本申請(qǐng)要求2014年2月28日提交的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)61/945,922的優(yōu)先權(quán)，該申請(qǐng)的說明書通過引用方式以其全文并入本文。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及TC-PTP的新型抑制劑及其在活化用于在疾病的免疫療法治療中的應(yīng)用的抗原呈遞細(xì)胞，如樹突細(xì)胞中的用途。

背景技術(shù)：

免疫療法或細(xì)胞療法的一個(gè)重要方面利用經(jīng)修飾的抗原呈遞細(xì)胞(APC)引發(fā)患者中的免疫應(yīng)答。樹突細(xì)胞(DC)(最有力的APC)對(duì)于此應(yīng)答的誘導(dǎo)和維持是必需的，并且對(duì)于針對(duì)治療動(dòng)物和人傳染病以及不同人癌癥的有效免疫療法的開發(fā)是中心要素。例如，在腫瘤組織中，DC可以吞沒凋亡或壞死腫瘤細(xì)胞，處理并且呈現(xiàn)腫瘤抗原以誘導(dǎo)腫瘤特異性T細(xì)胞應(yīng)答和免疫。然而，盡管此種有力的防御屏障，腫瘤進(jìn)展，轉(zhuǎn)移并且最終可以殺死宿主。腫瘤微環(huán)境中分泌的免疫抑制因子促成免疫監(jiān)視的脫逃。此類因子可以深刻影響DC功能。強(qiáng)烈的證據(jù)顯示，癌癥中的DC缺陷是由于髓樣細(xì)胞的異常分化和成熟，這對(duì)T細(xì)胞活化和抗腫瘤應(yīng)答具有不利的影響。因此，基于DC的免疫療法的效力受到免疫抑制腫瘤微環(huán)境危害。癌癥患者展現(xiàn)成熟的和功能性的DC的顯著減少，以及未成熟的DC(iDC)或未成熟的髓樣細(xì)胞(iMC，來(lái)自骨髓的DC祖先)的積累，這已經(jīng)與腫瘤衍生的抑制因子的升高的血漿水平聯(lián)系起來(lái)。從癌癥患者衍生的DC不表達(dá)共刺激分子CD80和CD86或表達(dá)低水平的共刺激分子CD80和CD86。因此，DC免疫療法的主要障礙是iDC或iMC誘導(dǎo)T細(xì)胞耐受性或無(wú)反應(yīng)性，這一致地影響有效的抗腫瘤應(yīng)答的形成，而有利于腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。

已經(jīng)將對(duì)于免疫應(yīng)答的活化必需的關(guān)鍵途徑之一(細(xì)胞因子活化的janus激酶-信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)物和轉(zhuǎn)錄活化劑(JAK-STAT)途徑)的調(diào)節(jié)異常鑒定為造成癌癥中的異常DC分化和功能的關(guān)鍵因素之一。此途徑控制DC分化、成熟、活化和T_H1細(xì)胞分化的DC依賴性誘導(dǎo)。Jak酪氨酸激酶家族中有四種成員：Jak1、Jak2、Jak3、和Tyk2[1,2]。Jak激酶與細(xì)胞因子受體組成性有關(guān)，并且通過細(xì)胞因子對(duì)其細(xì)胞表面受體的結(jié)合而活化。一旦活化，Jak激酶磷酸化受體上的特定酪氨酸殘基，提供STAT的結(jié)合位點(diǎn)。STAT(由7種成員組成：Stat1、Stat2、Stat3、Stat4、Stat5a、Stat5b、和Stat6)是一組潛伏性胞質(zhì)轉(zhuǎn)錄因子，其以無(wú)活性形式存在于細(xì)胞質(zhì)中。它們通過結(jié)合細(xì)胞因子受體上的磷酸化位點(diǎn)而活化，并且隨后在特定的酪氨酸殘基上被Jak磷酸化。當(dāng)磷酸化時(shí)，它們從受體解離，二聚化，并且進(jìn)入細(xì)胞核以誘導(dǎo)靶基因的表達(dá)。除了細(xì)胞因子和趨化因子受體外，JAK-STAT信號(hào)傳導(dǎo)也可以通過受體酪氨酸激酶，如表皮生長(zhǎng)因子受體、血小板衍生的生長(zhǎng)因子受體等直接啟動(dòng)。導(dǎo)致DC的最佳加強(qiáng)和Th-1細(xì)胞分化的下游活化的正是這些不同刺激物(正和負(fù))的組合；以及免疫原的識(shí)別。

目前，通過從外周血體外分化單核細(xì)胞及其隨后的成熟和活化產(chǎn)生用于免疫療法治療的DC是通過使用各種細(xì)胞因子混合劑。GM-CSF和IL-4之間的協(xié)同相互作用在DC分化期間誘導(dǎo)JAK-STAT途徑活化。IL-4主要經(jīng)由STAT6活化介導(dǎo)其效應(yīng)，并且GM-CSF活化STAT1和STAT5。STAT6在未成熟的DC中組成性活化，并且隨細(xì)胞分化為功能性成熟的DC而減少，而STAT1信號(hào)傳導(dǎo)在成熟的DC中較為強(qiáng)力，與共刺激分子表達(dá)的上調(diào)和IL-12生成相關(guān)聯(lián)。STAT5是成熟期間的DC分化需要的。DC分化的早期階段，以及共同淋巴樣祖先(CLP)和共同髓樣祖先(CMP)定型為DC譜系需要的一種其它的STAT是STAT3。DC分化與STAT3活化反相關(guān)，因此成熟的DC顯示了低水平的STAT3活化。然而，STAT3超活化響應(yīng)多種多樣的刺激物導(dǎo)致對(duì)DC成熟/活化的抑制。大多數(shù)腫瘤衍生的因子利用此途徑通過誘導(dǎo)STAT3超活化促進(jìn)異常DC分化?；罨腟TAT3通過增加組織蛋白酶S活性降低胞內(nèi)主要組織相容性復(fù)合物II(MHCII)α/β二聚體，和DC中的H2-DM水平。另外，STAT3超活化還抑制LPS誘導(dǎo)的白介素(IL)-12p40基因表達(dá)，并且影響對(duì)IL-12p40啟動(dòng)子的NF-kB募集，導(dǎo)致功能受損的和未成熟的具有高免疫抑制潛力的髓樣細(xì)胞的積累。這些報(bào)告顯示，STAT3活化必須緊密控制以維持抑制性和活化性信號(hào)之間的平衡。

PTP是通過使磷酸酪氨酸底物脫磷酸化控制多個(gè)細(xì)胞調(diào)節(jié)過程的跨膜或胞內(nèi)酶家族。人基因組中有107個(gè)PTP，并且?guī)追菥C述已經(jīng)詳細(xì)描述了此基因家族的成員。TC-PTP(PTPN2)主要以主要定位于細(xì)胞核的約45kD胞內(nèi)蛋白質(zhì)找到，并且屬于磷酸酪氨酸特異性PTP的I類亞家族。雖然TC-PTP是遍在表達(dá)的，但在所有造血細(xì)胞中觀察到最高的表達(dá)[1,3,4]。體外分析顯示，TC-PTP通過抑制JAK-STAT途徑負(fù)調(diào)節(jié)細(xì)胞因子信號(hào)傳導(dǎo)。目前，已經(jīng)將JAK1、JAK3、STAT1、STAT3、和STAT5a/b鑒定為細(xì)胞因子，如IL-2、IL-6、IL-4和IFN-γ下游的推定的TC-PTP靶標(biāo)[1,2,5]。因此，已經(jīng)將TC-PTP鑒定為DC活化的重要負(fù)調(diào)節(jié)物，提示了此酶的抑制劑在活化用于疾病的免疫療法治療的這些細(xì)胞中可以是有益的。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，提供了結(jié)構(gòu)式I的化合物或其藥學(xué)可接受鹽，及其立體異構(gòu)體：

其中：

X選自CH和N；

R¹選自下組：(a)C_1-3烷基，任選用1-5個(gè)鹵素和任選用一個(gè)選自以下的基團(tuán)取代：-OH、任選用1-3個(gè)鹵素取代的-OC_1-3烷基、-SO_xC_1-3烷基、和-CN；(b)-(C＝O)R⁴；(c)–CN；(d)-(C＝O)OR⁴；(e)-(C＝O)NHR⁴；(f)-(C＝O)NR⁵R⁶；和(g)芳基或雜芳基，其中所述芳基和雜芳基基團(tuán)自身可以任選用1-3個(gè)取代基取代，所述取代基獨(dú)立選自(i)鹵素、(ii)任選用1-3個(gè)鹵素取代的-(C＝O)O_1-3烷基，(iii)–COOH，(iv)任選用1-3個(gè)鹵素取代的C_1-3烷基，(v)任選用1-3個(gè)鹵素取代的-OC_1-3烷基，(vi)-SO_xMe，(vii)-CN，和(viii)-SO₂NH₂；

R²和R³獨(dú)立選自下組：(a)鹵素；(b)二氟甲基膦酸；

R⁴選自下組：(a)H；(b)C_1-3烷基，任選用1-5個(gè)鹵素和任選用一個(gè)選自以下的基團(tuán)取代：-OH、任選用1-3個(gè)鹵素取代的-OC_1-3烷基、-SO_xC_1-3烷基、和-CN；(d)芳基或雜芳基，其中所述芳基或雜芳基基團(tuán)自身可以任選用1-3個(gè)鹵素、C_1-3烷基或C_1-3鹵代烷基取代；

R⁵和R⁶獨(dú)立選自下組：(a)C_1-3烷基，任選用1-5個(gè)鹵素和任選用一個(gè)選自以下的基團(tuán)取代：-OH、任選用1-3個(gè)鹵素取代的-OC_1-3烷基、-SO_xC_1-3烷基、和-CN；(b)芳基或雜芳基，其中所述芳基或雜芳基基團(tuán)自身可以任選用1-3個(gè)鹵素、C_1-3烷基或C_1-3鹵代烷基取代；

R⁵和R⁶以及與它們附著的氮原子一起可以連接以形成5至7元環(huán)，其可以用1-3個(gè)基團(tuán)取代，所述基團(tuán)獨(dú)立選自：(i)鹵素，(ii)-(C＝O)OC_1-3烷基，(iii)-(C＝O)OH，(iv)C_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(v)-OC_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(vi)–OH，(vii)C_1-3羥基烷基，(viii)芳基或雜芳基，其中所述芳基或雜芳基基團(tuán)自身可以用1-3個(gè)鹵素、C_1-3烷基或C_1-3鹵代烷基取代；并且

x是0至2的整數(shù)。

化合物可以是結(jié)構(gòu)式Ia的化合物或其藥學(xué)可接受鹽，及其立體異構(gòu)體：

其中：

R¹選自下組：(a)C_1-3烷基，任選用1-5個(gè)鹵素和任選用一個(gè)選自以下的基團(tuán)取代：-OH、任選用1-3個(gè)鹵素取代的-OC_1-3烷基、和-CN；(b)-(C＝O)R⁴；(c)–CN；(d)-(C＝O)OR⁴；(e)-(C＝O)NHR⁴；和(f)-(C＝O)NR⁵R⁶；

R⁴選自下組：(a)H；和(b)C_1-3烷基，任選用1-5個(gè)鹵素取代；

R⁵和R⁶獨(dú)立選自下組：C_1-3烷基，任選用1-5個(gè)鹵素和任選用一個(gè)選自以下的基團(tuán)取代：-OH、和-OC_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代；并且

R⁵和R⁶以及與它們附著的氮原子一起可以連接以形成5至7元環(huán)，其可以用1-3個(gè)基團(tuán)取代，所述基團(tuán)獨(dú)立選自：(i)鹵素，(ii)C_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(iii)-OC_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(iv)–OH，和(vii)C_1-3羥基烷基。

化合物可以是結(jié)構(gòu)式Ib的化合物或其藥學(xué)可接受鹽，及其立體異構(gòu)體：

其中：

R¹選自下組：(a)C_1-3烷基，任選用1-5個(gè)鹵素和任選用一個(gè)選自以下的基團(tuán)取代：-OH、任選用1-3個(gè)鹵素取代的-OC_1-3烷基、和-CN；(b)-(C＝O)R⁴；(c)-CN；(d)-(C＝O)OR⁴；(e)-(C＝O)NHR⁴；和(f)-(C＝O)NR⁵R⁶；

R⁴選自下組：(a)H；和(b)C_1-3烷基，任選用1-5個(gè)鹵素取代；

R⁵和R⁶獨(dú)立選自下組：C_1-3烷基，任選用1-5個(gè)鹵素和任選用一個(gè)選自以下的基團(tuán)取代：-OH，和任選用1-3個(gè)鹵素取代的-OC_1-3烷基；并且

R⁵和R⁶以及與它們附著的氮原子一起可以連接以形成5至7元環(huán)，其可以用1-3個(gè)基團(tuán)取代，所述基團(tuán)獨(dú)立選自：(i)鹵素，(ii)C_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(iii)-OC_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(iv)-OH，和(vii)C_1.3羥基烷基。

化合物可以是式I的化合物或其藥學(xué)可接受鹽，選自以下化合物：

化合物可以是式Ia的化合物或其藥學(xué)可接受鹽，選自以下化合物：

化合物可以是選自以下化合物的式的化合物或其藥學(xué)可接受鹽：

化合物可以是式Ib的化合物或其藥學(xué)可接受鹽，其中所述化合物是：

根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，提供了藥物組合物，所述藥物組合物包含本發(fā)明的化合物或其藥學(xué)可接受鹽和藥學(xué)可接受載體。

根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，提供了本發(fā)明的化合物或其藥學(xué)可接受鹽用于制備藥物的用途，所述藥物用于抑制TC-PTP并活化抗原呈遞細(xì)胞以治療患者中的疾病或疾患。

根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，提供了治療有效量的本發(fā)明的化合物或其藥學(xué)可接受鹽用于預(yù)防或治療需要治療的患者中的TC-PTP介導(dǎo)的疾病或疾患的用途。

TC-PTP介導(dǎo)的疾病或疾患可以是免疫抑制疾病，并且免疫抑制疾病可以是艾滋。TC-PTP介導(dǎo)的疾病或疾患可以是癌癥，并且癌癥可以是前列腺癌，乳腺癌，卵巢癌，多發(fā)性骨髓瘤，腦癌，膠質(zhì)瘤，肺癌，唾液腺癌，胃癌，胸腺上皮癌，甲狀腺癌，白血病，黑色瘤，淋巴瘤，胃癌，胰腺癌，腎癌，膀胱癌，結(jié)腸癌和肝癌。TC-PTP介導(dǎo)的疾病或疾患可以是傳染病，并且傳染病可以是病毒性感染，細(xì)菌性感染，真菌性感染，寄生物感染，或其組合。病毒性感染可以是巨細(xì)胞病毒感染，埃巴病毒感染，乙肝病毒感染，丙肝病毒感染，皰疹病毒感染，人免疫缺陷病毒感染，人T淋巴細(xì)胞病毒感染，淋巴細(xì)胞性脈絡(luò)叢腦膜炎病毒感染，呼吸道合胞病毒感染病毒，鼻病毒感染，或其組合。細(xì)菌性感染可以是棒狀桿菌(Corynebacterium)感染，腸球菌(Enterococcus)感染，埃希氏菌(Escherichia)感染，嗜血桿菌(Haemophilius)感染，螺桿菌(Helicobacter)感染，軍團(tuán)菌(Legionella)感染，鉤端螺旋體(Leptospira)感染，利斯特氏菌(Listeria)感染，分枝桿菌(Mycobacterium)感染，奈瑟氏球菌(Neisseria)感染，卟啉單胞菌(Porphyromonas)感染，假單胞菌(Pseudomonus)感染，沙門氏菌(Salmonella)感染，葡萄球菌(Staphylococcus)感染，衣原體(Chlamydia)感染或其組合。真菌性感染可以是曲霉(Aspergillus)感染，芽生菌(Blastomyces)感染，念珠菌(Candida)感染，癬(Ringworm)感染，木珂蜜絲(Murcormyces)感染，或其組合。寄生性感染可以是血吸蟲(Schistosoma)感染，利什曼原蟲(Leishmania)感染，瘧原蟲(Plasmodium)感染，賈第蟲(Giardia)感染，錐蟲(Trypanosoma)感染和絳蟲(Taenia)感染。

根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，提供了本發(fā)明的化合物或其藥學(xué)可接受鹽，用于治療需要治療的患者中的TC-PTP介導(dǎo)的疾病或疾患。

TC-PTP介導(dǎo)的疾病或疾患可以是免疫抑制疾病，并且免疫抑制疾病可以是艾滋。TC-PTP介導(dǎo)的疾病或疾患可以是癌癥，并且癌癥可以是前列腺癌，乳腺癌，卵巢癌，多發(fā)性骨髓瘤，腦癌，膠質(zhì)瘤，肺癌，唾液腺癌，胃癌，胸腺上皮癌，甲狀腺癌，白血病，黑色瘤，淋巴瘤，胃癌，胰腺癌，腎癌，膀胱癌，結(jié)腸癌和肝癌。TC-PTP介導(dǎo)的疾病或疾患可以是傳染病，并且傳染病可以是病毒性感染，細(xì)菌性感染，真菌性感染，寄生物感染，或其組合。病毒性感染可以是巨細(xì)胞病毒感染，埃巴病毒感染，乙肝病毒感染，丙肝病毒感染，皰疹病毒感染，人免疫缺陷病毒感染，人T淋巴細(xì)胞病毒感染，淋巴細(xì)胞性脈絡(luò)叢腦膜炎病毒感染，呼吸道合胞病毒感染病毒，鼻病毒感染，或其組合。細(xì)菌性感染可以是棒狀桿菌感染，腸球菌感染，埃希氏菌感染，嗜血桿菌感染，螺桿菌感染，軍團(tuán)菌感染，鉤端螺旋體感染，利斯特氏菌感染，分枝桿菌感染，奈瑟氏球菌感染，卟啉單胞菌感染，假單胞菌感染，沙門氏菌感染，葡萄球菌感染，衣原體感染或其組合。真菌性感染可以是曲霉感染，芽生菌感染，念珠菌感染，癬感染，木珂蜜絲感染，或其組合。寄生性感染可以是血吸蟲感染，利什曼原蟲感染，瘧原蟲感染，賈第蟲感染，錐蟲感染和絳蟲感染。

根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，提供了刺激分離的抗原呈遞細(xì)胞的離體方法，所述方法包括：

