其中
X是CR或N；
R是氫、鹵素或低級烷基；
L是鍵、-C(O)-或-C(O)NH-；
Ar是苯基或含有一或二個N原子的五或六元雜芳基；
R1是鹵素、低級烷基、被鹵素取代的低級烷基、低級烷氧基、被鹵素取代的低級烷氧基或是環(huán)烷基；
n是0、1、2或3；
或涉及其藥學上適用的酸加成鹽，所有外消旋混合物，所有它們相應的對映體和/或光學異構體。
現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)式I化合物對痕量胺相關受體(trace amine associated receptors，TAAR)，尤其是TAAR1具有良好的親和性。
所述化合物可以用于以下疾病的治療：抑郁癥(depression)、焦慮癥(anxiety disorders)、雙相性精神障礙(bipolar disorder)、注意缺陷多動障礙(attention deficit hyperactivity disorder)(ADHD)、應激相關障礙(stress-related disorders)、精神病性精神障礙(psychotic disorders)如精神分裂癥(schizophrenia)、神經病(neurological diseases)如帕金森病(Parkinson’s disease)、神經變性疾病(neurodegenerative disorders)如阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease)、癲癇(epilepsy)、偏頭痛(migraine)、高血壓(hypertension)、精神藥物濫用(substance abuse)和代謝性疾病(metabolic disorders)如進食障礙(eating disorders)、糖尿病(diabetes)、糖尿病并發(fā)癥(diabetic complications)、肥胖癥(obesity)、異常脂肪血癥(dyslipidemia)、能量消耗和同化障礙(disorders of energy consumption and assimilation)、體溫穩(wěn)態(tài)紊亂和功能障礙(disorders and malfunction of body temperature homeostasis)、睡眠和晝夜節(jié)律障礙(disorders of sleep and circadian rhythm)、以及心血管疾病(cardiovascular disorders)。
對于可以結合至腎上腺素能受體的化合物報道的一些生理效應(即心血管效應、低血壓、鎮(zhèn)靜誘導)(WO02/076950，WO97/12874或EP 0717 037)在旨在治療如上所述的中樞神經系統(tǒng)疾病的藥物的情況下可能被認為是不適宜的副作用。因此，適宜的是獲得與腎上腺素能受體比較對于TAAR1受體具有選擇性的藥物。本發(fā)明的目標物對TAAR1受體顯示超過腎上腺素能受體的選擇性，尤其是與人類和大鼠α1和α2腎上腺素能受體比較的良好選擇性。
經典的生物胺(血清素，去甲腎上腺素，腎上腺素，多巴胺，組胺)在中樞和外周神經系統(tǒng)中作為神經遞質發(fā)揮重要的作用[1]。它們的合成和儲存，以及它們在釋放后的降解和再吸收被嚴格調節(jié)。已知生物胺水平的不平衡在很多病理情況下是造成改變的腦功能的原因[2-5]。第二類的內源胺化合物，即通常所說的痕量胺(TA)與經典的生物胺在結構、新陳代謝和亞細胞定位方面顯著地重疊。TA包括對-酪胺、β-苯基乙胺、色胺和章魚胺，并且它們在哺乳動物神經系統(tǒng)中以通常比經典的生物胺低的水平存在[6]。
它們的調節(jié)異常與多種精神病學疾病相關，如精神分裂癥和抑郁癥[7]，以及其他病情如注意缺陷多動障礙、偏頭痛、帕金森病、精神藥物濫用和進食障礙[8，9]。
長期以來，TA特異性受體僅是基于人類和其他哺乳動物的CNS中解剖學上離散的高親和性TA結合部位而猜測的[10，11]。因此，TA的藥理學作用被認為是經由眾所周知的經典生物胺的機制通過如下而介導的：或者通過引起它們的釋放、抑制它們的再吸收或通過與它們的受體體系“交叉反應”介導[9，12，13]。隨著近來GPCR新家族的數(shù)個成員，即痕量胺相關受體(TAAR)的識別，該觀點明顯地改變[7，14]。在人類中存在9種TAAR基因(包括3種假基因)并且在小鼠中存在16種基因(包括1種假基因)。TAAR基因不含有內含子(有一個例外，TAAR2含有1個內含子)并且在相同的染色體節(jié)段上位于彼此相臨的位置。受體基因的系統(tǒng)發(fā)育關系，與深入的GPCR藥效團相似性比較和藥理學數(shù)據一致，暗示這些受體形成三個不同的亞族[7，14]。TAAR1在人類與嚙齒類之間高度保守的四種基因(TAAR1-4)的第一亞類中。TA經由Gα活化TAAR1。已顯示TA的調節(jié)異常有助于多種疾病的病因學，所述多種疾病如抑郁癥、精神病、注意缺陷多動障礙、精神藥物濫用、帕金森病、偏頭痛、進食障礙、代謝性疾病，并且因此TAAR1配體對于這些疾病的治療具有很高的潛在可能。
因此，對于增加關于痕量胺相關受體的知識存在廣泛的興趣。
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本發(fā)明的目標是式I的新化合物和它們的藥用鹽，它們用于制備藥物的用途，所述藥物用于治療與痕量胺相關受體的生物學功能相關的病癥，它們的制備，以及基于根據本發(fā)明的化合物的用于病癥的控制或預防中的藥物，所述病癥如抑郁癥、焦慮癥、雙相性精神障礙、注意缺陷多動障礙、應激相關障礙、精神病性精神障礙如精神分裂癥、神經病如帕金森病、神經變性疾病如阿爾茨海默病、癲癇、偏頭痛、精神藥物濫用和代謝性疾病如進食障礙、糖尿病、糖尿病并發(fā)癥、肥胖癥、異常脂肪血癥、能量消耗和同化障礙、體溫穩(wěn)態(tài)紊亂和功能障礙、睡眠和晝夜節(jié)律障礙、以及心血管疾病。
使用本發(fā)明的化合物的優(yōu)選適應證是抑郁癥、精神病、帕金森病、焦慮癥、注意缺陷多動障礙(ADHD)以及糖尿病。
如本文所使用的，術語“低級烷基”表示含有1-7個碳原子的飽和直鏈或支鏈基團，例如，甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、異丁基、2-丁基、叔丁基等。優(yōu)選的烷基基團是具有1-4個碳原子的基團。
如本文所使用的，術語“低級烷氧基”表示其中烷基殘基如上面所定義并且其經由氧原子連接的基團。
術語“鹵素”表示氯、碘、氟和溴。優(yōu)選的鹵素基團是氟或氯。
如本文所使用的，術語“鹵素取代的低級烷基”表示如對于術語“低級烷基”所限定的包含1至7個碳原子的飽和直鏈或支鏈基團，其中至少一個氫原子被鹵素原子代替。優(yōu)選的鹵素原子是氟。此種基團的實例有CF3、CHF2、CH2F、CH2CF3或CH2CHF2。
如本文所使用的，術語″被鹵素取代的低級烷氧基”表示如上文限定的烷氧基，并且其中至少一個氫原子被鹵素替代。
術語“環(huán)烷基”表示包含3至6個碳原子的飽和的碳環(huán)，例如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基或環(huán)己基。
術語“含有一或二個N原子的五或六元雜芳基”表示環(huán)芳族5或六元環(huán)，其中至少一個碳原子被氮原子替代，例如基團吡啶基、嘧啶基或吡唑基。
術語“藥用酸加成鹽”包括與無機和有機酸的鹽，所述無機和有機酸如鹽酸、硝酸、硫酸、磷酸、檸檬酸、甲酸、富馬酸、馬來酸、乙酸、琥珀酸、酒石酸、甲磺酸、對甲苯磺酸等。
本發(fā)明的一個實施方案是式I化合物，其中“L”是鍵，例如以下化合物
(RS)-N-(4-氯苯基)-6-嗎啉-2-基-吡啶-3-胺
(RS)-N-(4-溴苯基)-6-嗎啉-2-基-吡啶-3-胺
(RS)-N-(4-乙氧基苯基)-6-嗎啉-2-基-吡啶-3-胺
(RS)-N-(3-氯苯基)-6-嗎啉-2-基-吡啶-3-胺
(RS)-N-(4-氟苯基)-6-嗎啉-2-基-吡啶-3-胺
(RS)-6-嗎啉-2-基-N-[4-(三氟甲基)苯基]吡啶-3-胺
(RS)-N-(6-嗎啉-2-基-3-吡啶基)-2-(三氟甲基)嘧啶-4-胺
N-(4-氯苯基)-6-[(2S)-嗎啉-2-基]吡啶-3-胺
6-[(2S)-嗎啉-2-基]-N-[4-(三氟甲基)苯基]吡啶-3-胺
N-(5-氯-2-吡啶基)-6-[(2S)-嗎啉-2-基]吡啶-3-胺
N-(5-溴-2-吡啶基)-6-[(2S)-嗎啉-2-基]吡啶-3-胺
6-[(2S)-嗎啉-2-基]-N-[6-(三氟甲基)-3-吡啶基]吡啶-3-胺
6-[(2S)-嗎啉-2-基]-N-[4-(三氟甲基)-2-吡啶基]吡啶-3-胺
N-(4-氯苯基)-6-[(2R)-嗎啉-2-基]吡啶-3-胺
6-[(2R)-嗎啉-2-基]-N-[4-(三氟甲基)苯基]吡啶-3-胺
N-(5-氯-2-吡啶基)-6-[(2R)-嗎啉-2-基]吡啶-3-胺
6-[(2R)-嗎啉-2-基]-N-[6-(三氟甲基)-3-吡啶基]吡啶-3-胺
6-[(2R)-嗎啉-2-基]-N-[4-(三氟甲基)-2-吡啶基]吡啶-3-胺
N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-5-(三氟甲基)吡啶-2-胺
N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-6-(三氟甲基)吡啶-2-胺
N-(5-溴-2-吡啶基)-6-[(2R)-嗎啉-2-基]吡啶-3-胺
N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-5-(三氟甲基)吡啶-2-胺
N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-6-(三氟甲基)吡啶-2-胺
(RS)-N-(4-氯苯基)-2-嗎啉-2-基-嘧啶-5-胺
(RS)-2-嗎啉-2-基-N-[4-(三氟甲基)苯基]嘧啶-5-胺
(RS)-5-氯-N-(5-氯-2-吡啶基)-6-嗎啉-2-基-吡啶-3-胺
(RS)-5-氯-6-嗎啉-2-基-N-[5-(三氟甲基)-2-吡啶基]吡啶-3-胺
(RS)-5-甲基-6-嗎啉-2-基-N-[5-(三氟甲基)-2-吡啶基]吡啶-3-胺
(RS)-N-(5-氯-2-吡啶基)-5-氟-6-嗎啉-2-基-吡啶-3-胺，或
(RS)-5-氟-6-嗎啉-2-基-N-[5-(三氟甲基)-2-吡啶基]吡啶-3-胺。
本發(fā)明的一個進一步的實施方案是式I化合物，其中“L”是-C(O)-，例如以下化合物
(RS)-4-氯-N-(6-嗎啉-2-基-3-吡啶基)苯甲酰胺
(RS)-3-氯-N-(6-嗎啉-2-基-3-吡啶基)苯甲酰胺
(RS)-4-乙氧基-N-(6-嗎啉-2-基-3-吡啶基)苯甲酰胺
(RS)-4-氟-N-(6-嗎啉-2-基-3-吡啶基)苯甲酰胺
(RS)-4-氯-N-(6-嗎啉-2-基-3-吡啶基)-3-丙基-1H-吡唑-5-甲酰胺
(RS)-N-(6-嗎啉-2-基-3-吡啶基)-2-(三氟甲基)吡啶-4-甲酰胺
4-氯-N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]苯甲酰胺
3-氯-N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]苯甲酰胺
N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-4-(三氟甲基)苯甲酰胺
N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-2-(三氟甲基)吡啶-4-甲酰胺
N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-3-(三氟甲基)苯甲酰胺
N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-6-(2，2，2-三氟乙氧基)吡啶-3-甲酰胺
2-乙基-N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]嘧啶-5-甲酰胺
3-異丙基-N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
4-氯-N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-3-丙基-1H-吡唑-5-甲酰胺
4-氯-3-環(huán)丙基-N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
4-氯-N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-5-甲酰胺
4-氯-3-甲基-N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
4-甲基-N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
4-氯-1-甲基-N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-5-丙基-吡唑-3-甲酰胺
4-氯-1-甲基-N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-5-丙基-吡唑-3-甲酰胺
4-氯-N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]苯甲酰胺
3-氯-N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]苯甲酰胺
N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-4-(三氟甲基)苯甲酰胺
N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-2-(三氟甲基)吡啶-4-甲酰胺
N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-3-(三氟甲基)苯甲酰胺
N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-6-(2，2，2-三氟乙氧基)吡啶-3-甲酰胺
2-乙基-N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]嘧啶-5-甲酰胺
3-異丙基-N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
4-氯-N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-3-丙基-1H-吡唑-5-甲酰胺
4-氯-3-環(huán)丙基-N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
4-氯-N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-5-甲酰胺
4-氯-3-甲基-N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
4-甲基-N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
(R)-3-乙基-4-甲基-N-(6-(嗎啉-2-基)吡啶-3-基)-1H-吡唑-5-甲酰胺
(S)-3-乙基-4-甲基-N-(6-(嗎啉-2-基)吡啶-3-基)-1H-吡唑-5-甲酰胺
(R)-6-甲基-N-(6-(嗎啉-2-基)吡啶-3-基)-2-(三氟甲基)嘧啶-4-甲酰胺
(S)-6-甲基-N-(6-(嗎啉-2-基)吡啶-3-基)-2-(三氟甲基)嘧啶-4-甲酰胺
(RS)-4-氯-N-(2-嗎啉-2-基嘧啶-5-基)苯甲酰胺
(RS)-4-氯-3-乙氧基-N-(6-嗎啉-2-基-3-吡啶基)-1H-吡唑-5-甲酰胺
(RS)-4-氯-N-(6-嗎啉-2-基-3-吡啶基)-3-(2，2，2-三氟乙氧基)-1H-吡唑-5-甲酰胺
4-氯-3-乙基-N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
3-乙基-4-氟-N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
4-溴-3-乙基-N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
4-氟-N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-3-丙基-1H-吡唑-5-甲酰胺
3-環(huán)丙基-4-氟-N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
4-溴-3-環(huán)丙基-N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
4-氯-3-乙基-N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
3-乙基-4-氟-N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
4-溴-3-乙基-N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
4-氟-N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-3-丙基-1H-吡唑-5-甲酰胺
3-環(huán)丙基-4-氟-N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
4-溴-3-環(huán)丙基-N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
3-異丁基-N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
4-氟-3-異丁基-N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
3-丁基-4-氟-N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
3-丁基-N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
5-異丙基-N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-2-(2，2，2-三氟乙基)吡唑-3-甲酰胺
2-異丙基-N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-5-(2，2，2-三氟乙氧基)吡唑-3-甲酰胺
3-異丁基-N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
4-氟-3-異丁基-N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
3-丁基-4-氟-N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
3-丁基-N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
5-異丙基-N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-2-(2，2，2-三氟乙基)吡唑-3-甲酰胺
2-異丙基-N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-5-(2，2，2-三氟乙氧基)吡唑-3-甲酰胺
4-氯-3-乙氧基-N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
4-氯-N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-3-(2，2，2-三氟乙氧基)-1H-吡唑-5-甲酰胺
4-氯-3-乙氧基-N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
(RS)-N-(5-氯-6-嗎啉-2-基-3-吡啶基)-2-(三氟甲基)吡啶-4-甲酰胺
(RS)-4-氯-N-(5-氯-6-嗎啉-2-基-3-吡啶基)-3-丙基-1H-吡唑-5-甲酰胺
(RS)-N-(5-氟-6-嗎啉-2-基-3-吡啶基)-2-(三氟甲基)吡啶-4-甲酰胺
(RS)-4-氯-N-(5-氟-6-嗎啉-2-基-3-吡啶基)-3-丙基-1H-吡唑-5-甲酰胺
4-氯-3-異丙基-N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
4-氟-3-異丙基-N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
(RS)-N-(5-甲基-6-嗎啉-2-基-3-吡啶基)-2-(三氟甲基)吡啶-4-甲酰胺
(RS)-4-氯-N-(5-甲基-6-嗎啉-2-基-3-吡啶基)-3-丙基-1H-吡唑-5-甲酰胺
4-氯-3-異丙基-N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺，或
4-氟-3-異丙基-N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺。
本發(fā)明的一個進一步實施方案是式I化合物，其中“L”是-C(O)NH-，例如以下化合物
(RS)-1-(3-氯苯基)-3-(6-嗎啉-2-基-3-吡啶基)脲
(RS)-1-(4-氟苯基)-3-(6-嗎啉-2-基-3-吡啶基)脲
(RS)-1-(6-嗎啉-2-基-3-吡啶基)-3-[4-(三氟甲基)苯基]脲
(RS)-1-(4-氯苯基)-3-(6-嗎啉-2-基-3-吡啶基)脲
1-(3-氯苯基)-3-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]脲
1-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-3-[3-(三氟甲基)苯基]脲
1-(3-氯苯基)-3-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]脲
1-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-3-[3-(三氟甲基)苯基]脲
(RS)-1-(3-氯苯基)-3-(2-嗎啉-2-基嘧啶-5-基)脲
(RS)-1-(5-氯-6-嗎啉-2-基-3-吡啶基)-3-(3-氯苯基)脲
(RS)-1-(3-氯苯基)-3-(5-氟-6-嗎啉-2-基-3-吡啶基)脲，或
(RS)-1-(3-氯苯基)-3-(5-甲基-6-嗎啉-2-基-3-吡啶基)脲.
