本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及三并環(huán)類間變性淋巴瘤激酶抑制劑、其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構(gòu)體，這些化合物的制備方法，含有這些化合物的藥物制劑和藥物組合物，以及該化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構(gòu)體在制備治療和/或預(yù)防由間變性淋巴瘤激酶介導(dǎo)的癌癥相關(guān)疾病的藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

間變性淋巴瘤激酶(Anaplastic lymphoma kinase，ALK)是受體酪氨酸激酶家族成員，可通過自身磷酸化募集下游蛋白，進而表達特定的基因，調(diào)節(jié)細胞代謝和生長。間變性淋巴瘤激酶最早發(fā)現(xiàn)于間變性大細胞淋巴瘤(Anaplastic large cell lymphoma，ALCL)中，后來發(fā)現(xiàn)在非小細胞肺癌(NSCLC)中亦有高表達。ALK在某些ALCL/NSCLC中的異常表達來源于不同的染色體易位。這些染色體易位均可產(chǎn)生相應(yīng)的融合蛋白。對這些融合基因分析表明，它們都含有ALK基因3’端編碼胞內(nèi)激酶區(qū)的基因序列，而與ALK融合的基因片段均含啟動子元件及編碼介導(dǎo)自身二聚化的序列，從而導(dǎo)致細胞內(nèi)具有ALK激酶活性的融合蛋白高表達及過度激活，引起細胞的惡性轉(zhuǎn)化。所以，ALK胞內(nèi)激酶區(qū)的活性及相應(yīng)的信號傳導(dǎo)途徑是導(dǎo)致ALCL形成的重要分子機制。

因此，研發(fā)針對ALK的小分子抑制劑，可以有效的降低突變的ALK基因?qū)ο掠蔚鞍椎挠绊?，進而影響到腫瘤細胞侵襲、增殖等效應(yīng)，最終影響腫瘤細胞的生長，起到抗腫瘤的作用。目前已經(jīng)有輝瑞公司的克唑替尼(Crizotinib)成功上市，但已有大量臨床證明一代ALK抑制劑Crizotinib，容易產(chǎn)生耐藥性，因此，設(shè)計并篩選對Crizotinib產(chǎn)生耐藥的患者也有良好的療效的二代ALK抑制劑，具有顯著的臨床意義。

因此，通過化合物結(jié)構(gòu)修飾尋找新的化合物結(jié)構(gòu)，努力改善化合物的理化性質(zhì)，提高成藥性，如提高化合物的生物利用度，來尋找對ALK突變有活性的小分子抑制劑，對于臨床上因ALK突變引起的疾病的治療，具有重要的意義。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明以開發(fā)針對ALK的小分子抑制劑為目標，發(fā)明了對治療和/或預(yù)防ALK介導(dǎo)的癌癥相關(guān)疾病具有良好效果的三并環(huán)類間變性淋巴瘤激酶抑制劑。具體的技術(shù)方案為如下：

1.通式(Ⅰ)所示的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構(gòu)體：

其中，

R¹選自-COR⁵，-CO₂R⁵，-CONRR⁵，-SOR⁵，-SO₂R⁵、-S(O₂)OR⁵或-SO₂NRR⁵；

R²、R³、R、R⁵獨立地選自氫原子、C_1-6烷基或3～8元碳環(huán)；

R⁴選自氫原子、鹵素原子、氰基、硝基、氨基、羧基、C_1-6烷氧基、C_1-6烷基、羥基C_1-6烷基、鹵代C_1-6烷基、羥基C_1-6烷氧基、鹵代C_1-6烷氧基、C_2-8烯基、C_2-8炔基、C_1-6烷基氨基、C_1-6烷基羰基、C_1-6烷基羰基氧基、(C_1-6烷基)₂氨基、氨基C_1-6烷基或磺?；鵆_1-6烷基；

A環(huán)選自任選被1～3個Q₁取代的3～8元環(huán)烷基或3～8元雜環(huán)基，所述的取代基Q₁選自羥基、氨基、羧基、氰基、硝基、鹵素原子、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6烷基氨基、(C_1-6烷基)₂氨基、鹵代C_1-6烷基、鹵代C_1-6烷氧基、C_1-6烷氧基C_1-6烷基、C_2-8烯基、C_2-8炔基或3～8元雜環(huán)基；

B環(huán)選自任選被1～3個Q₂取代的3～8元雜環(huán)基，或任選被1～3個Q₂取代的5～14元雜芳基，所述的取代基Q₂選自羥基、氨基、羧基、氰基、硝基、鹵素原子、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6烷基氨基、(C_1-6烷基)₂氨基、鹵代C_1-6烷基、鹵代C_1-6烷氧基、C_1-6烷氧基C_1-6烷基、C_1-6烷氧基C_1-6烷氧基、C_2-8烯基、C_2-8炔基或3～8元雜環(huán)基。

2.如技術(shù)方案1所述的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構(gòu)體，其中，

R¹選自-CONRR⁵，-SO₂R⁵或-SO₂NRR⁵，

R、R⁵獨立地選自C_1-6烷基；

R²、R³獨立地選自氫原子或C_1-6烷基；

R⁴選自氫原子、鹵素原子、氰基、硝基、氨基、羧基、C_1-6烷氧基或C_1-6烷基；

A環(huán)選自任選被1～2個Q₁取代的4～7元環(huán)烷基或4～7元雜環(huán)基，所述的取代基Q₁選自羥基、氨基、羧基、氰基、硝基、鹵素原子或C_1-6烷基；