用有效量的本發(fā)明的化合物或其藥學(xué)可接受鹽，及其立體異構(gòu)體處理分離的抗原呈遞細(xì)胞，

其中在所述化合物的所述處理之前、期間或之后將所述分離的抗原呈遞細(xì)胞與疾病特異性抗原溫育足以獲得分離的活化的抗原呈遞細(xì)胞的時(shí)間。

根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，提供了刺激分離的抗原呈遞細(xì)胞的離體方法，所述方法包括：

用有效量的式II的化合物或其藥學(xué)可接受鹽，及其立體異構(gòu)體處理分離的抗原呈遞細(xì)胞：

其中X’選自CH和N；

R¹’選自下組：(a)C_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素和任選用一個(gè)選自以下的基團(tuán)取代：-OH、任選用1-3個(gè)鹵素取代的-OC_1-3烷基、-SOxC_1-3烷基、和-CN，(b)-C(＝O)H，(c)-C(＝O)C_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(d)–CN，(e)-HC＝NOH，(f)-(CH₃)C＝NOH，(g)-HC＝NOC_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(h)-(CH₃)C＝NOC_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(i)-C(＝O)OC_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(j)-C(＝O)NHR^6’，(k)-CH＝CH-苯基，其中-CH＝CH-任選用1-2個(gè)取代基取代，所述取代基獨(dú)立選自：鹵素和任選用1-3個(gè)F取代的C_1-2烷基，(I)-CH₂CH₂-苯基，其中-CH₂CH₂-任選用1-4個(gè)取代基取代，所述取代基獨(dú)立選自：鹵素和任選用1-3個(gè)F取代的C_1-2烷基，(m)苯基，(n)-HET-苯基，其中HET是含有1-3個(gè)選自O(shè)、N和S的雜原子的5或6元雜芳香環(huán)，(o)-C＝C-苯基，和(p)-CH₂-苯基，其中-CH₂-苯基的-CH₂-基團(tuán)任選用1-2個(gè)取代基取代，所述取代基獨(dú)立選自鹵素和任選用1-3個(gè)F取代的C_1-2烷基，其中苯基和HET在所有出現(xiàn)中任選用1-3個(gè)取代基取代，所述取代基獨(dú)立選自：(i)鹵素，(ii)-C(＝O)OC_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(iii)-C(＝O)OH，(iv)C_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(v)-OC_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(vi)-SO_xMe，和(vii)-SO₂NH₂；

R^6’選自下組：H、任選用1-3個(gè)鹵素取代的C_1-3烷基、苯基和-CH₂-苯基，其中這兩次出現(xiàn)中的苯基任選用1-3個(gè)取代基取代，所述取代基獨(dú)立選自：(i)鹵素，(ii)-C(＝O)OC_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(iii)-C(＝O)OH，(iv)C_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，和(v)-OC_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代；

R^2’和R^4’獨(dú)立選自H、鹵素、-CH₃、-CF₃、-OCH₃和-OCF₃；

R^3’是鹵素，其中所述鹵素在與-CF₂PO(OR^5’)₂基團(tuán)鄰位的位置處與式II的稠合芳香環(huán)鍵合，

每個(gè)R5’基團(tuán)獨(dú)立選自下組：H和C_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，并且

x是0、1、或2；

其中在用所述式II的化合物的所述處理之前、期間或之后將所述分離的抗原呈遞細(xì)胞與疾病特異性抗原溫育足以獲得分離的活化的抗原呈遞細(xì)胞的時(shí)間。

根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，刺激分離的抗原呈遞細(xì)胞的離體方法，所述方法包括：

用有效量的下列至少一項(xiàng)處理分離的抗原呈遞細(xì)胞：

-有效量的本發(fā)明的化合物；

-有效量的式II的化合物或其藥學(xué)可接受鹽，及其立體異構(gòu)體：

其中X’選自CH和N；

R^1’選自下組：(a)C_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代和任選用一個(gè)選自以下的基團(tuán)取代：-OH、任選用1-3個(gè)鹵素取代的-OC_1-3烷基、-SOxC_1-3烷基、和-CN，(b)-C(＝O)H，(c)-C(＝O)C_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(d)-CN，(e)-HC＝NOH，(f)-(CH₃)C＝NOH，(g)-HC＝NOC_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(h)-(CH₃)C＝NOC_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(i)-C(＝O)OC_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(j)-C(＝O)NHR^6’，(k)-CH＝CH-苯基，其中-CH＝CH-任選用1-2個(gè)取代基取代，所述取代基獨(dú)立選自鹵素和任選用1-3個(gè)F取代的C_1-2烷基，(I)-CH₂CH₂-苯基，其中-CH₂CH₂-任選用1-4個(gè)取代基取代，所述取代基獨(dú)立選自鹵素和任選用1-3個(gè)F取代的C_1-2烷基，(m)苯基，(n)-HET-苯基，其中HET是含有1-3個(gè)選自O(shè)、N和S的雜原子的5或6元雜芳香環(huán)，(o)-C＝C-苯基，和(p)-CH₂-苯基，其中-CH₂-苯基的-CH₂-基團(tuán)任選用1-2個(gè)取代基取代，所述取代基獨(dú)立選自鹵素和任選用1-3個(gè)F取代的C_1-2烷基，其中苯基和HET在所有出現(xiàn)中任選用1-3個(gè)取代基取代，所述取代基獨(dú)立選自(i)鹵素，(ii)-C(＝O)OC_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(iii)-C(＝O)OH，(iv)C_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(v)-OC_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(vi)–SOxMe，和(vii)-SO₂NH₂；

R^6’選自下組：H、任選用1-3個(gè)鹵素取代的C_1-3烷基、苯基、和-CH₂-苯基，其中苯基在這兩次出現(xiàn)中任選用1-3個(gè)取代基取代，所述取代基獨(dú)立選自(i)鹵素,(ii)-C(＝O)OC_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(iii)-C(＝O)OH，(iv)C_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，和(v)-OC_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代；

R^2’和R^4’獨(dú)立選自H、鹵素、-CH₃、-CF₃、-OCH₃和-OCF₃；

R^3’是鹵素，其中所述鹵素在與-CF₂PO(OR^5’)₂基團(tuán)鄰位的位置處與式II的稠合芳香環(huán)鍵合，

每個(gè)R5’基團(tuán)獨(dú)立選自下組：H和C_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，并且

x是0、1、或2；和

其組合；

其中在與權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)所述和式II的至少一種所述化合物的所述接觸之前、期間或之后將所述抗原呈遞細(xì)胞與疾病特異性抗原溫育足以獲得分離的活化的抗原呈遞細(xì)胞的時(shí)間。

根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，提供了用于改善或治療有此需要的患者中的疾病的方法，所述方法包括：

對(duì)所述患者施用通過本發(fā)明的方法獲得的分離的活化的抗原呈遞細(xì)胞，其中所述疾病引起疾病特異性抗原在所述患者中的表達(dá)。

分離的抗原呈遞細(xì)胞或分離的活化的抗原呈遞細(xì)胞可以是樹突細(xì)胞。分離的抗原呈遞細(xì)胞或分離的活化的抗原呈遞細(xì)胞可以來(lái)自相同的患者。

處理分離的抗原呈遞細(xì)胞包括成熟混合劑。

處理分離的抗原呈遞細(xì)胞進(jìn)一步包括成熟混合劑。

成熟混合劑包括LPS、MPLA、INFγ、CD40L、IL-1β、IL-6、TNF-α、PGE-2、或其組合。

成熟混合劑可以是以下混合劑的至少一種：

a)LPS和INFγ；

b)MPLA和INFγ；

c)CD40L和INFγ；

d)IL-1β、IL-6和TNF-α；和

e)IL-1β、IL-6、TNF-α和PGE-2。

疾病可以是免疫抑制疾病，并且免疫抑制疾病可以是艾滋。疾病可以是癌癥，并且癌癥可以是前列腺癌，乳腺癌，卵巢癌，多發(fā)性骨髓瘤，腦癌，膠質(zhì)瘤，肺癌，唾液腺癌，胃癌，胸腺上皮癌，甲狀腺癌，白血病，黑色瘤，淋巴瘤，胃癌，胰腺癌，腎癌，膀胱癌，結(jié)腸癌和肝癌。疾病可以是傳染病，并且傳染病可以是病毒性感染，細(xì)菌性感染，真菌性感染，寄生物感染，或其組合。病毒性感染可以是巨細(xì)胞病毒感染，埃巴病毒感染，乙肝病毒感染，丙肝病毒感染，皰疹病毒感染，人免疫缺陷病毒感染，人T淋巴細(xì)胞病毒感染，淋巴細(xì)胞性脈絡(luò)叢腦膜炎病毒感染，呼吸道合胞病毒感染病毒，鼻病毒感染，或其組合。細(xì)菌性感染可以是棒狀桿菌感染，腸球菌感染，埃希氏菌感染，嗜血桿菌感染，螺桿菌感染，軍團(tuán)菌感染，鉤端螺旋體感染，利斯特氏菌感染，分枝桿菌感染，奈瑟氏球菌感染，卟啉單胞菌感染，假單胞菌感染，沙門氏菌感染，葡萄球菌感染，衣原體感染或其組合。真菌性感染可以是曲霉感染，芽生菌感染，念珠菌感染，癬感染，木珂蜜絲感染，或其組合。寄生性感染可以是血吸蟲感染，利什曼原蟲感染，瘧原蟲感染，賈第蟲感染，錐蟲感染和絳蟲感染。

可以將分離的活化的抗原呈遞細(xì)胞施用到患者的血流中，患者的淋巴結(jié)中，患者腫瘤中，患者的組織中，以及其組合。

根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，提供了在需要治療的患者中預(yù)防或治療TC-PTP介導(dǎo)的疾病或疾患的方法，所述方法包括對(duì)所述患者施用治療有效量的本發(fā)明的化合物，或其藥學(xué)可接受鹽。

TC-PTP介導(dǎo)的疾病或疾患可以是免疫抑制疾病，并且免疫抑制疾病可以是艾滋。TC-PTP介導(dǎo)的疾病或疾患可以是癌癥，并且癌癥可以是前列腺癌，乳腺癌，卵巢癌，多發(fā)性骨髓瘤，腦癌，膠質(zhì)瘤，肺癌，唾液腺癌，胃癌，胸腺上皮癌，甲狀腺癌，白血病，黑色瘤，淋巴瘤，胃癌，胰腺癌，腎癌，膀胱癌，結(jié)腸癌和肝癌。TC-PTP介導(dǎo)的疾病或疾患可以是傳染病，并且傳染病可以是病毒性感染，細(xì)菌性感染，真菌性感染，寄生物感染，或其組合。病毒性感染可以是巨細(xì)胞病毒感染，埃巴病毒感染，乙肝病毒感染，丙肝病毒感染，皰疹病毒感染，人免疫缺陷病毒感染，人T淋巴細(xì)胞病毒感染，淋巴細(xì)胞性脈絡(luò)叢腦膜炎病毒感染，呼吸道合胞病毒感染病毒，鼻病毒感染，或其組合。細(xì)菌性感染可以是棒狀桿菌感染，腸球菌感染，埃希氏菌感染，嗜血桿菌感染，螺桿菌感染，軍團(tuán)菌感染，鉤端螺旋體感染，利斯特氏菌感染，分枝桿菌感染，奈瑟氏球菌感染，卟啉單胞菌感染，假單胞菌感染，沙門氏菌感染，葡萄球菌感染，衣原體感染或其組合。真菌性感染可以是曲霉感染，芽生菌感染，念珠菌感染，癬感染，木珂蜜絲感染，或其組合。寄生性感染可以是血吸蟲感染，利什曼原蟲感染，瘧原蟲感染，賈第蟲感染，錐蟲感染和絳蟲感染。

施用可以是口服施用、靜脈內(nèi)施用、皮下施用、舌下施用、吸入施用或肌肉內(nèi)施用、或其組合。

根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，提供了藥物組合物，所述藥物組合物包含：

(1)本發(fā)明的第一化合物或其藥學(xué)可接受鹽；

(2)一種或多種選自下組的另外的化合物：

(a)細(xì)胞毒劑；

(b)抗代謝物；

(c)烷化劑；

(d)蒽環(huán)類抗生素；

(e)抗生素；

(f)抗有絲分裂劑；

(g)激素療法；

(h)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制劑；

(i)基因表達(dá)調(diào)控劑；

(j)凋亡誘導(dǎo)劑；

(k)血管發(fā)生抑制劑；

(l)免疫治療劑；和

(3)藥學(xué)可接受載體。

細(xì)胞毒劑可以是泰素(taxol)、松胞菌素B(cytochalasin B)、短桿菌肽D(gramicidin D)、溴化乙啶(ethidium bromide)、依米丁(emetine)、絲裂霉素(mitomycin)、依托泊苷(etoposide)、替尼泊苷(tenoposide)、長(zhǎng)春新堿(vincristine)、長(zhǎng)春堿(vinblastine)、秋水仙堿(colchicin)、多柔比星(doxorubicin)、柔紅霉素(daunorubicin)、二羥基炭疽菌素二酮(dihydroxy anthracin dione)、米托蒽醌(mitoxantrone)、光輝霉素(mithramycin)、放線菌素D(actinomycin D)、1-去氫睪酮(1-dehydrotestosterone)、糖皮質(zhì)激素(glucocorticoids)、普魯卡因(procaine)、丁卡因(tetracaine)、利多卡因(lidocaine)、普萘洛爾(propranolol)、嘌呤霉素(puromycin)、其類似物或同系物、或其組合。

抗代謝物可以是甲氨蝶呤、6-巰嘌呤、6-硫鳥嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶、氨烯咪胺(decarbazine)或其組合。

烷化劑可以是氮芥(mechlorethamine)、塞替派(thioepa)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、美法侖(melphalan)、卡莫司汀(carmustine)(BSNU)、洛莫司汀(lomustine)(CCNU)、環(huán)磷酰胺(cyclothosphamide)、白消安(busulfan)、二溴甘露醇(dibromomannitol)、鏈脲霉素(streptozotocin)、絲裂霉素C(mitomycin C)，順式-二氯二胺鉑(II)(cis-dichlorodiamine platinum(II))(DDP)順鉑、或者其組合。

蒽環(huán)類抗生素可以是柔紅霉素、多柔比星或其組合。

抗生素可以是更生霉素(dactinomycin)、博萊霉素(bleomycin)、光輝霉素(mithramycin)、氨茴霉素(anthramycin)(AMC)、或其組合。

抗有絲分裂劑可以是長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春堿或其組合。

信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制劑可以是伊馬替尼(imatinib)、曲妥珠單抗(trastuzumab)或其組合。

基因表達(dá)調(diào)控劑可以是siRNA、shRNA、反義寡核苷酸、HDAC抑制劑、或其組合。

免疫治療劑可以是單克隆抗體、嵌合抗原受體(CAR)-T-細(xì)胞、或其組合。

激素療法可以是促黃體素釋放素(LHRH)拮抗劑。

凋亡誘導(dǎo)劑可以是重組人TNF相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(TRAIL)。

血管發(fā)生抑制劑可以是索拉非尼、舒尼替尼、帕唑帕尼、依維莫司或其組合。

單克隆抗體可以是抗CTLA4、抗PD1或其組合。

第一化合物可以是：

本發(fā)明涉及結(jié)構(gòu)式I的化合物以及其藥學(xué)可接受鹽：

這些化合物是TC-PTP的抑制劑，并且可用于活化抗原呈遞細(xì)胞以治療患者不能引發(fā)足夠的免疫應(yīng)答的疾病。此類化合物可以用于治療癌癥、艾滋和相關(guān)醫(yī)學(xué)疾患、傳染病，并且也可以用于治療其它TC-PTP介導(dǎo)的疾病或疾患。

本發(fā)明還涉及使用口服、靜脈內(nèi)、皮下、舌下、吸入或肌肉內(nèi)施用對(duì)需要此類治療的患者直接施用本發(fā)明的化合物。

本發(fā)明還涉及在合適的培養(yǎng)基中用本發(fā)明的化合物離體處理從患者收獲的細(xì)胞以使那些細(xì)胞適合于對(duì)患者注射的方法。

本發(fā)明還涉及與治療有效量的抗原聯(lián)合用本發(fā)明的化合物離體處理抗原呈遞細(xì)胞(如樹突細(xì)胞)的方法，已知所述抗原可用于在那些細(xì)胞中產(chǎn)生期望的變化。

本發(fā)明還涉及生物劑的用途，所述生物作用劑在此類細(xì)胞的離體成熟期間降低抗原呈遞細(xì)胞(如樹突細(xì)胞)中的TC-PTP活性量。此類作用劑包括siRNA、CRSPR/CAs9、商品名為泰來(lái)(talens)的試劑、鋅指核酸酶、shRNA、和識(shí)別PTPN2基因序列的反義寡核苷酸。

本發(fā)明還涉及通過將活化的樹突細(xì)胞注射到患者中治療或控制癌癥、傳染病，如病毒性感染、細(xì)菌性感染、真菌性感染和寄生性感染，和相關(guān)醫(yī)學(xué)疾患的方法，其中已經(jīng)操作樹突細(xì)胞以呈遞對(duì)于患者患有的疾病而言特定的抗原。

本發(fā)明涵蓋對(duì)需要此類療法的患者施用活化的樹突細(xì)胞，通過將此類細(xì)胞注射到血流中、淋巴結(jié)中、直接注射到腫瘤中，或者直接注射到已經(jīng)受到對(duì)患者治療的疾病影響的另一組織中進(jìn)行。

可以通過本發(fā)明治療的癌癥類型包括但不限于前列腺癌，乳腺癌，卵巢癌，多發(fā)性骨髓瘤，腦癌，膠質(zhì)瘤，肺癌，唾液腺癌，胃癌，胸腺上皮癌，甲狀腺癌，白血病，黑色瘤，淋巴瘤，胃癌，胰腺癌，腎癌，膀胱癌，結(jié)腸癌和肝癌。

可以通過本發(fā)明治療的傳染病類型包括但不限于那些由以下病毒、細(xì)菌和寄生物引起的傳染?。壕藜?xì)胞病毒、埃巴病毒、乙肝病毒、丙肝病毒、皰疹病毒、人免疫缺陷病毒、人T淋巴細(xì)胞病毒、淋巴細(xì)胞性脈絡(luò)叢腦膜炎病毒、呼吸道合胞病毒感染病毒，和/或鼻病毒；棒狀桿菌、腸球菌、埃希氏菌、嗜血桿菌、螺桿菌、軍團(tuán)菌、鉤端螺旋體、利斯特氏菌、分枝桿菌、奈瑟氏球菌、卟啉單胞菌、假單胞菌、沙門氏菌、葡萄球菌、或衣原體；或血吸蟲、利什曼原蟲、瘧原蟲、賈第蟲、錐蟲和絳蟲，或真菌感染，如由曲霉，芽生菌，念珠菌，癬，和木珂蜜絲引起的感染。

