本發(fā)明屬于藥物結(jié)晶領(lǐng)域，涉及氘代核苷衍生物的結(jié)晶，具體涉及氘代索非布韋的結(jié)晶。
背景技術(shù)：
：吉利德在收購(gòu)法莫賽特后，開(kāi)發(fā)并上市了索非布韋(sofosbuvir)，2013年12月，F(xiàn)DA批準(zhǔn)索非布韋作為聯(lián)合抗病毒治療方案的一部分治療丙肝病毒感染；2014年1月，EC批準(zhǔn)索非布韋聯(lián)合其它抗病毒藥物(利巴韋林和聚乙二醇化干擾素α)治療基因型1-6慢性HCV感染。索非布韋的治療周期較長(zhǎng)，通常需要12周-24周的療程，治療費(fèi)用極其昂貴，目前全球僅有極少數(shù)患者能夠承受該治療并獲益，故仍需治療丙肝感染的化合物。中國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)CN201410335039.9提供了一類(lèi)氘代的核苷衍生物，其中實(shí)施例2制備的化合物5除了具有與索非布韋類(lèi)似的體外細(xì)胞毒性和抗丙肝病毒活性外，其藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)更是顯著優(yōu)于索非布韋，有望降低臨床的使用劑量，從而降低成本以讓更多患者受益。藥用化合物晶型的變化通常導(dǎo)致化合物具有不同的熔點(diǎn)、溶解度、吸濕性、穩(wěn)定性、生物活性等，這些均是影響藥物制備的難易、儲(chǔ)存穩(wěn)定性、制劑難易和生物利用度等的重要因素。當(dāng)化合物存在多晶型時(shí)，由于特定多晶型物具有特異性的熱力學(xué)性質(zhì)和穩(wěn)定性，因此在制備的過(guò)程中，了解在各個(gè)劑型中應(yīng)用的化合物的晶型是重要的，以保證生產(chǎn)過(guò)程應(yīng)用相同形態(tài)的藥物。因此，保證化合物是單一的晶型或是一些晶型的已知混合物是必要的。在判斷何種多晶型物是優(yōu)選的時(shí)候，必須比較它們的許多性質(zhì)并且優(yōu)選的多晶型物是基于許多物理性質(zhì)做出選擇的。完全可能的是一種多晶型在某些方面如制備的難易、穩(wěn)定性等被認(rèn)為是關(guān)鍵性的條件下是優(yōu)選的。在其它情況下，不同的多晶型物可能因更高的溶解度或優(yōu)良的藥代動(dòng)力學(xué)而優(yōu)選。藥用化合物的新的多晶型物的發(fā)現(xiàn)提供了改善藥物物理特性的機(jī)會(huì)，即擴(kuò)展了物質(zhì)的全部性質(zhì)，從而可以更好地指導(dǎo)化合物及其制劑的研究，因此本發(fā)明提供的式5化合物的多晶型物在藥物的制造及其它應(yīng)用中有商業(yè)價(jià)值。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：在一方面，本發(fā)明提供一種如式5所示化合物的Ⅰ型結(jié)晶，使用Cu-Kα輻射，其在X-射線(xiàn)粉末衍射(XRD)圖譜中，在2θ度數(shù)約為6.87、7.31、20.90處有衍射峰；典型地在2θ度數(shù)約為4.99、6.87、7.31、9.49、18.14、20.90處有衍射峰；進(jìn)一步典型地在2θ度數(shù)約為4.78、4.99、6.60、6.87、7.31、8.22、8.84、9.49、18.14、20.64、20.90、21.97、23.49處有衍射峰。使用Cu-Kα輻射，Ⅰ型結(jié)晶的典型的XRD的譜圖具有如下特征：編號(hào)2θ(度)相對(duì)強(qiáng)度(％)14.783.924.9911.936.602.146.8743.357.31100.068.224.278.845.889.4913.7918.1411.91020.645.91120.9050.41221.976.31323.494.1在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，Ⅰ型結(jié)晶具有基本上如圖1所示的粉末X-射線(xiàn)衍射圖譜。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，Ⅰ型結(jié)晶具有基本上如圖2所示的DSC圖譜。再一方面，本發(fā)明提供一種Ⅰ型結(jié)晶的制備方法，包括：a)將無(wú)定形的索非布韋用二氯甲烷溶解；b)從二氯甲烷中分離出Ⅰ型結(jié)晶。