本文披露內(nèi)容屬于藥物和化學(xué)科學(xué)領(lǐng)域。本文披露內(nèi)容涉及由式I表示的吡咯并喹啉醌(PQQ)和/或其鹽的多晶型形式。

其中“n”和“m”選自由(a)“n”＝3，“m”＝0和(b)“n”＝1，“m”＝2組成的組；并且

R3為Na⁺。

本文披露內(nèi)容還涉及用于制備式I的化合物的多晶型形式的方法、包含式I的化合物的多晶型形式的組合物及其用途。

背景技術(shù)：

吡咯并喹啉醌(PQQ)是一種天然產(chǎn)物并且被歸為必需的微量營(yíng)養(yǎng)素和膳食補(bǔ)充品，因?yàn)槠湓诰€粒體生物發(fā)生學(xué)中起關(guān)鍵作用。PQQ也被稱為吡咯喹啉醌(methoxatin)。在許多應(yīng)用中，PQQ的主要用途是保護(hù)線粒體免受氧化應(yīng)激，提供神經(jīng)保護(hù)和心臟保護(hù)。PQQ的常見食物來(lái)源為西芹、青椒、綠茶、番木瓜、獼猴桃、乳品和豆腐。然而，食品來(lái)源中可獲得的PQQ濃度僅為皮摩爾(pM)至納摩爾(nM)水平。這使得有必要開發(fā)能夠產(chǎn)生大量PQQ及其鹽的化學(xué)工藝。

在文獻(xiàn)中(J.Am.Chem.Soc.103(1981),5599-5600；Helv,Chem,Acta 76(1993),1667；WO2006/102642A1、JP 7-113024 A)很少有報(bào)道通過化學(xué)方法生產(chǎn)PQQ為游離酸及其鹽。然而，合成涉及大量的步驟(9-10步)并且高級(jí)中間體和最終產(chǎn)物的分離進(jìn)一步涉及繁瑣的后處理程序。

幾個(gè)研究團(tuán)隊(duì)已經(jīng)報(bào)道了具有或不具有金屬鹽的不同PQQ的多晶型物以及制備PQQ多晶型物的方法。多晶型現(xiàn)象是固態(tài)的化學(xué)品/藥物化合物以具有相同的化學(xué)組成與改變的物理性質(zhì)和各種各樣的生物學(xué)應(yīng)用的不同結(jié)晶形式存在的能力。對(duì)治療上重要的化學(xué)分子的新的多晶型形式的鑒定在藥物開發(fā)過程中是重要的步驟。

最近，Junichi EDAHIRO等人(US 20120116087 A1)報(bào)道了PQQ二鈉鹽和三鈉鹽的確定的晶體結(jié)構(gòu)。然而，最終的分離涉及使用有機(jī)溶劑。此外，已知醇類溶劑會(huì)與PQQ形成加合物。

因此，能夠看到對(duì)于獲得吡咯并喹啉醌(PQQ)鹽的更好的且更簡(jiǎn)單的合成途徑存在巨大的需求。本文披露內(nèi)容的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷并由高級(jí)中間體通過具有最少步驟的改進(jìn)的、成本有效的且可規(guī)模化的合成途徑來(lái)提供PQQ及其鹽的穩(wěn)定結(jié)晶形式。

附圖說(shuō)明

根據(jù)以下描述并結(jié)合附圖將使得本文披露內(nèi)容的特征更加清楚。應(yīng)當(dāng)理解，附圖僅根據(jù)該披露內(nèi)容描繪了若干實(shí)施方式，并且因此不應(yīng)被認(rèn)為是對(duì)其范圍的限制，該披露內(nèi)容的附加的特性和細(xì)節(jié)將通過使用附圖來(lái)描述：

圖1示出了PQQ的多晶型物-1(形式1)的粉末XRD圖譜。

圖2示出了PQQ的多晶型物-2(形式2)的粉末XRD圖譜。

圖3示出了PQQ鹽的多晶型物-3(形式3)的粉末XRD圖譜。

圖4示出了PQQ鹽的多晶型物-4(形式4)的粉末XRD圖譜。

圖5示出了PQQ鹽的多晶型物-5(形式5)的粉末XRD圖譜。

圖6示出了PQQ鹽的多晶型物-6(形式6)的粉末XRD圖譜。

圖7示出了PQQ鹽的多晶型物-7(形式7)的粉末XRD圖譜。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

