序列表本申請(qǐng)與電子格式的序列表一起提交。序列表以于2011年1月7日創(chuàng)建的標(biāo)題為BIOL0120WOSEQ.txt的文件形式提供，該文件大小為56KB。序列表的電子格式的信息通過引用整體并入本文。發(fā)明領(lǐng)域本文提供的是減少血管生成素樣3(ANGPTL3)mRNA和蛋白在動(dòng)物中的表達(dá)的方法、化合物和組合物。同時(shí)，本文提供的是具有用于減少動(dòng)物的ANGPTL3相關(guān)疾病或疾患的ANGPTL3抑制劑的方法、化合物和組合物。此類方法、化合物和組合物例如用于治療、預(yù)防、延緩或減輕動(dòng)物的一種或多種心血管疾病或代謝綜合征或其癥狀。發(fā)明背景糖尿病和肥胖癥(有時(shí)統(tǒng)稱為“糖尿病-肥胖癥(diabesity)”)是相關(guān)的，因?yàn)橐阎逝职Y加重糖尿病的病理學(xué)并且大于60％的糖尿病是肥胖的。大多數(shù)人肥胖癥與胰島素抵抗和瘦素抵抗相關(guān)。實(shí)際上，已提出肥胖癥可對(duì)胰島素作用的影響比糖尿病本身更大(Sindelka等人，PhysiolRes.，2002，51，85-91)。此外，市場(chǎng)上用于治療糖尿病的數(shù)種化合物已知誘導(dǎo)體重增加，這對(duì)疾病的治療而言是一種極不受歡迎的副作用。心血管疾病也是與肥胖癥和糖尿病相關(guān)。心血管疾病包括多種病因?qū)W并且具有同樣廣泛的致病因子和相關(guān)利益相關(guān)者。很多致病因子有助于癥狀例如升高的膽固醇(包括非-HDL膽固醇)血漿水平以及其它脂質(zhì)相關(guān)病癥。此類脂質(zhì)相關(guān)病癥(通常稱為血脂障礙)除了包括其它適應(yīng)癥之外，還包括高脂血癥、高膽固醇血癥和高甘油三酯血癥。升高的非-HDL膽固醇與動(dòng)脈粥樣硬化及其后遺癥(包括心血管疾病例如動(dòng)脈粥樣硬化、冠心病、心肌梗塞、缺血性休克及其它心臟病形式相關(guān)。這些在工業(yè)化國(guó)家中是最普遍的疾病類型。實(shí)際上，美國(guó)中估計(jì)有1200萬人罹患冠心病并且約3600萬人需要用于升高膽固醇水平的治療。流行病和實(shí)驗(yàn)證據(jù)已顯示高水平的循環(huán)甘油三酯(TG)可有助于心血管疾病和多種代謝病癥(Valdivielso等人，2009，Atherosclerosis.207(2):573-8；Zhang等人，2008，CircRes.1；102(2):250-6)。在來自小腸的乳糜顆粒中或在來自肝的極低密度脂蛋白(VLDL)中并入且分泌從外源性或內(nèi)源性來源衍生的TG。一旦在循環(huán)中，TG被脂蛋白脂酶(LpL)水解并且所得游離脂肪酸然后可被局部組織吸收并且用作能源。由于通常LpL對(duì)血漿TG和代謝具有極高的效應(yīng)，發(fā)現(xiàn)和開發(fā)影響LpL活性的化合物是非常感興趣。代謝綜合征是增加個(gè)人患上心血管疾病和糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)的醫(yī)學(xué)病癥的組合。癥狀(包括高血壓、高甘油三酯、降低的HDL和肥胖癥)在某些個(gè)體中趨向于一起出現(xiàn)。其以集聚方式影響許多人。在一些研究中，在USA的患病率被計(jì)算成高達(dá)25％的人口。代謝綜合征以各種其它名稱廣為人知，例如(代謝)綜合征X、胰島素抵抗綜合征、Reaven綜合征或CHAOS。在心血管病癥和代謝病癥的高患病率下，仍保持對(duì)治療這些疾患的改進(jìn)方法的需求。血管生成素是分泌型生長(zhǎng)因子的家族。與其相應(yīng)內(nèi)皮特異性受體一起，血管生成素在血管發(fā)生中起著重要的作用。一個(gè)家族成員血管生成素樣3(也稱為ANGPT5、ANGPTL3或血管生成素5)主要在肝中表達(dá)，并且被認(rèn)為在調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝中起作用(Kaplan等人，J.脂質(zhì)Res.，2003，44，136-143)。作為檢索組合的EST數(shù)據(jù)庫(kù)的結(jié)果，血管生成素樣3的人基因被鑒定且被克隆。全長(zhǎng)人cDNA編碼460氨基酸的多肽，該多肽具有血管生成素的特有結(jié)構(gòu)特征：信號(hào)肽、延長(zhǎng)的螺旋狀結(jié)構(gòu)域、短接頭肽和球狀纖維蛋白原同源性結(jié)構(gòu)域(FHD)。發(fā)現(xiàn)小鼠血管生成素樣3cDNA編碼與人多肽具有76％同一性的455氨基酸多肽。血管生成素的對(duì)準(zhǔn)顯示血管生成素樣3不像其它家庭成員，不包含決定鈣結(jié)合位點(diǎn)的酸性殘基的基序。Northern印跡分析揭示主要在成人組織的肝中的表達(dá)，而鼠胚胎Northern印跡顯示早在第15天就存在轉(zhuǎn)錄物，表明血管生成素樣3在肝發(fā)育期間的早期被表達(dá)且成年肝中維持表達(dá)。小鼠基因定位于染色體4，而人基因定位于1p31區(qū)域(Conklin等人，Genomics，1999，62，477-482)。KK肥胖小鼠具有中度肥胖癥的多基因綜合征和類似人遺傳性2型糖尿病的糖尿病表型。這些小鼠顯示高胰島素血癥、高血糖癥和高脂血癥的征兆。稱為KK/San的KK小鼠品系具有顯著低的血漿脂質(zhì)水平，盡管具有高胰島素血癥和高血糖癥的征兆。突變表型被隱性遺傳，并且基因座被稱為高脂質(zhì)血癥(hypl)?；蜃ㄎ挥谌旧w4的中間，并且該基因通過定位克隆被鑒定為血管生成素樣3。包含突變體KK/San小鼠中的全長(zhǎng)小鼠或人血管生成素樣3cDNA的重組體腺病毒的注射引起甘油三酯、總膽固醇和非酯化脂肪酸(NEFA)的血漿水平的增加。類似地，將重組血管生成素樣3蛋白注射到突變體小鼠中增加了甘油三酯和非酯化脂肪酸的水平(Koishi等人，Nat.Genet.，2002，30，151-157)。在另一項(xiàng)專注于甘油三酯在KK/San小鼠中的代謝途徑的研究中，血管生成素樣3的過表達(dá)導(dǎo)致富集甘油三酯的極低密度脂蛋白(VLDL)的顯著增加。肝VLDL甘油三酯分泌率的差異在野生型KK與KK/San小鼠之間不顯著。然而，用標(biāo)記VLDL的研究表明KK/San小鼠中的低血漿甘油三酯水平主要?dú)w因于增加的VLDL甘油三酯的酯解而不是增加的整顆粒攝取。KK/San小鼠的血漿apoB100和apoB48水平與野生型KK小鼠類似。ApoCIII缺陷型小鼠與KK/San小鼠具有類似的表型，并且認(rèn)為ApoCIII通過抑制VLDL甘油三酯的脂酶介導(dǎo)的水解的調(diào)節(jié)VLDL甘油三酯代謝。重組蛋白的體外分析揭示，血管生成素樣3直接抑制脂蛋白脂酶(LPL)活性(Shimizugawa等人，J.Biol.Chem.，2002，277，33742-33748)。與脂質(zhì)代謝中的作用一致，發(fā)現(xiàn)血管生成素樣3mRNA在正常飼料飲食和4％膽固醇喂養(yǎng)的C57BL/6J小鼠和在用肝X受體(LXR)激動(dòng)劑T0901317處理的鼠中上調(diào)。LXR是配體激活的轉(zhuǎn)錄因子，其在調(diào)節(jié)在肝和外周組織中支配膽固醇體內(nèi)穩(wěn)態(tài)的基因方面起作用。除膽固醇代謝之外，LXR還可在調(diào)節(jié)脂肪酸代謝的方面起作用。用激活LXR的天然或合成活性劑處理HepG2細(xì)胞導(dǎo)致增加的血管生成素樣3表達(dá)。發(fā)現(xiàn)人血管生成素樣3基因的啟動(dòng)子含有LXR反應(yīng)元件。此外，對(duì)于其它轉(zhuǎn)錄因子(包括HNF-1、HNF-4和C/EBP)而言，啟動(dòng)子包含數(shù)種蛋白結(jié)合位點(diǎn)(Kaplan等人，J.LipidRes.，2003，44，136-143)。用T0901317處理嚙齒類動(dòng)物與肝和血漿中的甘油三酯蓄積相關(guān)。肝甘油三酯蓄積通過增加的甾醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-1c(SREBP1c)和脂肪酸合酶(FAS)(兩者均為L(zhǎng)XR的靶)的表達(dá)來解釋。T0901317未能增加血管生成素樣3缺陷型小鼠中的血漿甘油三酯濃度，而經(jīng)刺激的肝甘油三酯蓄積與在經(jīng)處理的野生型小鼠中觀察到的類似。用T0901317處理的野生型小鼠中的血漿甘油三酯的升高類似血管生成素樣3mRNA在肝中的誘導(dǎo)和增加的蛋白血漿濃度(Inaba等人，J.Biol.Chem.，2003，278，21344-21351)。更多的研究解決在用外源性血管生成素樣3處理的KK/Snk小鼠中觀察到的血漿游離脂肪酸(FFA)水平的增加。用熒光標(biāo)記的血管生成素樣3蛋白固定的人組織的探針證實(shí)，僅在脂肪組織上具有強(qiáng)結(jié)合。而且，在3T3-L1脂肪細(xì)胞中檢查放射性標(biāo)記的蛋白結(jié)合并且發(fā)現(xiàn)是可飽和的且特異性的。用血管生成素樣3孵育3T3-L1脂肪細(xì)胞導(dǎo)致增加的FFA和甘油進(jìn)入培養(yǎng)基中的釋放(Shimamura等人，Biochem.Biophys.Res.Commun.，2003，301，604-609)。在使用鏈脲霉素處理的小鼠(STZ)模擬胰島素缺陷型狀態(tài)并且使用db/db小鼠模擬胰島素抗性糖尿病狀態(tài)的研究中，相比于對(duì)照動(dòng)物，在糖尿病小鼠中觀察到大量肝血管生成素樣3。糖尿病的兩種模型顯示高甘油三酯血癥，且由增加的血管生成素樣3表達(dá)則可至少部分地解釋觀察到的高脂血癥。這些結(jié)果表明，血管生成素樣3是糖尿病與血脂障礙之間的連接，升高將促進(jìn)高脂血癥(Inukai等人，Biochem.Biophys.Res.Commun.，2004，317，1075-1079)。隨后研究檢查了瘦素和胰島素對(duì)血管生成素樣3的調(diào)節(jié)，兩者均是代謝綜合征的關(guān)鍵參與者。相比于對(duì)照，在瘦素抗性db/db和瘦素缺陷型ob/ob小鼠中的血管生成素樣3表達(dá)和血漿蛋白水平增加。用瘦素補(bǔ)充ob/ob小鼠減少血管生成素樣3水平。表達(dá)的變化與血漿甘油三酯和游離脂肪酸水平的變化相關(guān)。在胰島素缺陷型的STZ處理的小鼠中的基因表達(dá)和血漿蛋白水平也增加(Shimamura等人，BiochemBiophysResCommun，2004，322，1080-1085)。根據(jù)其血管生成素家族中的成員，發(fā)現(xiàn)重組血管生成素樣3蛋白與αVβ3整合素結(jié)合以及誘導(dǎo)的整合素αVβ3依賴性趨觸性內(nèi)皮細(xì)胞粘著和遷移。其也刺激對(duì)整合素激活特有的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。血管生成素樣3在大鼠角膜血管發(fā)生試驗(yàn)中強(qiáng)烈地誘導(dǎo)血管發(fā)生(Camenisch等人，J.Biol.Chem.，2002，277，17281-17290)。通過數(shù)個(gè)組進(jìn)行測(cè)量基因組的與HDL、LDL和甘油三酯的血漿濃度相關(guān)的共有變體的基因組相關(guān)性掃描(GWAS)。GWAS研究發(fā)現(xiàn)甘油三酯與鄰近ANGPTL3的單核苷酸多態(tài)現(xiàn)象(SNP)之間的聯(lián)系(Willer等人，NatureGenetics，2008，40(2):161-169)。U.S.專利7,267,819、申請(qǐng)USSN12/128,545和申請(qǐng)USSN12/001,012通常描述血管生成素樣3激動(dòng)劑和拮抗劑。PCT公布WO/02101039(EP02733390)和WO/0142499(USSN10/164,030)公開了與小鼠血管生成素樣3互補(bǔ)的核酸序列(Ryuta，2002；Ryuta，2001)。目前缺乏用于治療心血管和代謝病癥的可接受的選擇。因?yàn)?，本文的目的是提供用于治療此類疾病和病癥的化合物和方法。血管生成素樣3在脂質(zhì)代謝中的潛在作用使其成為對(duì)于研究有吸引力的靶。反義技術(shù)作為用于減少某些基因產(chǎn)物的表達(dá)的有效方法出現(xiàn)并且由此可證明其可獨(dú)特地用于多種調(diào)節(jié)血管生成素樣3的治療、診斷和研究應(yīng)用。發(fā)明概述本文提供的是可用于經(jīng)由作用反義機(jī)理例如RNA酶H、RNAi和dsRNA酶，以及其它基于靶降解或靶占有的反義機(jī)理來調(diào)節(jié)基因表達(dá)和相關(guān)途徑的反義化合物。本文提供的是用于抑制ANGPTL3表達(dá)并且治療、預(yù)防、延緩或減輕ANGPTL3相關(guān)疾病、疾患或其癥狀的方法、化合物和組合物。在某些實(shí)施方案中，ANGPTL3相關(guān)疾病或疾患是心血管疾病或代謝疾病。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物和組合物包含靶向于ANGPTL3的長(zhǎng)度為10至30個(gè)連接核苷的經(jīng)修飾的寡核苷酸。ANGPTL3靶可具有選自SEQIDNO：1-5中任一個(gè)的序列。靶向ANGPTL3的經(jīng)修飾的寡核苷酸可具有包含與SEQIDNO：1-5的等長(zhǎng)部分互補(bǔ)的至少8個(gè)連續(xù)核堿基的核堿基序列。靶向ANGPTL3的經(jīng)修飾的寡核苷酸可具有包含選自SEQIDNO：34-182中任一個(gè)的核堿基序列的至少8個(gè)連續(xù)核堿基的核堿基序列。經(jīng)修飾的寡核苷酸可具有包含選自SEQIDNO：34-182中任一個(gè)的核堿基序列的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個(gè)連續(xù)核堿基的核堿基序列。經(jīng)修飾的寡核苷酸的連續(xù)核堿基部分可與選自SEQIDNO：1-5中任一個(gè)的ANGPTL3區(qū)域的等長(zhǎng)部分互補(bǔ)。ANGPTL3區(qū)域可選自以下區(qū)域的一個(gè)或多個(gè)：22-52、116-145、637-720、953-983、1333-1469和1463-1489。某些實(shí)施方案提供了減少動(dòng)物中ANGPTL3表達(dá)的方法，其包括向所述動(dòng)物施用包含靶向本文描述的ANGPTL3的經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物。某些實(shí)施方案提供了減少動(dòng)物中的apoC-III表達(dá)、甘油三酯水平、膽固醇水平、低密度脂蛋白(LDL)或葡萄糖水平的方法，其包括向所述動(dòng)物施用包含靶向本文描述的ANGPTL3的經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物，其中經(jīng)修飾的寡核苷酸減少動(dòng)物中的ANGPTL3表達(dá)。某些實(shí)施方案提供了減輕動(dòng)物中的心血管疾病或代謝疾病的方法，其包括向所述動(dòng)物施用包含靶向本文描述的ANGPTL3的經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物，其中經(jīng)修飾的寡核苷酸減少動(dòng)物中的ANGPTL3表達(dá)。某些實(shí)施方案提供了用于治療患有心血管疾病或代謝疾病的動(dòng)物的方法，其包括：1)鑒定患有代謝疾病或心血管疾病的所述動(dòng)物，和2)向所述動(dòng)物施用治療有效量的包含經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物，所述經(jīng)修飾的寡核苷酸由20個(gè)連接核苷組成并且具有與SEQIDNO：1-5至少90％互補(bǔ)(如對(duì)經(jīng)修飾的寡核苷酸的整體性所測(cè)量)的核堿基序列，由此治療患有心血管疾病或代謝疾病的動(dòng)物。在某些實(shí)施方案中，向動(dòng)物施用的治療有效量的化合物減少動(dòng)物中的心血管疾病或代謝疾病。某些實(shí)施方案提供了通過施用包含經(jīng)修飾的寡核苷酸的ANGPTL3抑制劑減少人中ANGPTL3水平、LDL水平、apoC-III水平、甘油三酯水平、膽固醇水平、葡萄糖水平、脂肪墊重、心血管疾病和代謝疾病中的一者或多者的方法。發(fā)明詳述應(yīng)理解，前述一般描述和以下詳細(xì)描述僅僅是示例性的且說明性的，并不限制如要求保護(hù)的本發(fā)明。在本文，使用的單數(shù)包括復(fù)數(shù)，除非另有明確指出。如本文所用的，使用的“或”意指“和/或”，除非另有指出。而且，使用的術(shù)語(yǔ)“包括”以及其它形式例如“包括”和“被包括”并不是限制性的。同時(shí)，術(shù)語(yǔ)例如“要素”或“組分”包含要素和組分兩者，包含一個(gè)單元和要素以及包含一個(gè)以上亞單元的組分，除非另有明確指出。本文所述的部分標(biāo)題僅僅是為了組織的目的并不應(yīng)理解為限制所述的主題。本申請(qǐng)引用的所有文件、或文件的一部分(包括但不限于專利、專利申請(qǐng)、文章、書籍和書籍)據(jù)此通過引用清楚(針對(duì)本文所述的文件以及其整體)并入。定義除非提供了明確定義，否則結(jié)合本文所述的分析化學(xué)、合成有機(jī)化學(xué)、以及醫(yī)藥和制藥化學(xué)所用的命名法、以及它們的方法和技術(shù)是本領(lǐng)熟知且常用的。標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)可用于化學(xué)合成以及化學(xué)分析。當(dāng)允許時(shí)，所有專利、申請(qǐng)、公布的申請(qǐng)和其它公布、GENBANK登記號(hào)及可通過數(shù)據(jù)庫(kù)例如NationalCenterforBiotechnologyInformation(NCBI)和其它在本整個(gè)公開中提及的數(shù)據(jù)獲得的相關(guān)序列信息通過引用(針對(duì)本文所論述的文件的部分以及其整體)并入本文。除非另有指出，下列術(shù)語(yǔ)具有以下含義：“2’-O-甲氧基乙基”(也稱為2’-MOE和2’-O(CH2)2-OCH3)是指呋喃糖基環(huán)的2’位的O-甲氧基-乙基修飾。2’-O-甲氧基乙基修飾的糖是經(jīng)修飾的糖。“2’-O-甲氧基乙基核苷酸”意指包含2’-O-甲氧基乙基修飾的糖部分的核苷酸。“3’靶位點(diǎn)”是指與特定反義化合物的3’最末端核苷酸互補(bǔ)的靶核酸的核苷酸。“5’靶位點(diǎn)”是指與特定反義化合物的5’最末端核苷酸互補(bǔ)的靶核酸的核苷酸。“5-甲基胞嘧啶”意指用與5’位連接的甲基修飾的胞嘧啶。5-甲基胞嘧啶是經(jīng)修飾的核堿基?！凹s”意指在值的±10％內(nèi)。例如，如果提及“標(biāo)記可增加約50％”，則暗示標(biāo)記可增加45％-55％?！盎钚运幱脛?Activepharmaceuticalagent)”意指當(dāng)施用于個(gè)體時(shí)提供了治療益處的藥物組合物中的物質(zhì)。例如，在某些實(shí)施方案中，靶向于ANGPTL3的反義寡核苷酸是活性藥用劑?！盎钚园袇^(qū)域”或“靶區(qū)域”意指靶向一個(gè)或多個(gè)活性反義化合物的區(qū)域。“活性反義化合物”意指減少靶核酸水平或蛋白水平的反義化合物?！爸拘纬伞币庵钢炯?xì)胞自前脂肪細(xì)胞的發(fā)展?！爸拘纬伞币庵钢镜漠a(chǎn)生或形成，脂肪變性或脂肪浸潤(rùn)?！胺逝职Y”或“肥胖癥”是指肥胖或與去脂肪體重有關(guān)的過度高量的體脂肪或脂肪組織的狀態(tài)。體脂肪的量包括關(guān)心脂肪遍及身體的分布和脂肪組織沉積的大小和質(zhì)量。體脂肪分布可通過皮膚褶測(cè)量、腰臀圍比或技術(shù)例如超聲、計(jì)算機(jī)斷層攝影術(shù)或核磁共振成像來評(píng)價(jià)。根據(jù)疾病控制和預(yù)防中心，體重指數(shù)(BMI)為30或以上的個(gè)體被認(rèn)為是肥胖的。本文所用的術(shù)語(yǔ)"肥胖癥"包括由于在體內(nèi)脂肪組織的過度積累而使體脂肪的增加超過身體需要的疾患。術(shù)語(yǔ)“肥胖癥”包括但不限于以下疾患：成年型肥胖癥；營(yíng)養(yǎng)性肥胖癥；內(nèi)源性或代謝肥胖癥；內(nèi)分泌性肥胖癥；家族性肥胖癥；胰島功能亢進(jìn)性肥胖癥；增生性-肥大性肥胖癥；性腺機(jī)能衰退性肥胖癥；甲狀腺功能減退性肥胖癥；終身性肥胖癥；病態(tài)肥胖癥和外源性肥胖癥?！鞍殡S施用(Administeredconcomitantly)”是指兩種活性劑的藥理學(xué)作用在患者中同時(shí)出現(xiàn)的任何方式兩種活性劑的共施用。伴隨施用不需要兩種活性劑以單一藥物組合物、以相同劑量形式或通過相同施用途徑施用。兩種活性劑的效應(yīng)不需要同時(shí)顯示它們自身。效應(yīng)僅需要在一定時(shí)段內(nèi)重疊并且不需要共存?！笆┯谩币庵附o動(dòng)物提供活性劑，并且包括但不限于通過醫(yī)學(xué)專業(yè)人員施用和自身施用?！盎钚詣?Agent)”意指當(dāng)施用于動(dòng)物時(shí)可提供治療益處的活性物質(zhì)?！暗谝换钚詣币庵副景l(fā)明的治療化合物。例如，第一活性劑可以是靶向ANGPTL3的反義寡核苷酸?！暗诙钚詣币庵副景l(fā)明的第二治療化合物(例如靶向ANGPTL3的第二反義寡核苷酸)和/或非-ANGPTL3治療化合物?！皽p輕”是指減輕相關(guān)疾病、病癥或疾患的至少一個(gè)指標(biāo)、癥狀或癥候。指標(biāo)的嚴(yán)重度可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的主觀或客觀量度來確定。“ANGPTL3”意指ANGPTL3的任何核酸或蛋白。“ANGPTL3表達(dá)”意指從編碼ANGPTL3的基因轉(zhuǎn)錄的mRNA的水平或從mRNA翻譯的蛋白的水平。ANGPTL3表達(dá)可通過本領(lǐng)域已知的方法例如Northern或Western印跡來測(cè)定?！癆NGPTL3核酸”意指任何編碼ANGPTL3的核酸。例如，在某些實(shí)施方案中，ANGPTL3核酸包括編碼ANGPTL3的DNA序列、從編碼ANGPTL3的DNA轉(zhuǎn)錄的RNA序列(包括包含內(nèi)含子和外顯子的基因組DNA)和編碼ANGPTL3的mRNA序列?！癆NGPTL3mRNA”意指編碼ANGPTL3蛋白的mRNA?！皠?dòng)物”是指人或非-人動(dòng)物，包括但不限于小鼠、大鼠、兔、狗、貓、豬和非-人靈長(zhǎng)類，包括但不限于猴和猩猩?！胺戳x活性”意指歸因于反義化合物與其靶核酸的雜交的任何可檢測(cè)或可測(cè)量的活性。在某些實(shí)施方案中，反義活性是由此類靶核酸編碼的把核酸或蛋白的量或表達(dá)的減少?！胺戳x化合物”意指能夠通過氫鍵合經(jīng)受與靶核酸雜交的寡聚化合物?！胺戳x抑制”意指在與靶核酸互補(bǔ)的反義化合物的存在下靶核酸水平或靶蛋白水平相比于在反義化合物存在下的靶核酸水平或靶蛋白水平的減少?！胺戳x寡核苷酸”意指具有允許與相應(yīng)的靶核酸區(qū)域或區(qū)段雜交的核堿基序列的單鏈寡核苷酸。如本文所用的，術(shù)語(yǔ)“反義寡核苷酸”包括本文所述的化合物的藥學(xué)上可接受的衍生物?！昂蠥poB的脂蛋白”意指具有載脂蛋白B作為其蛋白組分的任何脂蛋白，并且應(yīng)理解為包括LDL、VLDL、IDL和脂蛋白，且可通常由脂質(zhì)降低劑和療法靶向?！昂蠥poB-100的LDL”意指含有ApoB-100同種型的LDL?！