B環(huán)選自任選被1～2個Q₂取代的5～6元雜環(huán)基，或任選被1～2個Q₂取代的5～6元雜芳基，所述的取代基Q₂選自羥基、氨基、羧基、氰基、硝基、鹵素原子或C_1-6烷基。

3.如技術(shù)方案2所述的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構(gòu)體，其中，

R¹選自-SO₂R⁵或-SO₂NRR⁵，

R、R⁵獨立地選自C_1-6烷基；

R²、R³獨立地選自氫原子或C_1-6烷基；

R⁴選自鹵素原子；

A環(huán)選自任選被1～2個Q₁取代的5～6元雜環(huán)基，所述的取代基Q₁選自羥基、氨基、羧基、氰基、硝基、鹵素原子或C_1-4烷基；

B環(huán)選自任選被1～2個Q₂取代的5～6元雜環(huán)基，所述的取代基Q₂選自羥基、氨基、羧基、氰基、硝基、鹵素原子或C_1-4烷基。

4.如技術(shù)方案3所述的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構(gòu)體，其中，

R¹選自-SO₂R⁵，

R⁵獨立地選自C_1-4烷基；

R²、R³獨立地選自氫原子或C_1-4烷基；

R⁴選自鹵素原子；

A環(huán)選自任選被1～2個Q₁取代的含1～2個O和/或S原子的5～6元雜環(huán)基，所述的取代基Q₁選自羥基、氨基、羧基、氰基、硝基、鹵素原子或C_1-4烷基；

B環(huán)選自任選被1～2個Q₂取代的含1～2個N原子的5～6元雜環(huán)基，所述的取代基Q₂選自羥基、氨基、羧基、氰基、硝基、鹵素原子或C_1-4烷基。

5.如技術(shù)方案3所述的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構(gòu)體，其中，

R¹選自-SO₂R⁵,

R⁵獨立地選自甲基、乙基或異丙基；

R²、R³獨立地選自氫原子或甲基；

R⁴選自氯原子；

A環(huán)選自任選被1～2個Q₁取代的含1～2個O和/或S原子的5～6元雜環(huán)基，所述的取代基Q₁選自羥基、氨基、鹵素原子或C_1-4烷基；

B環(huán)選自任選被1～2個Q₂取代的哌啶基、哌嗪基、嗎啉基、吡咯烷基、二氫吡咯基、四氫呋喃基、四氫吡喃基或1,4-二氧雜環(huán)己烷基，所述的取代基Q₂選自甲基、乙基、正丙基、異丙基或正丁基。

6.如技術(shù)方案1所述的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構(gòu)體，其中，

R¹選自-SO₂R⁵或-SO₂NRR⁵，

R、R⁵獨立地選自C_1-6烷基；

R²、R³獨立地選自氫原子或C_1-6烷基；

R⁴選自氫原子、鹵素原子、氨基、C_1-6烷氧基或C_1-6烷基；

A環(huán)選自任選被1～2個Q₁取代的5～6元飽和雜環(huán)基，所述的取代基Q₁選自羥基、氨基、羧基、氰基、硝基、鹵素原子或C_1-6烷基；

B環(huán)選自任選被1～2個Q₂取代的5～6元飽和雜環(huán)基，所述的取代基Q₂選自羥基、氨基、羧基、氰基、硝基、鹵素原子或C_1-6烷基。

7.如技術(shù)方案6所述的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構(gòu)體，其中，

A環(huán)選自任選被1～2個Q₁取代的含1～2個O、S和/或N原子的5～6元飽和雜環(huán)基，所述的取代基Q₁選自羥基、氨基、羧基、氰基、硝基、鹵素原子或C_1-6烷基；

B環(huán)選自任選被1～2個Q₂取代的含1～2個O、S和/或N原子的5～6元飽和雜環(huán)基，所述的取代基Q₂選自羥基、氨基、羧基、氰基、硝基、鹵素原子或C_1-6烷基。

8.如技術(shù)方案7所述的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構(gòu)體，其中，

A環(huán)選自任選被1～2個Q₁取代的含1～2個O和/或S原子的5～6元飽和雜環(huán)基，所述的取代基Q₁選自羥基、氨基、羧基、氰基、硝基、鹵素原子或C_1-6烷基；

B環(huán)選自任選被1～2個Q₂取代的含1～2個N原子的5～6元飽和雜環(huán)基，所述的取代基Q₂選自羥基、氨基、羧基、氰基、硝基、鹵素原子或C_1-6烷基。

9.如技術(shù)方案8所述的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構(gòu)體，其中，

A環(huán)選自任選被1～2個Q₁取代的含1～2個O和/或S原子的5元飽和雜環(huán)基，所述的取代基Q₁選自羥基、氨基、羧基、氰基、硝基、鹵素原子或C_1-6烷基；

B環(huán)選自任選被1～2個Q₂取代的含1～2個N原子的5元飽和雜環(huán)基，所述的取代基Q₂選自羥基、氨基、羧基、氰基、硝基、鹵素原子或C_1-6烷基。

10.如技術(shù)方案8所述的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構(gòu)體，其中，

A環(huán)選自任選被1～2個Q₁取代的含1個O原子的5～6元飽和雜環(huán)基，所述的取代基Q₁選自羥基、氨基、羧基、氰基、硝基、鹵素原子或C_1-6烷基；

B環(huán)選自任選被1～2個Q₂取代的含1個N原子的5～6元飽和雜環(huán)基，所述的取代基Q₂選自羥基、氨基、羧基、氰基、硝基、鹵素原子或C_1-6烷基。

