本發(fā)明涉及化合物，其抑制Zeste增強(qiáng)子同源物2(EZH2)并且因此在癌細(xì)胞中有效抑制增殖和/或誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。
背景技術(shù)：
：表觀遺傳修飾在許多細(xì)胞過程(包括細(xì)胞增殖、分化和細(xì)胞存活)的調(diào)節(jié)中起著重要作用。總體表觀遺傳修飾在癌癥中是常見的，且包括導(dǎo)致致癌基因、腫瘤抑制基因和信號(hào)通路的異?；罨蚴Щ畹腄NA和/或組蛋白甲基化的總體變化、非編碼RNA的失調(diào)以及核小體重構(gòu)。但是，與癌癥中出現(xiàn)的基因突變不同，這些表觀遺傳變化可通過選擇性抑制所參與的酶而被逆轉(zhuǎn)。已知參與組蛋白或DNA甲基化的多個(gè)甲基化酶在癌癥中失調(diào)。因此，特定甲基化酶的選擇性抑制劑將有效用于治療增殖性疾病，例如癌癥。EZH2(人EZH2基因：Cardoso，C，等人；EuropeanJofHumanGenetics，第8卷，第3期，174-180頁(yè)，2000)為多梳抑制復(fù)合物2(PolycombRepressorComplex2，PRC2)的催化亞單位，其功能是通過將組蛋白H3的賴氨酸27三甲基化(H3K27me3)來(lái)使靶基因沉默。組蛋白H3是參與真核細(xì)胞染色質(zhì)結(jié)構(gòu)的五種主要組蛋白之一。以主要球狀結(jié)構(gòu)域和長(zhǎng)的N末端尾為特征的組蛋白涉及核小體結(jié)構(gòu)，即'串珠'結(jié)構(gòu)。雖然組蛋白被高度地翻譯后修飾，但組蛋白H3是五種組蛋白中被最廣泛修飾的。單獨(dú)的術(shù)語(yǔ)“組蛋白H3”是有意模糊的，因?yàn)樗鼪]有區(qū)分序列變體或修飾狀態(tài)。組蛋白H3是表觀遺傳學(xué)(epigenetics)新領(lǐng)域中的重要蛋白，其中其序列變體和可變的修飾狀態(tài)被認(rèn)為在基因的動(dòng)力學(xué)和長(zhǎng)期調(diào)節(jié)中發(fā)揮著作用。已經(jīng)在許多實(shí)體瘤(包括前列腺、乳腺、皮膚、膀胱、肝、胰腺、頭頸的腫瘤)中觀測(cè)到了增加的EZH2表達(dá)并且所述增加的EZH2表達(dá)與癌癥進(jìn)攻性、轉(zhuǎn)移性和不良預(yù)后有關(guān)(Varambally等人，2002；Kleer等人，2003；Breuer等人，2004；Bachmann等人，2005；Weikert等人，2005；Sudo等人，2005；Bachmann等人，2006)。例如，在表達(dá)高水平EZH2的腫瘤中，在前列腺切除術(shù)后存在高復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)，在具有高EZH2水平的乳腺癌患者中存在轉(zhuǎn)移增加、無(wú)疾病生存期縮短和死亡增加的風(fēng)險(xiǎn)(Varambally等人，2002；Kleer等人，2003)。最近，在UTX(ubiquitouslytranscribedtetratricopeptiderepeatsX，泛轉(zhuǎn)錄的三十四肽重復(fù)X)(即H3K27去甲基化酶，其與EZH2的功能相反)中的失活突變已經(jīng)在多個(gè)實(shí)體瘤和血液腫瘤類型(包括腎腫瘤、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、食管腫瘤、乳腺腫瘤、結(jié)腸腫瘤、非小細(xì)胞肺腫瘤、小細(xì)胞肺腫瘤、膀胱腫瘤、多發(fā)性骨髓瘤和慢性髓樣白血病腫瘤)中得以證實(shí)，且低UTX水平與乳腺癌中低存活有關(guān)，意味著UTX功能的喪失導(dǎo)致H3K27me3的增加和靶基因的抑制(Wang等人，2010)?？偠灾?，這些數(shù)據(jù)表明，在許多腫瘤類型中，增加的H3K27me3水平導(dǎo)致癌癥的惡化，并且EZH2活性的抑制可提供治療益處。許多研究報(bào)道，通過siRNA或shRNA直接敲除EZH2或通過SAH水解酶抑制劑3-去氮腺嘌呤A(deazaneplanocinA，DZNep)的治療間接消耗EZH2均降低癌細(xì)胞系在體外的增殖與侵入并降低體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)(Gonzalez等人，2008，GBM2009)。雖然不知道異常EZH2活性導(dǎo)致癌癥進(jìn)展的確切機(jī)理，但是許多EZH2靶基因是腫瘤抑制劑，意味著腫瘤抑制劑功能的喪失是關(guān)鍵機(jī)理。此外，EZH2在永生化或原代上皮細(xì)胞中的過表達(dá)促進(jìn)錨定無(wú)依賴性生長(zhǎng)和侵入且需要EZH2催化活性(Kleer等人，2003；Cao等人，2008)。因此，有力證據(jù)顯示，EZH2活性的抑制降低了細(xì)胞增殖和侵入。因此，抑制EZH2活性的化合物將可用于治療癌癥。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明涉及式(I)化合物：其中：L為(C2-C8)亞烷基或(C2-C8)亞烯基；R1為氫、鹵素、(C1-C6)烷基、(C2-C6)烯基、(C2-C6)炔基、鹵代(C1-C4)烷基、(C3-C6)環(huán)烷基、(C3-C6)環(huán)烷基(C1-C6)烷基、(C3-C6)環(huán)烷基(C2-C6)烯基、(C5-C6)環(huán)烯基、(C5-C6)環(huán)烯基(C1-C6)烷基、(C5-C6)環(huán)烯基(C2-C6)烯基、(C6-C10)雙環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、雜環(huán)烷基(C1-C6)烷基-、雜環(huán)烷基(C2-C6)烯基、苯基、苯基(C1-C6)烷基、苯基(C2-C6)烯基、雜芳基、雜芳基(C1-C6)烷基、雜芳基(C2-C6)烯基、氰基、-C(O)Ra、-CO2Ra、-C(O)NRaRb、-C(O)NRaNRaRb、-SRa、-S(O)Ra、-SO2Ra、-SO2NRaRb、硝基、-NRaRb、RaRbN(C1-C4)烷基-、-NRaC(O)Rb、-NRaC(O)NRaRb、-NRaC(O)ORa、-NRaSO2Rb、-NRaSO2NRaRb、-NRaNRaRb、-NRaNRaC(O)Rb、-NRaNRaC(O)NRaRb、-NRaNRaC(O)ORa、-ORa、-OC(O)Ra、或-OC(O)NRaRb，其中各環(huán)烷基、環(huán)烯基、雙環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、苯基或雜芳基任選獨(dú)立地被以下基團(tuán)取代1、2或3次：Rc-(C1-C6)烷基-O-、Rc-(C1-C6)烷基-S-、Rc-(C1-C6)烷基-、(C1-C4)烷基-雜環(huán)烷基-、鹵素、(C1-C6)烷基、(C3-C6)環(huán)烷基、鹵代(C1-C6)烷基、氰基、-C(O)Ra、-CO2Ra、-C(O)NRaRb、-SRa、-S(O)Ra、-SO2Ra、-SO2NRaRb、硝基、-NRaRb、-NRaC(O)Rb、-NRaC(O)NRaRb、-NRaC(O)ORa、-NRaSO2Rb、-NRaSO2NRaRb、-ORa、-OC(O)Ra、-OC(O)NRaRb、雜環(huán)烷基、苯基、雜芳基、苯基(C1-C2)烷基或雜芳基(C1-C2)烷基；R2為氫、鹵素、(C1-C6)烷基、(C2-C6)烯基、(C2-C6)炔基、鹵代(C1-C4)烷基、(C3-C6)環(huán)烷基、(C3-C6)環(huán)烷基(C1-C6)烷基、(C3-C6)環(huán)烷基(C2-C6)烯基、(C5-C6)環(huán)烯基、(C5-C6)環(huán)烯基(C1-C6)烷基、(C5-C6)環(huán)烯基(C2-C6)烯基、(C6-C10)雙環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、雜環(huán)烷基(C1-C6)烷基-、雜環(huán)烷基(C2-C6)烯基、苯基、苯基(C1-C6)烷基、苯基(C2-C6)烯基、雜芳基、雜芳基(C1-C6)烷基、雜芳基(C2-C6)烯基、-C(O)Ra、-CO2Ra、-C(O)NRaRb或-C(O)NRaNRaRb，其中各環(huán)烷基、環(huán)烯基、雙環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、苯基或雜芳基任選獨(dú)立地被以下基團(tuán)取代1、2或3次：Rc-(C1-C6)烷基-O-、Rc-(C1-C6)烷基-S-、Rc-(C1-C6)烷基-、(C1-C4)烷基-雜環(huán)烷基-、鹵素、(C1-C6)烷基、(C3-C6)環(huán)烷基、鹵代(C1-C6)烷基、氰基、-C(O)Ra、-CO2Ra、-C(O)NRaRb、-SRa、-S(O)Ra、-SO2Ra、-SO2NRaRb、硝基、-NRaRb、-NRaC(O)Rb、-NRaC(O)NRaRb、-NRaC(O)ORa、-NRaSO2Rb、-NRaSO2NRaRb、-ORa、-OC(O)Ra、-OC(O)NRaRb、雜環(huán)烷基、苯基、雜芳基、苯基(C1-C2)烷基或雜芳基(C1-C2)烷基；R3選自：氫、鹵素、(C1-C6)烷基、(C2-C6)烯基、(C2-C6)炔基、(C1-C4)烷氧基、-B(OH)2、(C3-C6)環(huán)烷基、(C3-C6)環(huán)烷基(C1-C4)烷基-、(C6-C10)雙環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、雜環(huán)烷基(C1-C4)烷基-、苯基、苯基(C1-C2)烷基、雜芳基、雜芳基(C1-C2)烷基、氰基、-C(O)Ra、-CO2Ra、-C(O)NRaRb、-C(O)NRaNRaRb、-SRa、-S(O)Ra、-SO2Ra、-SO2NRaRb、硝基、-NRaRb、RaRbN(C1-C4)烷基-、-NRaC(O)Rb、-NRaC(O)NRaRb、-NRaC(O)ORa、-NRaSO2Rb、-NRaSO2NRaRb、-NRaNRaRb、-NRaNRaC(O)Rb、-NRaNRaC(O)NRaRb、-NRaNRaC(O)ORa、-ORa、RaO(C1-C4)烷基-、RaO(C3-C6)炔基-、-OC(O)Ra和-OC(O)NRaRb，其中各環(huán)烷基、雙環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、苯基或雜芳基任選獨(dú)立地被以下基團(tuán)取代1、2或3次：Rc-(C1-C6)烷基-O-、Rc-(C1-C6)烷基-S-、Rc-(C1-C6)烷基-、(C1-C4)烷基-雜環(huán)烷基-、鹵素、(C1-C6)烷基、(C3-C6)環(huán)烷基、鹵代(C1-C6)烷基、氰基、-C(O)Ra、-CO2Ra、-C(O)NRaRb、-SRa、-S(O)Ra、-SO2Ra、-SO2NRaRb、硝基、-NRaRb、-NRaC(O)Rb、-NRaC(O)NRaRb、-NRaC(O)ORa、-NRaSO2Rb、-NRaSO2NRaRb、-ORa、-OC(O)Ra、-OC(O)NRaRb、雜環(huán)烷基、苯基、雜芳基、苯基(C1-C2)烷基或雜芳基(C1-C2)烷基；各Rc獨(dú)立地為-S(O)Ra、-SO2Ra、-NRaRb、-NRaC(O)ORa、-NRaSO2Rb或-CO2Ra；和Ra和Rb各自獨(dú)立地為氫、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基(C1-C4)烷基-、(C3-C6)環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、苯基、苯基(C1-C2)烷基-、雜芳基(C1-C4)烷基-或雜芳基，其中任意所述環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、苯基或雜芳基任選獨(dú)立地被以下基團(tuán)取代1、2或3次：鹵素、羥基、(C1-C4)烷氧基、氨基、-NH(C1-C4)烷基、-N((C1-C4)烷基)2、(C1-C4)烷基、鹵代(C1-C4)烷基、-CO2H、-CO2(C1-C4)烷基、-CONH2、-CONH(C1-C4)烷基、-CON((C1-C4)烷基)2、-SO2(C1-C4)烷基、-SO2NH2、-SO2NH(C1-C4)烷基或-SO2N((C1-C4)烷基)2；或Ra和Rb與它們所連接的氮一起代表5-或6-元飽和或不飽和環(huán)，其任選地含有選自氧、氮和硫的額外的雜原子，其中所述環(huán)任選獨(dú)立地被以下基團(tuán)取代1、2或3次：(C1-C4)烷基、鹵代(C1-C4)烷基、氨基、-NH(C1-C4)烷基、-N((C1-C4)烷基)2、羥基、氧代基團(tuán)、(C1-C4)烷氧基或(C1-C4)烷氧基(C1-C4)烷基-，其中所述環(huán)任選地與(C3-C6)環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、苯基或雜芳環(huán)稠合；或Ra和Rb與它們所連接的氮一起代表任選地與(C3-C6)環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、苯基或雜芳環(huán)稠合的6-至10-元橋連的雙環(huán)系統(tǒng)；或其藥學(xué)上可接受的鹽。本發(fā)明的另一方面涉及誘導(dǎo)實(shí)體瘤的癌細(xì)胞凋亡的方法；治療實(shí)體瘤癌癥的方法。本發(fā)明的另一方面涉及包含式(I)化合物和藥學(xué)上可接受的賦形劑的藥物制劑。在另一方面，提供了式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物，在制備用于治療EZH2介導(dǎo)的障礙(如通過誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡)的藥物中的用途。在另一方面，本發(fā)明提供式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽用于治療EZH2介導(dǎo)的疾病中的用途。本發(fā)明進(jìn)一步提供式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽作為活性治療物質(zhì)在治療EZH2介導(dǎo)的疾病中的用途。在另一方面，本發(fā)明提供式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其用于治療。在另一方面，提供了式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其用于治療EZH2介導(dǎo)的障礙。在另一方面，提供了式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其用于治療細(xì)胞增殖疾病。在另一方面，提供了式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其用于治療癌癥，包括治療實(shí)體瘤，例如腦瘤(神經(jīng)膠質(zhì)瘤)、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、白血病、淋巴瘤、Bannayan-Zonana綜合征、考登病、萊-杜病(Lhermitte-Duclosdisease)、乳腺癌、炎性乳腺癌、威爾姆斯腫瘤、尤因氏肉瘤、橫紋肌肉瘤、室管膜瘤、成神經(jīng)管細(xì)胞瘤、結(jié)腸癌、胃癌、膀胱癌、頭頸癌、腎癌、肺癌、肝癌、黑色素瘤、腎癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肉瘤、骨肉瘤、骨巨細(xì)胞瘤和甲狀腺瘤。在另一方面，提供了共同給藥本發(fā)明式(I)化合物和其他活性成分的方法。在另一方面，提供了式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和至少一種抗腫瘤藥的組合，其用于治療EZH2介導(dǎo)的障礙。在另一方面，提供了式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和至少一種抗腫瘤藥的組合，其用于治療細(xì)胞增殖疾病。在另一方面，提供了式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和至少一種抗腫瘤藥的組合，其用于治療癌癥，包括治療實(shí)體瘤，例如腦瘤(神經(jīng)膠質(zhì)瘤)、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、白血病、淋巴瘤、Bannayan-Zonana綜合征、考登病、萊-杜病、乳腺癌、炎性乳腺癌、威爾姆斯腫瘤、尤因氏肉瘤、橫紋肌肉瘤、室管膜瘤、成神經(jīng)管細(xì)胞瘤、結(jié)腸癌、胃癌、膀胱癌、頭頸癌、腎癌、肺癌、肝癌、黑色素瘤、腎癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肉瘤、骨肉瘤、骨巨細(xì)胞瘤和甲狀腺癌。發(fā)明詳述本發(fā)明涉及上述式(I)化合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(I)化合物，其中R1為氫、鹵素、(C1-C6)烷基、鹵代(C1-C4)烷基、(C3-C6)環(huán)烷基、(C3-C6)環(huán)烷基(C1-C4)烷基、苯基或苯基(C1-C2)烷基。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(I)化合物，其中R1為(C1-C4)烷基。在具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(I)化合物，其中R1為甲基。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(I)化合物，其中R2為氫、鹵素、(C1-C6)烷基、鹵代(C1-C4)烷基、(C3-C6)環(huán)烷基、(C3-C6)環(huán)烷基(C1-C4)烷基、苯基或苯基(C1-C2)烷基。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(I)化合物，其中R2為(C1-C4)烷基。