皠?dòng)脈粥樣硬化”意指影響大型和中型動(dòng)脈的動(dòng)脈的硬化并且其特征在于存在脂肪沉積物。脂肪沉積物被稱為"動(dòng)脈粥樣化"或“斑塊”，其主要由膽固醇和其它脂肪、鈣和癜痕脂肪，以及動(dòng)脈內(nèi)層的損傷組成。“雙環(huán)糖”意指通過兩個(gè)非孿位環(huán)原子的橋接修飾的呋喃糖基環(huán)。雙環(huán)糖是經(jīng)修飾的糖?！半p環(huán)核酸”或“BNA”是指核苷或核苷酸，其中該核苷或核苷酸的呋喃糖部分包括連接呋喃糖環(huán)上的兩個(gè)碳原子的橋，由此形成雙環(huán)系統(tǒng)?！懊苯Y(jié)構(gòu)”或“端帽部分”意指已在反義化合物的任一末端并入的化學(xué)修飾?！靶难芗膊　被颉靶难懿“Y”是指一組涉及心、血管或循環(huán)的疾患。心血管疾病的實(shí)例包括但不限于，動(dòng)脈瘤、心絞痛、心律不齊、動(dòng)脈粥樣硬化、腦血管疾病(中風(fēng))、冠心病、高血壓、血脂障礙、高脂血癥和高膽固醇血癥?！盎瘜W(xué)上不同的區(qū)域”是指以某種方式化學(xué)上不同于同一反義化合物的另一區(qū)域的反義化合物的區(qū)域。例如，具有2’-O-甲氧基乙基核苷酸的區(qū)域化學(xué)上不同于具有無2’-O-甲氧基乙基修飾的核苷酸的區(qū)域?！扒逗戏戳x化合物”意指具有至少兩個(gè)化學(xué)上不同的區(qū)域的反義化合物。“共施用”意指給個(gè)體施用兩種或更多種活性劑。兩種或更多種活性劑可以在單一藥物組合物中，或可以在分開的藥物組合物中。兩種或更多種活性劑中的每一種可通過相同或不同的施用路徑施用。共施用包括平行或相繼施用?！澳懝檀肌笔谴嬖谟谒袆?dòng)物組織的細(xì)胞膜中的甾醇分子。膽固醇必須經(jīng)由脂蛋白在動(dòng)物的血漿中進(jìn)行轉(zhuǎn)運(yùn)，所述脂蛋白包括極低密度脂蛋白(VLDL)、中等密度脂蛋白(IDL)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)。“血漿膽固醇”是指存在于血漿或血清中的所有脂蛋白(VDL、IDL、LDL、HDL)酯化的和/或非酯化的膽固醇的總和?！澳懝檀嘉找种苿币庵敢种朴娠嬍倡@得的外源性膽固醇的吸收的活性劑。“互補(bǔ)性”意指第一核酸與第二核酸的核堿基之間配對(duì)的能力。在某些實(shí)施方案中，第一核酸與第二核酸之間的互補(bǔ)性可在兩條DNA鏈之間、在兩條RNA鏈之間，或在DNA和RNA鏈之間。在某些實(shí)施方案中，一條鏈上的一些核堿基基于其它鏈與互補(bǔ)氫鍵合匹配。在某些實(shí)施方案中，一條鏈上的所有核堿基基于其它鏈與互補(bǔ)氫鍵匹配。在某些實(shí)施方案中，第一核酸是反義化合物且第二核酸是靶核酸。在某些此類實(shí)施方案中，反義寡核苷酸是第一核酸且靶核酸是第二核酸?！斑B續(xù)核堿基”意指彼此直接相鄰的核堿基?！肮谛牟?CHD)”意指供應(yīng)血和氧至心臟的小血管的狹窄，其通常是動(dòng)脈粥樣硬化的結(jié)果?！懊撗鹾颂呛塑账帷币庵冈诤塑账岬奶遣糠值?’位具有氫的核苷酸。脫氧核糖核苷酸可被多種取代基中的任一種修飾?！疤悄虿?Diabetesmellitus)"或"糖尿病"是特征在于紊亂的代謝和異常高的血糖(高血糖癥)的綜合征，這是由胰島素水平不足或胰島素敏感性降低引起的。特有癥狀是由于高血糖水平導(dǎo)致的過量尿生成(多尿癥)、過度口渴和試圖補(bǔ)償排尿增加的流體攝取的增加(煩渴)、由于高血糖對(duì)眼光學(xué)的效應(yīng)導(dǎo)致的視力模糊、不明體重減輕和嗜睡。“糖尿病性血脂障礙”或“具有血脂障礙的2型糖尿病”意指特征在于2型糖尿病、減少的HDL-C、升高的甘油三酯和升高的小且致密LDL顆粒的疾患?！跋♂寗币庵附M合物中缺少藥理學(xué)活性但是藥學(xué)上必需或期望的成分。例如，注射型組合物中的稀釋劑可以是液體，例如鹽水溶液。“血脂障礙”是指脂質(zhì)和/或脂蛋白代謝的病癥，包括脂質(zhì)和/或脂蛋白過度生成或缺乏。血脂障礙可表現(xiàn)為脂質(zhì)例如膽固醇和甘油三酯以及脂蛋白例如低密度脂蛋白(LDL)膽固醇的升高。“劑量單位”意指提供藥用劑的形式，例如丸劑、片劑或其它本領(lǐng)域中已知的劑量單位。在某些實(shí)施方案中，劑量單位是含有凍干的反義寡核苷酸的小瓶。在某些實(shí)施方案中，劑量單位是含有復(fù)原的反義寡核苷酸的小瓶?！皠┝俊币庵冈趩蝹€(gè)施用中或在指定時(shí)間內(nèi)提供的指定量的藥用劑。在某些實(shí)施方案中，劑量可在一個(gè)、兩個(gè)或多個(gè)大丸劑(bolus)、片劑或注射劑中施用。例如，在某些實(shí)施方案中，當(dāng)期望皮下施用時(shí)，所需劑量需要不易由單次注射調(diào)節(jié)的體積，因此，兩個(gè)或更多個(gè)注射可用于實(shí)現(xiàn)所需劑量。在某些實(shí)施方案中，藥用劑通過在延長(zhǎng)的時(shí)段內(nèi)或連續(xù)地輸注來施用。劑量可被陳述為每小時(shí)、每天、每周或每月藥用劑的量。劑量可以mg/kg或g/kg表示?！坝行Я俊被颉爸委熡行Я俊币庵缸阋栽谛枰钚詣┑膫€(gè)體中實(shí)現(xiàn)所需生理學(xué)結(jié)果的活性藥用劑的量。有效量可在個(gè)體間變化，取決于待治療個(gè)體的健康和身體條件、待治療個(gè)體的分類群、組合物的制劑、個(gè)體的醫(yī)療條件的評(píng)價(jià)、以及其它相關(guān)因素?！巴耆パa(bǔ)”或“100％互補(bǔ)”意指第一核酸的核堿基序列的每個(gè)核堿基在第二核酸的第二核堿基序列中具有互補(bǔ)核堿基。在某些實(shí)施方案中，第一核酸是反義化合物且靶核酸是第二核酸。“缺口基體(Gapmer)”意指其中具有多個(gè)支持RNA酶H切割的核苷的內(nèi)部區(qū)域位于具有一個(gè)或多個(gè)核苷的外部區(qū)域的嵌合反義化合物，其中包含內(nèi)部區(qū)域的核苷化學(xué)上不同于包含外部區(qū)域的核苷。內(nèi)部區(qū)域可被稱為“缺口區(qū)段”且外部區(qū)域可被稱為“翼區(qū)段”?！叭笨诩訉挼摹币庵妇哂?2或更多個(gè)連續(xù)2’-脫氧核糖核苷的缺口區(qū)段的嵌合反義化合物的位置在具有1至6個(gè)核苷的5’和3’翼區(qū)段之間和與所述5’和3’翼區(qū)段直接相鄰?！捌咸烟恰笔潜患?xì)胞用作能量和代謝中間體的來源的單糖?！把獫{葡萄糖”是指存在于血漿中的葡萄糖?！案呙芏戎鞍?C(HDL-C)”意指與高密度脂蛋白顆粒相關(guān)的膽固醇。HDL-C在血清(或血漿)中的濃度通常以mg/dL或nmol/L量化?！癏DL-C”和“血漿HDL-C”是指分別在血清和血漿中的HDL-C。“HMG-CoA還原酶抑制劑”意指通過抑制酶HMG-CoA還原酶起作用的活性劑，例如阿托伐他汀、羅蘇伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀、普伐他汀和辛伐他汀。“雜交”意指互補(bǔ)核酸分子的退火。在某些實(shí)施方案中，互補(bǔ)核酸分子包括反義化合物和靶核酸?！案吣懝檀佳Y”意指這樣的疾患，其特征在于升高的膽固醇或循環(huán)(血漿)膽固醇、LDL-膽固醇和VLDL-膽固醇，如根據(jù)ExpertPanelReportoftheNationalCholesterolEducationalProgram(NCEP)ofDetection，EvaluationofTreatmentofhighCholesterolinadults的指南(參見，Arch.Int.Med.(1988)148，36-39)。“高脂血癥”或“血脂過多(hyperlipemia)”是特征在于升高的血清脂質(zhì)或循環(huán)(血漿)脂質(zhì)的疾患。這種疾患顯示異常高的脂肪濃度。循環(huán)血液中的脂質(zhì)部分是膽固醇、低密度脂蛋白、極低密度脂蛋白和甘油三酯?！案吒视腿パY”意指特征在于升高的甘油三酯水平的疾患。“鑒定”或“選擇患有代謝疾病或心血管疾病的受試者”意指鑒定或選擇已診斷有代謝疾病、心血管疾病或代謝綜合征的受試者；或，鑒定或選擇患有代謝疾病、心血管疾病或代謝綜合征的受試者包括但不限于高膽固醇血癥、高血糖癥、高脂血癥、高甘油三酯血癥、高血壓、增加的胰島素抵抗、減少的胰島素敏感性、超過正常體重、和/或超過正常體脂肪含量或其任何組合。此類鑒定可通過任何方法實(shí)現(xiàn)，包括但不限于標(biāo)準(zhǔn)臨床試驗(yàn)或評(píng)價(jià)，例如測(cè)量血清或循環(huán)(血漿)膽固醇、測(cè)量血清或循環(huán)(血漿)血液-葡萄糖、測(cè)量血清或循環(huán)(血漿)甘油三酯、測(cè)量血壓、測(cè)量體脂肪含量、測(cè)量體重等?！拌b定”或“選擇糖尿病受試者”意指鑒定或選擇已被鑒定為糖尿病的受試者或鑒定或選擇具有糖尿病(1型或2型)的任何癥狀例如但不限于空腹葡萄糖為至少110mg/dL、糖尿、多尿癥、煩渴、增加的胰島素抵抗和/或降低的胰島素敏感性的受試者?！拌b定”或“選擇肥胖受試者”意指鑒定或選擇已被診斷為肥胖的受試者或鑒定或選擇BMI超過30和/或腰圍男性大于102cm或女性大于88cm的受試者?！拌b定”或“選擇患有血脂障礙的受試者”意指鑒定或選擇診斷有脂質(zhì)和/或脂蛋白代謝的病癥，包括脂質(zhì)和/或脂蛋白過度生成或缺乏。血脂障礙可表現(xiàn)為脂質(zhì)例如膽固醇和甘油三酯以及脂蛋白例如低密度脂蛋白(LDL)膽固醇的升高?！拌b定”或“選擇”患有增加的脂肪過多(adiposity)的受試者”意指鑒定或選擇具有增加量的體脂肪(或脂肪過多)的受試者，包括關(guān)心脂肪遍及身體的分布和脂肪組織沉積物的大小與質(zhì)量的一者或兩者。體脂肪分布可通過皮膚褶測(cè)量、腰臀圍比或技術(shù)例如超聲、計(jì)算機(jī)斷層攝影術(shù)或核磁共振成像來評(píng)價(jià)。根據(jù)疾病控制和預(yù)防中心，體重指數(shù)(BMI)為30或以上的個(gè)體被認(rèn)為是肥胖的?！疤岣叩男难芙Y(jié)果”意指不良心血管事件或其風(fēng)險(xiǎn)發(fā)生的減少。不良心血管事件的實(shí)例包括但不限于死亡、再梗塞、中風(fēng)、心源性休克、肺水腫、心跳停止和房性心律失常?！爸苯酉噜彙币庵冈谥苯酉噜彽囊刂g沒有插入要素?！皞€(gè)體”或“受試者”或“動(dòng)物”意指對(duì)于治療或療法所選定的人或非-人動(dòng)物?！耙种票磉_(dá)或活性”是指表達(dá)或活性的減少或阻斷并且不一定指示表達(dá)或活性的完全消除?！耙葝u素抵抗”被定義為其中正常量的胰島素不足以從細(xì)胞例如脂肪細(xì)胞、肌細(xì)胞和/或肝細(xì)胞產(chǎn)生正常胰島素響應(yīng)的疾患。脂肪細(xì)胞中的胰島素抵抗導(dǎo)致所存貯甘油三酯的水解，其升高血漿中的游離脂肪酸。肌肉中的胰島素抵抗減少葡萄糖攝取而肝中的胰島素抵抗減少葡萄糖存貯，兩種效應(yīng)用于升高血糖。胰島素和葡萄糖的高血漿水平由于胰島素抵抗而常引起代謝綜合征和2型糖尿病。“胰島素敏感性”是個(gè)體如何有效地加工葡萄糖的量度。具有高胰島素敏感性的個(gè)體有效地加工葡萄糖，而具有低胰島素敏感性的個(gè)體不能有效地加工葡萄糖?！昂塑臻g鍵合”是指核苷之間的化學(xué)鍵?！办o脈內(nèi)施用”意指進(jìn)入靜脈的施用。“連接核苷”意指鍵合在一起的相鄰核苷?！爸|(zhì)降低”意指受試者中的一種或多種脂質(zhì)的減少。脂質(zhì)降低可用一個(gè)或多個(gè)劑量隨時(shí)間流逝而發(fā)生?！爸|(zhì)降低劑”意指給受試者提供以實(shí)現(xiàn)受試者中脂質(zhì)的降低的活性劑例如ANGPTL3-特異性調(diào)節(jié)劑。例如，在某些實(shí)施方案中，給受試者提供脂質(zhì)降低劑減少受試者中的apoB、apoC3、總膽固醇、LDL-C、VLDL-C、IDL-C、非-HDL-C、甘油三酯、小且致密LDL顆粒和Lp(a)中的一者或多者。“降脂質(zhì)治療”意指給受試者提供以減少受試者中的一種或多種脂質(zhì)的治療方案。在某些實(shí)施方案中，提供降脂質(zhì)治療以減少受試者中的apoB、apoC3、總膽固醇、LDL-C、VLDL-C、IDL-C、非-HDL-C、甘油三酯、小且致密LDL顆粒和Lp(a)中的一者或多者?！爸鞍住崩鏥LDL、LDL和HDL是指一組存在于血清、血漿和淋巴且對(duì)于脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)重要的蛋白質(zhì)。每種脂蛋白的化學(xué)組成不同，因?yàn)镠DL具有較高的蛋白與脂質(zhì)的比例，而VLDL具有較低的蛋白與脂質(zhì)的比例?！暗兔芏戎鞍?膽固醇(LDL-C)”意指低密度脂蛋白顆粒中攜帶的膽固醇。LDL-C在血清(或血漿)中的濃度通常以mg/dL或nmol/L量化。“血清LDL-C”和“血漿LDL-C”是指分別在血清和血漿中的LDL-C?！爸饕L(fēng)險(xiǎn)因子”是指歸因于特定疾病或疾患的高風(fēng)險(xiǎn)的因子。在某些實(shí)施方案中，冠心病的主要風(fēng)險(xiǎn)因子包括但不限于吸煙、高血壓、低HDL-C、冠心病的家族史、年齡和其它本文公開的因子?！按x病癥”或“代謝疾病”是指特征在于代謝功能改變或紊亂的疾患?！按x”和“新陳代謝”是本領(lǐng)域熟知的術(shù)語(yǔ)并且一般包括在活器官內(nèi)發(fā)生的一系列生物過程。代謝病癥包括但不限于，高血糖癥、糖尿病前期、糖尿病(I型和2型)、肥胖癥、胰島素抵抗、代謝綜合征和由于2型糖尿病引起的血脂障礙。“代謝綜合征”意指特征在于代謝來源的脂質(zhì)和非-脂質(zhì)心血管風(fēng)險(xiǎn)因子的聚類的疾病。在某些實(shí)施方案中，代謝綜合征通過存在以下因素的任何3個(gè)來鑒定：腰圍男性大于102cm或女性大于88cm；血清甘油三酯為至少150mg/dL；HDL-C男性低于40mg/dL或女性低于50mg/dL；血壓為至少130/85mmHg；和空腹葡萄糖為至少110mg/dL。這些決定子可在臨床實(shí)踐中容易測(cè)量(JAMA，2001，285：2486-2497)?！板e(cuò)配”或“非-互補(bǔ)核堿基”是指當(dāng)?shù)谝缓怂岬暮藟A基不能與第二靶核酸相應(yīng)核堿基配對(duì)的情況?！盎旌闲脱系K”意指特征在于升高的膽固醇和升高的甘油三酯的疾患?！敖?jīng)修飾的核苷間鍵合”是指來自天然存在核苷間鍵(即磷酸二酯核苷間鍵)的取代或任何變化?！敖?jīng)修飾的核堿基”是指不是腺嘌呤、胞嘧啶、鳥嘌呤、胸苷或尿嘧啶的任何核堿基?！拔唇?jīng)修飾的核堿基”意指嘌呤堿基腺嘌呤(A)和鳥嘌呤(G)以及嘧啶堿基胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)和尿嘧啶(U)?！敖?jīng)修飾的核苷”意指獨(dú)立地具有一個(gè)或多個(gè)經(jīng)修飾的糖部分或經(jīng)修飾的核堿基的核苷?！敖?jīng)修飾的核苷酸”意指不獨(dú)立地具有一個(gè)或多個(gè)經(jīng)修飾的糖部分、經(jīng)修飾的核苷間鍵合或經(jīng)修飾的核堿基的核苷酸?！敖?jīng)修飾的核苷”意指獨(dú)立地具有一個(gè)或多個(gè)經(jīng)修飾的糖部分或經(jīng)修飾的核堿基的核苷。“經(jīng)修飾的寡核苷酸”意指包含至少一個(gè)經(jīng)修飾的核苷酸的寡核苷酸。“經(jīng)修飾的糖”是指天然糖的取代或變化。“基序”意指反義化合物中化學(xué)上不同區(qū)域的模型。“MTP抑制劑”意指抑制酶、微粒體甘油三酯轉(zhuǎn)移蛋白的活性劑。“天然存在核苷間鍵合”意指3'至5'磷酸二酯鍵合?！疤烊惶遣糠帧币庵赴l(fā)現(xiàn)于DNA(2’-H)或RNA(2’-OH)中的糖?！胺蔷凭灾靖渭膊　被颉癗AFLD”意指特征在于不是由于過度酒精(例如，超過20g/天的酒精消耗)使用引起的肝的脂肪炎癥的疾患。在某些實(shí)施方案中，NAFLD與胰島素抵抗和代謝綜合征相關(guān)。NAFLD包括范圍為肝細(xì)胞(肝脂肪變性)中的單一甘油三酯蓄積到具有炎癥的肝脂肪變性(脂肪肝炎)、纖維化和肝硬化的疾病譜。“非酒精性脂肪肝炎”(NASH)從NAFLD的進(jìn)展發(fā)生，遲于甘油三酯的沉積。能夠誘導(dǎo)壞死、炎癥和纖維化的“第二次打擊(secondhit)”對(duì)于NASH的發(fā)展是必需的。用于第二次打擊的候選可分為以下大類：引起氧化性應(yīng)激增加的因素和促進(jìn)促炎性細(xì)胞因子的表達(dá)的因素。已提出增加的肝甘油三酯導(dǎo)致動(dòng)物和人的肝細(xì)胞中增加的氧化應(yīng)激，表明肝甘油三酯蓄積、氧化應(yīng)激和肝脂肪變性向NASH的進(jìn)展之間的潛在因果關(guān)系(Browning和Horton，JClinInvest，2004，114，147-152)。高甘油三酯血癥和高脂肪酸血癥可引起外周組織中的甘油三酯蓄積(Shimamura等人，BiochemBiophysResCommun，2004，322，1080-1085)?！昂怂帷笔侵赣蓡误w核苷酸組成的分子。核酸包括核糖核酸(RNA)、脫氧核糖核酸(DNA)、單鏈核酸、雙鏈核酸、小干擾核糖核酸(siRNA)和微RNA(miRNA)。核酸還可以包含這些要素在單個(gè)分子中的組合?！昂藟A基”意指能夠與另一個(gè)核酸的堿基配對(duì)的雜環(huán)部分?！昂藟A基序列”意指不依賴于任何糖、鍵合或核堿基修飾的連續(xù)核堿基的次序。“核苷”意指與糖連接的核堿基。“核苷模擬物”包括用于替換糖或糖和堿基并且不一定在寡聚化合物的一個(gè)或多個(gè)位置連接的那些結(jié)構(gòu)；例如具有嗎啉代、環(huán)己烯基、環(huán)己基、四氫呋喃基、二環(huán)或三環(huán)糖模擬物例如非呋喃糖單元的核苷模擬物?！昂塑账帷币庵妇哂泄矁r(jià)連接于核苷的糖部分的磷酸基的核苷?！昂塑账崮M物”包括用于替代核苷且寡聚化合物的一個(gè)或多個(gè)位置連接的那些結(jié)構(gòu)，例如肽核酸或嗎啉代(通過-N(H)-C(＝O)-O-或其它非-磷酸二酯鍵合連接的嗎啉代)?！肮丫刍衔?或“寡聚物”是指包含兩個(gè)或更多個(gè)子結(jié)構(gòu)并且能夠與核酸分子的區(qū)域雜交的聚合結(jié)構(gòu)。在某些實(shí)施方案中，寡聚化合物是寡核苷。在某些實(shí)施方案中，寡聚化合物是寡核苷酸。在某些實(shí)施方案中，寡聚化合物是反義化合物。在某些實(shí)施方案中，寡聚化合物是反義寡核苷酸。在某些實(shí)施方案中，寡聚化合物是嵌合寡核苷酸?！肮押塑账帷币庵高B接核苷的聚合物，每個(gè)連接核苷可經(jīng)修飾或未經(jīng)修飾，彼此無關(guān)。“胃腸外施用”意指以除消化道之外的方式的施用。胃腸外施用包括局部施用、皮下施用、靜脈內(nèi)施用、肌內(nèi)施用、動(dòng)脈內(nèi)施用、腹膜內(nèi)施用或顱內(nèi)施用，例如鞘內(nèi)或腦室內(nèi)施用。施用可以是連續(xù)的、或慢性的、或短期或間歇的?！半摹币庵竿ㄟ^連接至少兩個(gè)氨基酸經(jīng)由酰胺鍵形成的分子。肽是指多肽和蛋白質(zhì)?！八幱脛币庵府?dāng)施用于個(gè)體時(shí)提供治療益處的物質(zhì)。例如，在某些實(shí)施方案中，靶向于ANGPTL3的反義寡核苷酸是藥用劑?！八幬锝M合物”意指適用于給個(gè)體施用的物質(zhì)的混合物。例如，藥物組合物可包含一種或多種活性劑和無菌水溶液。“藥學(xué)上可接受的載體”意指不干擾寡核苷酸的結(jié)構(gòu)或功能的介質(zhì)或稀釋劑。某些此類載體能使藥物組合物配制成例如片劑、丸劑、糖丸、膠囊、液體、凝膠劑、糖漿劑、漿液、混懸液和錠劑以給受試者口服攝入。某些此類載體能使藥物組合物配制成注射或輸注。例如，藥學(xué)上可接受的載體可以是無菌水溶液?！八帉W(xué)上可接受的鹽”意指反義化合物的生理學(xué)和藥學(xué)上可接受的鹽，即保留母體寡核苷酸的所需生物活性并且不賦予其不想要的毒理學(xué)效應(yīng)的鹽?！傲虼姿狨ユI合”意指核苷之間的鍵合，其中磷酸二酯鍵通過用硫原子替代非橋接氧原子之一來修飾。硫代磷酸酯鍵合是經(jīng)修飾的核苷間鍵合。“部分”意指核酸的確定數(shù)量的連續(xù)(即連接)核堿基。在某些實(shí)施方案中，部分是靶核酸的確定數(shù)量的連續(xù)核堿基。在某些實(shí)施方案中，部分是反義化合物的確定數(shù)量的連續(xù)核堿基?！邦A(yù)防”是指延緩或阻止疾病、病癥或疾患的發(fā)作或發(fā)展達(dá)到從數(shù)分鐘至無限期的時(shí)段。預(yù)防還意指減少疾病、病癥或疾患發(fā)展的風(fēng)險(xiǎn)?！扒八帯币庵敢詿o活性形式制備的治療劑，其在體內(nèi)或其細(xì)胞內(nèi)通過內(nèi)源性酶或其它化學(xué)品或條件的作用被轉(zhuǎn)化為活性形式。“副作用”意指可歸因于治療而不是所需效應(yīng)的生理學(xué)反應(yīng)。在某些實(shí)施方案中，副作用包括注射部位反應(yīng)、肝功能試驗(yàn)異常、腎功能異常、肝毒性、腎毒性、中樞神經(jīng)系統(tǒng)異常、肌病和不適。例如，增加的血清氨基轉(zhuǎn)移酶水平可指示肝毒性或肝功能異常。例如，增加的膽紅素可包括肝毒性或肝功能異常。“單鏈寡核苷酸”意指不與互補(bǔ)鏈雜交的寡核苷酸。“特異性雜交”是指與靶核酸具有足夠的互補(bǔ)性程度以誘導(dǎo)所需效應(yīng)同時(shí)在體內(nèi)測(cè)定和治療性處理的情況下在需要特異性結(jié)合的條件即在生理學(xué)條件下對(duì)非-靶核酸表現(xiàn)出最低效應(yīng)或無效應(yīng)的反義化合物“抑制素(Statin)”意指抑制HMG-CoA還原酶活性的活性劑。“皮下施用”意指在皮膚正下方的施用?！鞍邢颉被颉氨话邢颉币庵冈O(shè)計(jì)和選擇與靶核酸特異性雜交并且誘導(dǎo)所需效應(yīng)的反義化合物的方法?！鞍泻怂帷?、“靶RNA”和“靶RNA轉(zhuǎn)錄物”均是指能夠通過反義化合物靶向的核酸?！鞍袇^(qū)域”被定義為具有至少一個(gè)可識(shí)別的結(jié)構(gòu)、功能或特征的靶核酸的一部分。“靶區(qū)段”意指反義化合物所靶向的靶核酸的核苷酸的序列。“5’靶位點(diǎn)”是指靶區(qū)段的5’最末端核苷酸?！?’靶位點(diǎn)”是指靶區(qū)段的3’最末端核苷酸?！爸委熡行Я俊币庵附o個(gè)體提供了治療益處的活性劑的量。“治療性生活方式變化”意指旨在降低脂肪/脂肪組織質(zhì)量/或膽固醇的飲食和生活方式變化。此類變化可減少發(fā)展心臟病的危險(xiǎn)，并且可包括每天總卡路里、總脂肪、飽和脂肪、多不飽和脂肪、單不飽和脂肪、碳水化合物、蛋白質(zhì)、膽固醇、不溶纖維的飲食攝取的推薦以及體力活動(dòng)的推薦?！案视腿ァ币庵赣膳c三個(gè)脂肪酸分子組合的甘油的脂質(zhì)或中性脂肪?！?型糖尿病”(也稱為“2型糖尿病”或“糖尿病，2型”，并且之前稱為“糖尿病2型”、“非-胰島素依賴性糖尿病(NIDDM)”、“肥胖癥相關(guān)性糖尿病”或“成人型糖尿病”)是主要特征在于胰島素抵抗、相對(duì)胰島素缺乏和高血糖癥的代謝病癥?！爸委煛笔侵甘┯盟幬锝M合物以實(shí)現(xiàn)疾病、病癥或疾患的改變或提高。“未經(jīng)修飾的核苷酸”意指由天然存在核堿基、糖部分和核苷間鍵合組成的核苷酸。在某些實(shí)施方案中，未經(jīng)修飾的核苷酸是RNA核苷酸(即β-D-核糖核苷)或DNA核苷酸(即β-D-脫氧核糖核苷)。某些實(shí)施方案在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物和組合物包含靶向于ANGPTL3的長(zhǎng)度為10至30個(gè)連接核苷的經(jīng)修飾的寡核苷酸。ANGPTL3靶可具有選自SEQIDNO：1-5中任一個(gè)的序列。