本發(fā)明的部分化合物

發(fā)明詳述

本發(fā)明所述的“鹵素原子”包括氟原子、氯原子、溴原子和碘原子等。

本發(fā)明所述的“C_1-6烷基”表示直鏈或支鏈的含有1-6個碳原子的烷基，包括例如“C_1-4烷基”、“C_1-3烷基”等，具體實例包括但不限于：甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、2-甲基丙基、1-甲基丙基、1,1-二甲基乙基、正戊基、3-甲基丁基、2-甲基丁基、1-甲基丁基、1-乙基丙基、正己基、4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、3,3-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、1,2-二甲基丙基等。

本發(fā)明所述的“C_2-8烯基”是指含有至少一個雙鍵的碳原子數(shù)為2-8的直鏈或支鏈或環(huán)狀的烯基，包括例如“C_2-6烯基”、“C_2-4烯基”、“C_2-3烯基”、“C_3-6環(huán)烯基”等，具體實例包括但不限于：乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、2-甲基-1-丙烯基、1-甲基-2-丙烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、2-甲基-1-丁烯基、3-甲基-1-丁烯基、2-甲基-3-丁烯基、1,1-二甲基-2-丙烯基、1-乙基-2-丙烯基、2-己烯基、3-己烯基、2-甲基-1-戊烯基、3-甲基-1-戊烯基、1-甲基-2-戊烯基、3-甲基-2-戊烯基、2-甲基-3-戊烯基、1-甲基-4-戊烯基、3-甲基-4-戊烯基、1,1-二甲基-3-丁烯基、1,2-二甲基-3-丁烯基、1,3-二甲基-2-丁烯基、2,2-二甲基-3-丁烯基、2,3-二甲基-2-丁烯基、2,3-二甲基-1-丁烯基、2-乙基-1-丁烯基、2-乙基-3-丁烯基、2-庚烯基、3-庚烯基、4-庚烯基、1-辛烯基、3-辛烯基、4-辛烯基、1,3-丁二烯基、2,4-戊二烯基、1,4-己二烯基、2,4-己二烯基、1,5-庚二烯基、2,5-庚二烯基、2,6-辛二烯基、環(huán)戊烯基、1,3-環(huán)戊二烯基、環(huán)己烯基、1,4-環(huán)己二烯基、環(huán)庚烯基、1,4-環(huán)庚二烯基、環(huán)辛烯基等。

本發(fā)明所述的“C_2-8炔基”是指含有三鍵的碳原子數(shù)為2-8的直鏈或支鏈的炔基，其中包括例如“C_2-6炔基”、“C_2-4炔基”、“C_2-3炔基”等，具體實例包括但不限于：乙炔基、1-丙炔基、2-丁炔基、1-甲基-2-丙炔基、2-戊炔基、3-戊炔基、1-甲基-2-丁炔基、2-甲基-3-丁炔基、1,1-二甲基-2-丙炔基、1-乙基-2-丙炔基、2-己炔基、3-己炔基、1-甲基-2-戊炔基、1-甲基-3-戊炔基、2-甲基-3-戊炔基、1,1-二甲基-3-丁炔基、2-乙基-3-丁炔基、2-庚炔基、3-庚炔基、4-甲基-2-己炔基、5-甲基-2-己炔基、2-甲基-3-己炔基、5-甲基-3-己炔基、2-甲基-4-己炔基4-甲基-5-己炔基、2-辛炔基、3-辛炔基、4-辛炔基、4-甲基-2-庚炔基、5-甲基-3-庚炔基、6-甲基-3-庚炔基、2-甲基-4-庚炔基、2-甲基-5-庚炔基、3-甲基-6-庚炔基等。

本發(fā)明所述的“C_1-6烷氧基、C_1-6烷基氨基、(C_1-6烷基)₂氨基、C_1-6烷基硫基、C_1-6烷基羰基、C_1-6烷基羰基氧基”是指以C_1-6烷基-O-、C_1-6烷基-NH-、(C_1-6烷基)₂-N-、C_1-6烷基-S-、C_1-6烷基-C(O)-、C_1-6烷基-C(O)-O-方式形成的基團，其中“C_1-6烷基”的定義如前文所述。

本發(fā)明所述的“C_1-4烷氧基、C_1-4烷基氨基、(C_1-4烷基)₂氨基、C_1-4烷基硫基、C_1-4烷基羰基、C_1-4烷基羰基氧基是指以C_1-4烷基-O-、C_1-4烷基-NH-、(C_1-4烷基)₂-N-、C_1-4烷基-S-、C_1-4烷基-C(O)-、C_1-4烷基-C(O)-O-方式形成的基團，其中“C_1-4烷基”的定義如前文所述。

本發(fā)明所述的“鹵代C_1-6烷基、羥基C_1-6烷基、氨基C_1-6烷基、磺?；鵆_1-6烷基、C_1-6烷氧基C_1-6烷基、鹵代C_1-6烷氧基、羥基C_1-6烷氧基、C_1-6烷氧基C_1-6烷氧基”是指一至多個，例如1～4個、1～3個、1～2個鹵素原子、羥基、氨基、磺?；?、C_1-6烷氧基分別取代C_1-6烷基、C_1-6烷氧基中的氫原子所形成的基團。

本發(fā)明所述的“鹵代C_1-4烷基、羥基C_1-4烷基、氨基C_1-4烷基、磺?；鵆_1-4烷基、C_1-4烷氧基C_1-4烷基、鹵代C_1-4烷氧基、羥基C_1-4烷氧基、C_1-4烷氧基C_1-4烷氧基”是指一至多個， 例如1～4個、1～3個、1～2個鹵素原子、羥基、氨基、磺?；_1-4烷氧基分別取代C_1-4烷基、C_1-4烷氧基中的氫原子所形成的基團。