在具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(I)化合物，其中R2為異丙基或仲丁基。在更具體地實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(I)化合物，其中R2為異丙基。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(I)化合物，其中R3為雜芳基，其任選獨(dú)立地被以下基團(tuán)取代1或2次：Rc-(C1-C6)烷基-O-、Rc-(C1-C6)烷基-S-、Rc-(C1-C6)烷基-、(C1-C4)烷基-雜環(huán)烷基-、鹵素、(C1-C6)烷基、(C3-C6)環(huán)烷基、鹵代(C1-C6)烷基、氰基、-C(O)Ra、-CO2Ra、-C(O)NRaRb、-SRa、-S(O)Ra、-SO2Ra、-SO2NRaRb、硝基、-NRaRb、-NRaC(O)Rb、-NRaC(O)NRaRb、-NRaC(O)ORa、-NRaSO2Rb、-NRaSO2NRaRb、-ORa、-OC(O)Ra、-OC(O)NRaRb、雜環(huán)烷基、苯基、雜芳基、苯基(C1-C2)烷基或雜芳基(C1-C2)烷基；各Rc獨(dú)立地為-S(O)Ra、-SO2Ra、-NRaRb、-NRaC(O)ORa、-NRaSO2Rb或-CO2Ra；和Ra和Rb各自獨(dú)立地為氫、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基(C1-C4)烷基-、(C3-C6)環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、苯基、苯基(C1-C2)烷基-、雜芳基(C1-C2)烷基-或雜芳基，其中任意所述環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、苯基或雜芳基任選獨(dú)立地被以下基團(tuán)取代1、2或3次：鹵素、羥基、(C1-C4)烷氧基、氨基、-NH(C1-C4)烷基、-N((C1-C4)烷基)2、(C1-C4)烷基、鹵代(C1-C4)烷基、-CO2H、-CO2(C1-C4)烷基、-CONH2、-CONH(C1-C4)烷基、-CON((C1-C4)烷基)2、-SO2(C1-C4)烷基、-SO2NH2、-SO2NH(C1-C4)烷基或-SO2N((C1-C4)烷基)2；或Ra和Rb與它們所連接的氮一起代表5-或6-元飽和或不飽和環(huán)，其任選地含有選自氧、氮和硫的額外的雜原子，其中所述環(huán)任選獨(dú)立地被以下基團(tuán)取代1、2或3次：(C1-C4)烷基、鹵代(C1-C4)烷基、氨基、-NH(C1-C4)烷基、-N((C1-C4)烷基)2、羥基、氧代基團(tuán)、(C1-C4)烷氧基或(C1-C4)烷氧基(C1-C4)烷基-，其中所述環(huán)任選地與(C3-C6)環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、苯基或雜芳環(huán)稠合；或Ra和Rb與它們所連接的氮一起代表任選地與(C3-C6)環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、苯基或雜芳環(huán)稠合的6-至10-元橋連的雙環(huán)系統(tǒng)。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(I)化合物，其中R3為雜芳基，其任選被以下基團(tuán)取代：(C1-C4)烷氧基、-NRaRb、RaRbN(C1-C4)烷基-、(C1-C4)烷基雜環(huán)烷基-、鹵素、(C1-C4)烷基、(C3-C8)環(huán)烷基或雜環(huán)烷基。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(I)化合物，其中R3為雜芳基，其任選被以下基團(tuán)取代：雜環(huán)烷基或(C1-C4)烷基-雜環(huán)烷基-。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(I)化合物，其中R3為雜芳基，其任選被-NRaRb取代。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(I)化合物，其中R3為呋喃基、苯硫基(thiophenyl)、噻吩基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、噻唑基、異噻唑基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、噁唑基、異噁唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,5-噁二唑基、噻二唑基、異噻唑基、四唑基、吡啶基、噠嗪基、吡嗪基、嘧啶基或三嗪基，其各自任選被-NRaRb取代。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(I)化合物，其中R3為呋喃基、苯硫基、噻吩基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、噻唑基、異噻唑基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、噁唑基、異噁唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,5-噁二唑基、噻二唑基、異噻唑基、四唑基、吡啶基、噠嗪基、吡嗪基、嘧啶基或三嗪基，其各自任選被以下基團(tuán)取代：吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、4-甲基哌嗪基、嗎啉基或硫嗎啉基。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(I)化合物，其中R3為吡啶基，其任選被以下基團(tuán)取代：Rc-(C1-C6)烷基-O-、Rc-(C1-C6)烷基-S-、Rc-(C1-C6)烷基-、(C1-C4)烷基-雜環(huán)烷基-、鹵素、(C1-C6)烷基、(C3-C6)環(huán)烷基、鹵代(C1-C6)烷基、氰基、-C(O)Ra、-CO2Ra、-C(O)NRaRb、-SRa、-S(O)Ra、-SO2Ra、-SO2NRaRb、硝基、-NRaRb、-NRaC(O)Rb、-NRaC(O)NRaRb、-NRaC(O)ORa、-NRaSO2Rb、-NRaSO2NRaRb、-ORa、-OC(O)Ra、-OC(O)NRaRb、雜環(huán)烷基、苯基、雜芳基、苯基(C1-C2)烷基或雜芳基(C1-C2)烷基；各Rc獨(dú)立地為-S(O)Ra、-SO2Ra、-NRaRb、-NRaC(O)ORa、-NRaSO2Rb或-CO2Ra；且Ra和Rb各自獨(dú)立地為氫、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基(C1-C4)烷基-、(C3-C6)環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、苯基、苯基(C1-C2)烷基-、雜芳基(C1-C2)烷基-或雜芳基，其中任意所述環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、苯基或雜芳基任選獨(dú)立地被以下基團(tuán)取代1、2或3次：鹵素、羥基、(C1-C4)烷氧基、氨基、-NH(C1-C4)烷基、-N((C1-C4)烷基)2、(C1-C4)烷基、鹵代(C1-C4)烷基、-CO2H、-CO2(C1-C4)烷基、-CONH2、-CONH(C1-C4)烷基、-CON((C1-C4)烷基)2、-SO2(C1-C4)烷基、-SO2NH2、-SO2NH(C1-C4)烷基或-SO2N((C1-C4)烷基)2；或Ra和Rb與它們所連接的氮一起代表5-或6-元飽和或不飽和環(huán)，其任選地含有選自氧、氮和硫的額外的雜原子，其中所述環(huán)任選獨(dú)立地被以下基團(tuán)取代1、2或3次：(C1-C4)烷基、鹵代(C1-C4)烷基、氨基、-NH(C1-C4)烷基、-N((C1-C4)烷基)2、羥基、氧代基團(tuán)、(C1-C4)烷氧基或(C1-C4)烷氧基(C1-C4)烷基-，其中所述環(huán)任選地與(C3-C6)環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、苯基或雜芳環(huán)稠合；或Ra和Rb與它們所連接的氮一起代表任選地與(C3-C6)環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、苯基或雜芳環(huán)稠合的6-至10-元橋連的雙環(huán)系統(tǒng)。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(I)化合物，其中R3為吡啶基，其任選被以下基團(tuán)取代：(C1-C4)烷氧基、-NRaRb、RaRbN(C1-C4)烷基-、(C1-C4)烷基雜環(huán)烷基-、鹵素、(C1-C4)烷基、(C3-C8)環(huán)烷基或雜環(huán)烷基。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(I)化合物，其中R3為吡啶基，其任選被以下基團(tuán)取代：雜環(huán)烷基或(C1-C4)烷基-雜環(huán)烷基-。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(I)化合物，其中R3為吡啶基，其任選被-NRaRb取代。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(I)化合物，其中R3為吡啶基，其任選被以下基團(tuán)取代：吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、4-甲基哌嗪基、嗎啉基或硫嗎啉基。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(I)化合物，其中R3為吡啶基，其被哌嗪基取代。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(I)化合物，其中R3選自：氫、-SO2(C1-C4)烷基、鹵素、(C1-C6)烷基、(C2-C6)烯基、(C2-C6)炔基、羥基(C1-C4)烷基-、羥基(C3-C6)炔基-、(C1-C4)烷氧基、苯基、雜芳基和氰基，其中所述苯基或雜芳基任選獨(dú)立地被以下基團(tuán)取代1或2次：(C1-C4)烷氧基、-NRaRb、RaRbN(C1-C4)烷基-、(C1-C4)烷基雜環(huán)烷基-、鹵素、(C1-C4)烷基、(C3-C8)環(huán)烷基或雜環(huán)烷基。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(I)化合物，其中R3選自：鹵素、苯基和雜芳基，其中所述苯基或雜芳基任選獨(dú)立地被以下基團(tuán)取代1或2次：(C1-C4)烷氧基、-NRaRb、RaRbN(C1-C4)烷基-、(C1-C4)烷基雜環(huán)烷基-、鹵素、(C1-C4)烷基、(C3-C8)環(huán)烷基或雜環(huán)烷基。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(I)化合物，其中R3選自：鹵素、苯基和雜芳基，其中所述苯基或雜芳基任選被雜環(huán)烷基或(C1-C4)烷基-雜環(huán)烷基-取代。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(I)化合物，其中R3選自：氫、氰基、鹵素、(C1-C4)烷氧基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、噻唑基、噁唑基、異噁唑基、噁二唑基、噻二唑基、異噻唑基、苯基、吡啶基、噠嗪基、吡嗪基、嘧啶基和三嗪基，其中所述呋喃基、噻吩基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、噻唑基、噁唑基、異噁唑基、噁二唑基、噻二唑基、異噻唑基、苯基、吡啶基、噠嗪基、吡嗪基、嘧啶基或三嗪基任選被(C1-C4)烷氧基、-NRaRb、RaRbN(C1-C4)烷基-、(C1-C4)烷基雜環(huán)烷基-、鹵素、(C1-C4)烷基、(C3-C8)環(huán)烷基或雜環(huán)烷基取代。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(I)化合物，其中R3為苯基，其任選被以下基團(tuán)取代：-NRaRb或RaRbN(C1-C4)烷基-。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(I)化合物，其中R3為氰基、鹵素、(C1-C4)烷基、(C2-C6)烯基、(C2-C6)炔基、羥基(C1-C4)烷基-、羥基(C3-C6)炔基-或(C1-C4)烷氧基。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(I)化合物，其中R3為羥基(C3-C6)炔基-。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(I)化合物，其中R3為氰基、鹵素、(C1-C4)烷基或(C1-C4)烷氧基。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(I)化合物，其中R3為鹵素。在具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(I)化合物，其中R3為氟、氯或溴。在更具體地實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(I)化合物，其中R3為氯。在另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(I)化合物，其中R3為氰基。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(I)化合物，其中L為(C4-C5)亞烷基或(C4-C5)亞烯基。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(I)化合物，其中L選自：在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(I)化合物，其中L選自：在具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(I)化合物，其中L為在另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(I)化合物，其中L為在另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(I)化合物，其中L為在具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(I)化合物，其中：L為(C4-C5)亞烷基或(C4-C5)亞烯基；R1為氫、鹵素、(C1-C6)烷基、鹵代(C1-C4)烷基、(C3-C6)環(huán)烷基、(C3-C6)環(huán)烷基(C1-C4)烷基、苯基或苯基(C1-C2)烷基；R2為氫、鹵素、(C1-C6)烷基、鹵代(C1-C4)烷基、(C3-C6)環(huán)烷基、(C3-C6)環(huán)烷基(C1-C4)烷基、苯基或苯基(C1-C2)烷基；和R3選自：氫、-SO2(C1-C4)烷基、鹵素、(C1-C6)烷基、(C2-C6)烯基、(C2-C6)炔基、羥基(C1-C4)烷基-、羥基(C3-C6)炔基-、(C1-C4)烷氧基、苯基、雜芳基和氰基，其中所述苯基或雜芳基任選獨(dú)立地被以下基團(tuán)取代1或2次：(C1-C4)烷氧基、-NRaRb、RaRbN(C1-C4)烷基-、(C1-C4)烷基雜環(huán)烷基-、鹵素、(C1-C4)烷基、(C3-C8)環(huán)烷基或雜環(huán)烷基；或其藥學(xué)上可接受的鹽。在另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(I)化合物，其中：L為(C4-C5)亞烷基或(C4-C5)亞烯基；R1為(C1-C4)烷基；R2為(C1-C4)烷基；和R3選自：鹵素、苯基和雜芳基，其中所述苯基或雜芳基任選被雜環(huán)烷基或(C1-C4)烷基-雜環(huán)烷基-取代；或其藥學(xué)上可接受的鹽。在另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(I)化合物，其中：L選自:R1為(C1-C4)烷基；R2為(C1-C4)烷基；和R3為鹵素；或其藥學(xué)上可接受的鹽。在另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(I)化合物，其中：L選自:R1為(C1-C4)烷基；R2為(C1-C4)烷基；和R3為吡啶基，其任選被以下基團(tuán)取代：吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、4-甲基哌嗪基、嗎啉基或硫嗎啉基；或其藥學(xué)上可接受的鹽。