本發(fā)明涉及醫(yī)藥有機合成領域，具體地，涉及一種制備去氧膽酸或其酯、或其藥學可接受鹽，及其中間體的新方法。
背景技術：
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快速去除脂肪是古老的理想，有文獻報道，將去氧膽酸注射至體內(nèi)脂肪沉積部位時，具有脂肪去除的特性。目前去氧膽酸主要來源于動物軀體，雖然成本相對較低，但存在可能含有動物病原體和其它有害因子的危險。
為了實現(xiàn)去氧膽酸去除脂肪的全部潛力，解決動物來源產(chǎn)品帶來的問題。本發(fā)明提供了一種以化學方式合成去氧膽酸的方法，不僅所得產(chǎn)品的收率高、純度高，還適用于質量控制，便于工業(yè)化生產(chǎn)。
技術實現(xiàn)要素：
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本發(fā)明提供了一種制備去氧膽酸或其酯或其藥學可接受鹽的方法：
所述方法包括，
g)在路易斯酸存在下使式1化合物與丙烯酸甲酯反應形成式2化合物
h)在氫化條件下使式2化合物與H2反應形成式3化合物
i)使式3化合物與氧化劑反應形成式4化合物
j)在氫化條件下使式4化合物與H2反應形成式5化合物
k)使式5化合物與還原劑反應形成式6化合物
l)使式6化合物暴露于去保護條件下形成其酯，并且任選地暴露于適宜水解條件下形成去氧膽酸或其藥學上可接受的鹽。
在一實施例中，g)項中的路易斯酸是EtAlCl2。
在一實施例中，h)項中的氫化條件包含pd/C或PtO2催化劑。
在一實施例中，i)項中的氧化條件包含過氧化叔丁醇和氯鉻酸吡啶鹽。
在一實施例中，j)項中的氫化條件包含pd/C或PtO2催化劑。
在一實施例中，k)項中的還原劑是LiAl(OtBu)3H。
在一實施例中，l)項中的去保護和水解條件包含使式6化合物與堿土金屬氫氧化物、堿土金屬醇鹽、或二者的混合物反應。在某些方面，水解條件包括酸處理以獲得去氧膽酸。在其他方面中，省略酸處理以獲得相應的鹽。
在一實施例中，堿土金屬氫氧化物是NaOH。
在一實施例中，取氧膽酸的鹽可通過與堿土金屬醇鹽或氫氧化物反應來制備。去氧膽酸 的鹽包括鈉、鉀、或鋰鹽。
在一實施例中，提供選自由以下組成的群組的中間體化合物：
(Z)-3α-苯甲酰氧基-5β-孕甾-9(11)，17(20)-二烯(1)；
(E)-3α-苯甲酰氧基-5β-膽-9(11)，16,-二烯-24-酸甲酯(2)；
3α-苯甲酰氧基-5β-膽-9(11)-烯-24-酸甲酯(3)；
3α-苯甲酰氧基-5β-膽-9(11)-烯-12-酮-24-酸甲酯(4)；
3α-苯甲酰氧基-5β-膽烷-12-酮-24-酸甲酯(5)；
3α-苯甲酰氧基-5β-膽-9(11)-烯-12-羥基-24-酸甲酯(5a)；
3α-苯甲酰氧基-5β-膽烷-12β-羥基-24-酸甲酯(5b)；和
3α-苯甲酰氧基-5β-膽烷-12α-羥基-24-酸甲酯(6)。
在一優(yōu)選實施例中，本發(fā)明中去氧膽酸或其酯或其藥學可接受鹽由以下方法制備：
所述方法包括：
g)在路易斯酸存在下使式1化合物與丙烯酸甲酯反應形成式2化合物
h)在氫化條件下使式2化合物與H2反應形成式3化合物
i)使式3化合物與氧化劑反應形成式4化合物，HPLC監(jiān)測化合物3(1.2％)<2％(面積歸一化法)，停止反應，淬滅，處理反應。隨后加入氯鉻酸吡啶鹽，氧化反應過程中生成的化合物4a獲得化合物4
j)在氫化條件下使式4化合物與H2反應形成式5化合物，停止反應，加入氯鉻酸吡啶鹽，分別氧化反應過程中生成的化合物5a和化合物5b，由此獲得的化合物4在氫化條件下，繼續(xù)與H2反應得到化合物5，這樣循環(huán)操作提高化合物5的收率
k)使式5化合物與還原劑反應形成式6化合物