本發(fā)明所述的“3～8元環(huán)烷基”，是指3～8個碳原子的烷烴部分去除一個氫原子衍生的單環(huán)環(huán)狀烷基，包括例如“3～6元環(huán)烷基”、“4～7元環(huán)烷基”、“4～8元環(huán)烷基”、“4～6元環(huán)烷基”、“5～6元環(huán)烷基”等。其實例包括但不限于：環(huán)丙烷基、環(huán)丁烷基、環(huán)戊烷基、環(huán)己烷基、環(huán)庚烷基、環(huán)辛烷基、甲基環(huán)丙烷基、二甲基環(huán)丙烷基、甲基環(huán)丁烷基、二甲基環(huán)丁烷基、甲基環(huán)戊烷基、二甲基環(huán)戊烷基、甲基環(huán)己烷基、二甲基環(huán)己烷基等。

本發(fā)明所述的“雜原子”是指N、O、C(O)、S、SO和/或SO₂等，優(yōu)選N、O、S，更優(yōu)選N、O。

本發(fā)明所述的“3～8元雜環(huán)基”是指含有3～8個環(huán)原子、且含有至少一個雜原子(例如1、2、3、4或5個雜原子)的飽和或部分飽和的單環(huán)雜環(huán)化合物除去一個氫原子得到的基團，包括例如“3～7元雜環(huán)基”、“3～6元雜環(huán)基”、“4～7元雜環(huán)基”、“4～6元雜環(huán)基”、“5～6元雜環(huán)基”、“5～6元含氮雜環(huán)基”、“6元含氮雜環(huán)基”、“含1～2個N原子的5～6元雜環(huán)基”、“含1～2個N原子的5元雜環(huán)基”、“含1～2個O和/或S原子的5～6元雜環(huán)基”、“含1～2個O和/或S原子的5元雜環(huán)基”、“含1～2個O、S和/或N原子的5～6元飽和雜環(huán)基”、“含1～2個O和/或S原子的5～6元飽和雜環(huán)基”、“含1～2個N原子的5～6元飽和雜環(huán)基”、“含1～2個O和/或S原子的5元飽和雜環(huán)基”、“含1～2個N原子的5元飽和雜環(huán)基”、“含1個O原子的5～6元飽和雜環(huán)基”、“含1個N原子的5～6元飽和雜環(huán)基”等。具體實例包括但不僅限于：氮雜環(huán)丙烷基、2H-氮雜環(huán)丙烷基、二氮雜環(huán)丙烷基、3H-二氮雜環(huán)丙烯基、氮雜環(huán)丁烷基、1,4-二氧雜環(huán)己烷基、1,3-二氧雜環(huán)己烷基、1,3-二氧雜環(huán)戊烷基、1,4-二氧雜環(huán)己二烯基、四氫呋喃基、四氫吡喃基、二氫吡咯基、吡咯烷基、咪唑烷基、4,5-二氫咪唑基、吡唑烷基、4,5-二氫吡唑基、2,5-二氫噻吩基、四氫噻吩基、4,5-二氫噻唑基、哌啶基、哌嗪基、嗎啉基、4,5-二氫噁唑基、4,5-二氫異噁唑基、2,3-二氫異噁唑基、2H-1,2-噁嗪基、6H-1,3-噁嗪基、4H-1,3-噻嗪基、6H-1,3-噻嗪基、2H-吡喃基、2H-吡喃-2-酮基、3,4-二氫-2H-吡喃基等。

“3～8元碳環(huán)”是指含有3～8個碳原子的飽和、部分飽和或不飽和的單環(huán)化合物。包括例如“3～7元碳環(huán)”、“3～6元碳環(huán)”、“4～7元碳環(huán)”、“4～6元碳環(huán)”、“5～6元碳環(huán)”等。具體實例包括但不僅限于：環(huán)丙烷基、環(huán)丁烷基、環(huán)戊烷基、環(huán)己烷基、環(huán)庚烷基、環(huán)辛烷基、環(huán)戊烯基、1,3-環(huán)戊二烯基、環(huán)己烯基、1,4-環(huán)己二烯基、環(huán)庚烯基、1,4-環(huán)庚二烯基、環(huán)辛烯基、苯基等。優(yōu)選“5～6元飽和或部分飽和的碳環(huán)”。

本發(fā)明還提供了上述化合物的制備方法，但不僅限于以下方法，反應(yīng)方程式如下：

反應(yīng)步驟：

步驟1 中間體1的制備

購買或經(jīng)適當方法制備得到中間體1。

步驟2 中間體2的制備

中間體1溶于溶劑(例如甲醇)中，加入鈀碳，氫氣保護下25℃反應(yīng)(例如15-25小時)，過濾，濃縮得到中間體2。

步驟3 中間體3的制備

將中間體2溶于適當溶劑(例如乙腈)，冷卻至0℃，加入N-溴代琥珀酰亞胺，室溫攪拌(例如0.5-1.5小時)，反應(yīng)完畢，加水淬滅，有機溶劑(例如乙酸乙酯)萃取，濃縮，經(jīng)純化(例如硅膠柱層析)得到中間體3。

步驟4 中間體4的制備

將中間體3溶于適當溶劑(例如N,N-二甲基甲酰胺)，加入氰化亞銅，150℃反應(yīng)(例如1-3小時)，冷卻，倒入氨水中，有機溶劑(例如乙酸乙酯)萃取，濃縮，經(jīng)純化(例如硅膠柱層析)得到中間體4。

