專利名稱：一種鵝去氧膽酸的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種鵝去氧膽酸(3α，7α-二羥基-5β-膽甾烷酸)的制備方法，尤其涉及一種從家禽或動(dòng)物的膽汁中提取鵝去氧膽酸的方法。
背景技術(shù)：
鵝去氧膽酸(3α，7α-二羥基-5β-膽甾烷酸)Chenodeoxycholic Acid(簡稱CDCA)，是一種治療膽結(jié)石的藥物。1848年首次發(fā)現(xiàn)在鵝膽汁中，1924年定名為鵝去氧膽酸。其通過減少膽固醇吸收、合成，使膽汁內(nèi)膽固醇下降，從而阻抑膽固醇結(jié)石形成和促其溶解，并且能有效降低膽固醇飽和度。
鵝去氧膽酸除本身的藥用外，還可作為制取熊去氧膽酸(3α，7β-二羥基-5β-膽烷酸，簡稱UDCA)的原料。熊去氧膽酸是名貴中藥熊膽所含的主要有效成分，在臨床上用于治療各種膽疾及消化道疾病。但是中藥熊膽來源有限，而且有違于動(dòng)物保護(hù)原則。所以，天然熊膽的來源日趨減少，不能滿足醫(yī)療要求。因此，制備鵝去氧膽酸對(duì)于進(jìn)一步制備熊去氧膽酸也具有重要的意義。
CDCA主要由家禽的膽汁或動(dòng)物膽汁中提取，過去的提取方法由于涉及有毒化學(xué)品(動(dòng)物生化制藥學(xué)，1981，人民衛(wèi)生出版社，P259；醫(yī)藥工業(yè)，1987，18(2)75-76；)或使用大量不安全有機(jī)溶劑(中國生化藥物雜志，1996，17(1)17；應(yīng)用技術(shù)，1998，49-10；US Patent，3,965,131；US Patent，4,331,607；USPatent，4,163,017)，不能適應(yīng)現(xiàn)代工業(yè)的要求，而且制備的CDCA純度低，成本高。

發(fā)明內(nèi)容
為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，采用安全無毒、簡單實(shí)用的方法，得到純度較高的鵝去氧膽酸，本發(fā)明提供了一種可用于大規(guī)模制備高純度鵝去氧膽酸的方法。
本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的以家禽膽汁為例，本發(fā)明的制備方法包括以下步驟(1)總膽汁酸的鈣鹽制備取新鮮或冷凍鴨膽汁或其它家禽膽汁，按其體積以1-3mol/L在膽汁中加入工業(yè)氫氧化鈉，加熱煮沸3-24小時(shí)，進(jìn)行皂化，按膽汁體積12-20％加入CaCl2攪拌30-60分鐘，離心過濾，收集沉淀。
(2)脫色與沉淀轉(zhuǎn)化將濾餅懸浮于3-10量倍量的水中，加入雙氧水使?jié)舛冗_(dá)到混懸液體積的0.1-2％，然后按膽汁重量的6-12％加入碳酸鈉固體，使沉淀轉(zhuǎn)化，過濾，收集濾液；濾餅用少量水洗滌，合并濾液與洗滌液，加鹽酸至pH1-5之間，攪拌30分鐘，放置，充分沉淀，離心過濾，收集濾餅，即得粗制鵝去氧膽酸。將粗品按濕重加3-10倍水混懸，用NaOH調(diào)至固體物溶解，按粗品濕重的1∶0.1-0.5加入無水氯化鈣使之形成鈣鹽沉淀，過濾，將其沉淀懸于3-10倍體積的1-6mol/LHCl中，使鈣鹽沉淀轉(zhuǎn)化為游離的CDCA。