本發(fā)明的式I化合物的制備可以按順序或以會聚合成路線進行。本發(fā)明的化合物的合成在下面的方案1、2和3和對121個具體實施例的描述中示出。用于進行反應和所得產物純化所需的技能是本領域技術人員已知的。除非相反地指出，在以下方法描述中使用的取代基和符號具有之前在本文中給出的意義。
更詳細地，式I化合物可以通過下面給出的方法，通過實施例中給出的方法或通過類似的方法制備。用于單獨反應步驟的適當反應條件是本領域技術人員已知的。反應順序不限于方案1、2和3中給出的順序，而是根據原材料和它們相應的反應性，可以自由地改變反應步驟的順序。原材料是可商購的或可以通過與下面給出的方法相似的方法制備，通過說明書中引用的參考文獻中或實施例中描述的方法制備，或通過本領域已知的方法制備。
本發(fā)明的式I化合物及其藥用鹽可以通過本領域中已知的方法制備，例如，通過下述方法，所述方法包括
a)將式14的化合物
與式15-a的化合物反應
得到式16-a的化合物
接著脫保護Boc-基團，得到式I化合物
其中L是-C(O)-并且其他取代基如上文所述，或
b)將式14的化合物
與式15-b的化合物反應
得到式16-b的化合物
接著脫保護Boc-基團，得到式I化合物
其中L是-NHC(O)-并且其他取代基如上文所述，或
c)將式8，9或10的化合物
與式11的化合物反應
得到式12的化合物
接著脫保護Boc-基團，得到式I化合物
其中L是鍵并且其他取代基如上文所述，或
如果需要，將獲得的化合物轉變?yōu)樗幱盟峒映甥}。
一般程序
方案1
取代基如上文所述。
步驟A：酮1向α-鹵化的酮3的轉化可以用鹵化劑如氯、溴、N-氯琥珀酰亞胺(NCS)，N-溴琥珀酰亞胺(NBS)或四乙基三氯化銨，任選地用酸如HBr、HCl、HOAc、對甲苯磺酸作為添加劑，在溶劑如CH2Cl2、CHCl3、二烷、THF、乙腈中，在室溫至升高的溫度處理完成。
優(yōu)選的條件是HBr/HOAc溶液中的溴在70℃歷時3小時以形成α-溴酮3(hal＝Br)。
步驟A’：備選地，可以通過涉及酰鹵中間體的逐步方法獲得α-鹵化的酮3。羧酸2可以通過用鹵化劑如(COCl)2、SOCl2、PCl3、PBr3或Ph3P·Br2，任選地在溶劑如CH2Cl2，CHCl3，苯，或甲苯中，在0℃至升高的溫度處理而轉化為相應酰鹵。在第二步驟中，酰鹵中間體可以用(三甲基甲硅烷基)重氮甲烷處理，然后用濃HCl或HBr處理?？梢允褂靡译妗HF和二乙醚的混合物作為溶劑在0℃至室溫的溫度進行反應。
優(yōu)選的條件是CH2Cl2中的(COCl)2，在0℃至室溫，用于第一步驟并且在0-5℃混合反應物，接著在室溫反應30分鐘形成α-氯酮3(hal＝Cl)。
步驟B：C-N鍵形成可以通過用N-芐基氨基乙醇親核取代以提供α-氨基酮4來完成。反應可以利用堿如三乙胺，二異丙基乙胺，K2CO3，Na2CO3，Cs2CO3，KOtBu，在非質子溶劑如DMF，乙腈，DMSO，THF，DME，或二烷中，在室溫至升高的溫度進行。
優(yōu)選的條件是K2CO3作為堿，在無水DMF中，在室溫。
步驟C：酮4向二醇5的轉化可以通過用還原劑如LiBH4，NaBH4，LiAlH4，或DIBAL-H，在溶劑如MeOH，EtOH，THF，二乙醚，或甲苯中，在-78℃至室溫處理來完成。
優(yōu)選的條件是乙醇中NaBH4，在室溫歷時1小時。
步驟D：二醇5的環(huán)化可以通過酸介導的陽離子環(huán)化或涉及磺酸酯中間體的逐步方法完成。
在酸介導的陽離子環(huán)化中，轉化可以通過用無機酸如H2SO4或H3PO4在升高的溫度處理來完成。
在逐步方法中，轉化可以通過用一種磺?；瘎┑南喈斘?，如1-(對-甲苯磺?；?咪唑、甲磺酰氯或甲苯磺酰氯，或在無機堿如NaH和KOtBu，或有機堿如吡啶、三乙胺、N，N-二異丙基乙胺或N-甲基嗎啉的存在下，在醚溶劑如二乙醚、二烷、THF、或TBME中，或使用有機堿作為溶劑，在0℃至50℃處理二醇5完成。得到的磺酸酯可以通過用非親核堿如氫化鈉，叔丁醇鉀，或2-甲基-2-丁醇鉀，在醚溶劑如二乙醚、二烷、THF、或TBME中處理轉化為嗎啉6。
優(yōu)選的條件是逐步方法，使用NaH作為堿并且使用1-(對-甲苯磺酰基)咪唑作為磺?；瘎赥HF中，在室溫歷時16小時。
步驟E：芐基保護基團的去除可以通過Pd催化劑催化的氫化反應或通過用氯甲酸酯如ClCOOCH2CH2Cl、ClCOOCH(Cl)Me、ClCOOCH2Ph和ClCOOCH2CCl3，并且任選地用堿如三乙胺、二異丙基乙胺和氫氧化鈉，在溶劑如二氯甲烷、1，2-二氯乙烷、甲苯、THF、二乙醚、二烷、TBME、甲醇和乙醇中，在室溫至升高的溫度處理來完成。
優(yōu)選的條件是使用ClCOOCH(Cl)Me，在室溫在二氯甲烷中歷時4小時，接著在MeOH和甲苯中，在回流溫度歷時1小時。
步驟F：嗎啉7的保護可以用碳酸二叔丁酯，任選地在有機或無機堿如三乙胺、N，N-二異丙基乙胺、N-甲基嗎啉、碳酸鉀、碳酸鈉、或碳酸銫的存在下，在鹵化溶劑如二氯甲烷或1，2-二氯乙烷或醚溶劑如二乙醚、二烷、THF、或TBME中處理來完成。
優(yōu)選的條件是THF，在碳酸鉀作為堿的存在下，在室溫歷時2小時。
步驟G：8的對映異構體可以使用手性HPLC分離。優(yōu)選的條件是使用SFC(柱：Chiralpak AD-3100×4.6mm I.D.，3um)，利用5％至40％在CO2中的乙醇(0.05％DEA)作為流動相。
方案2
步驟A：芳基溴化物8，9，或10與芳基胺11的偶聯(lián)可以通過用鈀或銅催化劑、配體和堿，在溶劑如二烷、DMF、THF、甲苯、DMF和DMSO中，在升高的溫度，例如使用鈀-催化的Buchwald-Hartwig反應進行處理來完成。
優(yōu)選的條件是催化性的三(二亞芐基丙酮)二鈀(0)、催化性的4，5-雙(二苯基膦基)-9，9-二甲基呫噸(Xantphos)、和Cs2CO3，在二烷中，在90℃歷時12小時。
步驟B：Boc N-保護基團的去除可以用無機酸如HCl、H25O4、或H3PO4或有機酸如CF3COOH、CHCl2COOH、HOAc或對甲苯磺酸，在溶劑如CH2Cl2、CHCl3、THF、MeOH、EtOH、或H2O中，在0-80℃進行。
優(yōu)選的條件是CF3COOH作為酸，在CH2Cl2中，在室溫歷時1小時。
方案3
步驟A：C-N鍵形成可以通過用二苯甲酮亞胺，在鈀或銅催化劑、配體和堿的存在下，在溶劑如二烷、DME、THF、甲苯和DMSO中，在升高的溫度，例如使用鈀-催化的Buchwald-Hartwig反應處理溴化物8，9或10來完成。
優(yōu)選的條件是催化性的三(二亞芐基丙酮)二鈀(0)，催化性的4，5-雙(二苯基膦基)-9，9-二甲基呫噸(Xantphos)，和Cs2CO3，在二烷中在90℃12小時。
步驟B：二苯基亞甲基N-保護基團的去除可以通過在正常或升高的壓力下用氫氫化或通過使用甲酸銨或環(huán)己二烯作為氫源，用催化劑如PtO2、Pd-C或拉尼鎳(Raney nickel)，在溶劑如MeOH、EtOH、H2O、二烷、THF、EtOAc、二氯甲烷、氯仿、DMF或其混合物中轉移氫化完成。
該轉變還可以通過用羥胺鹽酸鹽，連同堿如乙酸鈉、乙酸鉀、碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸銫，在溶劑如MeOH、EtOH、二烷、THF、DMF或其混合物中處理來進行。
優(yōu)選的條件是羥胺鹽酸鹽，連同乙酸鈉，在MeOH中，在室溫歷時1小時。
步驟C：酰胺形成可以用羧酸15-a和偶聯(lián)劑如DCC、EDC、TBTU、HBTU或HATU，在有機堿如三乙胺、N，N-二異丙基乙胺或N-甲基嗎啉的存在下，在溶劑如二氯甲烷、1，2-二氯乙烷、DMF、DMSO、或醚溶劑包括二乙醚、二烷、THF、DME、或TBME中處理來完成。
優(yōu)選的條件是HATU與N，N-二異丙基乙胺，在DMF中，在室溫歷時16小時。
步驟D：脲形成可以通過用異氰酸酯15-b在有機堿如三乙胺、N，N-二異丙基乙胺或N-甲基嗎啉的存在下，在鹵化溶劑如二氯甲烷、1，2-二氯乙烷或氯苯中處理來完成。
優(yōu)選的條件是三乙胺作為堿，在二氯甲烷中，在室溫。
步驟E：Boc N-保護基團的去除可以用無機酸如HCl、H2SO4、或H3PO4或有機酸如CF3COOH、CHCl2COOH、HOAc或對甲苯磺酸，在溶劑如CH2Cl2、CHCl3、THF、MeOH、EtOH、或H2O中，在0-80℃進行。
優(yōu)選的條件是CF3COOH作為酸，在CH2Cl2中，在室溫歷時1小時。
化合物的分離和純化
如果需要，本文所描述的化合物和中間體的分離和純化可以通過任意合適的分離或純化程序完成，如例如，過濾，萃取，結晶，柱色譜，薄層色譜，厚層色譜，制備型低壓或高壓液相色譜或這些程序的組合。合適的分離和離析程序的具體說明可以通過參考在下面在本文中的制備和實施例而得到。然而，當然也可以使用其他等價的分離或離析程序。手性的式I化合物的外消旋混合物可以使用手性HPLC分離。手性合成中間體的外消旋混合物也可以使用手性HPLC分離。
式I化合物的鹽
式I化合物是堿性的并且可以轉化為相應的酸加成鹽。該轉化通過用至少化學計量的合適的酸處理完成，所述酸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等，以及有機酸如乙酸、丙酸、羥基乙酸、丙酮酸、草酸、蘋果酸、丙二酸、琥珀酸、馬來酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、對甲苯磺酸、水楊酸等。典型地，將游離堿溶解在惰性有機溶劑如二乙醚、乙酸乙酯、氯仿、乙醇或甲醇等中，并且將酸加入相似的溶劑中。將溫度保持在0℃至50℃之間。所得到的鹽自發(fā)地沉淀或可以用極性較小的溶劑使其從溶液析出。
實施例1
(RS)-N-(4-氯苯基)-6-嗎啉-2-基-吡啶-3-胺
a)2-溴-1-(5-溴-2-吡啶基)乙酮
將HBr/HOAc溶液(35％～39％，80mL)中的2-乙?；?5-溴吡啶(10.0g，CAS：214701-49-2)在70℃攪拌5min。逐滴加入Br2(9.6g)。在70℃繼續(xù)反應3h，TLC分析顯示起始材料的完全消耗。將混合物冷卻至室溫并通過濾紙過濾。在減壓下移除揮發(fā)物，并將殘留物在高真空下進一步干燥，得到粗制2-溴-1-(5-溴-2-吡啶基)乙酮(16.8g，產率：93.3％)，為棕色油狀物。粗產物在不純化的情況下用于下一步驟。MS(ESI)：281.9([{81Br}M+H]+)，277.9([{79Br}M+H]+)。
b)2-[芐基(2-羥基乙基)氨基]-1-(5-溴-2-吡啶基)乙酮
在室溫向2-溴-1-(5-溴-2-吡啶基)乙酮(16.8g)在無水DMF(150mL)中的溶液中分部分加入K2CO3(19.5g)。之后逐滴加入N-芐基氨基乙醇(10.2g，CAS：104-63-2)。在室溫繼續(xù)反應，直到TLC分析表明反應完成。將混合物倒入水(1000mL)中并用EtOAc(2x 1000mL)萃取。合并有機層并使用Na2SO4干燥。在減壓下移除揮發(fā)物。將殘留物通過急驟色譜(硅膠，以體積計石油醚/EtOAc＝10∶1)純化，得到2-[芐基(2-羥基乙基)氨基]-1-(5-溴-2-吡啶基)乙酮，為淺棕色油狀物(9g，產率：55％)。
c)(RS-2-[芐基(2-羥基乙基)氨基]-1-(5-溴-2-吡啶基)乙醇
在室溫，向2-[芐基(2-羥基乙基)氨基]-1-(5-溴-2-吡啶基)乙酮(4.1g)在EtOH(40mL)中的溶液中分部分加入NaBH4(540mg，14mmol)。TLC分析表明反應完成后，通過加入飽和NH4Cl水溶液(200mL)而小心地將反應猝滅。在減壓下移除EtOH。將殘留物用EtOAc(2x100mL)萃取。將合并的有機萃取物通過Na2SO4干燥并在減壓下濃縮。將殘留物在高真空下進一步干燥，提供粗制(RS)-2-[芐基(2-羥基乙基)氨基]-1-(5-溴-2-吡啶基)乙醇(3g，73％)，其在不純化的情況下用于下一步驟。MS(ESI)：352.9([{81Br}M+H]+)，350.9([{79Br}M+H]+)。
d)(RS)-4-芐基-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉
在室溫將氫化鈉(60％，2.7g)分部分加入(RS)-2-[芐基(2-羥基乙基)氨基]-1-(5-溴-2-吡啶基)乙醇(12g)在THF(100mL)中的溶液中。將反應混合物在室溫攪拌2h。將混合物冷卻至0℃，并且分部分加入1-(對-甲苯磺?；?咪唑(7g，CAS：2232-08-8)。30分鐘后，將混合物加溫至室溫。繼續(xù)攪拌過夜。將反應用飽和氯化銨水溶液猝滅。將混合物用乙酸乙酯萃取，用鹽水洗滌，并用Na2SO4干燥。通過色譜(硅膠，以體積計石油醚∶乙酸乙酯＝3∶1)純化提供(RS)-4-芐基-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉(4g，產率：34.5％)。
MS(ESI)：335.0([{81Br}M+H]+)，333.0([{79Bt}M+H]+)。
1H NMR(DMSO-d6)：8.60(1H)，8.05(1H)，7.42(1H)，7.30(5H)，4.51(1H)，3.97(1H)，3.82(1H)，3.59(1H)，3.47(1H)，3.07(1H)，2.75(1H)，2.19(1H)，1.91(m，1H)。
e)(RS)-2-(4-溴苯基)嗎啉
將(RS)-4-芐基-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉(4.35g)和氯甲酸1-氯乙基酯(2.5g，CAS：50893-53-3)在CH2Cl2(50mL)中的溶液在室溫攪拌4h。TLC分析表明起始材料完全消耗。在減壓下移除揮發(fā)物，并將殘留物在高真空下進一步干燥。將殘留物溶解在MeOH(40mL)中。在回流溫度攪拌溶液一小時。TLC分析表明反應完成。在減壓下移除揮發(fā)物，并將殘留物在高真空下進一步干燥，提供(RS)-2-(4-溴苯基)嗎啉(4.35g，13mmol產率：100％)。直接將粗產物用于下一步驟。
MS(ESI)：244.9([{81Br}M+H]+)，242.9([{79Br}M+H]+)。
f)(RS)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯
將K2CO3(5.38g)，二碳酸二叔丁酯(3.4g，CAS：424-99-5)，和來自上述反應(步驟e)的(RS)-2-(4-溴苯基)嗎啉(4.35g，13mmol)在THF(50mL)中的溶液在室溫攪拌2小時。TLC分析表明反應完成。加入水(200mL)。將混合物用乙酸乙酯(2x 100mL)萃取。將合并的有機層用水(200mL)洗滌。在減壓下濃縮有機層。急驟色譜(硅膠，以體積計石油醚/EtOAc＝3∶1)得到(RS)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯(3.95g，89％產率)
MS(ESI)：344.8([{81Br}M+H]+)，342.8([{79Br}M+H]+)。
1H NMR(DMSO-d6)：8.69(1H)，8.09(1H)，7.46(1H)，4.45(2H)，4.00(1H)，3.82(1H)，3.63(1H)，2.89(2H)，1.43(9H)。
g)(RS)-2-[5-(4-氯苯氨基)-2-吡啶基]嗎啉-4-甲酸叔丁酯
在N2氣氛下將(RS)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯(60mg)，4-氯苯胺(25mg，CAS：106-47-8)，4，5-雙(二苯基膦基)-9，9-二甲基呫噸(Xantphos，20mg，CAS：161265-03-8)，三(二亞芐基丙酮)二鈀(0)(16mg，CAS：51364-51-3)和Cs2CO3(170mg)在二烷(3mL)中的混合物在90℃攪拌12小時。CMS表明反應完成。將混合物用水(100mL)稀釋并用乙酸乙酯(2x 100mL)萃取。將合并的有機層用水(100mL)洗滌。將有機層在減壓下濃縮，提供粗制(RS)-2-[5-(4-氯苯氨基)-2-吡啶基]嗎啉-4-甲酸叔丁酯，為棕色油狀物。粗產物在不純化的情況下用于下一步驟。
h)(RS)-N-(4-氯苯基)-6-嗎啉-2-基-吡啶-3-胺
在室溫將來自上述反應(步驟g)的粗制(RS)-2-[5-(4-氯苯氨基)-2-吡啶基]嗎啉-4-甲酸叔丁酯溶解在CH2Cl2(3mL)中。加入三氟乙酸(TFA，1mL，CAS：76-05-1)。在室溫繼續(xù)反應一小時，在減壓下移除揮發(fā)物。通過制備型HPLC(流動相A：H2O，B：具有0.1％TFA的CH3CN，C18柱)的純化得到(RS)-N-(4-氯苯基)-6-嗎啉-2-基-吡啶-3-胺(25mg)，為淺黃色蠟狀固體。
MS(ESI)：292.1([{37Cl}M+H]+)，290.1([{35Cl}M+H]+)。
實施例2
(RS)-N-(4-溴苯基)-6-嗎啉-2-基-吡啶-3-胺
類似于實施例1，在步驟(g)中使用4-溴苯胺(CAS：106-40-1)替代4-氯苯胺，獲得標題化合物。淺黃色蠟狀固體。MS(ESI)：336.0([{81Br}M+H]+)，334.1([{79Br}M+H]+)。
實施例3
(RS)-N-(4-乙氧基苯基)-6-嗎啉-2-基-吡啶-3-胺
類似于實施例1，在步驟(g)中使用4-乙氧基苯胺(CAS：156-43-4)替代4-氯苯胺，獲得標題化合物。淺黃色油狀物。MS(ESI)：300.2([M+H]+)。
實施例4
(RS)-N-(3-氯苯基)-6-嗎啉-2-基-吡啶-3-胺
類似于實施例1，在步驟(g)中使用3-氯苯胺(CAS：108-42-9)替代4-氯苯胺，獲得標題化合物。淺黃色油狀物。MS(ESI)：292.0([{37Cl}M+H]+)，290.0([{35Cl}M+H]+)。
實施例5
(RS)-N-(4-氟苯基)-6-嗎啉-2-基-吡啶-3-胺
類似于實施例1，在步驟(g)中使用4-氟苯胺(CAS：371-40-4)替代4-氯苯胺，獲得標題化合物。淺黃色油狀物。MS(ESI)：274.1([M+H]+)。
實施例6
(RS)-6-嗎啉-2-基-N-[4-(三氟甲基)苯基]吡啶-3-胺
類似于實施例1，在步驟(g)中使用4-(三氟甲基)苯胺(CAS：455-14-1)替代4-氯苯胺，獲得標題化合物。淺黃色蠟狀固體。MS(ESI)：324.1([M+H]+)。
實施例7
(RS)-4-氯-N-(6-嗎啉-2-基-3-吡啶基)苯甲酰胺
a)(RS)-2-[5-(二苯亞甲基氨基)-2-吡啶基]嗎啉-4-甲酸叔丁酯
將(RS)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯(1.0g)，實施例1(f)，二苯甲酮亞胺(580mg，CAS：1013-88-3)，4，5-雙(二苯基膦基)-9，9-二甲基呫噸(Xantphos，500mg，CAS：161265-03-8)，三(二亞芐基丙酮)二鈀(0)(265mg，CAS：51364-51-3)和Cs2CO3(2.8g)在二烷(40mL)中的混合物通過向混合物中鼓泡氬數(shù)分鐘而脫氣。在Ar氣氛下將反應混合物在90℃攪拌12小時。TLC分析表明反應完成。將粗制反應混合物冷卻至室溫并過濾。將濾液在真空中濃縮并將殘留物用水(100mL)稀釋。將混合物用乙酸乙酯(2x 100mL)萃取。將合并的有機層用水(100mL)洗滌并濃縮至干燥。將殘留物通過急驟色譜(硅膠，以體積計CH2Cl2∶MeOH＝30∶1)純化，得到(RS)-2-[5-(二苯亞甲基氨基)-2-吡啶基]嗎啉-4-甲酸叔丁酯(1.28g，產率：99.9％)，為黃色固體。
b)(RS)-2-(5-氨基-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯
將來自上述反應(步驟a)的(RS)-2-[5-(二苯亞甲基氨基)-2-吡啶基]嗎啉-4-甲酸叔丁酯(1.28g)，羥胺鹽酸鹽(320mg，CAS：5470-11-1)和NaOAc(2.38g，CAS：127-09-3)在甲醇(50mL)中的混合物在室溫攪拌3小時。TLC分析表明反應完成。過濾混合物并濃縮。通過急驟色譜(硅膠，以體積計CH2Cl2∶MeOH＝100∶1至50∶1)純化得到(RS)-2-(5-氨基-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯(450mg，產率：55.4％)，為白色固體。
MS(ESI)：280.0([M+H]+)。
c)(RS)-2-[5-[(4-氯苯甲酰基)氨基]-2-吡啶基]嗎啉-4-甲酸叔丁酯
將(RS)-2-(5-氨基-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯(35mg)，4-氯苯甲酸(23mg，CAS：74-11-3)，HATU(57mg，CAS：148893-10-1)，和N，N-二異丙基乙胺(DIPEA，49mg，CAS：7087-68-5)溶解于DMF(1.5mL)中。將溶液在室溫攪拌直到TLC分析表明反應完成。將反應物用水(30mL)稀釋。將混合物用乙酸乙酯(2x 20mL)萃取。將合并的有機層用Na2SO4干燥并在減壓下濃縮。在高真空下進一步干燥提供粗制(RS)-2-[5-[(4-氯苯甲?；?氨基]-2-吡啶基]嗎啉-4-甲酸叔丁酯，為黃色固體，在不純化的情況下將其用于下一步驟。
d)(RS)-4-氯-N-(6-嗎啉-2-基-3-吡啶基)苯甲酰胺