步驟5 中間體5的制備

將中間體4溶于適當溶劑(例如甲醇)，加入氨水(10mL)和雷尼鎳，25℃反應(yīng)(15-25小時)，過濾，濃縮，經(jīng)適當方法得到中間體5。

步驟6 本發(fā)明通式(I)化合物的制備

將中間體5溶于適當溶劑(例如仲戊醇)，加入中間體6和對甲苯磺酸，120℃下攪拌(例 如10-30小時)。加入飽和碳酸氫鈉溶液，有機溶劑(例如乙酸乙酯)萃取，干燥，濃縮，經(jīng)適當方法(例如硅膠柱層析)得到本發(fā)明通式(I)化合物。

反應(yīng)方程式中，R¹、R²、R³、R⁴、A環(huán)和B環(huán)如前文所定義，X代表氟原子、氯原子、溴原子和碘原子。

本發(fā)明式(I)化合物的“立體異構(gòu)體”是指當式(I)化合物存在不對稱碳原子時，會產(chǎn)生對映異構(gòu)體，當化合物存在碳碳雙鍵或環(huán)狀結(jié)構(gòu)時，會產(chǎn)生順反異構(gòu)體，當化合物存在酮或肟時，會產(chǎn)生互變異構(gòu)體，所有式(I)化合物的對映異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體、消旋異構(gòu)體、順反異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、幾何異構(gòu)體、差向異構(gòu)體及其混合物，均包括在本發(fā)明范圍中。

本發(fā)明的通式(I)所示的任一化合物合成得到的若是消旋體，所需要的對映體純的化合物可以通過手性拆分的方法得到：可以通過具有手性固定相的色譜法(像高壓制備液相色譜、超臨界流體色譜)。手性填料包括但不限于：Chiralcel OJ-H,Chiralpak AD-H，Chiralpak IA，Chiralpak AS-H。

本發(fā)明的通式(I)所示的任一化合物藥學(xué)上可接受的鹽是指由藥學(xué)上可接受的、非毒性堿或酸制備的鹽，包括有機酸鹽、無機酸鹽、有機堿鹽、無機堿鹽。

有機酸鹽包括甲酸、乙酸、三氟乙酸鹽、苯磺酸、苯甲酸、對甲苯磺酸、樟腦磺酸、檸檬酸、甲磺酸、乙磺酸、丙磺酸、富馬酸、葡糖酸、谷氨酸、羥乙磺酸、乳酸、馬來酸、蘋果酸、扁桃酸、粘酸、雙羥萘酸、泛酸、琥珀酸、酒石酸等的鹽。

無機酸鹽包括氫溴酸、氫氯酸、硝酸、硫酸、磷酸等的鹽。

有機堿鹽包括伯、仲和叔胺，被取代胺包括天然存在的取代胺、環(huán)胺和堿離子交換樹脂，選自甜菜堿、咖啡因、膽堿、N,N’-二芐基乙二胺、二乙胺、2-二乙胺基乙醇、2-二甲胺基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基-嗎啉、N-乙基哌啶、葡甲胺、氨基葡萄糖、海巴明、異丙基胺、甲基葡糖胺、嗎啉、哌嗪、哌啶、普魯卡因、嘌呤、可可堿、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨丁三醇等的鹽。天然氨基酸鹽如甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、正亮氨酸、酪氨酸、胱氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、脯氨酸、羥基脯氨酸、組氨酸、鳥氨酸、賴氨酸、精氨酸、絲氨酸等的鹽。

無機堿鹽包括銨以及鋰、鈉、鉀、鈣、鎂、鋅、鋇、鋁、鐵、酮、亞鐵、錳、二價錳等的鹽。

本發(fā)明式(I)化合物的“酯”是指，當式(I)化合物存在羧基時，可以與醇發(fā)生酯化反應(yīng)而形成的酯，當式(I)化合物存在羥基時，可以有機酸、無機酸、有機酸鹽等發(fā)生酯化反應(yīng)而形成的酯。酯在酸或者堿存在的條件下，可以發(fā)生水解反應(yīng)生成相應(yīng)的 酸或醇。

通式(I)所示的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、酯或其立體異構(gòu)體可以是溶劑化物形式。若溶劑化物是水合物的情況下，水合作用可以在制備過程中完成或者可以利用原始無水產(chǎn)物的吸濕性逐漸進行。

本發(fā)明進一步要求保護包括上述的式(I)所示的任一化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構(gòu)體與一種或多種藥用載體和/或稀釋劑的藥物組合物，可以制成藥學(xué)上可接受的任一劑型。以口服、腸胃外、直腸或經(jīng)肺給藥等方式施用于需要這種治療的患者。用于口服給藥時，可制成常規(guī)的固體制劑，如片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑等；也可制成口服液體制劑，如口服溶液劑、口服混懸劑、糖漿劑等。制成口服制劑時，可以加入適宜的填充劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑等。用于腸胃外給藥時，可制成注射劑，包括注射液、注射用無菌粉末與注射用濃溶液。制成注射劑時，可采用現(xiàn)有制藥領(lǐng)域中的常規(guī)方法生產(chǎn)，配制注射劑時，可以不加入附加劑，也可根據(jù)藥物的性質(zhì)加入適宜的附加劑。用于直腸給藥時，可制成栓劑等。用于經(jīng)肺給藥時，可制成吸入劑或噴霧劑等。

