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一種植物瞬時(shí)表達(dá)植物DNA錯(cuò)配識(shí)別的核酸內(nèi)切酶的方法與流程

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技術(shù)特征:

1.一種植物DNA錯(cuò)配識(shí)別的核酸內(nèi)切酶的制備方法,包括如下步驟:在煙草葉片中表達(dá)植物DNA錯(cuò)配識(shí)別的核酸內(nèi)切酶,再?gòu)谋磉_(dá)植物DNA錯(cuò)配識(shí)別的核酸內(nèi)切酶的煙草葉片中提取植物DNA錯(cuò)配識(shí)別的核酸內(nèi)切酶。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于:所述在煙草葉片中表達(dá)植物DNA錯(cuò)配識(shí)別的核酸內(nèi)切酶,再?gòu)谋磉_(dá)植物DNA錯(cuò)配識(shí)別的核酸內(nèi)切酶的煙草葉片中提取植物DNA錯(cuò)配識(shí)別的核酸內(nèi)切酶的方法包括如下步驟:將所述植物DNA錯(cuò)配識(shí)別的核酸內(nèi)切酶的編碼基因?qū)朕r(nóng)桿菌,得到重組菌;再用所述重組菌侵染煙草外植體,得到侵染后煙草外植體;再?gòu)乃銮秩竞鬅煵萃庵搀w中提取所述植物DNA錯(cuò)配識(shí)別的核酸內(nèi)切酶,得到植物DNA錯(cuò)配識(shí)別的核酸內(nèi)切酶。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法,其特征在于:所述植物DNA錯(cuò)配識(shí)別的核酸內(nèi)切酶的編碼基因是通過(guò)重組表達(dá)載體導(dǎo)入所述農(nóng)桿菌的。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一所述的方法,其特征在于:所述侵染的方法為將所述重組菌注射到所述煙草葉片下表皮。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一所述的方法,其特征在于:所述重組表達(dá)載體為將所述植物DNA錯(cuò)配識(shí)別的核酸內(nèi)切酶的編碼基因插入表達(dá)載體中得到的載體。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一所述的方法,其特征在于:所述外植體為非子葉葉片;所述目的農(nóng)桿菌為農(nóng)桿菌EH105。

7.根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一所述的方法,其特征在于:所述植物DNA錯(cuò)配識(shí)別的核酸內(nèi)切酶為mung bean nuclease、SP1、S1、P1、ZEN1、ZEN2、CEL I、CEL II、M1、BENI、T7Endonuclease I、Endo V或T4Endonuclease VII;所述植物DNA錯(cuò)配識(shí)別的核酸內(nèi)切酶具體為CEL I。

8.根據(jù)權(quán)利要求1-7中任一所述的方法,其特征在于:所述CELI酶的編碼基因的核苷酸序列為序列表中序列3的第65-958位。

9.由權(quán)利要求1-8中任一所述的方法制備得到的植物DNA錯(cuò)配識(shí)別的核酸內(nèi)切酶。

10.權(quán)利要求9所述的植物DNA錯(cuò)配識(shí)別的核酸內(nèi)切酶在切割含有錯(cuò)配位點(diǎn)DNA中的應(yīng)用。

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