將來自上述反應(步驟c)的(RS)-2-[5-[(4-氯苯甲?；?氨基]-2-吡啶基]嗎啉-4-甲酸叔丁酯溶解在CH2Cl2(2mL)和三氟乙酸(1mL)的混合物中。將溶液在室溫攪拌一小時，直到LCMS表明反應完成。將溶液在減壓下濃縮。通過制備型HPLC(流動相A：H2O，B：具有0.1％TFA的CH3CN，C18柱)純化得到(RS)-4-氯-N-(6-嗎啉-2-基-3-吡啶基)苯甲酰胺(32mg)，為白色固體。
MS(ESI)：320.1([{37Cl}M+H]+)，318.1([{35Cl}M+H]+)。
實施例8
(RS)-1-(3-氯苯基)-3-(6-嗎啉-2-基-3-吡啶基)脲
a)(RS)-2-[5-[(3-氯苯基)氨甲?；被鵠-2-吡啶基1嗎啉-4-甲酸叔丁酯
將(RS)-2-(5-氨基-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯(80mg)，實施例7(b)，異氰酸3-氯苯酯(44mg，CAS：2909-38-8)和三乙胺(90mg，CAS：121-44-8)溶解于CH2Cl2(1mL)中。將溶液在室溫攪拌，直到TLC分析表明反應完成。加入水(20mL)。將混合物用乙酸乙酯(2x 20mL)萃取。將合并的有機層用Na2SO4干燥并在減壓下濃縮。在高真空下進一步干燥提供粗制(RS)-2-[5-[(3-氯苯基)氨甲?；被鵠-2-吡啶基]嗎啉-4-甲酸叔丁酯，為黃色油狀物，在不純化的情況下將其用于下一步驟。
b)(RS)-1-(3-氯苯基)-3-(6-嗎啉-2-基-3-吡啶基)脲
將來自上述反應(步驟a)的(RS)-2-[5-[(3-氯苯基)氨甲酰基氨基]-2-吡啶基]嗎啉-4-甲酸叔丁酯溶解在三氟乙酸(0.5mL)和CH2Cl2(2mL)的混合物中。將溶液在室溫攪拌，直到TLC分析表明反應完成。加入水(20mL)。將混合物用乙酸乙酯(2x 20mL)萃取。將水層用飽和NaHCO3水溶液中和直到中性pH，并用CH2Cl2/CH3OH(以體積計10∶1，20mL)萃取。將合并的有機層在減壓下濃縮。將殘留物通過制備型HPLC(流動相A：H2O，B：具有0.1％TFA的CH3CN，C18柱)純化，得到(RS)-1-(3-氯苯基)-3-(6-嗎啉-2-基-3-吡啶基)脲，為白色固體(40mg)。
MS(ESI)：335.1([{37Cl}M+H]+)，333.1([{35Cl}M+H]+)。
1H NMR(甲醇-d4)：8.75(1H)，8.10(1H)，7.68(1H)，7.59(1H)，7.30(2H)，7.16(1H)，4.91(1H)，4.15(1H)，4.37(1H)，3.67(1H)，3.36(1H)，3.29(2H)。
實施例9
(RS)-1-(4-氟苯基)-3-(6-嗎啉-2-基-3-吡啶基)脲
類似于實施例8，在步驟(a)中使用異氰酸4-氟苯酯(CAS：1195-45-5)替代異氰酸3-氯苯酯，獲得標題化合物。淺黃色油狀物。MS(ESI)：317.1([M+H]+)。
實施例10
(RS)-1-(6-嗎啉-2-基-3-吡啶基)-3-[4-(三氟甲基)苯基]脲
類似于實施例8，在步驟(a)中使用異氰酸4-(三氟甲基)苯酯(CAS：1548-13-6)替代異氰酸3-氯苯酯，獲得標題化合物。淺黃色固體。MS(ESI)：367.1([M+H]+)。
實施例11
(RS)-1-(4-氯苯基)-3-(6-嗎啉-2-基-3-吡啶基)脲
類似于實施例8，在步驟(a)中使用異氰酸4-氯苯酯(CAS：104-12-1)替代異氰酸3-氯苯酯，獲得標題化合物。灰白色固體。MS(ESI)：335.1([{37Cl}M+H]+)，333.1([{35Cl}M+H]+)。
實施例12
(RS)-3-氯-N-(6-嗎啉-2-基-3-吡啶基)苯甲酰胺
類似于實施例7，在步驟(c)中使用3-氯苯甲酸(CAS：535-80-8)替代4-氯苯甲酸，獲得標題化合物。淺黃色固體。MS(ESI)：320.1([{37Cl}M+H]+)，318.1([{35Cl}M+H]+)。
實施例13
(RS)-4-乙氧基-N-(6-嗎啉-2-基-3-吡啶基)苯甲酰胺
類似于實施例7，在步驟(c)中使用4-乙氧基苯甲酸(CAS：619-86-3)替代4-氯苯甲酸，獲得標題化合物。白色固體。MS(ESI)：328.2([M+H]+)。
實施例14
(RS)-4-氟-N-(6-嗎啉-2-基-3-吡啶基)苯甲酰胺
類似于實施例7，在步驟(c)中使用4-氟苯甲酸(CAS：456-22-4)替代4-氯苯甲酸，獲得標題化合物。白色固體。MS(ESI)：302.1([M+H]+)。
實施例15
(RS)-4-氯-N-(6-嗎啉-2-基-3-吡啶基)-3-丙基-1H-吡唑-5-甲酰胺
類似于實施例7，在步驟(c)中使用4-氯-5-丙基-1H-吡唑-3-甲酸(CAS：1340578-20-2)替代4-氯苯甲酸，獲得標題化合物。白色固體。MS(ESI)：352.1([{37Cl}M+H]+)，350.1([{35Cl}M+H]+)。
實施例16
(RS)-N-(6-嗎啉-2-基-3-吡啶基)-2-(三氟甲基)吡啶-4-甲酰胺
類似于實施例7，在步驟(c)中使用2-(三氟甲基)吡啶-4-甲酸(CAS：131747-41-6)替代4-氯苯甲酸，獲得標題化合物。淺黃色固體。MS(ESI)：353.0([M+H]+)。
實施例17
(RS)-N-(6-嗎啉-2-基-3-吡啶基)-2-(三氟甲基)嘧啶-4-胺
類似于實施例1，在步驟(g)中，使用2-(三氟甲基)嘧啶-4-胺(CAS：672-42-4)替代4-氯苯胺，獲得標題化合物。白色固體。MS(ESI)：326.2([M+H]+)。
實施例18
N-(4-氯苯基)-6-[(2S)-嗎啉-2-基]吡啶-3-胺
a)(2R)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯和(2S)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯
通過使用以下條件由SFC分離(RS)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯：Chiralpak AD-3柱(100×4.6mm I.D.：3um)；5％至40％的CO2中的乙醇(0.05％DEA)作為流動相；3mL/min流速；波長：220nm。獲得(2S)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯(1.6g，保留時間：1.421min)。為第一級分。獲得(2R)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯(1.6g，保留時間：1.571min)，為第二級分。
b)N-(4-氯苯基)-6-[(2S)-嗎啉-2-基]吡啶-3-胺
類似于實施例1，在步驟(g)中使用(2S)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯替代(RS)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯以與4-氯苯胺(CAS：106-47-8)反應，獲得N-(4-氯苯基)-6-[(2S)-嗎啉-2-基]吡啶-3-胺。蠟狀固體。MS(ESI)：292.1([{37Cl}M+H]+)，290.2([{35Cl}M+H]+)。
實施例19
6-[(2S)-嗎啉-2-基]-N-[4-(三氟甲基)苯基]吡啶-3-胺
類似于實施例18，在步驟(b)中使用4-(三氟甲基)苯胺(CAS：455-14-1)替代4-氯苯胺，獲得標題化合物。白色固體。MS(ESI)：324.0([M+H]+)。
實施例20
N-(5-氯-2-吡啶基)-6-[(2S)-嗎啉-2-基]吡啶-3-胺
類似于實施例18，在步驟(b)中使用2-氨基-5-氯吡啶(CAS：1072-98-6)替代4-氯苯胺，獲得標題化合物。白色固體。MS(ESI)：293.0([{37Cl}M+H]+)，291.0([{35Cl}M+H]+)。
實施例21
N-(5-溴-2-吡啶基)-6-[(2S)-嗎啉-2-基]吡啶-3-胺
類似于實施例18，在步驟(b)中使用2-氨基-5-溴吡啶(CAS：1072-97-5)替代4-氯苯胺，獲得標題化合物。白色固體。MS(ESI)：337.0([{81Br}M+H]+)，335.0([{79Br}M+H]+)。
實施例22
6-[(2S)-嗎啉-2-基]-N-[6-(三氟甲基)-3-吡啶基]吡啶-3-胺
類似于實施例18，在步驟(b)中使用5-氨基-2-(三氟甲基)吡啶(CAS：106877-33-2)替代4-氯苯胺，獲得標題化合物。白色固體。MS(ESI)：325.1([M+H]+)。
實施例23
6-[(2S)-嗎啉-2-基]-N-[4-(三氟甲基)-2-吡啶基]吡啶-3-胺
類似于實施例18，在步驟(b)中使用2-氨基-4-(三氟甲基)吡啶(CAS：106447-97-6)替代4-氯苯胺，獲得標題化合物。白色固體。MS(ESI)：325.1([M+H]+)。
實施例24
N-(4-氯苯基)-6-[(2R)-嗎啉-2-基]吡啶-3-胺
類似于實施例1，在步驟(g)中使用(2R)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯替代(RS)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯以與4-氯苯胺(CAS：106-47-8)反應，獲得標題化合物。蠟狀固體。MS(ESI)：292.1([{37Cl}M+H]+)，290.1([{35Cl}M+H]+)。
實施例25
6-[(2R)-嗎啉-2-基]-N-[4-(三氟甲基)苯基]吡啶-3-胺
類似于實施例24，使用4-(三氟甲基)苯胺(CAS：455-14-1)替代4-氯苯胺，獲得標題化合物。白色固體。MS(ESI)：324.0([M+H]+)。
實施例26
N-(5-氯-2-吡啶基)-6-[(2R)-嗎啉-2-基]吡啶-3-胺
類似于實施例24，使用2-氨基-5-氯吡啶(CAS：1072-98-6)替代4-氯苯胺，獲得標題化合物。白色固體。MS(ESI)：293.1([{37Cl}M+H]+)，291.1([{35Cl}M+H]+)。
實施例27
6-[(2R)-嗎啉-2-基]-N-[6-(三氟甲基)-3-吡啶基]吡啶-3-胺
類似于實施例24，使用5-氨基-2-(三氟甲基)吡啶(CAS：106877-33-2)替代4-氯苯胺，獲得標題化合物。白色固體。MS(ESI)：325.0([M+H]+)。
實施例28
6-[(2R)-嗎啉-2-基]-N-[4-(三氟甲基)-2-吡啶基]吡啶-3-胺
類似于實施例24，使用2-氨基-4-(三氟甲基)吡啶(CAS：106447-97-6)替代4-氯苯胺，獲得標題化合物。白色固體。MS(ESI)：325.0([M+H]+)。
實施例29
N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-5-(三氟甲基)吡啶-2-胺
類似于實施例18，在步驟(b)中使用2-氨基-5-(三氟甲基)吡啶(CAS：74784-70-6)替代4-氯苯胺，獲得標題化合物。白色固體。MS(ESI)：325.1([M+H]+)。
實施例30
N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-6-(三氟甲基)吡啶-2-胺
類似于實施例18，在步驟(b)中使用2-氨基-6-(三氟甲基)吡啶(CAS：34486-24-3)替代4-氯苯胺，獲得標題化合物。白色固體。MS(ESI)：325.0([M+H]+)。
實施例31
4-氯-N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]苯甲酰胺
類似于實施例7，在步驟(a)中使用(2S)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯替代(RS)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯，獲得標題化合物。白色固體。MS(ESI)：319.9([{37Cl}M+H]+)，317.9([{35Cl}M+H]+)。
實施例32
3-氯-N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]苯甲酰胺
類似于實施例7，在步驟(a)中使用(2S)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯替代(RS)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯，并且在步驟(c)中使用3-氯苯甲酸(CAS：535-80-8)替代4-氯苯甲酸，獲得標題化合物。白色固體。MS(ESI)：319.9([{37Cl}M+H]+)，317.9([{35Cl}M+H]+)。
實施例33
N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-4-(三氟甲基)苯甲酰胺
類似于實施例7，在步驟(a)中使用(2S)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯替代(RS)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯，并且在步驟(c)中使用4-(三氟甲基)苯甲酸(CAS：455-24-3)替代4-氯苯甲酸，獲得標題化合物。白色固體。MS(ESI)：352.0([M+H]+)。
實施例34
N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-2-(三氟甲基)吡啶-4-甲酰胺
類似于實施例7，在步驟(a)中使用(2S)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯替代(RS)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯，并且在步驟(c)中使用2-(三氟甲基)吡啶-4-甲酸(CAS：131747-41-6)替代4-氯苯甲酸，獲得標題化合物。白色固體。MS(ESI)：352.9([M+H]+)。
實施例35
N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-3-(三氟甲基)苯甲酰胺
類似于實施例7，在步驟(a)中使用(2S)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯替代(RS)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯，并且在步驟(c)中使用3-(三氟甲基)苯甲酸(CAS：454-92-2)替代4-氯苯甲酸，獲得標題化合物。白色固體。MS(ESI)：352.0([M+H]+)。
實施例36
N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-6-(2，2，2-三氟乙氧基)吡啶-3-甲酰胺
類似于實施例7，在步驟(a)中使用(2S)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯替代(RS)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯，并且在步驟(c)中使用6-(2，2，2-三氟乙氧基)煙酸(CAS：175204-90-7)替代4-氯苯甲酸，獲得標題化合物。白色固體。MS(ESI)：382.9([M+H]+)。
實施例37
2-乙基-N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]嘧啶-5-甲酰胺
類似于實施例7，在步驟(a)中使用(2S)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯替代(RS)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯，并且在步驟(c)中使用2-乙基嘧啶-5-甲酸(CAS：72790-16-0)替代4-氯苯甲酸，獲得標題化合物。白色固體。MS(ESI)：314.0([M+H]+)。
實施例38
3-異丙基-N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
類似于實施例7，使用(2S)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯替代(RS)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯在步驟(a)中，并且在步驟(c)中使用3-異丙基吡唑-5-甲酸(CAS：92933-47-6)替代4-氯苯甲酸，獲得標題化合物。白色固體。MS(ESI)：316.0([M+H]+)。
實施例39
4-氯-N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-3-丙基-1H-吡唑-5-甲酰胺
類似于實施例7，在步驟(a)中使用(2S)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯替代(RS)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯，并且在步驟(c)中使用4-氯-5-丙基-1H-吡唑-3-甲酸(CAS：1340578-20-2)替代4-氯苯甲酸，獲得標題化合物。白色固體。MS(ESI)：352.1([{37Cl}M+H]+)，350.1([{35Cl}M+H]+)。
實施例40
4-氯-3-環(huán)丙基-N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
類似于實施例7，使用(2S)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯替代(RS)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯在步驟(a)中，并且在步驟(c)中使用4-氯-3-環(huán)丙基-1H-吡唑-5-甲酸(CAS：1291275-83-6)替代4-氯苯甲酸，獲得標題化合物。白色固體。MS(ESI)：349.9([{37Cl}M+H]+)，347.9([{35Cl}M+H]+)。
實施例41
1-(3-氯苯基)-3-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]脲
類似于實施例8，在步驟(a)中使用(2S)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯替代(RS)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯，獲得標題化合物。白色固體。MS(ESI)：335.0([{37Cl}M+H]+)，333.0([{35Cl}M+H]+)。
實施例42
1-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-3-[3-(三氟甲基)苯基]脲
類似于實施例8，在步驟(a)中使用(2S)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯替代(RS)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯，并且使用異氰酸3-(三氟甲基)苯酯(CAS：329-01-1)替代異氰酸3-氯苯酯，獲得標題化合物。白色固體。MS(ESI)：367.0([M+H]+)。
實施例43
4-氯-N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-5-甲酰胺
類似于實施例7，在步驟(a)中使用(2S)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯替代(RS)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯，并且在步驟(c)中使用4-氯-5-(三氟甲基)-2H-吡唑-3-甲酸(CAS：934758-95-9)替代4-氯苯甲酸，獲得標題化合物。白色固體。MS(ESI)：377.9([{37Cl}M+H]+)，375.9([{35Cl}M+H]+)。
實施例44
4-氯-3-甲基-N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
類似于實施例7，在步驟(a)中使用(2S)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯替代(RS)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯，并且在步驟(c)中使用4-氯-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酸(CAS：29400-84-8)替代4-氯苯甲酸，獲得標題化合物。白色固體。MS(ESI)：324.1([{37Cl}M+H]+)，322.2([{35Cl}M+H]+)。
實施例45
4-甲基-N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