本發(fā)明的具體化合物包括：(E)-2-氯-4-異丙基-12-甲基-9,10,15,16-四氫-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮雜環(huán)十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-14,17(6H,13H)-二酮；(Z)-2-氯-4-異丙基-12-甲基-9,10,15,16-四氫-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮雜環(huán)十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-14,17(6H,13H)-二酮；2-氯-4-異丙基-12-甲基-7,8,9,10,15,16-六氫-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮雜環(huán)十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-14,17(6H,13H)-二酮；(E)-4-異丙基-12-甲基-2-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-9,10,15,16-四氫-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮雜環(huán)十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-14,17(6H,13H)-二酮；(E)-4-異丙基-12-甲基-14,17-二氧代-6,9,10,13,14,15,16,17-八氫-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮雜環(huán)十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-2-甲腈；和(E)-2-(3-羥基-3-甲基丁-1-炔-1-基)-4-異丙基-12-甲基-9,10,15,16-四氫-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮雜環(huán)十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-14,17(6H,13H)-二酮；或其藥學(xué)上可接受的鹽。通常但不是絕對(duì)地，本發(fā)明的鹽是藥學(xué)上可接受的鹽。所公開的化合物的含有堿性胺官能團(tuán)或其他堿性官能團(tuán)的鹽可通過本領(lǐng)域已知的任何合適的方法制備，包括用無(wú)機(jī)酸處理游離堿，所述無(wú)機(jī)酸諸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等，或用有機(jī)酸處理游離堿，所述有機(jī)酸諸如乙酸、三氟乙酸、馬來(lái)酸、琥珀酸、扁桃酸、富馬酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、乙醇酸、水楊酸、吡喃糖酸(諸如葡糖醛酸或半乳糖醛酸)、α-羥基酸(諸如檸檬酸或酒石酸)、氨基酸(諸如天冬氨酸或谷氨酸)、芳族酸(諸如苯甲酸或肉桂酸)、磺酸(諸如對(duì)甲苯磺酸、甲磺酸、乙磺酸等)。藥學(xué)上可接受的鹽的實(shí)例包括硫酸鹽、焦硫酸鹽、硫酸氫鹽、亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、磷酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸鹽、丙酸鹽、癸酸鹽、辛酸鹽、丙烯酸鹽、甲酸鹽、異丁酸鹽、己酸鹽、庚酸鹽、丙炔酸鹽、草酸鹽、丙二酸鹽、琥珀酸鹽、辛二酸鹽、癸二酸鹽、富馬酸鹽、馬來(lái)酸鹽、丁炔-1,4-二酸鹽、己炔-1,6-二酸鹽、苯甲酸鹽、氯苯甲酸鹽、甲基苯甲酸鹽、二硝基苯甲酸鹽、羥基苯甲酸鹽、甲氧基苯甲酸鹽、鄰苯二甲酸鹽、苯乙酸鹽、苯基丙酸鹽、苯基丁酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、γ-羥基丁酸鹽、乙醇酸鹽、酒石酸鹽、扁桃酸鹽和磺酸鹽(諸如二甲苯磺酸鹽、甲磺酸鹽、丙磺酸鹽、萘-1-磺酸鹽和萘-2-磺酸鹽)。所公開的化合物的含有羧酸官能團(tuán)或其他酸性官能團(tuán)的鹽可通過與合適的堿反應(yīng)制備。所述藥學(xué)上可接受的鹽可用提供藥學(xué)上可接受的陽(yáng)離子的堿制得，所述鹽包括堿金屬鹽(尤其是鈉鹽和鉀鹽)、堿土金屬鹽(尤其是鈣鹽和鎂鹽)、鋁鹽和銨鹽，以及所述藥學(xué)上可接受的鹽可從生理學(xué)可接受的有機(jī)堿制得，所述有機(jī)堿諸如三甲基胺、三乙基胺、嗎啉、吡啶、哌啶、甲基吡啶、二環(huán)己基胺、N,N’-二芐基乙二胺、2-羥基乙基胺、雙-(2-羥基乙基)胺、三-(2-羥基乙基)胺、普魯卡因、二芐基哌啶、去氫樅胺(dehydroabietylamine)、N,N’-二去氫樅胺、葡萄糖胺、N-甲基葡萄糖胺、三甲基吡啶、奎寧、喹啉，和堿性氨基酸諸如賴氨酸和精氨酸。不是藥學(xué)上可接受的其他鹽可用于制備本發(fā)明化合物，并且這些應(yīng)被視為形成本發(fā)明的另一方面。這些鹽諸如草酸鹽或三氟乙酸鹽，盡管它們本身不是藥學(xué)上可接受的，但是可用于制備在獲得本發(fā)明化合物和它們的藥學(xué)上可接受的鹽時(shí)用作中間體的鹽。式(I)化合物或其鹽可按立體異構(gòu)形式存在(例如，其含有一個(gè)或多個(gè)不對(duì)稱碳原子)。單獨(dú)的立體異構(gòu)體(對(duì)映異構(gòu)體和非對(duì)映異構(gòu)體)和這些異構(gòu)體的混合物包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。同樣地，應(yīng)理解式(I)的化合物或鹽可按不同于該式中所示的互變異構(gòu)形式存在，并且這些也包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。應(yīng)理解，本發(fā)明包括上文定義的具體組的所有組合和亞類。本發(fā)明的范圍包括立體異構(gòu)體的混合物以及經(jīng)純化的對(duì)映異構(gòu)體或?qū)τ钞悩?gòu)體/非對(duì)映異構(gòu)體富集的混合物。應(yīng)理解，本發(fā)明包括上文定義的具體組的所有組合和亞類。本發(fā)明還包括同位素標(biāo)記的化合物，其除以下事實(shí)外與式(I)所述的那些化合物相同：一個(gè)或多個(gè)原子被原子質(zhì)量或質(zhì)量數(shù)不同于天然常見的原子質(zhì)量或質(zhì)量數(shù)的原子代替。可引入本發(fā)明化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽中的同位素的實(shí)例包括氫、碳、氮、氧、磷、硫、氟、氯和碘的同位素，諸如2H、3H、11C、13C、14C、15N、17O、18O、31P、32P、35S、18F、36Cl、123I和125I。含有上述同位素和/或其他原子的其他同位素的本發(fā)明的化合物和所述化合物的藥學(xué)上可接受的鹽在本發(fā)明范圍內(nèi)。同位素標(biāo)記的本發(fā)明的化合物，例如引入了放射性同位素(諸如3H或14C)的那些化合物，用于藥物和/或底物組織分布測(cè)定。氚代的(即3H)和碳-14(即14C)同位素由于其易于制備及可檢測(cè)性而是特別優(yōu)選的。11C和18F同位素特別用于PET(正電子發(fā)射斷層掃描術(shù))，以及125I同位素特別用于SPECT(單光子發(fā)射計(jì)算機(jī)斷層掃描)，所有這些都用于腦成像。此外，用較重的同位素諸如氘(即2H)取代可因?qū)е赂蟮拇x穩(wěn)定性而提供治療益處，例如體內(nèi)半衰期增加或劑量需求減小，由此在一些情況中是優(yōu)選的。通常可通過進(jìn)行下文的方案和/或?qū)嵤├信兜牟僮?，通過用容易獲得的同位素標(biāo)記的試劑代替非同位素標(biāo)記的試劑來(lái)制備同位素標(biāo)記的式(I)化合物和其他化合物。本發(fā)明還提供了藥物組合物(也稱為藥物制劑)，其包含式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和一或多種賦形劑(在制藥領(lǐng)域也稱為載體和/或稀釋劑)。所述賦形劑在與該制劑的其他成分相容且對(duì)其接受者(即，患者)無(wú)毒方面是可接受的。合適的藥學(xué)上可接受的賦形劑將根據(jù)所選具體的劑型而變化。此外，可根據(jù)在組合物中所起的具體功能來(lái)選擇合適的藥學(xué)上可接受的賦形劑。例如，可根據(jù)促進(jìn)制備均一劑型的能力來(lái)選擇某些藥學(xué)上可接受的賦形劑?？筛鶕?jù)促進(jìn)制備穩(wěn)定的劑型的能力來(lái)選擇某些藥學(xué)上可接受的賦形劑。可根據(jù)在給藥至患者后促進(jìn)本發(fā)明化合物從身體的一個(gè)器官或部分?jǐn)y帶或運(yùn)輸至身體的另一器官或部分的能力來(lái)選擇某些藥學(xué)上可接受的賦形劑。某些藥學(xué)上可接受的賦形劑可根據(jù)其提高患者順應(yīng)性的能力進(jìn)行選擇。合適的藥學(xué)上可接受的賦形劑包括下列賦形劑類型：稀釋劑、填充劑、粘合劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑、助流劑、?；瘎聞?、潤(rùn)濕劑、溶劑、共溶劑、助懸劑、乳化劑、增甜劑、矯味劑、掩味劑、著色劑、防結(jié)塊劑、保濕劑、螯合劑、增塑劑、增粘劑、抗氧化劑、防腐劑、穩(wěn)定劑、表面活性劑和緩沖劑。本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解，某些藥學(xué)上可接受的賦形劑可以以多于一種功能和以替代性功能來(lái)使用，取決于所述賦形劑在制劑中存在多少和在制劑中存在何種其它成分。具有本領(lǐng)域的知識(shí)和技術(shù)的技術(shù)人員能夠選擇出以適當(dāng)量用于本發(fā)明的合適的藥學(xué)上可接受的賦形劑。此外，有許多本領(lǐng)域技術(shù)人員可用的資源，這些資源描述了藥學(xué)上可接受的賦形劑且其可用于選擇合適的藥學(xué)上可接受的賦形劑。實(shí)例包括Remington'sPharmaceuticalSciences(MackPublishingCompany)，TheHandbookofPharmaceuticalAdditives(GowerPublishingLimited)，和TheHandbookofPharmaceuticalExcipients(theAmericanPharmaceuticalAssociationandthePharmaceuticalPress)。本發(fā)明的藥物組合物使用本領(lǐng)域技術(shù)熟練人員已知的技術(shù)和方法制備。通常用于本領(lǐng)域的一些方法描述在Remington'sPharmaceuticalSciences(MackPublishingCompany)中。藥物組合物可為每個(gè)劑量單位含有預(yù)定量的活性成分的單位劑量形式。所述單位可含有治療有效劑量的式(I)化合物或其鹽，或一定比例的治療有效劑量的式(I)化合物或其鹽，從而在給定的時(shí)間可給予多個(gè)單位劑量形式以達(dá)到期望的治療有效劑量。優(yōu)選的單位劑量制劑是本申請(qǐng)上文所述的含有活性成分的每日劑量或亞劑量或其適當(dāng)?shù)谋壤哪切?。此外，所述藥物組合物可通過藥學(xué)領(lǐng)域熟知的任何方法制備。藥物組合物可適應(yīng)于通過任何適當(dāng)?shù)耐緩浇o藥，例如，經(jīng)口服(包括含服或舌下)、直腸、鼻、局部(包括含服、舌下或經(jīng)皮)、陰道或胃腸外(包括皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)或皮內(nèi))途徑給藥。所述組合物可通過藥學(xué)領(lǐng)域已知的任何方法制備，例如，通過使活性成分與一種或多種賦形劑結(jié)合。當(dāng)適應(yīng)于口服給藥時(shí)，藥物組合物可為離散單位諸如片劑或膠囊劑；粉末或顆粒；于水性或非水性液體中的溶液或懸浮液；可食用泡沫或攪打劑(whip)；水包油型液體乳液或油包水型乳液。本發(fā)明的化合物或其鹽或本發(fā)明的藥物組合物也可被摻入到糖果、薄片劑(wafer)和/或條帶型(tonguetape)制劑中，用于作為“快速溶解”的藥物給藥。例如，就以片劑或膠囊劑形式進(jìn)行的口服給藥而言，可將活性藥物組分與口服的無(wú)毒的藥學(xué)上可接受的惰性載體如乙醇、甘油、水等混合。粉末劑或顆粒劑如下制備：將化合物研磨至合適的微細(xì)尺寸，然后與經(jīng)類似研磨的藥物載體如可食用的碳水化合物(如淀粉或甘露醇)混合。也可存在矯味劑、防腐劑、分散劑和著色劑。膠囊劑如下制備：如上所述制備粉末混合物，然后填充到成形的明膠或非明膠殼中?？蓪⒅鲃┖蜐?rùn)滑劑如膠體二氧化硅、滑石、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣或固體聚乙二醇加到粉末混合物中，然后進(jìn)行填充操作。也可加入崩解劑或增溶劑如瓊脂、碳酸鈣或碳酸鈉以改善膠囊劑被攝入時(shí)的藥物利用度。此外，當(dāng)期望或需要時(shí)，也可將合適的粘合劑、潤(rùn)滑劑、崩解劑和著色劑摻到混合物中。合適的粘合劑包括淀粉、明膠、天然糖(如葡萄糖或β-乳糖)、玉米甜味劑、天然膠和合成膠如阿拉伯膠、西黃蓍膠、海藻酸鈉、羧甲基纖維素、聚乙二醇、蠟等。在這些劑型中使用的潤(rùn)滑劑包括油酸鈉、硬脂酸鈉、硬脂酸鎂、苯甲酸鈉、乙酸鈉、氯化鈉等。崩解劑包括但不限于淀粉、甲基纖維素、瓊脂、膨潤(rùn)土、黃原膠等。片劑如下配制：例如制備粉末混合物，制?；蝾A(yù)壓片(slugging)，加入潤(rùn)滑劑和崩解劑，然后壓制成片劑。粉末混合物如下制備：將經(jīng)合適研磨的化合物與上述稀釋劑或基質(zhì)以及任選的粘合劑(如羧甲基纖維素、海藻酸鹽、明膠或聚乙烯吡咯烷酮)、溶液延遲劑(solutionretardant)(如石蠟)、吸收促進(jìn)劑(如季胺鹽)和/或吸收劑(如膨潤(rùn)土、高嶺土或磷酸二鈣)混合。粉末混合物可如下制粒：潤(rùn)濕粘合劑如糖漿、淀粉糊、阿拉伯膠液、纖維素溶液或聚合物溶液，然后擠壓過篩。作為可選擇的制粒方法，粉末混合物可通過壓片機(jī)來(lái)處理，導(dǎo)致不完全成形的預(yù)壓片破裂成顆粒?？赏ㄟ^加入硬脂酸、硬脂酸鹽、滑石或礦物油的方式來(lái)對(duì)顆粒進(jìn)行潤(rùn)滑以防止與片劑成形模粘連。然后將經(jīng)潤(rùn)滑的混合物壓制成片劑。本發(fā)明的化合物或鹽也可與自由流動(dòng)的惰性載體組合，并在不經(jīng)歷制?；蝾A(yù)壓片步驟的情況下直接壓制成片劑?？商峁┩该鞯幕虿煌该鞯谋Ｗo(hù)性包衣，所述包衣由以下包衣層構(gòu)成：由蟲膠形成的隔離包衣層、由糖或聚合物形成的包衣層和由蠟形成的拋光包衣層?？蓪⑷玖霞拥竭@些包衣中以區(qū)分不同的劑量?？诜黧w如溶液劑、糖漿劑和酏劑可按劑量單位形式來(lái)制備，從而使給定的量含有預(yù)定量的活性成分。糖漿劑可通過將本發(fā)明的化合物或其鹽溶于經(jīng)合適矯味的水溶液中來(lái)制備，而酏劑通過使用無(wú)毒的含醇媒介物來(lái)制備。懸浮劑可通過將本發(fā)明的化合物或其鹽分散在無(wú)毒的媒介物中來(lái)制備。也可加入增溶劑和乳化劑(如乙氧基化的異硬脂醇和聚氧乙烯山梨醇醚)、防腐劑、矯味添加劑(如薄荷油、天然甜味劑、糖精或其它人造甜味劑)等。當(dāng)適當(dāng)時(shí)，可對(duì)用于口服給藥的單位劑量制劑進(jìn)行微囊化。也可例如通過將顆粒物質(zhì)包衣或包埋到聚合物、蠟等中來(lái)制備制劑以延長(zhǎng)或維持釋放。在本發(fā)明中，對(duì)于遞送藥物組合物而言，片劑和膠囊劑是優(yōu)選的。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了制備藥物組合物的方法，其包括將式(I)化合物或其鹽與至少一種賦形劑混合(或摻合)。本發(fā)明還提供了在哺乳動(dòng)物，尤其人中進(jìn)行治療的方法。本發(fā)明的化合物和組合物用于治療細(xì)胞增殖性疾病?？赏ㄟ^本文提供的方法和組合物得到治療的疾病包括，但不限于，癌癥(下文進(jìn)一步討論)、自身免疫性疾病、真菌病癥、關(guān)節(jié)炎、移植排斥、炎性腸病、醫(yī)療操作(medicalprocedure)后誘導(dǎo)的增殖，所述醫(yī)療操作包括，但不限于，手術(shù)、血管成形術(shù)等。應(yīng)理解，在一些情況下，細(xì)胞可能并不在高增殖或低增殖狀態(tài)(異常狀態(tài))但仍需要進(jìn)行治療。例如，在傷口愈合過程中，盡管細(xì)胞可能是“正常”增殖的，但仍可能需要增殖強(qiáng)化。因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明包括施用至患有或即將患有任一種這些疾病或病癥的細(xì)胞或個(gè)體。本文提供的組合物和方法尤其被認(rèn)為適用于治療癌癥，包括腫瘤，例如前列腺癌、乳腺癌、腦癌、皮膚癌、宮頸癌、睪丸癌等。它們尤其用于治療轉(zhuǎn)移性或惡性腫瘤。更具體地，可通過本發(fā)明的組合物和方法得到治療的癌癥包括，但不限于以下腫瘤類型，例如星形細(xì)胞癌、乳腺癌、宮頸癌、結(jié)腸直腸癌、子宮內(nèi)膜癌、食道癌、胃癌、頭頸癌、肝細(xì)胞癌、喉癌、肺癌、口腔癌、卵巢癌、前列腺癌和甲狀腺癌和肉瘤。