本發(fā)明進一步要求保護包括上面所述的式(I)任一化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構(gòu)體與其它一種或多種抗腫瘤劑和免疫抑制劑的藥物組合物。所述的抗腫瘤劑和免疫抑制劑為抗代謝物，包括但不限于卡培他濱、吉西他濱、培美曲塞二鈉；為生長因子抑制劑，包括但不限于帕唑帕尼、伊馬替尼、埃羅替尼、拉帕替尼、吉非替尼、凡德他尼；為抗體，包括但不限于赫賽汀、貝伐單抗；為有絲分裂抑制劑，選自紫杉醇、長春瑞濱、多西他賽、多柔比星；為抗腫瘤激素類，選自來曲唑、他莫西芬、氟維司群、氟他胺、曲普瑞林；為烷化劑類，包括但不限于環(huán)磷酰胺、氮芥、馬法蘭、瘤可寧、卡莫司??；為金屬鉑類，包括但不限于卡鉑、順鉑、奧沙利鉑；為免疫抑制類，包括但不限于依維莫司、西羅莫司、特癌適；為嘌呤類似物，包括但不限于6-巰基嘌呤、6-硫鳥嘌呤、硫唑嘌呤；為抗生素類，包括但不限于菌素D、柔紅霉素、阿霉素、米托蒽醌、爭光霉素、普卡霉素；為鉑配合物，包括但不限于順鉑、卡波鉑；為腎上腺皮質(zhì)抑制劑類，包括但不限于氨魯米特；為酶抑制劑，包括但不限于SAHA、阿糖胞苷、甲氨蝶呤、羥基脲、羥喜樹堿、拓撲特肯、拓撲替康、依立替康。

本發(fā)明還提供了本發(fā)明式(I)所示的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構(gòu)體在制備治療和/或預(yù)防ALK介導(dǎo)的癌癥相關(guān)疾病或增生性疾病的藥物中的應(yīng)用，所述癌癥相關(guān)的疾病包括但不限于腦瘤，肺癌，非小細胞性肺癌，鱗狀上皮細胞，膀胱癌，胃癌，卵巢癌，腹膜癌，胰腺癌，乳腺癌，頭頸癌，子宮頸癌，子宮內(nèi)膜癌，結(jié)直腸癌，肝癌，腎癌，食管腺癌，食管鱗狀細胞癌，非霍奇金淋巴瘤，腦瘤，中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤，即神 經(jīng)膠質(zhì)瘤，多形性膠質(zhì)母細胞瘤，膠質(zhì)肉瘤，前列腺癌，甲狀腺癌，雌性生殖道癌，原位癌，淋巴瘤，組織細胞淋巴瘤，神經(jīng)纖維瘤病，骨癌，皮膚癌，結(jié)腸癌，睪丸癌，小細胞肺癌，胃腸道間質(zhì)瘤，前列腺腫瘤，肥大細胞腫瘤，多發(fā)性骨髓瘤，黑色素瘤，膠質(zhì)瘤，膠質(zhì)母細胞瘤，星形細胞瘤，神經(jīng)母細胞瘤，肉瘤；增生性疾病，包括但不限于皮膚或前列腺的良性增生。

本發(fā)明化合物具有以下優(yōu)點：

(1)本發(fā)明式(I)化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構(gòu)體具有優(yōu)異的ALK抑制活性；

(2)本發(fā)明式(I)化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構(gòu)體顯示出良好的生物穩(wěn)定性，作用更持久，生物利用度高；

(3)本發(fā)明化合物制備工藝簡單，藥品純度高，質(zhì)量穩(wěn)定，易于進行大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)。

以下通過體外酶學(xué)和細胞學(xué)抑制活性實驗進一步闡述本發(fā)明化合物有益效果，但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明化合物僅具有下列有益效果。

實驗例1本發(fā)明化合物的體外酶學(xué)活性實驗

供試品：本發(fā)明化合物1，其化學(xué)名稱和制備方法見化合物1的制備實施例。

對照藥ceritinib，自制(參考專利WO2008/073687A2化合物66的制備方法制備)。

下述中實驗的縮寫所代表的含義如下：

DMSO：二甲基亞砜

DTT：二硫蘇糖醇

ALK：間變性淋巴瘤激酶

HEPES：4-羥乙基哌嗪乙磺酸

Brij-35：十二烷基聚乙二醇醚

EDTA：乙二胺四乙酸

實驗方法：采用Caliper Mobility Shift方法進行ALK激酶的抑制活性測定

1.1倍激酶緩沖液配制：

分別取pH7.5的HEPES、濃度為30％的Brij-35、母液濃度為1M的MgCl₂溶液、母液濃度為1M的DTT，加入超純水混勻，使HEPES的終濃度為50mM，Brij-35的終濃度為0.0015％，MgCl₂的終濃度為10mM，DTT的終濃度為2mM。

2.終止液的配制

分別取母液濃度為4％的包被液Coating Reagent#3(Caliper儀器所使用的12-sipper chip中自帶包被液)、母液濃度為1000mM pH7.5的HEPES、母液濃度為0.5M的EDTA、母液濃 度為30％的Brij-35，加入超純水混勻，使Coating Reagent#3終濃度為0.2％，HEPES終濃度為100mM，EDTA終濃度為50mM，Brij-35終濃度為0.015％。

3.5倍供試品溶液配制：

供試品的DMSO儲備液配制：分別稱取化合物適量(具體稱樣量請見下表)，加入適量DMSO溶解，混勻，備用。

取供試品的DMSO儲備液，用DMSO稀釋制成濃度為50μM的溶液，作為母液。用DMSO將上述母液四倍逐級稀釋，然后每個濃度分別用1倍激酶緩沖液稀釋10倍，制成5倍供試品溶液。