l)使式6化合物暴露于去保護條件下形成其酯，并且任選地暴露于適宜水解條件下形成去氧膽酸或其藥學上可接受的鹽，所述適宜水解條件為NaOH溶液。
在一實施例中，本發(fā)明中的化合物1由以下方法制備：
a)CH2Cl2，H2SO2；b)TsOH，toluene；c)10％Pd/C，NMP，H2；d)1.LiAl(tBuO)3.THF2.TsOH；e)Benzoyl Chloride，DMAP，TEA；f)Ph3PCH2CH3Br，KOtBu，THF
在一實施例中，本發(fā)明的化合物1.4由以下方法制備：
室溫下，以N-甲基吡咯烷酮為溶劑、10％pd/C為催化劑，將式1.3化合物與H2反應生成式1.4化合物
本發(fā)明中術語“路易斯酸”是指電子對受體。包括但不限于EtAlCl2、氯化鋁、氯化鐵、三氟化硼、五氯化鈮以及鑭系元素的三氟甲磺酸鹽。
術語“氫化劑”是指可向分子提供氫的試劑。
具體實施方法：
下面通過非限定性實施例來對本發(fā)明進行說明，應當理解為，此處描述的優(yōu)選實施例僅用于說明和解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
實施例1：化合物1.2的合成
5L三口瓶中加入二氯甲烷(2.0L，8V)和化合物1.1(250.0g，826.5mmol)，攪拌加熱至溶解。向反應液中滴加濃硫酸(124.0g，1240.0mmol,98％)，加熱反應液至回流，攪拌4h停止反應。
待反應液冷卻后，將其緩慢倒入1L冰水中，攪拌5min，隨后滴加飽和碳酸鈉溶液調(diào)PH值至7～8。靜止分液，水相以CH2Cl2(200mL，0.8V)萃取兩次，合并有機相；有機相以水(500mL，2V)、飽和食鹽水(500mL，2V)洗滌并以無水硫酸鈉干燥。干燥后過濾得到有機相，旋蒸除去有機相得粗品。向粗品中加乙酸乙酯(375mL，1.5V)，室溫下打漿洗滌12h過濾，以乙酸乙酯(50mL，0.2V)洗滌濾餅，抽干，20-40℃真空干燥得化合物1.2(211.0g，收率89.7％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:5.76(s,1H),5.64-5.45(m,1H),2.70-2.33(m,6H),2.23-2.02(m,7H),1.72-1.56(m,1H),1.57-1.45(m,1H),1.36(s,3H),1.27-1.08(m,1H),0.89(s,3H).
實施例2：化合物1.3的合成
將化合物1.2(200.0g，703.3mmol)、乙二醇(261.9g，4.22mol)、一水合對甲苯磺酸(6.7g，35.2mmol)和甲苯(2.0L，10V)置于3L單口瓶中，安裝分水器及冷凝管，攪拌加熱至回流反應2h。
冷卻后，將反應液倒入水(800mL，4V)中，分液，水相以乙酸乙酯：四氫呋喃＝5:1(200mL，1V)萃取，合并有機相，有機相以水(300mL，1.5V)、飽和食鹽水(300mL，1.5V)洗滌，無水硫酸鈉干燥，干燥后過濾得有機相，旋蒸除去溶劑得粗品。粗品以乙酸乙酯(1.0L，5V)加熱 溶解，隨后加入正庚烷(400mL，2V)降至室溫攪拌析晶1h，抽濾，以乙酸乙酯：正庚烷＝2.5:1(150mL，0.75V)洗滌濾餅，抽干，20-30℃真空干燥得化合物1.3(196.2g，收率85.0％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:5.75(s,1H),5.54(d,J＝5.8Hz,1H),3.93(m,2H),3.88(m,2H),
2.64-2.30(m,6H),2.26-1.97(m,7H),1.87(m,1H),1.73-1.65(m,1H),1.35(s,3H),1.11(m,1H),0.86(s,3H).