類似于實施例7，在步驟(a)中使用(2S)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯替代(RS)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯，并且在步驟(c)中使用4-甲基-1H-吡唑-3-甲酸(CAS：82231-51-4)替代4-氯苯甲酸，獲得標題化合物。白色固體。MS(ESI)：288.2([M+H]+)。
實施例46
4-氯-1-甲基-N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-5-丙基-吡唑-3-甲酰胺
類似于實施例7，在步驟(a)中使用2S)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯替代(RS)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯，并且在步驟(c)中使用4-氯-1-甲基-5-丙基-1H-吡唑-3-甲酸(CAS：1248078-41-2)替代4-氯苯甲酸，獲得標題化合物。白色固體。MS(ESI)：366.0([{37Cl}M+H]+)，364.0([{35Cl}M+H]+)。
實施例47
N-(5-溴-2-吡啶基)-6-[(2R)-嗎啉-2-基]吡啶-3-胺
類似于實施例1，在步驟(g)中使用(2R)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯替代(RS)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯，并且使用2-氨基-5-溴吡啶(CAS：1072-97-5)替代4-氯苯胺(CAS：106-47-8)，獲得標題化合物。蠟狀固體。MS(ESI)：337.0([{81Br}M+H]+)，335.1([{79Br}M+H]+)。
實施例48
4-氯-1-甲基-N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-5-丙基-吡唑-3-甲酰胺
類似于實施例7，在步驟(a)中使用2R)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯替代(RS)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯，并且在步驟(c)中使用4-氯-1-甲基-5-丙基-1H-吡唑-3-甲酸(CAS：1248078-41-2)替代4-氯苯甲酸，獲得標題化合物。白色固體。MS(ESI)：366.2([{37Cl}M+H]+)，364.2([{35Cl}M+H]+)。
實施例49
N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-5-(三氟甲基)吡啶-2-胺
類似于實施例1，在步驟(g)中使用(2R)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯替代(RS)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯，并且使用2-氨基-5-(三氟甲基)吡啶(CAS：74784-70-6)替代4-氯苯胺(CAS：106-47-8)，獲得標題化合物。白色固體。MS(ESI)：325.2([M+H]+)。
實施例50
N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-6-(三氟甲基)吡啶-2-胺
類似于實施例1，在步驟(g)中使用(2R)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯替代(RS)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯，并且使用2-氨基-6-(三氟甲基)吡啶(CAS：34486-24-3)替代4-氯苯胺(CAS：106-47-8)，獲得標題化合物。白色固體。MS(ESI)：325.2([M+H]+)。
實施例51
4-氯-N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]苯甲酰胺
類似于實施例7，使用(2R)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯替代(RS)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯在步驟(a)中。白色固體，獲得標題化合物。MS(ESI)：320.1([{37Cl}M+H]+)，318.1([{35Cl}M+H]+)。
實施例52
3-氯-N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]苯甲酰胺
類似于實施例7，在步驟(a)中使用(2R)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯替代(RS)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯，并且在步驟(c)中使用3-氯苯甲酸(CAS：535-80-8)替代4-氯苯甲酸，獲得標題化合物。白色固體。MS(ESI)：320.1([{37Cl}M+H]+)，318.1([{35Cl}M+H]+)。
實施例53
N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-4-(三氟甲基)苯甲酰胺
類似于實施例7，在步驟(a)中使用(2R)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯替代(RS)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯，并且在步驟(c)中使用4-(三氟甲基)苯甲酸(CAS：455-24-3)替代4-氯苯甲酸，獲得標題化合物。白色固體。MS(ESI)：352.2([M+H]+)。
實施例54
N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-2-(三氟甲基)吡啶-4-甲酰胺
類似于實施例7，在步驟(a)中使用(2R)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯替代(RS)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯，并且在步驟(c)中使用2-(三氟甲基)吡啶-4-甲酸(CAS：131747-41-6)替代4-氯苯甲酸，獲得標題化合物。白色固體。MS(ESI)：353.1([M+H]+)。
實施例55
N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-3-(三氟甲基)苯甲酰胺
類似于實施例7，在步驟(a)中使用(2R)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯替代(RS)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯，并且在步驟(c)中使用3-(三氟甲基)苯甲酸(CAS：454-92-2)替代4-氯苯甲酸，獲得標題化合物。白色固體。MS(ESI)：352.1([M+H]+)。
實施例56
N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-6-(2，2，2-三氟乙氧基)吡啶-3-甲酰胺
類似于實施例7，在步驟(a)中使用2R)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯替代(RS)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯，并且在步驟(c)中使用6-(2，2，2-三氟乙氧基)煙酸(CAS：175204-90-7)替代4-氯苯甲酸，獲得標題化合物。蠟狀固體。MS(ESI)：383.2([M+H]+)。
實施例57
2-乙基-N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]嘧啶-5-甲酰胺
類似于實施例7，在步驟(a)中使用(2R)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯替代(RS)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯，并且在步驟(c)中使用2-乙基嘧啶-5-甲酸(CAS：72790-16-0)替代4-氯苯甲酸，獲得標題化合物。蠟狀固體。MS(ESI)：314.2([M+H]+)。
實施例58
3-異丙基-N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
類似于實施例7，在步驟(a)中使用(2R)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯替代(RS)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯，并且在步驟(c)中使用3-異丙基吡唑-5-甲酸(CAS：92933-47-6)替代4-氯苯甲酸，獲得標題化合物。蠟狀固體。MS(ESI)：316.2([M+H]+)。
實施例59
4-氯-N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-3-丙基-1H-吡唑-5-甲酰胺
類似于實施例7，在步驟(a)中使用(2R)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯替代(RS)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯，并且在步驟(c)中使用4-氯-5-丙基-1H-吡唑-3-甲酸(CAS：1340578-20-2)替代4-氯苯甲酸，獲得標題化合物。白色固體。MS(ESI)：352.2([{37Cl}M+H]+)，350.2([{35Cl}M+H]+)。
實施例60
4-氯-3-環(huán)丙基-N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基].3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
類似于實施例7，在步驟(a)中使用(2R)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯替代(RS)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯，并且在步驟(c)中使用4-氯-3-環(huán)丙基-1H-吡唑-5-甲酸(CAS：1291275-83-6)替代4-氯苯甲酸，獲得標題化合物。白色固體。MS(ESI)：350.2([{37Cl}M+H]+)，348.2([{35Cl}M+H]+)。
實施例61
1-(3-氯苯基)-3-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]脲
類似于實施例8，在步驟(a)中使用(2R)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯替代(RS)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯，獲得標題化合物。白色固體。MS(ESI)：335.1([{37Cl}M+H]+)，333.2([{35Cl}M+H]+)。
實施例62
1-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-3-[3-(三氟甲基)苯基]脲
類似于實施例8，在步驟(a)中使用(2R)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯替代(RS)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯，并且使用異氰酸3-(三氟甲基)苯酯(CAS：329-01-1)替代異氰酸3-氯苯酯，獲得標題化合物。白色固體。MS(ESI)：367.1([M+H]+)。
實施例63
4-氯-N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-5-甲酰胺
類似于實施例7，在步驟(a)中使用(2R)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯替代(RS)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯，并且在步驟(c)中使用4-氯-5-(三氟甲基)-2H-吡唑-3-甲酸(CAS：934758-95-9)替代4-氯苯甲酸，獲得標題化合物。白色固體。MS(ESI)：378.1([{37Cl}M+H]+)，376.1([{35Cl}M+H]+)。
實施例64
4-氯-3-甲基-N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
類似于實施例7，在步驟(a)中使用(2R)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯替代(RS)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯，并且在步驟(c)中使用4-氯-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酸(CAS：29400-84-8)替代4-氯苯甲酸，獲得標題化合物。白色固體。MS(ESI)：324.1([{37Cl}M+H]+)，322.1([{35Cl}M+H]+)。
實施例65
4-甲基-N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
類似于實施例7，在步驟(a)中使用(2R)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯替代(RS)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯，并且在步驟(c)中使用4-甲基-1H-吡唑-3-甲酸(CAS：82231-51-4)替代4-氯苯甲酸，獲得標題化合物。白色固體。MS(ESI)：288.2([M+H]+)。
實施例66
(R)-3-乙基-4-甲基-N-(6-(嗎啉-2-基)吡啶-3-基)-1H-吡唑-5-甲酰胺
類似于實施例7，在步驟(a)中使用(2R)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯替代(RS)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯，并且在步驟(c)中使用3-乙基-4-甲基-1H-吡唑-5-甲酸(CAS：957129-38-3)替代4-氯苯甲酸，獲得標題化合物。白色固體。MS(ESI)：316.2([M+H]+)。
實施例67
(S)-3-乙基-4-甲基-N-(6-(嗎啉-2-基)吡啶-3-基)-1H-吡唑-5-甲酰胺
類似于實施例7，在步驟(a)中使用(2S)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯替代(RS)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯，并且在步驟(c)中使用3-乙基-4-甲基-1H-吡唑-5-甲酸(CAS：957129-38-3)替代4-氯苯甲酸，獲得標題化合物。白色固體。MS(ESI)：316.2([M+H]+)。
實施例68
(R)-6-甲基-N-(6-(嗎啉-2-基)吡啶-3-基)-2-(三氟甲基)嘧啶-4-甲酰胺
類似于實施例7，在步驟(a)中使用2R)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯替代(RS)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯，并且在步驟(c)中使用6-甲基-2-(三氟甲基)嘧啶-4-甲酸(CAS：945717-59-9)替代4-氯苯甲酸，獲得標題化合物。白色固體。MS(ESI)：368.1([M+H]+)。
實施例69
(S)-6-甲基-N-(6-(嗎啉-2-基)吡啶-3-基)-2-(三氟甲基)嘧啶-4-甲酰胺
類似于實施例7，在步驟(a)中使用(2S)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯替代(RS)-2-(5-溴-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯，并且在步驟(c)中使用6-甲基-2-(三氟甲基)嘧啶-4-甲酸(CAS：945717-59-9)替代4-氯苯甲酸，獲得標題化合物。白色固體。MS(ESI)：368.1([M+H]+)。
實施例70
(RS)-N-(4-氯苯基)-2-嗎啉-2-基-嘧啶-5-胺
a)5-溴嘧啶-2-碳酰氯
在室溫向5-溴嘧啶-2-甲酸(10.0g，CAS：37131-87-6)在CH2Cl2(100mL)中的溶液中加入草酰氯(6.4g)。加入DMF(0.5mL)。在室溫繼續(xù)反應5小時。過濾混合物。將濾液在減壓下濃縮并在高真空下進一步干燥，得到粗制5-溴嘧啶-2-碳酰氯(10.9g，產率：100％)，為灰色固體，其在不純化的情況下用于下一步驟。
b)2-溴-1-(5-溴嘧啶-2-基)乙酮
在0℃在N2氣氛下向來自步驟(a)的5-溴嘧啶-2-碳酰氯(10.9g，49.5mmol)在CH3CN(200mL)中的溶液中逐滴加入己烷中的TMSCHN2(2M，74.3mL)。將溶液在室溫攪拌16小時。然后在0℃加入HBr在AcOH中的溶液(48％，20mL)。將溶液在室溫攪拌3小時。加入EtOAc(500ml)和水(100ml)。將有機層用鹽水洗滌，經Na2SO4干燥，并在減壓下濃縮。將粗產物通過急驟色譜(硅膠，以體積計石油醚∶EtOAc＝30/1～10/1)純化，得到2-溴-1-(5-溴嘧啶-2-基)乙酮(13.8g，產率：100％)，為黃色油狀物。
MS(ESI)：282.8({81Br+81Br}M+H)+，280.8({79Br+81Br}M+H)+，278.8({79Br+79Br}M+H)+。
c)2-[芐基(2-羥基乙基)氨基]-1-(5-溴嘧啶-2-基)乙酮
向來自步驟(b)的2-溴-1-(5-溴嘧啶-2-基)乙酮(13.8g，49.5mmol)在CH3CN(200mL)中的溶液中加入N-芐基氨基乙醇(7.5g，CAS：104-63-2)和K2CO3(13.7g)。將混合物在室溫攪拌過夜。將反應溶液倒入水中并用CH2Cl2(3x 200mL)萃取。將合并的有機層經Na2SO4干燥并在減壓下濃縮。將粗產物通過急驟色譜(硅膠，以體積計CH2Cl2∶MeOH＝200/1～50/1)純化，得到2-[芐基(2-羥基乙基)氨基]-1-(5-溴嘧啶-2-基)乙酮(3.3g，產率：在三個步驟中從步驟(a)總共18.7％)，為黃色油狀物。
MS(ESI)：349.9({79Br}M+H)+，351.9({81Br}M+H)+。
d)(RS)-2-[芐基(2-羥基乙基)氨基]-1-(5-溴滵啶-2-基)乙醇
在0℃向2-[芐基(2-羥基乙基)氨基]-1-(5-溴嘧啶-2-基)乙酮(3.3g)在MeOH(70mL)中的溶液中加入NaBH4(394mg)。將溶液在室溫攪拌一小時直到TLC分析表明起始材料消耗。將反應溶液倒入水中并用CH2Cl2(2x 200ml)萃取。將合并的有機層經Na2SO4干燥并在減壓下濃縮，得到粗制(RS)-2-[芐基(2-羥基乙基)氨基]-1-(5-溴嘧啶-2-基)乙醇(3.5g，產率：100％)，其在不純化的情況下用于下一步驟。
e)(RS)-4-芐基-2-(5-溴嘧啶-2-基)嗎啉
在0℃向(RS)-2-[芐基(2-羥基乙基)氨基]-1-(5-溴嘧啶-2-基)乙醇(3.5g，9.93mmol，直接來自步驟d)在THF(80mL)中的溶液中加入Et3N(1.5g)和甲磺酰氯(1.14g)。將混合物在室溫攪拌2小時，然后過濾。在0℃向濾液中加入叔戊醇鉀(1.5g)在THF(20mL)中的溶液。將混合物在室溫攪拌一小時。將反應溶液倒入EtOAc(500mL)中，用鹽水(50mL)洗滌，并且在減壓下濃縮。將粗產物通過急驟色譜(硅膠，以體積計CH2Cl2/MeOH＝200/1～50/1)純化，得到(RS)-4-芐基-2-(5-溴嘧啶-2-基)嗎啉(0.5g，從在兩個步驟中的步驟d，16％產率)。
MS(ESI)：333.9({79Br}M+H)+，335.9({81Br}M+H)+。
f)(RS)-2-(5-溴嘧啶-2-基)嗎啉
向(RS)-4-芐基-2-(5-溴嘧啶-2-基)嗎啉(0.5g)在CH2Cl2(10mL)中的溶液中加入氯甲酸2-氯乙酯(643mg，CAS：627-11-2)。然后將溶液在回流溫度攪拌4小時，直到TLC表明起始材料消耗。在減壓下移除揮發(fā)物。將殘留物溶解在甲醇(10mL)中并在回流溫度攪拌一小時。將反應溶液在減壓下濃縮。在高真空下進一步干燥，得到粗制(RS)-2-(5-溴嘧啶-2-基)嗎啉(365mg，產率：100％)，其在不純化的情況下用于下一步驟。