因此，本文披露內(nèi)容涉及由式I表示的PQQ或其鹽的多晶型形式：

其中“n”和“m”選自由(a)“n”＝3，“m”＝0和(b)“n”＝1，“m”＝2組成的組，并且

R3為Na⁺；

用于制備由式I表示的PQQ或其鹽的多晶型形式的方法：

其中，“n”和“m”選自由(a)“n”＝3，“m”＝0和(b)“n”＝1，“m”＝2組成的組，并且

R3為Na⁺，其中，所述方法包括使式III與堿反應(yīng)，之后通過酸處理以獲得式I的化合物的步驟，

其中，R2選自包括以下的組：氫、直鏈或支鏈C1-8烷基、直鏈或支鏈C1-8烯基、直鏈或支鏈C1-8炔基、芳烷基、取代的芳烷基、雜芳烷基和取代的雜芳烷基，并且其中每個(gè)取代基任選地被取代；以及包含由式I表示的PQQ或其鹽的多晶型形式的組合物：

其中“n”和“m”選自由(a)“n”＝3，“m”＝0和(b)“n”＝1，“m”＝2組成的組，并且

R3為Na⁺，

任選地伴隨賦形劑。

具體實(shí)施方式

因此，本文披露內(nèi)容涉及由式I表示的PQQ或其鹽的多晶型形式：

其中“n”和“m”選自由(a)“n”＝3，“m”＝0和(b)“n”＝1，“m”＝2組成的組；并且

R3為Na⁺。

在本文披露內(nèi)容的一種實(shí)施方式中，當(dāng)n＝3且m＝0時(shí)，PQQ的多晶型形式選自包括以下的組：具有在7.9447±0.2°、11.7552±0.2°、12.6559±0.2°、14.8219±0.2°、16.0264±0.2°、17.0684±0.2°、18.8257±0.2°、19.5474±0.2°、22.5303±0.2°、23.5594±0.2°、24.7954±0.2°、25.6632±0.2°、27.13±0.2°、28.3092±0.2°、29.1776±0.2°、30.2626±0.2°、31.923±0.2°、34.6208±0.2°、35.7228±0.2°、37.0506±0.2°、37.8323±0.2°、38.8985±0.2°、39.6034±0.2°、40.9434±0.2°、43.9407±0.2°、48.3058±0.2°、54.7932±0.2°、58.6411±0.2°的衍射角2θ處具有特征峰的X射線粉末衍射圖案的形式1和具有在12.5376±0.2°、14.1135±0.2°、15.3635±0.2°、16.6934±0.2°、18.0525±0.2°、22.3898±0.2°、25.085±0.2°、28.2059±0.2°、31.2156±0.2°、35.8287±0.2°、37.3867±0.2°、39.5429±0.2°、42.936±0.2°、58.4641±0.2°的衍射角2θ處具有特征峰的X射線粉末衍射圖案的形式2。