其中步驟a)中二氯甲烷的量以能完全溶解索非布韋為宜。視需要，可進(jìn)行攪拌析晶或靜置析晶。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，在室溫下靜置析晶兩天。視需要，亦可加入少量Ⅰ型結(jié)晶的晶種進(jìn)行析晶。步驟b)中分離得到結(jié)晶后，可進(jìn)一步干燥。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，在50-60℃進(jìn)行真空干燥，干燥時(shí)間優(yōu)選為6-10小時(shí)。另一方面，本發(fā)明提供一種如式5所示化合物的Ⅱ型結(jié)晶，使用Cu-Kα輻射，其在X-射線(xiàn)粉末衍射(XRD)圖譜中，在2θ度數(shù)約為6.11、8.21、10.39、12.71、20.85處有衍射峰； 典型地在2θ度數(shù)約為6.11、8.21、10.39、10.87、12.19、12.71、13.76、14.11、16.85、17.19、17.70、17.98、18.83、19.39、19.81、20.14、20.85處有衍射峰；進(jìn)一步典型地在2θ度數(shù)約為6.11、8.21、10.39、10.87、12.19、12.71、13.76、14.11、15.90、16.85、17.19、17.70、17.98、18.83、19.39、19.81、20.14、20.85、21.84、25.55、26.96、27.74、28.13處有衍射峰。使用Cu-Kα輻射，Ⅱ型結(jié)晶的典型的XRD的譜圖具有如下特征：編號(hào)2θ(度)相對(duì)強(qiáng)度(％)16.1196.528.21100310.3955.1410.8714.9512.1914.5612.7155.2713.7614.6814.1114.9915.904.21016.8510.81117.1913.61217.7028.41317.9821.61418.8325.81519.3916.11619.8125.61720.1436.31820.8567.51921.8415.12025.5510.52126.9610.02227.745.32328.1312.9在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，Ⅱ型結(jié)晶具有基本上如圖3所示的粉末X-射線(xiàn)衍射圖譜。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，Ⅱ型結(jié)晶具有基本上如圖4所示的DSC圖譜。再一方面，本發(fā)明提供一種Ⅱ型結(jié)晶的制備方法，包括：a)將無(wú)定形的索非布韋用乙酸乙酯溶解；b)從乙酸乙酯中分離出Ⅱ型結(jié)晶。其中步驟a)中乙酸乙酯的量以能完全溶解索非布韋為宜。視需要，可進(jìn)行攪拌析晶或靜置析晶。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，攪拌析晶3小時(shí)。步驟b)中分離得到結(jié)晶后，可進(jìn)一步干燥。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，在50-60℃進(jìn)行真空干燥，干燥時(shí)間優(yōu)選為6-10小時(shí)。需要說(shuō)明的是，在XRD中，由結(jié)晶化合物得到的衍射譜圖對(duì)于特定的晶型往往是特征性的，其中譜帶(尤其是在低角度)的相對(duì)強(qiáng)度可能會(huì)因?yàn)榻Y(jié)晶條件、粒徑和其它測(cè)定條件的差異而產(chǎn)生的優(yōu)勢(shì)取向效果而變化。因此，衍射峰的相對(duì)強(qiáng)度對(duì)所針對(duì)的晶型并非是特征性的，判斷是否與已知的晶型相同時(shí)，更應(yīng)該注意的是峰的相對(duì)位置而不是它們的相對(duì)強(qiáng)度。在XRD圖譜中通常用2θ角或晶面距d表示峰位置，由于2θ角與入射X射線(xiàn)的波長(zhǎng)有關(guān)，兩者之間具有簡(jiǎn)單的換算關(guān)系：d＝λ/2sinθ，其中d代表晶面距，λ代表入射X射線(xiàn)的波長(zhǎng)(對(duì)于Cu-Ka，)，θ為衍射角。對(duì)于同種化合物的同種晶型，其XRD譜圖在整體上具有相似性，表征峰位置的2θ角誤差一般在±2％之內(nèi)，例如由于分析樣品時(shí)溫度的變化、樣品移動(dòng)或儀器的標(biāo)定等，峰的位置可能移動(dòng)；相對(duì)強(qiáng)度誤差可較大，但變化趨勢(shì)一致。