g)(RS)-2-(5-溴嘧啶-2-基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯
在室溫向來自步驟(f)的(RS)-2-(5-溴嘧啶-2-基)嗎啉(365mg，1.5mmol)和K2CO3(414mg)在THF(10mL)和水(5mL)的混合物中的溶液中加入二碳酸二叔丁酯(486mg，CAS：24424-99-5)。將反應繼續(xù)過夜。將混合物用CH2Cl2(2x 50mL)萃取。將合并的有機層用鹽水(20mL)洗滌，經Na2SO4干燥，并且在減壓下濃縮。通過急驟色譜(硅膠，以體積計CH2Cl2/MeOH＝200/1～50/1)的純化得到(RS)-2-(5-溴嘧啶-2-基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯(300mg，58％產率)，為黃色油狀物。
MS(ESI)：366.0({79Br}M+Na)+，368.0({81Br}M+Na)+，287.8({79Br}M-C4H8+H)+，289.8({81Br}M-C4H8+H)+。
h)(RS)-N-(4-氯苯基）-2-嗎啉-2-基-嘧啶-5-胺
向(RS)-2-(5-溴嘧啶-2-基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯(30mg)和4-氯苯胺(11mg，CAS：106-47-8)在二烷(1mL)中的溶液中加入4，5-雙(二苯基膦基)-9，9-二甲基呫噸(Xantphos，15mg，CAS：161265-03-8)，Cs2CO3(85mg，CAS：534-17-8)，和三(二亞芐基丙酮)二鈀(0)(8mg，CAS：51364-51-3)。在90℃在N2氣氛下進行反應過夜。將溶液用CH2Cl2(10mL)稀釋，用鹽水(20mL)洗滌，經Na2SO4干燥，并且在減壓下濃縮。將殘留物溶解在CH2Cl2(1mL)和TFA(1mL)的混合物中。將溶液在室溫攪拌3小時。在減壓下移除揮發(fā)物。將殘留物通過制備型HPLC(流動相A：H2O，B：具有0.1％TFA的CH3CN，C18柱)純化，得到(RS)-N-(4-氯苯基)-2-嗎啉-2-基-嘧啶-5-胺(10mg，兩個步驟中40％產率)，為白色固體。
1H NMR(400MHz，甲醇-d4)：δ8.54(2H)，7.33(2H)，7.17(2H)，4.9(1H)，4.1(1H)，3.97(1H)，3.63(1H)，3.51(1H)，3.35～3.23(2H)。
MS(ESI)：290.9({35Cl}M+H)+，292.9({37Cl}M+H)+。
實施例71
(RS)-2-嗎啉-2-基-N-[4-(三氟甲基)苯基]嘧啶-5-胺
類似于實施例70，在步驟(h)中使用4-(三氟甲基)苯胺(CAS：455-14-1)替代4-氯苯胺，獲得標題化合物。白色固體。MS(ESI)：325.0([M+H]+)。
實施例72
(RS)-4-氯-N-(2-嗎啉-2-基嘧啶-5-基)苯甲酰胺
a)(RS)-2-[5-(二苯亞甲基氨基)嘧啶-2-基]嗎啉-4-甲酸叔丁酯
向(RS)-2-(5-溴嘧啶-2-基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯(230mg)和二苯甲酮亞胺(127mg，CAS：1013-88-3)在二烷(10mL)中的溶液中加入4，5-雙(二苯基膦基)-9，9-二甲基呫噸(Xantphos，116mg，CAS：161265-03-8)，三(二亞芐基丙酮)二鈀(0)(61.3mg，CAS：51364-51-3)，和Cs2CO3(653mg，CAS：534-17-8)。在90℃在N2氣氛下進行反應過夜。將溶液倒入水(100mL)中并用CH2Cl2(2x 150mL)萃取。將合并的有機層經Na2SO4干燥并在減壓下濃縮，得到粗制(RS)-2-[5-(二苯亞甲基氨基)嘧啶-2-基]嗎啉-4-甲酸叔丁酯(297mg，產率：100％)，其在不純化的情況下用于下一步驟。
b)(RS)-2-(5-氨基嘧啶-2-基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯
向(RS)-2-[5-(二苯亞甲基氨基)嘧啶-2-基]嗎啉-4-甲酸叔丁酯(297mg，0.668mmol)在MeOH(10mL)中的溶液中加入乙酸鈉(274mg，CAS：127-09-3)和羥胺鹽酸鹽(69.6mg，CAS：5470-11-1)。將混合物在室溫攪拌2小時，直到TLC分析表明起始材料的完全消耗。將溶液倒入水(50mL)中，用CH2Cl2(2x 100mL)萃取。將合并的有機層經Na2SO4干燥，在減壓下濃縮，并且通過急驟色譜(硅膠，以體積計CH2Cl2/MeOH＝100/1～50/1)純化，得到(RS)-2-(5-氨基嘧啶-2-基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯(100mg，產率：55.6％)，為黃色固體。
MS(ESI)：281.2(M+H)+。
c)(RS)-4-氯-N-(2-嗎啉-2-基嘧啶-5-基)苯甲酰胺
向4-氯苯甲酸(16.7mg，CAS：74-11-3)在DMF(1mL)中的溶液中加入HATU(40.3mg，CAS：CAS：148893-10-1)和DIPEA(37.2mg，CAS：7087-68-5)。將混合物在室溫攪拌30分鐘。加入(RS)-2-(5-氨基嘧啶-2-基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯(27mg)。在室溫繼續(xù)反應過夜。然后將溶液用CH2Cl2(10mL)稀釋，用鹽水(20mL)洗滌，經Na2SO4干燥，并在減壓下濃縮。將殘留物溶解在CH2Cl2(1mL)和三氟乙酸(TFA，1mL，CAS：76-05-1)的混合物中。將溶液在室溫攪拌2小時。在減壓下移除揮發(fā)物。將殘留物通過制備型HPLC(流動相A：H2O，B：具有0.1％TFA的CH3CN，C18柱)純化，得到(RS)-4-氯-N-(2-嗎啉-2-基嘧啶-5-基)苯甲酰胺(8mg，在兩個步驟中26％產率)，為白色固體。
1H NMR(400MHz，甲醇-d4)：δ9.24(2H)，7.98(2H)，7.57(2H)，4.97(1H)，4.21(1H)，4.02(1H)，3.73(1H)，3.54(1H)，3.73～3.30(2H)。
MS(ESI)：319.0({35Cl}M+H)+，321.0({37Cl}M+H)+。
實施例73
(RS)-1-(3-氯苯基)-3-(2-嗎啉-2-基嘧啶-5-基)脲
向(RS)-2-(5-氨基嘧啶-2-基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯(27mg)在CH2Cl2(1mL)中的溶液中加入Et3N(19.4mg，CAS：121-44-8)和異氰酸3-氯苯酯(14.7mg，CAS：2909-38-8)。在室溫進行反應過夜。將溶液用CH2Cl2(10mL)稀釋，用檸檬酸水溶液(2x20mL)和鹽水(20mL)洗滌，經Na2SO4干燥，并在減壓下濃縮。將殘留物溶解在CH2Cl2(1mL)和三氟乙酸(TFA，1mL，CAS：76-05-1)的混合物中。將溶液在室溫攪拌2小時。在減壓下移除揮發(fā)物。將殘留物通過制備型HPLC(流動相A：H2O，B：具有0.1％TFA的CH3CN，C18柱)純化，得到標題化合物(7mg，在兩個步驟中22％產率)，為白色固體。
1H NMR(400MHz，甲醇-d4)：δ9.00(2H)，7.67(1H)，7.32～7.26(2H)，7.05(1H)，4.95(1H)，4.18(1H)，4.01(1H)，3.67(1H)，3.53(1H)，3.36～3.30(2H)。
MS(ESI)：334.1({35Cl}M+H)+，336.1({37Cl}M+H)+。
實施例74
(RS)-4-氯-3-乙氧基-N-(6-嗎啉-2-基-3-吡啶基)-1H-吡唑-5-甲酰胺
a)5-羥基-1H-吡唑-3-甲酸甲酯
向一水合肼(3.85g，0.077mol，CAS：7803-57-8)在甲苯(30mL)中的溶液中加入乙酸(15mL)和丁炔二酸二甲酯(10g，0.07mol，CAS：762-42-5)。將溶液在室溫攪拌3小時。然后將混合物倒入冰水中。將沉淀通過過濾收集并用冷水洗滌。在高真空下進一步干燥，得到5-羥基-1H-吡唑-3-甲酸甲酯(7.5g，75％產率)，為白色固體。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ12.81(s，1H)，10.04(br，1H)，5.96(br，1H)，3.77(s，3H)。
b)5-乙氧基-1H-吡唑-3-甲酸甲酯
向5-羥基-1H-吡唑-3-甲酸甲酯(4g，28.17mmol)在DMF(25mL)中的溶液中加入K2CO3(5.83g，42.2mmol)和碘乙烷(4.8g，31mmol)。將溶液在室溫攪拌15小時。然后將混合物倒入冰水中。將混合物用乙酸乙酯(100mL)萃取。將有機層用鹽水(30mL)洗滌，經Na2SO4干燥，并在減壓下濃縮。從二氯甲烷(10ml)再結晶，得到5-乙氧基-1H-吡唑-3-甲酸甲酯(2.2g，46％產率)，為白色固體。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ13.13(s，1H)，6.23(s，1H)，4.11(d，2H)，3.81(s，3H)，1.28(m，3H)。
c)4-氯-5-乙氧基-1H-吡唑-3-甲酸甲酯
在0℃向5-乙氧基-1H-吡唑-3-甲酸甲酯(2.2g，12.94mmol)在DMF(40mL)中的溶液中加入N-氯琥珀酰亞胺(2.06g，15.53mmol，CAS：128-09-6)。然后將混合物加溫至50℃。繼續(xù)攪拌15小時。將反應溶液在減壓下濃縮以去除約50％量的DMF。然后將溶液倒入冰水中。將沉淀通過過濾收集并用冷水洗滌。在高真空下進一步干燥，得到4-氯-5-乙氧基-1H-吡唑-3-甲酸甲酯(1.65g，63％產率)，為白色固體。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ13.44(br，1H)，4.24(d，2H)，3.85(s，3H)，1.32(t，3H)。
d)4-氯-5-乙氧基-1H-吡唑-3-甲酸
在0℃向4-氯-5-乙氧基-1H-吡唑-3-甲酸甲酯(1.65g，8.06mmol)在THF(30mL)中的溶液中加入1M NaOH水溶液(16.1mL，16.1mmol)。然后將溶液回流3小時。將反應混合物冷卻至室溫并倒入水中。用濃HCl將pH調節(jié)至～1。將沉淀通過過濾收集并用冷水洗滌。在高真空下進一步干燥，得到4-氯-5-乙氧基-1H-吡唑-3-甲酸(1.4g，91.5％產率)，為白色固體。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ13.25(s，1H)，4.23(d，2H)，1.32(t，3H)。
e)(RS)-4-氯-3-乙氧基-N-(6-嗎啉-2-基-3-吡啶基)-1H-吡唑-5-甲酰胺
類似于實施例7，在步驟(c)中使用4-氯-5-乙氧基-1H-吡唑-3-甲酸替代4-氯苯甲酸，獲得標題化合物。白色固體。
1H NMR(400MHz，甲醇-d4)：δ8.91(d，1H)，8.26(dd，1H)，7.62(d，1H)，4.90(s，1H)，4.33(m，2H)，4.25(m，1H)，4.04(m，1H)，3.70(d，1H)，3.36(d，1H)，3.29(m，2H)，1.43(t，3H)。
MS(ESI)：352.1({35Cl}M+H)+，354.1({37Cl}M+H)+。
實施例75
(RS)-4-氯-N-(6-嗎啉-2-基-3-吡啶基)-3-(2，2，2-三氟乙氧基)-1H-吡唑-5-甲酰胺
a)5-(2，2，2-三氟乙氧基)-1H-吡唑-3-甲酸甲酯
向5-羥基-1H-吡唑-3-甲酸甲酯(10g，70.4mmol)，Cs2CO3(25g，77.5mmol)在DMF(100ml)中的溶液中分部分加入三氟甲磺酸2，2，2-三氟乙酯(16.3g，70.4mmol，CAS：6226-25-1)。將溶液在室溫攪拌過夜。小心將反應混合物倒入500ml冰-水中。將沉淀通過過濾收集并用冷水洗滌。在高真空下進一步干燥得到5-(2，2，2-三氟乙氧基)-1H-吡唑-3-甲酸甲酯(12g，76％產率)，為白色固體。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ13.41(s，1H)，6.43(s，1H)，4.86(m，2H)，3.84(s，3H)
MS(ESI)：225.1([M+H]+)。
b)4-氯-5-(2，2，2-三氟乙氧基)-1H-吡唑-3-甲酸甲酯
在0℃向5-(2，2，2-三氟乙氧基)-1H-吡唑-3-甲酸甲酯(1.9g，8.47mmol)在DMF(30mL)中的溶液中加入N-氯琥珀酰亞胺(1.35g，10.17mmol)。然后將溶液在50℃攪拌15小時。將反應溶液在真空下濃縮以去除50％的DMF。然后將溶液倒入水中。將沉淀通過過濾收集，用水洗滌，并在高真空下干燥，得到4-氯-5-(2，2，2-三氟乙氧基)-1H-吡唑-3-甲酸甲酯(1.9g，87％產率)，為白色固體。
c)4-氯-5-(2，2，2-三氟乙氧基)-1H-吡唑-3-甲酸
在0℃向4-氯-5-(2，2，2-三氟乙氧基)-1H-吡唑-3-甲酸甲酯(1.9g，7.35mmol)在THF(15mL)和MeOH(15mL)的混合物中的溶液中加入1M NaOH水溶液(14.7mL，14.7mmol)。然后將溶液在回流溫度攪拌3小時。將反應溶液倒入水中。用濃HCl溶液將pH調節(jié)至約1。將沉淀通過過濾收集，用水洗滌，并在高真空下干燥，得到4-氯-5-(2，2，2-三氟乙氧基)-1H-吡唑-3-甲酸(1.5g，83％產率)，為白色固體。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ13.91(br，1H)，13.56(s，1H)，4.91(m，2H)。
MS(ESI)：245.0({35Cl}M+H)+，247.0({37Cl}M+H)+。
d)(RS)-4-氯-N-(6-嗎啉-2-基-3-吡啶基)-3-(2，2，2-三氟乙氧基)-1H-吡唑-5-甲酰胺
類似于實施例7，在步驟(c)中使用4-氯-5-(2，2，2-三氟乙氧基)-1H-吡唑-3-甲酸替代4-氯苯甲酸，獲得標題化合物。白色固體。
1H NMR(400MHz，甲醇-d4)：δ8.90(d，1H)，8.26(dd，1H)，7.63(d，1H)，4.91(s，1H)，4.81(m，2H)，4.25(d，1H)，4.03(m，1H)，3.70(d，1H)，3.36(d，1H)，3.29(m，2H)。
MS(ESI)：406.1({35Cl}M+H)+，408.1({37Cl}M+H)+。
實施例76
4-氯-3-乙基-N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
類似于實施例67，使用4-氯-3-乙基-1H-吡唑-5-甲酸(CAS：158668-22-5)替代3-乙基-4-甲基-1H-吡唑-5-甲酸，獲得標題化合物。白色固體。
MS(ESI)：336.0({35Cl}M+H)+，338.0({37Cl}M+H)+。
實施例77
3-乙基-4-氟-N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
類似于實施例67，使用5-乙基-4-氟-1H-吡唑-3-甲酸(CAS：681034-63-9)替代3-乙基-4-甲基-1H-吡唑-5-甲酸，獲得標題化合物。白色固體。
MS(ESI)：320.0(M+H)+。
實施例78
4-溴-3-乙基-N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
類似于實施例67，使用4-溴-5-乙基-1H-吡唑-3-甲酸(CAS：1291177-22-4)替代3-乙基-4-甲基-1H-吡唑-5-甲酸，獲得標題化合物。蠟狀固體。
MS(ESI)：381.9([{81Br}M+H]+)，379.9([{79Br}M+H]+)。
實施例79
4-氟-N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-3-丙基-1H-吡唑-5-甲酰胺
類似于實施例67，使用4-氟-5-丙基-1H-吡唑-3-甲酸(CAS：681034-64-0)，替代3-乙基-4-甲基-1H-吡唑-5-甲酸，獲得標題化合物。白色固體。
MS(ESI)：334.0(M+H)+。
實施例80
3-環(huán)丙基-4-氟-N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
類似于實施例67，使用5-環(huán)丙基-4-氟-1H-吡唑-3-甲酸(CAS：681034-74-2)替代3-乙基-4-甲基-1H-吡唑-5-甲酸，獲得標題化合物。蠟狀固體。
MS(ESI)：332.0(M+H)+。
實施例81
4-溴-3-環(huán)丙基-N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
類似于實施例67，使用4-溴-5-環(huán)丙基-2H-吡唑-3-甲酸(CAS：1290764-98-5)替代3-乙基-4-甲基-1H-吡唑-5-甲酸，獲得標題化合物。白色固體。
MS(ESI)：394.0([{81Br}M+H]+)，392.0([{79Br}M+H]+)。
實施例82
4-氯-3-乙基-N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
類似于實施例66，使用4-氯-3-乙基-1H-吡唑-5-甲酸(CAS：158668-22-5)替代3-乙基-4-甲基-1H-吡唑-5-甲酸，獲得標題化合物。白色固體。
MS(ESI)：336.1({35Cl}M+H)+，338.1({37Cl}M+H)+。
實施例83
3-乙基-4-氟-N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
類似于實施例66，使用5-乙基-4-氟-1H-吡唑-3-甲酸(CAS：681034-63-9)替代3-乙基-4-甲基-1H-吡唑-5-甲酸，獲得標題化合物。白色固體。
MS(ESI)：320.2(M+H)+。
實施例84
4-溴-3-乙基-N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
類似于實施例66，使用4-溴-5-乙基-1H-吡唑-3-甲酸(CAS：1291177-22-4)替代3-乙基-4-甲基-1H-吡唑-5-甲酸，獲得標題化合物。白色固體。
MS(ESI)：382.1([{81Br}M+H]+)，380.1([{79Bt}M+H]+)。
實施例85
4-氟-N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-3-丙基-1H-吡唑-5-甲酰胺
類似于實施例66，使用4-氟-5-丙基-1H-吡唑-3-甲酸(CAS：681034-64-0)，替代3-乙基-4-甲基-1H-吡唑-5-甲酸，獲得標題化合物。白色固體。
MS(ESI)：334.2(M+H)+。
實施例86
3-環(huán)丙基-4-氟-N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
類似于實施例66，使用5-環(huán)丙基-4-氟-1H-吡唑-3-甲酸(CAS：681034-74-2)替代3-乙基-4-甲基-1H-吡唑-5-甲酸，獲得標題化合物。蠟狀固體。
MS(ESI)：332.2(M+H)+。
實施例87
4-溴-3-環(huán)丙基-N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
類似于實施例66，使用4-溴-5-環(huán)丙基-2H-吡唑-3-甲酸(CAS：1290764-98-5)替代3-乙基-4-甲基-1H-吡唑-5-甲酸，獲得標題化合物。白色固體。
MS(ESI)：394.0([{81Br}M+H]+)，392.0([{79Br}M+H]+)。
實施例88
3-異丁基-N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
類似于實施例67，使用3-異丁基-1H-吡唑-5-甲酸(CAS：92933-49-8)替代3-乙基-4-甲基-1H-吡唑-5-甲酸，獲得標題化合物。白色固體。
MS(ESI)：330.2(M+H)+。
實施例89
4-氟-3-異丁基-N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
a)6-甲基-2，4-二氧代-庚酸乙酯
在0℃向乙醇鈉(7g，0.1mol)在無水乙醇(150mL)中的溶液中加入草酸二乙酯(15g，0.1mol，CAS：95-92-1)。之后分部分加入4-甲基-2-戊酮(10g，0.1mol，CAS：108-10-1)。將混合物在50℃攪拌20小時。將溶液冷卻至室溫并直接用于下一步驟。
b)5-異丁基-1H-吡唑-3-甲酸乙酯