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物和組合物包含經(jīng)修飾的寡核苷酸，所述經(jīng)修飾的寡核苷酸由10至30個(gè)核苷組成并且具有包含與SEQIDNO：1-5的等長(zhǎng)部分互補(bǔ)的至少8個(gè)連續(xù)核堿基的核堿基序列。本發(fā)明的化合物和組合物包含經(jīng)修飾的寡核苷酸，所述經(jīng)修飾的寡核苷酸由10至30個(gè)核苷組成并且具有包含選自SEQIDNO：34-182中任一個(gè)的核堿基序列的至少8個(gè)連續(xù)核堿基的核堿基序列。本發(fā)明的化合物和組合物包含經(jīng)修飾的寡核苷酸，所述經(jīng)修飾的寡核苷酸由10至30個(gè)核苷組成并且具有包含選自SEQIDNO：34-182中任一個(gè)所述的核堿基序列的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個(gè)連續(xù)核堿基的核堿基序列。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物和組合物包含經(jīng)修飾的寡核苷酸的鹽。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物和組合物還包含藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑。在某些實(shí)施方案中，經(jīng)修飾的寡核苷酸的核堿基序列與SEQIDNO：1-5中任一個(gè)至少70％、80％、90％、95％或100％互補(bǔ)，如對(duì)經(jīng)修飾的寡核苷酸的整體性所測(cè)量的。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物由單鏈的經(jīng)修飾的寡核苷酸組成。在某些實(shí)施方案中，經(jīng)修飾的寡核苷酸由8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30個(gè)連接核苷組成。在某些實(shí)施方案中，經(jīng)修飾的寡核苷酸由20個(gè)連接核苷組成。在某些實(shí)施方案中，所述經(jīng)修飾的寡核苷酸的至少一個(gè)核苷間鍵合是經(jīng)修飾的核苷間鍵合。在某些實(shí)施方案中，每個(gè)核苷間鍵合是硫代磷酸酯核苷間鍵合。在某些實(shí)施方案中，經(jīng)修飾的寡核苷酸的至少一個(gè)核苷包含經(jīng)修飾的糖。在某些實(shí)施方案中，經(jīng)修飾的寡核苷酸包含至少一個(gè)經(jīng)四氫吡喃修飾的核苷，其中四氫吡喃環(huán)代替呋喃糖環(huán)。在某些實(shí)施方案中，每一個(gè)經(jīng)四氫吡喃修飾的核苷具有以下結(jié)構(gòu)：其中Bx是任選保護(hù)的雜環(huán)堿基部分。在某些實(shí)施方案中，至少一種經(jīng)修飾的糖是雙環(huán)糖。在某些實(shí)施方案中，至少一種經(jīng)修飾的糖包含2’-O-甲氧基乙基或4’-(CH2)n-O-2’橋，其中n是1或2。在某些實(shí)施方案中，所述經(jīng)修飾的寡核苷酸中的至少一個(gè)核苷包含經(jīng)修飾的核堿基。在某些實(shí)施方案中，經(jīng)修飾的核堿基是5-甲基胞嘧啶。在某些實(shí)施方案中，經(jīng)修飾的寡核苷酸包含：a)由連接脫氧核苷組成的缺口區(qū)段；b)由連接核苷組成的5’翼區(qū)段；和c)由連接核苷組成的3’翼區(qū)段。缺口區(qū)段位于5’翼區(qū)段與3'翼區(qū)段之間并且每個(gè)翼區(qū)段中的每個(gè)核苷包含經(jīng)修飾的糖。在某些實(shí)施方案中，經(jīng)修飾的寡核苷酸由20個(gè)連接核苷組成，缺口區(qū)段由10個(gè)連接脫氧核苷組成，5’翼區(qū)段由5個(gè)連接核苷組成，3’翼區(qū)段由5個(gè)連接核苷組成，每個(gè)翼區(qū)段的每個(gè)核苷包含2’-O-甲氧基乙基糖并且每個(gè)核苷間鍵合是硫代磷酸酯鍵合，在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物和組合物包含經(jīng)修飾的寡核苷酸，所述經(jīng)修飾的寡核苷酸由20個(gè)連接核苷組成并且具有包含與SEQIDNO：1-5的等長(zhǎng)部分互補(bǔ)的至少8個(gè)連續(xù)核堿基的核堿基序列，其中經(jīng)修飾的寡核苷酸包含：a)由10個(gè)連接脫氧核苷組成的缺口區(qū)段；b)由5個(gè)連接核苷組成的5’翼區(qū)段；和c)由5個(gè)連接核苷組成的3’翼區(qū)段。缺口區(qū)段位于5’翼區(qū)段與3’翼區(qū)段之間，每個(gè)翼區(qū)段的每個(gè)核苷包含2’-O-甲氧基乙基糖，每個(gè)核苷間鍵合是硫代磷酸酯鍵合且每個(gè)胞嘧啶殘基是5-甲基胞嘧啶。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物和組合物包含經(jīng)修飾的寡核苷酸，所述經(jīng)修飾的寡核苷酸由20個(gè)連接核苷組成并且具有包含與SEQIDNO：34-182中任一個(gè)的至少8個(gè)連續(xù)核堿基的核堿基序列，其中經(jīng)修飾的寡核苷酸包含：a)由10個(gè)連接脫氧核苷組成的缺口區(qū)段；b)由5個(gè)連接核苷組成的5’翼區(qū)段；和c)由5個(gè)連接核苷組成的3’翼區(qū)段。缺口區(qū)段位于5’翼區(qū)段與3’翼區(qū)段之間，每個(gè)翼區(qū)段的每個(gè)核苷包含2’-O-甲氧基乙基糖，每個(gè)核苷間鍵合是硫代磷酸酯鍵合且每個(gè)胞嘧啶殘基是5-甲基胞嘧啶。某些實(shí)施方案提供了用于抑制ANGPTL3表達(dá)的方法、化合物和組合物。某些實(shí)施方案提供了減少動(dòng)物中的ANGPTL3表達(dá)的方法，其包括向所述動(dòng)物施用包含靶向于ANGPTL3的長(zhǎng)度為10至30個(gè)連接核苷的經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物。某些實(shí)施方案提供了減少動(dòng)物中的ApoC-III表達(dá)的方法，其包括向所述動(dòng)物施用包含靶向于ANGPTL3的長(zhǎng)度為10至30個(gè)連接核苷的經(jīng)修飾的寡核苷酸，由此減少動(dòng)物中的ApoC-III表達(dá)。某些實(shí)施方案提供了減少動(dòng)物中的甘油三酯水平的方法，其包括向所述動(dòng)物施用包含靶向于ANGPTL3的長(zhǎng)度為10至30個(gè)連接核苷的經(jīng)修飾的寡核苷酸，由此減少動(dòng)物中的甘油三酯水平。某些實(shí)施方案提供了減少動(dòng)物中的膽固醇水平的方法，其包括向所述動(dòng)物施用包含靶向于ANGPTL3的長(zhǎng)度為10至30個(gè)連接核苷的經(jīng)修飾的寡核苷酸，由此減少動(dòng)物中的膽固醇水平。某些實(shí)施方案提供了減少動(dòng)物中的低密度脂蛋白(LDL)水平的方法，其包括向所述動(dòng)物施用包含靶向于ANGPTL3的長(zhǎng)度為10至30個(gè)連接核苷的經(jīng)修飾的寡核苷酸，由此減少動(dòng)物中的低密度脂蛋白(LDL)水平。某些實(shí)施方案提供了減少動(dòng)物中的葡萄糖水平的方法，其包括向所述動(dòng)物施用包含靶向于ANGPTL3的長(zhǎng)度為10至30個(gè)連接核苷的經(jīng)修飾的寡核苷酸，由此減少動(dòng)物中的葡萄糖水平。某些實(shí)施方案提供了減輕動(dòng)物中的代謝疾病或心血管疾病的方法，其包括向所述動(dòng)物施用包含靶向于ANGPTL3的長(zhǎng)度為10至30個(gè)連接核苷的經(jīng)修飾的寡核苷酸，由此減輕動(dòng)物中的代謝疾病或心血管疾病。某些實(shí)施方案提供了用于治療患有ANGPTL3相關(guān)疾病或疾患的動(dòng)物的方法，包括：a)鑒定患有ANGPTL3相關(guān)疾病或疾患的所述動(dòng)物，和b)向所述動(dòng)物施用治療有效量的化合物，所述化合物包含靶向于ANGPTL3的長(zhǎng)度為10至30個(gè)連接核苷的經(jīng)修飾的寡核苷酸。在某些實(shí)施方案中，施用于動(dòng)物的治療有效量的化合物減輕動(dòng)物中的ANGPTL3相關(guān)疾病或疾患。某些實(shí)施方案提供了用于治療患有代謝疾病或心血管疾病的動(dòng)物的方法，包括：a)鑒定患有代謝疾病或心血管疾病的所述動(dòng)物，和b)向所述動(dòng)物施用治療有效量的包含經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物，所述經(jīng)修飾的寡核苷酸由20個(gè)連接核苷組成并且具有與SEQIDNO：1-5至少90％互補(bǔ)(如對(duì)經(jīng)修飾的寡核苷酸的整體性測(cè)量)的核堿基序列，由此治療患有代謝疾病或心血管疾病的動(dòng)物。在某些實(shí)施方案中，施用于動(dòng)物的治療有效量的化合物減輕動(dòng)物中的代謝疾病或心血管疾病。某些實(shí)施方案提供了通過施用包含經(jīng)修飾的寡核苷酸的ANGPTL3抑制劑減少人中ANGPTL3水平、LDL水平、apoC-III水平、甘油三酯水平、膽固醇水平、葡萄糖水平、脂肪墊重、心血管疾病和代謝疾病中的一者或多者的方法，所述經(jīng)修飾的寡核苷酸由20個(gè)連接核苷組成并且具有與SEQIDNO：1-5至少90％互補(bǔ)的核堿基序列，如對(duì)所述經(jīng)修飾的寡核苷酸的整體性所測(cè)量的。某些實(shí)施方案提供了本文所述的化合物和組合物用于抑制ANGPTL3表達(dá)的用途。某些實(shí)施方案提供了本文所述的化合物和組合物用于減少動(dòng)物中的ANGPTL3表達(dá)。某些實(shí)施方案包括向所述動(dòng)物施用包含靶向于ANGPTL3的長(zhǎng)度為10至30個(gè)連接核苷的經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物。某些實(shí)施方案提供了本文所述的化合物和組合物用于減少動(dòng)物中的ApoC-III表達(dá)的用途。某些實(shí)施方案包括向動(dòng)物施用包含靶向于ANGPTL3的長(zhǎng)度為10至30個(gè)連接核苷的經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物，由此減少動(dòng)物中的ApoC-III表達(dá)。某些實(shí)施方案提供了本文所述的化合物和組合物用于減少動(dòng)物中的甘油三酯水平的用途。某些實(shí)施方案包括給動(dòng)物施用包含靶向于ANGPTL3的長(zhǎng)度為10至30個(gè)連接核苷的經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物，由此減少動(dòng)物中的甘油三酯水平。某些實(shí)施方案提供了本文所述的化合物和組合物用于減少動(dòng)物中的膽固醇水平的用途。某些實(shí)施方案包括給動(dòng)物施用包含靶向于ANGPTL3的長(zhǎng)度為10至30個(gè)連接核苷的經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物，由此減少動(dòng)物中的膽固醇水平。某些實(shí)施方案提供了本文所述的化合物和組合物用于減少動(dòng)物中的低密度脂蛋白(LDL)水平的用途。某些實(shí)施方案包括給動(dòng)物施用包含靶向于ANGPTL3的長(zhǎng)度為10至30個(gè)連接核苷的經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物，由此減少動(dòng)物中的低密度脂蛋白(LDL)水平。某些實(shí)施方案提供了本文所述的化合物和組合物用于減少動(dòng)物中的葡萄糖水平的用途。某些實(shí)施方案包括給動(dòng)物施用包含靶向于ANGPTL3的長(zhǎng)度為10至30個(gè)連接核苷的經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物，由此減少動(dòng)物中的葡萄糖水平。某些實(shí)施方案提供了本文所述的化合物和組合物用于減輕動(dòng)物中的代謝疾病或心血管疾病的用途。某些實(shí)施方案包括給動(dòng)物施用包含靶向于ANGPTL3的長(zhǎng)度為10至30個(gè)連接核苷的經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物，由此減輕動(dòng)物中的代謝疾病或心血管疾病。某些實(shí)施方案提供了本文所述的化合物和組合物用于治療的用途。某些實(shí)施方案提供了本文所述的化合物和組合物用于治療患有ANGPTL3相關(guān)疾病或疾患的動(dòng)物的用途。在某些實(shí)施方案中，ANGPTL3相關(guān)疾病或疾患是代謝疾病或心血管疾病。某些實(shí)施方案包括：a)鑒定患有ANGPTL3相關(guān)疾病或疾患的所述動(dòng)物，和b)向所述動(dòng)物施用治療有效量的化合物，所述化合物包含靶向于ANGPTL3的長(zhǎng)度為10至30個(gè)連接核苷的經(jīng)修飾的寡核苷酸。在某些實(shí)施方案中，施用于動(dòng)物的治療有效量的化合物減輕動(dòng)物中的ANGPTL3相關(guān)疾病或疾患。某些實(shí)施方案提供了本文所述的化合物和組合物用于治療患有代謝疾病或心血管疾病的動(dòng)物的用途。包括：a)鑒定患有代謝疾病或心血管疾病的所述動(dòng)物，和b)向所述動(dòng)物施用包含經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物，由此治療患有代謝疾病或心血管疾病的動(dòng)物，所述經(jīng)修飾的寡核苷酸由20個(gè)連接核苷組成并且具有與SEQIDNO：1-5至少90％互補(bǔ)的核堿基序列，如對(duì)所述經(jīng)修飾的寡核苷酸的整體性所測(cè)量的。在某些實(shí)施方案中，施用于動(dòng)物的治療有效量的化合物減輕動(dòng)物中的代謝疾病或心血管疾病。某些實(shí)施方案提供了本文所述的化合物和組合物用于減少人中ANGPTL3水平、LDL水平、apoC-III水平、甘油三酯水平、膽固醇水平、葡萄糖水平、脂肪墊重、心血管疾病和代謝疾病中的一者或多者的用途，通過施用包含經(jīng)修飾的寡核苷酸的ANGPTL3抑制劑，所述經(jīng)修飾的寡核苷酸由20個(gè)連接核苷組成并且具有與SEQIDNO：1-5至少90％互補(bǔ)的核堿基序列，如對(duì)所述經(jīng)修飾的寡核苷酸的整體性所測(cè)量的。在某些實(shí)施方案中，ANGPTL3具有如GenBank登記號(hào)BG400407.1中所述的mRNA序列(以SEQIDNO：1并入本文)。在某些實(shí)施方案中，ANGPTL3具有如GenBank登記號(hào)BG562555.1中所述的mRNA序列(以SEQIDNO：2并入本文)。在某些實(shí)施方案中，ANGPTL3具有如GenBank登記號(hào)BG562798.1中所述的mRNA序列(以SEQIDNO：3并入本文)。在某些實(shí)施方案中，ANGPTL3具有如GenBank登記號(hào)NM_014495.1中所述的mRNA序列(以SEQIDNO：4并入本文)。在某些實(shí)施方案中，ANGPTL3具有如GenBank登記號(hào)NT_032977.5的核苷酸15511702至15521082中所述的序列(以SEQIDNO：5并入本文)。在某些實(shí)施方案中，ANGPTL3具有如GenBank登記號(hào)AF162224.1中所述的mRNA序列(以SEQIDNO：6并入本文)。在某些實(shí)施方案中，ANGPTL3具有如GenBank登記號(hào)AI195524.1中所述的mRNA序列(以SEQIDNO：7并入本文)。在某些實(shí)施方案中，ANGPTL3具有如GenBank登記號(hào)BB717501.1中所述的mRNA序列(以SEQIDNO：8并入本文)。表1基因靶名稱和序列靶名稱物種Genbank#SEQIDNO血管生成素樣3人BG400407.11血管生成素樣3人BG562555.12血管生成素樣3人BG562798.13血管生成素樣3人NM_014495.14血管生成素樣3人NT_032977.5的核苷酸15511702至155210825血管生成素樣3小鼠AF162224.16血管生成素樣3小鼠AI195524.17血管生成素樣3小鼠BB717501.18在某些實(shí)施方案中，該動(dòng)物是人。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物和組合物被稱為第一活性劑，并且本發(fā)明的方法或使用還包括施用第二活性劑。在某些實(shí)施方案中，共施用第一活性劑和第二活性劑。在某些實(shí)施方案中，相繼或伴隨共施用第一活性劑和第二活性劑。在某些實(shí)施方案中，第二活性劑是葡萄糖降低劑。葡萄糖降低劑可包括但不限于治療性生活方式改變、PPAR激動(dòng)劑、二肽基肽酶(IV)抑制劑、GLP-1類似物、胰島素或胰島素類似物、胰島素促泌素、SGLT2抑制劑、人胰淀素類似物、雙胍類、α-糖苷酶抑制劑或其組合。葡萄糖降低劑可包括但不限于二甲雙胍、磺酰脲、羅格列酮、美格列奈、噻唑烷二酮類、α-糖苷酶抑制劑或其組合?；酋ｋ蹇梢允谴姿峒弘?、氯磺丙脲、甲苯磺丁脲、妥拉磺脲、格列美脲、格列吡嗪、格列本脲或格列奇特。美格列奈可以是那格列奈或瑞格列奈。噻唑烷二酮類可以是吡格列酮或羅格列酮。α-糖苷酶可以是阿卡波糖或米格列醇。在某些實(shí)施方案中，第二活性劑是降脂質(zhì)治療。在某些實(shí)施方案中，降脂質(zhì)治療可包括但不限于治療性生活方式改變、HMG-CoA還原酶抑制劑、膽固醇吸收抑制劑、MTP抑制劑、靶向于ApoB的反義化合物或其任何組合。膽固醇吸收抑制劑可以是依澤替米貝。在某些實(shí)施方案中，施用包含胃腸外施用。在某些實(shí)施方案中，代謝疾病或心血管疾病包括但不限于肥胖癥、糖尿病、動(dòng)脈粥樣硬化、血脂障礙、冠心病、非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)、高脂肪酸血癥或代謝綜合征或其組合。血脂障礙可以是高脂血癥。高脂血癥可以是高膽固醇血癥、高甘油三酯血癥或高膽固醇血癥和高甘油三酯血癥兩者。NAFLD可以是肝脂肪變性或脂肪肝炎。糖尿病可以是具有2型糖尿病或血脂障礙的2型糖尿病。在某些實(shí)施方案中，施用發(fā)明化合物導(dǎo)致脂質(zhì)水平的減少，包括甘油三酯水平、膽固醇水平、胰島素抵抗、葡萄糖水平或其組合。一個(gè)或多個(gè)水平可獨(dú)立地減少5％、10％、20％、30％、35％或40％。施用本發(fā)明化合物可導(dǎo)致提高的胰島素敏感性或肝胰島素敏感性。施用本發(fā)明化合物可導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化斑塊、肥胖癥、葡萄糖、脂質(zhì)、葡萄糖抵抗、膽固醇的減少或胰島素敏感性的提高或其任何組合。某些實(shí)施方案提供了本文描述的化合物在制備用于治療、減輕、延緩或預(yù)防一種或多種代謝疾病或心血管疾病的藥物中的用途。某些實(shí)施方案提供了用于治療、預(yù)防或減輕一種或多種本文所述的代謝疾病或心血管疾病的試劑盒，其中所述試劑盒包含：a)本文描述的化合物；和任選的b)本文描述的其它活性劑或治療。該試劑盒還可包括使用該試劑盒來治療、預(yù)防或減輕一種或多種代謝疾病或心血管疾病的說明或標(biāo)簽。反義化合物寡聚化合物包括但不限于，寡核苷酸、寡核苷、寡核苷酸類似物、寡核苷酸模擬物、反義化合物、反義寡核苷酸和siRNA。寡聚化合物可以與靶核酸“反義”，意指能夠通過氫鍵合與靶核酸經(jīng)受雜交。在某些實(shí)施方案中，反義化合物具有這樣的核堿基序列，當(dāng)其以5'至3'方向書寫時(shí)包含其所靶向的靶核酸的靶區(qū)段的反向補(bǔ)體序列。在某些此類實(shí)施方案中，反義寡核苷酸具有這樣的核堿基序列，當(dāng)其以5'至3'方向書寫時(shí)包含其所靶向的靶核酸的靶區(qū)段的反向補(bǔ)體序列。在某些實(shí)施方案中，靶向于ANGPTL3核酸的反義化合物的長(zhǎng)度為10至30個(gè)核苷酸。換句話說，反義化合物為10至30個(gè)連接核堿基。在其它實(shí)施方案中，反義化合物包含由8至80、10至80、12至50、15至30、18至24、19至22個(gè)或20個(gè)連接核堿基組成的經(jīng)修飾的寡核苷酸。在某些此類實(shí)施方案中，反義化合物包含經(jīng)修飾的寡核苷酸，所述經(jīng)修飾的寡核苷酸由長(zhǎng)度為8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79或80個(gè)連接核堿基、或由上述值中的任何兩個(gè)所定義的范圍組成。在某些實(shí)施方案中，反義化合物包含縮短的或截短的經(jīng)修飾的寡核苷酸。縮短的或截短的經(jīng)修飾的寡核苷酸可具有從5'端(5’截短)、或可選地從3'端(3’截短)缺失的單一核苷?？s短的或截短的寡核苷酸可具有兩個(gè)或更多個(gè)從5'端缺失的核苷、或可選地可具有兩個(gè)或更多個(gè)從3'端缺失的核苷?？蛇x地，缺失的核苷可遍及經(jīng)修飾的寡核苷酸分散，例如在具有一個(gè)或多個(gè)從5'端缺失的核苷和一個(gè)或多個(gè)從3'端缺失的核苷的反義化合物中。當(dāng)單個(gè)額外的核苷存在于延長(zhǎng)的寡核苷酸中時(shí)，額外的核苷可位于寡核苷酸的5’、3'端或中央部分。當(dāng)存在兩個(gè)或或更多個(gè)額外的核苷時(shí)，添加的核苷可彼此相鄰，例如在具有兩個(gè)添加至寡核苷酸的5'端(5’添加)或可選地至3'端(3’添加)或中央部分的核苷的寡核苷酸中?？蛇x地，所添加的核苷可遍及反義化合物分散，例如在具有一個(gè)或多個(gè)添加至5'端的核苷，一個(gè)或多個(gè)添加至3'端的核苷和/或一個(gè)或多個(gè)添加中央部分的核苷的寡核苷酸中?？赡茉黾踊驕p少反義化合物例如反義寡核苷酸的長(zhǎng)度，和/或可能引入錯(cuò)配堿基而消除活性。例如，在Woolf等人(Proc.Natl.Acad.Sci.USA89:7305-7309，1992)中，測(cè)試長(zhǎng)度為13-25個(gè)核堿基的一系列反義寡核苷酸誘導(dǎo)靶RNA在卵母細(xì)胞注射模型中的切割的能力。在鄰近反義寡核苷酸的末端處具有8或11個(gè)錯(cuò)配堿基的長(zhǎng)度為25個(gè)核堿基的反義寡核苷酸能夠指導(dǎo)靶mRNA的特異性切割，盡管達(dá)到比不含錯(cuò)配的反義寡核苷酸小的程度。同樣地，使用13個(gè)核堿基反義寡核苷酸(包括具有1或3個(gè)錯(cuò)配的那些)實(shí)現(xiàn)靶特異性切割。Gautschi等人(J.Natl.CancerInst.93:463-471，2001年3月)證明了與bcl-2mRNA具有100％互補(bǔ)性并且具有與bcl-xLmRNA的3個(gè)錯(cuò)配的寡核苷酸減少在體外和體內(nèi)表達(dá)bcl-2和bcl-xL兩者的能力。而且，該寡核苷酸在體內(nèi)證明了有效的抗-腫瘤活性。Maher和Dolnick(Nuc.Acid.Res.16:3341-3358，1988)分別測(cè)試了一系列串聯(lián)14個(gè)核堿基反義寡核苷酸以及由2個(gè)或3個(gè)串聯(lián)反義寡核苷酸的序列組成的28和42核堿基反義寡核苷酸阻止人DHFR在兔網(wǎng)狀細(xì)胞測(cè)定中的翻譯的能力。