在本文披露內(nèi)容的另一種實(shí)施方式中，由式II表示的化合物的鹽的多晶型形式為二鈉鹽。

其中，“n＝1”且“m＝2”；

其中，R3為Na⁺。

在本文披露內(nèi)容的又一種實(shí)施方式中，當(dāng)n＝1，m＝2，且R3為Na⁺時(shí)，PQQ鹽的多晶型形式選自包括以下的組：具有在8.3367±0.2°、9.5883±0.2°、12.2471±0.2°、15.2353±0.2°、16.6527±0.2°、20.989±0.2°、22.7837±0.2°、26.0084±0.2°、27.4215±0.2°、29.174±0.2°、34.4201±0.2°、38.7959±0.2°的衍射角2θ處具有特征峰的X射線粉末衍射圖案的的形式3、具有在6.2526±0.2°、8.09±0.2°、8.5645±0.2°、14.0915±0.2°、17.569±0.2°、18.6382±0.2°、22.2638±0.2°、23.0319±0.2°、23.9335±0.2°、26.4089±0.2°、27.2276±0.2°、28.2427±0.2°、29.5534±0.2°、31.7176±0.2°、33.7511±0.2°、34.7226±0.2°、36.9752±0.2°、38.8203±0.2°、40.9029±0.2°、43.1906±0.2°、45.3693±0.2°、47.3751±0.2°的衍射角2θ處具有特征峰的X射線粉末衍射圖案的形式4、具有在6.3087±0.2°、8.787±0.2°、9.4638±0.2°、11.1383±0.2°、12.8604±0.2°、14.0298±0.2°、15.1081±0.2°、17.032±0.2°、21.1969±0.2°、22.3969±0.2°、23.3678±0.2°、26.8503±0.2°、27.6689±0.2°、29.435±0.2°、31.1489±0.2°、32.2817±0.2°、34.0255±0.2°、36.884±0.2°、38.6941±0.2°、43.2067±0.2°、45.2776±0.2°的衍射角2θ處具有特征峰的X射線粉末衍射圖案的形式5、具有在8.186±0.2°、9.4246±0.2°、18.5305±0.2°、26.6158±0.2°、27.292±0.2°、31.6378±0.2°、45.4109±0.2°、56.4274±0.2°、66.1811±0.2°的衍射角2θ處具有特征峰的X射線粉末衍射圖案的形式6、以及具有在9.3426±0.2°、11.6809±0.2°、13.6028±0.2°、14.9981±0.2°、16.0269±0.2°、18.9222±0.2°、20.4134±0.2°、22.0677±0.2°、23.7113±0.2°、25.6284±0.2°、26.4555±0.2°、27.4617±0.2°、28.5023±0.2°、30.7997±0.2°、31.6466±0.2°、32.4609±0.2°、35.9051±0.2°、36.7705±0.2°、38.0082±0.2°、38.7336±0.2°、41.5928±0.2°、43.7879±0.2°、45.3967±0.2°、46.9161±0.2°、48.9136±0.2°、52.7775±0.2°、56.5143±0.2°、61.0903±0.2°、66.189±0.2°的衍射角2θ處具有特征峰的X射線粉末衍射圖案的形式7。

在本文披露內(nèi)容的再一種實(shí)施方式中，其中形式1具有圖1中所示特征峰的X射線粉末衍射圖且形式2具有圖2中所示特征峰的X射線粉末衍射圖。

在本文披露內(nèi)容的再一種實(shí)施方式中，其中當(dāng)n＝1，m＝2且R3為Na⁺時(shí)，PQQ鹽的多晶型形式選自包括形式3、形式4、形式5、形式6和形式7的組。

在本文披露內(nèi)容的再一種實(shí)施方式中，其中形式3具有圖3中所示特征峰的X射線粉末衍射圖，形式4具有圖4中所示特征峰的X射線粉末衍射圖，形式5具有圖5中所示特征峰的X射線粉末衍射圖，形式6具有圖6中所示特征峰的X射線粉末衍射圖，并且形式7具有圖7中所示特征峰的X射線粉末衍射圖。

本文披露內(nèi)容進(jìn)一步涉及用于制備由式I表示的PQQ或其鹽的多晶型形式的方法：

其中“n”和“m”選自由(a)“n”＝3，“m”＝0和(b)“n”＝1，“m”＝2組成的組；并且

R3為Na⁺，其中所述方法包括使式III與堿反應(yīng)，之后再通過酸處理以獲得式I的化合物的步驟，

其中，R2選自包括以下的組：氫、直鏈或支鏈C1-8烷基、直鏈或支鏈C1-8烯基、直鏈或支鏈C1-8炔基、芳烷基、取代的芳烷基、雜芳烷基和取代的雜芳烷基，并且其中每個(gè)取代基任選地被取代。

在本文披露內(nèi)容的一種實(shí)施方式中，上述方法在堿(氫氧化鈉或碳酸鈉)存在下實(shí)施。

在本文披露內(nèi)容的另一種實(shí)施方式中，上述方法在酸(鹽酸或硫酸)存在下實(shí)施。

在本文披露內(nèi)容的又一種實(shí)施方式中，上述方法在約10℃至約80℃的溫度范圍下實(shí)施，并且持續(xù)范圍約1小時(shí)至約18小時(shí)的時(shí)長(zhǎng)。

在本文披露內(nèi)容的再一種實(shí)施方式中，上述方法進(jìn)一步包含所獲得的多晶型PPQ或其鹽的分離和/或純化。此外，所述分離包括選自包括以下的組的動(dòng)作：加入溶劑、淬滅、過濾和萃取，以及它們以任意順序的動(dòng)作組合。

本文披露內(nèi)容進(jìn)一步涉及包含由式I表示的PQQ或其鹽的多晶型形式的組合物：

其中“n”和“m”選自由(a)“n”＝3，“m”＝0和(b)“n”＝1，“m”＝2組成的組；并且

R3為Na⁺，

任選地伴隨賦形劑。

在本文披露內(nèi)容的一種實(shí)施方式中，該組合物為營(yíng)養(yǎng)組合物或藥物組合物；并且其中所述賦形劑選自包括以下的組：粘結(jié)劑、崩解劑、稀釋劑、潤(rùn)滑劑、增塑劑、滲透促進(jìn)劑和增溶劑，或它們的任意組合。

