ACT和空白NP的物理化學(xué)性質(zhì)以藥物用途為目的，為了儲存較大批量的NP，對于開發(fā)用于這些NP的凍干的工藝存在需求。在藥物包封之后，使用martinchristepsilon2-6d儀器冷凍干燥NP。當(dāng)用蔗糖(5％w/v)作為防凍劑凍干時，NP在物理上是穩(wěn)定的。在冷凍干燥的NP保持在4℃持續(xù)1個月之后，沒有尺寸、ζ電勢或藥物含量的顯著變化被檢測到，此外，NP的體外細胞毒活性被保持(圖6A-6B)。OXA-PAL-ACT生物性質(zhì)的評估如在圖7-11和表3A-3B中可以看到的，奧沙利鉑衍生物的IC50值在多種癌細胞系中在120h處理之后被確定。OXA-PAL-ACT具有針對癌細胞的獨特的效能，具有比奧沙利鉑更大的效力，此外OXA-PAL-ACT具有針對對鉑療法典型地是耐藥的多種癌細胞的廣譜的活性。表3A：在多種癌細胞系中在120h處理之后，奧沙利鉑衍生物的IC50值的總結(jié)*N.D-未確定(IC50值高于最大測試濃度-50μg/ml)。**數(shù)據(jù)來自三次獨立的實驗。表3B：在多種癌細胞系中在120h處理之后，奧沙利鉑衍生物的IC50值的總結(jié)*N.D-未確定(IC50值高于最大測試濃度-50μg/ml)。**數(shù)據(jù)來自三次獨立的實驗。如在圖10中所示出，OXA和OXA-PAL-ACT針對兩種卵巢癌細胞系的活性被確定。A2780是順鉑耐藥性細胞系A(chǔ)2780-cisR的母系，因此，耐藥性因子(resistancefactor)從劑量應(yīng)答曲線的IC50值來計算。OXA和OXA-PAL-ACT的耐藥性因子分別是5.2和1，這指示OXA-PAL-ACT可以針對對鉑療法典型地是耐藥的癌癥類型是有效的。在SKOV-3細胞中的凋亡細胞死亡通過使用膜聯(lián)蛋白V和碘化丙啶(PI)雙染色的流式細胞儀分析來評估。將細胞用5μg/ml和50μg/mlOXA-PAL-ACT處理持續(xù)24h。結(jié)果在圖12中被提供。鉑的細胞累積是細胞鉑藥物藥理學(xué)中的關(guān)鍵步驟。為了檢查OXA-PAL-ACT在癌細胞中的相對累積，在SKOV-3細胞和SKOV-3-luc細胞暴露至在變化的藥物濃度下的奧沙利鉑、OXA-PAL-ACT或OXA-PAL-ACTNP之后，在SKOV-3細胞和SKOV-3-luc細胞中的總Pt含量被測量。被歸一化成總細胞蛋白質(zhì)或1x105個細胞的數(shù)據(jù)在圖13-14中被提供。相比于奧沙利鉑的細胞累積，OXA-PAL-ACT和OXA-PAL-ACTNP的細胞累積是明顯較高的。在圖15中示出的、在SKOV-3細胞24h暴露至25μg/ml的奧沙利鉑、OXA-PAL-ACT或OXA-PAL-ACTNP之后測量的核DNA鉑化的程度的分析指示相比于奧沙利鉑，OXA-PAL-ACT的較高的DNA鉑化。普遍接受的是，通過鉑藥物的結(jié)合誘導(dǎo)的DNA損傷是其細胞毒性性質(zhì)的主要原因。因此，針對SKOV-3人類卵巢癌細胞系，較高的DNA鉑化不令人驚訝地表現(xiàn)為OXA-PAL-ACT相比于游離的奧沙利鉑的增加的細胞毒性。NP在SKOV-3細胞中通過CLSM的細胞攝取在溫育之后15min，已經(jīng)觀察到NP的細胞攝取和定位(localization)并且在第6h是最明顯的。將核通過DAPI染色，而使用若丹明熒光標(biāo)記的NP在細胞質(zhì)內(nèi)容易地被可視化。事實上，觀察到NP的增加的細胞質(zhì)累積作為稀釋(1:100相對于1:200)的函數(shù)并且相比于1、3時間間隔，在第6h，具有更顯著的核周圍的定位模式和核定位模式。