另外，判斷晶型是否一樣時(shí)應(yīng)注意保持整體觀念，因?yàn)椴⒉皇且粭l衍射線(xiàn)代表一個(gè)物相，而是一套特定的“d-I/I1”數(shù)據(jù)才代表某一物相。還應(yīng)指出的是，在混合物的鑒定中，由于含量下降等因素會(huì)造成部分衍射線(xiàn)的缺失，此時(shí)，無(wú)需依賴(lài)高純?cè)嚇又杏^察到的全部譜帶，甚至幾條譜帶也可能對(duì)給定的結(jié)晶是特征性的。又一方面，本發(fā)明提供上述Ⅰ型結(jié)晶或Ⅱ型結(jié)晶的結(jié)晶組合物。其中Ⅰ型結(jié)晶的結(jié)晶組合物是指，組合物中Ⅰ型結(jié)晶占組合物重量的50％以上，優(yōu)選在80％以上，更優(yōu)選在90％以上，最優(yōu)選在95％以上，該組合物中可含有少量化合物5的其他結(jié)晶或無(wú)定形物，包括但不限于化合物5的Ⅱ型結(jié)晶或無(wú)定形物。Ⅱ型結(jié)晶的結(jié)晶組合物是指，組合物中Ⅱ型結(jié)晶占組合物重量的50％以上，優(yōu)選在80％以上，更優(yōu)選在90％以上，最優(yōu)選在95％以上，該組合物中可含有少量化合物5的其他結(jié)晶或無(wú)定形物，包括但不限于化合物5的Ⅰ型結(jié)晶或無(wú)定形物。再一方面，本發(fā)明提供一種藥物組合物，其包含上述結(jié)晶或結(jié)晶組合物。任選的，所述藥物組合物還可包括藥學(xué)上可接受的輔料。藥學(xué)上可接受的輔料是本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的，例如參見(jiàn)崔福德主編的《藥劑學(xué)》第6版里面列舉的常用輔料。本發(fā)明的藥物組合物可通過(guò)多種方式給藥，給藥方式包括但不限于靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下、肌內(nèi)或口服給藥，優(yōu)選采用口服給藥的方式。給藥頻率為每天兩次、每天一次、每周一次或兩周一次，優(yōu)選為每天一次。給藥劑量為每次100-1000mg，優(yōu)選為每次400mg。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述藥物組合物的劑型為片劑，其包含400mg的索非布韋I型結(jié)晶、膠態(tài)二氧化硅、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、硬脂酸鎂、甘露醇和微晶纖維素。在本發(fā)明的另一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述藥物組合物的劑型為片劑，其包含400mg的索非布韋Ⅱ型結(jié)晶、膠態(tài)二氧化硅、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、硬脂酸鎂、甘露醇和微晶纖維素。又一方面，本發(fā)明提供上述結(jié)晶、結(jié)晶組合物或藥物組合物在制備抗慢性丙肝(CHC)的藥物中的用途，尤其是在制備抗基因型1、2、3或4的慢性丙肝的藥物中的用途。本發(fā)明提供的結(jié)晶，不僅純度高，而且穩(wěn)定性好，滿(mǎn)足藥物制備、生產(chǎn)的要求。附圖說(shuō)明圖1：化合物5的I型結(jié)晶的粉末X-射線(xiàn)衍射圖譜。圖2：化合物5的I型結(jié)晶的DSC圖譜。圖3：化合物5的Ⅱ型結(jié)晶的粉末X-射線(xiàn)衍射圖譜。圖4：化合物5的Ⅱ型結(jié)晶的DSC圖譜。圖5：化合物5的無(wú)定形形式的粉末X-射線(xiàn)衍射圖譜。具體實(shí)施方式下面將結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明，可以使本領(lǐng)域技術(shù)人員更全面的理解本發(fā)明，它們不應(yīng)該被認(rèn)為是對(duì)本發(fā)明范圍的限制，而只是本發(fā)明的示例性說(shuō)明和典型代表。實(shí)施例1化合物5的無(wú)定形形式的制備參照CN201410335039.9實(shí)施例2的方法，以10倍規(guī)模制備化合物5，得到化合物5(6.8g)，對(duì)其進(jìn)行粉末X-射線(xiàn)衍射圖譜表征，為無(wú)定形形式，具體參見(jiàn)圖5。