向來自步驟(a)的6-甲基-2，4-二氧代-庚酸乙酯(0.1mol)在乙醇(150mL)中的溶液中加入乙酸(9g，0.15mol)和一水合肼(8.1g，0.15mol，CAS：7803-57-8)。將反應混合物攪拌12小時。然后將反應溶液在減壓下濃縮，用水稀釋，并用乙酸乙酯(2x 300mL)萃取兩次。將合并的有機層用鹽水(50mL)洗滌，經Na2SO4干燥，經薄硅石墊過濾，并在減壓下濃縮。將粗產物通過硅膠色譜純化，得到5-異丁基-1H-吡唑-3-甲酸乙酯，為白色固體(13g，68％產率)。
MS(ESI)：197.2(M+H)+。
c)4-氟-5-異丁基-1H-吡唑-3-甲酸乙酯
在0℃向5-異丁基-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(5.0g，25.5mmol)在CH3CN(300mL)中的溶液中加入(18.0g，51.0mmol，CAS：140681-55-6)。然后將溶液加熱至70℃。繼續(xù)攪拌15小時。將反應溶液冷卻至室溫并在減壓下濃縮。將殘留物用HCl水溶液(3N，200mL)稀釋并用二氯甲烷(100mL x 2)萃取。將合并的有機層用鹽水(20mL)洗滌，經Na2SO4干燥，并在減壓下濃縮。通過硅膠柱色譜(以體積計，二氯甲烷/MeOH＝200/1～100/1)純化，得到4-氟-5-異丁基-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(1.4g，26％的產率)，為黃色油狀物。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ4.42(q，2H)，2.55(d，2H)，2.00(m，1H)，1.40(t，3H)，0.96(d，6H)。
MS(ESI)：215.1(M+H)+。
d)4-氟-5-異丁基-1H-吡唑-3-甲酸
在0℃向4-氟-5-異丁基-1H-吡唑-3-甲酸(1.4g，6.54mmol)在THF/MeOH(V/V＝1∶1，20mL)中的溶液中加入1M NaOH水溶液(13.1mL，13.1mmol)。然后將溶液回流3小時。將反應溶液倒入水中。用濃HCl調節(jié)pH至約1。將混合物用乙酸乙酯(100mL x2)萃取。將合并的有機層用鹽水(20mL)洗滌，在減壓下濃縮并從乙酸乙酯(30mL)再結晶，得到4-氟-5-異丁基-1H-吡唑-3-甲酸(1.2g，99％產率)，為黃色固體。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ2.44(d，2H)，1.90(m，1H)，0.87(d，6H)。
MS(ESI)：187.1(M+H)+。
e)4-氟-3-異丁基-N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
類似于實施例67，使用4-氟-5-異丁基-1H-吡唑-3-甲酸替代3-乙基-4-甲基-1H-吡唑-5-甲酸，獲得標題化合物。蠟狀固體。
MS(ESI)：348.2(M+H)+。
實施例90
3-丁基-4-氟-N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
類似于實施例67，使用5-丁基-4-氟-1H-吡唑-3-甲酸(CAS：681034-65-1)替代3-乙基-4-甲基-1H-吡唑-5-甲酸，獲得標題化合物。蠟狀固體。
MS(ESI)：348.2(M+H)+。
實施例91
3-丁基-N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
類似于實施例67，使用5-丁基-1H-吡唑-3-甲酸(CAS：92933-48-7)替代3-乙基-4-甲基-1H-吡唑-5-甲酸，獲得標題化合物。蠟狀固體。
MS(ESI)：330.2(M+H)+。
實施例92
5-異丙基-N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-2-(2，2，2-三氟乙基)吡唑-3-甲酰胺
a)5-異丙基-1H-吡唑-3-甲酸乙酯
向4-甲基-3-氧代戊酸乙酯(4g，21.6mmol，CAS：7152-15-0)在乙醇(100mL)中的溶液中加入乙酸(1.9g，32.4mmol)和一水合肼(1.7g，0.032mol，CAS：7803-57-8)。將反應混合物攪拌12小時，直到LCMS分析表明反應完成。將反應溶液在減壓下濃縮并用水稀釋。將混合物用二氯甲烷(2x 100mL)萃取兩次。將合并的有機層用鹽水(40mL)洗滌，經Na2SO4干燥，經薄硅石墊過濾，并在真空下濃縮，得到5-異丙基-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(2.1g，54％產率)，為黃色油狀物。
MS(ESI)：183.2(M+H)+。
b)5-異丙基-2-(2，2，2-三氟乙基)吡唑-3-甲酸乙酯
向5-異丙基-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(1g，5.5mmol)在DMF(10mL)中的溶液中加入2，2，2-三氟乙基碘(1.7g，8.3mmol，CAS：353-83-3)和Cs2CO3(2.1g，11mmol)。將反應混合物在50℃攪拌12小時。然后將反應溶液在減壓下濃縮并用水稀釋。將混合物用乙酸乙酯(2x 100mL)萃取。將合并的有機層用鹽水(50mL)洗滌，經Na2SO4干燥，經薄硅石墊過濾，并在真空下濃縮。將粗產物通過硅膠色譜純化，得到5-異丙基-2-(2，2，2-三氟乙基)吡唑-3-甲酸乙酯(500mg，36％產率)，為白色固體。
MS(ESI)：265.2(M+H)+。
c)5-異丙基-2-(2，2，2-三氟乙基)吡唑-3-甲酸
向5-異丙基-2-(2，2，2-三氟乙基)吡唑-3-甲酸乙酯(2g，7.6mmol)在MeOH/H2O(V/V＝3∶1，12mL)中的溶液中加入NaOH(1.2g，30.3mmol)。將反應混合物在30℃攪拌2小時。將反應溶液在減壓下濃縮并用水稀釋。將混合物用2N HCl(30mL)酸化至約pH＝2。將混合物用乙酸乙酯(2x100mL)萃取。將合并的有機層用鹽水(100mL)洗滌，經Na2SO4干燥，經薄硅石墊過濾，并在減壓下濃縮。在高真空下進一步干燥，得到5-異丙基-2-(2，2，2-三氟乙基)吡唑-3-甲酸(1.6g，89％產率)，為白色固體。
1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ6.91(s，1H)，5.25(q，2H)，3.04(m，1H)，1.29(d，6H)。
MS(ESI)：237.2(M+H)+。
d)5-異丙基-N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-2-(2，2，2-三氟乙基)吡唑-3-甲酰胺
類似于實施例67，使用5-異丙基-2-(2，2，2-三氟乙基)吡唑-3-甲酸替代3-乙基-4-甲基-1H-吡唑-5-甲酸，獲得標題化合物。白色固體。
MS(ESI)：398.2(M+H)+。
實施例93
2-異丙基-N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-5-(2，2，2-三氟乙氧基)吡唑-3-甲酰胺
a)5-羥基-1H-吡唑-3-甲酸甲酯
向一水合肼(44.8g，0.894mol，CAS：7803-57-8)在甲苯(300mL)中的溶液中加入乙酸(180mL)和丁炔二酸二甲酯(100mL，0.813mol，CAS：762-42-5)。將溶液在室溫攪拌3小時。將混合物倒入冰水中。將沉淀通過過濾收集，用冷水洗滌，并且在高真空下干燥，得到5-羥基-1H-吡唑-3-甲酸甲酯(67.5g，59％產率)，為白色固體。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ12.81(bra，1H)，10.03(br，1H)，5.91(s，1H)，3.78(s，3H)。
b)5-(2，2，2-三氟乙氧基)-1H-吡唑-3-甲酸甲酯
向5-羥基-1H-吡唑-3-甲酸甲酯(10g，70.4mmol)，Cs2CO3(25g，77.5mmol)在DMF(100ml)中的溶液中分部分加入三氟甲磺酸2，2，2-三氟乙酯(16.3g，70.4mmol)。將溶液在室溫攪拌過夜。然后將反應混合物倒入500ml冰水中。將沉淀通過過濾收集，用冷水洗滌，并且在高真空下干燥，得到5-(2，2，2-三氟乙氧基)-1H-吡唑-3-甲酸甲酯(12g，76％產率)，為白色固體。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ13.41(s，1H)，6.43(s，1H)，4.86(m，2H)，3.84(s，3H)
MS(ESI)：225.1(M+H)+。
c)2-異丙基-5-(2，2，2-三氟乙氧基)吡唑-3-甲酸甲酯
向5-(2，2，2-三氟乙氧基)-1H-吡唑-3-甲酸甲酯(12.0g，53.4mm0l)和Cs2CO3(52.0g，161mmol)在DMF(100.0ml)中的溶液中分部分加入2-溴丙烷(7.2g，56.0mmol)。將溶液在室溫攪拌過夜。然后將反應溶液在真空中濃縮以去除至少50％的DMF。將剩余的混合物倒入水中。將沉淀通過過濾收集，用冷水洗滌，在高真空下干燥，得到2-異丙基-5-(2，2，2-三氟乙氧基)吡唑-3-甲酸甲酯(10.3g，74％產率)，為白色固體。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ6.45(s，1H)，5.35(m，1H)，4.82(q，2H)，3.83(s，3H)，1.371(d，6H)。
MS(ESI)：267.0(M+H)+。
d)2-異丙基-5-(2，2，2-三氟乙氧基)吡唑-3-甲酸
將2-異丙基-5-(2，2，2-三氟乙氧基)吡唑-3-甲酸甲酯(4.3g，16.2mmol)和NaOH(1.9g，48.5mmol)在MeOH/H2O(V/V＝3∶1，50.0ml)中的溶液在室溫攪拌過夜。通過在0℃加入濃HCl(約5ml)將反應混合物酸化至pH＝4～5。將溶液倒入500ml冰水中。將沉淀通過過濾收集，用冷水洗滌，并且在高真空下干燥，得到2-異丙基-5-(2，2，2-三氟乙氧基)吡唑-3-甲酸(3.86g，95％產率)，為白色固體。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ6.37(s，1H)，5.38(m，1H)，4.79(q，2H)，1.34(d，6H)。
MS(ESI)：252.9(M+H)+。
e)2-異丙基-N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-5-(2，2，2-三氟乙氧基)吡唑-3-甲酰胺
類似于實施例67，使用2-異丙基-5-(2，2，2-三氟乙氧基)吡唑-3-甲酸替代3-乙基-4-甲基-1H-吡唑-5-甲酸，獲得標題化合物。白色固體。
MS(ESI)：414.2(M+H)+。
實施例94
3-異丁基-N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
類似于實施例66，使用3-異丁基-1H-吡唑-5-甲酸(CAS：92933-49-8)替代3-乙基-4-甲基-1H-吡唑-5-甲酸，獲得標題化合物。白色固體。
MS(ESI)：330.2(M+H)+。
實施例95
4-氟-3-異丁基-N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
類似于實施例66，使用4-氟-5-異丁基-1H-吡唑-3-甲酸替代3-乙基-4-甲基-1H-吡唑-5-甲酸，獲得標題化合物。蠟狀固體。
MS(ESI)：348.2(M+H)+。
實施例96
3-丁基-4-氟-N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
類似于實施例66，使用5-丁基-4-氟-1H-吡唑-3-甲酸(CAS：681034-65-1)替代3-乙基-4-甲基-1H-吡唑-5-甲酸，獲得標題化合物。蠟狀固體。
MS(ESI)：348.2(M+H)+。
實施例97
3-丁基-N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
類似于實施例66，使用5-丁基-1H-吡唑-3-甲酸(CAS：92933-48-7)替代3-乙基-4-甲基-1H-吡唑-5-甲酸，獲得標題化合物。白色固體。
MS(ESI)：330.2(M+H)+。
實施例98
5-異丙基-N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-2-(2，2，2-三氟乙基)吡唑-3-甲酰胺
類似于實施例66，使用5-異丙基-2-(2，2，2-三氟乙基)吡唑-3-甲酸替代3-乙基-4-甲基-1H-吡唑-5-甲酸，獲得標題化合物。白色固體。
MS(ESI)：398.1(M+H)+。
實施例99
2-異丙基-N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-5-(2，2，2-三氟乙氧基)吡唑-3-甲酰胺
類似于實施例66，使用2-異丙基-5-(2，2，2-三氟乙氧基)吡唑-3-甲酸替代3-乙基-4-甲基-1H-吡唑-5-甲酸，獲得標題化合物。白色固體。
MS(ESI)：414.2(M+H)+。
實施例100
4-氯-3-乙氧基-N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
類似于實施例66，使用4-氯-5-乙氧基-1H-吡唑-3-甲酸替代3-乙基-4-甲基-1H-吡唑-5-甲酸，獲得標題化合物。白色固體。
MS(ESI)：352.1({35Cl}M+H)+，354.1({37Cl}M+H)+。
實施例101
4-氯-N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-3-(2，2，2-三氟乙氧基)-1H-吡唑-5-甲酰胺
類似于實施例66，使用4-氯-5-(2，2，2-三氟乙氧基)-1H-吡唑-3-甲酸替代3-乙基-4-甲基-1H-吡唑-5-甲酸，獲得標題化合物。白色固體。
MS(ESI)：406.1({35Cl}M+H)+，408.0({37Cl}M+H)+。
實施例102
(RS)-5-氯-N-(5-氯-2-吡啶基)-6-嗎啉-2-基-吡啶-3-胺
a)5-溴-3-氯-吡啶-2-碳酰氯
在室溫向5-溴-3-氯吡啶-2-甲酸(5.0g，21.06mmol，CAS：1189513-51-6)在二氯甲烷(50mL)中的懸浮液中加入草酰氯(3.38g，31.6mmol，CAS：79-37-8)和DMF(0.1mL)。繼續(xù)反應5小時。將溶液在減壓下濃縮并在高真空下干燥，得到粗制5-溴-3-氯-吡啶-2-碳酰氯(5.4g，100％的產率)，為黃色固體，其直接用于下一步驟。
b)2-溴-1-(5-溴-3-氯-2-吡啶基)乙酮
在0～5℃向粗制5-溴-3-氯-吡啶-2-碳酰氯(5.4g，21.06mmol)在CH3CN(100mL)中的溶液中逐滴加入(三甲基甲硅烷基)重氮甲烷溶液(2M于己烷中，31.6mL，63.2mmol，CAS：18107-18-1)。將混合物在室溫攪拌過夜。在0～5℃加入HBr(48％于水中，10mL)。將溶液攪拌一小時。將反應溶液倒入水(200mL)中。將混合物用EtOAc(200mL)萃取。將有機層用鹽水(100mL)洗滌，經Na2SO4干燥，并在減壓下濃縮。將殘留物通過柱色譜(以體積計石油醚/乙酸乙酯＝100/1)純化，得到5-溴-3-氯-吡啶-2-碳酰氯(5.17g，78.3％產率)，為黃色固體。
MS(ESI)：315.8([{81Br+81Br}M+H]+)，313.8([{81Br+79Br}M+H]+)，311.8([{79Br+79Br}M+H]+)。
c)5-溴-3-氯-2-(氧雜環(huán)丙烷-2-基)吡啶
在0-5℃向5-溴-3-氯-吡啶-2-碳酰氯(5.17g，16.5mmol)在乙醇(100mL)中的溶液中加入NaBH4(752.4mg，19.8mmol)。將溶液在室溫攪拌一小時。加入K2CO3(2.3g，16.5mmol)。繼續(xù)反應過夜。將反應混合物倒入水(200mL)中并用乙酸乙酯(200mL)萃取。將有機層用鹽水(100mL)洗滌，經Na2SO4干燥，并在減壓下濃縮。在高真空下進一步干燥，得到5-溴-3-氯-2-(氧雜環(huán)丙烷-2-基)吡啶(3.86g，100％產率)，為黃色油狀物，其直接用于下一步驟。
MS(ESI)：235.9([{81Br}M+H]+)，233.9([{79Br}M+H]+)。
d)1-(5-溴-3-氯-2-吡啶基)-2-(2-羥基乙基氨基)乙醇
向5-溴-3-氯-2-(氧雜環(huán)丙烷-2-基)吡啶(3.86g，16.5mmol)在THF(20mL)中的溶液中加入乙醇胺(10mL，CAS：141-43-5)。將溶液在室溫攪拌過夜。然后將溶液用乙酸乙酯(200mL)稀釋。將有機層用鹽水(100mL)洗滌，經Na2SO4干燥，并在減壓下濃縮。在高真空下進一步干燥，得到粗制1-(5-溴-3-氯-2-吡啶基)-2-(2-羥基乙基氨基)乙醇(3.0g，61.6％產率)，為黃色油狀物，其直接用于下一步驟。
e)N-[2-(5-溴-3-氯-2-吡啶基)-2-羥基-乙基]-N-(2-羥基乙基)氨基甲酸叔丁酯
向1-(5-溴-3-氯-2-吡啶基)-2-(2-羥基乙基氨基)乙醇(3.0g，16.5mmol)在THF(30mL)和水(20mL)的混合物中的溶液中加入二碳酸二叔丁酯(3.29g，15.22mmol，CAS：24424-99-5)和K2CO3(2.8g，20.3mmol)。將溶液在室溫攪拌過夜。將反應溶液用水(50mL)稀釋。將混合物用乙酸乙酯(200mL)萃取。將有機層用鹽水(100mL)洗滌，經Na2SO4干燥，并在減壓下濃縮。將殘留物通過柱色譜(以體積計CH2Cl2/MeOH＝100/1～50/1)純化，得到N-[2-(5-溴-3-氯-2-吡啶基)-2-羥基-乙基]-N-(2-羥基乙基)氨基甲酸叔丁酯(1.5g，37.5％產率)，為黃色油狀物。
MS(ESI)：295.0([{79Br}M-Boc+H]+)，296.9([{81Br}M-Boc+H]+)，338.9([{79Br}M-56+H]+)，340.9([{81Br}M-56+H]+)，
f)2-(5-溴-3-氯-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯
在室溫向N-[2-(5-溴-3-氯-2-吡啶基)-2-羥基-乙基]-N-(2-羥基乙基)氨基甲酸叔丁酯(1.5g，3.79mmol)在甲苯(20mL)中的溶液中加入PPh3(1.19g，4.55mmol)和Et3N(957mg，9.47mmol)。然后在0～5℃加入偶氮二羧酸二異丙酯(0.92g，4.55mmol，CAS：2446-83-5)在甲苯(10mL)中的溶液。將溶液在室溫攪拌過夜。然后將反應溶液用乙酸乙酯(200mL)稀釋。將混合物用NaHCO3(100mL×3)和鹽水(100mL×2)洗滌，經Na2SO4干燥，并在減壓下濃縮。將殘留物通過柱色譜(以體積計石油醚/乙酸乙酯＝20/1～5/1)純化，得到2-(5-溴-3-氯-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯(1.0g，70％產率)，為白色固體。
1H NMR(400MHz，甲醇-d4)：δ8.62(d，J＝2Hz，1H)，7.89(d，J＝2Hz，1H)，4.89(d，J＝10Hz，1H)，4.30～3.8(m，3H)，3.76(m，1H)，3.13(br，2H)，1.49(s，9H)。
g)(RS)-5-氯-N-(5-氯-2-吡啶基)-6-嗎啉-2-基-吡啶-3-胺
在N2氣氛下向2-(5-溴-3-氯-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯(80mg，0.211mmol)和2-氨基-5-氯吡啶(27mg，0.211mmol，CAS：1072-98-6)在二烷(1mL)中的溶液中加入Xantphos(4，5-雙(二苯基膦基)-9，9-二甲基呫噸，36.7mg，0.063mmol，CAS：161265-03-8)，Cs2CO3(206.2mg，0.633mmol)，和三(二亞芐基丙酮)二鈀(0)(19.3mg，0.021mmol，CAS：51364-51-3)。將混合物在80℃攪拌過夜。然后將溶液倒入水(100mL)中。將混合物用CH2Cl2(150mL×2)萃取。將合并的有機層經Na2SO4干燥并在減壓下濃縮。將殘留物溶解在CH2Cl2(1mL)中。然后加入三氟乙酸(1mL)。將溶液在室溫攪拌3小時。將反應溶液在減壓下濃縮。將殘留物通過制備型HPLC(0.5％TFA于CH3CN中)純化，得到(RS)-5-氯-N-(5-氯-2-吡啶基)-6-嗎啉-2-基-吡啶-3-胺(50mg)，為白色固體。
1H NMR(400MHz，甲醇-d4)：δ8.62(dd，2H)，8.21(s，1H)，7.64(dd，1H)，6.87(d，1H)，5.23(dd，1H)，4.11(m，1H)，3.98(m，1H)，3.67(m，1H)，3.49(m，1H)，3.35～3.30(m，2H)。
MS(ESI)：325.1({35Cl}M+H)+，327.0({37Cl}M+H)+。
實施例103
(RS)-5-氯-6-嗎啉-2-基-N-[5-(三氟甲基)-2-吡啶基]吡啶-3-胺
類似于實施例102，在步驟(g)中使用2-氨基-5-三氟甲基吡啶(CAS：74784-70-6)替代2-氨基-5-氯吡啶，獲得標題化合物。白色固體。MS(ESI)：361.0([{37Cl}M+H]+)，359.1([{35Cl}M+H]+)。