更具體地，這些化合物可用于治療：心臟：肉瘤(血管肉瘤、纖維肉瘤、橫紋肌肉瘤、脂肪肉瘤)、粘液瘤、橫紋肌瘤、纖維瘤、脂肪瘤和畸胎瘤；肺：支氣管癌(鱗狀細(xì)胞癌、未分化小細(xì)胞癌、未分化大細(xì)胞癌、腺癌)、肺泡(細(xì)支氣管)癌、支氣管腺瘤、肉瘤、淋巴瘤、軟骨錯(cuò)構(gòu)瘤、間皮瘤；胃腸道：食道(鱗狀細(xì)胞癌、腺癌、平滑肌肉瘤、淋巴瘤)、胃(癌、淋巴瘤、平滑肌肉瘤)、胰腺(導(dǎo)管腺癌、胰島瘤、胰高血糖素瘤、胃泌素瘤、類癌瘤、舒血管腸肽瘤(vipoma))、小腸(腺癌、淋巴瘤、類癌瘤、卡波西肉瘤、平滑肌瘤、血管瘤、脂肪瘤、神經(jīng)纖維瘤、纖維瘤)、大腸(腺癌、管狀腺瘤、絨毛狀腺瘤、錯(cuò)構(gòu)瘤、平滑肌瘤)；泌尿生殖道：腎(腺癌、威爾姆斯腫瘤(Wilm'stumor)(腎胚細(xì)胞瘤)、淋巴瘤、白血病)、膀胱和尿道(鱗狀上皮細(xì)胞癌、移行細(xì)胞癌、腺癌)、前列腺(腺癌、肉瘤)、睪丸(精原細(xì)胞瘤、畸胎瘤、胚胎性癌、畸胎癌、絨毛膜癌、肉瘤、間質(zhì)細(xì)胞癌、纖維瘤、纖維腺瘤、腺瘤樣瘤、脂肪瘤)；肝：肝癌(肝細(xì)胞癌)、膽管癌、肝母細(xì)胞瘤、血管肉瘤、肝細(xì)胞性腺瘤、血管瘤；膽道：膽囊癌、壺腹癌、膽管癌；骨：成骨性肉瘤(骨肉瘤)、纖維肉瘤、惡性纖維組織細(xì)胞瘤、軟骨肉瘤、尤因肉瘤、惡性淋巴瘤(網(wǎng)狀細(xì)胞肉瘤)、多發(fā)性骨髓瘤、惡性巨細(xì)胞瘤脊索瘤、骨軟骨瘤(骨軟骨外生骨疣(osteocartilaginousexostose))、良性軟骨瘤、軟骨母細(xì)胞瘤、軟骨粘液纖維瘤(chondromyxofibroma)、骨樣骨瘤和巨細(xì)胞瘤；神經(jīng)系統(tǒng)：頭骨(骨瘤、血管瘤、肉芽腫、黃色瘤、畸形性骨炎)、腦膜(腦膜瘤、腦膜肉瘤(meningiosarcoma)、神經(jīng)膠質(zhì)瘤病)、腦(星形細(xì)胞瘤、成神經(jīng)管細(xì)胞瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、室管膜瘤、生殖細(xì)胞瘤(松果體瘤)、多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、少突神經(jīng)膠質(zhì)瘤(oligodendroglioma)、神經(jīng)鞘瘤、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤、先天性腫瘤)、脊髓神經(jīng)纖維瘤、腦膜瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、肉瘤)；婦科：子宮(子宮內(nèi)膜癌)、宮頸(宮頸癌、腫瘤前宮頸病變(pre-tumorcervicaldysplasia))、卵巢(卵巢癌(漿液性囊腺癌、粘液性囊腺癌、未分類癌(unclassifiedcarcinoma))、顆膜細(xì)胞瘤(granulosa-thecalcelltumor)、塞-萊細(xì)胞瘤(Sertoli-Leydigcelltumor)、無(wú)性細(xì)胞瘤、惡性畸胎瘤)、外陰(鱗狀上皮細(xì)胞癌、上皮內(nèi)癌、腺癌、纖維肉瘤、黑色素瘤)、陰道(透明細(xì)胞癌、鱗狀上皮細(xì)胞癌、葡萄狀肉瘤(胚胎性橫紋肌肉瘤)、輸卵管(癌))；血液方面：血液(髓細(xì)胞性白血病(急性和慢性)、急性成淋巴細(xì)胞性白血病、慢性淋巴細(xì)胞性白血病、骨髓增生性疾病、多發(fā)性骨髓瘤、骨髓增生異常綜合征(myelodysplasticsyndrome))、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤(惡性淋巴瘤)；皮膚：惡性黑色素瘤、基底細(xì)胞癌、鱗狀上皮細(xì)胞癌、卡波西肉瘤、發(fā)育不良痣(molesdysplasticnevi)、脂肪瘤、血管瘤、皮膚纖維瘤、瘢痕瘤、牛皮癬；和腎上腺：神經(jīng)母細(xì)胞瘤。因此，本文所述術(shù)語(yǔ)“癌細(xì)胞”包括患有任一上述病癥或相關(guān)病癥的細(xì)胞。本發(fā)明化合物可與其他治療劑，尤其是可提高化合物活性或體內(nèi)處置時(shí)間的藥劑組合或共同給藥。本發(fā)明的組合療法包括施用至少一種本發(fā)明化合物并使用至少一種其他治療方法。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合療法包括施用至少一種本發(fā)明化合物和手術(shù)治療。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合療法包括施用至少一種本發(fā)明化合物和放射療法。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合療法包括施用至少一種本發(fā)明化合物和至少一種支持性護(hù)理藥物(例如，至少一種鎮(zhèn)吐藥)。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合療法包括施用至少一種本發(fā)明化合物和至少一種其他化療劑。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，本發(fā)明包括施用至少一種本發(fā)明化合物和至少一種抗腫瘤藥。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明包括治療方案，其中本公開的EZH2抑制劑本身并沒有活性或并沒有顯著活性，但是當(dāng)其與另一療法組合時(shí)(所述另一療法作為單獨(dú)療法時(shí)可以是有活性的或無(wú)活性的)，該組合提供有用的治療效果。本文所用的術(shù)語(yǔ)“共同給藥”及其衍生詞語(yǔ)是指同時(shí)給藥或以任意單獨(dú)的方式相繼給藥本文所述的EZH2抑制化合物和已知用于治療癌癥的一種或多種其他活性成分(包括化療和放射治療)。當(dāng)向有治療癌癥需要的患者給藥時(shí)，本文所用術(shù)語(yǔ)一種或多種其他活性成分還包括已知的或被證明有有益性質(zhì)的任意化合物或治療劑。優(yōu)選地，如果所述給藥不是同時(shí)的，那么該化合物以彼此極接近的時(shí)間進(jìn)行給藥。此外，所述化合物是否以同一劑型施用并不重要，例如一種化合物可局部給藥而另一化合物可口服給藥。通常，在治療本發(fā)明中指定的癌癥時(shí)，可以共同給藥對(duì)所治療的易感腫瘤具有活性的任何抗腫瘤藥物。該藥物的實(shí)例參考V.T.Devita和S.Hellman(主編)的CancerPrinciplesandPracticeofOncology，第6版(2001年2月15日)，LippincottWilliams&WilkinsPublishers。本領(lǐng)域一般技術(shù)人員將能夠根據(jù)藥物的具體特征和所涉及癌癥辨別藥物的何種組合將是有用的?？捎糜诒景l(fā)明的典型抗腫瘤藥物包括，但不限于，抗微管劑例如二萜類化合物和長(zhǎng)春花生物堿；鉑配位絡(luò)合物；烷基化劑例如氮芥、氧氮磷雜環(huán)己二烯(oxazaphosphorine)、烷基磺酸鹽、亞硝基脲和三氮烯；抗生素例如蒽環(huán)類、放線菌素和博萊霉素；拓?fù)洚悩?gòu)酶II抑制劑例如表鬼臼毒素；抗代謝劑例如嘌呤和嘧啶類似物和抗葉酸化合物；拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑例如喜樹堿；激素和激素類似物；DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑例如阿扎胞苷和地西他濱；信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑抑制劑；非受體酪氨酸激酶血管生成抑制劑；免疫治療劑；促細(xì)胞凋亡劑；以及細(xì)胞周期信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制劑。通常，對(duì)所治療的易感腫瘤具有活性的任意化學(xué)治療劑可與本發(fā)明化合物組合使用，條件是該具體藥物與采用本發(fā)明化合物的療法在臨床上兼容。用于本發(fā)明的典型抗腫瘤劑包括，但不限于：烷化劑、抗代謝藥、抗腫瘤抗生素、抗有絲分裂藥、核苷類似物、拓?fù)洚悩?gòu)酶I和II抑制劑、激素和激素類似物；維甲酸，組蛋白脫乙酰基酶抑制劑；信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路抑制劑，包括細(xì)胞生長(zhǎng)或生長(zhǎng)因子功能的抑制劑、血管生成抑制劑和絲氨酸/蘇氨酸或其他激酶抑制劑；細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑；反義療法和免疫治療劑，包括單克隆抗體、疫苗或其他生物制劑。核苷類似物是指轉(zhuǎn)化成三磷酸脫氧核苷酸并代替胞嘧啶并入到復(fù)制的DNA中的化合物。DNA甲基轉(zhuǎn)移酶共價(jià)地連接至該經(jīng)修飾的堿基上，導(dǎo)致酶失活以及降低的DNA甲基化。核苷類似物的實(shí)例包括阿扎胞苷和地西他濱，它們都用于治療骨髓增生異常疾病。組蛋白脫乙?；?HDAC)抑制劑包括伏立諾他，其用于治療皮膚T細(xì)胞淋巴瘤。HDAC通過組蛋白脫乙?；饔脕?lái)修飾染色質(zhì)。此外，它們具有各種作用底物，包括各種轉(zhuǎn)錄因子和信號(hào)分子。其他HDAC抑制劑正在研發(fā)。信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路抑制劑是阻斷或抑制化學(xué)過程的那些抑制劑，所述化學(xué)過程引起細(xì)胞內(nèi)變化。如本文所用，這一變化是細(xì)胞增殖或分化或存活。用于本發(fā)明的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路抑制劑包括，但不限于，受體酪氨酸激酶的抑制劑、非受體酪氨酸激酶的抑制劑、SH2/SH3結(jié)構(gòu)域阻斷劑、絲氨酸/蘇氨酸激酶的抑制劑、磷脂酰肌醇-3-OH激酶的抑制劑、肌醇信號(hào)傳導(dǎo)和Ras癌基因的抑制劑。信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路抑制劑可與上述組合物和方法中的本發(fā)明化合物組合使用。受體激酶血管生成抑制劑也可用于本發(fā)明中。涉及VEGFR和TIE-2的血管生成抑制劑在上述針對(duì)信號(hào)傳導(dǎo)抑制劑(兩者都是受體酪氨酸激酶)中進(jìn)行討論。其他抑制劑可與本發(fā)明化合物組合使用。例如，抗VEGF抗體，其不識(shí)別VEGFR(受體酪氨酸激酶)，但結(jié)合至該配體；整聯(lián)蛋白(αvβ3)的小分子抑制劑，其抑制血管生成；內(nèi)皮他丁和血管他丁(非-RTK)也可被證明用于與本發(fā)明化合物組合。VEGFR抗體的一個(gè)實(shí)例是貝伐單抗生長(zhǎng)因子受體的多種抑制劑正在研發(fā)且包括配體拮抗劑、抗體、酪氨酸激酶抑制劑、反義寡核苷酸和適體。任意這些生長(zhǎng)因子受體抑制劑可與本發(fā)明化合物組合用于本文所述的任意組合物和方法/用途中。曲妥珠單抗是生長(zhǎng)因子功能的抗-erbB2抗體抑制劑的實(shí)例。生長(zhǎng)因子功能的抗-erbB2抗體抑制劑的一個(gè)實(shí)例是西妥昔單抗(ErbituxTM，C225)。貝伐單抗是直接針對(duì)VEGFR的單克隆抗體的實(shí)例。表皮生長(zhǎng)因子受體的小分子抑制劑的實(shí)例包括但不限于拉帕替尼和厄洛替尼甲磺酸伊馬替尼是PDGFR抑制劑的一個(gè)實(shí)例。VEGFR抑制劑的實(shí)例包括帕唑帕尼ZD6474、AZD2171、PTK787、舒尼替尼和索拉非尼。抗微管或抗有絲分裂劑是時(shí)相特異性藥物(phasespecificagent)，其在細(xì)胞周期中的M期或有絲分裂期具有抗腫瘤細(xì)胞的微管的活性?？刮⒐軇┑膶?shí)例包括但不限于二萜類化合物(diterpenoid)和長(zhǎng)春花生物堿(vincaalkaloid)。天然來(lái)源的二萜類化合物是時(shí)相特異性的抗癌劑，其在細(xì)胞周期中的G2/M期起作用。認(rèn)為二萜類化合物通過與該蛋白結(jié)合，使微管的β-微管蛋白亞單位穩(wěn)定。然后使蛋白的分解受到抑制，有絲分裂停止，接著發(fā)生細(xì)胞死亡。二萜類化合物的實(shí)例包括但不限于紫杉醇及其類似物多西他賽。紫杉醇，5β,20-環(huán)氧-1,2α,4,7β,10β,13α-六羥基紫杉-11-烯-9-酮4,10-二乙酸酯2-苯甲酸酯13-(2R,3S)-N-苯甲酰基-3-苯基異絲氨酸酯，其是從太平洋紫杉樹(Taxusbrevifolia)中分離出來(lái)的天然二萜產(chǎn)物，且作為可注射的溶液市售。其為萜類紫杉烷家族的成員。其在1971年由Wani等人首次分離出來(lái)(J。Am。Chem，Soc.,93：2325,1971)，并通過化學(xué)和X-射線結(jié)晶學(xué)方法表征其結(jié)構(gòu)。其活性的機(jī)理之一是關(guān)于紫杉醇能結(jié)合微管蛋白，進(jìn)而抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)的能力。Schiff等,Proc.Natl,Acad,Sci。USA,77：1561-1565(1980)；Schiff等,Nature,277：665-667(1979)；Kumar,J。Biol,Chem,256：10435-10441(1981)。有關(guān)一些紫杉醇衍生物的合成和抗癌活性的綜述，參見D.G.I.Kingston等,StudiesinOranicChemistry第26卷,標(biāo)題為“NewtrendsinNaturalProductsChemistry1986”,Attaur-Rahman,P.W.LeQuesne編輯(Elsevier,Amsterdam,1986)第219-235頁(yè)。在美國(guó)，已經(jīng)批準(zhǔn)紫杉醇的臨床用于治療難治的卵巢癌(Markman等,YaleJournalofBiologyandMedicine,64：583,1991；McGuire等,Ann.Int.,Med.,111：273,1989)和用于治療乳腺癌(Holmes等,J.Nat.CancerInst.,83：1797,1991)。其為治療皮膚癌(Einzig等,Proc.Am.Soc.Clin.Oncol.,20：46)和頭頸癌(Forastire等,Sem.Oncol.,20：56,1990)的可能的候選藥物。該化合物還具有治療多囊性腎病(Woo等,Nature,368：750,1994)、肺癌和瘧疾的潛力。采用紫杉醇治療患者，導(dǎo)致骨髓抑制(多重細(xì)胞譜系(multiplecelllineage),Ignoff,R.J.等,CancerChemotherapyPocketGuide,1998)，這與高于閾濃度(50nM)的給藥的持續(xù)時(shí)間有關(guān)(Kearns,C.M.等,SeminarsinOncology,3(6)p.16-23,1995)。多西他賽(Docetaxel)，5β-20-環(huán)氧-1,2α,4,7β,10β,13α-六羥基紫杉-11-烯-9-酮4-乙酸酯2-苯甲酸酯13-(2R,3S)-N-羧基-3-苯基異絲氨酸N-叔丁基酯，三水合物，作為可注射的溶液市售。多西他賽可用于治療乳腺癌。多西他賽是適量(q.v.)紫杉醇的半合成衍生物，其利用天然前體即從歐洲漿果紫杉樹的針葉中提取的10-去乙?；鶟{果赤霉素III制備。多西他賽的劑量限制性毒性是嗜中性白細(xì)胞減少癥。長(zhǎng)春花生物堿(Vincaalkaloids)是來(lái)源于長(zhǎng)春花屬植物的時(shí)相特異性的抗腫瘤藥物。長(zhǎng)春花生物堿通過特異性地結(jié)合微管蛋白而在細(xì)胞周期的M期(有絲分裂)起作用。因此，被結(jié)合的微管蛋白分子不能聚合成微管。認(rèn)為有絲分裂在中期被停止，隨后細(xì)胞死亡。長(zhǎng)春花生物堿的實(shí)例包括但不限于長(zhǎng)春堿，長(zhǎng)春新堿和長(zhǎng)春瑞濱。長(zhǎng)春堿(Vinblastine)，長(zhǎng)春堿硫酸鹽，以注射液市售。盡管已經(jīng)表明其有可能作為各種實(shí)體瘤的二線治療，但是其主要用于治療睪丸癌和各種淋巴瘤，包括霍奇金病以及淋巴細(xì)胞和組織細(xì)胞的淋巴瘤。骨髓抑制是長(zhǎng)春堿的劑量限制性副作用。長(zhǎng)春新堿(Vincristine)，長(zhǎng)春堿22-氧代-硫酸鹽，以注射溶液市售。長(zhǎng)春新堿顯示用于治療急性白血病，還發(fā)現(xiàn)用于針對(duì)霍奇金和非霍奇金惡性淋巴瘤的治療方案中。脫發(fā)和神經(jīng)作用是長(zhǎng)春新堿最常見的副作用，并產(chǎn)生較小程度的骨髓抑制和胃腸粘膜炎作用。長(zhǎng)春瑞濱(Vinorelbine)，3',4'-二脫氫-4'-脫氧-C'-去甲長(zhǎng)春堿(norvincaleukoblastine)[R-(R*,R*)-2,3-二羥基丁二酸二鹽(1：2)(鹽)]，以長(zhǎng)春瑞濱酒石酸鹽注射溶液市售，是半合成的長(zhǎng)春花生物堿。長(zhǎng)春瑞濱可作為單獨(dú)的藥物或與其它化學(xué)治療劑(如順鉑)組合，用于治療各種實(shí)體瘤，特別是非小細(xì)胞肺癌、晚期乳腺癌和激素難治的前列腺癌。骨髓抑制是長(zhǎng)春瑞濱最常見的劑量限制性副作用。鉑配位絡(luò)合物(Platinumcoordinationcomplex)是非時(shí)相特異性的抗癌劑，其與DNA相互作用。鉑絡(luò)合物進(jìn)入腫瘤細(xì)胞，進(jìn)行水合作用，并與DNA形成鏈內(nèi)部和鏈之間的交聯(lián)，導(dǎo)致對(duì)腫瘤不利的生物學(xué)作用。鉑配位絡(luò)合物的實(shí)例包括但不限于順鉑和卡鉑。順鉑，順式-二氨二氯合鉑，以注射溶液市售。順鉑主要用于治療轉(zhuǎn)移性睪丸癌和卵巢癌以及晚期的膀胱癌。順鉑的主要?jiǎng)┝肯拗菩愿弊饔檬悄I毒性和耳毒性，所述腎毒性可通過飲水和利尿來(lái)控制。卡鉑，二氨[1,1-環(huán)丁烷-二羧酸根(2-)-O,O']合鉑，以注射溶液市售。卡鉑主要用于晚期卵巢癌的一線和二線治療。骨髓抑制是卡鉑的劑量限制性毒性。烷化劑是非時(shí)相特異性的抗癌藥物和強(qiáng)親電子試劑。通常，烷化劑借助于烷基化作用，通過DNA分子的親核部分如磷酸基(phosphate)、氨基、巰基、羥基、羧基和咪唑基，與DNA形成共價(jià)鍵。這種烷基化作用破壞核酸功能，導(dǎo)致細(xì)胞死亡。烷化劑的實(shí)例包括但不限于氮芥(如環(huán)磷酰胺、美法侖和苯丁酸氮芥)、磺酸烷基酯(如白消安、亞硝基脲如卡莫司汀)，以及三氮烯(如達(dá)卡巴嗪)。環(huán)磷酰胺(Cyclophosphamide)，2-[雙(2-氯乙基)氨基]四氫-2H-1,3,2-氧氮磷雜環(huán)己二烯2-氧化物一水合物，以注射溶液或片劑市售。環(huán)磷酰胺可作為單獨(dú)的藥物或與其它化學(xué)治療劑組合，用于治療惡性淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤和白血病。脫發(fā)、惡心、嘔吐和白細(xì)胞減少癥是環(huán)磷酰胺最常見的劑量限制性副作用。美法侖(Melphalan)，4-[雙(2-氯乙基)氨基]-L-苯基丙氨酸，以注射溶液或片劑市售。美法侖可用于多發(fā)性骨髓瘤和不可切除的卵巢上皮癌的姑息療法。骨髓抑制是美法侖最常見的劑量限制性副作用。苯丁酸氮芥(Chlorambucil)，4-[雙(2-氯乙基)氨基]苯丁酸，以片劑市售。