實施例3：化合物1.4的合成
化合物1.3(150.0g,456.8mmol)、鈀炭(15.0g,10％)、N-甲基吡咯烷酮(1.5L，10V)置于加壓反應釜中，氫氣置換，在40-60psi、150rpm的條件下室溫攪拌6h。
加入乙酸乙酯(750mL，5V)，過濾除去鈀炭，加水(750mL，5V)，水相以乙酸乙酯(300mL，2V)萃取兩次，合并有機相，有機相以水(450mL，3V)、飽和食鹽水(450mL，3V)洗滌后，用無水硫酸鈉干燥，過濾獲得有機相，旋蒸除去溶劑得化合物1.4(135.8g，收率90.0％)。
經(jīng)過TLC和ELSD檢測，全部是5β構型的化合物1.4，未發(fā)現(xiàn)5α構型的結構。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:5.44(d,J＝5.6Hz,1H),3.94-3.92(m,4H),2.50-2.40(m,2H),2.17(m,2H),2.14-1.95(m,7H),1.86-1.69(m,4H),1.49(m,4H),1.10(s,3H),0.99-0.87(m,1H),0.81(s,3H).
實施例4：化合物1.5的合成
將化合物1.4(130.0g,393.4mmol)、四氫呋喃(1.3L，10V)投入2L三口瓶，氮氣保護下攪拌溶解，降溫至-5至5℃，滴加LiAl(OtBu)3H(786.8mL,786.8mmol,1.0M)，室溫攪拌30min。滴加7％對甲苯磺酸(260mL，2V)，室溫攪拌6h。加水(520mL，4V)，以乙酸乙酯(520mL，4V)萃取，合并有機相，有機相以水(520mL，4V)、飽和食鹽水(390mL，3V)洗滌并以無水硫酸鈉干燥，過濾獲得有機相，旋蒸除去溶劑的粗品；粗品以丙酮：正庚烷＝1:8(390mL，3V)室溫打漿洗滌1h，抽干，20℃化合物1.5(107.8g，收率95.0％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:5.42(d,J＝5.6Hz,1H),3.73-3.60(m,1H),2.46(m,1H),2.23-1.98(m,7H),1.80-1.70(m,2H),1.57-1.36(m,7H),1.33-1.13(m,3H),1.09(s,3H),0.82(s,3H).
實施例5：化合物1.6的合成
化合物1.5(30.0g,104mmol)、DMAP(1.22g，10mmol)及三乙胺(30.4g，300mmol)溶于300mL二氯甲烷中，室溫下向其中滴加苯甲酰氯(28.1g，200mmol)，滴完完畢，升溫至回流，反應10小時，TLC顯示反應完全，停止反應。冷卻反應液至室溫，補加200mL二氯甲烷，100mL水洗滌反應液一次，2N HCl(150mL)洗滌有機相一次，飽和食鹽水(100mL)洗滌有機相一次，減壓脫除溶劑得油狀物，300mL丙酮溶解油狀物，向其中緩慢滴加50mL水，漸有固體析出，冷卻至0-5℃攪拌2-4小時，抽濾得白色粉末固體化合物1.6(38.2g，收率95％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.05(dd,J＝8.2,1.0Hz,2H),7.55(m,1H),7.45(m,2H),5.49(d,J＝5.6Hz,1H),5.08-4.93(m,2H),2.49(m,1H),2.32-1.99(m,7H),1.95-1.85(m,1H),1.84-1.51(m,7H),1.48-1.20(m,3H),1.15(s,3H),0.85(s,3H).
實施例6：化合物1的合成
氮氣保護下，三苯基乙基溴化膦(41.6g，112mmol)溶于150mL四氫呋喃，20-30℃下向混懸液中加入叔丁醇鉀(12.6g，112mmol)，反應液即呈橘紅色，室溫攪拌1小時，滴加100毫升溶有化合物1.6(20g，51mmol)的四氫呋喃溶液，20分鐘滴完，室溫反應2小時，TLC顯示原料完全轉化，將反應液傾倒至400mL冰水中，加入甲基叔丁基醚(50mL)×2分液萃取，飽和食鹽水(40mL)洗滌有機層，減壓脫除溶劑，留約40mL體積，加入200mL異丙醇，減壓脫除四氫呋喃，留約100mL溶劑時，已有大量固體析出，向其中滴加20毫升水，冷卻結晶液至0-5℃，攪拌析晶1小時，過濾得白色針狀結晶，40-50℃鼓風干燥的化合物1(17.5g，收率85％)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.06(m,2H),7.55(t,J＝8.0,8.0Hz,1H),7.44(t,J＝8.0,8.0Hz,2H),5.46(s,1H),5.22(m,1H),5.03(m,1H),2.48-2.37(m,3H),2.33-2.20(m,1H),2.20-2.00(m,3H),1.94-1.84(m,1H),1.81-1.60(m,9H),1.51-1.16(m,5H),1.13(s,3H),0.84(s,3H).