鑒于如附圖中闡明的選擇的實(shí)施方案的以下詳細(xì)描述，本文的主題的特征和優(yōu)點(diǎn)將變得明顯。應(yīng)當(dāng)認(rèn)識(shí)到，公開和要求保護(hù)的主題能夠在各個(gè)方面修改，而都不偏離權(quán)利要求書的范圍。因而，附圖和說明書應(yīng)當(dāng)視為本質(zhì)上闡述性的，而不視為限制性，并且主題的全部范圍在權(quán)利要求書中列出。

附圖說明

本公開的其它特征和優(yōu)點(diǎn)從與附圖結(jié)合考慮的以下詳細(xì)描述看將變得明顯，其中：

圖1顯示了通過實(shí)施例6或?qū)嵤├?的化合物活化的成熟樹突細(xì)胞的單次處理后28天的小鼠中的腫瘤體積。

圖2顯示了在存在和缺乏實(shí)施例7的化合物的情況下在分化和成熟后的人DC中的IL-12的誘導(dǎo)。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明涉及結(jié)構(gòu)式I的化合物以及其藥學(xué)可接受鹽，及其立體異構(gòu)體：

其中：

X選自CH和N；

R¹選自下組：(a)C_1-3烷基，任選用1-5個(gè)鹵素和任選用一個(gè)選自以下的基團(tuán)取代：-OH、任選用1-3個(gè)鹵素取代的-OC_1-3烷基、-SO_xC_1-3烷基、和-CN；(b)-(C＝O)R⁴；(c)–CN；(d)-(C＝O)OR⁴；(e)-(C＝O)NHR⁴；(f)-(C＝O)NR⁵R⁶；和(g)芳基或雜芳基，其中所述芳基和雜芳基基團(tuán)自身可以任選用1-3個(gè)取代基取代，所述取代基獨(dú)立選自(i)鹵素、(ii)任選用1-3個(gè)鹵素取代的-(C＝O)OC_1-3烷基，(iii)–COOH，(iv)任選用1-3個(gè)鹵素取代的C_1-3烷基，(v)任選用1-3個(gè)鹵素取代的-OC_1-3烷基，(vi)-SO_xMe，(vii)-CN，和(viii)-SO₂NH₂；

R²和R³獨(dú)立選自下組：(a)鹵素；(b)二氟甲基膦酸；

R⁴選自下組：(a)H；(b)C_1-3烷基，任選用1-5個(gè)鹵素和任選用一個(gè)選自以下的基團(tuán)取代：-OH、任選用1-3個(gè)鹵素取代的-OC_1-3烷基、-SO_xC_1-3烷基、和-CN；(d)芳基或雜芳基，其中所述芳基或雜芳基基團(tuán)自身可以任選用1-3個(gè)鹵素、C_1-3烷基或C_1-3鹵代烷基取代；

R⁵和R⁶獨(dú)立選自下組：(a)C_1-3烷基，任選用1-5個(gè)鹵素和任選用一個(gè)選自以下的基團(tuán)取代：-OH、任選用1-3個(gè)鹵素取代的-OC_1-3烷基、-SO_xC_1-3烷基、和-CN；(b)芳基或雜芳基，其中所述芳基或雜芳基基團(tuán)自身可以任選用1-3個(gè)鹵素、C_1-3烷基或C_1-3鹵代烷基取代；

R⁵和R⁶以及與它們附著的氮原子一起可以連接以形成5至7元環(huán)，其可以用1-3個(gè)基團(tuán)取代，所述基團(tuán)獨(dú)立選自：(i)鹵素，(ii)-(C＝O)OC_1-3烷基，(iii)-(C＝O)OH，(iv)C_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(v)-OC_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(vi)–OH，(vii)C_1-3羥基烷基，(viii)芳基或雜芳基，其中所述芳基或雜芳基基團(tuán)自身可以用1-3個(gè)鹵素、C_1-3烷基或C_1-3鹵代烷基取代；并且

x是0至2的整數(shù)。

根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明可以以結(jié)構(gòu)式Ia和其藥學(xué)可接受鹽，及其立體異構(gòu)體概述：

其中：

R¹選自下組：(a)C_1-3烷基任選用1-5個(gè)鹵素和任選用一個(gè)選自以下的基團(tuán)取代：-OH、任選用1-3個(gè)鹵素取代的-OC_1-3烷基、和-CN；(b)-(C＝O)R⁴；(c)–CN；(d)-(C＝O)OR⁴；(e)-(C＝O)NHR⁴；和(f)-(C＝O)NR⁵R⁶；

R⁴選自下組：(a)H；和(b)C_1-3烷基，任選用1-5個(gè)鹵素取代；

R⁵和R⁶獨(dú)立選自下組：C_1-3烷基，任選用1-5個(gè)鹵素和任選用一個(gè)選自以下的基團(tuán)取代：-OH、和-OC_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代；并且

R⁵和R⁶以及與它們附著的氮原子一起可以連接以形成5至7元環(huán)，其可以用1-3個(gè)基團(tuán)取代，所述基團(tuán)獨(dú)立選自：(i)鹵素，(ii)C_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(iii)-OC_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(iv)–OH，和(vii)C_1-3羥基烷基。

根據(jù)又一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明可以以結(jié)構(gòu)式Ib和其藥學(xué)可接受鹽，及其立體異構(gòu)體概述：

其中：

R¹選自下組：(a)C_1-3烷基，任選用1-5個(gè)鹵素和任選用一個(gè)選自以下的基團(tuán)取代：-OH、任選用1-3個(gè)鹵素取代的-OC_1-3烷基、和-CN；(b)-(C＝O)R⁴；(c)-CN；(d)-(C＝O)OR⁴；(e)-(C＝O)NHR⁴；和(f)-(C＝O)NR⁵R⁶；

R⁴選自下組：(a)H；和(b)C_1-3烷基，任選用1-5個(gè)鹵素取代；

R⁵和R⁶獨(dú)立選自下組：C_1-3烷基，任選用1-5個(gè)鹵素和任選用一個(gè)選自以下的基團(tuán)取代：-OH，和任選用1-3個(gè)鹵素取代的-OC_1-3烷基；并且

R⁵和R⁶以及與它們附著的氮原子一起可以連接以形成5至7元環(huán)，其可以用1-3個(gè)基團(tuán)取代，所述基團(tuán)獨(dú)立選自：(i)鹵素，(ii)C_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(iii)-OC_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(iv)-OH，和(vii)C_1.3羥基烷基。

本發(fā)明包括所示的化合物，并且還包括(在可能的情況下)化合物的單獨(dú)的非對(duì)映異構(gòu)體、對(duì)映異構(gòu)體和差向異構(gòu)體，和其非對(duì)映異構(gòu)體和/或?qū)τ钞悩?gòu)體的混合物，包括外消旋混合物。雖然本文中公開的具體的立體化學(xué)是優(yōu)選的，但是其它立體異構(gòu)體，包括非對(duì)映異構(gòu)體、對(duì)映異構(gòu)體、差向異構(gòu)體，和這些的混合物也可以用于活化APC。無(wú)活性或活性較小的非對(duì)映異構(gòu)體和對(duì)映異構(gòu)體可用于與酶靶標(biāo)和活化機(jī)制相關(guān)的科學(xué)研究。

可以在藥物組合物中使用本文中公開的化合物，所述藥物組合物包含(a)化合物或其藥學(xué)可接受鹽，和(b)藥學(xué)可接受載體?；衔锟梢杂糜诎环N或多種其它活性藥用成分的藥物組合物?；衔镆部梢栽谒幬锝M合物中使用，其中式I的化合物或其藥學(xué)可接受鹽是唯一的活性成分。

根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明的化合物是TC-PTP的抑制劑，并且可用于活化抗原呈遞細(xì)胞以治療患者不能引發(fā)足夠的免疫應(yīng)答的疾病。此類化合物可以用于治療癌癥、病毒性感染、細(xì)菌性感染、真菌性感染和寄生性感染，并且也可以用于治療其它TC-PTP介導(dǎo)的疾病或疾患。

根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，可以使用口服、靜脈內(nèi)、皮下、舌下、吸入或肌肉內(nèi)施用直接對(duì)需要此類治療的患者給予本發(fā)明的化合物。

根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明還涉及在合適的培養(yǎng)基中用本發(fā)明的化合物離體處理從患者收獲的細(xì)胞以使那些細(xì)胞適合于對(duì)患者注射的方法。

根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明還涉及與治療有效量的抗原聯(lián)合用本發(fā)明的化合物離體處理抗原呈遞細(xì)胞(如樹突細(xì)胞)的方法，已知所述抗原可用于在那些細(xì)胞中產(chǎn)生期望的變化。

根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明還涉及與合適的成熟混合劑聯(lián)合用本發(fā)明的化合物離體處理抗原呈遞細(xì)胞(如樹突細(xì)胞)的方法，所述成熟混合劑可以由以下作用劑中的一種或多種組成，但是不限于此：

a)LPS和INFγ；

b)MPLA和INFγ；

c)CD40L和INFγ；

d)IL-1β、IL-6和TNF-α；和

e)IL-1β、IL-6、TNF-α和PGE-2。

根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明還涉及通過將活化的樹突細(xì)胞注射到患者中治療或控制癌癥和傳染病，如病毒性感染、細(xì)菌性感染、真菌性感染和寄生性感染，和相關(guān)醫(yī)學(xué)疾患的方法，其中已經(jīng)操作樹突細(xì)胞以呈遞對(duì)于患者患有的疾病而言特定的抗原。

根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，認(rèn)為對(duì)于在治療癌癥中具有效用的活化的DC，在成熟過程期間必須將它暴露于腫瘤特異性抗原，然后，它吸收并呈遞在細(xì)胞表面上。類似地，認(rèn)為如果將活化的DC暴露于傳染源特異性抗原，那么DC可以在治療相關(guān)的傳染病中具有效用。(Moll,2004)。

根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明涉及對(duì)需要此類療法的患者施用活化的樹突細(xì)胞，通過將此類細(xì)胞注射到血流中、淋巴結(jié)中、直接注射到腫瘤中，或者直接注射到已經(jīng)受到對(duì)患者治療的疾病影響的另一組織中進(jìn)行。

可以通過本發(fā)明的化合物治療的癌癥類型包括但不限于前列腺癌、乳腺癌、腦癌、膠質(zhì)瘤、肺癌、唾液癌、胃癌、胸腺上皮癌、甲狀腺癌、卵巢癌、多發(fā)性骨髓瘤、白血病、黑素瘤、淋巴瘤、胃癌、腎癌、胰腺癌、膀胱癌、結(jié)腸癌和肝癌。

可以通過本發(fā)明治療的病毒性感染的類型包括但不限于由巨細(xì)胞病毒、埃巴病毒、乙肝病毒、丙肝病毒、皰疹病毒、人免疫缺陷病毒、人T淋巴細(xì)胞病毒、淋巴細(xì)胞性脈絡(luò)叢腦膜炎病毒、呼吸道合胞病毒感染病毒，和/或鼻病毒引起的感染。

可以通過本發(fā)明治療的細(xì)菌性感染的類型包括但不限于由棒狀桿菌、腸球菌、埃希氏菌、嗜血桿菌、螺桿菌、軍團(tuán)菌、鉤端螺旋體、利斯特氏菌、分枝桿菌、奈瑟氏球菌、卟啉單胞菌、假單胞菌、沙門氏菌、葡萄球菌、和衣原體引起的感染。

可以通過本發(fā)明治療的寄生性感染的類型包括但不限于由血吸蟲、利什曼原蟲、瘧原蟲、賈第蟲、錐蟲和絳蟲引起的感染。

可以通過本發(fā)明治療的真菌性感染的類型包括但不限于由曲霉，芽生菌，念珠菌，癬，和木珂蜜絲引起的感染。

根據(jù)又一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明還包括用式I、式Ia、和/或式Ib的化合物或其藥學(xué)可接受鹽體外處理原代細(xì)胞，以及與合適的抗原一起溫育以產(chǎn)生適合于治療性處理需要免疫療法的患者的活化的細(xì)胞。

縮寫

有機(jī)化學(xué)、藥物化學(xué)、藥理學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中通常使用的縮寫和術(shù)語(yǔ)是是這些領(lǐng)域的從業(yè)人員公知的，并且在本文中使用。下文提供了代表性的縮寫和定義：

Ac是乙?；鵞CH₃C(O)-]，Ac₂O是乙酸酐；APC是抗原呈遞細(xì)胞；9-BBN是9-硼雙環(huán)[3.3.1]壬烷；Bn是芐基；BOC是叔丁基氧基羰基；DIAD是偶氮二甲酸二異丙酯(diisopropylazodicarboxylate)；DIBAL是二異丁基氫化鋁；DMF是N,N-二甲基甲酰胺；DMSO是二甲亞砜；EDAC(或EDC)是1-乙基-3-[3-(二甲基氨基)丙基]-碳二亞胺HCl；Et₃N是三乙胺；Et是乙基；EtOAc是乙酸乙酯；EtOH是乙醇；3-F-Ph是3-氟苯基，HCl是氫氯酸；HOBt是1-羥基苯并三唑；HPLC是高效液相層析；LCMS是具有質(zhì)譜檢測(cè)的HPLC；LG是離去基團(tuán)；M是摩爾；mmol是毫摩爾；Me是甲基；MeOH是甲醇；MsCl是甲磺酰氯；N是正常的；NaHMDS是六甲基二硅疊氮化鈉(sodium hexamethyldisiliazide)；NaOAc是乙酸鈉；NaOtBu是叔丁醇鈉；NMO是N-甲基嗎啉N氧化物；NMP是N甲基吡咯烷酮；Pd(dba)₂是三(二苯亞甲基丙酮)二鈀；PdCl2(Ph₃P)₂是二氯二-(三苯基磷烯)鈀(dichlorobis-(triphenylphosphene)palladium)；PG表示未規(guī)定的保護(hù)基團(tuán)；Ph是苯基；PhMe是甲苯；PPh₃是三苯基膦；PMB是對(duì)甲氧基芐基；RT是室溫；TBAF是四丁基氟化銨；TBS是叔丁基二甲基甲硅烷基；tBu是叔丁基；Tf是三氟鹽(triflate)；TFA是三氟乙酸；THF是四氫呋喃；TLC是薄層層析；TMS是三甲基甲硅烷基；TPAP是過釕酸四內(nèi)胺(tetrapropylammonium perruthenate)。

定義

“烷基”以及具有前綴“烷”的其它基團(tuán)，如烷氧基和烷?；庵缚梢允蔷€性或支鏈的碳鏈，及其組合，除非碳鏈另有定義。烷基基團(tuán)的例子包括甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、仲和叔丁基、戊基、己基，庚基，辛基，壬基，等等。在規(guī)定的碳原子數(shù)允許例如C_3-10的情況下，術(shù)語(yǔ)烷基還包括環(huán)烷基基團(tuán)，和直鏈或支鏈烷基鏈與環(huán)烷基結(jié)構(gòu)組合的組合。在未規(guī)定碳原子數(shù)量時(shí)，意指C_1-6。

“環(huán)烷基”是烷基的子集，并且是指具有規(guī)定數(shù)目的碳原子的飽和碳環(huán)狀環(huán)。環(huán)烷基的實(shí)例包括環(huán)丙基，環(huán)丁基，環(huán)戊基，環(huán)己基，環(huán)庚基，環(huán)辛基，等等。環(huán)烷基通常是單環(huán)，除非另有說明。環(huán)烷基是飽和的，除非另有定義。

術(shù)語(yǔ)“烷氧基”指規(guī)定的碳原子數(shù)(例如，C_1-6烷氧基)，或此范圍內(nèi)的任何數(shù)目[即，甲氧基(MeO-)，乙氧基，異丙氧基等等]的直鏈或支鏈烷氧化物。

術(shù)語(yǔ)“烷基硫代”指規(guī)定的碳原子數(shù)(例如，C_1-6烷基硫代)，或此范圍內(nèi)的任何數(shù)目[即，甲基硫代(MeS-)，乙基硫基，異丙基硫基等]的直鏈或支鏈烷基硫化物。

術(shù)語(yǔ)“烷基氨基”指規(guī)定的碳原子數(shù)(例如，C_1-6烷基氨基)，或此范圍內(nèi)的任何數(shù)目[即，甲基氨基、乙基氨基、異丙基氨基、叔丁基氨基等]的直鏈或支鏈烷基胺。

術(shù)語(yǔ)“烷基磺?；敝敢?guī)定的碳原子數(shù)(例如，C_1-6烷基磺?；?，或此范圍內(nèi)的任何數(shù)目[即，甲基磺酰基(MeSO₂·)、乙基磺?；?、異丙基磺?；萞的直鏈或支鏈烷基砜。

術(shù)語(yǔ)“烷基亞磺?；敝敢?guī)定的碳原子數(shù)(例如，C_1-6烷基亞磺?；?，或此范圍內(nèi)的任何數(shù)目[即，甲基亞磺?；?MeSO-)、乙基亞磺?；惐鶃喕酋；萞的直鏈或支鏈烷基硫化物。

術(shù)語(yǔ)“烷基氧基羰基”指規(guī)定的碳原子數(shù)(例如，C_1-6烷基氧基羰基)，或此范圍內(nèi)的任何數(shù)目[即，甲基氧基羰基(MeOCO^-)、乙基氧基羰基、或丁基氧基羰基]的本發(fā)明的羧酸衍生物的直鏈或支鏈酯。

“芳基”指含有碳環(huán)原子的單或多環(huán)芳香族環(huán)系統(tǒng)。優(yōu)選的芳基是單環(huán)或雙環(huán)6-10元芳香族環(huán)系統(tǒng)。苯基和萘基是優(yōu)選的芳基。最優(yōu)選的芳基是苯基。

“雜環(huán)基”指含有至少一個(gè)選自O(shè)、S和N的雜原子，進(jìn)一步包括硫的氧化形式，即SO和SO₂的飽和或不飽和非芳香族環(huán)或環(huán)系統(tǒng)。雜環(huán)的實(shí)例包括四氫呋喃(THF)、二氫呋喃、1,4-二噁烷、嗎啉、1,4-二噻烷、哌嗪、哌啶、1,3-二氧戊環(huán)、咪唑烷(imidazolidine)、咪唑啉、吡咯啉、吡咯烷(pyrrolidine)、四氫吡喃、二氫吡喃、氧硫雜環(huán)戊烷(oxathiolane)、二硫戊環(huán)(dithiolane)、1,3-二噁烷、1,3-二噻烷、氧硫雜環(huán)己烷(oxathiane)、硫代嗎啉、2-氧代哌啶-1-基、2-氧代吡咯烷-1-基、2-氧代氮雜環(huán)丁烷-1-基(2-oxoazetidin-1-yl)、1,2,4-噁二嗪-5(6H)-酮-3-基(1,2,4-oxadiazin-5(6H)-one-3-yl)，等等。