實施例104
(RS)-5-甲基-6-嗎啉-2-基-N-[5-(三氟甲基)-2-吡啶基]吡啶-3-胺
a)2-溴-1-(5-溴-3-甲基-2-吡啶基)乙酮
將5-溴-3-甲基吡啶-2-碳酰氯(4g，17mmol，CAS：1114809-24-3)在CH3CN(60mL)中的溶液在0℃攪拌。加入(三甲基甲硅烷基)重氮甲烷(2M于己烷中，21mL，42mmol，CAS：18107-18-1)。將混合物在室溫攪拌過夜，直到TLC分析表明起始材料完全消耗。加入HBr(12mL，48％水溶液)。將得到的溶液在室溫攪拌過夜。將混合物用飽和NaHCO3水溶液處理，以調節(jié)pH至約7。分層。將水層用乙酸乙酯(200mL x2)萃取。將合并的有機層用鹽水(200mL)洗滌，經硫酸鈉干燥，并在減壓下濃縮。在不純化的情況下將殘留物(4.5g)用于下一步驟。
b)5-溴-3-甲基-2-(氧雜環(huán)丙烷-2-基)吡啶
將2-溴-1-(5-溴-3-甲基-2-吡啶基)乙酮(4g，13.7mmol)在EtOH(80mL)中的溶液在0℃攪拌。加入NaBH4(623mg，16.4mmol)。將混合物在室溫攪拌4小時。加入K2CO3(945mg，6.9mmol)。將得到的溶液在室溫攪拌過夜。將混合物用水(300ml)稀釋。分層。將水層用EtOAc(300mL x 2)萃取。將合并的有機層用鹽水(300mL)洗滌，經硫酸鈉干燥，并且在減壓下濃縮。在不純化的情況下將殘留物用于下一步驟。
c)1-(5-溴-3-甲基-2-吡啶基)-2-(2-羥基乙基氨基)乙醇
向5-溴-3-甲基-2-(氧雜環(huán)丙烷-2-基)吡啶(3.5g，16.4mmol)在THF(15mL)中的攪拌溶液中加入2-氨基乙醇(15mL，CAS：41-43-5)。將混合物在室溫攪拌過夜。然后將反應混合物倒入THF/EtOAc(1∶1，200mL)中并用鹽水(100mL)洗滌。將有機層經Na2SO4干燥并濃縮，得到粗制1-(5-溴-3-甲基-2-吡啶基)-2-(2-羥基乙基氨基)乙醇(2.6g，58％產率)，為油狀物，在不純化的情況下將其用于下一步驟。
MS(ESI)：277.0([{81Br}M+H]+)，275.0([{79Br}M+H]+)。
d)N-[2-(5-溴-3-甲基-2-吡啶基)-2-羥基-乙基]-N-(2-羥基乙基)氨基甲酸叔丁酯
將1-(5-溴-3-甲基-2-吡啶基)-2-(2-羥基乙基氨基)乙醇(2.6g，9.5mmol，crude)，K2CO3(3.0g，22mmol)和(Boc)2O(1.9g，7.3mmol，CAS：24424-99-5)在THF(30mL)中的混合物在室溫攪拌12小時。然后將混合物用水(200mL)稀釋并用乙酸乙酯(200mL x 2)萃取。將合并的有機層用水(100mL)和鹽水(100mL)洗滌，并在減壓下濃縮。通過硅膠色譜純化，得到N-[2-(5-溴-3-甲基-2-吡啶基)-2-羥基-乙基]-N-(2-羥基乙基)氨基甲酸叔丁酯(1.31g，37％產率)，為淺黃色油狀物。
e)2-(5-溴-3-甲基-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯
將N-[2-(5-溴-3-甲基-2-吡啶基)-2-羥基-乙基]-N-(2-羥基乙基)氨基甲酸叔丁酯(1.3g，3.5mmol)，PPh3(1.02g，4.2mmol)和Et3N(900mg，9mmol)的混合物在0℃攪拌10分鐘。逐滴加入偶氮二羧酸二異丙酯(848mg，4.2mmol，CAS：2446-83-5)。繼續(xù)反應過夜。將混合物在減壓下濃縮。通過在硅膠上急驟色譜的純化得到2-(5-溴-3-甲基-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯(600mg，48％產率)，為灰白色固體。
1H NMR(400MHz，甲醇-d4)：δ8.46(d，1H)，7.87(d，1H)，4.65(m，1H)，4.11(m，1H)，3.98(m，2H)，3.72(t，1H)，3.32(m，2H)，2.43(s，3H)，1.52(s，9H)。
MS(ESI)：359.0([{81Br}M+H]+)，357.0([{79Br}M+H]+)。
f)(RS)-5-甲基-6-嗎啉-2-基-N-[5-(三氟甲基)-2-吡啶基]吡啶-3-胺
在N2氣氛下將2-(5-溴-3-甲基-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯(60mg，0.17mmol)，2-氨基-5-三氟甲基吡啶(26mg，CAS：74784-70-6)，Xantphos(20mg，0.034mmol，CAS：161265-03-8)，Pd2(dba)3(16mg，0.017mmol，CAS：51364-51-3)和Cs2CO3(166mg，0.51mmol)在二烷(5mL)中的混合物在90℃攪拌12小時。然后將混合物用水(100mL)稀釋并用乙酸乙酯(100mL x2)萃取。將合并的有機層用水(100mL)洗滌，并在減壓下濃縮。將殘留物在高真空下干燥。
然后將殘留物溶解在二氯甲烷(2mL)中。加入三乙胺(0.5ml)。將得到的混合物在室溫攪拌一小時。在減壓下移除揮發(fā)物。硅膠色譜純化得到(RS)-5-甲基-6-嗎啉-2-基-N-[5-(三氟甲基)-2-吡啶基]吡啶-3-胺(15mg)，為白色固體。
1H NMR(400MHz，甲醇-d4)：δ9.05(d，1H)，8.54(s，1H)，8.24(d，1H)，7.89(dd，1H)，7.01(d，1H)，5.21(dd，1H)，4.17(m，1H)，4.04(m，1H)，3.60(m，2H)，3.41(m，1H)，3.34(m，1H)，2.50(s，3H)。
MS(ESI)：339.1(M+H)+。
實施例105
4-氯-N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-3-(2，2，2-三氟乙氧基)-1H-吡唑-5-甲酰胺
類似于實施例67，使用4-氯-5-(2，2，2-三氟乙氧基)-1H-吡唑-3-甲酸替代3-乙基-4-甲基-1H-吡唑-5-甲酸，獲得標題化合物。白色固體。
MS(ESI)：406.1({35Cl}M+H)+，408.1({37Cl}M+H)+。
實施例106
4-氯-3-乙氧基-N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
類似于實施例67，使用4-氯-5-乙氧基-1H-吡唑-3-甲酸替代3-乙基-4-甲基-1H-吡唑-5-甲酸，獲得標題化合物。白色固體。
MS(ESI)：352.1({35Cl}M+H)+，354.1({37Cl}M+H)+。
實施例107
(RS)-N-(5-氯-6-嗎啉-2-基-3-吡啶基)-2-(三氟甲基)吡啶-4-甲酰胺
a)2-[5-(二苯亞甲基氨基)-3-氯-2-吡啶基]嗎啉-4-甲酸叔丁酯
在N2氣氛下向2-(5-溴-3-氯-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯(0.4g，1.057mmol)和二苯甲酮亞胺(191.3mg，1.057mmol，CAS：1013-88-3)在二烷(15mL)中的溶液中加入Xantphos(4，5-雙(二苯基膦基)-9，9-二甲基呫噸，183.5mg，0.317mmol，CAS：161265-03-8)，Cs2CO3(1.03g，3.17mmol)和三(二亞芐基丙酮)二鈀(0)(96.8mg，0.1mmol，CAS：51364-51-3)。將混合物在85℃攪拌過夜。然后過濾反應混合物。將濾液在真空中濃縮，得到粗制2-[5-(二苯亞甲基氨基)-3-氯-2-吡啶基]嗎啉-4-甲酸叔丁酯(505mg，100％的產率)，為黃色油狀物，其直接用于下一步驟。
b)2-(5-氨基-3-氯-2-吡啶基)嗎啉-4甲酸叔丁酯
向2-[5-(二苯亞甲基氨基)-3-氯-2-吡啶基]嗎啉-4-甲酸叔丁酯(505mg，1.057mmol)在甲醇(10mL)中的溶液中加入乙酸鈉(433.4mg，5.28mmol)和羥胺鹽酸鹽(110.2mg，1.58mmol)。將混合物在室溫攪拌2小時。將溶液倒入水(50mL)中并用CH2Cl2(100mL×2)萃取。將合并的有機層經Na2SO4干燥，在真空中濃縮，并通過柱色譜(以體積計CH2Cl2/甲醇＝100/1～50/1)純化，得到2-(5-氨基-3-氯-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯(270mg，81％產率)，為黃色固體。
MS(ESI)：258.0([{35Cl}M-56+H]+)，314.0([{35Cl}M+H]+)，316.0([{37Cl}M+H]+)，336.0([{35Cl}M+Na]+)。
c)(RS)-N-(5-氯-6-嗎啉-2-基-3-吡啶基)-2-(三氟甲基)吡啶-4-甲酰胺
向2-(三氟甲基)吡啶-4-甲酸(40mg，0.21mmol，CAS：131747-41-6)在DMF(1mL)中的溶液中加入HATU(79.7mg，0.21mmol，CAS：148893-10-1)，二異丙基乙胺(73.7mg，0.57mmol)，和2-(5-氨基-3-氯-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯(60mg，0.19mmol)。將溶液在室溫攪拌過夜。然后將反應混合物用CH2Cl2(50mL)稀釋。將溶液用鹽水(50mL×2)洗滌，經Na2SO4干燥，并在真空下濃縮。將殘留物溶解在CH2Cl2(1mL)和三氟乙酸(1mL)。將溶液在室溫攪拌2小時。將反應溶液在真空下濃縮。將殘留物通過制備型-HPLC(CH3CN中0.5％三氟乙酸)純化，得到(RS)-N-(5-氯-6-嗎啉-2-基-3-吡啶基)-2-(三氟甲基)吡啶-4-甲酰胺(11mg)，為白色固體。
1H NMR(400MHz，甲醇-d4)：δ8.95(d，1H)，8.90(d，1H)，8.50(d，1H)，8.34(s，1H)，8.15(m，1H)，5.28(dd，1H)，4.07(m，1H)，4.01(m，1H)，3.72(m，1H)，3.56(m，1H)，3.36～3.30(m，2H)。
MS(ESI)：387.1([{35Cl}M+H]+)，389.1([{37Cl}M+H]+)。
實施例108
(RS)-4-氯-N-(5-氯-6-嗎啉-2-基-3-吡啶基)-3-丙基-1H-吡唑-5-甲酰胺
類似于實施例107，在步驟(c)中使用4-氯-5-丙基-1H-吡唑-3-甲酸(CAS：1340578-20-2)替代2-(三氟甲基)吡啶-4-甲酸，獲得標題化合物。白色固體。
MS(ESI)：386.1([{37Cl}M+H]+)，384.1([{35Cl}M+H]+)。
實施例109
(RS)-1-(5-氯-6-嗎啉-2-基-3-吡啶基)-3-(3-氯苯基)脲
向2-(5-氨基-3-氯-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯(60mg，0.19mmol)在CH2Cl2(1mL)中的溶液中加入三乙胺(38.4mg，0.38mmol)和異氰酸3-氯苯酯(29.2mg，0.19mmol，CAS：2909-38-8)。將溶液在室溫攪拌過夜。將反應溶液用CH2Cl2(50mL)稀釋，用鹽水(50mL×2)洗滌，經Na2SO4干燥，并在真空下濃縮。將殘留物溶解在CH2Cl2(1mL)和三氟乙酸(1mL)中的混合物中。在室溫攪拌溶液2小時。在減壓下移除揮發(fā)物。將殘留物通過制備型-HPLC(CH3CN中0.5％三氟乙酸)純化，得到標題化合物(20mg)，為白色固體。
1H NMR(400MHz，甲醇-d4)：δ8.58(s，1H)，8.25(s，1H)，7.67(s，1H)，7.31～7.27(m，2H)，7.08～7.06(m，1H)，5.27～5.24(dd，J＝12Hz，1H)，4.10～4.00(m，1H)，4.99～3.98(m，1H)，3.71～3.68(m，1H)，3.55～3.54(m，1H)，3.36～3.30(m，2H)。
對于化合物RW-04-035-05的LCMS：MS(ESI)：367.1({35Cl}M+H)+，369.0({37Cl}M+H)+。
實施例110
(RS)-N-(5-氯-2-吡啶基)-5-氟-6-嗎啉-2-基-吡啶-3-胺
a)2-溴-1-(5-溴-3-氟-2-吡啶基)乙酮
在室溫向1-(5-溴-3-氟吡啶-2-yl)乙酮(5.5g，25.2mmol，CAS：1160936-52-6)在乙酸(30mL)中的溶液中加入氫溴酸溶液(33重量％于乙酸中，30mL)和吡咯烷酮氫三溴化物(8.4g，26.4mmol，CAS：22580-55-8)。將溶液在室溫攪拌過夜。將溶液在減壓下濃縮。將殘留物用乙酸乙酯(800mL)稀釋。將沉淀通過過濾收集并在高真空下干燥，得到2-溴-1-(5-溴-3-氟-2-吡啶基)乙酮(7.52g，79％產率)，為HBr鹽。
b)5-溴-3-氟-2-(氧雜環(huán)丙烷-2-基)吡啶
在0～5℃向2-溴-1-(5-溴-3-氟-2-吡啶基)乙酮(7.52g，20mmol，HBr鹽)在乙醇(140mL)中的溶液中加入NaBH4(910mg，24mmol)。然后將溶液在室溫攪拌一小時。加入乙醇鈉(660mg，10mmol)。將溶液在室溫攪拌過夜。將反應溶液倒入水(100mL)用乙酸乙酯(100mL x 3)萃取。將合并的有機層用鹽水(200mL)洗滌，經Na2SO4干燥，并在真空中濃縮，得到5-溴-3-氟-2-(氧雜環(huán)丙烷-2-基)吡啶(4.4g，100％產率)，為黃色油狀物，其直接用于下一步驟。
MS(ESI)：219.9([{81Br}M+H]+)，217.9([{79Br}M+H]+)。
c)1-(5-溴-3-氟-2-吡啶基)-2-(2-羥基乙基氨基)乙醇
向5-溴-3-氟-2-(氧雜環(huán)丙烷-2-基)吡啶(4.8g，22.12mmol)在THF(20mL)中的溶液中加入2-氨基乙醇(10mL，CAS：41-43-5)。將溶液在室溫攪拌過夜。將反應溶液用乙酸乙酯(200mL)稀釋。將有機層用鹽水(100mL)洗滌，經Na2SO4干燥，并在真空中濃縮，得到粗制1-(5-溴-3-氟-2-吡啶基)-2-(2-羥基乙基氨基)乙醇(5.0g，81％產率)，為黃色固體，其直接用于下一步驟。
d)N-[2-(5-溴-3-氟-2-吡啶基)-2-羥基-乙基]-N-(2-羥基乙基)氨基甲酸叔丁酯
向1-(5-溴-3-氟-2-吡啶基)-2-(2-羥基乙基氨基)乙醇(5.0g，17.9mmol)在THF(50mL)和H2O(30mL)的混合物中的溶液中加入二碳酸二叔丁酯(5.8g，26.9mmol，CAS：24424-99-5)和K2CO3(4.9g，36mmol)。將溶液在室溫攪拌過夜。將反應溶液用水(50mL)稀釋。將混合物用乙酸乙酯(100mL x2)萃取。合并的有機層用鹽水(100mL)洗滌，經Na2SO4干燥，并在減壓下濃縮。將殘留物通過硅膠柱色譜(以體積計CH2Cl2/MeOH＝100/1～50/1)純化，得到N-[2-(5-溴-3-氟-2-吡啶基)-2-羥基-乙基]-N-(2-羥基乙基)氨基甲酸叔丁酯(5.2g，77％產率)，為黃色油狀物。
MS(ESI)：278.9([{79Br}M-Boc+H]+)，280.9([{81Br}M-Boc+H]+)。
e)2-(5-溴-3-氟-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯
在室溫向N-[2-(5-溴-3-氟-2-吡啶基)-2-羥基-乙基]-N-(2-羥基乙基)氨基甲酸叔丁酯(5.2g，13.7mmol)在甲苯(100mL)中的溶液中加入PPh3(4.3g，16.4mmol)和Et3N(3.46g，34.25mmol)。然后在0～5℃加入DIAD(3.32g，16.4mmol)在甲苯(30mL)中的溶液。將溶液在室溫攪拌過夜。將反應溶液用水(100mL)稀釋并用乙酸乙酯(100mL x 2)萃取。將合并的有機層用NaHCO3水溶液(100mL x 3)和鹽水(100mL x2)洗滌，經Na2SO4干燥，并在減壓下濃縮。將殘留物通過硅膠柱色譜(以體積計石油醚/乙酸乙酯＝20/1～5/1)純化，得到2-(5-溴-3-氟-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯(3.2g，65％產率)，為白色固體。
MS(ESI)：361.0([{79Br}M+H]+)，363.0([{81Br}M+H]+)。
f)(RS)-N-(5-氯-2-吡啶基)-5-氟-6-嗎啉-2-基-吡啶-3-胺
在N2氣氛下向2-(5-溴-3-氟-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯(80mg，0.221mmol)和2-氨基-5-氯吡啶(28.4mg，0.221mmol，CAS：1072-98-6)在二烷(1mL)中的溶液中加入Xantphos(4，5-雙(二苯基膦基)-9，9-二甲基呫噸，38.4mg，0.066mmol，CAS：161265-03-8)，Cs2CO3(216mg，0.663mmol)，和三(二亞芐基丙酮)二鈀(0)(20mg，0.022mmol，CAS：51364-51-3)。將混合物在80℃攪拌過夜。然后將溶液倒入水(100mL)中。將混合物用CH2Cl2(150mL×2)萃取。將合并的有機層經Na2SO4干燥并在減壓下濃縮。將殘留物溶解在CH2Cl2(1mL)。然后加入三氟乙酸(1mL)。將溶液在室溫攪拌3小時。將反應溶液在減壓下濃縮。將殘留物通過制備型HPLC(0.5％TFA于CH3CN中)純化，得到(RS)-N-(5-氯-2-吡啶基)-5-氟-6-嗎啉-2-基-吡啶-3-胺(44mg)，為白色固體。
1H NMR(400MHz，甲醇-d4)：δ8.45(m，2H)，8.22(d，1H)，7.64(dd，1H)，6.88(d，1H)，5.12(m，1H)，4.12(m，1H)，3.98(m，1H)，3.67(m，1H)，3.48(m，1H)，3.33(m，1H)，3.31(m，1H)。
MS(ESI)：308.9([{35Cl}M+H]+)，310.9([{37Cl}M+H]+)。
實施例111
(RS)-5-氟-6-嗎啉-2-基-N-[5-(三氟甲基)-2-吡啶基]吡啶-3-胺
類似于實施例110，在步驟(f)中使用2-氨基-5-三氟甲基吡啶(CAS：74784-70-6)替代2-氨基-5-氯吡啶，獲得標題化合物。白色固體。
MS(ESI)：343.0(M+H)+。
實施例112
(RS)-1-(3-氯苯基)-3-(5-氟-6-嗎啉-2-基-3-吡啶基)脲
a)2-[5-(二苯亞甲基氨基)-3-氟-2-吡啶基]嗎啉-4-甲酸叔丁酯
在N2氣氛下向2-(5-溴-3-氟-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯(0.6g，1.66mmol)和二苯甲酮亞胺(300mg，1.66mmol，CAS：1013-88-3)在二烷(30mL)中的溶液中加入Xantphos(4，5-雙(二苯基膦基)-9，9-二甲基呫噸，288mg，0.5mmol，CAS：161265-03-8)，Cs2CO3(1.62g，4.98mmol)和三(二亞芐基丙酮)二鈀(0)(152mg，0.166mmol，CAS：51364-51-3)。將混合物在85℃攪拌過夜。然后將反應混合物過濾。在真空下濃縮濾液，得到粗制2-[5-(二苯亞甲基氨基)-3-氟-2-吡啶基]嗎啉-4-甲酸叔丁酯(766mg，100％產率)，為黃色油狀物，其直接用于下一步驟。
b)2-(5-氨基-3-氟-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯
向2-[5-(二苯亞甲基氨基)-3-氟-2-吡啶基]嗎啉-4-甲酸叔丁酯(766mg，1.66mmol)在甲醇(20mL)中的溶液中加入乙酸鈉(681mg，8.3mmol)和羥胺鹽酸鹽(173mg，2.5mmol)。將混合物在室溫攪拌2小時。將溶液倒入水(50mL)中并用CH2Cl2(100mL×2)萃取。將合并的有機層經Na2SO4干燥，在真空下濃縮，并通過柱色譜(以體積計CH2Cl2/甲醇＝100/1～50/1)純化，得到2-(5-氨基-3-氟-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯(350mg，71％產率)，為黃色固體。
MS(ESI)：242.0(M-56+H)+，298.0(M+H)+。
c)(RS)-1-(3-氯苯基)-3-(5-氟-6-嗎啉-2-基-3-吡啶基)脲
向2-(5-氨基-3-氟-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯(70mg，0.235mmol)在二氯甲烷(1mL)中的溶液中加入Et3N(48mg，0.47mmol)和異氰酸3-氯苯酯(36mg，0.24mmol，CAS：2909-38-8)。將溶液在室溫攪拌過夜。將反應溶液用二氯甲烷(50mL)稀釋。然后將溶液用鹽水(50mL×2)洗滌，經Na2SO4干燥，在減壓下濃縮，并在高真空下干燥。將殘留物溶解在二氯甲烷(1mL)和三氟乙酸(1mL)中。將溶液在室溫攪拌2小時。將反應溶液在減壓下濃縮。將殘留物通過制備型HPLC(CH3CN中0.5％TFA)純化，得到(RS)-1-(3-氯苯基)-3-(5-氟-6-嗎啉-2-基-3-吡啶基)脲_(52mg)，為白色固體。
