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一種檢測革蘭氏陽性細(xì)菌耐藥基因的基因芯片試劑盒的制作方法

文檔序號:12697567閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.用于檢測革蘭氏陽性細(xì)菌耐藥基因的引物對組,由如下3個引物對組成:

1)如下(a1)或(a2)所示的引物對,記為引物對1:

(a1)由序列表中序列1和序列2所示的兩條單鏈DNA分子組成的引物對;

(a2)由將序列表中序列1和序列2經(jīng)過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈DNA分子組成的,且與(a1)中所述引物對功能相同的引物對;

2)如下(b1)或(b2)所示的引物對,記為引物對2:

(b1)由序列表中序列3和序列4所示的兩條單鏈DNA分子組成的引物對;

(b2)由將序列表中序列3和序列4經(jīng)過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈DNA分子組成的,且與(b1)中所述引物對功能相同的引物對;

3)如下(c1)或(c2)所示的引物對,記為引物對3:

(c1)由序列表中序列5和序列6所示的兩條單鏈DNA分子組成的引物對;

(c2)由將序列表中序列5和序列6經(jīng)過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈DNA分子組成的,且與(c1)中所述引物對功能相同的引物對。

2.用于檢測革蘭氏陽性細(xì)菌耐藥基因的成套單鏈DNA,由探針組和權(quán)利要求1所述的引物對組組成;

所述探針組由如下3個單鏈DNA探針組成:序列表中序列7所示的單鏈DNA探針1;序列表中序列8所示的單鏈DNA探針2;序列表中序列9所示的單鏈DNA探針3。

3.用于檢測革蘭氏陽性細(xì)菌耐藥基因的試劑盒,含有權(quán)利要求1所述的引物對組,以及雜交芯片;

所述雜交芯片是按照包括如下步驟的方法制備獲得的:將通式為“NH2-(T)n-雜交探針序列”的3種單鏈檢測探針分別通過氨基與醛基的反應(yīng)固定到醛基修飾化的固相載體上,獲得所述雜交芯片;所述通式中的(T)n表示n個連續(xù)的T,n為大于等于5,且小于等于30的整數(shù);所述通式中對應(yīng)于所述3種單鏈檢測探針的3種雜交探針序列分別如序列表中序列7-9所示。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的試劑盒,其特征在于:所述試劑盒中還含有經(jīng)熒光標(biāo)記的隨機(jī)引物;所述隨機(jī)引物的序列為5’-NX-3’,N表示A、G、C和T中的任一種,6≤X≤15,且X為整數(shù),NX表示X個連續(xù)的脫氧核糖核苷酸。

5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的試劑盒,其特征在于:所述試劑盒中還含有雜交 液;所述雜交液中含有經(jīng)熒光標(biāo)記的無關(guān)單鏈DNA分子;所述無關(guān)單鏈DNA分子為非源自于所述革蘭氏陽性細(xì)菌耐藥基因的單鏈DNA分子。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的試劑盒,其特征在于:所述雜交芯片的制備方法還包括將表面化學(xué)質(zhì)控探針QC、和/或雜交質(zhì)控探針PC、和/或陰性對照探針BC通過氨基與醛基的反應(yīng)固定到所述醛基修飾化的固相載體上的步驟;

所述表面化學(xué)質(zhì)控探針QC、所述雜交質(zhì)控探針PC和所述陰性對照探針均為單鏈探針;

所述表面化學(xué)質(zhì)控探針QC的一端經(jīng)氨基修飾,另一端具有熒光標(biāo)記;

所述雜交質(zhì)控探針PC的一端經(jīng)氨基修飾,且能與所述雜交液中的所述無關(guān)單鏈DNA分子雜交;

所述陰性對照探針BC的一端經(jīng)氨基修飾,且與源自于所述細(xì)菌耐藥基因的任何單鏈DNA分子均不能雜交。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的試劑盒,其特征在于:所述表面化學(xué)質(zhì)控探針QC自5’端到3’端的結(jié)構(gòu)組成為“NH2-TCACTTGCTTCCGTTGAGG-Hex”;

所述雜交質(zhì)控探針PC自5’端到3’端的結(jié)構(gòu)組成為“NH2-TTTTTTTTTTTTCCTCAACGGAAGCAAGTGAT”;

所述陰性對照探針BC自5’端到3’端的結(jié)構(gòu)組成為“NH2-TTTTTTTTTTTTGTTGCTTCTGGAATGAGTTTGCT”。

8.權(quán)利要求1所述的引物對組或權(quán)利要求2所述的成套單鏈DNA或權(quán)利要求3-7中任一所述的試劑盒在如下(a)或(b)中的應(yīng)用:

(a)檢測或輔助檢測革蘭氏陽性細(xì)菌耐藥基因,或制備用于檢測或輔助檢測革蘭氏陽性細(xì)菌耐藥基因的產(chǎn)品;

(b)檢測或輔助檢測含有革蘭氏陽性細(xì)菌耐藥基因的細(xì)菌,或制備用于檢測或輔助檢測含有革蘭氏陽性細(xì)菌耐藥基因的細(xì)菌的產(chǎn)品。

9.根據(jù)權(quán)利要求1-8中任一所述引物對組或成套單鏈DNA或試劑盒或應(yīng)用,其特征在于:所述革蘭氏陽性細(xì)菌耐藥基因?yàn)槿缦轮械闹辽僖环N:mecA基因、vanA基因、vanB基因。

10.權(quán)利要求1所述的引物對組或權(quán)利要求2所述的成套單鏈DNA在制備權(quán)利要求3-7中任一所述的試劑盒中的應(yīng)用。

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