苯丁酸氮芥可用于慢性淋巴細(xì)胞性白血病和惡性淋巴瘤(如淋巴肉瘤、巨濾泡性淋巴瘤和霍奇金病)的姑息療法。骨髓抑制是苯丁酸氮芥最常見的劑量限制性副作用。白消安(Busulfan)，1,4-丁二醇二甲磺酸酯，以片劑市售。白消安用于慢性髓細(xì)胞性白血病的姑息療法。骨髓抑制是白消安最常見的劑量限制性副作用?？就?Carmustine)，1,3-[雙(2-氯乙基)-1-亞硝基脲，以單瓶裝的凍干產(chǎn)物市售?？就】勺鳛閱为?dú)的藥物或與其它藥物組合，用于腦瘤、多發(fā)性骨髓瘤、霍奇金病和非霍奇金淋巴瘤的姑息療法。延遲的骨髓抑制是卡莫司汀最常見的劑量限制性副作用。達(dá)卡巴嗪(Dacarbazine)，5-(3,3-二甲基-1-三氮烯基)-咪唑-4-甲酰胺，以單瓶裝的產(chǎn)物市售。達(dá)卡巴嗪可用于轉(zhuǎn)移性惡性黑素瘤的治療，并且可與其它藥物組合，用于霍奇金病的二線治療。惡心、嘔吐和厭食是達(dá)卡巴嗪最常見的劑量限制性副作用?？股仡惪拱﹦?Antibioticanti-neoplastics)是非時(shí)相特異性的藥物，其結(jié)合或嵌入DNA中。通常，這種作用導(dǎo)致穩(wěn)定的DNA復(fù)合物或鏈斷裂，破壞核酸的正常功能，導(dǎo)致細(xì)胞死亡?？股仡惪鼓[瘤藥物的實(shí)例包括但不限于放線菌素(如更生霉素)；蒽環(huán)類(anthrocyclins)(如柔紅霉素和多柔比星)；以及博來(lái)霉素。更生霉素(Dactinomycin，也稱為放線菌素D)，以注射液形式市售。更生霉素可用于威爾姆斯腫瘤和橫紋肌肉瘤的治療。惡心、嘔吐和厭食是更生霉素最常見的劑量限制性副作用。柔紅霉素(Daunorubicin)，(8S-順式-)-8-乙?；?10-[(3-氨基-2,3,6-三脫氧基-α-L-來(lái)蘇-己吡喃糖基)-氧基]-7,8,9,10-四氫-6,8,11-三羥基-1-甲氧基-5,12-并四苯二酮鹽酸鹽，以脂質(zhì)體可注射形式或可注射形式市售。柔紅霉素可在急性非淋巴細(xì)胞性白血病和晚期HIV相關(guān)的卡波西肉瘤的治療中用于誘導(dǎo)緩解。骨髓抑制是柔紅霉素最常見的劑量限制性副作用。多柔比星(Doxorubicin)，(8S,10S)-10-[(3-氨基-2,3,6-三脫氧-α-L-來(lái)蘇-己吡喃糖基)氧基]-8-乙醇?；?7,8,9,10-四氫-6,8,11-三羥基-1-甲氧基-5,12-并四苯二酮鹽酸鹽，以或ADRIAMYCIN注射溶液市售。多柔比星主要用于急性成淋巴細(xì)胞性白血病和急性成髓細(xì)胞性白血病的治療，但也是治療某些實(shí)體瘤和淋巴瘤的有用組分。骨髓抑制是多柔比星最常見的劑量限制性副作用。博來(lái)霉素(Bleomycin)，是從輪絲鏈霉菌(streptomycesverticilus)菌株中分離出來(lái)的細(xì)胞毒素糖肽類抗生素的混合物，以市售。博來(lái)霉素可作為單獨(dú)的藥物或與其它藥物組合，用于鱗狀細(xì)胞癌、淋巴瘤和睪丸癌的姑息療法。肺部和皮膚的毒性是博來(lái)霉素最常見的劑量限制性副作用。拓?fù)洚悩?gòu)酶II抑制劑包括但不限于表鬼臼脂毒素。表鬼臼脂毒素(Epipodophyllotoxins)是來(lái)源于曼德拉草(mandrake)植物的時(shí)相特異性的抗腫瘤藥物。表鬼臼脂毒素通常通過與拓?fù)洚悩?gòu)酶II和DNA形成三元復(fù)合物，導(dǎo)致DNA鏈斷裂來(lái)影響處于細(xì)胞周期的S和G2期的細(xì)胞。鏈斷裂物積聚，接著細(xì)胞死亡。表鬼臼脂毒素的實(shí)例包括但不限于依托泊苷和替尼泊苷。依托泊苷(Etoposide)，4'-去甲基-表鬼臼脂毒素9[4,6-0-(R)-亞乙基-β-D-吡喃葡萄糖苷]，以注射溶液或膠囊市售，并且常稱之為VP-16。依托泊苷可作為單獨(dú)的藥物或與其它化療劑組合，用于治療睪丸癌和非小細(xì)胞肺癌。骨髓抑制是依托泊苷最常見的副作用。白細(xì)胞減少癥的發(fā)生率(incidence)傾向于比血小板減少癥的發(fā)生率更嚴(yán)重。替尼泊苷(Teniposide)，4'-去甲基-表鬼臼脂毒素9[4,6-0-(R)-噻吩亞甲基-β-D-吡喃葡萄糖苷]，以注射溶液市售，并且通常稱之為VM-26。替尼泊苷可作為單獨(dú)的藥物或與其它化療劑組合，用于治療兒童急性白血病。骨髓抑制是替尼泊苷最常見的劑量限制性副作用。替尼泊苷可引起白細(xì)胞減少癥和血小板減少癥?？勾x腫瘤藥物(Antimetaboliteneoplasti)是時(shí)相特異性的抗腫瘤藥物，其作用于細(xì)胞周期的S期(DNA合成)，通過抑制DNA的合成，或者通過抑制嘌呤或嘧啶堿基的合成進(jìn)而限制DNA的合成。因此，S期不能繼續(xù)進(jìn)行下去，接著細(xì)胞死亡?？勾x類抗腫瘤藥物的實(shí)例包括但不限于氟尿嘧啶、甲氨蝶呤、阿糖胞苷、巰基嘌呤、硫鳥嘌呤，以及吉西他濱。5-氟尿嘧啶，5-氟-2,4-(1H,3H)嘧啶二酮，以氟尿嘧啶市售。5-氟尿嘧啶的給藥導(dǎo)致胸苷酸合成的抑制，并且還摻入到RNA和DNA中。結(jié)果通常是細(xì)胞死亡。5-氟尿嘧啶可作為單獨(dú)的藥物或與其它化療劑組合，用于治療乳腺癌、結(jié)腸癌、直腸癌、胃癌和胰腺癌。骨髓抑制和粘膜炎是5-氟尿嘧啶的劑量限制性副作用。其它的氟嘧啶類似物包括5-氟脫氧尿嘧啶核苷(氟尿苷)和5-氟脫氧尿嘧啶核苷一磷酸。阿糖胞苷(Cytarabine)，4-氨基-1-β-D-阿拉伯呋喃糖基-2(1H)-嘧啶酮，以市售，并且通常稱之為Ara-C。認(rèn)為阿糖胞苷在S-期具有細(xì)胞時(shí)相特異性，其通過將阿糖胞苷末端摻入到生長(zhǎng)的DNA鏈中而抑制DNA鏈的延長(zhǎng)。阿糖胞苷作為單獨(dú)的藥物或與其它化療劑組合，用于治療急性白血病。其它的胞苷類似物包括5-氮雜胞苷和2',2'-二氟脫氧胞苷(吉西他濱)。阿糖胞苷引起白細(xì)胞減少癥、血小板減少癥和粘膜炎。巰基嘌呤，1,7-二氫-6H-嘌呤-6-硫酮一水合物，以市售。巰基嘌呤在S-期通過至今尚未清楚的機(jī)理抑制DNA的合成而具有細(xì)胞時(shí)相特異性。巰基嘌呤可作為單獨(dú)的藥物或與其它化療劑組合，用于治療急性白血病。預(yù)期骨髓抑制和胃腸粘膜炎是高劑量巰基嘌呤的副作用。可使用的巰基嘌呤類似物是硫唑嘌呤。硫鳥嘌呤(Thioguanine)，2-氨基-1,7-二氫-6H-嘌呤-6-硫酮，以市售。硫鳥嘌呤在S-期通過至今尚未清楚的機(jī)理抑制DNA的合成而具有細(xì)胞時(shí)相特異性。硫鳥嘌呤可作為單獨(dú)的藥物或與其它化療劑組合，用于治療急性白血病。骨髓抑制，包括白細(xì)胞減少癥、血小板減少癥和貧血是給藥硫鳥嘌呤最常見的劑量限制性副作用。然而，還發(fā)生胃腸副作用，而且該副作用可能是劑量限制性的。其它的嘌呤類似物包括噴司他丁、赤式羥基壬基腺嘌呤(erythrohydroxynonyladenine)、磷酸氟達(dá)拉濱和克拉屈濱。吉西他濱(Gemcitabine)，2'-脫氧-2',2'-二氟胞苷一鹽酸鹽(β-異構(gòu)體)，以市售。吉西他濱通過阻斷細(xì)胞通過G1/S邊界的發(fā)展在S-期具有細(xì)胞時(shí)相特異性。吉西他濱可與順鉑組合，用于治療局部的晚期非小細(xì)胞肺癌，也可以單獨(dú)地用于治療局部的晚期胰腺癌。骨髓抑制(包括白細(xì)胞減少癥、血小板減少癥和貧血)是給藥吉西他濱最常見的劑量限制性副作用。甲氨蝶呤，N-[4[[(2,4-二氨基-6-蝶啶基)甲基]甲基氨基]苯甲?；鵠-L-谷氨酸，以甲氨蝶呤鈉市售。甲氨蝶呤在S-期具有細(xì)胞時(shí)相特異性作用，其通過抑制合成嘌呤核苷酸和胸苷酸所需的脫氫葉酸還原酶來(lái)抑制DNA的合成、修復(fù)和/或復(fù)制。甲氨蝶呤可作為單獨(dú)的藥物或與其它化療劑組合，用于治療絨毛膜癌、腦膜白血病、非霍奇金淋巴瘤，以及乳腺癌、頭癌、頸癌、卵巢癌和膀胱癌。預(yù)期骨髓抑制(白細(xì)胞減少癥、血小板減少癥和貧血)和粘膜炎是給藥甲氨蝶呤的副作用。喜樹堿(Camptothecins)，包括喜樹堿和喜樹堿衍生物，其可作為拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑來(lái)使用或開發(fā)。認(rèn)為喜樹堿細(xì)胞毒素活性與其拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制活性相關(guān)。喜樹堿的實(shí)例包括但不限于伊立替康、托泊替康，以及下述7-(4-甲基哌嗪子基-亞甲基)-10,11-亞乙二氧基-20-喜樹堿的各種旋光體。鹽酸伊立替康(IrinotecanHCl)，(4S)-4,11-二乙基-4-羥基-9-[(4-哌啶子基哌啶子基)羰基氧基]-1H-吡喃并[3',4',6,7]中氮茚并[1,2-b]喹啉-3,14(4H,12H)-二酮鹽酸鹽，以注射溶液市售。伊立替康(Irinotecan)是喜樹堿的衍生物，其與其活性代謝物SN-38一起結(jié)合在拓?fù)洚悩?gòu)酶I-DNA復(fù)合物上。認(rèn)為由于雙鏈不可修復(fù)的(irreparable)斷裂，導(dǎo)致出現(xiàn)細(xì)胞毒性，所述斷裂是由拓?fù)洚悩?gòu)酶I：DNA：伊立替康或SN-38三元復(fù)合物與復(fù)制酶之間的相互作用引起的。伊立替康可用于治療結(jié)腸或直腸的轉(zhuǎn)移癌。鹽酸伊立替康的劑量限制性副作用是骨髓抑制，包括嗜中性白細(xì)胞減少癥，以及包括腹瀉的胃腸道效應(yīng)。鹽酸托泊替康(TopotecanHCl)，(S)-10-[(二甲基氨基)甲基]-4-乙基-4,9-二羥基-1H-吡喃并[3',4',6,7]中氮茚并[1,2-b]喹啉-3,14-(4H,12H)-二酮一鹽酸鹽，以注射溶液市售。托泊替康是喜樹堿的衍生物，其與拓?fù)洚悩?gòu)酶I-DNA復(fù)合物結(jié)合，并阻止單鏈斷裂物的再連接，所述單鏈斷裂物是拓?fù)洚悩?gòu)酶I響應(yīng)DNA分子的扭轉(zhuǎn)張力(torsionalstrain)所引起的。托泊替康用于卵巢轉(zhuǎn)移癌和小細(xì)胞肺癌的二線治療。鹽酸托泊替康的劑量限制性副作用是骨髓抑制，主要是嗜中性白細(xì)胞減少癥。藥物組合物可按照每單位劑量含有預(yù)定量的活性成分的單位劑量形式存在。該單位依據(jù)所治療的疾病、給藥途徑和患者的年齡、體重和狀況，可含有，例如，0.5mg-1g，優(yōu)選1mg-700mg，更優(yōu)選5mg-100mg的式(I)化合物，或藥物組合物可按照每單位劑量含有預(yù)定量的活性成分的單位劑量形式存在。優(yōu)選的單位劑量組合物是含有如上文所述的活性成分的日劑量或亞劑量或其適當(dāng)分?jǐn)?shù)的那些。此外，該藥物組合物可通過藥學(xué)領(lǐng)域熟知的任意方法制備。藥物組合物可適于任意合適的途徑的施用，例如，口服(包括含服或舌下)、直腸、鼻、局部(包括含服、舌下或經(jīng)皮)、陰道或胃腸外(包括皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)或真皮內(nèi))途徑。該組合物可通過藥物領(lǐng)域已知的任意方法制備，例如，通過將式(I)化合物與一種或多種載體或賦形劑組合。適用于口服給藥的藥物組合物可為離散單位，例如片劑或膠囊；粉劑或顆粒；水性或非水液體中的溶液或混懸液；食用泡沫或攪打劑；水包油的液體乳液或油包水的液體乳液。膠囊是通過以下制備的：按上述制備粉末混合物并填充到成形的明膠鞘中?？稍谔畛洳僮髑?，將助流劑和潤(rùn)滑劑，例如膠體二氧化硅、滑石、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、固體聚乙二醇加至該粉末混合物中。還可加入崩解劑或增溶劑，例如瓊脂、碳酸鈣或碳酸鈉，使得當(dāng)該膠囊被攝取時(shí)提高藥物的利用度。此外，當(dāng)需要或必要時(shí)，還可將合適的粘合劑、潤(rùn)滑劑、崩解劑和著色劑摻入到該混合物中。合適的粘合劑包括淀粉、明膠、天然糖(例如葡萄糖或β-乳糖)、玉米甜味劑、天然和合成樹膠(例如阿拉伯膠、黃蓍膠或海藻酸鈉)、羧甲基纖維素、聚乙二醇、蠟等。在這些劑型中所用的潤(rùn)滑劑包括油酸鈉、硬脂酸鈉、硬脂酸鎂、苯甲酸鈉、乙酸鈉、氯化鈉等。崩解劑包括，但不限于，淀粉、甲基纖維素、瓊脂、膨潤(rùn)土、黃原膠等。片劑是通過如下制備的，例如，制備粉末混合物、制粒或預(yù)壓(slugging)、添加潤(rùn)滑劑和崩解劑并壓制成片。粉末混合物是通過以下制備的，將適當(dāng)粉碎的化合物與上述稀釋劑或基質(zhì)混合，并任選地，與粘合劑(例如羧甲基纖維素、藻酸鹽、明膠或聚乙烯吡咯烷酮)、溶液延遲劑(例如石蠟)、再吸收加速劑(例如季鹽)和/或吸收劑(例如膨潤(rùn)土、高嶺土或磷酸二鈣)混合。用片劑成形模，通過加入硬脂酸、硬脂酸鹽、滑石或礦物油可將該粉末混合物制粒。然后將該經(jīng)潤(rùn)滑的混合物壓制成片。本發(fā)明化合物還可與自由流動(dòng)的惰性載體組合且無(wú)需進(jìn)行制?；蝾A(yù)壓步驟而直接壓制成片?？商峁┯上x膠隔離包衣、糖或聚合材料的包衣和蠟的拋光包衣組成的透明或不透明的保護(hù)包衣?？蓪⑷玖霞又吝@些包衣以區(qū)分不同的劑量?？诜黧w(例如溶液、糖漿和酏劑)可以單位劑量形式制備，使得給定量含有預(yù)定量的式(I)化合物。糖漿可通過將該化合物溶于適當(dāng)矯味的水溶液中進(jìn)行制備，而酏劑通過使用無(wú)毒的醇媒介物制備?；鞈乙嚎赏ㄟ^將該化合物分散于無(wú)毒媒介物中進(jìn)行配制。還可加入增溶劑和乳化劑(例如乙氧基化的異硬脂醇和聚氧乙烯山梨醇醚)、防腐劑、矯味添加劑(例如薄荷油或天然甜味劑或糖精或其他人造甜味劑)等。當(dāng)適當(dāng)時(shí)，可對(duì)用于口服給藥的單位劑量制劑進(jìn)行微囊化。也可例如通過將顆粒物質(zhì)包衣或包埋到聚合物、蠟等中來(lái)制備制劑以延長(zhǎng)或維持釋放。適用于直腸給藥的藥物組合物可以栓劑或灌腸劑存在。適用于陰道給藥的藥物組合物可以陰道栓劑、棉塞、霜?jiǎng)?、凝膠劑、糊劑、泡沫劑或噴霧制劑存在。適用于胃腸外給藥的藥物制劑包括水性和非水無(wú)菌注射溶液，其可含有抗氧化劑、緩沖劑、抑菌劑和溶質(zhì)，其使得該組合物與預(yù)期接受者的血液等滲；和水性和非水無(wú)菌混懸液，其可包含懸浮劑和增稠劑。該藥物組合物可存在于單位劑量或多劑量容器中，例如密閉的安瓿和小瓶且可儲(chǔ)存于冷凍干燥的(凍干的)條件下，其僅需在使用前立即加入無(wú)菌液體載體，例如注射用水。臨時(shí)注射溶液和混懸液可由無(wú)菌粉末、顆粒和片劑制備。應(yīng)理解，除了上面特別提及的成分，該藥物組合物可根據(jù)所探討的制劑類型包含本領(lǐng)域常用的其他試劑，例如適用于口服給藥的那些可包含矯味劑。本發(fā)明化合物的治療有效量將取決于許多因素，包括，例如，預(yù)期接受者的年齡和體重、需要治療的確切病癥和其嚴(yán)重性、該制劑的性質(zhì)和給藥途徑且最終由開處方人員慎重決定。但是，治療貧血的式(I)化合物的有效量的通常范圍是每天0.001-100mg/kg接受者體重，適當(dāng)?shù)胤秶鸀槊刻?.01-10mg/kg體重。對(duì)于70kg成年哺乳動(dòng)物，每天的實(shí)際量將適當(dāng)?shù)貫?-700mg且該量可以每日單一劑量給予或以每天若干(例如2、3、4、5或6個(gè))亞劑量給予，使得總的劑量相同。有效量的鹽或溶劑合物等可按式(I)化合物本身有效量的比例來(lái)確定。預(yù)期類似的劑量將適用于治療上述其他病癥。定義術(shù)語(yǔ)以其被接受的含義使用。以下定義旨在闡明，而非限制所定義的術(shù)語(yǔ)。本文所用術(shù)語(yǔ)“烷基”表示具有指定碳原子數(shù)的飽和、直鏈或支鏈烴部分。術(shù)語(yǔ)“(C1-C6)烷基”是指含有1-6個(gè)碳原子的烷基。示例性的烷基包括，但不限于甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基和己基。本文所用術(shù)語(yǔ)“亞烷基”表示具有指定碳原子數(shù)的飽和、直鏈或支鏈二價(jià)烴部分。術(shù)語(yǔ)“(C2-C8)亞烷基”是指含有2-8個(gè)碳原子的亞烷基。當(dāng)術(shù)語(yǔ)“烷基”與其他取代基組合使用時(shí)，例如“鹵代(C1-C4)烷基”、“羥基(C1-C4)烷基”或“苯基(C1-C2)烷基-”，術(shù)語(yǔ)“烷基”旨在涵蓋二價(jià)直鏈或支鏈烴基，其中連接點(diǎn)是通過烷基部分。術(shù)語(yǔ)“鹵代(C1-C4)烷基”旨在表示在含有1-4個(gè)碳原子的烷基的1個(gè)或多個(gè)碳原子上具有1個(gè)或多個(gè)可相同或不同的鹵素原子的基團(tuán)，其可以是直鏈或支鏈碳基。在本發(fā)明中所用的“鹵代(C1-C4)烷基”的實(shí)例包括，但不限于，-CF3(三氟甲基)、-CCl3(三氯甲基)、1,1-二氟乙基、2,2,2-三氟乙基和六氟異丙基。在本發(fā)明中所用的“苯基(C1-C2)烷基-”的實(shí)例包括，但不限于，芐基(苯基甲基)、1-甲基芐基(1-苯基乙基)和苯乙基(2-苯基乙基)。在本發(fā)明中所用的“羥基(C1-C4)烷基”的實(shí)例包括，但不限于，羥基甲基、羥基乙基和羥基異丙基?！巴檠趸笔侵负型ㄟ^氧連接原子連接的上文所定義的烷基的基團(tuán)。術(shù)語(yǔ)“(C1-C4)烷氧基”是指具有至少1個(gè)和最多4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烴基，其通過氧連接原子連接。在本發(fā)明中所用的示例性的“(C1-C4)烷氧基”包括，但不限于，甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、異丁氧基和叔丁氧基。當(dāng)使用術(shù)語(yǔ)“烯基”時(shí)，其是指直鏈或支鏈的烴鏈，其含有指定的碳原子數(shù)和至少1個(gè)且至多4個(gè)碳-碳雙鍵。實(shí)例包括乙烯基(或亞乙烯基)和丙烯基(或亞丙烯基)。當(dāng)使用術(shù)語(yǔ)“亞烯基”時(shí)，其是指直鏈或支鏈二價(jià)烴部分，其含有指定的碳原子數(shù)和至少1個(gè)且至多4個(gè)碳-碳雙鍵。當(dāng)使用術(shù)語(yǔ)“炔基”(或“亞炔基”)時(shí)，其是指直鏈或支鏈的烴鏈，其含有指定的碳原子數(shù)和至少1個(gè)且至多4個(gè)碳-碳叁鍵。