“雜芳基”是指含有至少一個(gè)選自O(shè)，S和N的環(huán)雜原子的芳香族或部分芳香族雜環(huán)。因此，雜芳基包含與不是芳香族的其它種類的環(huán)如芳基、環(huán)烷基和雜環(huán)基稠合的雜芳基。雜芳基基團(tuán)的實(shí)例包括：吡咯基、異噁唑基(isoxazolyl)、異噻唑基(isothiazolyl)、吡唑基(pyrazolyl)、吡啶基(pyridyl)、噁唑基(oxazolyl)，噁二唑基(oxadiazolyl)(特別是，1,3,4-噁二唑-2-基(1,3,4-oxadiazol-2-yl)和1,2,4-噁二唑-3-基(1,2,4-oxadiazol-3-yl))，噻二唑基(thiadiazolyl)，噻唑基(thiazolyl)，咪唑基(imidazolyl)，三唑基(triazolyl)，四唑基(tetrazolyl)，呋喃基(furyl)，三嗪基(triazinyl)，噻吩基(thienyl)，嘧啶基(pyrimidyl)，苯并異噁唑基(benzisoxazolyl)，苯并噁唑基(benzoxazolyl)，苯并噻唑基(benzothiazolyl)，苯并噻二唑基(benzothiadiazolyl)，二氫苯并呋喃基(dihydrobenzofuranyl)，二氫吲哚基(indolinyl)，噠嗪基(pyridazinyl)，吲唑基(indazolyl)，異吲哚基(isoindolyl)，二氫苯并噻吩基(dihydrobenzothienyl)，吲嗪基(indolizinyl)，噌啉基(cinnolinyl)，酞嗪(phthalazinyl)，喹唑啉基(quinazolinyl)，萘啶基(naphthyridinyl)，咔唑基(carbazolyl)，苯并二氧戊環(huán)基(benzodioxolyl)，喹喔啉基(quinoxalinyl)，嘌呤基(purinyl)，呋枯基(furazanyl)，異芐基呋喃基(isobenzylfuranyl)，苯并咪唑基(benzimidazolyl)，苯并呋喃基(benzofuranyl)，苯并噻吩基(benzothienyl)，喹啉基(quinolyl)，吲哚基(indolyl)，異喹啉基(isoquinolyl)，二苯并呋喃基(dibenzofuranyl)等。對(duì)于雜環(huán)基和雜芳基基團(tuán)，包括含有3-15個(gè)原子的環(huán)和環(huán)系統(tǒng)，形成1-3個(gè)環(huán)。

“鹵素”指氟、氯、溴和碘。氯化物和氟化物一般是優(yōu)選的。當(dāng)在烷基或烷氧基基團(tuán)上取代鹵素時(shí)，氟化物是最優(yōu)選的(例如CF₃O和CF₃CH₂O)。

如本文中使用，術(shù)語(yǔ)“組合物”意指涵蓋包含規(guī)定量的規(guī)定成分的產(chǎn)物，以及直接或間接源自規(guī)定量的規(guī)定成分的組合的任何產(chǎn)物。所述術(shù)語(yǔ)就藥物組合物而言意圖涵蓋包含活性成分和構(gòu)成載體的惰性成分的產(chǎn)物，以及直接或間接源自任何兩種或更多種成分的組合、復(fù)合或聚集，或者一種或多種成分的解離，或者一種或多種成分的其它類型的反應(yīng)或相互作用的任何產(chǎn)物。因而，本發(fā)明的藥物組合物涵蓋通過混合本發(fā)明的化合物和藥學(xué)可接受載體制備的任何組合物。通過“藥學(xué)可接受”或“可接受”，意指載體、稀釋劑或賦形劑必須與配制劑的其它成分相容，并且對(duì)其接受者無(wú)害。

結(jié)構(gòu)式I、結(jié)構(gòu)式Ia和/或結(jié)構(gòu)式Ib的化合物可以含有一種或多種不對(duì)稱中心，并且因此可以作為外消旋物和外消旋混合物、單一對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體混合物和單獨(dú)的非對(duì)映異構(gòu)體發(fā)生。本發(fā)明意圖包括結(jié)構(gòu)式I,結(jié)構(gòu)式Ia和/或結(jié)構(gòu)式Ib的化合物的所有此類異構(gòu)形式。

可以將結(jié)構(gòu)式I、結(jié)構(gòu)式Ia和/或結(jié)構(gòu)式Ib的化合物分成其單獨(dú)的非對(duì)映異構(gòu)體，例如通過從合適的溶劑，例如甲醇或乙酸乙酯或其混合物的分步結(jié)晶，或者經(jīng)由使用光學(xué)活性靜止期的手性層析?？梢酝ㄟ^結(jié)晶產(chǎn)物或結(jié)晶中間體的X射線晶體學(xué)測(cè)定絕對(duì)立體化學(xué)，所述結(jié)晶產(chǎn)物或結(jié)晶中間體在必要時(shí)用含有已知的絕對(duì)構(gòu)型的非對(duì)稱中心的試劑衍生化。

或者，可以通過使用已知的絕對(duì)構(gòu)型的光學(xué)純的起始材料或試劑的立體特異性合成獲得通式結(jié)構(gòu)式I、結(jié)構(gòu)式Ia和/或結(jié)構(gòu)式Ib的化合物的任何立體異構(gòu)體。

根據(jù)需要，可以分離化合物的外消旋混合物，從而分離單獨(dú)的對(duì)映異構(gòu)體。可以通過本領(lǐng)域中公知的方法，如將化合物的外消旋混合物與對(duì)映體上純的化合物偶聯(lián)以形成非對(duì)映異構(gòu)體混合物實(shí)施分離，接著通過標(biāo)準(zhǔn)方法，如分步結(jié)晶或?qū)游龇蛛x單獨(dú)的非對(duì)映異構(gòu)體。偶聯(lián)反應(yīng)經(jīng)常是使用對(duì)映體上純的酸或堿的鹽形成。然后，可以通過切割添加的手性殘基將非對(duì)映異構(gòu)體衍生物轉(zhuǎn)化為純的對(duì)映異構(gòu)體。也可以通過利用手性靜止期的層析方法直接分離化合物的外消旋混合物，所述方法是本領(lǐng)域中公知的。

本文中描述的一些化合物含有烯屬雙鍵，并且除非另有規(guī)定，意指包括E和Z幾何異構(gòu)體二者。

本文中描述的一些化合物可以以互變異構(gòu)體存在，所述互變異構(gòu)體具有伴隨一個(gè)或多個(gè)雙鍵位移的不同氫附著點(diǎn)。例如，酮及其烯醇形式是酮-烯醇互變異構(gòu)體。本發(fā)明的化合物涵蓋單獨(dú)的互變異構(gòu)體及其混合物。

在通式I、通式Ia和/或通式Ib的化合物中，原子可以展現(xiàn)出其天然同位素豐度，或者一個(gè)或多個(gè)原子可以人工富集特定同位素，該同位素具有相同的原子數(shù)，但是與自然界中主要存在的原子量或質(zhì)量數(shù)不同的原子量或質(zhì)量數(shù)。本發(fā)明意指包括通式I、通式Ia和/或通式Ib的化合物的所有合適的同位素變異。例如，氫(H)的不同同位素形式包括氕(¹H)和氘(²H)。氕是自然界中找到的主要的氫同位素。氘的富集可以提供某些治療優(yōu)點(diǎn)，如延長(zhǎng)體內(nèi)半衰期或降低劑量需要，或者可以提供可用作表征生物樣品的標(biāo)準(zhǔn)品的化合物?？梢酝ㄟ^本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的常規(guī)技術(shù)或者通過與本文中的方案和實(shí)施例中描述的方法類似的方法使用合適的同位素富集的試劑和/或中間體無(wú)需過度實(shí)驗(yàn)制備通式I、通式Ia和/或通式Ib內(nèi)的同位素富集的化合物。

鹽和配制劑

應(yīng)當(dāng)理解，如本文中使用的，提到結(jié)構(gòu)式I、結(jié)構(gòu)式Ia和/或結(jié)構(gòu)式Ib的化合物意指還包括藥學(xué)可接受鹽，并且還包括當(dāng)它們作為游離化合物或其藥學(xué)可接受鹽的前體或者在其它合成操作中使用時(shí)不是藥學(xué)可接受的鹽。術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)可接受鹽”指從藥學(xué)可接受無(wú)毒性堿或酸，包括無(wú)機(jī)或有機(jī)堿和無(wú)機(jī)或有機(jī)酸制備的鹽。術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)可接受鹽”內(nèi)涵蓋的基礎(chǔ)化合物的鹽指一般通過使游離堿與合適的有機(jī)或無(wú)機(jī)酸起反應(yīng)制備的本發(fā)明的化合物的無(wú)毒性鹽。本發(fā)明的基礎(chǔ)化合物的代表性鹽包括但不限于下列各項(xiàng)：乙酸鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、碳酸氫鹽、硫酸氫鹽、酒石酸氫鹽、硼酸鹽、溴化物、樟腦磺酸鹽、碳酸鹽、氯化物、克拉維酸鹽、檸檬酸鹽、依地酸鹽、乙二磺酸鹽、依托酸鹽(estolate)、乙磺酸鹽、富馬酸鹽、葡庚糖酸鹽、葡糖酸鹽、谷氨酸鹽、己基間苯二酚鹽、氫溴酸鹽、鹽酸鹽、羥基萘甲酸鹽、碘化物、異硫代硫酸鹽、乳酸鹽、乳糖酸鹽、月桂酸鹽、蘋果酸鹽、馬來(lái)酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、甲基溴化物、甲基硝酸鹽、甲基硫酸鹽、粘酸鹽、萘磺酸鹽、硝酸鹽、N-甲基葡糖胺銨鹽、油酸鹽、草酸鹽、撲酸鹽(pamoate)(雙羥萘酸鹽(embonate))、棕櫚酸鹽、泛酸鹽、磷酸鹽/二磷酸鹽、聚半乳糖醛酸鹽、水楊酸鹽、硬脂酸鹽、硫酸鹽、次醋酸鹽(subacetate)、琥珀酸鹽、鞣酸鹽、酒石酸鹽、茶氯酸鹽(teoclate)、甲苯磺酸鹽、三乙基碘(triethiodide)和戊酸鹽。此外、在本發(fā)明化合物攜帶酸性的分子部分的情況下，合適的其藥學(xué)可接受鹽包括但不限于，由無(wú)機(jī)堿，包括鋁、銨、鈣、銅、鐵、亞鐵、鋰、鎂、錳、錳(mangamous)、鉀、鈉、鋅等衍生的鹽。特別優(yōu)選的是銨、鈣、鎂、鉀和鈉鹽。從藥學(xué)可接受的有機(jī)無(wú)毒堿衍生的鹽包括伯、仲和叔胺、環(huán)胺和堿性離子交換樹脂、如精氨酸、甜菜堿、咖啡因、膽堿、N,N-二芐基乙二胺、二乙胺、2-二乙基氨基乙醇、2-二甲基氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基嗎啉、N-乙基哌啶、葡糖胺、氨基葡萄糖、組氨酸、異丙胺、賴氨酸、甲基葡糖胺、嗎啉、哌嗪、哌啶、聚胺樹脂、普魯卡因、嘌呤、可可堿、三乙基胺、三甲基胺、三丙基胺、氨基丁三醇、等等的鹽。

此外，在本發(fā)明的化合物中存在羧酸(-COOH)或醇基團(tuán)的情況下，可以采用羧酸衍生物的藥學(xué)可接受酯，如醇的甲酯、乙酯、或特戊?；趸柞?pivaloyloxymethyl)、或?；パ苌?，如乙?；ァ⑻匚祯；?、苯甲?；?、和氨基酰基酯。包括用于修改溶解度或水解特征以用作持續(xù)釋放或前藥配制劑的本領(lǐng)域中已知的那些酯和?；鶊F(tuán)。

本發(fā)明中也包括結(jié)構(gòu)式I、結(jié)構(gòu)式Ia和/或結(jié)構(gòu)式Ib的化合物的溶劑合物，特別是水合物。

根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，結(jié)構(gòu)式I、結(jié)構(gòu)式Ia和/或結(jié)構(gòu)式Ib的化合物可以被包含在用作藥物的各種配制劑中。用于口服使用的配制劑可以呈現(xiàn)為硬明膠膠囊，其中將活性成分與惰性固體稀釋劑，例如碳酸鈣、磷酸鈣或高嶺土混合，或者呈現(xiàn)為軟明膠膠囊，其中將活性成分與水或油介質(zhì)，例如花生油、液體石蠟或橄欖油混合。

水性懸浮液含有與適合于制備水性懸浮液的賦形劑混合的活性物質(zhì)。此類賦形劑是懸浮劑，例如羧甲基纖維素鈉，甲基纖維素，羥基丙基甲基纖維素，藻酸鈉，聚乙烯吡咯烷酮，黃蓍樹膠和阿拉伯樹膠；分散或潤(rùn)濕劑可以是天然存在的磷脂(phosphatide)，例如卵磷脂，或烯基氧化物與脂肪酸的縮合產(chǎn)物，例如聚氧乙烯硬脂酸酯，或環(huán)氧乙烷與長(zhǎng)鏈脂肪族醇的縮合產(chǎn)物，例如十七亞乙基氧基十六醇(heptadecaethylene-oxycetanol)，或環(huán)氧乙烷與由脂肪酸和己糖醇衍生的偏酯的縮合產(chǎn)物，如聚氧乙烯山梨糖醇單油酸酯，或環(huán)氧乙烷與由脂肪酸和己糖醇酐衍生的偏酯的縮合產(chǎn)物，例如聚乙烯脫水山梨醇單油酸酯。水性懸浮液也可含有一種或多種防腐劑，例如對(duì)羥基苯甲酸乙基或正丙基酯，一種或多種著色劑，一種或多種調(diào)味劑，和一種或多種甜味劑，如蔗糖，糖精或阿斯巴甜。

可以通過在植物油，例如花生油，橄欖油，芝麻油或椰子油中，或在礦物油如液體石蠟中懸浮活性成分來(lái)配制油性懸浮液。油性懸浮液可含有增稠劑，例如蜂蠟，硬石蠟或鯨蠟醇?？梢约尤胩鹞秳?，如上面列出的那些甜味劑和調(diào)味劑以提供可口的口服制劑。這些組合物可以通過加入抗氧化劑，如抗壞血酸來(lái)保存。

適合于通過加入水制備水性懸浮液的可分散粉劑和顆粒劑提供與分散劑或潤(rùn)濕劑、懸浮劑和一種或多種防腐劑混合的活性成分。合適的分散或潤(rùn)濕劑和懸浮劑由上文已提及的那些舉例說明。也可以存在另外的賦形劑，例如甜味劑，調(diào)味劑和著色劑。

本發(fā)明的藥物組合物也可以是水包油乳劑的形式。油相可以是植物油例如橄欖油或花生油，或礦物油例如液體石蠟或這些的混合物。合適的乳化劑可以是天然存在的磷脂，例如大豆，卵磷脂和自脂肪酸和己糖醇酐衍生的酯或偏酯，例如山梨糖醇單油酸酯，以及所述偏酯與環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物，例如聚氧乙烯山梨醇單油酸酯。乳劑也可含有甜味劑和調(diào)味劑。

糖漿和酏劑可以用甜味劑配制，例如甘油，丙二醇，山梨醇或蔗糖。這類制劑也可含有緩和劑/防腐劑和調(diào)味劑和著色劑。藥物組合物可以是無(wú)菌可注射水性或油性懸浮液的形式?？梢允褂靡讶缟衔奶峒暗哪切┖线m的分散或濕潤(rùn)劑和懸浮劑，按照已知技術(shù)配制此懸浮液。無(wú)菌可注射制劑也可以是在無(wú)毒的胃腸外可接受的稀釋劑或溶劑中的無(wú)菌可注射溶液或懸浮液，例如作為在1,3-丁二醇中的溶液。可以使用的可接受的媒介物和溶劑中有水，林格氏溶液和等張氯化鈉溶液。此外，無(wú)菌、不揮發(fā)性油常規(guī)用作溶劑或懸浮介質(zhì)。為此目的，任何溫和的不揮發(fā)性油都可以使用，包括合成的甘油單或二酯。此外，脂肪酸如油酸在注射物的制備中得到應(yīng)用。

也可以鼻內(nèi)或通過吸入，通常以干粉末的形式(單獨(dú)，作為混合物，例如在與乳糖的干燥混合物中，或作為混合組分顆粒，例如與磷脂，如磷脂酰膽堿混合)從干粉末吸入器或者作為氣溶膠噴霧從加壓容器、泵、噴射、霧化器(優(yōu)選使用電流體動(dòng)力學(xué)的I霧化器以產(chǎn)生細(xì)霧)、或噴霧器，使用或不使用合適的推進(jìn)劑，如1,1,1,2-四氟乙烷或1,1,1,2,3,3,3-七氟丙烷施用本發(fā)明的化合物。對(duì)于鼻內(nèi)使用，粉末可包含生物粘著劑，例如，殼聚糖或環(huán)糊精。

加壓容器、泵、噴霧、霧化器或噴霧器含有本發(fā)明的化合物的溶液或懸浮液，其包含例如乙醇，乙醇水溶液，或用于分散，增溶，或延長(zhǎng)活性物釋放的合適的備選劑，作為溶劑的推進(jìn)劑和可選的表面活性劑，如脫水山梨醇三油酸酯，油酸，或寡聚乳酸。

在干粉末或懸浮液配制劑中使用之前，將藥物產(chǎn)品微粉化至適合于通過吸入遞送的大小(通常小于5微米)。

這可以通過任何適當(dāng)?shù)姆鬯榉椒▽?shí)現(xiàn)，諸如螺旋噴射研磨，流化床噴射研磨，形成納米顆粒的超臨界流體加工，高壓均化，或噴霧干燥。