三個(gè)14核堿基反義寡核苷酸中的每一個(gè)單獨(dú)地能夠抑制翻譯，盡管以比28或42核堿基反義寡核苷酸更適度的水平抑制翻譯。反義化合物基序在某些實(shí)施方案中，靶向于ANGPTL3核酸的反義化合物具有排列在模型或基序中的經(jīng)化學(xué)修飾的亞單位以賦予反義化合物性質(zhì)例如增強(qiáng)的抑制活性、增加的對(duì)靶核酸的結(jié)合親和力或體內(nèi)核酸酶對(duì)降解的抵抗。嵌合反義化合物通常包含至少一個(gè)經(jīng)修飾的區(qū)域以賦予增加的對(duì)核酸酶降解的抵抗、增加在細(xì)胞攝取、增加的對(duì)靶核酸的結(jié)合親和力和/或增加的抑制活性。嵌合反義化合物的第二區(qū)域可任選地用作細(xì)胞內(nèi)切核酸酶RNA酶H的底物，其切割RNA:DNA雙鏈體的RNA鏈。具有缺口基體基序的反義化合物被認(rèn)為是嵌合反義化合物。在缺口基體中，具有多個(gè)支持RNAeH切割的核苷酸的內(nèi)部區(qū)域位于具有在化學(xué)上不同于內(nèi)部區(qū)域的核苷的多個(gè)核苷酸的外部區(qū)域之間。在具有缺口基體基序的反義寡核苷酸的情況下，缺口區(qū)段通常用作內(nèi)切核酸酶切割的底物，盡管翼區(qū)段包含經(jīng)修飾的核苷。在某些實(shí)施方案中，缺口基體的區(qū)域通過包含每個(gè)不同區(qū)域的糖部分類型來區(qū)分。用于區(qū)分缺口基體的區(qū)域的糖部分類型可在一些實(shí)施方案中包括β-D-核糖核苷、β-D-脫氧核糖核苷、2'-修飾的核苷(此類2’-修飾的核苷此外還可包括2’-MOE和2’-O-CH3)和經(jīng)雙環(huán)糖修飾的核苷(此類經(jīng)雙環(huán)糖修飾的核苷可包括具有4’-(CH2)n-O-2’橋的那些，其中n＝1或n＝2)。優(yōu)選地，每個(gè)不同區(qū)域包含一致的糖部分。翼-缺口-翼基序常被稱為“X-Y-Z”，其中“X”表示5’翼區(qū)域的長(zhǎng)度，“Y”表示缺口區(qū)域的長(zhǎng)度，以及“Z”表示3’翼區(qū)域的長(zhǎng)度。如本文所用的，稱為“X-Y-Z”的缺口基體具有這樣的構(gòu)型以使缺口區(qū)段的位置與5’翼區(qū)段與3'翼區(qū)段中的每個(gè)直接相鄰。因此，沒有插入核苷酸存在于5’翼區(qū)段與缺口區(qū)段、或缺口區(qū)段與3’翼區(qū)段之間。本文描述的任何反義化合物可具有缺口基體基序。在一些實(shí)施方案中，X和Z相同，在其它實(shí)施方案中，它們是不同的。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，Y為8至15個(gè)核苷酸。X、Y或Z可以是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30個(gè)或更多個(gè)核苷酸中的任一個(gè)。因此，缺口基體包括但不限于，例如5-10-5、4-8-4、4-12-3、4-12-4、3-14-3、2-13-5、2-16-2、1-18-1、3-10-3、2-10-2、1-10-1、2-8-2、6-8-6、5-8-5、1-8-1、2-6-2、6-8-6、5-8-5、1-8-1、2-6-2、2-13-2、1-8-2、2-8-3、3-10-2、1-18-2或2-18-2。在某些實(shí)施方案中，作為“翼基體(wingmer)”基序的反義化合物具有翼-缺口或缺口-翼構(gòu)型，即本文對(duì)于缺口基體構(gòu)型所述的X-Y或Y-Z構(gòu)型。因此，翼基體構(gòu)型包括但不限于，例如5-10、8-4、4-12、12-4、3-14、16-2、18-1、10-3、2-10、1-10、8-2、2-13或5-13。在某些實(shí)施方案中，靶向于ANGPTL3核酸的反義化合物具有5-10-5缺口基體基序。在某些實(shí)施方案中，靶向于ANGPTL3核酸的反義化合物具有缺口加寬的基序。靶核酸、靶區(qū)域和核苷酸序列編碼ANGPTL3的核苷酸序列包括但不限于以下：如GenBank登記號(hào)BG400407.1所列的人序列(以SEQIDNO：1并入本文)、GenBank登記號(hào)BG562555.1(以SEQIDNO：2并入本文)、GenBank登記號(hào)BG562798.1(以SEQIDNO：3并入本文)、GenBank登記號(hào)NM_014495.1(以SEQIDNO：4并入本文)、GenBank登記號(hào)NT_032977.5核苷酸15511702至15521082(以SEQIDNO：5并入本文)、GenBank登記號(hào)AF162224.1(以SEQIDNO：6并入本文)、GenBank登記號(hào)AI195524.1(以SEQIDNO：7并入本文)和GenBank登記號(hào)BB717501.1(以SEQIDNO：8并入本文)。應(yīng)理解，本文所含的實(shí)施例中每個(gè)SEQIDNO所列的序列與糖部分、核苷間鍵合或核堿基的任何修飾無關(guān)。照這樣，由SEQIDNO定義的反義化合物可獨(dú)立地包含糖部分、核苷間鍵合或核堿基的一或多個(gè)修飾。由Isis號(hào)(IsisNo)所述的反義化合物指示核堿基序列和基序的組合。在某些實(shí)施方案中，靶區(qū)域是靶核酸的結(jié)構(gòu)上限定的區(qū)域。例如，靶區(qū)域可包含3’UTR、5’UTR、外顯子、內(nèi)含子、外顯子/內(nèi)含子接頭、編碼區(qū)、翻譯起始區(qū)、翻譯終止區(qū)或其它定義的核酸區(qū)域。ANGPTL3的結(jié)構(gòu)上定義的區(qū)域可通過序列數(shù)據(jù)庫(kù)例如NCBI的登記號(hào)獲得并且此類信息通過引用并入本文。在某些實(shí)施方案中，靶區(qū)域可包含靶區(qū)域內(nèi)的一個(gè)靶區(qū)段的5’靶位點(diǎn)的序列至靶區(qū)域內(nèi)的另一靶區(qū)段的3’靶位點(diǎn)。在某些實(shí)施方案中，“靶區(qū)段”是較小的、核酸內(nèi)的靶區(qū)域的亞部分。例如，靶區(qū)段可以是一個(gè)或多個(gè)反義化合物所靶向的靶核酸的核苷酸的序列?！?’靶位點(diǎn)”是指靶區(qū)段的5’最末端核苷酸。“3’靶位點(diǎn)”是指靶區(qū)段的3’最末端核苷酸。靶向包括確定反義化合物與其雜交以使所需效應(yīng)發(fā)生的至少一個(gè)靶區(qū)段。在某些實(shí)施方案中，所需效應(yīng)是mRN靶核酸水平減少。在某些實(shí)施方案中，所需效應(yīng)是通過靶核酸或與靶核酸相關(guān)的表型改變編碼的蛋白的水平的降低。靶區(qū)域可包含一個(gè)或多個(gè)靶區(qū)段。靶區(qū)域內(nèi)的多個(gè)靶區(qū)段可以重疊?？蛇x地，它們可以是非重疊的。在某些實(shí)施方案中，靶區(qū)域內(nèi)的靶區(qū)段被最多約300個(gè)核苷酸間隔。在某些實(shí)施方案中，靶區(qū)域內(nèi)的靶區(qū)段被多個(gè)核苷酸(為、約為、最多、最多為靶核酸上的250、200、150、100、90、80、70、60、50、40、30、20或10個(gè)核苷酸)間隔，或?yàn)橛扇魏蝺蓚€(gè)前述值定義的范圍。在某些實(shí)施方案中，靶區(qū)域內(nèi)的靶區(qū)段被靶核酸上的最多或最多約5個(gè)核苷酸間隔。在某些實(shí)施方案中，靶區(qū)段是連續(xù)的?？紤]的是通過具有起始核酸(為本文所列的5’靶位點(diǎn)或3’靶位點(diǎn)的任一個(gè))的范圍定義的靶區(qū)域。可在5’UTR、編碼區(qū)、3’UTR、內(nèi)含子、外顯子或外顯子/內(nèi)含子接頭內(nèi)發(fā)現(xiàn)適合的靶區(qū)段。包含起始密碼子或終止密碼子的靶區(qū)段也是適合的靶區(qū)段。適合的靶區(qū)段可明確地排除某種結(jié)構(gòu)上定義的區(qū)域例如起始密碼子或終止密碼子。適合的靶區(qū)段的確定可包括靶核酸序列與其它序列通過基因組的比較。例如，BLAST算法可用于在不同核酸中鑒定相似性區(qū)域。這種比較可防止可以與序列而不是所選靶核酸(即，非-靶或脫-靶序列)以非特異性方式雜交的反義化合物序列的選擇?？纱嬖诜戳x化合物在活性靶區(qū)域內(nèi)的活性(例如，由靶核酸水平減少百分比所定義的)的變化。在某些實(shí)施方案中，ANGPTL3mRNA水平的減少指示ANGPTL3蛋白表達(dá)的抑制。ANGPTL3蛋白水平的減少也指示靶mRNA表達(dá)的抑制。此外，表型改變例如膽固醇、LDL、甘油三酯或葡萄糖的水平的減少可指示ANGPTL3mRNA和/或蛋白表達(dá)的抑制。雜交在一些實(shí)施方案中，雜交在本文公開的反義化合物與ANGPTL3核酸之間發(fā)生。最為常見的雜交機(jī)理包括核酸分子的互補(bǔ)核堿基之間的氫鍵合(例如，Watson-Crick、Hoogsteen或反向Hoogsteen氫鍵合)。雜交可在不同條件下發(fā)生。嚴(yán)格條件是序列依賴性的并且由待雜交的核酸分子的性質(zhì)和組分決定。確定序列是否可特異性與靶核酸雜交的方法是本領(lǐng)域所熟知的(Sambrooke和Russell，MolecularCloning：ALaboratoryManual，第3版，2001)。在某些實(shí)施方案中，本文提供的反義化合物可與ANGPTL3核酸特異性雜交?；パa(bǔ)性當(dāng)反義化合物的足夠量的核堿基可與靶核酸的相應(yīng)核堿基發(fā)生氫鍵合，反義化合物和靶核酸彼此互補(bǔ)以使所需效應(yīng)發(fā)生(例如，靶核酸例如ANGPTL3核酸的反義抑制)。反義化合物可在ANGPTL3核酸的一個(gè)或多個(gè)區(qū)段上雜交以使插入或相鄰區(qū)段不參與雜交事件(例如，環(huán)結(jié)構(gòu)、錯(cuò)配或發(fā)夾結(jié)構(gòu))。在某些實(shí)施方案中，本文提供的反義化合物或其特定部分與ANGPTL3核酸、靶區(qū)域、靶區(qū)段或其特定部分具有或至少具有70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％。在某些實(shí)施方案中，本文提供的反義化合物或其特定部分與SEQIDNO：1-5的一個(gè)或多個(gè)的序列具有或至少具有70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％。具有靶核酸的反義化合物的互補(bǔ)性百分比可使用常規(guī)方法來測(cè)定。例如，反義化合物的18至20個(gè)核堿基與靶區(qū)域互補(bǔ)并且將由此特異性雜交的反義化合物代表90％互補(bǔ)性。在此實(shí)例中，剩余的非-互補(bǔ)核堿基可與互補(bǔ)核堿基簇生或散開并且不需彼此連續(xù)或與互補(bǔ)核堿基連續(xù)。照這樣，長(zhǎng)度為18個(gè)核堿基的具有4(4)個(gè)非-互補(bǔ)核堿基(其通過完全互補(bǔ)性的兩個(gè)區(qū)域與靶核酸側(cè)翼連接)的反義化合物將與靶核酸具有77.8％全互補(bǔ)性并且因此在本發(fā)明的范圍內(nèi)。反義化合物與靶核酸區(qū)域的互補(bǔ)性百分比可常規(guī)地使用本領(lǐng)域已知的BLAST程序(基礎(chǔ)定點(diǎn)校準(zhǔn)研究工具)和PowerBLAST程序(Altschul等人，J.Mol.Biol.，1990，215，403410；Zhang和Madden，GenomeRes.，1997，7，649656)來測(cè)定。同源性、序列同一性或互補(bǔ)性的百分比可通過例如，Gap程序(Wisconsin序列分析包，Version8forUnix，GeneticsComputerGroup，UniversityResearchPark，MadisonWis.)、利用使用Smith和Waterman的算法(Adv.Appl.Math.，1981，2，482489)的缺省設(shè)定來測(cè)定。在某些實(shí)施方案中，本文提供的反義化合物或或其特定部分與靶核酸、或其特定部分完全互補(bǔ)(即100％互補(bǔ))。例如，反義化合物可與ANGPTL3核酸、或靶區(qū)域、或靶區(qū)段或其靶序列完全互補(bǔ)。如本文所用的，“完全互補(bǔ)”意指反義化合物的每個(gè)核堿基能夠與靶核酸的相應(yīng)核堿基精確堿基配對(duì)。例如，20核堿基反義化合物與400核堿基長(zhǎng)的靶序列完全(100％)互補(bǔ)，只要存在與反義化合物完全互補(bǔ)的靶核酸的相應(yīng)20核堿基部分。提及第一和/或第二核酸的特定部分時(shí)，還可使用完全互補(bǔ)。例如，30核堿基反義化合物的20核堿基部分可與400核堿基長(zhǎng)的靶序列“完全互補(bǔ)”。30核堿基寡核苷酸的20核堿基部分與靶序列“完全互補(bǔ)”，如果靶序列具有相應(yīng)的20核堿基部分，其中每個(gè)核堿基與反義化合物的20核堿基部分互補(bǔ)。同時(shí)，整個(gè)30核堿基反義化合物可與靶序列完全互補(bǔ)，取決于反義化合物的剩余10核堿基是否也與靶序列互補(bǔ)。非-互補(bǔ)核堿基的位置可在反義化合物的5'端或3'端?？蛇x地，非-互補(bǔ)核堿基或核堿基可以在反義化合物的內(nèi)部位置。當(dāng)存在兩個(gè)或更多個(gè)非-互補(bǔ)核堿基時(shí)，它們可以是連續(xù)(即連接)或非連續(xù)的。在一個(gè)實(shí)施方案中，非-互補(bǔ)核堿基位于缺口基體反義寡核苷酸的翼區(qū)段。在某些實(shí)施方案中，長(zhǎng)度為或至多為10、12、13、14、15、16、17、18、19或20個(gè)核堿基的反義化合物包含相對(duì)于與靶核酸例如ANGPTL3核酸或其特定部分的最多4個(gè)、最多3個(gè)、最多2個(gè)或最多1個(gè)非-互補(bǔ)核堿基。在某些實(shí)施方案中，長(zhǎng)度為或至多為10、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30個(gè)核堿基的反義化合物包含相對(duì)于靶核酸例如ANGPTL3核酸或其特定部分的最多6個(gè)、最多5個(gè)、最多4個(gè)、最多3個(gè)、最多2個(gè)或最多1個(gè)非-互補(bǔ)核堿基。本文提供的反義化合物還包括與靶核酸的一部分互補(bǔ)的那些。如本文所用的，“部分”是指在靶核酸的區(qū)域或區(qū)段內(nèi)的確定數(shù)量的連續(xù)(即連接)核堿基?！安糠帧边€可以是指反義化合物中確定數(shù)量的連續(xù)核堿基。在某些實(shí)施方案中，反義化合物與靶區(qū)段的至少8核堿基部分互補(bǔ)。在某些實(shí)施方案中，反義化合物與靶區(qū)段的至少10核堿基部分互補(bǔ)。在某些實(shí)施方案中，與靶區(qū)段的至少15核堿基部分互補(bǔ)。還考慮的是與靶區(qū)段的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多個(gè)核堿基部分、或由這些值中的任何兩個(gè)所定義的范圍互補(bǔ)的反義化合物。同一性本文提供的反義化合物還可與特定核苷酸序列、SEQIDNO或由特定Isis號(hào)所示的的化合物的序列或其部分具有確定的同一性百分比。如本文所用的，反義化合物與本文公開的序列具有同一性，如果其具有相同的核堿基配對(duì)能力。例如，公開的DNA序列中包含替代胸苷的尿嘧啶的RNA將被認(rèn)為與DNA序列具有同一性，因?yàn)槟蜞奏ず托剀諆烧吲c腺嘌呤配對(duì)。還考慮本文所述的反義化合物以及具有與本文提供的反義化合物相關(guān)的非-相同堿基的化合物的縮短的和延長(zhǎng)的形式。非-相同堿基可彼此相鄰或遍及反義化合物分散。根據(jù)具有與其所相比較的序列相關(guān)的相同堿基配對(duì)的堿基數(shù)計(jì)算反義化合物的同一性百分比。在某些實(shí)施方案中，反義化合物或其部分與一個(gè)或多個(gè)反義化合物或SEQIDNO或其本文公開的部分具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性。修飾核苷是堿基-糖組合。核苷的核堿基(也稱為堿基)部分通常為雜環(huán)堿基部分。核苷酸是還包括共價(jià)連接于核苷的糖部分的磷酸基的核苷。對(duì)于那些包括戊呋喃糖基糖的核苷，磷酸基可連接于糖的2'、3'或5'羥基部分。寡核苷酸通過相鄰核苷彼此的共價(jià)鍵合而形成，以形成線性聚合寡核苷酸。在寡核苷酸結(jié)構(gòu)內(nèi)，磷酸基通常被稱為形成寡核苷酸的核苷間鍵合。對(duì)反義化合物的修飾包括對(duì)核苷間鍵合、糖部分或核堿基的取代或改變。因?yàn)樗栊再|(zhì)例如，例如增加的細(xì)胞攝取、增強(qiáng)的對(duì)核酸靶的親和力以及增加的在核酸酶存在下的穩(wěn)定性、或增加的抑制活性，與天然形式相比，通常優(yōu)選經(jīng)修飾的反義化合物。還可以比較經(jīng)化學(xué)修飾的核苷以增加縮短的或截短的反義寡核苷酸對(duì)于其靶核酸的結(jié)合親和力。因此，通?？捎镁哂写祟惤?jīng)化學(xué)修飾的核苷的較短的反義化合物獲得類似的結(jié)果。經(jīng)修飾的核苷間鍵合RNA和DNA的天然存在核苷間鍵合是3'至5'磷酸二酯鍵合。因?yàn)樗璧男再|(zhì)例如，增加的細(xì)胞攝取、增強(qiáng)的對(duì)靶核酸的親和力以及增加的在核酸酶存在下的穩(wěn)定性，與具有天然存在核苷間鍵合的反義化合物相比，通常選擇具有一個(gè)或多個(gè)修飾的即非-天然存在的核苷間鍵合的反義化合物。寡核苷酸具有經(jīng)修飾的核苷間鍵合，包括保留磷原子的核苷間鍵合以及不具有磷原子的的核苷間鍵合。代表性含磷核苷間鍵合包括但不限于，磷酸二酯、磷酸三酯、甲基膦酸酯、氨基磷酸酯、和硫代磷酸酯。制備含磷和非-含磷鍵合的方法是熟知的。在某些實(shí)施方案中，靶向于ANGPTL3核酸的反義化合物包含一個(gè)或多個(gè)經(jīng)修飾的核苷間鍵合。在某些實(shí)施方案中，經(jīng)修飾的核苷間鍵合是硫代磷酸酯鍵合。在某些實(shí)施方案中，反義化合物的每個(gè)核苷間鍵合是硫代磷酸酯核苷間鍵合。經(jīng)修飾的糖部分反義化合物可任選地包含一個(gè)或多個(gè)核苷，其中糖基團(tuán)已被修飾。此類經(jīng)糖修飾的核苷可賦予反義化合物增強(qiáng)的核酸酶穩(wěn)定性、增加的結(jié)合親和力或一些其它有益的生物學(xué)性質(zhì)。在某些實(shí)施方案中，核苷包含經(jīng)化學(xué)修飾的呋喃核糖環(huán)部分。經(jīng)化學(xué)修飾的呋喃核糖環(huán)的實(shí)例包括但不限于添加取代基基團(tuán)(包括5'和2'取代基基團(tuán)、橋接非孿位環(huán)原子以形成雙環(huán)核酸(BNA)、用S、N(R)或C(R1)(R)2(R＝H、C1-C12烷基或保護(hù)基團(tuán))替代核糖基環(huán)氧原子及其組合。經(jīng)化學(xué)修飾的糖的實(shí)例包括2'-F-5'-甲基取代核苷(參見，于2008年8月21日公布的PCT國(guó)際申請(qǐng)WO2008/101157，對(duì)于其它公開的5'、2'-雙取代的核苷)或用S替代核糖基環(huán)氧原子并且在2'-位進(jìn)一步取代(參見，公布的U.S.專利申請(qǐng)US20050130923，于2005年6月16日公布)或可選地5'-取代BNA(參見，于2007年11月22日公布的PCT國(guó)際申請(qǐng)WO2007/134181，其中LNA被例如5'-甲基或5'-乙烯基基團(tuán)取代)。具有經(jīng)修飾的糖部分的核苷的實(shí)例包括不但不限于，包含5'-乙烯基、5'-甲基(R或S)、4'-S、2'-F、2'-OCH3、和2'-O(CH2)2OCH3取代基基團(tuán)的核苷。2’位的取代基還可以選自烷基、氨基、疊氮基、硫代、O-烷基、O-C1-C10烷基、OCF3、O(CH2)2SCH3、O(CH2)2-O-N(Rm)(Rn)和O-CH2-C(＝O)-N(Rm)(Rn)，其中每個(gè)Rm和Rn獨(dú)立地是H或取代的或未取代的C1-C10烷基。雙環(huán)核酸(BNA)的實(shí)例包括不但不限于，包含4'和2'核糖基環(huán)原子之間的橋的核苷。在某些實(shí)施方案中，本文提供了包括一個(gè)或多個(gè)BNA核苷的反義化合物，其中橋包含下式之一：4'-(CH2)-O-2'(LNA)；4'-(CH2)-S-2'；4’-(CH2)2-O-2’(ENA)；4’-C(CH3)2-O-2’(參見PCT/US2008/068922)；4’-CH(CH3)-O-2’和4’-CH(CH2OCH3)-O-2’(參見U.S.專利7,399,845，于2008年7月15日授權(quán))；4’-CH2-N(OCH3)-2’(參見PCT/US2008/064591)；4’-CH2-O-N(CH3)-2’(參見公布的U.S.專利申請(qǐng)US2004-0171570，于2004年9月2日公布)；4’-CH2-N(R)-O-2’(參見U.S.專利7,427,672，于2008年9月23日授權(quán))；4’-CH2-CH(參見Chattopadhyaya等人，J.Org.Chem，2009，74，118-134)(CH3)-2’和4’-CH2-C(＝CH2)-2’(參見PCT/US2008/066154)；并且其中R獨(dú)立地是H、C1-C12烷基、或保護(hù)基團(tuán)。前述BNA每一個(gè)包括各種立體化學(xué)糖構(gòu)型，包括例如α-L-呋喃核糖和β-D-呋喃核糖(參見PCT國(guó)際申請(qǐng)PCT/DK98/00393，于1999年3月25日以WO99/14226公布)。先前，α-L-亞甲基氧基(4’-CH2-O-2’)BNA's也已被并入顯示反義活性的反義寡核苷酸中(Frieden等人，NucleicacidsResearch，2003，21，6365-6372)。涉及雙環(huán)核苷的更多報(bào)道可發(fā)現(xiàn)于公布的文獻(xiàn)(參見例如：Srivastava等人，J.Am.Chem.Soc.，2007，129，8362-8379；U.S.專利No.7,053,207；6,268,490；6,770,748；6,794,499；7,034,133；和6,525,191；Elayadi等人，Curr.OpinionInvens.Drugs，2001，2，558-561；Braasch等人，Chem.Biol.，2001，8，1-7；和Orum等人，Curr.OpinionMol.Ther.，2001，3，239-243；和U.S.6,670,461；國(guó)際申請(qǐng)WO2004/106356；WO94/14226；WO2005/021570；U.S.專利申請(qǐng)No.US2004-0171570；US2007-0287831；US2008-0039618；U.S.專利No.7,399,845；U.S.專利序列No.12/129,154；60/989,574；61/026,995；61/026,998；61/056,564；61/086,231；61/097,787；61/099-,844；PCT國(guó)際申請(qǐng)No.PCT/US2008/064591；PCT/US2008/066154；PCT/US2008/068922；和公布的PCT國(guó)際申請(qǐng)WO2007/134181)。