4.各種其他試劑的配制

用1倍激酶緩沖液分別配制所需要的2.5倍ALK激酶溶液、2.5倍多肽溶液，備用。

5.酶學(xué)反應(yīng)：

1)384孔板中相對應(yīng)的孔中分別加入5μL配制好的5倍供試品溶液、10μL配制好的2.5倍激酶溶液，室溫孵育10分鐘。

2)相對應(yīng)的孔中再分別加入10μL配制好的2.5倍多肽溶液，使測試物終濃度為1000nM、250nM、63nM、16nM、4nM、1nM、0.2nM、0.1nM、0.02nM、0.004nM。啟動酶反應(yīng)，28℃孵育1小時。

6.酶學(xué)檢測：

每個相對應(yīng)的孔中分別加入25μL終止液，終止反應(yīng)。Caliper儀器讀取數(shù)據(jù)，并通過數(shù)據(jù)計算抑制率，

抑制率(％)＝(最大值-樣本值)/(最大值-最小值)×100，采用XLFIT軟件進行曲線擬合，得出IC₅₀值。

最大值：不加測試物的陽性對照，最小值：不加酶的陰性對照。

實驗結(jié)果和結(jié)論：

表1 本發(fā)明化合物的體外酶學(xué)抑制活性

由表1可見，本發(fā)明化合物對ALK激酶具有良好的抑制活性，可用于治療與激酶相 關(guān)的疾病，特別是ALK激酶介導(dǎo)的病癥或病況，具有顯著的臨床意義。

實驗例2本發(fā)明化合物的體外細胞活性實驗

供試品：本發(fā)明化合物1,其化學(xué)名稱和制備方法見化合物1的制備實施例。

對照藥Ceritinib，自制(參考專利WO2008/073687A2化合物66制備方法制備)。

下述中實驗的縮寫所代表的含義如下：

rpm：轉(zhuǎn)每分鐘

DMSO：二甲基亞砜

MTS：溴化噻唑藍四氮唑

RPMI1640：1640培養(yǎng)基(RPMI:Roswell Park Memorial Institute)

500×、1000×、10×其中的“×”：倍

實驗方法：

NCI-H3122細胞：

(1)培養(yǎng)基配制：

配制含2.5％的胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基，備用。

(2)細胞培養(yǎng)：

在5％CO₂、37℃條件的培養(yǎng)箱中，將NCI-H3122細胞置T25培養(yǎng)瓶中用“(1)”中配制好的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞至80％融合。

(3)接種細胞：

用胰酶消化細胞，1000rpm離心4min，去除上清液，用培養(yǎng)基重新混懸，調(diào)整細胞密度，取該細胞混懸液90μL接種到96孔板中，獲得最終細胞密度為：3000個細胞/孔；然后在5％CO₂、37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。

(4)加入供試品：

(4.1)供試品溶液配制

對照藥溶液：稱取對照藥2.17mg，加入適量DMSO溶解并分別用DMSO梯度稀釋制成一系列濃度的母液(1000×對照藥溶液)，再分別用培養(yǎng)基稀釋該母液100倍得到10×對照藥溶液，分別取該溶液10μL，加入到96孔板相應(yīng)的孔中，得到對照藥溶液最終濃度為：10μM、2.5μM、625nM、156nM、39nM、9.8nM、2.5nM、0.625nM。

化合物1溶液：稱取化合物8mg，加入適量DMSO溶解并分別用DMSO梯度稀釋制成一系列濃度的母液(1000×化合物1溶液)，再分別用培養(yǎng)基稀釋該母液100倍得到10×化合物1溶液，分別取該溶液10μL，加入到96孔板相應(yīng)的孔中，得到化合物1溶液最終濃度為： 10μM、2.5μM、625nM、156nM、39nM、9.8nM、2.5nM、0.625nM。

(4.2)對照孔設(shè)置：

溶媒對照：0.1％DMSO。

空白對照：培養(yǎng)基，儀器調(diào)零。

(4.3)將96孔板放37℃、5％CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h。

(5)檢測：

向96孔板的每個試驗孔中加入CCK-8試劑10μL，放回5％CO₂、37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1h。設(shè)置酶標儀檢測波長450nm，讀取結(jié)果。

(6)IC₅₀計算：細胞存活率(％)＝(樣本值－空白值)/(最大值－空白值)×100，采用Graph prism軟件進行曲線擬合，得出IC₅₀值。

最大值：不加化合物只加溶媒的的細胞對照即溶媒對照，空白值：培養(yǎng)基空白對照。

實驗結(jié)果和結(jié)論：

表2 本發(fā)明化合物的細胞抑制活性

由表2可見，與對照藥相比，本發(fā)明化合物對細胞NCI-H3122具有更好的抑制活性，可用于治療ALK激酶介導(dǎo)的病癥或病況，具有顯著的臨床意義。

具體實施方式

以下通過實施例形式的具體實施方式，對本發(fā)明的上述內(nèi)容作進一步的詳細說明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下實施例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。

實施例15-氯-N⁴-(2-異丙基磺酰基)苯基)-N²-(2,3,7,8-四氫-1H-呋喃并[3,2-e]異吲哚-5-基)嘧啶-2,4-二胺的制備

(1)2,3-二氫苯并呋喃-5-羧酸甲酯的制備

將2,3-二氫苯并呋喃-5-羧酸(15g,0.091mol)溶于甲醇(800mL)中，加入濃硫酸(2mL)，65℃反應(yīng)20小時，冷卻，加入碳酸氫鈉，濃縮，加水(200mL)稀釋，乙酸乙酯(150mL×3)萃取，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮得產(chǎn)物(15.8g,產(chǎn)率97.5％)。

