本發(fā)明涉及制備(2’R)-2’-脫氧-2’-氟-2’-甲基尿苷3’，5’-二苯甲酸酯(A)的改進(jìn)方法。該化合物是合成丙肝病毒(HCV)NS5B聚合酶抑制劑索菲布韋的關(guān)鍵中間體。

二、

背景技術(shù)：
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丙肝，是一種由丙型肝炎病毒(HCV)感染引起的病毒性肝炎，全球HCV的感染率約為3％，估計(jì)約1.8億人感染了HCV，每年新發(fā)丙型肝炎病例約3.5萬例。一旦被感染，約有20％的人能夠清除病毒，但是其它的人在他們的余生都會(huì)攜帶HCV。有10％到20％的慢性感染個(gè)體最終將發(fā)展成為危及生命的肝硬化或癌癥。丙型肝炎呈全球性流行，未來20年內(nèi)與HCV感染相關(guān)的死亡率(肝衰竭及肝細(xì)胞癌導(dǎo)致的死亡)將繼續(xù)增加，對(duì)患者的健康和生命危害極大，丙肝病毒感染已成為世界性的健康問題。

長(zhǎng)期以來，聚乙二醇化干擾素(PEG-IFN)與利巴韋林合用是治療丙肝病毒感染的標(biāo)準(zhǔn)療法。但是從目前的狀況來看，這種標(biāo)準(zhǔn)治療方法效果不是很理想，對(duì)于1a/1b型患者的臨床治愈率約為50％，且這種療法的用藥時(shí)間比較長(zhǎng)，比如HCV I型的丙肝患者，需要連續(xù)用藥48周，同時(shí)還經(jīng)常發(fā)生嚴(yán)重的不良反應(yīng)，如伴有精神方面的問題、出現(xiàn)流行性感冒樣癥狀和產(chǎn)生血液學(xué)毒性，從而造成現(xiàn)有療法的成功治愈率還不到10％，加之反跳率高、價(jià)格昂貴、長(zhǎng)期注射給患者帶來很大痛苦，因此，開發(fā)一種全新機(jī)制的、更加高效低毒的HCV抑制劑顯得尤為重要。

HCV基因組是一種黃病毒科的單鏈RNA(+)，約9600個(gè)堿基對(duì)編碼了共3009-3030個(gè)氨基酸的多肽。該多肽被蛋白酶切割為10個(gè)具有不同功能的蛋白，其中包括核心蛋白——Core，外殼糖蛋白——E1，E2，非結(jié)構(gòu)性蛋白——NS2，NS3(具有絲氨酸蛋白酶活性，解旋酶活性)，NS4A，NS4B，NS5A，NS5B(具有RdRP活性)，以及1個(gè)功能未知的蛋白——p7(最近發(fā)現(xiàn)它可能是一種離子通道)在蛋白成熟過程中，Core，E1，E2和p7間的切割依靠細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)肽酶完成，NS2和NS3則依靠自身的半胱氨酸蛋白酶活性實(shí)現(xiàn)自催化斷裂，其余蛋白間的切割由成熟后的NS3完成。(Michael P.Manns et al.，Nature Reviews Drug Discovery，6，991-1001(2007))。病毒基因復(fù)制酶NS5B是病毒的RNA依賴RNA聚合酶，具有以RNA為模板的RNA復(fù)制活性，負(fù)責(zé)HCV基因組的復(fù)制。NS5B基因是HCV特有，在各種基因型的HCV病毒中都高度保守，而且其在哺乳動(dòng)物細(xì)胞基因組中缺乏對(duì)應(yīng)基因。未感染的細(xì)胞通常并不表達(dá)RNA依賴的RNA(Raffaele De Francesco，Antiviral Research，58：1-16(200))，因此，NS5B成為治療丙型肝炎的理想靶點(diǎn)。同時(shí)，不同基因型病毒在全球的分布也存在較大差異，其中1，2，3型病毒呈全球分布，歐美地區(qū)以1a型為主，而包括中國在內(nèi)的遠(yuǎn)東地區(qū)，1b，2a，2b型更為常見，其中1b型為主要優(yōu)勢(shì)株。1a和1b占所有被感染人數(shù)的78.1％?；诖?，有必要開發(fā)出能夠抑制1a和1b亞型的HCV抑制劑。在以前的文獻(xiàn)中，已經(jīng)報(bào)道了噻吩羧酸類化合物可以作為作用于NS5B聚合酶的HCV抑制劑。