在本文披露內(nèi)容的另一種實(shí)施方式中，將該組合物配制成選自包括以下的組的劑型：片劑、糖錠、錠劑、水性或油性混懸劑、油膏劑、貼劑、凝膠劑、洗劑、潔齒劑、膠囊劑、乳劑、霜?jiǎng)?、噴霧劑、滴劑、可分散性粉劑或顆粒劑、硬或軟凝膠膠囊劑中的乳劑、糖漿劑、酏劑和食品補(bǔ)充劑，或它們的任意組合。

本文披露內(nèi)容進(jìn)一步涉及由式I表示的PQQ和/或其鹽的多晶型形式的用途：

其中“n”和“m”選自由(a)“n”＝3,“m”＝0和(b)“n”＝1,“m”＝2組成的組；并且R3為Na⁺；用于控制選自包括以下的組的病癥：神經(jīng)元性疾病、心血管疾病和營(yíng)養(yǎng)失調(diào)以及它們的組合。

材料和方法：

化學(xué)品獲自多個(gè)商業(yè)供應(yīng)商，例如Apollo Scientific、Sigma-Aldrich等等。利用Merck硅膠230-400篩來(lái)進(jìn)行最終純化。在氧化鋁支持的硅膠40F254板(德國(guó)達(dá)姆施塔特市，Merck)上進(jìn)行TLC實(shí)驗(yàn)。在UV(254nm)和KMnO₄下照射該板。利用Buchi B-540來(lái)測(cè)定熔點(diǎn)并且不經(jīng)校正。在德國(guó)Bruker BioSpin公司的Bruker AM-300(¹H NMR 300MHz)上記錄所有的¹H NMR圖譜。通過Agilent Technology的LCMS6200系列來(lái)檢測(cè)未知化合物的分子量。參比內(nèi)標(biāo)TMS，以ppm(δ)來(lái)報(bào)告化學(xué)位移。信號(hào)指定如下：s，單峰；d，雙峰；t，三峰；m，多峰；brs，寬單峰。

所采用的化學(xué)品如下：

1)4,5-二氧-4,5-二氫-1H-吡咯并[2,3-f]喹啉-2,7,9-三羧酸三甲酯

2)氫氧化鈉

3)碳酸鈉

4)鹽酸

5)水

6)甲醇

7)乙醇

對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員而言，基于本文中提供的描述，本文披露內(nèi)容的另外實(shí)施方式和特征將是清楚的。然而，以下的實(shí)施例不應(yīng)被解釋為限制本文披露內(nèi)容的范圍。

實(shí)施例

實(shí)施例1：

4,5-二氧-4,5-二氫-1H-吡咯并[2,3-f]喹啉-2,7,9-三羧酸(PQQ)多晶型物-形式1[式I，‘n’＝3且‘m’＝0]的合成

在約25-30°下向約15L的約3.5％氫氧化鈉溶液中加入4,5-二氧-4,5-二氫-1H-吡咯并[2,3-f]喹啉-2,7,9-三羧酸三甲酯(1.0kg，1當(dāng)量，2.686摩爾)。在約25℃至約30℃下攪拌反應(yīng)混合物約3小時(shí)。通過HPLC來(lái)監(jiān)控反應(yīng)的完成。之后，用12N鹽酸將反應(yīng)混合物酸化(pH:<1)，并在40-60℃下攪拌12小時(shí)以使反應(yīng)物料沉淀。過濾沉淀物以獲得產(chǎn)物[4,5-二氧-4,5-二氫-1H-吡咯并[2,3-f]喹啉-2,7,9-三羧酸]，其為亮紅色固體(約0.80Kg，產(chǎn)率：90％)。.