(3)大孔吸附劑層析純化將前述制得的初步純化的CDCA粗品按1∶4-1∶8的比例，用95％(V/V-)酒精溶解，調(diào)整酒精濃度至30-50％，上經(jīng)相同濃度酒精平衡的過大孔吸附樹脂(所用大孔吸附樹脂是指具有苯乙烯-二乙烯苯，丙烯酸-甲基丙烯酸酯型結(jié)構(gòu)的各型樹脂)，流速按層析柱液體流動(dòng)線性速度1.0-5.0cm/分控制，接著用2-5倍柱體積的50％酒精溶液洗滌，繼之用60％乙醇洗脫，其間不斷用薄層層析檢測(cè)，待出現(xiàn)外觀純一的CDCA斑點(diǎn)時(shí)開始收集洗脫液直至完畢。將經(jīng)薄層檢定外觀為CDCA純點(diǎn)的洗脫液合并，加0.1-1％活性碳脫色后，于真空下蒸發(fā)回收酒精，得到無定型CDCA結(jié)晶，將此無定型結(jié)晶置60-80℃水浴中培育24小時(shí)，取出后置于60℃真空干燥16-20小時(shí)，可得到純度為95％左右，熔點(diǎn)在120-140℃ CDCA結(jié)晶。該結(jié)晶可使用公知的方法，進(jìn)一步制備熔點(diǎn)在160-170℃的CDCA結(jié)晶(USPatent，4,213,911；US Patent，4,022,806；US Patent.4,163,017)。
對(duì)于動(dòng)物膽汁，將膽紅素提取后的殘?jiān)礉裰?∶4加水懸浮，照家禽膽汁相同的方法進(jìn)行皂化，其后的步聚完全相同。
具體實(shí)施例方式
下面通過具體實(shí)施例對(duì)本方法作進(jìn)一步說明。
實(shí)施例1取新鮮或冷凍鴨膽汁，鵝膽汁或其它家禽膽汁，按其體積加入工業(yè)氫氧化鈉至2mol/L，加熱煮沸5小時(shí)，進(jìn)行皂化，按膽汁體積15％加入CaCl2攪拌30鐘，離心過濾，收集沉淀。
將濾餅懸浮于8量倍量的水中，加入雙氧水使?jié)舛冗_(dá)到混懸液體積的1％，然后按膽汁重量的10％加入碳酸鈉固體，使沉淀轉(zhuǎn)化，過濾，收集濾液，濾餅用少量水洗滌，合并濾液與洗滌液，加鹽酸至pH3，攪拌30分鐘，放置，充分沉淀，離心，收集濾餅，即得粗制鵝去氧膽酸。將粗品按濕重加5倍水混懸，用NaOH調(diào)至固體物溶解，按粗品濕重的1∶0.4加入無水氯化鈣使形成鈣鹽沉淀，過濾，將沉淀懸于8倍體積的2 mol/L HCl中，使鈣鹽沉淀轉(zhuǎn)化為游離的CDCA。
將前述制得的初步純化的CDCA粗品按1∶8用95％(V/V)酒精溶解，調(diào)整酒精濃度至40％，上經(jīng)相同濃度酒精平衡的過大孔吸附樹脂，流速按層析柱液體流動(dòng)線性速度1.0cm/分控制，接著用2-5倍柱體積的50％酒精溶液洗滌，繼之用60％乙醇洗脫，其間不斷用薄層層析檢測(cè)，待出現(xiàn)外觀純一的CDCA斑點(diǎn)時(shí)開始收集洗脫液直至完畢。將經(jīng)薄層檢定外觀為CDCA純點(diǎn)的洗脫液合并，加1％活性碳脫色后，于真空下蒸發(fā)回收酒精，得到無定型CDCA結(jié)晶，純度為95％左右，熔點(diǎn)在120-140℃。
實(shí)施例2取豬牛羊動(dòng)物膽汁，按膽紅素提取方法提取膽紅素，將膽紅素提取后的殘?jiān)?，按濕?∶4加水懸浮，照家禽膽汁相同的方法進(jìn)行皂化，其后的步聚完全相同?？傻玫郊兌葹?3％左右的鵝去氧膽酸。
權(quán)利要求