實(shí)例包括乙炔基(或亞乙炔基)和丙炔基(或亞丙炔基)。當(dāng)使用“環(huán)烷基”時(shí)，其是指含有指定碳原子數(shù)的非芳族的、飽和、環(huán)狀烴環(huán)。因此，例如，術(shù)語(yǔ)“(C3-C8)環(huán)烷基”是指具有3-8個(gè)碳原子的非芳族的環(huán)狀烴環(huán)。在本發(fā)明中所用的示例性的“(C3-C8)環(huán)烷基”包括，但不限于，環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基和環(huán)辛基。本文所用術(shù)語(yǔ)“環(huán)烯基”是指非芳香、環(huán)狀烴環(huán)，其含有指定的碳原子數(shù)和至少一個(gè)碳-碳雙鍵。術(shù)語(yǔ)“(C5-C8)環(huán)烯基”是指具有5-8個(gè)環(huán)碳原子的非芳香環(huán)狀烴環(huán)。用于本發(fā)明的示例性的“(C5-C8)環(huán)烯基”包括環(huán)戊烯基、環(huán)己烯基、環(huán)庚烯基和環(huán)辛烯基。本文所用的術(shù)語(yǔ)“環(huán)烷基氧基-”是指含有通過氧連接原子連接的上文定義的環(huán)烷基的基團(tuán)。本發(fā)明中所用的示例性的“(C3-C8)環(huán)烷基氧基-”包括環(huán)丙基氧基、環(huán)丁基氧基、環(huán)戊基氧基、環(huán)己基氧基、環(huán)庚基氧基和環(huán)辛基氧基。本文所用術(shù)語(yǔ)“二環(huán)烷基”是指含有指定碳原子數(shù)的飽和的橋連、稠合或螺環(huán)的雙環(huán)烴環(huán)系統(tǒng)。示例性的“(C6-C10)二環(huán)烷基”包括，但不限于雙環(huán)[2.1.1]己基、雙環(huán)[2.1.1]庚基、雙環(huán)[3.2.1]辛基、雙環(huán)[2.2.2]辛基、雙環(huán)[3.2.2]壬基、雙環(huán)[3.3.1]壬基、雙環(huán)[3.3.2]癸基、雙環(huán)[4.3.1]癸基、雙環(huán)[2.2.0]己基、雙環(huán)[3.1.0]己基、雙環(huán)[3.2.0]庚基、雙環(huán)[4.1.0]庚基、八氫并環(huán)戊二烯基(octahydropentalenyl)、雙環(huán)[4.2.0]辛基、十氫萘基、螺[3.3]庚基、螺[2.4]庚基、螺[3.4]辛基、螺[2.5]辛基、螺[4.4]壬基、螺[3.5]壬基和螺[4.5]癸基。術(shù)語(yǔ)“鹵素”和“鹵代”表示氯、氟、溴或碘取代基。“羥基”或“羥基”旨在表示基團(tuán)-OH?！半s環(huán)烷基”表示基團(tuán)或部分，其包含非芳族的、單價(jià)單環(huán)或雙環(huán)基團(tuán)，其為飽和或部分不飽和的，含有3-10個(gè)環(huán)原子，包含1-3個(gè)獨(dú)立地選自氮、氧和硫的雜原子(包括N-氧化物、硫氧化物和硫二氧化物)。在本發(fā)明中所用的雜環(huán)烷基的示例性實(shí)例包括，但不限于，氮雜環(huán)丙烷基、氮雜環(huán)丁烷基、吡咯烷基、吡唑烷基、吡唑啉基、咪唑烷基、咪唑啉基、噁唑啉基、噻唑啉基、四氫呋喃基、二氫呋喃基、1,3-二氧雜環(huán)戊烷基、哌啶基、哌嗪基、嗎啉基、硫嗎啉基、四氫吡喃基、二氫吡喃基、1,3-二噁烷基、1,4-二噁烷基、1,3-氧硫雜環(huán)戊烷基、1,3-氧硫雜環(huán)己烷基、1,3-二噻烷基、1,4-二噻烷基、六氫-1H-1,4-二氮雜基、氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛基、氮雜雙環(huán)[3.3.1]壬基、氮雜雙環(huán)[4.3.0]壬基、氧雜雙環(huán)[2.2.1]庚基、1,1-二氧化四氫-2H-噻喃基和1,5,9-三氮雜環(huán)癸基。本文所用術(shù)語(yǔ)“雜芳基”是指芳香環(huán)系統(tǒng)，其含有一個(gè)或多個(gè)碳和至少一個(gè)選自氮、氧和硫的雜原子(包括N-氧化物)。雜芳基可以是取代或未取代的單環(huán)或多環(huán)。單環(huán)雜芳基可在該環(huán)上具有1-4個(gè)雜原子，而多環(huán)雜芳基可含有1-8個(gè)雜原子。雙環(huán)雜芳基環(huán)可含有8-10個(gè)成員原子。單環(huán)雜芳環(huán)可含有5-6個(gè)成員原子(碳原子和雜原子)。示例性的5至6元雜芳基包括，但不限于，呋喃基、苯硫基(thiophenyl)、噻吩基(thienyl)、吡咯基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、噻唑基、異噻唑基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、噁唑基、異噁唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,5-噁二唑基、噻二唑基、異噻唑基、四唑基、吡啶基、噠嗪基、吡嗪基、嘧啶基和三嗪基。其他示例性的雜芳基包括，但不限于苯并呋喃基、異苯并呋喃基、2,3-二氫苯并呋喃基、1,3-苯并二氧雜環(huán)戊烯基(benzodioxolyl)、二氫苯并二氧雜環(huán)己二烯基(dihydrobenzodioxinyl)、苯并噻吩基、吲嗪基、吲哚基、異吲哚基、二氫吲哚基、異二氫吲哚基、苯并咪唑基、二氫苯并咪唑基、苯并噁唑基、二氫苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并異噻唑基、二氫苯并異噻唑基、吲唑基、吡咯并吡啶基、吡咯并嘧啶基、咪唑并吡啶基、咪唑并嘧啶基、吡唑并吡啶基、吡唑并嘧啶基、苯并噁二唑基、苯并噻二唑基、苯并三唑基、三唑并吡啶基、嘌呤基、喹啉基、四氫喹啉基、異喹啉基、四氫異喹啉基、喹喔啉基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、1,5-二氮雜萘基、1,6-二氮雜萘基、1,7-二氮雜萘基、1,8-二氮雜萘基和蝶啶基。本文所用術(shù)語(yǔ)“氰基”是指基團(tuán)-CN。本文所用術(shù)語(yǔ)“任選地”是指隨后描述的事件可能發(fā)生或不發(fā)生，且包括發(fā)生的事件和不發(fā)生的事件二者。除非另外提及，否則本文所用短語(yǔ)“任選取代的”或其變體表示被一個(gè)或多個(gè)取代基任選取代，包括多個(gè)取代度的情況。該短語(yǔ)不應(yīng)被理解成重復(fù)本文所述和描繪的取代基。本文所用術(shù)語(yǔ)“治療”是指在先前患有或確診的患者或受試者中，減輕具體病癥、消除或減少該病癥的一種或多種癥狀、減緩或消除該病癥的進(jìn)展和延遲該病癥的復(fù)發(fā)。本文所用術(shù)語(yǔ)“有效量”是指由例如研究人員或臨床醫(yī)師所探索的將引起組織、系統(tǒng)、動(dòng)物或人的生物學(xué)或醫(yī)學(xué)響應(yīng)的藥物或藥劑的量。術(shù)語(yǔ)“治療有效量”是指與未接受該量的相應(yīng)受試者相比，引起疾病、障礙或副作用的改進(jìn)的治療、治愈、預(yù)防或改善，或降低疾病或障礙進(jìn)展速度的任意量。術(shù)語(yǔ)在其范圍內(nèi)還包括提高正常生理功能的有效量。對(duì)于在療法中的用途，治療有效量的式(I)化合物及其鹽可以化學(xué)原料施用。此外，所述活性成分可以藥物組合物存在。化合物制備縮寫B(tài)oc2O一縮二碳酸二叔丁酯CaCl2氯化鈣Cbz羧基芐基CHCl3氯仿CH3CN乙腈Cs2CO3碳酸銫DBU1,8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯DCM二氯甲烷DIAD偶氮二甲酸二異丙酯DME1,2-二甲氧基乙烷DMFN,N-二甲基甲酰胺DMSO二甲基亞砜dppf1,1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵EtOAc乙酸乙酯EDCN-(3-二甲基氨基丙基)-N′-碳二亞胺鹽酸鹽ES電噴霧Et3N三乙胺Et2O二乙醚EtOH乙醇H小時(shí)HCl鹽酸H2O水HOAt1-羥基-7-氮雜苯并三唑HPLC高效液相色譜Hunig’sbaseN,N-二異丙基乙胺LCMS液相色譜質(zhì)譜MeOH甲醇MgCl2氯化鎂MgSO4硫酸鎂min分鐘MS質(zhì)譜Na2CO3碳酸鈉NaH氫化鈉NaHCO3碳酸氫鈉NaI碘化鈉NaOH氫氧化鈉Na2SO4硫酸鈉NH4Cl氯化銨PdCl2(dppf)-DCM[1,1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(II)-二氯甲烷絡(luò)合物Pd2(dba)3三(二亞芐基丙酮)二鈀(0)Pd(PPh3)4四(三苯基膦)鈀(0)TBME叔丁基甲基醚TFA三氟乙酸THF四氫呋喃一般性合成方案本發(fā)明化合物可通過各種方法，包括熟知的標(biāo)準(zhǔn)合成方法制備。示例性的一般性合成方法如下所示，然后具體的本發(fā)明化合物在工作實(shí)施例中進(jìn)行制備。本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解，如果本文所描述的取代基與本文所述的合成方法相容，則該取代基可用對(duì)該反應(yīng)條件穩(wěn)定的合適的保護(hù)基團(tuán)進(jìn)行保護(hù)。該保護(hù)基團(tuán)可在反應(yīng)順序中合適的點(diǎn)進(jìn)行脫除以提供所需的中間體或目標(biāo)化合物。在下文所述的全部方案中，根據(jù)合成化學(xué)的一般原則，在有必要的位點(diǎn)，針對(duì)敏感或反應(yīng)性基團(tuán)使用保護(hù)基團(tuán)。保護(hù)基團(tuán)根據(jù)有機(jī)合成的標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行處理(T.W.Green和P.G.M.Wuts，(1991)ProtectingGroupsinOrganicSynthesis，JohnWiley&Sons，其保護(hù)基團(tuán)引入本文作為參考)。使用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉的方法，在該化合物合成的合適的階段將這些基團(tuán)脫除。方法及反應(yīng)條件的選擇以及它們的執(zhí)行順序應(yīng)與本發(fā)明化合物的制備一致。起始材料是市售可得的或使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法從市售可得的起始材料制備的。其中L為亞烯基的式(I)化合物可根據(jù)反應(yīng)式1或通過類似方法進(jìn)行制備。在適當(dāng)?shù)娜軇?例如二甲基亞砜)中，使用適當(dāng)?shù)脑噭?例如EDC)將適當(dāng)官能化的烯基-取代的4-羧基吲哚A偶聯(lián)至適當(dāng)官能化的烯基-取代的3-氨基甲基吡啶B。在適當(dāng)?shù)娜軇?例如二氯甲烷)中，使用適當(dāng)?shù)脑噭?例如Grubbs一代或二代RCM催化劑)的酰胺C的閉環(huán)置換提供大環(huán)D。在適當(dāng)?shù)娜軇?例如1,4-二噁烷)中，使用適當(dāng)?shù)脑噭?例如鹽酸)水解該2-甲氧基吡啶，得到式(I)化合物。反應(yīng)式1：式(I)化合物的合成，其中L為亞烯基(其中n為0-6，m為0-6且m+n＝0-6)。其中L為亞烷基的所述式(I)化合物可根據(jù)反應(yīng)式2或類似方法進(jìn)行制備。在適當(dāng)?shù)臈l件下，例如在催化性鈀炭的存在下，在氫氣氣氛中，在適當(dāng)?shù)娜軇?例如乙酸乙酯)中氫化大環(huán)D，得到飽和的大環(huán)E。在適當(dāng)?shù)娜軇?例如1,4-二噁烷)中，使用適當(dāng)?shù)脑噭?例如鹽酸)水解該2-甲氧基吡啶部分，得到式(I)化合物。反應(yīng)式2：式(I)化合物的合成，其中L為亞烷基(其中n為0-6，m為0-6且m+n＝0-6)。實(shí)驗(yàn)以下指引適用于本文所述的全部實(shí)驗(yàn)操作。除非另外提及，否則所有反應(yīng)是在正氮?dú)鈮合?，使用烘干的玻璃器具進(jìn)行的。所指定的溫度是外部的(即浴溫度)且是近似的。通過注射器轉(zhuǎn)移對(duì)空氣和濕度敏感的液體。試劑按原樣使用。所用的溶劑是那些供應(yīng)商標(biāo)注為“無(wú)水”的溶劑。溶液中的試劑所標(biāo)注的摩爾濃度是近似的且使用前并未相對(duì)于相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行滴定。除非另外提及，否則所有的反應(yīng)是通過攪拌棒進(jìn)行攪拌的。除非另外提及，否則加熱是使用含有硅油的加熱浴進(jìn)行的。反應(yīng)是使用配有Biotage微波EXP小瓶(0.2–20mL)和隔墊和瓶蓋的BiotageInitiatorTM2.0，用微波輻射(0–400W，2.45GHz)進(jìn)行的?；谌軇┖碗x子電荷所使用的輻射水平(即高、正常、低)是基于供應(yīng)商的說(shuō)明。使用干冰/丙酮或干冰/2-丙醇將溫度冷卻至-70℃以下。用作干燥劑的硫酸鎂和硫酸鈉是無(wú)水級(jí)別的且可互換使用。被描述為“真空”或“減壓下”除去的溶劑是通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)完成的。制備型正相硅膠色譜是使用以下進(jìn)行的：配有RediSep或ISCOGold硅膠柱(4g-330g)的TeledyneISCOCombiFlashCompanion儀器或配有SF25硅膠柱(4g–3-00g)的AnalogixIF280儀器或配有HP硅膠柱(10g–100g)的BiotageSP1儀器。除非另外提及，否則反相HPLC純化是使用YMC-pack柱(ODS-A75x30mm)作為固相進(jìn)行的。除非另外提及，否則使用25mL/minA(乙腈-0.1％TFA):B(水-0.1％TFA)的移動(dòng)相，10-80％梯度A(10min)，在214nM處進(jìn)行UV檢測(cè)。PESciexAPI150單四極桿質(zhì)譜儀(PESciex，Thornhill，Ontario，Canada)是陽(yáng)離子檢測(cè)模式下，使用電噴霧電離進(jìn)行操作。該霧化氣體產(chǎn)生自零空氣發(fā)生器(BalstonInc.，Haverhill，MA，USA)并以65psi遞送，而所述氣簾氣(curtaingas)是以50psi從Dewar液氮容器中遞送的高純氮。施加到電噴霧針上的電壓是4.8kV。室口(orifice)設(shè)定在25V且質(zhì)譜儀以0.5掃描/秒的速率進(jìn)行掃描，其使用0.2amu的步幅質(zhì)量并收集分布數(shù)據(jù)。方法A，LCMS。使用配有Hamilton10uL注射器(其執(zhí)行向Valco10通進(jìn)樣閥的注入)的CTCPAL自動(dòng)采樣器(LEAPTechnologies，Carrboro，NC)，將樣品送入該質(zhì)譜儀。所述HPLC泵是ShimadzuLC-10ADvp(ShimadzuScientificInstruments，Columbia，MD)，其以0.3mL/min和在3.2分鐘內(nèi)由4.5％A至90％B的線性梯度，然后保持0.4分鐘。流動(dòng)相由容器A中的100％(H2O0.02％TFA)和容器B中的100％(CH3CN0.018％TFA)組成。固定相是Aquasil(C18)且柱尺寸為1mmx40mm。檢測(cè)是由214nm處的UV、蒸發(fā)光散射(ELSD)和MS進(jìn)行的。方法B，LCMS?；蛘撸褂镁哂蠰C/MS的Agilent1100分析型HPLC系統(tǒng)并在1mL/min和在2.2分鐘內(nèi)由5％A至100％B的線性梯度，然后保持0.4min。流動(dòng)相由容器A中的100％(H2O0.02％TFA)和容器B中的100％(CH3CN0.018％TFA)組成。固定相是具有3.5um顆粒尺寸的Zobax(C8)且柱尺寸為2.1mmx50mm。檢測(cè)是由214nm處的UV、蒸發(fā)光散射(ELSD)和MS進(jìn)行的。方法C，LCMS。或者，使用配有毛細(xì)管柱(50×4.6mm，5μm)的MDSSCIEXAPI2000。HPLC是在配有柱ZorbaxSB-C18(50×4.6mm，1.8μm)的Agilent-1200系列UPLC系統(tǒng)上進(jìn)行的，其用CH3CN:醋酸銨緩沖液進(jìn)行洗脫。該反應(yīng)是在微波(CEM，Discover)中進(jìn)行的。1H-NMR譜在400MHz進(jìn)行記錄，其使用BrukerAVANCE400MHz儀器，配有ACDSpectmanagerv.10用于再處理。所指代的多重性為：s＝單峰，d＝雙峰，t＝三重峰，q＝四重峰，quint＝五重峰，sxt＝六重峰，m＝多重峰，dd＝雙二重峰，dt＝雙三重峰等和br表示寬信號(hào)。除非另外提及，否則所有NMR是在DMSO-d6中進(jìn)行。分析型HPLC：產(chǎn)物用以下進(jìn)行分析，Agilent1100分析型色譜系統(tǒng)，具有4.5x75mmZorbaxXDB-C18柱(3.5um)，梯度為在4分鐘內(nèi)從5％CH3CN(0.1％甲酸)至95％CH3CN(0.1％甲酸)的H2O溶液(0.1％甲酸)以2mL/min進(jìn)行，并且接著保持1min。實(shí)施例的制備實(shí)施例1：(E)-2-氯-4-異丙基-12-甲基-9,10,15,16-四氫-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮雜環(huán)十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-14,17(6H,13H)-二酮4-(丁-3-烯-1-基)-2-甲氧基-6-甲基吡啶-3-甲腈的制備，在-78℃，向2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-甲腈(1.5g，9.25mmol)在四氫呋喃(40mL)中的溶液中加入雙(三甲基甲硅烷基)氨基鋰(10.17mL，10.17mmol)并將該混合物在-78℃攪拌1小時(shí)。