用于在吸入器或吹入器中使用的膠囊(例如由明膠或HPMC制成)、泡罩和藥筒可以配制成含有本發(fā)明的化合物、合適的粉末基質(zhì)如乳糖或淀粉和性能改性劑如l-亮氨酸，甘露醇或硬脂酸鎂的粉末混合物。乳糖可為無(wú)水的或呈單水合物形式，優(yōu)選后者。其它合適的賦形劑包括葡聚糖、葡萄糖、麥芽糖、山梨糖醇、木糖醇、果糖、蔗糖和海藻糖。

適合于在使用電流體動(dòng)力學(xué)以產(chǎn)生細(xì)霧的霧化器中使用的溶液配制劑可以含有每次動(dòng)作的對(duì)數(shù)(log)值至20mg的本發(fā)明的化合物，并且動(dòng)作體積可以從11變化到1001。典型的配制劑可以包含式I的化合物、丙二醇、無(wú)菌水、乙醇和氯化鈉?？梢源姹际褂玫膫溥x溶劑包括甘油和聚乙二醇。

合適的調(diào)味劑，如薄荷醇和左薄荷腦，或甜味劑，如糖精或糖精鈉，可以加入到旨在用于吸入/鼻內(nèi)施用的本發(fā)明的那些配制劑。

例如，可以使用聚(DL-乳酸-共乙醇酸)(PGLA)將用于吸入/鼻內(nèi)施用的配制劑配制為立即釋放和/或改進(jìn)釋放。改進(jìn)釋放配制劑包括延遲釋放，持續(xù)釋放，脈沖釋放，受控釋放，靶向釋放和程序釋放。

在干粉末吸入器和氣溶膠的情況中，依靠遞送計(jì)量的量的閥確定劑量單位。根據(jù)本發(fā)明的單位通常安排為施用計(jì)量劑量或含有1fig至10mg的式I的化合物的“噴”。總計(jì)每日劑量通常會(huì)在1lag至10mg的范圍內(nèi)，其可以以單劑量或更通常貫穿整天作為分開的劑量施用。

式Ia和/或式Ib的化合物也可以以栓劑形式施用，用于藥物的直腸施用。這些組合物可以通過將藥物與合適的無(wú)刺激性賦形劑混合制備，所述賦形劑在常溫下是固體但在直腸溫度下為液體，因此將在直腸中融化以釋放藥物混合。此類材料為可可脂和聚乙二醇。

對(duì)于局部使用，采用含有式I的化合物的霜?jiǎng)?、軟膏劑、膠凍劑、溶液或懸浮液等。(對(duì)于本申請(qǐng)的目的而言，局部施用應(yīng)包括口腔洗劑和含漱劑)。

效用

本文中具體例示的化合物在抑制TC-PTP酶上展現(xiàn)良好的效力，如通過其體外測(cè)定法顯示?；衔镆话阍跍y(cè)定法部分中描述的酶測(cè)定法中具有小于10μM的IC₅₀值，并且優(yōu)選具有小于1μM的IC₅₀值。

根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，TC-PTP的抑制劑可以改善免疫抑制疾病并且可以具有在預(yù)防或治療免疫抑制疾病中的效用。

本發(fā)明的一個(gè)方面提供了用于治療和控制癌癥的方法，所述方法包括對(duì)需要此類治療的患者施用治療有效量的樹突細(xì)胞，所述樹突細(xì)胞已經(jīng)通過式I、式Ia和/或式Ib的化合物，和/或式II的化合物，和從影響患者的癌細(xì)胞衍生的抗原或抗原混合物處理活化。

本發(fā)明的第二個(gè)方面提供了用于治療和控制HIV感染的方法，所述方法包括對(duì)需要此類治療的患者施用治療有效量的樹突細(xì)胞，所述樹突細(xì)胞已經(jīng)通過式I、式Ia和/或式Ib的化合物，和/或式II的化合物，和對(duì)于HIV病毒而言特異的衍生的抗原或抗原混合物處理活化。

本發(fā)明的第三個(gè)方面提供了用于治療和控制免疫抑制疾病的方法，所述方法包括對(duì)需要此類治療的患者施用治療有效量的樹突細(xì)胞，所述樹突細(xì)胞已經(jīng)通過式I、式Ia和/或式Ib的化合物，和/或式II的化合物和從由免疫抑制疾病影響的細(xì)胞衍生的抗原或抗原混合物處理活化。

式II的化合物是具有以下通式的TC-PTP的抑制劑、其藥學(xué)可接受鹽，及其立體異構(gòu)體：

其中

X’選自CH和N；

R^1’選自下組：(a)C_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代和任選用一個(gè)選自以下的基團(tuán)取代：-OH、任選用1-3個(gè)鹵素取代的-OC_1-3烷基、-SOxC_1-3烷基、和-CN，(b)-C(＝O)H，(c)-C(＝O)C_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(d)-CN，(e)-HC＝NOH，(f)-(CH₃)C＝NOH，(g)-HC＝NOC_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(h)-(CH₃)C＝NOC_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(i)-C(＝O)OC_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(j)-C(＝O)NHR^6’，(k)-CH＝CH-苯基，其中-CH＝CH-任選用1-2個(gè)取代基取代，所述取代基獨(dú)立選自鹵素和任選用1-3個(gè)F取代的C_1-2烷基，(I)-CH₂CH₂-苯基，其中-CH₂CH₂-任選用1-4個(gè)取代基取代，所述取代基獨(dú)立選自鹵素和任選用1-3個(gè)F取代的C_1-2烷基，(m)苯基，(n)-HET-苯基，其中HET是含有1-3個(gè)選自O(shè)、N和S的雜原子的5或6元雜芳香環(huán)，(o)-C＝C-苯基，和(p)-CH₂-苯基，其中-CH₂-苯基的-CH₂-基團(tuán)任選用1-2個(gè)取代基取代，所述取代基獨(dú)立選自鹵素和任選用1-3個(gè)F取代的C_1-2烷基，其中苯基和HET在所有出現(xiàn)中任選用1-3個(gè)取代基取代，所述取代基獨(dú)立選自(i)鹵素，(ii)-C(＝O)OC_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(iii)-C(＝O)OH，(iv)C_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(v)-OC_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(vi)–SOxMe，和(vii)-SO₂NH₂；

R^6’選自下組：H、任選用1-3個(gè)鹵素取代的C_1-3烷基、苯基、和-CH₂-苯基，其中苯基在這兩次出現(xiàn)中任選用1-3個(gè)取代基取代，所述取代基獨(dú)立選自(i)鹵素,(ii)-C(＝O)OC_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(iii)-C(＝O)OH，(iv)C_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，和(v)-OC_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代；

R^2’和R^4’獨(dú)立選自H、鹵素、-CH₃-、CF₃、-OCH₃和-OCF₃；

R^3’是鹵素，其中所述鹵素在與-CF₂PO(OR^5’)₂基團(tuán)鄰位的位置處與式II的稠合芳香環(huán)鍵合，

每個(gè)R5’基團(tuán)獨(dú)立選自下組：H和C_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，并且

x是0、1、或2。

除了靈長(zhǎng)類如人外，多種其它哺乳動(dòng)物可按照本發(fā)明的方法進(jìn)行治療。例如，可以治療哺乳動(dòng)物，包括但不限于，牛，綿羊，山羊，馬，狗，貓，豚鼠，大鼠或其它牛，羊，馬，犬，貓，嚙齒類(如小鼠)物種。然而，該方法也可以在其它物種，如禽類物種(例如，雞)中實(shí)施。

最佳濃度

可以通過在細(xì)胞中體外滴定化合物并且監(jiān)測(cè)IL-12的釋放測(cè)定用于活化APC的式I的化合物的有效濃度。在缺乏細(xì)胞毒性的情況下提供IL-12的最大釋放的最低濃度將取決于該化合物的內(nèi)在效力和其抑制細(xì)胞中的TC-PTP的能力。然后，該最佳濃度用于處理用于活化抗原呈遞的ACP。有用的濃度范圍為水性緩沖液或細(xì)胞培養(yǎng)基中的1nM至1mM。優(yōu)選地，使用的濃度介于1μM和100μM之間。

對(duì)于體外使用，可以以水、DMSO或水和DMSO的混合物中的溶液施用式I、式Ia和/或式Ib的化合物，到典型培養(yǎng)基中的APC懸浮液，使得終濃度是約1nM至約500μM。

對(duì)于體內(nèi)使用，每天的約0.01mg至約140mg/kg體重的等級(jí)的劑量水平可用于治療上文指定的疾患，或者可選每天每名患者約0.5mg至約7g。

可以與載體材料組合以產(chǎn)生單一劑量形式的活性成分的量會(huì)隨著治療的宿主和具體的施用模式而變化。例如，意在用于人的口服施用的配制劑可以含有0.5mg至5g與合適且方便的量的載體材料復(fù)合的活性劑，所述載體材料可以從總組合物的約5％變化到約95％。劑量單位形式一般會(huì)含有約1mg至約500mg的活性成分，通常25mg、50mg、100mg、200mg、300mg、400mg、500mg、600mg、800mg、或1000mg。

試劑盒

在用于體外目的時(shí)可以將式I、式Ia和/或式Ib的化合物包裝以用作結(jié)晶固體，無(wú)定形固體或凍干粉末。合適數(shù)量的范圍為約0.1mg至1g。理想地，將化合物包裝在容器中，該容器可以添加有適當(dāng)?shù)娜軇┮詫?shí)現(xiàn)期望的溶液濃度?；蛘?，可以將化合物包裝為固定濃度的水溶液，或包裝為固定濃度的水溶性有機(jī)溶劑中的溶液。合適的有機(jī)溶劑可以包括DMSO，甲醇，乙醇或乙腈，或這些溶劑與水的混合物。合適的濃度為約0.1mM至約25mM。

本發(fā)明包括試劑盒，該試劑盒包含式I，式Ia和/或式Ib的化合物，和關(guān)于如何使用所述化合物的用法說明。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，試劑盒還可以包括區(qū)分靶細(xì)胞的材料，和/或抗原和/或合適的細(xì)胞培養(yǎng)基的選擇。試劑盒將允許患者的細(xì)胞被方便地活化，分離和在臨床背景中再注射。可以優(yōu)化此種處理以用目前的臨床治療標(biāo)準(zhǔn)品最佳起作用。

可以在一次或多次注射中對(duì)需要免疫療法的患者施用式I，式Ia和/或式Ib的化合物活化的APC。將調(diào)節(jié)注射的頻率和注射間的間隔以最大化治療響應(yīng)。例如，可以每天一次、兩次或更多次，或者每周一次、兩次或更多次，每?jī)芍堋⒚吭禄蛎績(jī)稍禄蛞哉J(rèn)為最適合于患者的治療益處的任何其它間隔發(fā)生注射。

聯(lián)合療法

可以用APC治療需要免疫療法的患者，所述APC用式I，式Ia和/或式Ib的化合物與對(duì)于醫(yī)學(xué)從業(yè)人員已知的其它治療同時(shí)活化。此類多種治療的使用對(duì)于患者可以是特別有利的。此列治療可以包括但不限于手術(shù)切除、放射、化學(xué)療法、靶向療法和其它類型的免疫療法?？梢允褂玫幕瘜W(xué)治療劑包括：

a)細(xì)胞毒劑，如泰素、松胞菌素B、短桿菌肽D、溴化乙啶、依米丁、絲裂霉素、依托泊苷、替尼泊苷、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春堿、秋水仙堿、多柔比星、柔紅霉素、二羥基炭疽菌素二酮、米托蒽醌、光輝霉素、放線菌素D、1-去氫睪酮、糖皮質(zhì)激素、普魯卡因、丁卡因、利多卡因、普萘洛爾、嘌呤霉素和其類似物或同系物；

b)抗代謝物，如甲氨蝶呤、6-巰嘌呤、6-硫鳥嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶、氨烯咪胺；

c)烷化劑，如氮芥、塞替派、苯丁酸氮芥、美法侖、卡莫司汀(BSNU)和洛莫司汀(CCNU)、環(huán)磷酰胺、白消安、二溴甘露醇、鏈脲霉素、絲裂霉素C，和順式-二氯二胺鉑(II)(DDP)順鉑；

d)蒽環(huán)類抗生素，如柔紅霉素和多柔比星；

e)抗生素，如更生霉素、博萊霉素、光輝霉素、和氨茴霉素(AMC)；

f)抗有絲分裂劑，如長(zhǎng)春新堿和長(zhǎng)春堿；

g)可以使用的靶向療法包括，但是它們不限于：激素療法(如地加瑞克(degarelix)，降低前列腺癌中的睪酮水平的促黃體素釋放素(LHRH)拮抗劑)，信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制劑(如伊馬替尼和曲妥珠單抗)，以及基因表達(dá)調(diào)節(jié)劑(例如HDAC抑制劑帕比司他(panobinostat)和貝利司他(belinostat))，凋亡誘導(dǎo)劑(如重組人TNF相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(TRAIL))和血管發(fā)生抑制劑(如索拉非尼、舒尼替尼、帕唑帕尼和依維莫司)；

h)可以使用的免疫療法劑包括單克隆抗體治療(抗CTLA4，抗PD1)，和嵌合抗原受體(CAR)-T-細(xì)胞。

用于測(cè)量生物活性的測(cè)定法

可以使用用于TC-PTP-抑制活性的以下測(cè)定法評(píng)估本申請(qǐng)的化合物的活性。式I的化合物在此測(cè)定法中會(huì)具有<10μM的活性，并且優(yōu)選是<1μM的活性。

1)用于TC-PTP的酶測(cè)定法

測(cè)定緩沖液：50mM Bis-Tris(pH＝6.3)

2mM EDTA

5mM N,N’-二甲基-N,N’-二(巰基乙?；?肼(DMH)

底物：在-20℃貯存的10mM熒光素二磷酸(FDP)(也可以使用10mM DiFMUP)

酶稀釋緩沖液：50mM Bis-Tris(pH＝6.3)

2mM EDTA

5mM DMH

20％(v/v)甘油

0.01％非離子表面活性劑(Triton X-100)

在96孔板中在室溫實(shí)施測(cè)定法。170μl中的反應(yīng)混合物含有50mM Bis-Tris(pH＝6.3)、2mM EDTA、5mM N,N’-二甲基-N,N’-二(巰基乙?；?肼(DMH)和10μM熒光素二磷酸(FDP)或6,8-二氟-4-甲基傘形酮基磷酸(DiFMUP)。將10μl的溶解于DMSO中的測(cè)試化合物(抑制劑)的10個(gè)濃度(連續(xù)稀釋)或用于對(duì)照的單獨(dú)DMSO添加到每個(gè)孔，并且將板混合2min。通過添加20μl稀釋的TC-PTP(FDP為50nM，50mM Bis/Tris(pH＝6.3)中的DiFMUP為0.5nM，2mM EDTA，5mM DMH，20％甘油和0.01％非離子表面活性劑(Triton X-100))啟動(dòng)反應(yīng)。通過以440nm的激發(fā)和530nm的發(fā)射(在525nm的截留濾器)(對(duì)于FDP)和360nm的激發(fā)和450nm的發(fā)射(在435nm的截留濾器)(對(duì)于DiFMUP)使用光譜最大通用迷你型(Spectromax Gemini)熒光讀板儀(分子探針，Molecular probes)連續(xù)監(jiān)測(cè)熒光產(chǎn)物熒光素單磷酸(FMP)或6,8-二氟-7-羥基-4-香豆素(DiFMU)的出現(xiàn)達(dá)15-30min追蹤磷酸酶活性。至少一式兩份完成所有測(cè)定法。相對(duì)于抑制劑的濃度繪圖FMP或DiFMU形成的初始速率，并且將數(shù)據(jù)擬合到4參數(shù)方程，并且擬合的拐點(diǎn)是IC₅₀。

2)小鼠樹突細(xì)胞測(cè)定法

使用裝備有23號(hào)針的注射器將小鼠骨髓細(xì)胞從股骨和脛骨沖洗到RPMI(補(bǔ)充有10％FBS、慶大霉素、HEPES、非必需氨基酸)。通過經(jīng)由注射器將細(xì)胞懸浮液溫和通過幾次，以分散塊。通過使細(xì)胞懸浮液通過70μM尼龍濾器除去細(xì)胞和碎片的任何剩余的塊。將懸浮液離心(300x g達(dá)10min)，棄去上清液，并且在5ml紅細(xì)胞裂解緩沖液(SIGMA)中重懸細(xì)胞。對(duì)細(xì)胞計(jì)數(shù)，并且根據(jù)用于CD11b細(xì)胞的陽(yáng)性選擇的用法說明(Stemcell technologies)分離小鼠單核細(xì)胞(CD11b+)。然后，在補(bǔ)充有10％FBS、慶大霉素、HEPES(羥乙基哌嗪乙硫磺酸的縮寫)和非必需的氨基酸(aa)的RPMI培養(yǎng)基中重懸細(xì)胞，并且用40ng/ml重組小鼠GM-CSF和IL-4(Peprotech)處理。以1x10⁶個(gè)細(xì)胞/mL鋪板小鼠單核細(xì)胞。在存在不同濃度的化合物(0-32μM)的情況下在濕潤(rùn)的培養(yǎng)箱中在37℃,5％CO₂溫育細(xì)胞6天。通過從板除去培養(yǎng)基的一半，并且用相同體積的補(bǔ)充有相同濃度的細(xì)胞因子和測(cè)試化合物的新鮮培養(yǎng)基補(bǔ)充，每三天更換培養(yǎng)基。

可以將未成熟的單核細(xì)胞衍生的DC與含有測(cè)試化合物的DC成熟混合劑一起溫育，并且再溫育24-72小時(shí)。存在有文獻(xiàn)中鑒定的許多DC成熟混合劑，“黃金標(biāo)準(zhǔn)”由10ng/ml TNF-α、10ng/ml IL-1β、1000個(gè)單位/ml IL-6和1μg/mL PGE2組成?；蛘?，也已經(jīng)使用MPLA(10μg/mL)和IFNγ(500U/ml,制備Peprotech，用于臨床研究)。對(duì)于實(shí)施例12中顯示的數(shù)據(jù)，用LPS(1μg/mL))培養(yǎng)未成熟的單核細(xì)胞衍生的DC達(dá)48小時(shí)以誘導(dǎo)成熟。以1和32μM之間變化的濃度在成熟混合劑中包含測(cè)試化合物。

可以通過許多測(cè)定法測(cè)定成熟的DC的特征以評(píng)估DC介導(dǎo)的抗腫瘤響應(yīng)和癌癥免疫，包括對(duì)DC上表達(dá)的表面標(biāo)志物的流式細(xì)胞術(shù)分析，活化的DC的細(xì)胞因子生成譜，抗原呈遞測(cè)定法和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。