1.一種鵝去氧膽酸(3α，7α-二羥基-5β-膽甾烷酸)的制備方法，其特征是，所用的膽汁為家禽膽汁或動(dòng)物來源的膽汁，包括以下步驟(1)總膽汁酸的鈣鹽制備按膽汁體積以加入1-3mol/L的比例加入工業(yè)氫氧化鈉，加熱煮沸3-24小時(shí)，皂化結(jié)束后按膽汁體積12-20％加入CaCl2；(2)脫色與沉淀轉(zhuǎn)化將鈣鹽濾餅懸浮于3-10倍量的水中，加入工業(yè)雙氧水使?jié)舛冗_(dá)到混懸液體積的0.1-2％進(jìn)行脫色，然后按膽汁重量的6-12％加入碳酸鈉固體，使之沉淀轉(zhuǎn)化；將CDCA粗品加水混懸，用NaOH調(diào)至固體物溶解，按粗品濕重的1∶0.1-0.5加入無水氯化鈣使形成鈣鹽沉淀，將CDCA鈣鹽沉淀懸于1-6mol/L HCl中，使鈣鹽沉淀轉(zhuǎn)化為游離的CDCA；(3)大孔吸附劑層析純化將初步純化的CDCA的粗品用酒精溶解，調(diào)整酒精濃度至30-50％，上大孔吸附樹脂層析柱，用50％酒精溶液洗滌，繼之用60％乙醇洗脫；用薄層層析檢測(cè)外觀純一的CDCA斑點(diǎn)，將經(jīng)薄層檢定為外觀CDCA純點(diǎn)的洗脫液合并，獲得純度為95％CDCA；對(duì)于動(dòng)物膽汁，將膽紅素提取后的殘?jiān)?，按濕?∶4加水懸浮，照家禽膽汁相同的方法進(jìn)行皂化，其后的步聚完全相同。
2.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征是，在總膽汁酸的鈣鹽制備中，按所用膽汁體積加入工業(yè)氫氧化鈉至2mol/L，加熱煮沸5小時(shí)，進(jìn)行皂化，按膽汁體積15％加入CaCl2攪拌30鐘，離心過濾，收集沉淀。
3.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征是，在脫色與沉淀轉(zhuǎn)化步驟中，將濾餅懸浮于8量倍量的水中，加入雙氧水使?jié)舛冗_(dá)到混懸液體積的1％，然后按膽汁重量的10％加入碳酸鈉固體進(jìn)行脫色；將粗品按濕重加5倍水混懸，用NaOH調(diào)至固體物溶解，按粗品濕重的1∶0.4加入無水氯化鈣使形成鈣鹽沉淀，過濾，將沉淀懸于8倍體積的2mol/L HCl中，使鈣鹽沉淀轉(zhuǎn)化為游離的CDCA。
4.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征是，在大孔吸附劑層析純化步驟中，將初步純化的CDCA粗品按1∶8比例用95％(V/V)酒精溶解，調(diào)整酒精濃度至40％。
5.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征是，所用大孔吸附樹脂是指具有苯乙烯-二乙烯苯，丙烯酸-甲基丙烯酸酯型結(jié)構(gòu)的各型樹脂。
全文摘要
本發(fā)明涉及從家禽及動(dòng)物膽汁中提取純化鵝去氧膽酸的工業(yè)化制備方法。其過程包括通過堿液皂化膽汁、制備總膽汁酸的鈣鹽沉淀、雙氧水及活性碳脫色、碳酸鈉及鹽酸轉(zhuǎn)化鵝去氧膽酸鈣鹽沉淀及大孔吸附樹脂純化等步驟。整個(gè)工藝具有環(huán)境友好，安全無毒，低成本，易于大規(guī)模操作的優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)C07J9/00GK1528779SQ0315147
公開日2004年9月15日 申請(qǐng)日期2003年9月29日 優(yōu)先權(quán)日2003年9月29日
發(fā)明者曹學(xué)君 申請(qǐng)人:華東理工大學(xué)