實施例7：化合物2的合成
5000ml三口圓底燒瓶中加入化合物1(220g，544mmol)和二氯甲烷(2200ml，10V)攪拌溶解，進行氮氣置換。將反應體系降溫至-5～5℃之間，約15min滴加完丙烯酸甲酯(117g，1360mmol)，繼續(xù)攪拌30min，控制反應體系溫度在-5～5℃，隨后滴加二氯乙基鋁溶液(25％己烷溶液，829mL，1631mmol)，繼續(xù)攪拌30min后，將反應體系升溫至25～30℃攪拌反應48小時。經(jīng)HPLC監(jiān)測化合物1<3％(歸一化法面積)，停止反應。
攪拌條件下，將反應液緩慢加入到冰水混合物(4400g，20V)中，分液，萃取，合并有機相。有機相先后用1mol/L鹽酸(2200ml，10V)和10％氯化鈉溶液(2200ml，10V)洗滌。有機相減壓除去溶劑后，加入異丙醇(1320ml，6V)，繼續(xù)減壓蒸餾直至蒸出的液體密度與異丙醇密度一致，補加異丙醇(1320ml，6V)，然后滴加水(275ml，1.25V)，大量固體析出，在20～30℃下攪拌2小時，然后降溫至0～5℃下繼續(xù)攪拌2h，停止攪拌。過濾，濾餅用少量低溫的異丙醇/水(4/1)洗滌，抽干，50℃下鼓風干燥直至水分<1％，得到化合物2(238g，收率89％)。
1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ:7.93-7.95(d,2H),7.63-7.67(t,1H),7.49-7.53(t,3H),5.43(s,1H),5.34(s,1H),4.92(s,1H),3.58(s,3H),2.21-2.26(m,2H),2.10-2.14(m,4H),1.95-2.03(m,2H),1.81-1.87(m,2H),1.71-1.72(m,1H),1.54-1.70(m,5H),1.47-1.53(q,1H),1.33-1.35(d,2H),1.16-1.19(q,1H),1.10(s,3H),1.02-1.03(d,1H),1.01-1.02(d,3H),0.65(s,3H).
m.p.＝109-109.7℃.
HPLC(UV,aera):98.4％.
實施例8：化合物3的合成
1.0L的潔凈高壓釜中加入化合物2(1000g，2.04mol)，四氫呋喃(5000mL，5V)，和10％Pd/C(50％w.t.，120g，12％w.t.)后，將裝置密封好，先后進行氮氣置換和氫氣置換，保持氫氣壓力為1.2MPa下反應24小時。經(jīng)HPLC監(jiān)測化合物2<2％(面積歸一化法)，停止反應。進行氮氣置換后，取出反應漿液，過濾，濾液減壓除去溶劑，再加入乙腈(2000mL，2V)后，繼續(xù)減壓蒸餾除去溶劑，隨后加入乙腈(12L，12V)加熱溶清，不進行純化直接進行下一步反應。
實施例9：化合物4的合成
控制實施例8中所得化合物3和乙腈的反應液溫度在45～50℃，向其中加入碘化亞銅(309g，1624mmol)后，加入TBHP(70％)(783g，6089mmol)，繼續(xù)攪拌24小時，HPLC監(jiān)測化合物3(1.2％)<2％(面積歸一化法)，停止反應。將反應體系溫度降至15～25℃，隨后加入乙酸乙酯(5.0L，5V)，滴加飽和亞硫酸鈉溶液(5.0L，5V)，攪拌，過濾，濾液加入飽和氯化鈉溶液(3.0L，3V)攪拌，分液，合并有機相，減壓去除部分溶劑，保持體系的體積在13L左右。
控制上述去除溶劑的有機相體系溫度在20～30℃，分批加入氯鉻酸吡啶鹽(481g，2233mmol)，HPLC監(jiān)測化合物4a<2％(面積歸一化法)，停止反應。加入乙酸乙酯(5.0L，5V)，過濾除去不溶物，濾液加入飽和亞硫酸鈉溶液(5.0L，5V)和飽和氯化鈉溶液(3.0L，3V)，攪拌 分液，合并有機相。有機相用氯化鈉溶液(3.0L,3V)洗滌一遍，有機相減壓除去溶劑。加入二氯甲烷(3000ml，3V)溶解，經(jīng)過硅膠柱(100-200目，10.0Kg，10w.t.)，二氯甲烷作為洗脫液，收集產(chǎn)品，減壓除去部分二氯甲烷溶劑，加入正庚烷(15.0L,15v)，繼續(xù)減壓除去二氯甲烷，體系有大量固體析出，過濾得到化合物4(713g,收率71％)
1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ:7.93-7.95(d,2H),7.62-7.64(t,1H),7.48-7.52(t,3H),5.64(s,1H),4.93(s,1H),3.58(s,3H),2.41-2.49(m,1H),2.34-2.36(m,1H),2.22-2.26(m,1H),2.10-2.13(m,2H),1.86-1.88(m,2H),1.64-1.75(m,6H),1.32-1.55(m,7H),1.20(s,3H),1.24-1.26(m,2H),0.91-0.93(d,3H),0.86(s,3H).