3)人樹突細(xì)胞測(cè)定法

用相等體積的加有2％FBS的PBS稀釋人血液的樣品。在名稱為L(zhǎng)ymphoprep的淋巴細(xì)胞分離劑(Stemcell technologies)上分層稀釋的血液，注意最小化血液與名稱為L(zhǎng)ymphoprep的淋巴細(xì)胞分離劑的混合。在室溫以800x g離心混合物20分鐘，驟停。如果已經(jīng)將血液貯存超過2小時(shí)，那么將離心時(shí)間增加到30分鐘。然后，在不破壞血漿-名稱為L(zhǎng)ymphoprep的淋巴細(xì)胞分離劑界面的情況下取出并棄去上血漿層。在不破壞紅細(xì)胞/粒細(xì)胞團(tuán)粒的情況下取出并保留血漿-名稱為L(zhǎng)ymphoprep的淋巴細(xì)胞分離劑界面處的單核細(xì)胞層(PMBC)。用培養(yǎng)基將單核細(xì)胞清洗一次，并且根據(jù)CD14+陽(yáng)性選擇試劑盒(Stemcell technologies)的用法說明分離CD14+細(xì)胞。在PromoCell單核細(xì)胞附著培養(yǎng)基(PromoCell)中培養(yǎng)所得的CD14+細(xì)胞。以0.5x 10⁶個(gè)細(xì)胞/cm²鋪板細(xì)胞，并且在濕潤(rùn)的培養(yǎng)箱中在5％CO₂和37℃溫育1h。然后，在存在不同濃度的測(cè)試化合物(0-32μM)的情況下用補(bǔ)充有慶大霉素、50ng/mL重組GM-CSF和35ng/ml重組IL-4的StemXVivo無(wú)血清樹突細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基替換PromoCell單核細(xì)胞附著培養(yǎng)基。

在濕潤(rùn)的培養(yǎng)箱中在37℃,5％CO₂溫育細(xì)胞6天。通過從板除去培養(yǎng)基的一半并且用相同體積的補(bǔ)充有細(xì)胞因子和測(cè)試化合物的新鮮培養(yǎng)基補(bǔ)充，每三天更換培養(yǎng)基?；蛘?，可以除去整個(gè)培養(yǎng)基體積，并且立即用含有細(xì)胞因子和測(cè)試化合物的新鮮培養(yǎng)基替換。

用MPLA(2.5ng/mL)和IFNγ(1000U/ml,Peprotech，用于臨床研究)和合適濃度的TC-PTP抑制劑處理所得的未成熟的單核細(xì)胞衍生的DC，并且將細(xì)胞再溫育48小時(shí)。也可以使用其它DC成熟混合劑，包括10ng/ml TNF-α、10ng/ml IL-1β、1000個(gè)單位/ml IL-6和1μg/mL PGE2以及合適濃度的TC-PTP抑制劑。

可以通過許多測(cè)定法測(cè)定成熟的DC的特征，以評(píng)估DC介導(dǎo)的抗腫瘤響應(yīng)和癌癥免疫，包括對(duì)DC上表達(dá)的表面標(biāo)志物的流式細(xì)胞術(shù)分析，活化的DC的細(xì)胞因子生成譜，抗原呈遞測(cè)定法和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。

4)小鼠同基因腫瘤模型

通過從兩種商品化的構(gòu)建體(addgene 19360:pLenti pgk和addgene 18751:MSCV-IRES-GFP)亞克隆產(chǎn)生新的雙重報(bào)告物(GFP和螢光素酶)的基于MSCV的質(zhì)粒。使用此構(gòu)建體產(chǎn)生逆轉(zhuǎn)錄病毒，以感染EG7淋巴瘤細(xì)胞(ATCC#CRL-2133)。EG7-ova表達(dá)細(xì)胞是T細(xì)胞淋巴瘤的常用的模型，所述T細(xì)胞淋巴瘤工程化為表達(dá)卵清蛋白抗原，使得它們可用于免疫學(xué)和藥物發(fā)現(xiàn)應(yīng)用。然后，在McGill大學(xué)(McGill University Life Sciences Complex flow cytometry core(BD FACscalibur))對(duì)這些細(xì)胞進(jìn)行GFP分選，之后在同基因C57b16小鼠(Harlan)中皮下植入(5x10⁵個(gè)細(xì)胞)。允許在小鼠中建立腫瘤，然后在植入后10天成像(Perkin Elmer IVIS100)，并且使用IVIS軟件量化發(fā)光。然后，在用2x10⁶個(gè)離體衍生的并且經(jīng)抑制劑處理的成熟樹突細(xì)胞(IP注射)(參見用PTP抑制劑對(duì)單核細(xì)胞衍生的DC的離體活化)注射后第10天處理小鼠。在成熟期間以2.5mg/mL的濃度將卵清蛋白添加到DC培養(yǎng)物。在成熟后，通過用磷酸鹽緩沖鹽水溫和重懸以取出任何松散附著的細(xì)胞收獲DC。然后，將細(xì)胞旋下，并且用磷酸鹽緩沖鹽水清洗兩次。在注射前，在磷酸鹽緩沖鹽水中以每mL的2000萬(wàn)個(gè)細(xì)胞的濃度重懸DC。

本發(fā)明的化合物的制備

在以下方案、方法和實(shí)施例中闡述了用于制備本發(fā)明的化合物的合成方法。起始材料是商品化的或者可以根據(jù)本領(lǐng)域中已知或如本文中闡述的方案制備。在某些情況下，進(jìn)行上述反應(yīng)方案的順序可以改變，以促進(jìn)反應(yīng)或者避免不需要的反應(yīng)產(chǎn)物。本發(fā)明的化合物依靠以下所示的具體實(shí)施例闡述。然而，這些具體實(shí)施例不應(yīng)解釋為形成認(rèn)為是本發(fā)明的唯一屬。這些實(shí)施例進(jìn)一步闡述了本發(fā)明的化合物的制備細(xì)節(jié)。本領(lǐng)域技術(shù)人員將容易理解，以下制備方案的條件和過程的已知變化可用于制備這些化合物。所有的溫度均為攝氏度，除非另有說明。質(zhì)譜(MS)通過電噴霧離子質(zhì)譜法(ESI)進(jìn)行測(cè)定。¹H NMR譜是在400或500MHz在Bruker儀上記錄。

縮寫列表：

Alk＝烷基

Ar＝芳基

BINAP＝2,2'-二(聯(lián)苯基膦基)-1,1'-二萘

Boc＝叔丁氧基羰基

br＝寬

CH₂Cl₂＝二氯甲烷

d＝雙峰

DBU＝1,8-二氮雜二環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯

DEAD＝偶氮二羧酸二乙酯

DIBAL＝二異丁基氫化鋁

DIPEA＝N,N-二異丙基乙胺

DMF＝二甲基甲酰胺

DMSO＝二甲亞砜

ESI＝電噴射離子化

EtOAc＝乙酸乙酯

h＝小時(shí)

HATU＝O-(7-偶氮苯并三氮唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯

HOAc＝乙酸

Hunig堿＝二異丙基乙胺

LiOH＝氫氧化鋰

m＝多重峰

MeCN＝乙腈

MeOH＝甲醇

MeTHF＝2-甲基四氫呋喃

MgSO₄＝硫酸鎂

min＝分鐘

MS＝質(zhì)譜法

MTBE＝甲基叔丁基醚

NaOH＝氫氧化鈉

Na₂SO₄＝硫酸鈉

NMP＝N-甲基2-吡咯烷酮

NMR＝核磁共振譜學(xué)

PG＝保護(hù)基

Ph＝苯基

rt＝室溫

s＝單峰

t＝三重峰

TFA＝三氟乙酸

TFAA＝三氟乙酸酐

THF＝四氫呋喃

TMEDA＝N,N,N',N'-四甲基乙二胺

方法A：

可以通過單金屬化四溴苯，接著用?；瘎?，如DMF捕獲制備本發(fā)明的化合物?？梢栽趬A性條件下用適當(dāng)官能化的硫醇處理所獲得的α-鹵代苯甲醛，以置換與醛相鄰的溴。如果R¹是吸電子基團(tuán)，那么隨后的加熱將產(chǎn)生羥醛與醛的縮合產(chǎn)物，形成適當(dāng)取代的苯并噻吩?？梢苑沁x擇性金屬化剩余的溴原子之一并用碘捕獲。將所得的芳基碘與商品化的溴氟甲基膦酸二乙酯的鋅酸鹽偶聯(lián)。在這一點(diǎn)上，可以再官能化R¹基團(tuán)以提供本發(fā)明的膦酸酯前體。隨后乙酯水解和用合適的堿如氫氧化銨或氫氧化鈉的鹽形成，提供了本發(fā)明的化合物。可以通過最后兩步的任一步的層析分離產(chǎn)品的混合物。

方法B：

可以使用I₂、ICl或其它碘化劑在5位中選擇性碘化商品化的2-氯-4-氨基苯甲酸的甲酯。酯還原成相應(yīng)的醛，接著在堿性條件下用適當(dāng)官能化的硫醇處理會(huì)置換與醛相鄰的氯。如果R¹是吸電子基團(tuán)，那么隨后的加熱將產(chǎn)生羥醛與醛的縮合產(chǎn)物，形成適當(dāng)取代的苯并噻吩?？梢允褂蒙５逻~爾反應(yīng)將苯胺氮轉(zhuǎn)化為溴原子。將所得的芳基碘與商品化的溴二氟甲基膦酸二乙酯的鋅酸鹽偶聯(lián)。在這一點(diǎn)上，可以再官能化R¹基團(tuán)以提供本發(fā)明的膦酸酯前體。隨后使用TMSBr的膦酸酯水解和用合適的堿如氫氧化銨或氫氧化鈉的鹽形成，提供了本發(fā)明的化合物。

方法C:

可以用試劑如NBS在5位中選擇性溴化商品化的2-氯-4-氨基苯甲酸的甲酯。酯還原成相應(yīng)的醛，接著在堿性條件下用適當(dāng)官能化的硫醇處理會(huì)置換與醛相鄰的氯。如果R¹是吸電子基團(tuán)，那么隨后的加熱將產(chǎn)生羥醛與醛的縮合產(chǎn)物，形成適當(dāng)取代的苯并噻吩?？梢允褂蒙５逻~爾反應(yīng)將苯胺氮轉(zhuǎn)化為碘原子。將所得的芳基碘與商品化的溴二氟甲基膦酸二乙酯的鋅酸鹽偶聯(lián)。在這一點(diǎn)上，可以再官能化R¹基團(tuán)以提供本發(fā)明的膦酸酯前體。隨后使用TMSBr的膦酸酯水解和用合適的堿如氫氧化銨或氫氧化鈉的鹽形成，提供了本發(fā)明的化合物。

方法D：

可以使用NBS或其它溴化劑在5位中選擇性溴化商品化的2-氯-4-氨基苯甲酸?？梢允褂蒙５逻~爾反應(yīng)將苯胺氮轉(zhuǎn)化為碘原子，并且可以在費(fèi)希爾條件下酯化酸。將所得的芳基碘與商品化的溴二氟甲基膦酸二乙酯的鋅酸鹽偶聯(lián)。可以使用硼氫化鈉或其它還原劑將酯還原成醇，然后使用氧化劑如MnO₂、斯文氧化劑(Swern)或TPAP氧化成醛?；蛘?，可以使用DiBAL-H將此酯直接還原成醛?？梢栽趬A性條件下用適當(dāng)官能化的硫醇處理α-鹵代醛以置換與醛相鄰的氟。如果R¹是吸電子基團(tuán)，那么隨后的加熱將產(chǎn)生羥醛與醛的縮合產(chǎn)物，形成適當(dāng)取代的苯并噻吩。在這一點(diǎn)上，可以再官能化R¹基團(tuán)以提供本發(fā)明的膦酸酯前體。隨后使用TMSBr的膦酸酯水解和用合適的堿如氫氧化銨或氫氧化鈉的鹽形成，提供了本發(fā)明的化合物。

提供以下實(shí)施例以闡述本發(fā)明，并且不應(yīng)解釋為以任何方式限制本發(fā)明。本發(fā)明的范圍以所附權(quán)利要求書限定。

實(shí)施例1

((6-溴-2-(乙氧基羰基)苯并[B]噻吩-5-基)二氟甲基)膦酸酯

步驟1：4-氨基-2-氯苯甲酸甲酯

對(duì)0℃的甲醇逐滴添加氯化乙酰(314.7mmol,22.4mL)。在添加氯化乙酰后，在rt攪拌反應(yīng)混合物30min，然后一次就添加4-氨基-2-氯苯甲酸1(116.6mmol,20.0g)。在回流時(shí)加熱反應(yīng)混合物18小時(shí)，冷卻到0℃，并且在真空下濃縮。將殘留物在250mL乙酸乙酯中懸浮，冷卻到0℃，并且添加飽和水性NaHCO₃(pH是8)。將混合物分配，并且用乙酸乙酯(200mL)提取。用鹽水清洗組合有機(jī)層，通過MgSO₄干燥，并且在真空下濃縮以提供作為黃色固體的20.9g標(biāo)題化合物，其在下一步中在不純化的情況下照原樣使用：¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ7.78(d,J＝8.6Hz,1H),6.70(d,J＝2.3Hz,1H),6.52(dd,J＝8.6,2.3Hz,1H),4.09(bs,1H),3.86(s,3H)。LCMS(M+1)＝186.1,188.1。

步驟2：4-氨基-2-氯-5-碘-苯甲酸甲酯

對(duì)MeOH(216mL)中的4-氨基-2-氯苯甲酸甲酯(20.0g,107.75mmol)和CaCO₃(21.58g,215.5mmol)的懸浮液添加CH₂Cl₂(102mL)中的一氯化碘(20.0g,123.2mmol)的溶液。在室溫?cái)嚢杷玫姆磻?yīng)混合物5h，并且通過添加冷卻水(700mL)和乙酸乙酯(700mL)淬滅。通過賽麗特(celite)將它過濾，用300mL 10％硫代硫酸鈉處理濾液，分配，并且用乙酸乙酯(400mL)提取水性層。用10％硫代硫酸鈉(2x)和鹽水清洗合并的有機(jī)層。通過MgSO₄干燥有機(jī)層，并且在真空下濃縮到干燥。將殘留物在硅膠中吸附，加載到快速柱中，用5、7.5和10％乙酸乙酯/甲苯洗脫所述快速柱以提供作為黃色固體的17.0g標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ8.26(s,1H),6.75(s,1H),4.52(bs,1H),3.87(s,3H)。LCMS(M+1)＝312.0,314.0。

步驟3：(4-氨基-2-氯-5-碘苯基)甲醇

在-40℃在氮?dú)庀略?0min的時(shí)間段里對(duì)CH₂Cl₂(400mL)和THF(100mL)中的4-氨基-2-氯-5-碘-苯甲酸甲酯(17.0g,54.6mmol)的溶液緩慢添加二異丁基氫化鋁(136.0mL,136.0mmol,1.0M，在CH₂Cl₂中)。在完成添加后除去冷卻浴。在rt攪拌2h后，將混合物倒入0℃飽和水性酒石酸鉀鈉。將層分配，并且用CH₂Cl₂(600mL)提取水層。用鹽水清洗合并的有機(jī)層，通過MgSO₄干燥，并且在真空下濃縮到干燥，以提供作為橙色固體的15.5g標(biāo)題化合物，其在下一步中在不進(jìn)一步純化的情況下使用。

步驟4：4-氨基-2-氯-5-碘苯甲醛

在rt對(duì)DMF(270mL)中的(4-氨基-2-氯-5-碘苯基)甲醇(15.5g,54.7mmol)的溶液逐批次添加活化的MnO₂(23.8g,273.4mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌18h，TLC顯示不完全的反應(yīng)。再添加15.0g MnO₂，并且在rt再攪拌反應(yīng)混合物18h，然后經(jīng)由賽麗特過濾。用乙酸乙酯(400mL)和水(300mL)稀釋濾液。分配層，并且用乙酸乙酯(300mL x 2)提取水層。用鹽水清洗合并的有機(jī)層，通過MgSO₄干燥，并且在真空下濃縮到干燥。在50％Et₂O/己烷中研磨殘留物以提供作為黃色固體的10.2g標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ10.12(d,J＝0.8Hz,1H),8.22(s,1H),6.70(d,J＝0.8Hz,1H),4.79(bs,1H)。LCMS(M+1)＝282.0,283.9。

步驟5：6-氨基-5-碘苯并[b]噻吩-2-羧酸乙酯

用氮?dú)鈱?6mL無(wú)水DMF中的4-氨基-2-氯-5-碘苯甲醛(10.2g,36.2mmol)和K₂CO₃(12.5g,90.6mmol)的懸浮溶液脫氣15min，緩慢添加巰基乙酸乙酯(8.34mL,76.1mmol)，然后在rt攪拌所得的反應(yīng)混合物3天。對(duì)等分試樣的分析顯示了約5％的起始材料和95％2-((5-氨基-2-甲?；?4-碘苯基)硫代)乙酸乙酯。然后，在75℃將反應(yīng)混合物加熱5h。將它冷卻到rt，倒入水(500mL)和CH₂Cl₂(400mL)的混合物中，并且分配。用CH₂Cl₂(300mL)提取水層。用鹽水清洗合并的有機(jī)層，通過MgSO₄干燥，并且在真空下濃縮到干燥。在50％Et₂O/己烷中研磨殘留物以提供作為黃色固體的5.0g標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ8.17(s,1H),7.81(s,1H),7.15(s,1H),4.37(q,J＝7.0Hz,2H),4.30(s,2H),1.40(t,J＝7.0Hz,3H)。LCMS(M+1)＝348.0。

步驟6：6-溴-5-碘苯并[b]噻吩-2-羧酸乙酯

對(duì)69mL無(wú)水乙腈中的6-氨基-5-碘苯并[b]噻吩-2-羧酸乙酯6(2.4g,6.9mmol)和CuBr(1.0g,7.6mmol)的懸浮溶液添加亞硝酸叔丁酯(1.0mL,10.34mmol)。在45℃將所得的反應(yīng)混合物加熱6h，冷卻到rt，并且倒入5％硫代硫酸鈉中。用DCM(150mL X 2)提取它，用鹽水清洗合并的有機(jī)層，通過MgSO₄干燥，并且在真空下濃縮到干燥。在硅膠中吸附殘留物，加載到快速柱中，用20和30％CH₂Cl₂/己烷洗脫所述快速柱以提供作為淡黃色固體的的900mg標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ8.38(s,1H),8.15(s,1H),7.15(s,1H),4.44-4.38(m,2H),1.42(t,J＝7.0Hz,3H)。LCMS(M+1)＝410.9,412.9。