(2)7-硝基-2,3-二氫苯并呋喃-5-羧酸甲酯的制備

將2,3-二氫苯并呋喃-5-羧酸甲酯(14g,78.6mmol)溶于乙酸酐(200mL)中，冷卻至0℃，滴加濃硝酸(質(zhì)量分數(shù)65％,7mL,102.2mmol)，滴加完畢后升至室溫攪拌1小時，反應(yīng)完倒入水(200mL)中，乙酸乙酯(150mL×3)萃取，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮，粗品經(jīng)硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)純化得產(chǎn)物(13g,產(chǎn)率74.3％)。

(3)7-氨基-2,3-二氫苯并呋喃-5-羧酸甲酯的制備

將7-硝基-2,3-二氫苯并呋喃-5-羧酸甲酯(10g,44.8mmol)溶于甲醇(300mL)中，加入鈀碳(1g)，氫氣氛圍下25℃反應(yīng)20小時，過濾，濾液濃縮得產(chǎn)物(6g,產(chǎn)率69.4％)。

(4)7-氨基-4-溴-2,3-二氫苯并呋喃-5-羧酸甲酯的制備

將7-氨基-2,3-二氫苯并呋喃-5-羧酸甲酯(5.4g,28mmol)溶于乙腈(100mL)中，冷卻至0℃，分批加入N-溴代琥珀酰亞胺(5.98g,33.6mmol)，加畢升至室溫攪拌1小時反應(yīng)完全，倒入水(100mL)中，乙酸乙酯(150mL×3)萃取，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮，粗品經(jīng)硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)純化得產(chǎn)物(5g,產(chǎn)率65.6％)。

(5)7-氨基-4-氰基-2,3-二氫苯并呋喃-5-羧酸甲酯的制備

將7-氨基-4-溴-2,3-二氫苯并呋喃-5-羧酸甲酯(4g,14.7mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(50mL)中，加入氰化亞銅(1.57g,17.6mmol)，150℃反應(yīng)2小時，冷卻，倒入氨水(80mL)中，乙酸乙酯(150mL×3)萃取，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮，粗品經(jīng)硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝30:1)純化得產(chǎn)物(1.4g,產(chǎn)率43.7％)。

(6)5-氨基-1,2,7,8-四氫-3H-呋喃并[3,2-e]異吲哚-3-酮的制備

將7-氨基-4-氰基-2,3-二氫苯并呋喃-5-羧酸甲酯(0.4g,1.83mmol)溶于甲醇(100mL),加入氨水(10mL)和雷尼鎳(0.1g)，25℃反應(yīng)20小時。過濾，濾液濃縮得產(chǎn)物(0.28g,產(chǎn)率80％)。

(7)叔丁基5-氨基-1,3,7,8-四氫-2H-呋喃并[3,2-e]異吲哚-2-羧酸酯的制備

將5-氨基-1,2,7,8-四氫-3H-呋喃并[3,2-e]異吲哚-3-酮(0.28g,1.47mmol)溶于四氫呋喃(20mL)中，0℃下滴加硼烷-二甲硫醚溶液(2mol/L,2.57mL,5.14mmol)，加完后65℃反應(yīng)24小時。冷卻至0℃，滴加甲醇(5mL)淬滅反應(yīng)，再加入4mol/L鹽酸(5mL)，65℃攪拌4小時。冷卻后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，加水稀釋，加入氫氧化鈉溶液調(diào)至pH＝10，加入二碳酸二叔丁酯(416mg,1.91mmol)，室溫攪拌1小時，乙酸乙酯(10mL×3)萃取，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮，粗品經(jīng)硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝2:1)純化得產(chǎn)物(75mg,產(chǎn)率18.5％)。

(8)2,5-二氯-N-(2-(異丙基磺?；?苯基)嘧啶-4-胺的制備

將2-(異丙基磺?；?苯胺(1g,5mmol)和2,4,5-三氯嘧啶(1.1g,6mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中，加入氫化鈉(含量60％,0.4g,10mmol)，25℃下反應(yīng)12小時。加水，乙酸乙酯萃取(30mL×3)，有機相合并，飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，真空濃縮，粗品經(jīng)硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝25:1)得產(chǎn)物(0.8g,產(chǎn)率46％)。

(9)5-氯-N⁴-(2-異丙基磺酰基)苯基)-N²-(2,3,7,8-四氫-1H-呋喃并[3,2-e]異吲哚-5-基)嘧啶-2,4-二胺的制備

將叔丁基5-氨基-1,3,7,8-四氫-2H-呋喃并[3,2-e]異吲哚-2-羧酸酯(70mg,0.25mmol)溶于仲戊醇(8mL)中，加入2,5-二氯-N-(2-(異丙基磺?；?苯基)嘧啶-4-胺(104mg,0.3mmol)和對甲苯磺酸(86mg,0.5mmol)，120℃下攪拌20小時。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，加飽和碳酸氫鈉溶液，乙酸乙酯(10mL×3)萃取，無水硫酸鈉干燥，真空濃縮，粗品經(jīng)硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇:氨水＝10:1:0.1)得終產(chǎn)物(10mg,產(chǎn)率8.2％)。

分子式:C₂₃H₂₄ClN₅O₃S分子量:485.99LC-MS(m/z):486[M]⁺

¹H-NMR(400MHz,MeOD-d₄)δ:8.49(d,J＝8.0Hz,1H),8.14(s,1H),7.90(d,J＝8.0Hz,1H),7.72(s,1H),7.70-7.67(m,1H),7.39-7.35(m,1H),4.65(t,J＝8.6Hz,2H),4.53(s,2H),4.45(s,2H),3.26(t,J＝8.8Hz,2H),1.19(d,J＝6.8Hz,6H)。