加入3-溴丙-1-烯(0.880mL，10.17mmol)并將該混合物在-78℃攪拌1小時(shí)并歷時(shí)1小時(shí)溫?zé)嶂?℃。然后將該混合物在0℃攪拌3小時(shí)。將該反應(yīng)用飽和NH4Cl水溶液淬滅并用EtOAc(3x)萃取。將該合并的有機(jī)物用Na2SO4干燥并濃縮。將該殘余物使用反相HPLC純化，其使用Trilution軟件，以及phenomenexGemini5uC18(2)100A，AXIA30x100mm5micron，運(yùn)行10-分鐘(30mL/min，40％ACN/H2O(0.1％甲酸)至80％ACN/H2O(0.1％甲酸))，在254nm處進(jìn)行UV檢測(cè)，得到4-(丁-3-烯-1-基)-2-甲氧基-6-甲基吡啶-3-甲腈(1.01g，54％)，其為淡黃色油。LC-MS(ES)m/z＝203[M+H]+。(4-(丁-3-烯-1-基)-2-甲氧基-6-甲基吡啶-3-基)甲胺的制備，在0℃，向4-(丁-3-烯-1-基)-2-甲氧基-6-甲基吡啶-3-甲腈(700mg，3.46mmol)在二乙醚(15mL)中的溶液中加入LAH(2M在THF中，3.46mL，6.92mmol)并將該混合物緩慢溫?zé)嶂潦覝夭⒃谑覝財(cái)嚢?小時(shí)。將該混合物用冰浴冷卻并用最小量的水淬滅(直至不再有氫氣產(chǎn)生)。將該混合物用DCM處理并過濾并將殘余物用DCM:MeOH(10:1)洗滌。將合并的有機(jī)相濃縮并將殘余物使用柱色譜(硅膠，在DCM中的0-13％MeOH)純化，得到(4-(丁-3-烯-1-基)-2-甲氧基-6-甲基吡啶-3-基)甲胺(604mg，85％)，其為淡黃色油。LC-MS(ES)m/z＝190(主要)207[M+H]+(次要)。3-烯丙基-6-氯-1H-吲哚-4-甲酸甲酯的制備，向6-氯-1H-吲哚-4-甲酸甲酯(1000mg，4.77mmol)在四氫呋喃(20mL)中的溶液中加入烯丙醇(0.324mL，4.77mmol)并將該混合物通過鼓入氮?dú)饷摎?分鐘。加入三乙基硼烷(1.431mL，1.431mmol)和四(三苯基膦)鈀(0)(276mg，0.239mmol)并將該混合物加熱至75℃并在75℃攪拌18小時(shí)。將該混合物濃縮并將殘余物使用柱色譜(硅膠，在己烷中的0-70％EtOAc)純化，得到3-烯丙基-6-氯-1H-吲哚-4-甲酸甲酯(714mg，60％)，其為白色固體。LC-MS(ES)m/z＝250[M+H]+。3-烯丙基-6-氯-1-異丙基-1H-吲哚-4-甲酸甲酯的制備，向3-烯丙基-6-氯-1H-吲哚-4-甲酸甲酯(700mg，2.80mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的溶液中加入氫化鈉(60wt％的礦物油中的分散體，168mg，4.21mmol)并將該混合物在0℃攪拌30分鐘。加入2-碘丙烷(620mg，3.64mmol)并將該反應(yīng)在室溫?cái)嚢?8小時(shí)。將該混合物用10％NH4Cl水溶液淬滅并用EtOAc(3x)萃取。將該合并的有機(jī)物干燥(Na2SO4)并濃縮，將殘余物使用柱色譜純化(硅膠，在己烷中的0-60％EtOAc)，得到3-烯丙基-6-氯-1-異丙基-1H-吲哚-4-甲酸甲酯(550mg，67％)，其為白色固體。LC-MS(ES)m/z＝292[M+H]+。3-烯丙基-6-氯-1-異丙基-1H-吲哚-4-甲酸的制備，向3-烯丙基-6-氯-1-異丙基-1H-吲哚-4-甲酸甲酯(500mg，1.714mmol)在甲醇(8mL)中的溶液中加入氫氧化鈉水溶液(6M，1.428mL，8.57mmol)并將該混合物在室溫?cái)嚢?8小時(shí)。將該混合物濃縮以除去甲醇并將所得水溶液使用1NHCl酸化至pH3，然后用DCM(3x)萃取。將該合并的有機(jī)物用Na2SO4干燥并濃縮，得到3-烯丙基-6-氯-1-異丙基-1H-吲哚-4-甲酸(445mg，93％)，其為白色固體。LC-MS(ES)m/z＝278[M+H]+。3-烯丙基-N-((4-(丁-3-烯-1-基)-2-甲氧基-6-甲基吡啶-3-基)甲基)-6-氯-1-異丙基-1H-吲哚-4-甲酰胺的制備，向3-烯丙基-6-氯-1-異丙基-1H-吲哚-4-甲酸(442mg，1.591mmol)在二甲基亞砜(8mL)中的溶液中加入(4-(丁-3-烯-1-基)-2-甲氧基-6-甲基吡啶-3-基)甲胺(345mg，1.671mmol)、EDC(610mg，3.18mmol)和N-甲基嗎啉(0.875mL，7.96mmol)并將該混合物在室溫?cái)嚢?8小時(shí)。將該混合物用水淬滅并用EtOAc(3x)萃取。將該合并的有機(jī)物用Na2SO4干燥并濃縮。將該殘余物使用柱色譜(硅膠，在己烷中0-100％EtOAc)純化，得到3-烯丙基-N-((4-(丁-3-烯-1-基)-2-甲氧基-6-甲基吡啶-3-基)甲基)-6-氯-1-異丙基-1H-吲哚-4-甲酰胺(550mg，74％)，其為白色固體。LC-MS(ES)m/z＝466[M+H]+。(E)-2-氯-4-異丙基-14-甲氧基-12-甲基-9,10,15,16-四氫-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮雜環(huán)十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-17(6H)-酮和(Z)-2-氯-4-異丙基-14-甲氧基-12-甲基-9,10,15,16-四氫-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮雜環(huán)十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-17(6H)-酮的制備，向3-烯丙基-N-((4-(丁-3-烯-1-基)-2-甲氧基-6-甲基吡啶-3-基)甲基)-6-氯-1-異丙基-1H-吲哚-4-甲酰胺(200mg，0.429mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中加入Grubbs二代催化劑(36.4mg，0.043mmol)并將該混合物在氮?dú)夥障禄亓鲾嚢?小時(shí)。將該混合物稀釋并過濾。將該濾液濃縮并將殘余物使用反相HPLC純化，其使用Trilution軟件，以及phenomenexGemini5uC18(2)100A，AXIA30x100mm5micron，運(yùn)行10-分鐘(30mL/min，50％ACN/H2O(0.1％TFA)至85％ACN/H2O(0.1％TFA))，在254nm處進(jìn)行UV檢測(cè)，得到(E)-2-氯-4-異丙基-14-甲氧基-12-甲基-9,10,15,16-四氫-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮雜環(huán)十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-17(6H)-酮(46mg，24％)，其為白色固體。LC-MS(ES)m/z＝438[M+H]+。還分離出(Z)-2-氯-4-異丙基-14-甲氧基-12-甲基-9,10,15,16-四氫-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮雜環(huán)十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-17(6H)-酮(21mg，11％)，其為白色固體LC-MS(ES)m/z＝438[M+H]+。(E)-2-氯-4-異丙基-12-甲基-9,10,15,16-四氫-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮雜環(huán)十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-14,17(6H,13H)-二酮的制備，向(E)-2-氯-4-異丙基-14-甲氧基-12-甲基-9,10,15,16-四氫-4H-苯并[11,12][1]氮雜環(huán)十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-17(6H)-酮(15mg，0.034mmol)在1,4-二噁烷(2mL)中的溶液中加入HCl的1,4-二噁烷溶液(4M，500μl，2.000mmol)并將該混合物在70℃攪拌20小時(shí)。將該混合物濃縮并將殘余物使用反相HPLC純化，其使用Trilution軟件，以及phenomenexGemini5uC18(2)100A，AXIA30x100mm5micron，運(yùn)行10-分鐘(30mL/min，40％ACN/H2O(0.1％甲酸)至80％ACN/H2O(0.1％甲酸))，在254nm處進(jìn)行UV檢測(cè)，得到(E)-2-氯-4-異丙基-12-甲基-9,10,15,16-四氫-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮雜環(huán)十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-14,17(6H,13H)-二酮(12mg)，其為白色固體。LC-MS(ES)m/z＝424[M+H]+。1HNMR(600MHz，DMSO-d6)δppm1.39(d，J＝6.80Hz，6H)2.11(s，3H)2.17(br.s.，2H)2.54(br.s.，2H)3.28(br.s.，2H)4.21(br.s.，2H)4.70-4.81(m，1H)5.13(br.s.，2H)5.83(s，1H)7.00(s，1H)7.37(s，1H)7.61-7.75(m，1H)8.08(br.s.，1H)11.27(s，1H)。實(shí)施例2:(Z)-2-氯-4-異丙基-12-甲基-9,10,15,16-四氫-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮雜環(huán)十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-14,17(6H,13H)-二酮，向(Z)-2-氯-4-異丙基-14-甲氧基-12-甲基-9,10,15,16-四氫-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮雜環(huán)十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-17(6H)-酮(18mg，0.041mmol)在1,4-二噁烷(2mL)中的溶液中加入HCl的1,4-二噁烷溶液(4M，500μl，2.000mmol)并將該混合物在70℃攪拌20小時(shí)。將該混合物濃縮并將殘余物用CH3CN洗滌并在真空干燥，得到(Z)-2-氯-4-異丙基-12-甲基-9,10,15,16-四氫-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮雜環(huán)十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-14,17(6H,13H)-二酮(17mg)，其為灰白色固體。LC-MS(ES)m/z＝424[M+H]+。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δppm1.44(dJ＝7.05Hz，6H)2.12(s，3H)2.32-2.42(m，2H)2.84(t，J＝6.95Hz，2H)3.45(d，J＝5.56Hz，2H)4.43(d，J＝5.31Hz，2H)4.69-4.80(m，1H)5.07-5.21(m，2H)5.98(s，1H)7.01(d，J＝1.52Hz，1H)7.42(s，1H)7.65(d，J＝1.77Hz，1H)8.28(t，J＝5.43Hz，1H)11.48(br.s.，1H)。實(shí)施例3:2-氯-4-異丙基-12-甲基-7,8,9,10,15,16-六氫-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮雜環(huán)十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-14,17(6H,13H)-二酮2-氯-4-異丙基-14-甲氧基-12-甲基-7,8,9,10,15,16-六氫-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮雜環(huán)十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-17(6H)-酮的制備，將(E)-2-氯-4-異丙基-14-甲氧基-12-甲基-9,10,15,16-四氫-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮雜環(huán)十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-17(6H)-酮(30mg，0.068mmol)在乙酸乙酯(2mL)中的溶液通過鼓入氮?dú)饷摎?0分鐘。加入Pt/C(5wt％，8mg)并將該溶液用氫氣吹掃5分鐘，然后在氫氣氣氛(氣球)下攪拌1小時(shí)。將該混合物過濾并將濾液濃縮，得到2-氯-4-異丙基-14-甲氧基-12-甲基-7,8,9,10,15,16-六氫-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮雜環(huán)十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-17(6H)-酮(28mg，93％)，其為灰白色固體。LC-MS(ES)m/z＝440[M+H]+。2-氯-4-異丙基-12-甲基-7,8,9,10,15,16-六氫-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮雜環(huán)十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-14,17(6H,13H)-二酮的制備，向2-氯-4-異丙基-14-甲氧基-12-甲基-7,8,9,10,15,16-六氫-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮雜環(huán)十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-17(6H)-酮(26mg，0.059mmol)在1,4-二噁烷(2mL)中的溶液中加入HCl的1,4-二噁烷溶液(4M，500μl，2.000mmol)并將該混合物在70℃攪拌20小時(shí)。將該混合物濃縮并將殘余物用CH3CN洗滌并真空干燥，得到2-氯-4-異丙基-12-甲基-7,8,9,10,15,16-六氫-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮雜環(huán)十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-14,17(6H,13H)-二酮(25mg)，其為灰白色固體。LC-MS(ES)m/z＝426[M+H]+。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δppm1.25(br.s.，2H)1.35-1.43(m，8H)1.74-1.82(m，2H)2.12(s，3H)2.54-2.62(m，2H)2.82(t，J＝6.57Hz，2H)4.50(d，J＝5.56Hz，2H)4.66-4.79(m，1H)5.93(s，1H)6.97(d，J＝1.77Hz，1H)7.34(s，1H)7.62(d，J＝1.77Hz，1H)8.54(t，J＝5.56Hz，1H)11.46(s，1H)實(shí)施例4:(E)-4-異丙基-12-甲基-2-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-9,10,15,16-四氫-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮雜環(huán)十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-14,17(6H,13H)-二酮3-烯丙基-6-溴-1H-吲哚-4-甲酸甲酯的制備向6-溴-1H-吲哚-4-甲酸甲酯(700mg，2.76mmol)在THF(12mL)中的溶液中加入烯丙醇(0.187mL，2.76mmol)，將該混合物通過鼓入氮?dú)饷摎?分鐘。加入Pd(PPh3)4(159mg，0.138mmol)和三乙基硼烷(1M，THF，0.827mL，0.827mmol)并將該混合物加熱至75℃并攪拌7小時(shí)。將該混合物濃縮并將殘余物使用柱色譜純化(硅膠，0-60％EtOAc在己烷中)，得到3-烯丙基-6-溴-1H-吲哚-4-甲酸甲酯(535mg，66％)，其為白色固體。LC-MS(ES)m/z＝293.9，295.9[M+H]+。3-烯丙基-6-溴-1-異丙基-1H-吲哚-4-甲酸甲酯的制備向3-烯丙基-6-溴-1H-吲哚-4-甲酸甲酯(530mg，1.802mmol)在DMF(10mL)中的溶液中加入NaH(60％的礦物油中的分散物，108mg，2.70mmol)并將該混合物在0℃攪拌30min。加入2-碘丙烷(0.234mL，2.342mmol)并將該反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?8小時(shí)。將該混合物用10％NH4Cl水溶液淬滅并用EtOAc(3x)萃取。將該合并的有機(jī)物用Na2SO4干燥并濃縮。將該殘余物使用柱色譜(硅膠，在己烷中的0-60％EtOAc)純化，得到3-烯丙基-6-溴-1-異丙基-1H-吲哚-4-甲酸甲酯(440mg，73％)，其為淡黃色油。LC-MS(ES)m/z＝336.0，338.1[M+H]+。3-烯丙基-6-溴-1-異丙基-1H-吲哚-4-甲酸的制備向3-烯丙基-6-溴-1-異丙基-1H-吲哚-4-甲酸甲酯(440mg，1.309mmol)在MeOH(6mL)中的溶液中加入NaOH水溶液(5M，1.091mL，6.54mmol)并將該混合物在室溫?cái)嚢?8小時(shí)。將該混合物濃縮以除去MeOH并將所得水溶液使用HCl水溶液(1N)酸化至pH3，然后用DCM(3x)萃取。