卵巢癌小鼠模型為了卵巢癌小鼠模型的誘導(dǎo)，分成4個組的5-6周齡的重癥綜合免疫缺陷(SCID)小鼠用2x106SKOV-3luc細胞直接注射到腹腔中(腹腔注射(i.p.))。將細胞懸浮在100μlPBS中。給藥方案將治療通過靜脈內(nèi)注射施用一周一次，總計4次治療。治療組包括在5mg/kg體重的劑量下的游離的奧沙利鉑、在15mg/kg體重的劑量下的OXA-PAL-ACT、作為對照的注射溶液(媒介物)、以及15mg/kg的OXA-PAL-ACTNP。所有治療以相同治療方案被給出。對于腫瘤驗證和腫瘤生長跟蹤，使用CCCD攝像機(IVIS,CaliperLifeSciences,XenogenCorporation)每7天進行生物發(fā)光成像。腹膜內(nèi)注射D-熒光素并且將小鼠通過3％異氟烷麻醉。將動物放在IVIS成像盒中的黑色紙上并且背側(cè)地和腹側(cè)地成像。以輻射亮度單位(光子/秒/cm2)記錄總發(fā)光(背側(cè)的和腹側(cè)的)。在細胞注射和腫瘤接種的驗證后第30天，將動物分成具有相等的平均輻射亮度值的四個組。如在圖16A中可以看到的，治療從第30天開始。OXA溶液的最大耐受劑量是5mg/kg，而由于媒介物的毒性，在溶液中的OXA-PAL-ACT的最大耐受劑量是15mg/kg。注意的是，并入在NP內(nèi)的OXA-PAL-ACT在30mg/kg的劑量下是良好地耐受的?？梢杂^察到的是，從第60天，在溶液和在NP中的OXA-PAL-ACT兩者均比OXA更有效。在相同劑量下的OXA-PAL-ACT溶液和NP之間不存在差異，如在圖16B中所描述。此外，在圖17中，隨時間的體重變化被提供。盡管如通過從細胞接種接近第50天開始的明顯的重量減少所反映的，OXA是毒性的，然而包括OXA-PAL-ACT溶液和NP的剩余的制劑與對照媒介物類似地不減少動物體重并且還注意到一些增加，這示出OXA-PAL-ACT制劑在視覺上是良好地耐受的。這些結(jié)果是非常令人鼓舞的并且在將來向臨床醫(yī)生打開新穎的治療機會，提供戰(zhàn)勝威脅生命的癌癥疾病的新的治療武器(therapeuticarsenal)的。胰腺癌將5-6周齡SCID小鼠用2x106BxPC-3-luc細胞皮下地接種。在腫瘤接種后第7天，將小鼠分成具有相等的平均輻射亮度值的四個組。將治療通過靜脈內(nèi)注射(尾部)施用一周一次，總計4次治療。新穎的化合物(游離的和并入NP內(nèi)的)和OXA的抗增殖活性在HCT116-luc2細胞系(人類結(jié)腸直腸癌)和BxPc-3-luc2細胞系(人類胰腺癌)中通過MTT測定法來確定。產(chǎn)生的50％生長抑制濃度(IC50)值在表4中被提供。表4.OXA、OXA-PAL-ACT(OPA)、以及OPANP在兩種癌癥細胞系中的IC50值。胰腺腫瘤通過熒光素酶轉(zhuǎn)染的胰腺癌細胞BxPc-3-luc2至SCID-bg小鼠的皮下注射被誘導(dǎo)。腫瘤發(fā)育和進展通過生物發(fā)光成像來驗證。在腫瘤細胞注射之后第八天，開始四次治療的周期(靜脈內(nèi)途徑)(一周一次)。相比于OXA和對照，OPA和OPANP在胰腺腫瘤生長抑制方面是相等地且顯著地更有效。此外，在此特定的細胞系中沒有示出任何效力的對照和OXA之間不存在差異。結(jié)腸癌模型將5-6周齡SCID小鼠用1x106HCT-116-luc2細胞皮下地接種。在腫瘤接種之后第1天，開始治療。將治療通過靜脈內(nèi)注射(尾部)施用每四天一次，總計4次治療。