活化的鋅粉的制備

用1.0N HCl(40mL x 3)、H₂O(100mL x 5)、MeOH(100mL x 3)和Et₂O(100mL x 3)清洗燒結(jié)漏斗中的鋅粉。然后，在高真空下放置收集的鋅過夜。

步驟7：((二乙氧基磷酰基)二氟甲基)溴化鋅(II)

對(duì)86mL無(wú)水THF中的活化的Zn粉末(2.26g,34.56mmol)的懸浮溶液添加1,2-二溴乙烷(149.0pL,1.73mmol)，并且在50℃加熱反應(yīng)混合物15min。在冷卻到rt后，添加三甲基氯硅烷(262.0μL,2.0mmol)，并且將混合物超聲處理15分鐘。逐滴添加(溴二氟甲基)膦酸二乙酯(6.15mL,34.56mmol)，然后在50℃加熱混合物1h。將混合物(約0.4M)冷卻到rt，并且直接用于下一個(gè)步驟。

步驟8：6-溴-5-((二乙氧基磷?；?二氟甲基)苯并[b]噻吩-2-羧酸乙酯

在rt對(duì)THF中的0.4M((二乙氧基磷酰基)二氟甲基)溴化鋅(II)(14.6mL,5.84mmol)的新鮮制備的溶液一次就添加CuBr(420mg,2.93mmol)。在rt將所得的反應(yīng)混合物攪拌30min，然后緩慢添加14.6mL無(wú)水THF中的6-溴-5-碘苯并[b]噻吩-2-羧酸乙酯(來(lái)自步驟6，800mg,1.95mmol)的溶液。在45℃加熱混合物過夜，冷卻到rt，然后添加乙酸乙酯(100mL)和水性飽和氯化銨(100mL)。分配混合物，并且用乙酸乙酯(100mL)提取水層。用鹽水清洗合并的有機(jī)層，通過MgSO₄干燥，并且在真空下濃縮到干燥。

將殘留物在硅膠上吸附，然后加載到快速柱上，用5、7、10和12％乙酸乙酯/甲苯洗脫所述快速柱以提供作為黃色固體的260mg標(biāo)題化合物?；厥?00mg起始材料。¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ8.19(s,1H),8.16(s,1H),8.04(s,1H),4.44-4.40(m,2H),4.32-4.21(m,4H),1.42(t,J＝7.2Hz,3H),1.39-1.32(m,6H)。LCMS(M+1)＝471.0,473.0。

步驟9：((6-溴-2-(乙氧基羰基)苯并[b]噻吩-5-基)二氟甲基)膦酸二銨

在rt對(duì)1mL無(wú)水二氯甲烷中的6-溴-5-((二乙氧基磷酰基)二氟甲基)苯并[b]噻吩-2-羧酸乙酯(40mg,0.09mmol)的攪拌溶液添加三甲基溴硅烷(112pL,0.85mmol)。在rt攪拌反應(yīng)混合物過夜，在真空下濃縮到干燥，與二氯甲烷(3x)和乙醇(3x)共蒸發(fā)。在0.5mL乙醇中溶解殘留物，并且添加1.0mL氨(0.5M，在二噁烷中)。攪拌懸浮液30min，在真空下濃縮到干燥，并且在Et₂O中研磨殘留物以提供作為無(wú)色粉末的20mg標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,MeOH-d4):δ8.42(s,1H),8.26(s,1H),8.11(s,1H),4.39(q,J＝7.1Hz,2H),1.40(t,J＝7.1Hz,3H)。LCMS(M+1)＝414.9,416.9。

實(shí)施例2

6-溴-5-(二氟(膦?；?甲基)苯并[B]噻吩-2-羧酸鹽(6-BROMO-5-(DIFLUORO(PHOSPHONATO)METHYL)BENZO[B]THIOPHENE-2-CARBOXYLATE)

步驟1：6-溴-5-((乙氧基(羥基)磷?；?二氟甲基)苯并[b]噻吩-2-羧酸

在0℃對(duì)0.90mL乙醇和1.60mL THF中的6-溴-5-((二乙氧基磷酰基)二氟甲基)苯并[b]噻吩-2-羧酸乙酯8(實(shí)施例1，步驟8；120mg，0.25mmol)的攪拌溶液逐滴添加1N LiOH(380μL,0.38mmol)。除去冷卻浴，并且在rt攪拌反應(yīng)混合物3h。將溶液冷卻到0℃，添加1N HCl以達(dá)到pH 2，并且用乙酸乙酯(2x)提取混合物。用鹽水清洗合并的有機(jī)層，通過MgSO4干燥，并且在真空下濃縮至干燥。通過用10％MeOH/CH₂Cl₂和i-PrOH/NH₄OH/H₂O(12:3:1)洗脫的快速柱純化殘留物，以提供作為無(wú)色固體的51mg標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,MeOH-d4):δ8.31(s,1H),8.26(s,1H),8.09(s,1H),4.18-4.10(m,2H),1.29(s,J＝7.04Hz,3H)。LCMS(M+1)＝415.0,417.0。

步驟2：6-溴-5-(二氟(膦?；?甲基)苯并[B]噻吩-2-羧酸三銨

在rt對(duì)1mL無(wú)水二氯甲烷中的6-溴-5-((乙氧基(羥基)磷?；?二氟甲基)苯并[b]噻吩-2-羧酸11(51mg,0.12mmol)的攪拌溶液添加三甲基溴硅烷(162μL,1.2mmol)。在rt將反應(yīng)混合物攪拌過夜,在真空下濃縮到干燥，與二氯甲烷(3x)和乙醇(3x)共蒸發(fā)。在0.5mL乙醇中溶解殘留物，并且添加1.0mL氨(0.5M，在二噁烷中)。將它攪拌30min，在真空下濃縮到干燥，并且在i-PrOH/NH₄OH/H₂O(12:3:1)中研磨殘留物，提供作為無(wú)色粉末的26mg標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,D₂O):δ8.15(s,1H),8.07(s,1H),7.72(s,1H)。LCMS(M+1)＝386.9,388.9。

實(shí)施例3

((6-溴-2-氨基甲?；讲B]噻吩-5-基)二氟甲基)膦酸鹽

步驟1：氫((6-溴-2-氨基甲?；讲b]噻吩-5-基)二氟甲基)膦酸乙酯

在rt對(duì)0.50mL THF中的6-溴-5-((二乙氧基磷?；?二氟甲基)苯并[b]噻吩-2-羧酸乙酯(實(shí)施例1，步驟8；60mg，0.13mmol)的攪拌溶液添加0.50mL氫氧化銨(28-30％/H₂O)。在65℃加熱混合物過夜，并且在真空下濃縮至干燥。通過用i-PrOH/NH₄OH/H₂O(54:2.5:0.5至30:2.5:0.5)洗脫的快速柱純化殘留物。在真空下濃縮級(jí)份，在乙酸乙酯中懸浮殘留物，并且添加1N HCl以調(diào)節(jié)pH 2。分配混合物，并且用乙酸乙酯提取水層。用鹽水清洗合并的有機(jī)層，通過MgSO₄干燥，并且在真空下濃縮到干燥以提供黃色固體的26mg標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,MeOH-d4):δ8.33(s,1H),8.19(s,1H),8.04(s,1H),4.21-4.14(m,2H),1.33-1.27(m,3H)。LCMS(M+1)＝414.0,416.0。

步驟2：((6-溴-2-氨基甲?；讲b]噻吩-5-基)二氟甲基)膦酸二銨

在rt對(duì)1mL無(wú)水二氯甲烷中的氫((6-溴-2-氨基甲?；讲b]噻吩-5-基)二氟甲基)膦酸乙酯(26mg,0.06mmol)的攪拌溶液添加三甲基溴硅烷(83μL,0.63mmol)。在rt將反應(yīng)混合物攪拌過夜。LCMS顯示了不完全反應(yīng)；再添加160μL三甲基溴硅烷。在rt將它攪拌過夜，在真空下濃縮到干燥，與二氯甲烷(3x)和乙醇(3x)共蒸發(fā)。在0.5mL乙醇中溶解殘留物，并且添加1.0mL氨(濃度為0.5M，在二噁烷中)。將它攪拌30min，在真空下濃縮到干燥，并且在2-丙醇中研磨殘留物，以提供作為淡黃色粉末的15mg標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,D₂O):δ8.13(2s,2H),7.83(s,1H)。LCMS(M+1)＝385.8,387.9。

實(shí)施例4

((6-溴-2-氰基苯并[b]噻吩-5-基)二氟甲基)膦酸鹽

步驟1：((6-溴-2-氰基苯并[b]噻吩-5-基)二氟甲基)膦酸乙基甲酯

對(duì)氫((6-溴-2-氨基甲?；讲b]噻吩-5-基)二氟甲基)膦酸乙酯(實(shí)施例3，步驟1；26mg，0.06mmol)添加POCl₃(2mL)，并且在90℃加熱反應(yīng)混合物過夜。將它在真空下濃縮到干燥，然后添加2mL無(wú)水甲醇，在rt攪拌30min。然后，在真空下濃縮至干燥混合物。通過用0至60％EtOAc/己烷洗脫的商品名為Isco Combiflash的儀器純化殘留物，以提供8mg標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ8.21(s,1H),8.18(s,1H),7.91(s,1H),4.33-4.27(m,2H),3.92(s,1.5H),3.89(s,1.5H),1.37(t,J＝7.0Hz,3H)。LCMS(M+1)＝410.0,412.0。

步驟2：((6-溴-2-氰基苯并[b]噻吩-5-基)二氟甲基)膦酸二銨

在rt對(duì)1mL無(wú)水二氯甲烷中的((6-溴-2-氰基苯并[b]噻吩-5-基)二氟甲基)膦酸乙基甲酯(8mg,0.02mmol)的攪拌溶液添加三甲基溴硅烷(52μL,0.4mmol)。整個(gè)周末在rt攪拌反應(yīng)混合物，在真空下濃縮到干燥，與二氯甲烷(3x)和乙醇(3x)共蒸發(fā)。在0.5mL乙醇中溶解殘留物，并且添加1.0mL氨(0.5M，在二噁烷中)。攪拌懸浮液30min，在真空下濃縮到干燥，并且在2-丙醇中研磨殘留物以提供3mg標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,D₂O):δ8.27(s,1H),8.18(s,1H),8.04(s,1H)。LCMS(M+1)＝367.8,369.9。

實(shí)施例5

((6-溴-2-(羥基甲基)苯并[b]噻吩-5-基)二氟甲基)膦酸鹽

步驟1：((6-溴-2-(羥基甲基)苯并[b]噻吩-5-基)二氟甲基)膦酸二乙酯

在65℃在30min里對(duì)1.0mL THF中的6-溴-5-((二乙氧基膦?；?二氟甲基)苯并[b]噻吩-2-羧酸乙酯(200mg,0.42mmol)和硼氫化鈉(96mg,2.55mmol)的懸浮液逐滴添加無(wú)水甲醇(300μL)。將反應(yīng)于65℃保持3h，冷卻到rt，倒入1N HCl中，用EtOAc(2x)提取。用鹽水清洗合并的有機(jī)層，通過MgSO₄干燥，并且在真空下濃縮至干燥。通過用0至90％EtOAc/己烷洗脫的商品名為Isco Combiflash的儀器(24g柱)純化殘留物，以提供作為黃色固體的100mg標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,CDCI₃):δ8.10(s,1H),7.96(s,1H),7.14(s,1H),4.89(s,2H),4.29-4.18(m,4H),1.36-1.25(m,6H),LCMS(M+1)＝429.1,431.1。

步驟2：((6-溴-2-(羥基甲基)苯并[b]噻吩-5-基)二氟甲基)膦酸二銨

在rt對(duì)2mL無(wú)水二氯甲烷中的((6-溴-2-(羥基甲基)苯并[b]噻吩-5-基)二氟甲基)膦酸二乙酯(100mg,0.23mmol)攪拌溶液添加三甲基溴硅烷(307μL,2.30mmol)。在rt將反應(yīng)混合物攪拌過夜，在真空下濃縮到干燥，與二氯甲烷(3x)和乙醇(3x)共蒸發(fā)。通過在用10-20％EtOH/H₂O洗脫的C-18上的快速層析純化殘留物。收集級(jí)份，并且在真空下濃縮至干燥。在0.5mL乙醇中溶解殘留物，并且添加1.0mL氨(0.5M，在二噁烷中)。將它攪拌30min，在真空下濃縮到干燥，并且在2-丙醇中研磨殘留物，以提供作為黃色固體的9mg標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,D₂O):δ8.13(s,1H),8.10(s,1H),7.24(s,1H),4.75(s,2H)。LCMS(M+1)＝372.9,375.9。

實(shí)施例6

((6-溴-2-(氰基甲基)苯并[b]噻吩-5-基)二氟甲基)膦酸鹽

步驟1：((6-溴-2-(氯甲基)苯并[b]噻吩-5-基)二氟甲基)膦酸二乙酯

在0℃對(duì)無(wú)水二噁烷(1mL)中的((6-溴-2-(羥基甲基)苯并[b]噻吩-5-基)二氟甲基)膦酸二乙酯(實(shí)施例5，步驟1；60mg，0.14mmol)的攪拌溶液添加亞硫酰氯(16μL,0.22mmol)。反應(yīng)混合物在rt達(dá)3h，然后再添加亞硫酰氯(16μL,0.22mmol)，并且攪拌2h。在真空下濃縮至干燥。通過用20至40％EtOAc/己烷洗脫的快速層析純化殘留物，以提供作為無(wú)色膠質(zhì)的37mg標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ8.12(s,1H),8.02(d,J＝1Hz,1H),7.31(d,J＝1Hz,1H),4.84(s,2H),4.38-4.20(m,4H),1.37-1.34(m,6H)。LCMS(M+1)＝447.0,449.0。

步驟2：((6-溴-2-(氰基甲基)苯并[b]噻吩-5-基)二氟甲基)膦酸二乙酯

在rt對(duì)DMSO(1mL)中的((6-溴-2-(氯甲基)苯并[b]噻吩-5-基)二氟甲基)膦酸二乙酯(36mg,0.08mmol)的攪拌溶液添加氰化鉀(7mg,0.1mmol)。反應(yīng)混合物在rt達(dá)5h，然后超聲處理1h(水浴的溫度達(dá)到45℃)。將它冷卻到rt，倒入H₂O:EtOAc(1:1)的混合物中，分配，并且用EtOAc提取水層。用鹽水清洗合并的有機(jī)層，通過MgSO₄干燥，并且在真空下濃縮至干燥。通過用50至60％EtOAc/己烷洗脫的快速層析純化殘留物，以提供作為黃色固體的9mg標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,CDCl ₃):δ8.11(s,1H),8.03(s,1H),7.34(s,1H),4.31-4.21(m,4H),3.99(s,2H),1.38-1.25(m,6H)。LCMS(M+1)＝438.0,440.0。

步驟3:((6-溴-2-(氰基甲基)苯并[b]噻吩-5-基)二氟甲基)膦酸二銨

在rt對(duì)0.5mL無(wú)水二氯甲烷中的((6-溴-2-(氰基甲基)苯并[b]噻吩-5-基)二氟甲基)膦酸二乙酯(9mg,0.02mmol)的攪拌溶液添加三甲基溴硅烷(27μL,0.20mmol)。在rt將反應(yīng)混合物攪拌過夜，LCMS顯示了不完全反應(yīng)。將它超聲處理3h(水浴的溫度達(dá)到45℃)，在真空下濃縮到干燥，與二氯甲烷(3x)和乙醇(3x)共蒸發(fā)。在0.5mL乙醇中溶解殘留物，并且添加1.0mL氨(0.5M，在二噁烷中)。將懸浮液攪拌30min，在真空下濃縮到干燥，在2-丙醇中研磨殘留物以提供7mg標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,D₂O):δ8.11(s,1H),8.09(s,1H),7.33(s,1H),4.10(s,2H)。LCMS(M+1)＝381.9,383.9。

實(shí)施例7

((5-溴-2-(乙氧基羰基)苯并[B]噻吩-6-基)二氟甲基)膦酸鹽

步驟1：4-氨基-5-溴-2-氯苯甲酸甲酯

在rt對(duì)196mL THF中的4-氨基-2-氯苯甲酸甲酯(10.9g,58.73mmol)的攪拌溶液添加NBS(11.5g,64.6mmol)。整個(gè)周末在rt攪拌反應(yīng)混合物，添加200mL EtOAc，并且用10％硫代硫酸鈉，接著用10％碳酸鈉和鹽水清洗有機(jī)層。通過MgSO₄干燥有機(jī)層，并且在真空下濃縮至干燥。在硅膠上吸附殘留物，加載到快速柱上，并且用10-30％EtOAc/己烷洗脫。再次通過用8％EtOAc/甲苯洗脫的快速層析純化混合的級(jí)份以提供作為淺黃色固體的總共9.58g標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ8.03(s,1H),6.79(s,1H),4.52(bs,2H),3.87(s,3H)。LCMS(M+1)＝263.9,265.9。

步驟2：(4-氨基-5-溴-2-氯苯基)甲醇

在-40℃在氮?dú)庀略?0min里對(duì)二氯甲烷(650mL)中的4-氨基-5-溴-2-氯苯甲酸甲酯(16.73g,63.25mmol)的溶液緩慢添加二異丁基氫化鋁(158mL,158mmol,1.0M/CH₂Cl₂)；在完成添加后除去冷卻浴。在rt攪拌2h后，將混合物倒入0℃飽和水性酒石酸鉀鈉。將層分離，并且用二氯甲烷(600mL)提取水層。用鹽水清洗合并的有機(jī)層，通過MgSO₄干燥，并且在真空下濃縮至干燥。在硅膠上吸附殘留物，加載到快速柱上，所述快速柱用10-15％乙酸乙酯/甲苯洗脫，以提供作為橙色固體的10.8g標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ7.49(s,1H),6.78(s,1H),4.64(s,2H),4.15(bs,2H)。LCMS(M+1)＝236.0,238.0。

步驟3：4-氨基-5-溴-2-氯苯甲醛

在rt對(duì)DMF(229mL)中的(4-氨基-5-溴-2-氯苯基)甲醇(10.8g,45.7mmol)的溶液逐批次添加活化的MnO₂(19.9g,228.3mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌18h，并且通過賽麗特過濾。用乙酸乙酯(300mL)和水(200mL)洗脫濾液，將層分配，并且用乙酸乙酯(200mL)提取水層。用鹽水清洗合并的有機(jī)層，通過MgSO₄干燥，并且在真空下濃縮到干燥以提供作為橙色固體的10.7g標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ10.16(s,1H),8.02(s,1H),6.75(s,H),4.81(bs,2H)。LCMS(M+1)＝234.0,236.0。