通過HPLC得到純度：99.3％

¹H NMR(DMSO,300MHz):7.20(s,1H),8.60(s,1H)和13.60(bs,3H)

IR(ATR,cm^-1)υ:3553、3257、3009、2615、1746、1711、1644、1506、1399、1197和767

PQQ的多晶型物-1(形式1)的粉末XRD圖譜：

圖1中提供了PQQ的多晶型物-1(形式1)的粉末XRD圖譜樣式。

PQQ的多晶型物1(形式1)的峰值列表

實(shí)施例2：

4,5-二氧-4,5-二氫-1H-吡咯并[2,3-f]喹啉-2,7,9-三羧酸(PQQ)多晶型物-形式2[式I，‘n’＝3且‘m’＝0]的合成

在25-30℃下向15L的3.5％氫氧化鈉溶液中加入4,5-二氧-4,5-二氫-1H-吡咯并[2,3-f]喹啉-2,7,9-三羧酸三甲酯(1.0kg,1當(dāng)量，2.686摩爾)。在25℃至30℃下攪拌反應(yīng)混合物3小時(shí)。通過HPLC來(lái)監(jiān)控反應(yīng)的完成。之后，用硫酸將反應(yīng)混合物酸化(pH:<1)并在25-30℃下攪拌12小時(shí)以使反應(yīng)物料沉淀。過濾沉淀物以獲得產(chǎn)物[4,5-二氧-4,5-二氫-1H-吡咯并[2,3-f]喹啉-2,7,9-三羧酸]，其為亮紅色固體(約0.78Kg，產(chǎn)率：88％)。

通過HPLC得到純度:99.3％

¹H NMR(DMSO,300MHz):7.02(s,1H),8.60(s,1H)和3.60(bs,3H)

IR(ATR,cm^-1)v:3503、3255、2965、1746、1711、1644、1506、1320、1196和766

PQQ的多晶型物-2(形式2)的粉末XRD圖譜：

圖2中提供了PQQ的多晶型物-2(形式2)的粉末XRD圖譜樣式。

PQQ的多晶型物-2(形式2)的峰值列表

實(shí)施例3：

4,5-二氧-4,5-二氫-1H-吡咯并[2,3-f]喹啉-2,7,9-三羧酸二鈉(PQQ.2Na)多晶型物-形式3[式II，“n”＝1，“m”＝2]的合成

程序：

在25-30℃下向15L的10％碳酸鈉溶液中加入4,5-二氧-4,5-二氫-1H-吡咯并[2,3-f]喹啉-2,7,9-三羧酸三甲酯(1.0kg，1當(dāng)量，2.686摩爾)。在16小時(shí)內(nèi)將反應(yīng)混合物加熱至70℃至75℃。通過HPLC來(lái)監(jiān)控反應(yīng)的完成。之后，用1N鹽酸將反應(yīng)混合物酸化(pH:3.0-3.5)以使反應(yīng)物料沉淀。在0-5℃下過濾沉淀物以獲得產(chǎn)物[4,5-二氧-4,5-二氫-1H-吡咯并[2,3-f]喹啉-2,7,9-三羧酸二鈉]，其為暗紅色固體(約0.85Kg，產(chǎn)率：85％)。

¹H NMR(D₂O,300MHz):6.84(s,1H),8.48(s,1H)；LC-MS(ESI):329(M-H)，通過HPLC得到純度：98.6％

IR(ATR,cm^-1)υ:3407、1719、1666、1621、1580、1537、1497、1356、1243、975和731

多晶型物-3(形式3)的粉末XRD圖譜：

圖3中提供了PQQ鹽的多晶型物3(形式3)的粉末XRD圖譜樣式。

PQQ鹽的多晶型物-3(形式3)的峰值列表

實(shí)施例4：

4,5-二氧-4,5-二氫-1H-吡咯并[2,3-f]喹啉-2,7,9-三羧酸二鈉(PQQ.2Na)多晶型物-形式4[式II，“n”＝1，“m”＝2]的合成

程序：

在25-30℃下向15L的10％碳酸鈉溶液中加入4,5-二氧-4,5-二氫-1H-吡咯并[2,3-f]喹啉-2,7,9-三羧酸三甲酯(1.0kg,1當(dāng)量，2.686摩爾)。在16小時(shí)內(nèi)將反應(yīng)混合物加熱至70℃至75℃。通過HPLC來(lái)監(jiān)控反應(yīng)的完成。之后，用12鹽酸將反應(yīng)混合物酸化(pH:3.0-3.5)以使反應(yīng)物料沉淀。在0-5℃下過濾沉淀物以獲得產(chǎn)物[4,5-二氧-4,5-二氫-1H-吡咯并[2,3-f]喹啉-2,7,9-三羧酸二鈉]，其為暗紅色固體。在減壓下，在25-30℃干燥該固體24小時(shí)以達(dá)到水含量為約22％(約0.90Kg，產(chǎn)率：90％)。