在某些實(shí)施方案中，BNA核苷的雙環(huán)糖部分包括但不限于，在戊呋喃糖基糖部分的4'位與2’位之間具有至少一個(gè)橋的化合物，其中此類橋獨(dú)立地包含1或2至4個(gè)獨(dú)立地選自以下的連接基團(tuán)：-[C(Ra)(Rb)]n-、-C(Ra)＝C(Rb)-、-C(Ra)＝N-、-C(＝O)-、-C(＝NRa)-、-C(＝S)-、-O-、-Si(Ra)2-、-S(＝O)x-和-N(Ra)-；其中：x是0、1或2；n是1、2、3或4；Ra和Rb各自獨(dú)立地是H、保護(hù)基團(tuán)、羥基、C1-C12烷基、取代的C1-C12烷基、C2-C12烯基、取代的C2-C12烯基、C2-C12炔基、取代的C2-C12炔基、C5-C20芳基、取代的C5-C20芳基、雜環(huán)自由基、取代的雜環(huán)自由基、雜芳基、取代的雜芳基、C5-C7脂環(huán)族自由基、取代的C5-C7脂環(huán)族自由基、鹵素、OJ1、NJ1J2、SJ1、N3、COOJ1、?；?C(＝O)-H)、取代的?；?、CN、磺?；?S(＝O)2-J1)或磺酰氧基(S(＝O)-J1)；并且J1和J2各自獨(dú)立地是H、C1-C12烷基、取代的C1-C12烷基、C2-C12烯基、取代的C2-C12烯基、C2-C12炔基、取代的C2-C12炔基、C5-C20芳基、取代的C5-C20芳基、?；?C(＝O)-H)、取代的?；㈦s環(huán)自由基、取代的雜環(huán)自由基、C1-C12氨基烷基、取代的C1-C12氨基烷基或保護(hù)基團(tuán)。在某些實(shí)施方案中，雙環(huán)糖部分的橋是-[C(Ra)(Rb)]n-、-[C(Ra)(Rb)]n-O-、-C(RaRb)-N(R)-O-或–C(RaRb)-O-N(R)-。在某些實(shí)施方案中，橋是4'-CH2-2'、4'-(CH2)2-2'、4'-(CH2)3-2'、4'-CH2-O-2'、4'-(CH2)2-O-2'、4'-CH2-O-N(R)-2'和4'-CH2-N(R)-O-2'-，其中每一個(gè)R獨(dú)立地是H、保護(hù)基團(tuán)或C1-C12烷基。在某些實(shí)施方案中，雙環(huán)核苷包括但不限于，(A)α-L-亞甲基氧基(4’-CH2-O-2’)BNA、(B)β-D-亞甲基氧基(4’-CH2-O-2’)BNA、(C)亞乙基氧基(4’-(CH2)2-O-2’)BNA、(D)氨基氧基(4’-CH2-O-N(R)-2’)BNA、(E)氧基氨基(4’-CH2-N(R)-O-2’)BNA和(F)甲基(亞甲基氧基)(4’-CH(CH3)-O-2’)BNA、(G)亞甲基-硫基(4’-CH2-S-2’)BNA、(H)亞甲基-氨基(4’-CH2-N(R)-2’)BNA、(I)甲基碳環(huán)(4’-CH2-CH(CH3)-2’)BNA和(J)亞丙基碳環(huán)(4’-(CH2)3-2’)BNA，如下所述。其中Bx是堿基部分且R獨(dú)立地是H、保護(hù)基團(tuán)或C1-C12烷基。在某些實(shí)施方案中，具有式I的雙環(huán)核苷：其中：Bx是雜環(huán)堿基部分；-Qa-Qb-Qc-是-CH2-N(Rc)-CH2-、-C(＝O)-N(Rc)-CH2-、-CH2-O-N(Rc)-、-CH2-N(Rc)-O-或-N(Rc)-O-CH2；Rc是C1-C12烷基或氨基保護(hù)基團(tuán)；并且Ta和Tb各自獨(dú)立地是H、羥基保護(hù)基團(tuán)、綴合物基團(tuán)、反應(yīng)性磷基團(tuán)、磷部分、或支持介質(zhì)的共價(jià)連接。在某些實(shí)施方案中，具有式II的雙環(huán)核苷：其中：Bx是雜環(huán)堿基部分；Ta和Tb各自獨(dú)立地是H、羥基保護(hù)基團(tuán)、綴合物基團(tuán)、反應(yīng)性磷基團(tuán)、磷部分、或支持介質(zhì)的共價(jià)連接；Za是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、取代的C1-C6烷基、取代的C2-C6烯基、取代的C2-C6炔基、?；⑷〈孽；⑷〈孽０?、巰基、或取代的硫基。在一個(gè)實(shí)施方案中，取代的基團(tuán)中的每一個(gè)獨(dú)立地被選自以下的取代基基團(tuán)單取代或多取代：鹵素、氧代、羥基、OJc、NJcJd、SJc、N3、OC(＝X)Jc和NJeC(＝X)NJcJd，其中每一個(gè)Jc、Jd和Je獨(dú)立地是H、C1-C6烷基或取代的C1-C6烷基且X是O或NJc。在某些實(shí)施方案中，具有式III的雙環(huán)核苷：其中：Bx是雜環(huán)堿基部分；Ta和Tb各自獨(dú)立地是H、羥基保護(hù)基團(tuán)、綴合物基團(tuán)、反應(yīng)性磷基團(tuán)、磷部分、或支持介質(zhì)的共價(jià)連接；Zb是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、取代的C1-C6烷基、取代的C2-C6烯基、取代的C2-C6炔基、或取代的酰基(C(＝O)-)。在某些實(shí)施方案中，具有式IV的雙環(huán)核苷：其中：Bx是雜環(huán)堿基部分；Ta和Tb各自獨(dú)立地是H、羥基保護(hù)基團(tuán)、綴合物基團(tuán)、反應(yīng)性磷基團(tuán)、磷部分、或支持介質(zhì)的共價(jià)連接；Rd是C1-C6烷基、取代的C1-C6烷基、C2-C6烯基、取代的C2-C6烯基、C2-C6炔基、或取代的C2-C6炔基；qa、qb、qc和qd各自獨(dú)立地是H、鹵素、C1-C6烷基、取代的C1-C6烷基、C2-C6烯基、取代的C2-C6烯基、C2-C6炔基、或取代的C2-C6炔基、C1-C6烷氧基、取代的C1-C6烷氧基、?；?、取代的?；?、C1-C6氨基烷基、或取代的C1-C6氨基烷基；在某些實(shí)施方案中，具有式V的雙環(huán)核苷：其中：Bx是雜環(huán)堿基部分；Ta和Tb各自獨(dú)立地是H、羥基保護(hù)基團(tuán)、綴合物基團(tuán)、反應(yīng)性磷基團(tuán)、磷部分、或支持介質(zhì)的共價(jià)連接；qa、qb、qe和qf各自獨(dú)立地是氫、鹵素、C1-C12烷基、取代的C1-C12烷基、C2-C12烯基、取代的C2-C12烯基、C2-C12炔基、取代的C2-C12炔基、C1-C12烷氧基、取代的C1-C12烷氧基、OJj、SJj、SOJj、SO2Jj、NJjJk、N3、CN、C(＝O)OJj、C(＝O)NJjJk、C(＝O)Jj、O-C(＝O)NJjJk、N(H)C(＝NH)NJjJk、N(H)C(＝O)NJjJk或N(H)C(＝S)NJjJk；或qe和qf一起＝C(qg)(qh)；qg和qh各自獨(dú)立地是H、鹵素、C1-C12烷基、或取代的C1-C12烷基。亞甲基氧基(4’-CH2-O-2’)BNA單體腺嘌呤、胞嘧啶、鳥嘌呤、5-甲基-胞嘧啶、胸腺嘧啶和尿嘧啶的合成和制備與其寡聚化，以及核酸識(shí)別性質(zhì)已被描述(Koshkin等人，Tetrahedron，1998，54，3607-3630)。BNA及其制備也描述于WO98/39352和WO99/14226中。亞甲基氧基(4’-CH2-O-2’)BNA和2'-硫代-BNA的類似物已被制備(Kumar等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.，1998，8，2219-2222)。包含作為核酸聚合酶的底物的寡脫氧核糖核苷酸雙鏈體的鎖定核苷類似物的制備還已被描述(Wengel等人，WO99/14226)。而且，2'-氨基-BNA(一種新型的構(gòu)象上受限的高親和力寡核苷酸類似物)的合成已在本領(lǐng)域中被描述(Singh等人，J.Org.Chem.，1998，63，10035-10039)。此外，2'-氨基-和2'-甲基氨基-BNA's已被制備并且其具有互補(bǔ)RNA和DNA鏈的雙鏈體的熱穩(wěn)定性已被先前報(bào)道。在某些實(shí)施方案中，具有式VI的雙環(huán)核苷：其中：Bx是雜環(huán)堿基部分；Ta和Tb各自獨(dú)立地是H、羥基保護(hù)基團(tuán)、綴合物基團(tuán)、反應(yīng)性磷基團(tuán)、磷部分、或支持介質(zhì)的共價(jià)連接；qi、qj、qk和ql各自獨(dú)立地是H、鹵素、C1-C12烷基、取代的C1-C12烷基、C2-C12烯基、取代的C2-C12烯基、C2-C12炔基、取代的C2-C12炔基、C1-C12烷氧基、取代的C1-C12烷氧基、OJj、SJj、SOJj、SO2Jj、NJjJk，N3、CN、C(＝O)OJj、C(＝O)NJjJk、C(＝O)Jj、O-C(＝O)NJjJk、N(H)C(＝NH)NJjJk、N(H)C(＝O)NJjJk或N(H)C(＝S)NJjJk；并且qi和qj或ql和qk一起＝C(qg)(qh)，其中qg和qh各自獨(dú)立地是H、鹵素、C1-C12烷基、或取代的C1-C12烷基。一種具有4'-(CH2)3-2'橋和烯基類似物、橋4'-CH＝CH-CH2-2'的碳環(huán)雙環(huán)核苷已被描述(Freier等人，NucleicacidsResearch，1997，25(22)，4429-4443和Albaek等人，J.Org.Chem.，2006，71，7731-7740)。碳環(huán)雙環(huán)核苷的合成和制備及其寡聚化以及生化研究已被描述(Srivastava等人，J.Am.Chem.Soc.2007，129(26)，8362-8379)。在某些實(shí)施方案中，核苷通過用糖代用品替代核糖基環(huán)來修飾。此類修飾包括但不限于用替代環(huán)系統(tǒng)(有時(shí)稱為DNA類似物)例如嗎啉代環(huán)、環(huán)己烯基環(huán)、環(huán)己基環(huán)或四氫吡喃基環(huán)例如具有下式之一的環(huán)系統(tǒng)替代核糖基環(huán)：很多其它二環(huán)和三環(huán)替代環(huán)系統(tǒng)也是本領(lǐng)域已知的，可用于修飾核苷以并入反義化合物中(參見例如綜述文章：Leumann，ChristianJ.，Bioorganic&MedicinalChemistry，2002，10，841-854)。此類環(huán)系統(tǒng)可經(jīng)受各種額外取代以增強(qiáng)活性。參見例如具有式VII的化合物：其中對(duì)于式VII的所述至少一個(gè)四氫吡喃核苷類似物中的每一個(gè)獨(dú)立地：Bx是雜環(huán)堿基部分；Ta和Tb各自獨(dú)立地是連接四氫吡喃核苷類似物與反義化合物的核苷間連接基團(tuán)或Ta和Tb之一是連接四氫吡喃核苷類似物與反義化合物的核苷間連接基團(tuán)并且Ta和Tb中的另一個(gè)是H、羥基保護(hù)基團(tuán)、連接的綴合物基團(tuán)、或5'或3'-末端基團(tuán)；q1、q2、q3、q4、q5、q6和q7各自獨(dú)立地是H、C1-C6烷基、取代的C1-C6烷基、C2-C6烯基、取代的C2-C6烯基、C2-C6炔基或取代的C2-C6炔基；并且R1和R2中的每一個(gè)選自氫、羥基、鹵素、取代的或未取代的烷氧基、NJ1J2、SJ1，N3、OC(＝X)J1、OC(＝X)NJ1J2、NJ3C(＝X)NJ1J2和CN，其中X是O、S或NJ1，并且J1、J2和J3中每一個(gè)獨(dú)立地是H或C1-C6烷基。在某些實(shí)施方案中，提供了式VII的經(jīng)修飾的THP核苷，其中q1、q2、q3、q4、q5、q6和q7各自是H(M)。在某些實(shí)施方案中，q1、q2、q3、q4、q5、q6和q7中的至少一個(gè)不是H。在某些實(shí)施方案中，q1、q2、q3、q4、q5、q6和q7中的至少一個(gè)是甲基。在某些實(shí)施方案中，提供了式VII的THP核苷，其中R1和R2之一是F(K)。在某些實(shí)施方案中，提供了式VII的THP核苷，其中R1和R2之一是甲氧基乙氧基。在某些實(shí)施方案中，R1是氟且R2是H；R1是H且R2是氟；R1是甲氧基且R2是H，且R1是H且R2是甲氧基乙氧基。用于制備經(jīng)修飾的糖的方法是對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是熟知的。在具有經(jīng)修飾的糖部分的核苷酸中，維持核堿基部分(天然的、經(jīng)修飾的或其組合)以與適當(dāng)?shù)暮怂岚须s交。在某些實(shí)施方案中，靶向于ANGPTL3核酸的反義化合物包含一個(gè)或多個(gè)具有經(jīng)修飾的糖部分的核苷酸。在某些實(shí)施方案中，經(jīng)修飾的糖部分是2’-MOE。在某些實(shí)施方案中，布置2’-MOE修飾的核苷酸在缺口基體基序中。在某些實(shí)施方案中，經(jīng)修飾的糖部分是具有(4’-CH(CH3)-O-2’)橋接基團(tuán)的雙環(huán)核苷。在某些實(shí)施方案中，布置經(jīng)(4’-CH(CH3)-O-2’)修飾的核苷酸遍及缺口基體基序的翼。用于制備經(jīng)修飾的糖的方法是對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是熟知的。在具有經(jīng)修飾的糖部分的核苷酸中，維持核堿基部分(天然的、經(jīng)修飾的或其組合)以與適當(dāng)?shù)暮怂岚须s交。在某些實(shí)施方案中，靶向于ANGPTL3核酸的反義化合物包含一個(gè)或多個(gè)具有經(jīng)修飾的糖部分的核苷酸。在某些實(shí)施方案中，經(jīng)修飾的糖部分是2’-MOE。在某些實(shí)施方案中，布置2’-MOE修飾的核苷酸在缺口基體基序中。經(jīng)修飾的核堿基核堿基(或堿基)修飾或取代結(jié)構(gòu)上可區(qū)別于天然存在的或合成的未經(jīng)修飾的核堿基，但功能上可與其互換。天然的和經(jīng)修飾的核堿基均能夠參與氫鍵合。此類核堿基修飾可賦予反義化合物核酸酶穩(wěn)定性、結(jié)合親和力或一些其它有益的生物學(xué)性質(zhì)。經(jīng)修飾的核堿基包括合成的和天然的核堿基如，例如，5-甲基胞嘧啶(5-me-C)。某些核堿基取代，包括5-甲基胞嘧啶取代，特別可用于增加反義化合物對(duì)靶核酸的結(jié)合親和力。例如，已顯示5-甲基胞嘧啶取代增加核酸雙鏈體穩(wěn)定性0.6-1.2℃(Sanghvi，Y.S.，Crooke，S.T.和Lebleu，B.編，AntisenseResearchandApplications，CRCPress，BocaRaton，1993，pp.276-278)。其它經(jīng)修飾的核堿基包括5-羥基甲基胞嘧啶、黃嘌呤、次黃嘌呤、2-氨基腺嘌呤、腺嘌呤和鳥嘌呤的6-甲基和其它烷基衍生物、腺嘌呤和鳥嘌呤的2-丙基和其它烷基衍生物、2-硫代尿嘧啶、2-硫代胸腺嘧啶和2-硫代胞嘧啶、5-鹵代尿嘧啶和胞嘧啶、5-丙炔基(-C≡C-CH3)尿嘧啶和胞嘧啶以及嘧啶堿基的其它炔基衍生物、6-偶氮尿嘧啶、胞嘧啶和胸腺嘧啶、5-尿嘧啶(假尿嘧啶)、4-硫代尿嘧啶、8-鹵代、8-氨基、8-巰基、8-硫代烷基、8-羥基和其它8-取代的腺嘌呤和鳥嘌呤、5-鹵代(特別是5-溴)、5-三氟甲基和其它5-取代的尿嘧啶和胞嘧啶、7-甲基鳥嘌呤和7-甲基腺嘌呤、2-F-腺嘌呤、2-氨基-腺嘌呤、8-氮雜鳥嘌呤和8-氮雜腺嘌呤、7-去氮鳥嘌呤和7-去氮腺嘌呤和3-去氮鳥嘌呤和3-去氮腺嘌呤。雜環(huán)堿基部分還可以包括其它嘌呤或嘧啶堿基被其它雜環(huán)例如7-去氮-腺嘌呤、7-去氮鳥苷、2-氨基吡啶和2-吡啶酮代替的那些。特別可用于增加反義化合物的結(jié)合親和力的核堿基包括5-取代的嘧啶、6-氮雜嘧啶和N-2、N-6和O-6取代的嘌呤，包括2氨基丙基腺嘌呤、5-丙炔基尿嘧啶和5-丙炔基胞嘧啶。在某些實(shí)施方案中，靶向于ANGPTL3核酸的反義化合物包含一個(gè)或多個(gè)經(jīng)修飾的核堿基。在某些實(shí)施方案中，縮短的或缺口加寬的靶向于ANGPTL3核酸的反義寡核苷酸包含一個(gè)或多個(gè)經(jīng)修飾的核堿基。在某些實(shí)施方案中，經(jīng)修飾的核堿基是5-甲基胞嘧啶。在某些實(shí)施方案中，每個(gè)胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。組合物和用于配制藥物組合物的方法反義寡核苷酸可與藥學(xué)上可接受的活性或惰性物質(zhì)混合以用于制備藥物組合物或制劑。組合物和用于配制藥物組合物的方法取決于多種標(biāo)準(zhǔn)，包括但不限于施用途徑、疾病程度或所施用的劑量。靶向于ANGPTL3核酸的反義化合物可通過將反義化合物與適合的藥學(xué)上可接受的稀釋劑或載體組合來用于藥物組合物。藥學(xué)上可接受的稀釋劑包括磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)。PBS是適用于組合物進(jìn)行胃腸外遞送的稀釋劑。因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，本文所述的方法所用的是包含靶向于ANGPTL3核酸的反義化合物和藥學(xué)上可接受的稀釋劑的藥物組合物。在某些實(shí)施方案中，藥學(xué)上可接受的稀釋劑是PBS。在某些實(shí)施方案中，反義化合物是反義寡核苷酸。包含反義化合物的藥物組合物包含任何藥學(xué)上可接受的鹽、酯或此類酯的鹽、或任何其它寡核苷酸，其在施用于動(dòng)物(包括人)時(shí)，能夠提供(直接或間接)生物學(xué)活性的代謝物或其殘基。因此，例如，本公開涉及反義化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、前藥、此類前藥的藥學(xué)上可接受的鹽、及其它生物等效形式。適合的藥學(xué)上可接受的鹽包括但不限于，鈉鹽和鹽。前藥可包括在反義化合物的一端或兩端并入另外的核苷，其在體內(nèi)通過內(nèi)源核酸酶被切割，以形成活性反義化合物。綴合的反義化合物反義化合物可共價(jià)連接于一個(gè)或多個(gè)部分或綴合物，其增強(qiáng)所得反義寡核苷酸的活性、細(xì)胞分布或細(xì)胞攝取。典型綴合物基團(tuán)包括膽固醇部分和脂質(zhì)部分。另外的綴合物基團(tuán)包括碳水化合物、磷脂、生物素、吩嗪、葉酸鹽、菲啶、蒽醌、吖啶、熒光素、羅丹明、香豆素和染料。反義化合物還可被修飾以具有一個(gè)或多個(gè)通常連接于反義化合物的一端或兩端的穩(wěn)定基團(tuán)，從而增強(qiáng)性質(zhì)例如，例如核酸酶穩(wěn)定性。穩(wěn)定基團(tuán)中包括帽結(jié)構(gòu)。這些末端修飾防止具有末端核酸的反義化合物從外切核酸酶降解，并且可有助于在細(xì)胞內(nèi)遞送和/或定域。帽可存在于5'-末端(5'-帽)或3'-末端(3'-帽)或可存在于兩端。帽結(jié)構(gòu)是本領(lǐng)域所熟知的并且包括例如倒置的脫氧脫堿基帽。更多的3'和5'-穩(wěn)定基團(tuán)(其用于覆蓋反義化合物的一端或兩端的頂部以賦予核酸酶穩(wěn)定性)包括在于2003年1月16日公布的WO03/004602公開的那些。細(xì)胞培養(yǎng)物和反義化合物處理可在多種細(xì)胞類型中體外測(cè)試反義化合物對(duì)ANGPTL3核酸的水平、活性或表達(dá)的效應(yīng)。用于此類分析的細(xì)胞類型可從商業(yè)販?zhǔn)凵?例如AmericanTypeCultureCollection，Manassus，VA；Zen-Bio，Inc.，ResearchTrianglePark，NC；CloneticsCorporation，Walkersville，MD)得到并且細(xì)胞根據(jù)販?zhǔn)凵痰募夹g(shù)說明使用市售可得的試劑(例如InvitrogenLifeTechnologies，Carlsbad，CA)來培養(yǎng)。示例性細(xì)胞類型包括但不限于，HepG2細(xì)胞、Hep3B細(xì)胞、Huh7(肝細(xì)胞癌)細(xì)胞、原代肝細(xì)胞、A549細(xì)胞、GM04281成纖維細(xì)胞和LLC-MK2細(xì)胞。反義寡核苷酸的體外試驗(yàn)本文所述的是用反義寡核苷酸處理細(xì)胞的方法，該反義寡核苷酸可經(jīng)適當(dāng)?shù)匦揎椧杂闷渌戳x化合物處理。一般而言，當(dāng)細(xì)胞在培養(yǎng)中達(dá)到約60-80％匯合時(shí)用反義寡核苷酸處理細(xì)胞。一種通常用于將反義寡核苷酸引入所培養(yǎng)的細(xì)胞中的試劑包括陽(yáng)離子轉(zhuǎn)染試劑(Invitrogen，Carlsbad，CA)。將反義寡核苷酸與在1(Invitrogen，Carlsbad，CA)中混合以實(shí)現(xiàn)反義寡核苷酸的所需最終濃度和濃度，其通常為2至12ug/mL每100nM反義寡核苷酸。另一種通常用于將反義寡核苷酸引入所培養(yǎng)的細(xì)胞中的試劑包括LIPOFECTAMINE(Invitrogen，Carlsbad，CA)。將反義寡核苷酸與LIPOFECTAMINE在1低血清培養(yǎng)基(Invitrogen，Carlsbad，CA)中混合以實(shí)現(xiàn)反義寡核苷酸的所需最終濃度和濃度，其通常為2至12ug/mL每100nM反義寡核苷酸。另一種通常用于將反義寡核苷酸引入所培養(yǎng)的細(xì)胞中的試劑包括(Invitrogen，Carlsbad，CA)。將反義寡核苷酸與在1低血清培養(yǎng)基(Invitrogen，Carlsbad，CA)中混合以實(shí)現(xiàn)反義寡核苷酸的所需濃度和濃度，其通常為2至12ug/mL每100nM反義寡核苷酸。另一種通常用于將反義寡核苷酸引入所培養(yǎng)的細(xì)胞中的試劑包括OligofectamineTM(InvitrogenLifeTechnologies，Carlsbad，CA)。將反義寡核苷酸與OligofectamineTM在Opti-MEMTM-1低血清培養(yǎng)基(InvitrogenLifeTechnologies，Carlsbad，CA)中混合以實(shí)現(xiàn)寡核苷酸的所需濃度，其具有約0.2至0.8μL每100nM的OligofectamineTM：寡核苷酸比。另一種通常用于將反義寡核苷酸引入所培養(yǎng)的細(xì)胞中的試劑包括FuGENE6(RocheDiagnosticsCorp.，Indianapolis，IN)。將反義寡聚物化合物與FuGENE6混合在1mL無血清RPMI中混合以實(shí)現(xiàn)寡核苷酸的所需濃度，其具有1至4μLFuGENE6每100nM的FuGENE6：寡聚化合物比。另一種通常用于將反義寡核苷酸引入所培養(yǎng)的細(xì)胞中的技術(shù)包括電穿孔(Sambrooke和Russell，MolecularCloning：ALaboratoryManual，3rdEd.，2001)。通過常規(guī)方法用反義寡核苷酸處理細(xì)胞。通常在反義寡核苷酸處理16-24小時(shí)收獲細(xì)胞，此時(shí)靶核酸的RNA或蛋白水平通過本領(lǐng)域已知的和本文所述的方法來測(cè)量。一般而言，當(dāng)以多個(gè)復(fù)制進(jìn)行處理時(shí)，該數(shù)據(jù)以復(fù)制處理的平均值呈示。所用的反義寡核苷酸濃度隨細(xì)胞系而變化。測(cè)定特定細(xì)胞系的最佳反義寡核苷酸濃度的方法是本領(lǐng)域所熟知的。當(dāng)用Lipofecti或Cytofectin轉(zhuǎn)染時(shí)，通常以1nM至300nM范圍的濃度使用反義寡核苷酸。當(dāng)利用電穿孔轉(zhuǎn)染時(shí)，以625至20,000nM范圍的較高濃度使用反義寡核苷酸。RNA分離可在總細(xì)胞RNA或poly(A)+mRNA上進(jìn)行RNA分析。RNA分離的方法是本領(lǐng)域所熟知的(Sambrooke和Russell，MolecularCloning：ALaboratoryManual，第3版，2001)。RNA根據(jù)生產(chǎn)廠商的推薦方案，使用本領(lǐng)域所熟知的方法例如使用試劑(Invitrogen，Carlsbad，CA)來制備。抑制靶水平或表達(dá)的分析ANGPTL3核酸的水平或表達(dá)的抑制可用多種本領(lǐng)域已知的方法(Sambrooke和RussellinMolecularCloning.ALaboratoryManual.