m.p.＝124.6-126.4℃.
HPLC(UV,aera):96.9％.
實施例10：化合物5的合成
10L潔凈干燥的高壓釜中加入化合物4(600g，1184mmol)，四氫呋喃(6.0L，10V)的溶液，和10％Pd/C(干，150g，25％w.t.)，先后進行氮氣置換和氫氣置換，保持體系壓力在1.2Mpa，將反應體系加熱至55～65℃，攪拌24小時，HPLC監(jiān)測化合物5占67％，烯醇式化合物(5a)和羥基化合物(5b)占31％，未知雜質2％，停止反應。
過濾回收Pd/C，濾液減壓除去溶劑后用乙酸乙酯(6.0L,10V)溶解，控制體系溫度在20～30℃，分批加入氯鉻酸吡啶鹽(76.4g，355mmol)，繼續(xù)攪拌12小時，HPLC顯示烯醇式化合物和羥基化合物低于1％，經(jīng)過硅藻土床過濾，濾液水洗，合并有機相，有機相減壓除去溶劑，用四氫呋喃(6.0L，10V)溶解，得到溶液。
將溶液加入到10L潔凈干燥的高壓釜中，加入之前回收的Pd/C，保持體系氫氣壓力1.5MPa，溫度55-65℃下，反應24小時，HPLC監(jiān)測化合物4<1％，化合物5占比85％。過濾回收Pd/C，濾液減壓除去溶劑后用乙酸乙酯(6.0L,10V)溶解，控制體系溫度在20～30℃，分批加入氯鉻酸吡啶鹽(158g，734mmol)，繼續(xù)攪拌12小時，HPLC顯示烯醇式化合物和羥基化合物低于1％，經(jīng)過硅藻土床過濾，濾液水洗，合并有機相，有機相減壓除去溶劑，用四氫呋喃(6.0L，10V)溶解，得到溶液。
將溶液加入到10L潔凈干燥的高壓釜中，加入之前回收的Pd/C，保持體系氫氣壓力 1.5MPa，溫度55-65℃下，反應24小時，HPLC監(jiān)測化合物4<1％，化合物5占比92％。
反應體系用0.22微米有機濾膜過濾除去Pd/C，加入活性炭(60g，10％w.t)，加熱回流30min，用0.22微米有機濾膜過濾除去活性炭，濾液減壓除去溶劑，加入二氯甲烷(1800ml，3V)和甲醇(4800ml，8V)。減壓除去二氯甲烷，過程有白色固體析出，降溫析晶，保持體系溫度在-5～0℃下攪拌2小時，停止攪拌，過濾，濾餅用冷甲醇(600mL，1V)洗滌，抽干，50℃鼓風干燥直至衡重為止，得到化合物5(510g,收率85％)。
1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ:7.95-7.96(d,2H),7.62-7.66(m,1H),7.49-7.52(t,2H),4.84-4.89(m,1H),3.57(s,3H),2.44-2.54(m,1H),2.30-2.37(m,1H),2.17-2.25(m,1H),1.58-1.92(m,13H),1.22-1.49(m,8H),1.05-1.17(m,2H),1.02(s,3H),0.97(s,3H),0.75-0.77(m,3H).
m.p.＝123.2-125.2℃.
HPLC(UV,aera):97.2％.