¹H NMR(D₂O，300MHz):7.07(s,1H),7.69(s,1H)；LC-MS(ESI):329(M-H),通過HPLC得到純度：99.5％

IR(ATR,cm^-1)υ:3500、1669、1619、1540、1496、1356、1241和728

PQQ鹽的多晶型物-4(形式4)的粉末XRD圖譜：

圖4提供了PQQ鹽的多晶型物4的粉末XRD圖譜樣式。

多晶型物-4(形式4)的峰值列表

峰值列表

實(shí)施例5:

4,5-二氧-4,5-二氫-1H-吡咯并[2,3-f]喹啉-2,7,9-三羧酸二鈉(PQQ.2Na)多晶型物-形式5[式II，“n”＝1，“m”＝2]的合成

在25-30℃下進(jìn)一步干燥在實(shí)施例4中獲得的產(chǎn)物，以達(dá)到水分含量為約12％。

以下的圖譜數(shù)據(jù)對(duì)應(yīng)于具有12％水分含量的PQQ。

峰值列表

注釋：當(dāng)水含量為12％時(shí)，在2θ為11.139處出現(xiàn)新的峰。

¹H NMR(D₂O,300MHz):6.97(s,1H),8.48(s,1H)；LC-MS(ESI):329(M-H)，通過HPLC得到純度：99.5％

IR(ATR,cm^-1)υ:3500、3408、1669、1621、1497、1359、1241和729

實(shí)施例6：

4,5-二氧-4,5-二氫-1H-吡咯并[2,3-f]喹啉-2,7,9-三羧酸二鈉(PQQ.2Na)多晶型物-形式6[式II，“n”＝1，“m”＝2]

程序：

在25℃-30℃下向15L的3.5％氫氧化鈉溶液中加入4,5-二氧-4,5-二氫-1H-吡咯并[2,3-f]喹啉-2,7,9-三羧酸三甲酯(1.0kg,1當(dāng)量，2.68mol)，并攪拌16小時(shí)。通過HPLC來(lái)監(jiān)控反應(yīng)的完成。之后，在1小時(shí)內(nèi)用12N鹽酸將反應(yīng)混合物酸化(pH:3.0-3.5)以使反應(yīng)物料沉淀。在20℃-30℃下過濾該沉淀物以獲得產(chǎn)物[4,5-二氧-4,5-二氫-1H-吡咯并[2,3-f]喹啉-2,7,9-三羧酸二鈉]，其為暗紅色固體(約0.84Kg，84％)。

¹H NMR(D₂O,300MHz):6.84(s,1H),8.48(s,1H)；LC-MS(ESI):329(M-H)，通過HPLC得到純度：99.4％

IR(ATR,cm^-1)υ:3423、2558、1717、1674、1611、1543、1502、1235、1147、938和718

PQQ鹽的多晶型物-5(形式6)的粉末XRD圖譜：

圖6中提供了多晶型物6的粉末XRD圖譜樣式。

多晶型物-6的峰值列表：

實(shí)施例7:

4,5-二氧-4,5-二氫-1H-吡咯并[2,3-f]喹啉-2,7,9-三羧酸二鈉(PQQ.2Na)多晶型物-形式7[式II，“n”＝1，“m”＝2]

程序：

在25-30℃下向15L的3.5％氫氧化鈉溶液中加入4,5-二氧-4,5-二氫-1H-吡咯并[2,3-f]喹啉-2,7,9-三羧酸三甲酯(1.0kg,1當(dāng)量，2.686摩爾)。在16小時(shí)內(nèi)將反應(yīng)混合物加熱至25℃至30℃。通過HPLC來(lái)監(jiān)控反應(yīng)的完成。之后，在劇烈攪拌下在3小時(shí)內(nèi)用12N鹽酸將反應(yīng)混合物酸化(pH:3.0-3.5)以使反應(yīng)物料沉淀。在0-5℃下過濾該沉淀物以獲得產(chǎn)物[4,5-二氧-4,5-二氫-1H-吡咯并[2,3-f]喹啉-2,7,9-三羧酸二鈉]，其為暗紅色固體(約0.88Kg，88％)。

¹H NMR(D₂O,300MHz):6.84(s,1H),8.48(s,1H)；LC-MS(ESI):329(M-H)，通過HPLC得到純度：99.4％

IR(ATR,cm^-1)υ:3414、2474、1681、1643、1503、1356、1296、1238、1084、1049、811、723和698

PQQ鹽的多晶型物-6(形式7)的粉末XRD圖譜：

圖7中提供了多晶型物7的粉末XRD圖譜樣式。

多晶型物-7的峰值列表