第3版.2001)來測(cè)定。例如，靶核酸水平可通過例如Northern印跡分析、競(jìng)爭(zhēng)聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)或定量實(shí)時(shí)PCR來定量。RNA分析可在總細(xì)胞RNA或poly(A)+mRNA上進(jìn)行。RNA分離的方法是本領(lǐng)域所熟知的。Northern印跡分析也在本領(lǐng)域中是常規(guī)的。定量實(shí)時(shí)PCR可使用市售可得的ABI7600、7700或7900序列DetectionSystem(可由PE-AppliedBiosystems，F(xiàn)osterCity，CA得到)方便地實(shí)現(xiàn)并且根據(jù)生產(chǎn)廠商的技術(shù)說明來使用。靶RNA水平的定量實(shí)時(shí)PCR分析靶RNA水平的定量可根據(jù)生產(chǎn)廠商的技術(shù)說明通過定量實(shí)時(shí)PCR使用ABI7600、7700或7900序列檢測(cè)系統(tǒng)(PE-AppliedBiosystems，F(xiàn)osterCity，CA)來實(shí)現(xiàn)。定量實(shí)時(shí)PCR的方法是本領(lǐng)域所熟知的。在實(shí)時(shí)PCR前，將分離的RNA經(jīng)受逆轉(zhuǎn)錄酶(RT)反應(yīng)，其產(chǎn)生互補(bǔ)DNA(cDNA)，然后cDNA用作實(shí)時(shí)PCR擴(kuò)增的底物。在相同的樣品孔中相繼進(jìn)行RT和實(shí)時(shí)PCR反應(yīng)。RT和實(shí)時(shí)PCR試劑由Invitrogen(Carlsbad，CA)獲得。RT和實(shí)時(shí)-PCR反應(yīng)通過本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的方法來進(jìn)行。通過實(shí)時(shí)PCR獲得的基因(或RNA)靶數(shù)量可使用表達(dá)恒定的基因(例如親環(huán)蛋白A)的表達(dá)水平，或通過使用(Invitrogen，Inc.Carlsbad，CA)定量總RNA來進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。親環(huán)蛋白A表達(dá)通過實(shí)時(shí)PCR，通過與靶、多路技術(shù)同時(shí)運(yùn)行或單獨(dú)地來定量。總RNA使用RNA定量試劑(Invitrogen，Inc.Carlsbad，CA)來定量。通過進(jìn)行RNA定量的方法教導(dǎo)于Jones，L.J.等人(AnalyticalBiochemistry，1998，265，368-374)中。4000儀器(PEAppliedBiosystems)用于測(cè)量熒光。設(shè)計(jì)探針和引物以與ANGPTL3核酸雜交。用設(shè)計(jì)實(shí)時(shí)PCR探針和引物的方法是本領(lǐng)域所熟知的，并且可包括使用軟件例如PRIMER軟件(AppliedBiosystems，F(xiàn)osterCity，CA)。通過RT、實(shí)時(shí)PCR獲得的基因靶數(shù)量可使用GAPDH(一種表達(dá)恒定的基因)的表達(dá)水平，或通過定量總RNA使用RiboGreenTM(MolecularProbes，Inc.Eugene，OR)來標(biāo)準(zhǔn)化。GAPDH表達(dá)通過RT、實(shí)時(shí)PCR，通過與靶、多路技術(shù)同時(shí)運(yùn)行或單獨(dú)地來定量。總RNA使用RiboGreenTMRNA定量試劑(MolecularProbes，Inc.Eugene，OR)來定量。表2中所示的是用于在本文所述的細(xì)胞類型中測(cè)量GAPDH表達(dá)的引物和探針。GAPDHPCR探針具有共價(jià)連接于5’端的JOE和共價(jià)連接于3’端的TAMRA或MGB，其中JOE是熒光報(bào)道基因染料且TAMRA或MGB是淬滅劑染料。在一些細(xì)胞類型中，從不同物種被設(shè)計(jì)至GAPDH序列的引物和探針用于測(cè)量GAPDH表達(dá)。例如，人GAPDH引物和探針組用于測(cè)量猴源性細(xì)胞和細(xì)胞系中的GAPDH表達(dá)。表2用于實(shí)時(shí)PCR的GAPDH引物和探針靶名稱物種序列描述序列(5'至3')SEQIDNOGAPDH人正向引物CAACGGATTTGGTCGTATTGG15GAPDH人反向引物GGCAACAATATCCACTTTACCAGAGT16GAPDH人探針CGCCTGGTCACCAGGGCTGCT17GAPDH人正向引物GAAGGTGAAGGTCGGAGTC18GAPDH人反向引物GAAGATGGTGATGGGATTTC19GAPDH人探針CAAGCTTCCCGTTCTCAGCC20GAPDH人正向引物GAAGGTGAAGGTCGGAGTC18GAPDH人反向引物GAAGATGGTGATGGGATTTC19GAPDH人探針TGGAATCATATTGGAACATG21GAPDH小鼠正向引物GGCAAATTCAACGGCACAGT22GAPDH小鼠反向引物GGGTCTCGCTCCTGGAAGAT23GAPDH小鼠探針AAGGCCGAGAATGGGAAGCTTGTCATC24GAPDH大鼠正向引物TGTTCTAGAGACAGCCGCATCTT25GAPDH大鼠反向引物CACCGACCTTCACCATCTTGT26GAPDH大鼠探針TTGTGCAGTGCCAGCCTCGTCTCA27設(shè)計(jì)用于實(shí)時(shí)PCR的探針和引物以與靶特異性序列雜交。探針和引物以及它們所雜交的靶核酸序列示于表3中。靶特異性PCR探針具有共價(jià)連接于5’端的FAM和共價(jià)連接于3'端的TAMRA或MGB，其中FAM是熒光染料且TAMRA或MGB是淬滅劑染料。表3用于實(shí)時(shí)PCR的基因靶特異性引物和探針蛋白水平的分析ANGPTL3核酸的反義抑制可通過測(cè)量ANGPTL3蛋白水平來評(píng)估。ANGPTL3的蛋白水平可用多種本領(lǐng)域熟知的方法，例如免疫沉淀、Western印跡分析(免疫印跡)、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)、定量蛋白質(zhì)測(cè)定法、蛋白質(zhì)活性測(cè)定法(例如，半胱天冬酶活性測(cè)定法)、免疫組織化學(xué)、免疫細(xì)胞化學(xué)或熒光激活細(xì)胞分選法(FACS)來評(píng)價(jià)或定量(Sambrooke和Russell，MolecularCloning：ALaboratoryManual，第3版，2001)。針對(duì)靶的抗體可被鑒定且由多種來源例如抗體的MSRS目錄(AerieCorporation，Birmingham，MI)獲得，或可經(jīng)由本領(lǐng)域熟知的常規(guī)單克隆或多克隆抗體產(chǎn)生方法來制備。反義化合物的體內(nèi)試驗(yàn)在動(dòng)物中測(cè)試反義化合物例如反義寡核苷酸以評(píng)估其抑制ANGPTL3表達(dá)并且產(chǎn)生表型改變的能力。試驗(yàn)可在正常動(dòng)物中或在實(shí)驗(yàn)疾病模型中進(jìn)行。對(duì)于給動(dòng)物施用，在藥學(xué)上可接受的稀釋劑例如磷酸鹽緩沖溶液中配制反義寡核苷酸。施用包括胃腸外施用途徑。在用反義寡核苷酸處理的時(shí)段后，從組織中分離RNA并且測(cè)量ANGPTL3核酸表達(dá)的變化。ANGPTL3蛋白水平的變化也被測(cè)量。某些適應(yīng)癥在某些實(shí)施方案中，本文提供的是治療個(gè)體的方法，其包括施用一種或多種本文所述的藥物組合物。在某些實(shí)施方案中，個(gè)體患有代謝疾病和/或心血管疾病。在某些實(shí)施方案中，個(gè)體患有動(dòng)脈粥樣硬化、肝脂肪變性或高脂血癥。因此，本文提供的是用于減輕與代謝疾病或心血管疾病相關(guān)的癥狀的方法。本文還提供的是用于減輕在需要其的受試者中與動(dòng)脈粥樣硬化、肝脂肪變性或高脂血癥相關(guān)的癥狀的方法。在某些實(shí)施方案中，提供的是用于減少與代謝疾病或心血管疾病相關(guān)的癥狀的發(fā)作的速率的方法。在某些實(shí)施方案中，提供的是用于減少與動(dòng)脈粥樣硬化、肝脂肪變性或高脂血癥相關(guān)的癥狀的發(fā)作的速率的方法。在某些實(shí)施方案中，提供的是用于減少與代謝疾病或心血管疾病相關(guān)的癥狀的嚴(yán)重度的方法。在某些實(shí)施方案中，提供的是用于減少與動(dòng)脈粥樣硬化、肝脂肪變性或高脂血癥相關(guān)的癥狀的嚴(yán)重度的方法。在此類實(shí)施方案中，該方法包括給需要其的個(gè)體施用治療有效量的靶向于ANGPTL3核酸的化合物。在某些實(shí)施方案中，靶向于ANGPTL3核酸的反義化合物的施用導(dǎo)致ANGPTL3表達(dá)減少至少約15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或99％，或由這些值的任意兩個(gè)所限定的范圍。在某些實(shí)施方案中，包含靶向于ANGPTL3的反義化合物的藥物組合物可用于制備用于治療罹患或易感于代謝疾病或心血管疾病的患者的藥物。在某些實(shí)施方案中，包含靶向于ANGPTL3的反義化合物的藥物組合物可用于制備用于治療罹患或易感于動(dòng)脈粥樣硬化、肝脂肪變性或高脂血癥的患者的藥物。在某些實(shí)施方案中，本文所述的方法包括施用包含具有本文所述的SEQIDNO：34-182中所述的序列的8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個(gè)連續(xù)核堿基部分的經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物。施用在某些實(shí)施方案中，胃腸外施用本文所述的化合物和組合物。在某些實(shí)施方案中，胃腸外施用是通過輸注。輸注可以是長(zhǎng)期的或連續(xù)的或短時(shí)間的或間歇的。在某些實(shí)施方案中，用泵遞送經(jīng)輸注的藥劑。在某些實(shí)施方案中，胃腸外施用是通過注射。注射可用注射器或泵來遞送。在某些實(shí)施方案中，注射是彈丸注射。在某些實(shí)施方案中，將注射直接施用于組織或器官。某些聯(lián)合療法在某些實(shí)施方案中，第一活性劑包含本發(fā)明的經(jīng)修飾的寡核苷酸與一種或多種第二活性劑共施用。在某些實(shí)施方案中，設(shè)計(jì)此類第二活性劑以治療與本文所述的第一活性劑相同的疾病、病癥或疾患。在某些實(shí)施方案中，設(shè)計(jì)此類第二活性劑來治療與本文所述的第一活性劑不同的疾病、病癥或疾患。在某些實(shí)施方案中，設(shè)計(jì)此類第二活性劑來治療一種或多種本文所述的藥物組合物的不期望的副作用。在某些實(shí)施方案中，第二活性劑與第一活性劑共施用以治療第一活性劑的不期望的效應(yīng)。在某些實(shí)施方案中，第二活性劑與第一活性劑共施用來產(chǎn)生組合效應(yīng)。在某些實(shí)施方案中，第二活性劑與第一活性劑共施用來產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng)。在某些實(shí)施方案中，第一活性劑和一種或多種第二活性劑在相同時(shí)間施用。在某些實(shí)施方案中，第一活性劑和一種或多種第二活性劑在不同時(shí)間施用。在某些實(shí)施方案中，第一活性劑和一種或多種第二活性劑被制備在單一藥物制劑中。在某些實(shí)施方案中，第一活性劑和一種或多種第二活性劑被分開制備。在某些實(shí)施方案中，第二活性劑包括但不限于抗壞血酸。本發(fā)明提供的各個(gè)方面的實(shí)施方案也通過以下任意一個(gè)段落進(jìn)行了描述。1.一種減少動(dòng)物中的ANGPTL3表達(dá)的方法，其包括向所述動(dòng)物施用包含靶向于ANGPTL3的長(zhǎng)度為10至30個(gè)連接核苷的經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物，其中減少所述動(dòng)物中的ANGPTL3表達(dá)。2.一種減少動(dòng)物中的apoC-III表達(dá)的方法，其包括向所述動(dòng)物施用包含靶向于ANGPTL3的長(zhǎng)度為10至30個(gè)連接核苷的經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物，其中減少所述動(dòng)物中的apoC-III表達(dá)。3.一種減少動(dòng)物中的甘油三酯水平的方法，其包括向所述動(dòng)物施用包含靶向于ANGPTL3的長(zhǎng)度為10至30個(gè)連接核苷的經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物，其中減少所述動(dòng)物中的甘油三酯水平。4.一種減少動(dòng)物中的膽固醇水平的方法，其包括向所述動(dòng)物施用包含靶向于ANGPTL3的長(zhǎng)度為10至30個(gè)連接核苷的經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物，其中減少所述動(dòng)物中的膽固醇水平。5.一種減少動(dòng)物中的低密度脂蛋白(LDL)水平的方法，其包括向所述動(dòng)物施用包含靶向于ANGPTL3的長(zhǎng)度為10至30個(gè)連接核苷的經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物，其中減少所述動(dòng)物中的低密度脂蛋白(LDL)水平。6.一種減少動(dòng)物中的葡萄糖水平的方法，其包括向所述動(dòng)物施用包含靶向于ANGPTL3的長(zhǎng)度為10至30個(gè)連接核苷的經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物，其中減少所述動(dòng)物中的葡萄糖水平。7.一種減輕動(dòng)物中的代謝疾病或心血管疾病的方法，其包括向所述動(dòng)物施用包含靶向于ANGPTL3的長(zhǎng)度為10至30個(gè)連接核苷的經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物，其中減輕所述動(dòng)物中的代謝疾病或心血管疾病。8.段落1-7中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸具有與SEQIDNO：1-5至少90％互補(bǔ)的核堿基序列，如對(duì)所述經(jīng)修飾的寡核苷酸的整體性所測(cè)量的。9.段落1-7中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸具有包含SEQIDNO：34-182中任一個(gè)所述的序列的至少8個(gè)連續(xù)核堿基的核堿基序列。10.段落1-7中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述動(dòng)物是人。11.段落1-7中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述化合物是第一活性劑，并且還包括施用第二活性劑。12.段落11所述的方法，其中共施用所述第一活性劑和第二活性劑。13.段落11中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述第二活性劑是葡萄糖降低劑。14.段落13所述的方法，其中所述葡萄糖降低劑是治療性生活方式改變、PPAR激動(dòng)劑、二肽基肽酶(IV)抑制劑、GLP-1類似物、胰島素或胰島素類似物、胰島素促泌素、SGLT2抑制劑、人胰淀素類似物、雙胍類、α-糖苷酶抑制劑或其組合。15.段落13所述的方法，其中所述葡萄糖降低劑是二甲雙胍、磺酰脲、羅格列酮或其組合。16.段落13所述的方法，其中所述葡萄糖降低劑是選自以下的磺酰脲：醋酸己脲、氯磺丙脲、甲苯磺丁脲、妥拉磺脲、格列美脲、格列吡嗪、格列本脲或格列奇特。17.段落13所述的方法，其中所述葡萄糖降低劑是二甲雙胍。18.段落13所述的方法，其中所述葡萄糖降低劑是選自那格列奈或瑞格列奈的美格列奈。19.段落13所述的方法，其中所述葡萄糖降低劑是選自吡格列酮或羅格列酮的噻唑烷二酮類。20.段落13所述的方法，其中所述葡萄糖降低劑是選自阿卡波糖或米格列醇的α-糖苷酶抑制劑。21.段落11所述的方法，其中所述第二活性劑是降脂質(zhì)治療。22.段落21所述的方法，其中所述降脂質(zhì)治療是治療性生活方式改變、HMG-CoA還原酶抑制劑、膽固醇吸收抑制劑、MTP抑制劑、靶向于ApoB的反義化合物或其任何組合。23.段落21所述的方法，其中所述降脂質(zhì)治療是選自以下的HMG-CoA還原酶抑制劑：阿托伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀、普伐他汀、羅蘇伐他汀或辛伐他汀。24.段落21所述的方法，其中所述降脂質(zhì)治療是膽固醇吸收抑制劑依澤替米貝。25.段落1-7中任一項(xiàng)所述的方法，其中施用包含胃腸外施用。26.段落1-7中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述化合物由單鏈經(jīng)修飾的寡核苷酸組成。27.段落1-7中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸具有與SEQIDNO：1-5中任一個(gè)至少95％互補(bǔ)的核堿基序列，如對(duì)所述經(jīng)修飾的寡核苷酸的整體性所測(cè)量的。28.段落1-7中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸具有與SEQIDNO：1-5中任一個(gè)至少100％互補(bǔ)的核堿基序列，如對(duì)所述經(jīng)修飾的寡核苷酸的整體性所測(cè)量的。29.段落1-7中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸的至少一個(gè)核苷間鍵合是經(jīng)修飾的核苷間鍵合。30.段落29所述的方法，其中每個(gè)核苷間鍵合是硫代磷酸酯核苷間鍵合。31.段落1-7中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸的至少一個(gè)核苷包含經(jīng)修飾的糖。32.段落31所述的方法，其包含至少一個(gè)經(jīng)四氫吡喃修飾的核苷，其中四氫吡喃環(huán)代替呋喃糖環(huán)。33.段落32所述的方法，其中至少一個(gè)經(jīng)四氫吡喃修飾的核苷中的每一個(gè)具有以下結(jié)構(gòu)：其中Bx是任選保護(hù)的雜環(huán)堿基部分。34.段落31所述的方法，其中至少一種經(jīng)修飾的糖是雙環(huán)糖。35.段落31所述的方法，其中至少一種經(jīng)修飾的糖包含2’-O-甲氧基乙基或4’-(CH2)n-O-2’橋，其中n是1或2。36.段落1-7中任一項(xiàng)所述的方法，其中經(jīng)修飾的寡核苷酸的至少一個(gè)核苷包含經(jīng)修飾的核堿基。37.段落36所述的方法，其中所述經(jīng)修飾的核堿基是5-甲基胞嘧啶。38.段落1-7中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸由20個(gè)連接核苷組成。39.段落1-7中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸包含：a.由連接脫氧核苷組成的缺口區(qū)段；b.由連接核苷組成的5’翼區(qū)段；c.由連接核苷組成的3’翼區(qū)段；其中所述缺口區(qū)段位于5’翼區(qū)段與3'翼區(qū)段之間并且每個(gè)翼區(qū)段中的每個(gè)核苷包含經(jīng)修飾的糖。40.段落1-7中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸由20個(gè)連接核苷組成，具有包含選自SEQIDNO：34-182中任一個(gè)的核堿基序列的至少8個(gè)連續(xù)核堿基的核堿基序列，并且包含：a.由10個(gè)連接脫氧核苷組成的缺口區(qū)段；b.由5個(gè)連接核苷組成的5’翼區(qū)段；c.由5個(gè)連接核苷組成的3’翼區(qū)段；其中所述缺口區(qū)段位于5’翼區(qū)段與3’翼區(qū)段之間，其中每個(gè)翼區(qū)段的每個(gè)核苷包含2’-O-甲氧基乙基糖，其中每個(gè)核苷間鍵合是硫代磷酸酯鍵合，并且其中每個(gè)胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。41.一種用于治療患有代謝疾病或心血管疾病的動(dòng)物的方法，其包括a.鑒定患有代謝疾病或心血管疾病的所述動(dòng)物，b.向所述動(dòng)物施用治療有效量的包含經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物，所述經(jīng)修飾的寡核苷酸由20個(gè)連接核苷組成并且具有與SEQIDNO：1-5至少90％互補(bǔ)的核堿基序列，如對(duì)經(jīng)修飾的寡核苷酸的整體性所測(cè)量的，其中患有代謝疾病或心血管疾病的所述動(dòng)物被治療。42.段落41所述的方法，其中向所述動(dòng)物施用所述治療有效量的化合物減少所述動(dòng)物中的代謝疾病或心血管疾病。43.段落7或41的方法，其中所述代謝疾病或心血管疾病是肥胖癥、糖尿病、動(dòng)脈粥樣硬化、血脂障礙、冠心病、非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)、高脂肪酸血癥或代謝綜合征或其組合。44.段落43所述的方法，其中所述血脂障礙是高脂血癥。45.段落44所述的方法，其中所述高脂血癥是高膽固醇血癥、高甘油三酯血癥、高膽固醇血癥和高甘油三酯血癥兩者。46.段落43所述的方法，其中所述NAFLD是肝脂肪變性或脂肪肝炎。47.段落43所述的方法，其中所述糖尿病是2型糖尿病或具有血脂障礙的2型糖尿病。48.段落1所述的方法，其中所述施用導(dǎo)致脂質(zhì)水平減少，包括甘油三酯水平、膽固醇水平、胰島素抵抗、葡萄糖水平或其組合。49.段落48所述的方法，其中所述水平獨(dú)立地減少5％、10％、20％、30％、35％或40％。50.段落1-7中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述施用導(dǎo)致提高的胰島素敏感性。51.段落50所述的方法，其中所述施用導(dǎo)致提高的胰島素敏感性。52.一種通過施用包含經(jīng)修飾的寡核苷酸的ANGPTL3抑制劑減少人中ANGPTL3水平、LDL水平、apoC-III水平、甘油三酯水平、膽固醇水平、葡萄糖水平、脂肪墊重、心血管疾病和代謝疾病中的一者或多者的方法，所述經(jīng)修飾的寡核苷酸由20個(gè)連接核苷組成并且具有與SEQIDNO：1-5至少90％互補(bǔ)的核堿基序列，如對(duì)所述經(jīng)修飾的寡核苷酸的整體性所測(cè)量的。53.段落1-52中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述施用導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化斑塊、肥胖癥、葡萄糖、脂質(zhì)、葡萄糖抗性、膽固醇減少或胰島素敏感性增加或其任何組合。54.一種包含經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物，所述經(jīng)修飾的寡核苷酸由10至30個(gè)連接核苷組成并且具有包含選自SEQIDNO：34-182中任一個(gè)的核堿基序列的至少8個(gè)連續(xù)核堿基的核堿基序列。