將該合并的有機(jī)物用Na2SO4干燥并濃縮，得到3-烯丙基-6-溴-1-異丙基-1H-吲哚-4-甲酸(395mg，94％)，其為淡黃色固體。LC-MS(ES)m/z＝322.0，324.0[M+H]+。3-烯丙基-6-溴-N-((4-(丁-3-烯-1-基)-2-甲氧基-6-甲基吡啶-3-基)甲基)-1-異丙基-1H-吲哚-4-甲酰胺的制備向3-烯丙基-6-溴-1-異丙基-1H-吲哚-4-甲酸(390mg，1.210mmol)在DMSO(6mL)中的溶液中加入(4-(丁-3-烯-1-基)-2-甲氧基-6-甲基吡啶-3-基)甲胺(250mg，1.210mmol)、N-甲基嗎啉(0.798mL，7.26mmol)、EDC(464mg，2.421mmol)和HOAt(330mg，2.421mmol)并將該混合物在室溫?cái)嚢?8小時(shí)。將該混合物用水淬滅并用EtOAc(3x)萃取。將該合并的有機(jī)物用Na2SO4干燥并濃縮。將該殘余物使用柱色譜(硅膠，在己烷中的0-100％EtOAc)純化，得到3-烯丙基-6-溴-N-((4-(丁-3-烯-1-基)-2-甲氧基-6-甲基吡啶-3-基)甲基)-1-異丙基-1H-吲哚-4-甲酰胺(530mg，86％)，其為灰白色固體。LC-MS(ES)m/z＝510.2，512.2[M+H]+。(E)-2-溴-4-異丙基-14-甲氧基-12-甲基-9,10,15,16-四氫-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮雜環(huán)十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-17(6H)-酮的制備將3-烯丙基-6-溴-N-((4-(丁-3-烯-1-基)-2-甲氧基-6-甲基吡啶-3-基)甲基)-1-異丙基-1H-吲哚-4-甲酰胺(360mg，0.705mmol)在DCM(30mL)中的溶液通過鼓入氮?dú)膺M(jìn)行脫氣5分鐘。加入Grubbs一代催化劑(32mg，0.038mmol)并將該反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)。將該混合物濃縮并將殘余物使用柱色譜(硅膠，在己烷中的0-80％EtOAc)純化，得到(E)-2-溴-4-異丙基-14-甲氧基-12-甲基-9,10,15,16-四氫-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮雜環(huán)十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-17(6H)-酮(178mg，52％)，其為白色固體。LC-MS(ES)m/z＝482.1，484.1[M+H]+。(E)-4-(5-(4-異丙基-14-甲氧基-12-甲基-17-氧代-6,9,10,15,16,17-六氫-4H-吡啶并[4’,3’:11,12][1]氮雜環(huán)十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-2-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯的制備向10mL微波管中加入(E)-2-溴-4-異丙基-14-甲氧基-12-甲基-9,10,15,16-四氫-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮雜環(huán)十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-17(6H)-酮(80mg，0.166mmol)、4-(5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(84mg，0.216mmol)、DME(2mL)、水(0.667mL)和Na2CO3水溶液(2M，0.083mL，0.166mmol)并將該混合物通過鼓入氮?dú)膺M(jìn)行脫氣5分鐘。加入PdCl2(dppf)-DCM(10.83mg，0.013mmol)并將該管密封。將該混合物在140℃微波反應(yīng)器中加熱20min。將該混合物濃縮并將該殘余物溶于MeOH中并過濾。將該濾液使用反相HPLC純化，其使用Trilution軟件，Gemini5uC18110A，AXIA30x50mm5micron，運(yùn)行10-分鐘(30mL/min，45％ACN/H2O(0.1％NH4OH)至80％ACN/H2O(0.1％NH4OH))，在254nm處進(jìn)行UV檢測(cè)，得到(E)-4-(5-(4-異丙基-14-甲氧基-12-甲基-17-氧代-6,9,10,15,16,17-六氫-4H-吡啶并[4’,3’:11,12][1]氮雜環(huán)十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-2-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(67mg。61％)，其為灰白色固體。LC-MS(ES)m/z＝665.5[M+H]+(次要)，305.3(主要)。(E)-4-異丙基-12-甲基-2-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-9,10,15,16-四氫-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮雜環(huán)十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-14,17(6H,13H)-二酮二鹽酸鹽的制備向(E)-4-(5-(4-異丙基-14-甲氧基-12-甲基-17-氧代-6,9,10,15,16,17-六氫-4H-吡啶并[4’,3’:11,12][1]氮雜環(huán)十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-2-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(64mg，0.096mmol)在1,4-二噁烷(3mL)中的溶液中加入HCl(4M在1,4-二噁烷中，0.6mL，2.400mmol)并將該混合物在70℃攪拌20小時(shí)。將該混合物濃縮并將殘余物使用反相HPLC純化，其使用Trilution軟件，phenomenexGemini5uC18(2)100A，AXIA30x100mm5micron，運(yùn)行10-分鐘(30mL/min，20％ACN/H2O(0.1％甲酸)至80％ACN/H2O(0.1％甲酸))，在254nm處進(jìn)行UV檢測(cè)，得到(E)-4-異丙基-12-甲基-2-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-9,10,15,16-四氫-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮雜環(huán)十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-14,17(6H,13H)-二酮二鹽酸鹽(39mg，64％)，其為灰白色固體。LC-MS(ES)m/z＝551.3[M+H]+(次要)，276.2(主要)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ:1.44(d，J＝6.4Hz，6H)，2.15(s，3H)，2.17–2.25(m，2H)，2.54–2.64(m，3H),3.22–3.37(m，6H)，3.88–4.02(m，5H)，4.20–4.34(m，1H)，4.85-4.96(m，1H)，5.10–5.23(m，2H)，5.94(s，1H)，7.28-7.36(m，2H)，7.39(s，1H)，7.89(s，1H)，8.16–8.20(m，1H)，8.28–8.40(m，1H)，8.50–8.53(m，1H)，9.44(br.s.，2H)，11.49(br.s.，1H)。實(shí)施例5.(E)-4-異丙基-12-甲基-14,17-二氧代-6,9,10,13,14,15,16,17-八氫-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮雜環(huán)十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-2-甲腈向10mL可密封管中加入(E)-2-溴-4-異丙基-12-甲基-9,10,15,16-四氫-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮雜環(huán)十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-14,17(6H,13H)-二酮(50mg，0.107mmol)、氰化鋅(14.41mg，0.123mmol)、DMF(1mL)、dppf(7.69mg，0.014mmol)、鋅(1.745mg，0.027mmol)和Pd2(dba)3(12.71mg，0.014mmol)并將該混合物通過鼓入氮?dú)膺M(jìn)行脫氣。將該管密封并將該混合物在120℃加熱6小時(shí)。將該混合物濃縮并將殘余物用DMSO處理并過濾。將該濾液使用反相HPLC純化，其使用Trilution軟件，phenomenexGemini5uC18(2)100A，AXIA30x100mm5micron，運(yùn)行10-分鐘(30mL/min，38％ACN/H2O(0.1％甲酸)至78％ACN/H2O(0.1％甲酸))，在254nm處UV檢測(cè)，得到(E)-4-異丙基-12-甲基-14,17-二氧代-6,9,10,13,14,15,16,17-八氫-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮雜環(huán)十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-2-甲腈(15mg，33％)的產(chǎn)物，其為灰白色固體。LC-MS(ES)m/z＝415.2[M+H]+。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ:1.43(d，J＝6.6Hz，6H)，2.12(s，3H)，2.18(br.s.，2H)，2.54-2.62(m，2H)，3.30-3.33(m，2H)，4.09-4.35(m，2H)，4.87(quin.，J＝6.6Hz，1H)，5.03-5.21(m，2H)，5.84(s，1H)，7.32(d，J＝1.3Hz，1H)，7.68(s，1H)，8.21(d，J＝1.3Hz，2H)，11.29(s，1H)。實(shí)施例6:(E)-2-(3-羥基-3-甲基丁-1-炔-1-基)-4-異丙基-12-甲基-9,10,15,16-四氫-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮雜環(huán)十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-14,17(6H,13H)-二酮向10mL微波管中加入(E)-2-溴-4-異丙基-12-甲基-9,10,15,16-四氫-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮雜環(huán)十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-14,17(6H,13H)-二酮(70mg，0.090mmol)、NaI(2.69mg，0.018mmol)、鋅(1.172mg，0.018mmol)、DMSO(2mL)和DBU(0.014mL，0.090mmol)并將該混合物通過鼓入氮?dú)饷摎?分鐘。加入2-甲基丁-3-炔-2-醇(37.7mg，0.448mmol)和Pd(PPh3)4(10.36mg，8.97μmol)并將該管密封。將該混合物在85℃攪拌3小時(shí)。將該混合物冷卻并過濾。將該濾液使用反相HPLC純化，其使用Trilution軟件，phenomenexGemini5uC18(2)100A，AXIA30x100mm5micron，運(yùn)行10-分鐘(30mL/min，35％ACN/H2O(0.1％甲酸)至70％ACN/H2O(0.1％甲酸))，在254nm處UV檢測(cè)，得到(E)-2-(3-羥基-3-甲基丁-1-炔-1-基)-4-異丙基-12-甲基-9,10,15,16-四氫-4H-吡啶并[4',3':11,12][1]氮雜環(huán)十三烯并[5,4,3-cd]吲哚-14,17(6H,13H)-二酮(13mg，30％)，其為灰白色固體。LC-MS(ES)m/z＝472.3[M+H]+。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ:1.40(d，J＝6.8Hz，6H)，1.50(s，6H)，2.11(s，3H)，2.18(br.s.，2H)，2.55(br.s.，2H)，3.29(br.s.，2H)，4.22(br.s.，2H)，4.78(quin.，J＝6.6Hz，1H)，5.08-5.22(m，2H)，5.46(s，1H)，5.84(s，1H)，7.01(d，J＝1.0Hz，1H)，7.41(s，1H)，7.60(d，J＝1.3Hz，1H)，8.01(br.s.，1H)，11.30(s，1H)。測(cè)定方案評(píng)估本文包含的化合物抑制PRC2復(fù)合物中EZH2的甲基轉(zhuǎn)移酶活性的能力。人PRC2復(fù)合物是通過如下制備的：在Sf9細(xì)胞中共表達(dá)5個(gè)成員蛋白(FLAG-EZH2、EED、SUZ12、RbAp48、AEBP2)的每一個(gè)，然后共純化。酶活性是通過閃爍迫近分析法(SPA)測(cè)定的，其中將氚代甲基從3H-SAM轉(zhuǎn)移至單核小體(mononucleosome)的組蛋白H3上的賴氨酸殘基上，所述單核小體是從HeLa細(xì)胞純化得到的。單核小體在SPA珠上被捕獲并將所得信號(hào)在ViewLux讀板器上讀取。部分A.化合物的制備1.將固體溶于100％DMSO中制備10mM化合物儲(chǔ)備液。2.在384孔板上，將各測(cè)試化合物溶于100％DMSO以建立11個(gè)點(diǎn)的連續(xù)稀釋(1:3稀釋，最高濃度10mM)，第6欄和第18欄為DMSO對(duì)照。3.將100nL化合物從稀釋板分配至反應(yīng)板(GrenierBio-One，384孔，Cat#784075)。部分B.試劑的制備制備以下溶液：1.50mMTris-HCl，pH8：每1L堿緩沖液，混合1MTris-HCl(pH8)(50mL)和蒸餾水(950mL)。2.1x測(cè)試緩沖液：每10mL1x測(cè)試緩沖液，混合50mMTris-HCl(pH8)(9958uL)，1MMgCl2(20uL)，2MDTT(20uL)和10％吐溫-20(2uL)以提供50mMTris-HCl(pH8)、2mMMgCl2、4mMDTT、0.002％吐溫-20的最終濃度。3.2x酶溶液：每10mL2x酶溶液，混合1x測(cè)試緩沖液和PRC2復(fù)合物以提供10nM的最終酶濃度。4.SPA珠混懸液：每1mL的SPA珠混懸液，混合PS-PEI涂覆的LEADSeeker珠子(40mg)和ddH2O(1mL)，以提供40mg/mL的最終濃度。5.2x底物溶液：每10mL2x底物溶液，混合1x測(cè)試緩沖液(9728.55uL)，800ug/mL單核小體(125uL)，1mM冷的SAM(4uL)和7.02uM3H-SAM(142.45uL；0.55mCi/mL)以提供5ug/mL核小體、0.2uM冷的SAM和0.05uM3H-SAM的最終濃度。6.2.67x淬滅/珠子混合物：每10mL2.67x淬滅/珠子混合物，混合ddH2O(9358uL)，10mM冷的SAM(267uL)，40mg/mL珠子混懸液(375uL)以提供100uM冷的SAM和0.5mg/mLSPA珠子的最終濃度。部分C.在384孔GrenierBio-One板上的測(cè)試反應(yīng)化合物的添加1.以100nL/孔將100x化合物分配至測(cè)試孔中(如上所述)。2.以100nL/孔將100％DMSO分配至第6和18欄，分別用于高對(duì)照和低對(duì)照。測(cè)定1.以5uL/孔將1x測(cè)試緩沖液分配至第18欄(低對(duì)照反應(yīng))。2.以5uL/孔將2x酶溶液分配至第1-17、19-24欄。3.以500rpm旋轉(zhuǎn)該測(cè)試板約1分鐘。4.堆疊該測(cè)試板，覆蓋最頂端的板。5.在室溫，用該酶培養(yǎng)該化合物/DMSO30分鐘。6.以5uL/孔將2x底物溶液分配至第1-24欄。7.以500rpm旋轉(zhuǎn)該測(cè)試板約1分鐘。8.堆疊該測(cè)試板，覆蓋最頂端的板。9.在室溫培養(yǎng)該測(cè)試板1小時(shí)。淬滅/珠子的添加1.以5uL/孔將3x淬滅/珠混合物分配至第1-24欄。2.用粘性TopSeal密封各測(cè)試板的頂部。3.以500rpm旋轉(zhuǎn)該測(cè)試板約1分鐘。4.使該板保持平衡>20min。讀板1.在Viewlux讀板器上讀取測(cè)試板，其采用613nm的發(fā)射濾波器，讀取時(shí)間為300秒。試劑的加入可采取手動(dòng)或用自動(dòng)液體處理器。*該測(cè)試中的最終DMSO濃度為1％。*陽(yáng)性對(duì)照是在第6欄；陰性對(duì)照是在第18欄。*化合物的最終起始濃度為100μM。結(jié)果抑制百分比是由各化合物濃度相對(duì)于DMSO對(duì)照計(jì)算的并將所得值使用ABASE數(shù)據(jù)擬合軟件包內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)IC50擬合參數(shù)進(jìn)行擬合。本發(fā)明示例性的化合物通常根據(jù)上述或類似的測(cè)定進(jìn)行測(cè)試且被發(fā)現(xiàn)是EZH2的抑制劑。該IC50值的范圍是約40nM至約500nM。根據(jù)本文所示測(cè)試測(cè)定的具體生物活性列于下表。重復(fù)該測(cè)試流程可得到略有不同的IC50值。實(shí)施例EZH2IC50(nM)1402316350043251586200當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3