實施例11：化合物6的合成
氮氣保護下，3000ml三口圓底燒瓶中加入化合物5(170g，334mmol)，四氫呋喃(1020ml,6V)，攪拌溶解?？刂企w系溫度在-5～5℃，滴加1mol/L三叔丁氧基氫化鋁鋰四氫呋喃溶液(501mL，501mmol)，滴加完成后，在-5～5℃下繼續(xù)攪拌24小時。HPLC監(jiān)測化合物5(aera)<1％，停止反應。將體系冷卻，保持體系溫度不高于10℃，滴加2mol/L鹽酸(600ml)，分液，合并有機相，飽和氯化鈉(170ml，1V)和2mol/L鹽酸(170ml，1V)一起攪拌洗滌，分液獲得有機相，飽和氯化鈉(340ml，2V)洗，分液獲得有機相，有機相減壓除去部分溶劑，剩約300ml溶劑體積時，加入正庚烷(1700ml，10V)攪拌，分液，獲得有機相，繼續(xù)減壓蒸餾除去四氫呋喃后(通過蒸出的液體密度與正庚烷一致來判斷)，同時保證體系體積在1700ml左右溶液，在10～25℃下攪拌2小時，過濾，濾餅用少量正庚烷洗滌，抽干，得化合物6(145g，收率85％)。
1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ:7.96-7.98(d,2H),7.63-7.67(t,1H),7.50-7.54(t,2H),4.88(m,1H),4.27-4.28(m,1H),4.27-4.28(d,1H),3.80-3.81(d,1H),3.60(s,3H),2.28-2.35(m,1H),2.16-2.24(m,1H),1.85-1.97(m,2H),1.68-1.82(m,6H),1.55-1.66(m,4H),1.48-1.51(m,2H),1.32-1.48(m,4H),1.14-1.28(m,3H),0.96-1.14(m,3H),0.93(s,3H),0.91(s,3H),0.61(s,3H).
m.p.＝107.7-112.3℃.
HPLC(UV,aera):98.81％.
實施例12：粗去氧膽酸的合成
2000ml三口圓底燒瓶中加入化合物6(100g，196mmol)，四氫呋喃(600ml，6V)和甲醇(600ml，6V)，攪拌溶解，保持體系溫度低于25℃下，滴加4mol/L氫氧化鈉溶液(196ml，784mmol)，在20-30℃溫度下攪拌24小時。HPLC監(jiān)測反應完成，補加水(800ml，8V)，將體系溫度降到10～15℃后，滴加1mol/L鹽酸調(diào)節(jié)pH至9～10，然后減壓除去有機溶劑，冷卻至10～25℃，二氯甲烷(500ml*2)洗滌兩遍，用1mol/L鹽酸調(diào)節(jié)pH至1～2，攪拌2小時，過濾，濾液用水(500ml，5V)洗滌，抽干，鼓風干燥得到固體101g。15～25℃下，將產(chǎn)品溶于甲基叔丁基醚(1000ml,10V)，攪拌12小時以上，過濾，濾餅用甲基叔丁基醚(400ml,4V)洗滌后，經(jīng)過鼓風干燥得到去氧膽酸粗品(73.1g，95％)。
實施例13：去氧膽酸的純化
2000ml三口圓底燒瓶中加入去氧膽酸粗品(100g，196mmol)和10％甲醇的二氯甲烷溶液(1500ml，15V)，加熱攪拌溶解，過濾除去不溶物，繼續(xù)加熱蒸餾，同時滴加二氯甲烷(2000ml)，保證滴加速度與蒸餾出液體速度一致，通過氣相測定體系的甲醇含量在2.5％～3％，降溫至5～10℃，攪拌2小時后過濾，濾餅用二氯甲烷(200ml，2V)洗滌，鼓風干燥，經(jīng)過HPLC(ELSD)確定最大單雜低于0.1％。將所得產(chǎn)品(為二氯甲烷合物)加入到水中(1000ml)，再加入氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至9-10，攪拌溶解，然后滴加1mol/L鹽酸調(diào)節(jié)pH至1～2，在10～25℃下攪拌2小時后，過濾，濾餅用水(500ml)洗滌，然后濾餅用純水(2000ml,20V)在60-80℃下漿化4-8h，然后過濾，抽干，經(jīng)過干燥得到去氧膽酸純品(92g，收率92％)。
1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ:11.99(s,1H),4.38-4.58(m,1H),4.21-4.30(m,1H),3.71-3.79(m,1H),3.30-3.51(m,2H),2.12-2.31(m,1H),2.05-2.12(m,1H),1.71-1.91(m,4H),1.42-1.71(m,5H),1.28-1.38(m,9H),1.15-1.25(m,3H),1.11(s,3H),0.95-1.08(m,2H),0.91(d,3H),0.86(s,3H).
m.p.＝173.2-174.1℃.
HPLC(ELSD)純度：99.9％.