圖19示出通過生物發(fā)光熒光素酶成像測定的、在SCID-bg活體小鼠(n＝9-10)中從細胞注射(第0天直至第33天)的HCT-116-luc2腫瘤生長的縱向檢測和定量。結(jié)果作為平均值±SEM被提供。統(tǒng)計學(xué)分析使用SPSS進行并且揭示，觀察到的組之間的差異是顯著的(單向ANOVA**P<0.01)。事實上，等效劑量被感染，因為9mg/kgOPA等效于5mg/kgOXA?？梢宰⒁獾剑瑢φ盏哪[瘤隨時間逐漸地且顯著地生長，而最顯著的抑制效果由OPANP在從腫瘤接種的33天的時間間隔時被引出。OPANP的結(jié)果在腫瘤的抑制方面比由OXA在等效的劑量下引出的抑制效果明顯地更有效。然而，在OPA溶液和OPANP之間或在OPA溶液和OXA溶液之間不存在明顯的效力差異(圖19)。比較研究新的Pt化合物的分配系數(shù)在正辛醇和水中通過搖瓶法被確定。產(chǎn)生的logP值在表5中被報告。如所預(yù)期，新的衍生物的測量的logP值大于OXA，指示其固有的親脂性特性。表5.Pt化合物的195PtNMR位移、實驗地測量的logP、以及通過循環(huán)伏安法測量的還原電勢。[a]相對于Ag/AgCl。OXA-PAL-ACT(OPA)生物性質(zhì)的評估新穎的化合物和奧沙利鉑的抗增殖活性在PC-3細胞系、PC-3-luc(人類前列腺癌)細胞系、BxPC-3(人類胰腺癌)細胞系、OVCAR-8細胞系、SKOV-3(人類卵巢癌)細胞系、CT-26-luc(鼠科結(jié)腸直腸癌)細胞系中通過MTT測定法被確定。將細胞連續(xù)地處理持續(xù)120h。產(chǎn)生的50％生長抑制濃度(IC50)值在表6中被總結(jié)。OPA示出針對不同癌細胞系的獨特的效能，具有比OXA更強的細胞毒性。此外，其具有針對對基于鉑的化合物典型地耐藥的癌細胞的廣譜的活性。表6.在多種癌細胞系中120h溫育之后，OXA衍生物的IC50值。*值是從三次獨立的實驗獲得的平均值±標(biāo)準偏差。OXA和OPA針對一對順鉑敏感性和耐藥性的卵巢癌細胞系A(chǔ)2780和A2780-cisR的活性作為濃度的函數(shù)被確定。A2780cisR通過減少的攝取、增強的DNA修復(fù)/耐受、以及升高的還原的谷胱甘肽(GSH)水平的組合對順鉑是耐藥的。耐藥性因子是在耐藥細胞系中的IC50值與在母體細胞系中的IC50值的比率(表7)，其指示OPA可以克服獲得性順鉑耐藥性并且可以針對對鉑療法典型地是耐藥的癌癥類型是有效的。表7.化合物針對A2780、A2780-cisR的IC50(μM)值和RF[a]IC50值是對于50％細胞死亡所需的藥物濃度并且是三次獨立的實驗的平均值±SD。[b]代表耐藥性因子的RF是在耐藥細胞系中的IC50值與在母體細胞系中的IC50值的比率。應(yīng)當(dāng)強調(diào)的是，不考慮細胞系，OPA一直是比ODP二棕櫚酸奧沙利鉑更有細胞毒性的且更有效的，這表明LogP的值不是影響細胞毒性效果的唯一的參數(shù)，而且分子的兩親性也確實影響細胞毒性效果。顯然地，需要接近2的值的一定的logP值以允許癌細胞的良好的且迅速的可滲透性，如由表6和表7中所描述的結(jié)果反映的。在溫育之后15min，已經(jīng)觀察到NP的細胞攝取和定位并且最明顯的是在第6h。將核通過DAPI染色，而使用PE麗絲胺若丹明B熒光標(biāo)記的NP在細胞質(zhì)內(nèi)容易地被可視化。事實上，觀察到NP的增加的細胞質(zhì)累積作為稀釋(1:100相對于1:200)的函數(shù)并且相比于1、3時間間隔，在第6h，具有更顯著的核周圍的定位模式和核定位模式。當(dāng)前第1頁1 2 3