1H NMR(400MHz，甲醇-d4)：δ8.41(s，1H)，8.06(dd，1H)，7.67(s，1H)，7.29(m，2H)，7.05(m，1H)，5.13(dd，1H)，4.12(m，1H)，3.98(m，1H)，3.69(m，1H)，3.51(dd，1H)，3.35～3.30(m，2H)。
MS(ESI)：351.1([{35Cl}M+H]+)，353.1([{37Cl}M+H]+)。
實施例113
(RS)-N-(5-氟-6-嗎啉-2-基-3-吡啶基)-2-(三氟甲基)吡啶-4-甲酰胺
向2-(三氟甲基)吡啶-4-甲酸(57mg，0.30mmol，CAS：131747-41-6)在DMF(1mL)中的溶液中加入HATU(112.2mg，0.295mmol，CAS：148893-10-1)，N，N-二異丙基乙胺(104mg，0.804mmol，CAS：7087-68-5)和2-(5-氨基-3-氟-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯(80mg，0.27mmol)。將溶液在室溫攪拌過夜。將反應混合物用二氯甲烷(50mL)稀釋。然后將溶液用水(50mL)和鹽水(50mL)洗滌，經Na2SO4干燥，在減壓下濃縮，并在高真空下干燥。將殘留物溶解在二氯甲烷(1mL)和三氟乙酸(1mL)中。將溶液在室溫攪拌2小時。將反應溶液在減壓下濃縮。將殘留物通過制備型HPLC(CH3CN中0.5％TFA)純化，得到(RS)-N-(5-氟-6-嗎啉-2-基-3-吡啶基)-2-(三氟甲基)吡啶-4-甲酰胺(10mg)，為白色固體。
1H NMR(400MHz，甲醇-d4)：δ8.94(d，1H)，8.77(d，1H)，8.34～8.30(m，2H)，8.15(d，1H)，5.19(dd，1H)，4.14(m，1H)，4.06(m，1H)，3.71(m，1H)，3.55(m，1H)，3.36～3.30(m，2H)。
MS(ESI)：393.0(M+Na)+，371.0(M+H)+。
實施例114
(RS)-4-氯-N-(5-氟-6-嗎啉-2-基-3-吡啶基)-3-丙基-1H-吡唑-5-甲酰胺
類似于實施例113，使用4-氯-5-丙基-1H-吡唑-3-甲酸(CAS：1340578-20-2)替代2-(三氟甲基)吡啶-4-甲酸，獲得標題化合物。白色固體。MS(ESI)：370.0([{37Cl}M+H]+)，368.0([{35Cl}M+H]+)。
實施例115
4-氯-3-異丙基-N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
類似于實施例66，使用4-氯-5-丙-2-基-2H-吡唑-3-甲酸(CAS：1291271-55-0)替代3-乙基-4-甲基-1H-吡唑-5-甲酸，獲得標題化合物。白色固體。
MS(ESI)：350.0({35Cl}M+H)+，352.0({37Cl}M+H)+。
實施例116
4-氟-3-異丙基-N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
a)4-氟-3-異丙基-1H-吡唑-5-甲酸乙酯
在0℃向3-異丙基-1H-吡唑-5-甲酸乙酯(5.0g，0.027mmol，CAS：78208-72-7)在CH3CN(300mL)中的溶液中加入(12.7g，35.7mmol，CAS：140681-55-6)。然后將溶液加熱至70℃。繼續(xù)攪拌15小時。將反應溶液冷卻至室溫并在減壓下濃縮。將殘留物用HCl水溶液(3N，200mL)稀釋并用二氯甲烷(100mL x 2)萃取。將合并的有機層用鹽水(50mL)洗滌，經Na2SO4干燥，并在減壓下濃縮。通過硅膠柱色譜(以體積計二氯甲烷/MeOH＝200/1～100/1)純化，得到4-氟-3-異丙基-1H-吡唑-5-甲酸乙酯(900mg，17％產率)，為黃色油狀物。
MS(ESI)：223.1(M+Na)+，201.1(M+H)+。
b)4-氟-3-異丙基-1H-吡唑-5-甲酸
在0℃向4-氟-3-異丙基-1H-吡唑-5-甲酸乙酯(900mg，4.49mmol)在THF/MeOH(10/10mL)中的溶液中加入1M NaOH水溶液(9mL，9mmol)。然后將溶液回流3小時。將反應溶液倒入水中。用濃HCl將pH調節(jié)至1。將混合物用乙酸乙酯(100mL x2)萃取。將合并的有機層用鹽水洗滌，并在真空下濃縮。將殘留物從乙酸乙酯(10mL)再結晶，得到4-氟-3-異丙基-1H-吡唑-5-甲酸(450mg，58％產率)，為白色固體。
1H NMR(400MHz，甲醇-d4)：δ3.08(m，1H)，1.32(d，6H)。
MS(ESI)：173.1(M+H)+。
c)4-氟-3-異丙基-N-[6-[(2R)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
類似于實施例66，使用4-氟-3-異丙基-1H-吡唑-5-甲酸替代3-乙基-4-甲基-1H-吡唑-5-甲酸，獲得標題化合物。白色固體。
1H NMR(400MHz，甲醇-d4)：δ8.93(d，1H)，8.27(dd，1H)，7.59(d，1H)，4.87(m，1H)，4.24(dd，1H)，4.01(t，1H)，3.67(d，1H)，3.34(m，1H)，3.30(m，2H)，3.11(m，1H)。1.35(d，6H)。
MS(ESI)：334.1(M+H)+。
實施例117
(RS)-N-(5-甲基-6-嗎啉-2-基-3-吡啶基)-2-(三氟甲基)吡啶-4-甲酰胺
a)2-[5-(二苯亞甲基氨基)-3-甲基-2-吡啶基]嗎啉-4-甲酸叔丁酯
在N2氣氛下，向2-(5-溴-3-甲基-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯(0.28g，0.78mmol)和二苯甲酮亞胺(156mg，0.86mmol，CAS：1013-88-3)在二烷(20mL)中的溶液中加入Xantphos(4，5-雙(二苯基膦基)-9，9-二甲基呫噸，90mg，0.156mmol，CAS：161265-03-8)，Cs2CO3(0.77g，2.34mmol)和三(二亞芐基丙酮)二鈀(0)(72mg，0.078mmol，CAS：51364-51-3)。將混合物在90℃攪拌12小時。然后將反應混合物用水(50mL)稀釋并用乙酸乙酯(100mL x 2)萃取。將合并的有機層用鹽水洗滌，經Na2SO4干燥，并在減壓下濃縮。在高真空下進一步干燥，得到2-[5-(二苯亞甲基氨基)-3-甲基-2-吡啶基]嗎啉-4-甲酸叔丁酯(360mg)，為黃色油狀物，其直接用于下一步驟。
b)2-(5-氨基-3-甲基-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯
向2-[5-(二苯亞甲基氨基)-3-甲基-2-吡啶基]嗎啉-4-甲酸叔丁酯(360mg，0.78mmol)在甲醇(10mL)中的溶液中加入乙酸鈉(250mg，2.34mmol)和羥胺鹽酸鹽(82mg，1.17mmol)。將混合物在室溫攪拌3小時。將溶液倒入水(50mL)中并用CH2Cl2(100mL×2)萃取。將合并的有機層經Na2SO4干燥，在真空下濃縮，并通過柱色譜(以體積計CH2Cl2/甲醇＝100/1～50/1)純化，得到2-(5-氨基-3-甲基-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯(150mg，65％產率)，為灰白色固體。
c)(RS)-N-(5-甲基-6-嗎啉-2-基-3-吡啶基)-2-(三氟甲基)吡啶-4-甲酰胺
向2-(三氟甲基)吡啶-4-甲酸(29mg，0.15mmol，CAS：131747-41-6)在DMF(1mL)中的溶液中加入HATU(56mg，0.15mmol，CAS：148893-10-1)，N，N-二異丙基乙胺(52mg，0.40mmol，CAS：7087-68-5)和2-(5-氨基-3-甲基-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯(40mg，0.14mmol)。將溶液在室溫攪拌過夜。將反應溶液用二氯甲烷(50mL)稀釋。然后將溶液用水(50mL)和鹽水(50mL)洗滌，經Na2SO4干燥，在減壓下濃縮，并在高真空下干燥。將殘留物溶解在二氯甲烷(1mL)和三氟乙酸(1mL)中。將溶液在室溫攪拌2小時。將反應溶液在減壓下濃縮。將殘留物通過制備型HPLC(0.5％TFA于CH3CN中)純化，得到(RS)-N-(5-甲基-6-嗎啉-2-基-3-吡啶基)-2-(三氟甲基)吡啶-4-甲酰胺(4mg)，為白色固體。
1H NMR(400MHz，甲醇-d4)：δ8.95(d，1H)，8.85(d，1H)，8.34(s，1H)，8.15(dd，1H)，5.13(dd，1H)，4.04(m，2H)，3.77(m，1H)，3.61(dd，1H)，3.38～3.30(m，2H)，2.49(s，3H)。
MS(ESI)：367.1(M+H)+。
實施例118
(RS)-4-氯-N-(5-甲基-6-嗎啉-2-基-3-吡啶基)-3-丙基-1H-吡唑-5-甲酰胺
類似于實施例117，使用4-氯-5-丙基-1H-吡唑-3-甲酸(CAS：1340578-20-2)替代2-(三氟甲基)吡啶-4-甲酸，獲得標題化合物。白色固體。MS(ESI)：366.0([{37Cl}M+H]+)，364.0([{35Cl}M+H]+)。
實施例119
(RS)-1-(3-氯苯基)-3-(5-甲基-6-嗎啉-2-基-3-吡啶基)脲
向2-(5-氨基-3-甲基-2-吡啶基)嗎啉-4-甲酸叔丁酯(30mg，0.1mmol)在二氯甲烷(1mL)中的溶液中加入Et3N(30mg，0.3mmol)和異氰酸3-氯苯酯(16mg，0.1mmol，CAS：2909-38-8)。將溶液在室溫攪拌過夜。將反應溶液用二氯甲烷(50mL)稀釋。然后將溶液用鹽水(50mL×2)洗滌，經Na2SO4干燥，在減壓下濃縮，并在高真空下干燥。將殘留物溶解在二氯甲烷(1mL)和三氟乙酸(1mL)中。在室溫攪拌溶液2小時。將反應溶液在減壓下濃縮。將殘留物通過制備型HPLC(0.5％TFA于CH3CN中)純化，得到(RS)-1-(3-氯苯基)-3-(5-甲基-6-嗎啉-2-基-3-吡啶基)脲(32mg)，為白色固體。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ9.36(d，2H)，9.04(m，1H)，8.47(s，1H)，7.84(d，1H)，7.73(s，1H)，7.32(m，2H)，7.05(m，1H)，4.91(dd，1H)，4.00(m，1H)，3.89(m，1H)，3.58(m，2H)，3.27(d，1H)，3.15(m，1H)，2.35(s，3H)。
MS(ESI)：347.0([{35Cl}M+H]+)，349.0([{37Cl}M+H]+)。
實施例120
4-氯-3-異丙基-N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
類似于實施例67，使用4-氯-5-丙-2-基-2H-吡唑-3-甲酸(CAS：1291271-55-0)替代3-乙基-4-甲基-1H-吡唑-5-甲酸，獲得標題化合物。白色固體。
MS(ESI)：350.1({35Cl}M+H)+，352.1({37Cl}M+H)+。
實施例121
4-氟-3-異丙基-N-[6-[(2S)-嗎啉-2-基]-3-吡啶基]-1H-吡唑-5-甲酰胺
類似于實施例67，使用4-氟-3-異丙基-1H-吡唑-5-甲酸替代3-乙基-4-甲基-1H-吡唑-5-甲酸，獲得標題化合物。白色固體。
MS(ESI)：334.2(M+H)+。
式I化合物和它們的藥學上有用的加成鹽擁有有價值的藥理學特性。具體地，已經發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的化合物對于痕量胺相關受體(TAAR)，尤其是TAAR1具有良好的親和性。
根據在下文中給出的試驗研究這些化合物。
材料和方法
TAAR表達質粒和穩(wěn)定轉染的細胞系的構建
為了構建表達質粒，基本上如Lindemann等[14]所述，從基因組DNA擴增人類、大鼠和小鼠TAAR 1的編碼序列。以1.5mM Mg2+使用延伸高保真PCR體系(Expand High Fidelity PCR System)(Roche Diagnostics)，并按照制造商的使用說明將純化的PCR產物克隆至pCR2.1-TOPO克隆載體(Invitrogen)中。將PCR產物亞克隆至pIRESneo2載體(BD Clontech，Palo Alto，California)中，并且在引入細胞系中之前對表達載體進行序列證實。
基本上如Lindemann等(2005)所述，培養(yǎng)HEK293細胞(ATCC#CRL-1573)。為了產生穩(wěn)定轉染的細胞系，用含有TAAR編碼序列的pIRESneo2表達質粒(上面描述)與Lipofectamine 2000(Invitrogen)根據制造商的使用說明轉染HEK293細胞，并且轉染后24小時，用1mg/ml G418(Sigma，Buchs，瑞士)補充培養(yǎng)基。在約10d的培養(yǎng)周期之后，將克隆分離、擴增并用cAMP Biotrak酶免疫測定(EIA)系統(tǒng)(Amersham)，按照由制造商提供的非乙?；疎IA程序對其測定對痕量胺(所有化合物購自Sigma)的反應性。將對于15個傳代的培養(yǎng)周期顯示出穩(wěn)定的EC50的單克隆細胞系用于所有隨后的研究。
針對大鼠TAAR1的放射性配體結合測定
膜制備和放射性配體結合
將穩(wěn)定表達大鼠TAAR1的HEK-293細胞在含有胎牛血清(10％，在56℃熱滅活30min)，青霉素/鏈霉素(1％)，和375μg/ml遺傳霉素(Gibco)的DMEM高葡萄糖培養(yǎng)基中在37℃和5％CO2保持。使用胰蛋白酶/EDTA將細胞從培養(yǎng)瓶中釋放，收獲，用冰-冷的PBS(不含Ca2+和Mg2+)洗滌兩次，以1’000rpm在4℃沉淀5min，冰凍并保存在-80℃。將冰凍的沉淀懸浮在20ml含有10mM EDTA的HEPES-NaOH(20mM，pH 7.4)中，并用Polytron(PT 6000，Kinematica)以14’000rpm勻質化20s。勻漿以48’000x g在4℃離心30min。之后，去除并棄去上清液，并使用Polytron(以14’000rpm，20s)將沉淀重新懸浮在20ml含有0.1mM EDTA的HEPES-NaOH(20mM，pH 7.4)中。重復此程序，并將最終的沉淀重新懸浮在含有0.1mM EDTA的HEPES-NaOH中，并使用Polytron勻質化。典型地，將2ml膜部分的等分試樣保存在-80℃。對于每個新的膜批次，通過飽和曲線確定解離常數(shù)(Kd)。TAAR1放射性配體3[H]-(S)-4-[(乙基-苯基-氨基)-甲基]-4，5-二氫-唑-2-基胺(在WO 2008/098857中描述)以與計算的Kd值相等的濃度使用，其通常為大約2.3nM，產生約0.2％的該放射性配體的結合，和占總結合的約85％的特異性結合。非特異性結合定義為在10μM未標記配體的存在下結合的3[H]-(S)-4-[(乙基-苯基-氨基)-甲基]-4，5-二氫-唑-2-基胺的量。所有化合物均以寬的濃度范圍(10pM至10μM)一式兩份地進行測試。將測試化合物(20μl/well)轉移至96深孔板(TreffLab)中，并加入180μl含有MgCl2(10mM)和CaCl2(2mM)的HEPES-NaOH(20mM，pH 7.4)(結合緩沖液)，300μl以nM計濃度為3.3x Kd的放射性配體3[H]-(S)-4-[(乙基-苯基-氨基)-甲基]-4，5-二氫-唑-2-基胺和500μl膜(以50μg蛋白/ml重新懸浮)。96深孔板在4℃溫育1hr。通過經由在聚乙烯亞胺(0.3％)中預浸1hr并用1ml冷的結合緩沖液洗滌3次的Unifilter-96板(Packard Instrument Company)和玻璃濾器GF/C(Perkin Elmer)迅速過濾終止溫育。在添加45μl Microscint 40(PerkinElmer)后，將Unifilter-96板密封，并在1hr后使用TopCount微板閃爍計數(shù)儀(Packard Instrument Company)計數(shù)放射活性。
針對小鼠TAAR1的放射性配體結合測定
膜制備和放射性配體結合
穩(wěn)定表達小鼠TAAR1的HEK-293細胞在含有胎牛血清(10％，在56℃熱滅活30min)，青霉素/鏈霉素(1％)，和375μg/ml遺傳霉素(Gibco)的DMEM高葡萄糖培養(yǎng)基中在37℃和5％CO2保持。使用胰蛋白酶/EDTA將細胞從培養(yǎng)瓶中釋放，收獲，用冰-冷的PBS(不含Ca2+和Mg2+)洗滌兩次，以1’000rpm在4℃沉淀5min，冰凍并保存在-80℃。將冰凍的沉淀懸浮在20ml含有10mM EDTA的HEPES-NaOH(20mM，pH 7.4)中，并用Polytron(PT 6000，Kinematica)以14’000rpm勻質化20s。勻漿以48’000x g在4℃離心30min。之后，去除并棄去上清液，并使用Polytron(以14’000rpm，20s)將沉淀重新懸浮在20ml含有0.1mM EDTA的HEPES-NaOH(20mM，pH 7.4)中。重復此程序，并將最終的沉淀重新懸浮在含有0.1mM EDTA的HEPES-NaOH中，并使用Polytron勻質化。典型地，將2ml膜部分的等分試樣保存在-80℃。對于每個新的膜批次，通過飽和曲線確定解離常數(shù)(Kd)。TAAR1放射性配體3[H]-(S)-4-[(乙基-苯基-氨基)-甲基]-4，5-二氫-唑-2-基胺(在WO 2008/098857中描述)以與計算的Kd值相等的濃度使用，其通常為大約0.7nM，產生約0.5％的該放射性配體的結合，和占總結合的約70％的特異性結合。非特異性結合定義為在10μM未標記配體的存在下結合的3[H]-(S)-4-[(乙基-苯基-氨基)-甲基]-4，5-二氫-唑-2-基胺的量。所有化合物均以寬的濃度范圍(10pM至10μM)一式兩份地進行測試。將測試化合物(20μl/孔)轉移至96深孔板(TreffLab)中，并加入180μl含有MgCl2(10mM)和CaCl2(2mM)的HEPES-NaOH(20mM，pH 7.4)(結合緩沖液)，300μl以nM計濃度為3.3x Kd的放射性配體3[H]-(S)-4-[(乙基-苯基-氨基)-甲基]-4，5-二氫-唑-2-基胺和500μl膜(以60μg蛋白/ml重新懸浮)。96深孔板在4℃溫育1hr。通過經由在聚乙烯亞胺(0.3％)中預浸1hr并用1ml冷的結合緩沖液洗滌3次的Unifilter-96板(Packard Instrument Company)和玻璃濾器GF/C(Perkin Elmer)迅速過濾終止溫育。在添加45μl Microscint 40(PerkinElmer)后，將Unifilter-96板密封，并在1hr后使用TopCount微板閃爍計數(shù)儀(Packard Instrument Company)計數(shù)放射活性。
所述化合物在小鼠或大鼠中顯示如下表所示的對TAAR1(以μM計)的Ki值(μM)。
可以將式I化合物和式I化合物的藥用鹽用作藥物，例如以藥物制劑的形式?？梢詫⑺幬镏苿┛诜o藥，例如以片劑、包衣片劑、糖錠劑、硬和軟明膠膠囊、溶液、乳劑或混懸劑的形式。然而，給藥還可以直腸給藥，例如以栓劑形式，或者腸胃外給藥，例如以注射液形式。
可以用藥學上惰性的無機或有機載體加工式I化合物用于藥物制劑的制備。例如，可以使用乳糖、玉米淀粉或其衍生物、滑石、硬脂酸或其鹽等，作為用于片劑、包衣片劑、糖錠劑和硬明膠膠囊的那些載體。用于軟明膠膠囊的合適載體為，例如，植物油、蠟、脂肪、半固體和液體多元醇等。然而，取決于活性物質的本性，在軟明膠膠囊的情況下通常不需要載體。用于制備溶液和糖漿的合適載體為，例如，水、多元醇、甘油、植物油等。用于栓劑的合適載體為，例如，天然或硬化油、蠟、脂肪、半液體或液體多元醇等。
此外，藥物制劑可以含有防腐劑、增溶劑、穩(wěn)定劑、潤濕劑、乳化劑、甜味劑、著色劑、調味劑、改變滲透壓的鹽、緩沖劑、掩蔽劑或者抗氧化劑。它們還可以含有其它的治療上有價值的物質。
含有式I化合物或其藥用鹽以及治療上惰性的載體的藥物也是本發(fā)明的目的，同樣的是用于它們的制備的方法，所述方法包括將一種或多種式I化合物和/或藥用酸加成鹽以及如果需要，一種或多種其他治療上有價值的物質，與一種或多種治療上惰性的載體一起得到蓋倫制劑給藥形式。
根據本發(fā)明的最優(yōu)選的適應證是包括中樞神經系統(tǒng)的病癥的那些，例如抑郁癥、精神病、帕金森病、焦慮癥、注意缺陷多動障礙(ADHD)以及糖尿病的治療或預防。
劑量可以在寬限度內變化并且當然應在每個特定的情況下調整以適應個體的需求。在口服給藥的情況下，用于成人的劑量可以在以下范圍變化：每天約0.01mg至約1000mg的通式I化合物或相應量的其藥用鹽。每日的劑量可以作為單次劑量給藥或以分開的劑量給藥，并且此外，當其被認為需要時也可以超過上限。
片劑制劑(濕法制粒)
制備程序
1.將第1、2、3和4項混合，并用純化水制粒。
2.將顆粒在50℃干燥。
3.使顆粒通過合適的研磨設備。
4.加入第5項并混合三分鐘；在合適的壓機上壓制。
膠囊制劑
制備程序
1.將第1、2和3項在合適的混合器中混合30分鐘。
2.加入第4和5項并混合3分鐘。
3.填充至合適的膠囊中。