55.段落54所述的化合物，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸的核堿基序列與SEQIDNO：1-5至少95％互補(bǔ)。56.段落54所述的化合物，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸的核堿基序列與SEQIDNO：1-5至少100％互補(bǔ)。57.段落54所述的化合物，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸是單鏈寡核苷酸。58.段落54所述的化合物，其中至少一個(gè)核苷間鍵合是經(jīng)修飾的核苷間鍵合。59.段落58所述的化合物，其中每個(gè)核苷間鍵合是硫代磷酸酯核苷間鍵合。60.段落54所述的化合物，其中至少一個(gè)核苷包含經(jīng)修飾的糖。61.段落60所述的化合物，其中至少一種經(jīng)修飾的糖是雙環(huán)糖。62.段落60所述的化合物，其中至少一種經(jīng)修飾的糖包含2’-O-甲氧基乙基或4’-(CH2)n-O-2’橋，其中n是1或2。63.段落54所述的化合物，其中至少一個(gè)核苷包含經(jīng)修飾的核堿基。64.段落63所述的化合物，其中所述經(jīng)修飾的核堿基是5-甲基胞嘧啶。65.段落54所述的化合物，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸包含：由連接脫氧核苷組成的缺口區(qū)段；由連接核苷組成的5’翼區(qū)段；由連接核苷組成的3’翼區(qū)段；其中所述缺口區(qū)段位于5’翼區(qū)段與3’翼區(qū)段之間，并且其中每個(gè)翼區(qū)段的每個(gè)核苷包含經(jīng)修飾的糖。66.段落54所述的化合物，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸由20個(gè)連接核苷組成并且包含：由10個(gè)連接脫氧核苷組成的缺口區(qū)段；由5個(gè)連接核苷組成的5’翼區(qū)段；由5個(gè)連接核苷組成的3’翼區(qū)段；其中所述缺口區(qū)段位于5’翼區(qū)段與3’翼區(qū)段之間，其中每個(gè)翼區(qū)段的每個(gè)核苷包含2’-O-甲氧基乙基糖；且其中每個(gè)核苷間鍵合是硫代磷酸酯鍵合。67.段落54所述的化合物，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸由20個(gè)連接核苷組成。68.一種包含經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物或其鹽和藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑，所述經(jīng)修飾的寡核苷酸由10至30個(gè)連接核苷組成并且具有包含選自SEQIDNO：34-182中任一個(gè)所述的序列的核堿基序列的至少8個(gè)連續(xù)核堿基的核堿基序列。69.段落68所述的化合物，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸是單鏈寡核苷酸。70.段落68所述的化合物，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸由20個(gè)連接核苷組成。71.一種包含經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物，所述經(jīng)修飾的寡核苷酸由20個(gè)連接核苷組成，并且具有包含選自SEQIDNO：34-182中任一個(gè)的核堿基序列的至少8個(gè)連續(xù)核堿基的核堿基序列，其中經(jīng)修飾的寡核苷酸包含：由10個(gè)連接脫氧核苷組成的缺口區(qū)段；由5個(gè)連接核苷組成的5’翼區(qū)段；由5個(gè)連接核苷組成的3’翼區(qū)段；其中所述缺口區(qū)段位于5’翼區(qū)段與3’翼區(qū)段之間，其中每個(gè)翼區(qū)段的每個(gè)核苷包含2’-O-甲氧基乙基糖，其中每個(gè)核苷間鍵合是硫代磷酸酯鍵合，并且其中每個(gè)胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。實(shí)施例非限定性公開且通過引用并入盡管根據(jù)某些實(shí)施方案已選擇性描述本文所述的某些化合物、組合物和方法，但是下列實(shí)施例僅用于舉例說明本文所述的化合物并且不旨在限制于此。本申請(qǐng)引用的每篇參考文獻(xiàn)通過引用整體并入本文。實(shí)施例1：寡聚化合物對(duì)人血管生成素樣3的反義抑制設(shè)計(jì)一系列寡聚化合物靶向人血管生成素樣3的不同區(qū)域，使用公布的表1中所述的序列?；衔锸居诒?中。表4中的所有化合物是長(zhǎng)度為20個(gè)核苷酸的嵌合寡核苷酸(“缺口基體”)，其由包括10個(gè)2’-脫氧核苷酸的中央“缺口”區(qū)域組成，該區(qū)域經(jīng)由5個(gè)核苷酸“翼”側(cè)翼連接在兩側(cè)(5’和3’)。翼由2’-O-(2-甲氧基乙基)核苷酸(也稱為2’-MOE核苷酸)組成。核苷間(主鏈)鍵合是遍及寡核苷酸的硫代磷酸酯。所有胞嘧啶殘基是5-甲基胞嘧啶。表4中的寡聚化合物與編碼血管生成素樣3的靶核酸分子特異性雜交并且包含增加結(jié)合親和力的區(qū)域，該區(qū)域?yàn)楣丫刍衔锏摹耙怼薄９丫刍衔锔靼l(fā)RNA酶H活性的區(qū)域，該區(qū)域?yàn)椤叭笨凇眳^(qū)域。通過如在本文其它實(shí)施例中所述的定量實(shí)時(shí)PCR、使用表3中所示的靶特異性引物和探針(SEQIDNO：28、SEQIDNO：29和SEQIDNO：30)分析化合物對(duì)基因靶mRNA水平的效應(yīng)。根據(jù)實(shí)驗(yàn)對(duì)數(shù)據(jù)求平均值，該實(shí)驗(yàn)中Huh7細(xì)胞用150nM公開的寡聚化合物使用OLIGOFECTAMINETM來處理。表4所示的是每一個(gè)寡聚化合物所靶向的序列的SEQIDNO。表達(dá)減少被表示為表4中的抑制百分比。如果存在，"N.D."指示"未測(cè)定"。這些寡聚化合物對(duì)其具有抑制性的靶區(qū)域在本文被稱為“驗(yàn)證的靶區(qū)段”。表4具有2’-MOE翼和脫氧缺口的嵌合寡核苷酸對(duì)人血管生成素樣3mRNA水平的抑制實(shí)施例2：寡聚化合物對(duì)小鼠血管生成素樣3的反義抑制設(shè)計(jì)一系列寡聚化合物靶向小鼠血管生成素樣3的不同區(qū)域，使用公布的表1中所述的序列?；衔锸居诒?中。表5中的所有化合物是長(zhǎng)度為20個(gè)核苷酸的嵌合寡核苷酸(“缺口基體”)，其由包括10個(gè)2’-脫氧核苷酸的中央“缺口”區(qū)域組成，該區(qū)域經(jīng)由5個(gè)核苷酸“翼”側(cè)翼連接在兩側(cè)(5’和3’)。翼由2’-O-(2-甲氧基乙基)核苷酸(也稱為2’-MOE核苷酸)組成。核苷間(主鏈)鍵合是遍及寡核苷酸的硫代磷酸酯。所有胞嘧啶殘基是5-甲基胞嘧啶。表5中的寡聚化合物與編碼血管生成素樣3的靶核酸分子特異性雜交并且包含增加結(jié)合親和力的區(qū)域，該區(qū)域?yàn)楣丫刍衔锏摹耙怼?。寡聚化合物各包含引發(fā)RNA酶H活性的區(qū)域，該區(qū)域?yàn)椤叭笨凇眳^(qū)域。通過如在本文其它實(shí)施例中所述的定量實(shí)時(shí)PCR、使用表3中所示的靶特異性引物和探針(SEQIDNO：31、SEQIDNO：32和SEQIDNO：33)分析化合物對(duì)基因靶mRNA水平的效應(yīng)。根據(jù)實(shí)驗(yàn)對(duì)數(shù)據(jù)求平均值，該實(shí)驗(yàn)中小鼠原代肝細(xì)胞用150nM公開的寡聚化合物使用OLIGOFECTAMINETM來處理。使用的對(duì)照寡聚化合物是SEQIDNO：9和10。表5所示的是每一個(gè)寡聚化合物所靶向的序列的SEQIDNO。表達(dá)減少被表示為表5中的抑制百分比。如果存在，"N.D."指示"未測(cè)定"。這些寡聚化合物對(duì)其具有抑制性的靶區(qū)域在本文被稱為“驗(yàn)證的靶區(qū)段”。表5的反義寡核苷酸也可與人ANGPTL3mRNA(GENBANKAccessionNM_014495.1，以SEQIDNO：4并入本文)，取決于鼠寡核苷酸與人ANGPTL3序列錯(cuò)配的核堿基的數(shù)目。“人靶起始位點(diǎn)”指示反義寡核苷酸所靶向的人mRNA中的5’最末端核苷酸?！叭税薪K止位點(diǎn)”指示反義寡核苷酸所靶向的人mRNA中的3’最末端核苷酸。‘錯(cuò)配’指示鼠寡核苷酸與人基因序列錯(cuò)配的核堿基的數(shù)目。稱呼“n/a”指示鼠寡核苷酸與人基因序列之間存在3個(gè)以上錯(cuò)配。鼠寡核苷酸與人基因序列之間的互補(bǔ)性越大，鼠寡核苷酸越有可能與人基因序列雜交反應(yīng)。表5具有2’-MOE翼和脫氧缺口的嵌合寡核苷酸對(duì)小鼠血管生成素樣3mRNA水平的抑制實(shí)施例3：靶向血管生成素樣3的雙鏈寡聚化合物的設(shè)計(jì)和篩選根據(jù)本發(fā)明，包含本發(fā)明的寡聚化合物及其互補(bǔ)序列的一系列雙鏈體(包括dsRNA及其模擬物)可被設(shè)計(jì)成靶血管生成素樣3。雙鏈體的反義鏈的核堿基序列包含靶向于本文公開的血管生成素樣3的寡核苷酸的至少一部分。鏈的末端可通過添加一個(gè)或多個(gè)天然或經(jīng)修飾的核堿基來修飾以形成懸突。然后核酸雙鏈體的有義鏈被設(shè)計(jì)并且被合成為反義鏈的互補(bǔ)序列并且還可包含任一末端的修飾或添加。雙鏈體的反義和有義鏈包含約17至25個(gè)核苷酸或約19至23個(gè)核苷酸?？蛇x地，反義和有義鏈包含20、21或22個(gè)核苷酸。例如，在一個(gè)實(shí)施方案中，dsRNA雙鏈體的兩條鏈均在中央核堿基上互補(bǔ)，每一條在一個(gè)或兩個(gè)末端具有懸突。例如，包含具有序列CGAGAGGCGGACGGGACCG(以SEQIDNO：183并入本文)并且具有脫氧胸苷(dT)的兩-核堿基懸突的反義鏈的雙鏈體將具有以下結(jié)構(gòu)：cgagaggcggacgggaccgTT反義鏈(SEQIDNO：184)互補(bǔ)序列(SEQIDNO：185)懸突可為2至6個(gè)核堿基并且這些核堿基可以或不可以與靶核酸互補(bǔ)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，雙鏈體可僅在一個(gè)末端上具有懸突。在另一個(gè)實(shí)施方案中，包含具有相同序列例如CGAGAGGCGGACGGGACCG(SEQIDNO：183)的反義鏈的雙鏈體可被制備具有如下鈍性末端(無單鏈懸突)：cgagaggcggacgggaccg反義鏈(SEQIDNO：183)互補(bǔ)序列(SEQIDNO：186)RNA雙鏈體可以是單分子或雙分子的；即，兩條鏈可以是單分子的一部分或可以是單獨(dú)的分子。雙鏈體的RNA鏈可通過技術(shù)人員熟知的方法來合成或購(gòu)自DharmaconResearchInc.(Lafayette，CO)。一旦合成，則對(duì)互補(bǔ)鏈退火。將單鏈等份并稀釋至50μM的濃度。一旦被稀釋，則將30μL每條鏈與15μL5X退火緩沖液溶液組合。所述緩沖液的終濃度為100mM醋酸鉀、30mMHEPES-KOHpH7.4和2mM硬脂酸鎂。終體積為75μL。將溶液在90℃孵育1分鐘，然后離心15秒。將管在37℃攪拌1小時(shí)，此時(shí)在實(shí)驗(yàn)中使用dsRN雙鏈體。dsRNA雙鏈體的終濃度為20μM。一旦被制備，評(píng)價(jià)雙鏈化合物調(diào)節(jié)血管生成素樣3的能力。當(dāng)細(xì)胞達(dá)到80％匯合時(shí)，它們用本發(fā)明的雙鏈化合物處理。對(duì)于生長(zhǎng)在96孔板中的細(xì)胞，將孔用200μLOPTI-MEM-1TM低血清培養(yǎng)基(GibcoBRL)洗滌一次，然后用含有12μg/mLLIPOFECTINTM(GibcoBRL)和終濃度為200nM的所需雙鏈體反義化合物(6μg/mLLIPOFECTINTM每100nM雙鏈體反義化合物的比率)的130μLOPTI-MEM-1TM處理。處理5小時(shí)后，將培養(yǎng)基用新鮮培養(yǎng)基替換。在處理后16小時(shí)收獲細(xì)胞，此時(shí)分離RNA并且通過RT-PCR測(cè)量靶減少。實(shí)施例4：寡聚化合物對(duì)小鼠血管生成素樣3的反義抑制：劑量響應(yīng)研究在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，選擇這些寡核苷酸用于另外的劑量-響應(yīng)研究。將小鼠原代肝細(xì)胞用6.25、25、100或400nMISIS233693(SEQIDNO：131)、ISIS233698(SEQIDNO：136)或ISIS233725(SEQIDNO：159)處理或錯(cuò)義對(duì)照寡核苷酸ISIS113529(5-10-5缺口基體，CTCTTACTGTGCTGTGGACA，以SEQIDNO：11并入本文)和mRNA水平如在本文其它實(shí)施例中所述進(jìn)行測(cè)量。未處理的細(xì)胞用作對(duì)照，將該數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化成對(duì)照。這些研究的結(jié)果示于表6中。根據(jù)三個(gè)實(shí)驗(yàn)對(duì)數(shù)據(jù)求平均，并且以相對(duì)于未處理對(duì)照的抑制百分比表示。表6小鼠原代肝細(xì)胞中血管生成素樣3mRNA表達(dá)的抑制如示于表6中，ISIS233693、233698和233725以劑量依賴性方式降低血管生成素樣3mRNA水平。實(shí)施例5：C57BL/6小鼠的體內(nèi)研究中對(duì)血管生成素樣3的反義抑制的效應(yīng)根據(jù)本發(fā)明，選擇靶向小鼠血管生成素樣3的兩個(gè)寡核苷酸用于體內(nèi)研究。用ISIS233693(SEQIDNO：131)或ISIS233698(SEQIDNO：136)50mg/kg注射喂養(yǎng)正常飼料的雄性C57BL/6小鼠，每周兩次，持續(xù)2周。每一個(gè)處理組包含5只動(dòng)物。一組動(dòng)物接受注射研究，每周兩次，持續(xù)2周。鹽水注射組用作對(duì)照組，將寡核苷酸處理組與其相比較。2周處理期后，處死小鼠，評(píng)價(jià)肝中的血管生成素樣3mRNA水平。通過實(shí)時(shí)PCR定量mRNA表達(dá)水平，如本文其它實(shí)施例中所述。相對(duì)于鹽水處理的小鼠、ISIS233693引起血管生成素樣3mRNA水平減少44％。ISIS233698引起血管生成素樣3mRNA水平減少41％。該數(shù)據(jù)證明血管生成素樣3反義寡核苷酸處理可有效地抑制肝中的靶mRNA表達(dá)。在研究結(jié)束時(shí)測(cè)量脾重、體重和肝重。在處理期結(jié)束時(shí)測(cè)量的平均組織重量和體重(以克計(jì))示于表7中。如示于表7，體重、肝重和脾重不受寡核苷酸處理影響。表7血管生成素樣3表達(dá)的反義抑制對(duì)無脂肪小鼠的組織重量和體重的效應(yīng)處理體重肝重脾重鹽水241.10.1ISIS233693231.10.1ISIS233698221.00.1在研究結(jié)束時(shí)，使用Olympus臨床分析儀(OlympusAmericaInc.，Melville，NY)通過常規(guī)分析評(píng)價(jià)動(dòng)物的血清膽固醇、HDL、LDL、甘油三酯和葡萄糖水平。還測(cè)量血清轉(zhuǎn)氨酶ALT和AST(其增加可指示肝毒性)。未觀察到與肝毒性相關(guān)的AST或ALT的水平。測(cè)量的血清葡萄糖(GLUC)、膽固醇(CHOL)、LDL、HDL和甘油三酯(TRIG)的水平示于表8中，以每個(gè)處理組的平均結(jié)果(以mg/dL計(jì))表示。表8血管生成素樣3表達(dá)的反義抑制對(duì)無脂肪小鼠中的血清葡萄糖、脂質(zhì)和轉(zhuǎn)氨酶的效應(yīng)處理CHOLGLUHDLTGLDL鹽水801725810914ISIS23369370251537210ISIS23369887266678412如示于表8，用ISIS233693和ISIS233698的處理降低血清甘油三酯。用ISIS233693的處理降低總膽固醇。實(shí)施例6：血管生成素樣3的反義抑制的效應(yīng)：高脂肪喂養(yǎng)的小鼠中的體內(nèi)劑量-響應(yīng)研究報(bào)道稱C57BL/6小鼠品系對(duì)高脂血癥誘導(dǎo)的動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成敏感。因此，這些小鼠進(jìn)行高脂肪飲食喂養(yǎng)并用于以下研究，以評(píng)價(jià)血管生成素樣3反義寡核苷酸對(duì)mRNA表達(dá)的效應(yīng)。將雄性C57BL/6小鼠置于含有來自脂肪的60％卡路里的高脂肪飲食中(例如，ResearchDietsD12492，ResearchDietssInc.，NewBrunswick，NJ)。將接受高脂肪飲食的小鼠分成處理組。三組接受注射ISIS233693(SEQIDNo：131)，以10mg/kg、25mg/kg或50mg/kg的劑量每周兩次，持續(xù)6周。三個(gè)其它組接受注射ISIS233698(SEQIDNo：136)，以10mg/kg、25mg/kg或50mg/kg的劑量每周兩次，持續(xù)6周。一組高脂肪喂養(yǎng)的動(dòng)物接受注射鹽水，兩周兩次，持續(xù)6周。鹽水注射組用作對(duì)照組，將其與寡核苷酸處理組相比較。6周處理期后，處死小鼠，評(píng)價(jià)肝中的血管生成素樣3mRNA水平。通過實(shí)時(shí)PCR定量mRNA表達(dá)水平，如本文其它實(shí)施例中所述。結(jié)果示于表9中，以相對(duì)于鹽水處理的對(duì)照的平均抑制百分比表示。表9來自高脂肪喂養(yǎng)的小鼠的肝中血管生成素樣3表達(dá)的反義抑制：劑量-響應(yīng)研究處理抑制％ISIS233693，10mg/kg73ISIS233693，25mg/kg88ISIS233693，50mg/kg93ISIS233698，10mg/kg17ISIS233698，25mg/kg39ISIS233698，50mg/kg55這些數(shù)據(jù)顯示靶向于血管生成素樣3mRNA的反義寡核苷酸以劑量依賴性方式有效地降低肝中的靶mRNA表達(dá)。在整個(gè)研究中監(jiān)測(cè)體重。在研究結(jié)束時(shí)測(cè)量脾重、脂肪墊重和肝重。在治療期結(jié)束時(shí)測(cè)量的平均組織重量和體重示于表10中。表10血管生成素樣3表達(dá)的反義抑制對(duì)高脂肪喂養(yǎng)的小鼠的組織重量和體重的效應(yīng)：劑量-響應(yīng)研究處理體重肝脾脂肪墊鹽水361.20.12.1ISIS233693，10mg/kg371.50.12.0ISIS233693，25mg/kg341.40.11.3ISIS233693，50mg/kg321.50.11.1ISIS233698，10mg/kg381.40.11.8ISIS233698，25mg/kg331.20.11.5ISIS233698，50mg/kg331.50.11.5這些數(shù)據(jù)證明體重、脾重和肝重未受影響。脂肪墊重通過用ISIS233698的處理以劑量依賴性方式減少。用ISIS233698的處理也減少脂肪墊重。在研究結(jié)束時(shí)，使用Olympus臨床分析儀(OlympusAmericaInc.，Melville，NY)通過常規(guī)分析評(píng)價(jià)動(dòng)物的血清膽固醇、甘油三酯和葡萄糖水平。使用Olympus臨床分析儀(OlympusAmericaInc.，Melville，NY)還測(cè)量血清轉(zhuǎn)氨酶ALT和AST(其增加可指示肝毒性)。測(cè)量的血清膽固醇(CHOL)和甘油三酯(TRIG)水平示于表11中，以每個(gè)處理組的平均結(jié)果(以mg/dL計(jì))表示。還示出HDL和LDL的平均水平以及平均葡萄糖水平(GLUC)。ALT和AST(也示于表11中)同樣以每個(gè)處理組的平均結(jié)果表示，以國(guó)際單位/L(IU/L)計(jì)。表11血管生成素樣3的反義抑制對(duì)高脂肪喂養(yǎng)的小鼠中血清葡萄糖、膽固醇、甘油三酯和肝轉(zhuǎn)氨酶的效應(yīng)處理ALTASTCHOLHDLLDLTRIGGLUC鹽水224717714331120244ISIS233693，10mg/kg23601511272381263ISIS233693，25mg/kg21621251061857254ISIS233693，50mg/kg52791471252244206ISIS233698，10mg/kg285515112027101285ISIS233698，25mg/kg16531351102389248ISIS233698，50mg/kg1921751581263177215如示于表11，與鹽水處理相比較，用ISIS233693或ISIS233698處理導(dǎo)致降低的膽固醇水平和血清甘油三酯的劑量依賴性減少。ISIS233693和ISIS233698也導(dǎo)致HDL的輕微減少，其通常在小鼠中觀察到，當(dāng)由于這樣的事實(shí)—小鼠(不像人和其它物種)以HDL顆粒形式攜帶90％其血清膽固醇—對(duì)抗高脂血癥藥進(jìn)行測(cè)試時(shí)。而且，用ISIS233693的處理降低LDL。實(shí)施例7：血管生成素樣3水平的反義抑制對(duì)體內(nèi)肝甘油三酯的效應(yīng)肝脂肪變性是指脂質(zhì)在肝中的蓄積或“脂肪肝”，其通常由酒精消耗、糖尿病和高脂血癥引起并且可發(fā)展成末期肝損傷。考慮到脂肪肝疾患的有害結(jié)果，有用的是鑒定預(yù)防或改善肝脂肪變性的化合物?？赏ㄟ^測(cè)量組織甘油三酯含量和通過肝組織的組織學(xué)檢查評(píng)價(jià)肝脂肪變性。在又一個(gè)實(shí)施方案中，如實(shí)施例6中所述地評(píng)價(jià)動(dòng)物中的肝組織甘油三酯含量。使用甘油三酯GPO測(cè)定(RocheDiagnostics，Indianapolis，IN)測(cè)量肝組織甘油三酯含量。每個(gè)處理組的結(jié)果被標(biāo)準(zhǔn)化成鹽水處理的對(duì)照并且示于表12中。表12血管生成素樣3的反義抑制對(duì)高脂肪喂養(yǎng)的小鼠中肝甘油三酯的效應(yīng)處理對(duì)照％ISIS233693，10mg/kg82ISIS233693，25mg/kg54ISIS233693，50mg/kg31ISIS233698，10mg/kg55ISIS233698，25mg/kg41ISIS233698，50mg/kg47如示于表12，用靶向于血管生成素樣3的反義寡核苷酸的處理導(dǎo)致肝甘油三酯的劑量依賴性減少。實(shí)施例8：血管生成素樣3的反義抑制的效應(yīng)：高脂肪喂養(yǎng)的小鼠中的用ISIS233693的體內(nèi)研究在與實(shí)施例6中所述的研究類似的研究中，將雄性C57BL/6小鼠置于含有來自脂肪的60％卡路里的高脂肪飲食中(例如，ResearchDietsD12492，ResearchDietssInc.，NewBrunswick，NJ)。將接受高脂肪飲食的小鼠分成處理組。一組接受注射ISIS233693(SEQIDNo：131)，以50mg/kg的劑量每周兩次，持續(xù)6周。將寡核苷酸溶于鹽水用于注射。