Vertex的特拉匹韋和Merck的Vitrelis在2011年批準(zhǔn)上市，這倆種新藥仍需要與干擾素和利巴韋林合用才能獲得較好的療效。所以其毒副作用仍和標(biāo)準(zhǔn)療法相似。相比之下，核苷化合物及其磷酸酯潛藥對(duì)抑制丙肝病毒具有相當(dāng)?shù)膬?yōu)勢(shì)，因?yàn)樗鼈儗?duì)各種類型的丙肝病毒都有效，并且較少產(chǎn)生耐藥性。

索菲布韋是首個(gè)無需聯(lián)合干擾素就能安全有效治療某些類型丙肝的藥物。臨床試驗(yàn)證實(shí)針對(duì)1和4型丙肝，該藥物聯(lián)合聚乙二醇干擾素和利巴韋林的總體持續(xù)病毒學(xué)應(yīng)答率(SVR)高達(dá)90％；針對(duì)2型丙肝，該藥物聯(lián)合利巴韋林的SVR為89％-95％；針對(duì)3型丙肝，該藥物聯(lián)合利巴韋林的SVR為61％-63％。值得一提的是，索非布韋的臨床試驗(yàn)還包含了一些丙肝合并肝硬化的患者，療效也較顯著。

三、

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
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本發(fā)明針對(duì)索菲布韋制備工藝中存在的問題，經(jīng)過大量的試驗(yàn)和反復(fù)的改進(jìn)研究，取得了驚人的發(fā)現(xiàn)，發(fā)現(xiàn)了一種原料易得、工藝路線簡(jiǎn)單、適用于工業(yè)化大生產(chǎn)制備(2’R)-2’-脫氧-2’-氟-2’-甲基尿苷3’，5’-二苯甲酸酯(A)的合成方法。

為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，反應(yīng)過程如方案1所示：

方案1

具體反應(yīng)通過如下步驟實(shí)現(xiàn)：

(a)商業(yè)購買的2，4-二醇嘧啶(3)與TMSCl在HMDS中回流硅烷化，反應(yīng)結(jié)束后濃縮，旋于溶劑，得到2，4-雙三甲基硅烷氧基嘧啶(2)。

(b)2，4-雙三甲基硅烷氧基嘧啶(2)與(2R)-2-脫氧-2-氟-2-甲基-D-赤式戊糖酸GAMMA-內(nèi)酯3，5-二苯甲酸酯(1)在催化劑的作用下生成索菲布韋重要中間體(2′R)-2′-脫氧-2′-氟-2′-甲基尿苷3′，5′-二苯甲酸酯(A)。催化所用的催化劑為2，4，6-三甲基吡啶三氟甲烷磺酸鹽，4-甲基2，6-二叔丁基吡啶三氟甲烷磺酸鹽，吡啶三氟甲烷磺酸鹽中的一種或幾種。

有許多合成方面的文獻(xiàn)和專利對(duì)索菲布韋中間體(2′R)-2′-脫氧-2′-氟-2′-甲基尿苷3′，5′-二苯甲酸酯(A)進(jìn)行了詳細(xì)的報(bào)道，但都有各自的不足。按起始原料、合成步驟或中間體的不同，目前文獻(xiàn)報(bào)道的主要有3種合成方法。CN 101918425 A，CN 104017020 A，CN 102199181 A，CN 102361641 A，CN 102858790 A等所報(bào)道的合成路線如方案2-4所示。

方案2：經(jīng)由多步合成的化合物4在吡啶和苯甲酰氯(BzCl)的作用下將羥基保護(hù)起來，生成化合物5后，在80％乙酸做溶劑時(shí)回流脫掉氨基的保護(hù)基并氧化氨基生成(2′R)-2′-脫氧-2′-氟-2′甲基尿苷3′，5′-二苯甲酸酯(A)

方案3：由索菲布韋的另一個(gè)中間體(2R)-2-脫氧-2-氟-2-甲基-D-赤式戊糖酸GAMMA-內(nèi)酯3，5-二苯甲酸酯(6)做為起始原料，經(jīng)Al化物還原羰基后SOCl₂將醇鹵化生成鹵代物(7)。鹵代物(7)經(jīng)過兩步反應(yīng)后得到(2′R)-2′-脫氧-2′-氟-2′-甲基尿苷3′，5′-二苯甲酸酯(A)。

方案4：由索菲布韋的另一個(gè)中間體(2R)-2-脫氧-2-氟-2-甲基-D-赤式戊糖酸GAMMA-內(nèi)酯3，5-二苯甲酸酯(6)做為起始原料，經(jīng)Al化物還原羰基后則有乙酸酐保護(hù)醇羥基，生成了(2R)-2-脫氧-2-氟-2-甲基-D-赤式戊糖酸GAMMA-內(nèi)酯3，5-二苯甲酸酯(1)?；衔?又經(jīng)過兩步反應(yīng)得到(2′R)-2′-脫氧-2′-氟-2′-甲基尿苷3′，5′-二苯甲酸酯(A)。