步驟4：6-氨基-5-溴苯并[b]噻吩-2-羧酸乙酯

用氮?dú)鈱?duì)45mL無(wú)水DMF中的4-氨基-5-溴-2-氯苯甲醛(10.6g,45.2mmol)和K₂CO₃(15.6g,113.0mmol)的懸浮液脫氣15min，然后冷卻到0℃。緩慢添加巰基乙酸乙酯(5.9mL,54.25mmol)，并且在rt將所得的反應(yīng)混合物攪拌過夜。LCMS顯示了約50％轉(zhuǎn)化；再添加巰基乙酸乙酯(5.9mL,54.25mmol)，并且在rt攪拌過夜。然后，在75℃加熱混合物5h，冷卻到rt，并且倒入水(500mL)和CH₂Cl₂(400mL)的混合物中。將層分離，并且用CH₂Cl₂(300mL)提取水層。用鹽水清洗合并的有機(jī)層，通過MgSO₄干燥，并且在真空下濃縮至干燥。通過用30-50％CH₂Cl₂/己烷洗脫的快速層析純化殘留物。收集級(jí)份，并且在真空下濃縮至干燥。在50％Et₂O/己烷(60mL)中研磨殘留物以提供作為黃色固體的3g標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ7.93(s,1H),7.83(s,1H),7.15(s,1H),4.37(q,J＝7.2Hz,2H),4.15(bs,2H),1.39(t,J＝7.2Hz,3H)。LCMS(M+1)＝300.0,302.0。

步驟5：5-溴-6-碘苯并[b]噻吩-2-羧酸乙酯

對(duì)15mL無(wú)水乙腈中的6-氨基-5-溴苯并[b]噻吩-2-羧酸乙酯(2.12g,7.06mmol)和Cul(1.48g,7.76mmol)的懸浮液添加亞硝酸叔丁酯(1.26mL,10.60mmol)。在45℃加熱所得的反應(yīng)混合物6h，冷卻到rt，并且倒入5％硫代硫酸鈉中。用CH₂Cl₂(150mL x 2)提取它，并且用鹽水清洗合并的有機(jī)層,通過MgSO₄干燥，并且在真空下濃縮至干燥。在硅膠上吸附殘留物，加載到快速柱上，并且用20至30％CH₂Cl₂/己烷洗脫以提供400mg標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,CDCl ₃):δ8.38(s,1H),8.16(s,1H),7.90(s,1H),4.46-4.39(m,2H),1.42(t,J＝7.0Hz,3H)。LCMS(M+1)＝410.9,412.9。

步驟6：5-溴-6-((二乙氧基磷?；?二氟甲基)苯并[b]噻吩-2-羧酸乙酯

在rt對(duì)THF中的0.4M((二乙氧基磷?；?二氟甲基)溴化鋅(II)(實(shí)施例1，步驟7；7.5mL,3.0mmol)的新鮮制備的溶液一次就添加CuBr(215mg,1.5mmol)。在rt將所得的混合物攪拌30min，然后緩慢添加7.5mL無(wú)水THF中的5-溴-6-碘苯并[b]噻吩-2-羧酸乙酯(400mg,1.33mmol)的溶液。在45℃加熱混合物過夜，冷卻到rt，然后添加乙酸乙酯(80mL)和水性飽和氯化銨(80mL)。將層分配，并且用乙酸乙酯(80mL)提取水層。用鹽水清洗合并的有機(jī)層，通過MgSO₄干燥，并且在真空下濃縮至干燥。在硅膠上吸附殘留物，加載到快速柱上，并且用5-10％乙酸乙酯/甲苯洗脫以提供55mg標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,CDCl ₃):δ8.17(s,1H),8.14(s,1H),7.96(s,1H),4.42(d,J＝7.0Hz,2H),4.32-4.20(m,4H),1.40(t,J＝7.0Hz,3H),1.37-1.33(m,6H)。LCMS(M+1)＝471.0,473.0。

步驟7：((5-溴-2-(乙氧基羰基)苯并[b]噻吩-6-基)二氟甲基)膦酸二銨

在rt對(duì)1mL無(wú)水二氯甲烷中的5-溴-6-((二乙氧基磷?；?二氟甲基)苯并[b]噻吩-2-羧酸乙酯(55mg,0.12mmol)的攪拌溶液添加三甲基溴硅烷(178μL,1.16mmol)。在rt將反應(yīng)混合物攪拌過夜，在真空下濃縮到干燥，與二氯甲烷(3x)和乙醇(3x)共蒸發(fā)。在0.5mL乙醇中溶解殘留物，并且添加1.0mL氨(0.5M，在二噁烷中)。將它攪拌30min，在真空下濃縮到干燥，并且在Et₂O中研磨殘留物以提供作為無(wú)色粉末的43mg標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,MeOH-d4):δ8.55(s,1H),8.22(s,1H),8.03(s,1H),4.40(q,J＝7.1Hz,2H),1.40(t,J＝7.1Hz,3H)。LCMS(M+1)＝415.0,417.0。

實(shí)施例8

((5-溴-2-(甲氧基羰基)苯并[b]噻吩-6-基)二氟甲基)膦酸鹽

步驟1：4-氨基-5-溴-2-氟苯甲酸

在40min的時(shí)段里分成多個(gè)小的批次對(duì)116mL THF中的4-氨基-2-氟苯甲酸1(18g,116.0mmol)的-10℃溶液添加N-溴琥珀酰亞胺(22.3g,125.3mmol)，期間將內(nèi)部溫度維持在低于-5℃。允許反應(yīng)加熱到室溫，并且攪拌18h。在真空下除去THF后，在58mL DMF中溶解殘留物，并且緩慢添加116mL水以誘導(dǎo)沉淀。劇烈攪拌混合物1h，然后過濾，用水清洗，并且在真空下干燥以提供20.7g黃色固體。在120mL乙酸乙酯中研磨提供作為淡黃色固體的14.5g標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.60(s,1H),7.78(d,J＝7.4Hz,1H),6.50(d,J＝13.3Hz,1H),6.34(s,2H)。LCMS(M+1):234.0和236.0。

步驟2：5-溴-2-氟-4-碘苯甲酸

對(duì)370mL水中的4-氨基-3-溴-2-氟苯甲酸(15.58g,66.58mmol)的0℃懸浮液逐滴添加53.3mL濃縮的HCl。緩慢添加水(49mL)中的亞硝酸鈉(5.05g,73.33mmol)溶液以維持內(nèi)部溫度<10℃。將所得的懸浮液加熱到rt，并且攪拌1h，直至它形成溶液。在裝備有機(jī)械攪拌器的三頸燒瓶中裝入水(290mL)，添加碘化鉀(55.3g,332.9mmol)，并且將所得的溶液加熱到30℃。在1h里將重氮鹽溶液緩慢轉(zhuǎn)移到碘化鉀溶液，從而控制氣體放出的速率，并且維持內(nèi)部溫度為35℃±5℃。用水(25mL)和濃縮的HCl(2.5mL)的溶液漂洗含有重氮鹽的燒瓶，然后添加到Kl溶液。在30℃將所得的懸浮液攪拌過夜。過濾固體，并且用水清洗兩次，然后干燥以給出作為黃色固體的20.3g粗制5-溴-2-氟-4-碘苯甲酸，其在不進(jìn)一步純化的情況下用于下一步。

步驟3：5-溴-2-氟-4-碘苯甲酸甲酯

在0℃對(duì)甲醇(118mL)逐滴添加氯化乙酰(11.3mL,158.9mmol)。在完成氯化乙酰的添加后，在rt攪拌溶液30min，然后一次就添加5-溴-2-氟-4-碘苯甲酸(20.3g,58.9mmol)。在回流加熱反應(yīng)混合物4h，冷卻到0℃，并且在真空下濃縮。在50mL二乙醚中懸浮殘留物，加熱到40℃，并且添加30mL己烷。在rt攪拌懸浮液混合物90min，過濾，并且用15mL己烷-Et₂O(2:1)清洗固體。在真空下干燥收集固體以提供作為黃色固體的13.52g標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.14-8.13(m,1H),7.69-7.66(m,1H),3.93(s,3H)。

步驟4：5-溴-4-((二乙氧基磷?；?二氟甲基)-2-氟苯甲酸甲酯

對(duì)脫氣的、無(wú)水的THF(19.7mL)中的Zn粉末(4.93g,75.33mmol)的懸浮液添加TMSCl(3.33mL,26.37mmol)，并且在劇烈攪拌的情況下將懸浮液添加到50℃達(dá)1.5h。將內(nèi)容物冷卻到30℃，并且逐滴添加THF(81mL)中的(溴二氟甲基)膦酸二乙酯(20.1g,75.33mmol)的溶液(溫度保持于40-45℃)。在30℃攪拌反應(yīng)混合物2h(渾濁的懸浮液變?yōu)榫哂幸恍┏练e物的溶液)。將溴化銅(10.81g,75.33mmol)火焰干燥，并且在無(wú)水DMAC(21.5mL)中懸浮。將有機(jī)鋅溶液緩慢轉(zhuǎn)移到懸浮的溴化銅，并且在rt攪拌混合物30min。將DMAC(54mL)中的5-溴-2-氟-4-碘苯甲酸甲酯4(13.52g,37.67mmol)溶液緩慢添加到反應(yīng)混合物，將它加熱到50℃達(dá)8h。將反應(yīng)混合物冷卻到rt，并且倒入水-乙酸乙酯(1:1)的混合物中。將層分開，并且用乙酸乙酯(2x)提取水層。用水、3％氫氧化銨和鹽水依序清洗合并的有機(jī)層，然后通過MgSO₄干燥，并且蒸發(fā)到干燥，以提供19g粗制材料，將該粗制材料置于高真空下36h。通過用10-40％乙酸乙酯/己烷洗脫的柱層析純化粗制材料以提供作為淺黃色油的12.2g標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.15(d,J＝6.7Hz,1H),7.60-7.57(m,1H),4.20-4.16(m,4H),3.87(s,3H),1.24(t,J＝7.0Hz,6H)。

步驟5：((2-溴-5-氟-4-(羥基甲基)苯基)二氟甲基)膦酸二乙酯

在65℃對(duì)THF(140mL)中的5-溴-4-((二乙氧基磷酰基)二氟甲基)-2-氟苯甲酸甲酯(12g,28.63mmol)和硼氫化鈉(5.4g,143.15mmol)的懸浮液添加甲醇(10mL)，從而控制氣體放出。在添加甲醇后(30分鐘)，將反應(yīng)混合物冷卻到0℃，并且緩慢添加水性飽和氯化銨。用二氯甲烷(2x)提取混合物，用鹽水清洗合并的有機(jī)層，通過MgSO₄干燥，并且蒸發(fā)到干燥。通過用30％和65％乙酸乙酯/己烷洗脫的柱層析純化粗制材料以提供作為無(wú)色固體的7g標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.79(6,J＝7.0Hz,1H),7.37-7.34(m,1H),5.53(t,J＝5.9Hz,1H),4.57(d,J＝5.9Hz,2H),4.21-4.11(m,4H),1.24(t,J＝7.0Hz,6H)。

步驟6：((2-溴-5-氟-4-甲?；交?二氟甲基)膦酸二乙酯

在rt對(duì)無(wú)水DMF(71mL)中的((2-溴-5-氟-4-(羥基甲基)苯基)二氟甲基)膦酸二乙酯(7.0g,17.9mmol)的溶液添加活化的MnO₂(15.6g,179.0mmol)。在rt攪拌反應(yīng)混合物18h，然后加熱到60℃達(dá)4h。將二乙醚(71mL)和水(71mL)添加到反應(yīng)混合物，并且通過賽麗特將它過濾。將層分開，并且用二乙醚(2x)提取水層。用水和鹽水依序清洗合并的有機(jī)層，通過MgSO₄干燥，并且蒸發(fā)到干燥。通過用20-65％乙酸乙酯/己烷洗脫的柱層析純化粗制材料以提供作為無(wú)色油的2.1g標(biāo)題化合物?；厥?.6起始材料。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.12(s,1H),8.12(d,J＝6.7Hz,1H),7.63(d,J＝11.0Hz,1H),4.21-4.16(m,4H),1.24(t,J＝7.2Hz,6H)。

步驟7：5-溴-6-((二乙氧基磷?；?二氟甲基)苯并[b]噻吩-2-羧酸甲酯

用氮?dú)鈱?duì)3mL無(wú)水DMF中的((2-溴-5-氟-4-甲酰基苯基)二氟甲基)膦酸二乙酯7(270mg,0.69mmol)和碳酸鉀(201mg,1.46mmol)的懸浮溶液脫氣15min，然后在30min的時(shí)段里添加1mL無(wú)水DMF中的巰基乙酸甲酯(70μL,0.76mmol)的溶液。在rt將反應(yīng)混合物攪拌過夜。將反應(yīng)混合物加熱到45℃達(dá)4h，并且冷卻到0℃。添加水和乙酸乙酯，將層分開，并且用乙酸乙酯提取水層。用鹽水清洗合并的有機(jī)層，通過MgSO₄干燥，并且蒸發(fā)到干燥。通過用20-50％乙酸乙酯/己烷洗脫的柱層析純化粗制材料以提供作為無(wú)色固體的190mg標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.47(s,1H),8.46(s,1H),8.20(s,1H),4.20-4.11(m,4H),3.30(s,3H),1.22(t,J＝7.0Hz,6H)。

步驟8((5-溴-2-(甲氧基羰基)苯并[b]噻吩-6-基)二氟甲基)膦酸銨

在rt對(duì)2.6mL無(wú)水二氯甲烷中的5-溴-6-((二乙氧基磷酰基)二氟甲基)苯并[b]噻吩-2-羧酸甲酯(119mg,0.26mmol)的攪拌溶液添加三甲基溴硅烷(515μL，3.9mmol)。在rt將反應(yīng)混合物攪拌過夜，濃縮到干燥，與二氯甲烷(3x)和甲醇(3x)共蒸發(fā)。在甲醇(3mL)中溶解殘留物，并且添加5.2mL氨(0.5M，在二噁烷中)。將它攪拌1h，在真空下濃縮到干燥，在Et₂O(3mL)中研磨殘留物，以提供作為無(wú)色粉末的100mg標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,D₂O)δ8.22(s,1H),8.13(s,1H),7.92(s,1H),3.81(s,3H)。LCMS(M+1):400.8和402.8。

實(shí)施例9

((5-溴-2-(羧基)苯并[B]噻吩-6-基)二氟甲基)膦酸鹽

在rt對(duì)2mL無(wú)水二氯甲烷中的5-溴-6-((二乙氧基磷?；?二氟甲基)苯并[b]噻吩-2-羧酸乙酯(100mg,0.21mmol)的攪拌溶液添加三甲基溴硅烷(280μL,2.12mmol)。在rt將反應(yīng)混合物攪拌過夜。LCMS顯示了反應(yīng)不是完全的。將它超聲處理4h(在40℃的浴溫度)，并且將反應(yīng)混合物濃縮到干燥，與二氯甲烷(3x)和乙醇(3x)共蒸發(fā)。在乙醇(0.5mL)和水(1.0mL)中溶解殘留物。將1.0N NaOH(280μL,0.27mmol)添加到反應(yīng)混合物，并且rt攪拌過夜。添加20mL水和20mL Et₂O，分配，并且用Et₂O清洗水層，然后用1N HCl處理它以調(diào)節(jié)pH為3，用乙酸乙酯(2x)提取。用鹽水清洗合并的有機(jī)層，通過MgSO₄干燥，并且蒸發(fā)到干燥。在EtOH(2mL)中溶解殘留物，并且添加5.4mL氨(0.5M，在二噁烷中)。將它攪拌1h，在真空下濃縮到干燥，并且在Et₂O(2mL)中研磨殘留物以提供作為無(wú)色粉末的46mg標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,D₂O)δ8.11(s,1H),8.10(s,1H),7.62(s,1H)。LCMS(M+1):386.9和388.8。

實(shí)施例10

[(3-溴-7-氰基-2-萘基)(二氟)甲基]膦酸鹽

如WO 2008/089581中所述，制備此化合物。

實(shí)施例11

關(guān)于TC-PTP的酶測(cè)定數(shù)據(jù)

在針對(duì)TC-PTP測(cè)試時(shí)，觀察到酶活性的以下抑制劑：

實(shí)施例12

關(guān)于TC-PTP抑制劑對(duì)樹突細(xì)胞的刺激的細(xì)胞測(cè)定數(shù)據(jù)

*相對(duì)經(jīng)媒介物處理的細(xì)胞在存在32μM測(cè)試化合物的情況下6天的DC溫育和成熟后的24hIL-12生成

實(shí)施例13

使用用實(shí)施例5的化合物活化的DC在小鼠癌癥模型中的效力。

現(xiàn)在參考圖1，其顯示了通過實(shí)施例6或?qū)嵤├?的化合物活化的成熟樹突細(xì)胞的單次處理后28天的小鼠中的腫瘤體積。這些數(shù)據(jù)顯示了通過實(shí)施例5的化合物(其在實(shí)施例12中顯示的IL-12釋放測(cè)定法中是有效力的)活化的樹突細(xì)胞比通過實(shí)施例6的化合物(其在IL-12釋放測(cè)定法中效力低)活化的樹突細(xì)胞在降低此模型中的腫瘤體積上提供更大的效力。

實(shí)施例14

在存在和缺乏實(shí)施例7的化合物的情況下分化和成熟后的人DC中的IL-12誘導(dǎo)。

現(xiàn)在參考圖2，其顯示了衍生自從人胰腺癌患者采集的單核細(xì)胞的樹突細(xì)胞(其在存在實(shí)施例7的化合物的情況下成熟)顯示了比在沒有實(shí)施例7的化合物的情況下成熟的相同細(xì)胞更大的IL-12釋放。IL-12釋放指示這些細(xì)胞的活化狀態(tài)，并且由于TC-PTP抑制劑的存在所致的IL-12增加表明了本發(fā)明的效用。

雖然優(yōu)選的實(shí)施方案已經(jīng)在上文描述并且在附圖中闡明，但是對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)明顯的是，可以在不偏離此公開的前提下做出修改。認(rèn)為此類修改是公開的范圍內(nèi)所包括的可能的變型。

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