一組高脂肪喂養(yǎng)的動(dòng)物接受注射鹽水，每周兩次，持續(xù)6周。鹽水注射組用作對(duì)照組，將其與寡核苷酸處理組相比較。6周處理期后，處死小鼠，評(píng)價(jià)肝中的血管生成素樣3mRNA水平。通過實(shí)時(shí)PCR定量mRNA表達(dá)水平，如本文其它實(shí)施例中所述。ISIS233693引起靶mRNA水平的88％減少。在整個(gè)研究中監(jiān)測(cè)體重。在研究結(jié)束時(shí)測(cè)量脾重、脂肪墊重和肝重。僅用鹽水處理的動(dòng)物的平均體重、肝重、脾重和脂肪墊重分別為33g、1.2g、0.1g、0.7g。用ISIS233693處理的動(dòng)物的平均體重、肝重、脾重和脂肪墊重分別為31g、1.6g、0.2g和0.2g。用ISIS233693的處理減少脂肪墊重71％。在研究結(jié)束時(shí)，通過常規(guī)臨床分析(例如在臨床試驗(yàn)設(shè)施例如BTS，LabCorp，SanDiego，CA的部門)評(píng)價(jià)動(dòng)物的血清膽固醇、甘油三酯和葡萄糖水平。還測(cè)量血清轉(zhuǎn)氨酶ALT和AST與血清蛋白(其增加可指示肝毒性)，以及膽紅素水平(其增加可指示腎臟毒性)。用ISIS233693處理未觀察到毒性增加(作為異常腎或肝功能的指示劑)。ISIS233693引起血清甘油三酯和葡萄糖水平的減少，但未改變血清膽固醇、LDL或HDL水平。肝脂肪變性是指脂質(zhì)在肝中的蓄積或“脂肪肝”，其通常由酒精消耗、糖尿病和高脂血癥引起并且可發(fā)展成末期肝損傷。考慮到脂肪肝疾患的有害結(jié)果，有用的是鑒定預(yù)防或改善肝脂肪變性的化合物。可通過測(cè)量組織甘油三酯含量和通過肝組織的組織學(xué)檢查評(píng)價(jià)肝脂肪變性。使用甘油三酯GPO測(cè)定(RocheDiagnostics，Indianapolis，IN)測(cè)量肝組織甘油三酯含量。ISIS233693處理組的平均結(jié)果被標(biāo)準(zhǔn)化成鹽水處理的對(duì)照。ISIS233693的處理引起肝甘油三酯水平的75％減少。通過常規(guī)程序進(jìn)行組織學(xué)分析。簡(jiǎn)言之，獲得肝樣品，固定在10％中性緩沖的福爾馬林中，進(jìn)行H&E染色，評(píng)價(jià)肝形態(tài)學(xué)?？蛇x地，獲得肝組織，冷凍，切片，隨后用油紅O染色法染色以使脂質(zhì)沉積物可見，用曙紅復(fù)染色以標(biāo)記細(xì)胞質(zhì)。通過光學(xué)顯微法評(píng)價(jià)所制備的樣品。如通過油紅O染色法和組織學(xué)分析評(píng)價(jià)，來自用ISIS233693處理的肝所呈示的脂肪含量與鹽水處理的對(duì)照肝相比減少。因此，靶向于血管生成素樣3的寡聚化合物改善肝脂肪變性，如通過測(cè)量組織甘油三酯含量和通過肝組織的組織學(xué)檢查兩者來評(píng)價(jià)。綜上所述，本文所示的體內(nèi)研究指示血管生成素樣3的反義寡核苷酸減少導(dǎo)致肝靶mRNA的劑量依賴性減少以及血清和肝甘油三酯水平減少。此外，靶向于血管生成素樣3的反義寡核苷酸引起無脂肪喂養(yǎng)的小鼠和高脂肪喂養(yǎng)的小鼠兩者中的血清膽固醇水平減少。而且，觀察到脂肪墊重的減少而沒有類似的體重或器官重量的減少，這表明脂肪含量的靶特異性減少。因此，本發(fā)明的另一方面是對(duì)于疾患例如高脂血癥減少血清膽固醇、血清甘油三酯、肝甘油三酯或脂肪墊重的方法。實(shí)施例9：血管生成素樣3的反義抑制對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的效應(yīng)：LDLr-/-小鼠中用ISIS233693的處理以高膽固醇血癥飲食喂養(yǎng)的LDL受體敲除小鼠(一種用于研究動(dòng)脈粥樣硬化的模型)中評(píng)價(jià)ISIS233693作為抗-動(dòng)脈粥樣硬化藥的效應(yīng)(Ishibashi等人，JClin.Invest.1994May；93:1885-93)。處理給具有LDL受體基因敲除的C57Bl/6小鼠(JacksonLabs，#2207)喂養(yǎng)HarlanTekland飲食，TD94059(37％千卡脂肪，一半來自可可脂，1.25％膽固醇)。起始飲食后4周，將小鼠分成兩組用于處理，每組包含6-8只小鼠。第一組接受皮下注射ISIS233693(SEQIDNo：131)，以25mg/kg的劑量每周兩次，持續(xù)16周。第二組接受皮下注射錯(cuò)配的對(duì)照寡核苷酸、ISIS141923(CCTTCCCTGAAGGTTCCTCC，以SEQIDNO：187并入本文)，以25mg/kg的劑量每周兩次，持續(xù)16周。將寡核苷酸溶于鹽水用于注射。一組高脂肪喂養(yǎng)的動(dòng)物接受注射鹽水，每周兩次，持續(xù)16周。鹽水注射組用作對(duì)照組，將其與寡核苷酸處理組相比較。每4周采集血樣。在處理期結(jié)束時(shí)，對(duì)小鼠實(shí)施安樂死，收集肝和主動(dòng)脈以用于進(jìn)一步分析。RNA分析從肝組織萃取RNA，并且使用ANGPTL3引物探針組(前向序列CACCTGGGCAGTCACGAAA，在本文被稱為SEQIDNO：188；反向序列GGAGGGCCCCAGGGATAT，在本文被稱為SEQIDNO：189；探針序列CACGCTACATGTGGCTGAGATTCGTGG，在本文被稱為SEQIDNO：190)進(jìn)行ANGPTL3的實(shí)時(shí)PCR分析。結(jié)果以相對(duì)于PBS對(duì)照的鼠ANGPTL3抑制百分比呈示。如示于表13中，用ISIS233693的處理導(dǎo)致ANGPTL3mRNA相比于PBS對(duì)照的顯著減少。用對(duì)照寡核苷酸、ISIS141923處理并未導(dǎo)致ANGPTL3的顯著減少，如所期望的。表13LDLr-/-小鼠肝中相對(duì)于PBS對(duì)照的ANGPTL3mRNA抑制抑制％ISIS14192313ISIS23369390膽固醇和脂質(zhì)水平通過Bligh和Dyer的方法(Bligh，E和Dyer，W，CanJBiochemPhysiol，37，911-917，1959)萃取血漿和肝甘油三酯以及膽固醇，并且借助于市售可得的甘油三酯試劑盒(DCL甘油三酯試劑；DiagnosticChemicalsLtd.)測(cè)量。結(jié)果示于表14-17中。表14表明，第16周時(shí)用ISIS233693的處理導(dǎo)致膽固醇水平相比于PBS對(duì)照顯著減少58％?？偰懝檀妓降臏p少是LDL膽固醇水平相比于對(duì)照顯著減少58％的結(jié)果，如示于表15中。表16顯示HDL減少，這有可能是小鼠模型依賴性的，如前文詳述的。類似地，表17表明，第16周時(shí)用ISIS233693的處理相對(duì)于PBS對(duì)照減少甘油三酯水平75％。表14對(duì)LDLr-/-小鼠中的總膽固醇水平(mg/dL)的效應(yīng)第0周第4周第8周第12周第16周PBS1,3131,6181,3981,0831,629ISIS14192312621710162411021167ISIS23369313531070930558683表15對(duì)LDLr-/-小鼠中的LDL膽固醇水平(mg/dL)的效應(yīng)第0周第4周第8周第12周第16周PBS1,0311,1201,0019091,204ISIS141923102211851116902843ISIS2336931075731648453511表16對(duì)LDLr-/-小鼠中的HDL膽固醇水平(mg/dL)的效應(yīng)第0周第4周第8周第12周第16周PBS154166169145300ISIS141923139171179171278ISIS23369315311610397159表17對(duì)LDLr-/-小鼠中的甘油三酯水平(mg/dL)的效應(yīng)粥樣硬化病變?cè)u(píng)估評(píng)價(jià)在用PBS、接著用福爾馬林PBS溶液(5％福爾馬林于PBS中)灌注后自小鼠收獲的主動(dòng)脈中的粥樣硬化病變嚴(yán)重度。通過使用解剖顯微鏡從升主動(dòng)脈近端至額動(dòng)脈的分叉解剖整個(gè)小鼠主動(dòng)脈。除去外膜脂肪，然后縱向打開主動(dòng)脈，平直地釘在黑解剖蠟(blackdissectingwax)上，用SudanIV染色，以固定放大倍數(shù)照相。將照片數(shù)字化，通過使用AdobePhotoshopversion7.0和NIHScionImage軟件(http://rsb.info.nih.gov/nih-image/Default.html)計(jì)算總主動(dòng)脈區(qū)和病變區(qū)。結(jié)果示于表18中，被報(bào)告為含有病變的總主動(dòng)脈區(qū)的百分比。如所示，用ISIS233693的處理導(dǎo)致主動(dòng)脈病變的顯著減少和動(dòng)脈粥樣硬化疾患的改善。表18對(duì)LDLr-/-小鼠中的病變區(qū)(總主動(dòng)脈區(qū)％)的效應(yīng)肝功能為了評(píng)價(jià)ISIS寡核苷酸對(duì)肝功能，使用自動(dòng)臨床化學(xué)分析儀(HitachiOlympusAU400e，Melville，NY)測(cè)量轉(zhuǎn)氨酶血漿濃度。測(cè)量ALT(丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶)和AST(天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶)的血漿濃度并且結(jié)果示于表19和20中，以IU/L表示。每4周進(jìn)行測(cè)量值。第0周為處理的起點(diǎn)和起始高脂肪飲食后4周。表19對(duì)LDLr-/-小鼠中的肝ALT(IU/L)的效應(yīng)第0周第4周第8周第12周第16周PBS2935393636ISIS1419233032323360ISIS2336932048708391表20對(duì)LDLr-/-小鼠中的肝AST(IU/L)的效應(yīng)實(shí)施例10：血管生成素樣3的反義抑制對(duì)人apoB100轉(zhuǎn)基因LDLr-/-小鼠的效應(yīng)評(píng)價(jià)在以高膽固醇血癥飲食喂養(yǎng)的人apoB-100轉(zhuǎn)基因LDL受體敲除小鼠中ISIS233693作為脂質(zhì)降低劑的效應(yīng)。這些研究中所用的小鼠已描述于先前的公布Sanan等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.95：4544–4549)中。簡(jiǎn)言之，該小鼠品系是最初由Ishibashi等人(J.Clin.Invest.92：883–893)所述的LDLr–/–小鼠(其是129sv和C57BL/6品系的雜種)與人apoB-100轉(zhuǎn)基因小鼠(Linton等人，J.Clin.Invest.92：3029–3037)(其是SJL和C57BL/6B品系的雜種)之間雜交的雜種。繁殖顯示LDLr–/–和apoB過表達(dá)性狀是純合的，并且小鼠展示出含有apoB-100的LDL大量增加。處理將小鼠喂養(yǎng)HarlanTekland飲食、TD88137或‘Western飲食’(21％無水乳脂(butterfat)、34％蔗糖和總計(jì)0.2％的膽固醇)。起始飲食1周后，將小鼠分組以用于處理，每組包括5只小鼠。第一隊(duì)列接受皮下注射ISIS233693(SEQIDNo：131)，以12.5mg/kg、25mg/kg或50mg/kg的劑量每周兩次，持續(xù)4周。第二隊(duì)列接受皮下注射對(duì)照寡核苷酸、ISIS141923(SEQIDNO：187)，以12.5mg/kg或50mg/kg的劑量每周兩次，持續(xù)4周。將寡核苷酸溶于鹽水用于注射。一組高脂肪喂養(yǎng)的動(dòng)物接受注射鹽水，每周兩次，持續(xù)4周。鹽水注射組用作對(duì)照組，將其與寡核苷酸處理組相比較。每周對(duì)小鼠稱重。在處理期結(jié)束時(shí)，對(duì)小鼠實(shí)施安樂死，收集血樣、肝、腎、脾和脂肪墊以用于進(jìn)一步分析。RNA分析從肝組織萃取RNA，并且使用ANGPTL3引物探針組(前向序列CACCTGGGCAGTCACGAAA，在本文被稱為SEQIDNO：187；反向序列GGAGGGCCCCAGGGATAT，在本文被稱為SEQIDNO：188；探針序列CACGCTACATGTGGCTGAGATTCGTGG，在本文被稱為SEQIDNO：189)進(jìn)行ANGPTL3的實(shí)時(shí)PCR分析以及使用ApoCIII引物探針組(前向：TGCAGGGCTACATGGAACAA，以SEQIDNO：12并入本文；反向：CGGACTCCTGCACGCTACTT，以SEQIDNO：13并入本文；探針：CTCCAAGACGGTCCAGGATGCGC，以SEQIDNO：14并入本文)進(jìn)行ApoCIIImRNA的實(shí)時(shí)PCR分析。結(jié)果以相對(duì)于PBS對(duì)照的鼠ANGPTL3和鼠ApoCIII的抑制百分比呈示。如示于表21中，用ISIS233693和ISIS233725的處理導(dǎo)致ANGPTL3mRNA相比于PBS對(duì)照的顯著的劑量依賴性減少。以50mg/kg/周用ISIS233693的處理也導(dǎo)致ApoCIIImRNA的抑制。肝脂肪酸結(jié)合蛋白(LFABP)的RNA水平也通過實(shí)時(shí)PCR測(cè)量。結(jié)果示于表21中，并且表明ISIS寡核苷酸對(duì)ANGPTL3的抑制也通過抑制LFABP來影響脂肪酸在肝中的轉(zhuǎn)運(yùn)。用寡核苷酸、ISIS141923的處理并未導(dǎo)致ANGPTL3、LFABP或apoCIII的顯著減少，如所期望的。表21小鼠肝中相對(duì)于PBS對(duì)照的ANGPTL3和LFABPmRNA的抑制百分比膽固醇和脂質(zhì)水平通過Bligh和Dyer的方法(Bligh，E和Dyer，W，CanJBiochemPhysiol，37，911-917，1959)萃取血漿和肝甘油三酯以及膽固醇，并且借助于市售可得的甘油三酯試劑盒(DCL甘油三酯試劑；DiagnosticChemicalsLtd.)。結(jié)果示于表22中。研究表明，以25mg/kg/周用ISIS233693和ISIS233725的處理分別使膽固醇水平相比于PBS對(duì)照減少63％和37％?？偰懝檀妓降臏p少主要是LDL膽固醇水平相比于對(duì)照分別顯著減少63％和34％的結(jié)果，如所示的。HDL的輕微減少可能是小鼠模型依賴性的，如先前詳述當(dāng)在小鼠中測(cè)試高脂血癥藥時(shí)通常在小鼠中觀察到HDL降低。研究表明，以25mg/kg/周用ISIS233693和ISIS233725的處理使甘油三酯水平相對(duì)于PBS分別減少82％和70％。因此，用靶向ANGPTL3的ISIS寡核苷酸的處理引起該小鼠模型中血漿脂質(zhì)特性的顯著提高。表22對(duì)血漿脂質(zhì)水平(mg/dL)的效應(yīng)葡萄糖為了評(píng)價(jià)ISIS寡核苷酸對(duì)葡萄糖生成的效應(yīng)，血漿葡萄糖值使用Beckman葡萄糖分析儀II(BeckmanCoulter)通過葡萄糖氧化酶法來測(cè)量。結(jié)果示于表23中，并且表明以50mg/kg/周用ISIS233693和ISIS233725的處理導(dǎo)致血漿葡萄糖水平相比于PBS對(duì)照均減少40％。表23對(duì)血漿葡萄糖水平(mg/dL)的效應(yīng)肝功能為了評(píng)價(jià)ISIS寡核苷酸對(duì)肝功能的效應(yīng)，使用自動(dòng)臨床化學(xué)分析儀(HitachiOlympusAU400e，Melville，NY)測(cè)量轉(zhuǎn)氨酶血漿濃度。測(cè)量ALT(丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶)和AST(天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶)的血漿濃度并且結(jié)果示于表24中，以IU/L表示。如本研究所示，用ISIS233693的處理未引起轉(zhuǎn)氨酶水平的任何顯著增加，因此未導(dǎo)致對(duì)肝功能的任何副作用。該測(cè)定以及RNA分析確立ISIS233693是有效且可耐受的靶向ANGPTL3的反義寡核苷酸。表24對(duì)血漿轉(zhuǎn)氨酶(IU/L)的效應(yīng)體重和器官重量為了評(píng)價(jià)ISIS寡核苷酸對(duì)器官重量的效應(yīng)，在研究結(jié)束后收獲器官并且稱重。結(jié)果示于表25中，并且表明用ISIS寡核苷酸的處理對(duì)肝重、脾重或腎重沒有影響。以50mg/kg/周用ISIS233693的處理確實(shí)使小鼠的脂肪墊重相比于PBS對(duì)照減少77％。表25對(duì)器官重量(g)的影響實(shí)施例11：C57BL/6小鼠中ANGPTL3的反義抑制相比于非諾貝特抑制的效應(yīng)通過與非諾貝特比較在首次接受試驗(yàn)的C57BL/6小鼠中評(píng)價(jià)靶向小鼠ANGPTL3的ISIS233693。非諾貝特是市售可得的用于受試者中的高膽固醇血癥和高甘油三酯血癥的治療，并且已知可減少膽固醇、低密度脂蛋白(LDL)、極低密度脂蛋白(VLDL)和甘油三酯水平以及增加高密度脂蛋白(HDL)水平。用ISIS233693(SEQIDNO：131)注射一組喂養(yǎng)正常飼料的5只雄性C57BL/6小鼠，以50mg/kg的劑量每周兩次，持續(xù)6周。第二組小鼠用非諾貝特處理，每日管飼施用50mg/kg/周。一組動(dòng)物接受注射PBS，每周兩次，持續(xù)6周。PBS注射組用作對(duì)照組，將其與寡核苷酸處理組相比較。6周處理期后，處死小鼠，并且評(píng)價(jià)肝中的ANGPTL3mRNA水平。通過實(shí)時(shí)PCR定量mRNA表達(dá)水平，如本文其它實(shí)施例中所述。相對(duì)于PBS處理的小鼠，ISIS233693引起ANGPTL3mRNA水平減少85％。數(shù)據(jù)表明，ANGPTL3反義寡核苷酸處理可有效地抑制肝中的靶mRNA表達(dá)。膽固醇和脂質(zhì)水平通過Bligh和Dyer的方法(Bligh，E和Dyer，W，CanJBiochemPhysiol，37，911-917，1959)萃取血漿和肝甘油三酯以及膽固醇，并且借助于市售可得的甘油三酯試劑盒(DCL甘油三酯試劑；DiagnosticChemicalsLtd.)。結(jié)果示于表26中。研究表明，以50mg/kg/周用ISIS233693的處理使膽固醇水平相比于PBS對(duì)照減少23％。研究表明，以50mg/kg/周用ISIS233693的處理使甘油三酯水平相比于PBS對(duì)照減少38％。用非諾貝特的處理對(duì)膽固醇或甘油三酯水平?jīng)]有影響。因此，用靶向ANGPTL3的ISIS寡核苷酸的處理引起該小鼠模型中血漿脂質(zhì)特性的顯著提高。表26對(duì)血漿脂質(zhì)水平(mg/dL)的效應(yīng)葡萄糖為了評(píng)價(jià)ISIS寡核苷酸對(duì)葡萄糖生成的效應(yīng)，血漿葡萄糖值使用Beckman葡萄糖分析儀II(BeckmanCoulter)通過葡萄糖氧化酶法來測(cè)量。結(jié)果示于表27中，并且表明以50mg/kg/周用ISIS233693的處理導(dǎo)致血漿葡萄糖水平相比于PBS對(duì)照減少19％。用非諾貝特的處理對(duì)葡萄糖水平?jīng)]有影響。表27對(duì)血漿葡萄糖水平(mg/dL)的效應(yīng)葡萄糖PBS242ISIS233693196非諾貝特228肝功能為了評(píng)價(jià)ISIS寡核苷酸對(duì)肝功能的效應(yīng)，使用自動(dòng)臨床化學(xué)分析儀(HitachiOlympusAU400e，Melville，NY)測(cè)量轉(zhuǎn)氨酶血漿濃度。測(cè)量ALT(丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶)和AST(天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶)的血漿濃度并且結(jié)果示于表28中，以IU/L表示。如本研究所示，用ISIS233693或非諾貝特的處理未引起轉(zhuǎn)氨酶水平的任何顯著增加，因此未導(dǎo)致對(duì)肝功能的任何副作用。表28對(duì)血漿轉(zhuǎn)氨酶(IU/L)的效應(yīng)對(duì)血漿NEFA和3HB水平的效應(yīng)測(cè)定小鼠組中的NEFA和3-HB水平，并且示于表29中。作為脂肪氧化指示劑的NEFA和3-HB水平未被用ISIS寡核苷酸的處理顯著影響。用非諾貝特的處理增加脂肪氧化，如NEFA和3HB兩者的水平增加所示。表29對(duì)NEFA和3HB水平的效應(yīng)NEFA3HBPBS0.90393ISIS2336930.98447非諾貝特1.20641器官重量為了評(píng)價(jià)ISIS寡核苷酸對(duì)器官重量的效應(yīng)，在研究結(jié)束后收獲器官并且稱重。結(jié)果示于表30中，并且表明用ISIS233693的處理對(duì)肝重、脾重或腎重沒有影響。以50mg/kg/周用ISIS233693的處理確實(shí)使小鼠的白脂肪組織重量相比于PBS對(duì)照減少45％.表30對(duì)器官重量(g)的影響實(shí)施例12：Sprague-Dawley大鼠中ANGPTL3的反義抑制的效應(yīng)評(píng)價(jià)SpragueDawley大鼠中的ISIS360363(GTGACATATTCTTCACCTCT；SEQIDNO：191)和ISIS360382(TTTAAGTGACGTTACCTCTG；SEQIDNO：192)，兩個(gè)5-10-5MOE缺口基體分別在起始位置333和476靶向大鼠mRNA序列SEQIDNO：193(Genbank登記號(hào)XM_233218.1)。用ISIS360363或ISIS360382注射兩組喂養(yǎng)正常飼料的SpragueDawley大鼠，以50mg/kg每周一次，持續(xù)6周。一組動(dòng)物接受注射PBS，每周兩次，持續(xù)6周。PBS注射組用作對(duì)照組，將其與寡核苷酸處理組相比較。RNA分析從肝組織萃取RNA，以用于ANGPTL3的實(shí)時(shí)PCR分析。結(jié)果以相對(duì)于PBS對(duì)照的大鼠ANGPTL3抑制百分比表示。如示于表31中，用ISIS360363和ISIS360382的處理導(dǎo)致ANGPTL3mRNA相比于PBS對(duì)照的顯著減少。表31SpragueDawley大鼠肝中相對(duì)于PBS對(duì)照的ANGPTL3mRNA抑制ISISNo抑制％3603637036038289膽固醇和脂質(zhì)水平通過Bligh和Dyer的方法(Bligh，E和Dyer，W，CanJBiochemPhysiol，37，911-917，1959)萃取血漿和肝甘油三酯以及膽固醇，并且借助于市售可得的甘油三酯試劑盒(DCL甘油三酯試劑；DiagnosticChemicalsLtd.)。結(jié)果示于表26中。研究表明，以50mg/kg/周用ISIS360363和360382的處理使膽固醇水平相比于PBS對(duì)照分別減少67％和81％。因此，用靶向ANGPTL3的ISIS寡核苷酸的處理引起該大鼠模型中的血漿甘油三酯特性的顯著改善。該模型中用ISIS寡核苷酸的處理對(duì)總膽固醇或LDL水平?jīng)]有影響。表32對(duì)血漿甘油三酯水平(mg/dL)的效應(yīng)PBS136ISIS36036345ISIS36038226當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3