實(shí)施例2化合物5的Ⅰ型結(jié)晶的制備稱(chēng)取1g實(shí)施例1獲得的無(wú)定形化合物5，將其用8ml二氯甲烷溶解，靜置兩天，析出固體后抽濾，濾餅50℃真空干燥8小時(shí)。其粉末X-射線(xiàn)衍射圖譜具體參見(jiàn)圖1；其DSC圖譜具體參見(jiàn)圖2。實(shí)施例3化合物5的Ⅱ型結(jié)晶的制備稱(chēng)取1g實(shí)施例1獲得的無(wú)定形化合物5，將其用8ml乙酸乙酯溶解，室溫?cái)嚢?小時(shí)，析出固體后抽濾，濾餅50℃真空干燥8小時(shí)。其粉末X-射線(xiàn)衍射圖譜具體參見(jiàn)圖3；其DSC圖譜具體參見(jiàn)圖4。實(shí)施例4體外抗肝病毒活性評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)方法：化合物進(jìn)行1:3系列稀釋8個(gè)濃度點(diǎn)，雙復(fù)孔，加入96孔板中。將HCV-1b復(fù)制子細(xì)胞懸浮在含10％FBS的培養(yǎng)液中，以每孔8000個(gè)細(xì)胞的密度種到含有化合物的96孔板中。細(xì)胞在5％CO2、37℃條件下培養(yǎng)3天。加入細(xì)胞活力檢測(cè)試劑，半小時(shí)后檢測(cè)熒光信號(hào)(RFU，細(xì)胞活力原始數(shù)據(jù))。隨后向每孔細(xì)胞中加入熒光素酶發(fā)光底物Bright-Glo，5分鐘后用化學(xué)發(fā)光檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)化學(xué)發(fā)光信號(hào)值RLU。分析原始數(shù)據(jù)RFU和RLU，計(jì)算HCV-1b復(fù)制子細(xì)胞的活力百分比及化合物對(duì)HCVGT1b基因型復(fù)制子的抑制活性百分比。應(yīng)用GraphPadPrism軟件對(duì)抑制活性和細(xì)胞活力百分比數(shù)據(jù)進(jìn)行非線(xiàn)性擬合，計(jì)算化合物的EC50和CC50。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：索非布韋、化合物5體外抑制細(xì)胞活力的CC50均大于1000nM，對(duì)HCVGT1b基因型復(fù)制子抑制活性的EC50分別為104.9、119.2nM(見(jiàn)表1)。表1化合物體外細(xì)胞毒性與抗丙肝病毒活性實(shí)施例5大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)方法：9只雄性SD大鼠隨機(jī)分成3組，每組3只，自由飲水，禁食約16h后分別灌胃給予50mg/kg的索非布韋、化合物5，給藥后保持禁食4小時(shí)。分別于給藥后0.25、0.5、1、2、3、4、6、8、10、24h于眼眶取血0.1mL，EDTA-K2抗凝，4℃，4000rpm，10min離心分離血漿。采用LC-MS/MS法測(cè)定血漿中主要代謝產(chǎn)物GS-331007。本方法使用地西泮作為內(nèi)標(biāo)，采用蛋白沉淀法從20μl大鼠血漿中提取出GS-331007和內(nèi)標(biāo)，采用反相色譜柱分離GS-331007和內(nèi)標(biāo)，并使用串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜儀的電噴霧離子化方式(ESI)進(jìn)行定量分析。GS-331007的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)范圍為5.00-5000ng/ml。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：大鼠分別灌胃給予50mg/kg索非布韋、化合物5后，GS-331007的AUC0-24h分別為4640和6392ng*h/mL，Cmax分別為873和1159ng/mL。以代謝物GS-331007計(jì)，化合物5的相對(duì)生物利用度分別為137.75％(見(jiàn)表2)。表2大鼠灌胃給予50mg/kg索非布韋、化合物5后GS-331007的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3