方案2

方案3

方案4

方案3和方案4在合成4(2′R)-2′-脫氧-2′-氟-2′-甲基尿苷3′，5′-二苯甲酸酯(A)時(shí)與方案1的合成路線相似，但是都需要多合成一步中間體。

方案1在方案3和方案4的基礎(chǔ)上簡(jiǎn)化了工藝步驟，提高了合成效率，更加適宜工業(yè)化生產(chǎn)。

四、附圖簡(jiǎn)介：

圖1為(2′R)-2′-脫氧-2′-氟-2′-甲基尿苷3′，5′-二苯甲酸酯的¹HNMR

圖2為(2′R)-2′-脫氧-2′-氟-2′-甲基尿苷3′，5′-二苯甲酸酯的¹³CNMR

圖3為(2′R)-2′-脫氧-2′-氟-2′-甲基尿苷3′，5′-二苯甲酸酯的MS

五、具體實(shí)施案例：

實(shí)施例1，催化劑的合成：

4-甲基-2，6-二叔丁基吡啶(0.10g)，CH₃CN(1mL)加入到5mL的三頸瓶中抽換氣3次，持續(xù)攪拌下冰鹽浴冷卻至0℃。三氟甲磺酸(43μL)溶于CH₃CN(1mL)在10min內(nèi)逐滴加入到反應(yīng)瓶中，滴加完畢，撤去冰鹽浴，室溫?cái)嚢?h，有固體析出。在-40℃攪拌20min，過濾，即得到白色固體4-甲基-2，6-二叔丁基吡啶三氟甲磺酸鹽(0.14g，82％)。

實(shí)施例2

(2R)-2-脫氧-2-氟-2-甲基-D-赤式戊糖酸GAMMA-內(nèi)酯3，5-二苯甲酸酯(10g)，2，4-雙三甲基硅烷氧基嘧啶(5.8g)，2，4，6-三甲基吡啶三氟甲烷磺酸鹽(5％)，CH₃CN(150mL)加入到500mL的三頸瓶中并抽換氣3次。在持續(xù)攪拌下加熱至150℃，回流10h。TLC檢測(cè)反應(yīng)完全，降溫至室溫，濃縮去除有機(jī)溶劑即得化合物A(10.91g，97％)，經(jīng)HPLC檢測(cè)有98％純度。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ 11.62(S，1H)，7.38～8.12(m，11H)，6.09～6.25(br，1H)，5.68～5.87(br，1H)，5.60～5.62(d，1H，J＝5.61Hz)，4.63～4.70(m，3H)，1.41～1.47(d，3H，J＝1.45Hz)。

13C-NMR(400MHz，DMSO)：δ166.1，165.1，150.3，134.2，1337，130.3，129.9，129.6，129.3，128.9，128.8，102.8，77.55，73.7，64.0，17.8。

MS(ESI)m/z：467.0[M+H]⁺

實(shí)施例3

2，4-二醇嘧啶(1M)，六甲基二硅氮烷(3L)，催化量的三甲基氯硅烷(1ml)，混合液回流12h，冷卻，濃縮掉有機(jī)溶劑，即得2，4-雙三甲基硅烷氧基嘧啶(248.45g，95％)

實(shí)施例4

(2R)-2-脫氧-2-氟-2-甲基-D-赤式戊糖酸GAMMA-內(nèi)酯3，5-二苯甲酸酯(416g)，2，4-雙三甲基硅烷氧基嘧啶(307.2g)，4-甲基2，6-二叔丁基吡啶三氟甲烷磺酸鹽(5％)，CH₃CN(6L)加入到10L的反應(yīng)釜中并抽換氣3次。在持續(xù)攪拌下加熱至150℃，回流15h。TLC檢測(cè)反應(yīng)完全，降溫至室溫，濃縮去除有機(jī)溶劑即得化合物A(435g，93％)，經(jīng)HPLC檢測(cè)有98％純度。

實(shí)施例5

(2R)-2-脫氧-2-氟-2-甲基-D-赤式戊糖酸GAMMA-內(nèi)酯3，5-二苯甲酸酯(10g)，2，4-二(三甲硅氧基)嘧啶；2，4-雙三甲基硅烷氧基嘧啶(5.8g)，吡啶三氟甲烷磺酸鹽(5％)，CH₃CN(150mL)加入到500mL的三頸瓶中并抽換氣3次。在持續(xù)攪拌下加熱至150℃，回流10h。TLC檢測(cè)反應(yīng)完全，降溫至室溫，濃縮去除有機(jī)溶劑即得化合物A(10.57g 94％)，經(jīng)HPLC檢測(cè)有95％純度。