虛擬篩選化合物在制備激酶抑制劑中的應(yīng)用和藥物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及藥物領(lǐng)域，更具體地，設(shè)及一種虛擬篩選化合物在制備激酶抑制劑中 的應(yīng)用，W及W該虛擬篩選化合物作為活性組分的藥物，該藥物能夠預(yù)防和/或治療激酶介 導(dǎo)的疾病。
【背景技術(shù)】
[0002] 與人類(lèi)重大疾病相關(guān)的藥物祀標(biāo)的發(fā)現(xiàn)及其藥物的研發(fā)是祀向治療研究中的重 要環(huán)節(jié)。蛋白激酶(protein kinase，ΡΚ)是細(xì)胞內(nèi)最大的蛋白家族之一，參與細(xì)胞生長(zhǎng)、分 裂和調(diào)亡等多種生理過(guò)程。在真核細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中蛋白激酶扮演重要的角色。蛋白激酶是 一類(lèi)憐酸轉(zhuǎn)移酶，其作用是將ΑΤΡ分子的γ憐酸基轉(zhuǎn)移到底物蛋白特定的氨基酸殘基上，使 底物蛋白憐酸化。人類(lèi)基因組內(nèi)共含有518個(gè)蛋白激酶基因，約占真核生物基因的1.7%。蛋 白激酶活性異常通常會(huì)引發(fā)包括癌癥、糖尿病、炎癥在內(nèi)的許多重大疾病。超過(guò)400種人類(lèi) 疾病與蛋白激酶有直接或間接的關(guān)系。因此蛋白激酶己成為繼G蛋白偶聯(lián)受體之后的第二 大藥物治療祀標(biāo)。據(jù)統(tǒng)計(jì)，目前全世界藥物在研或開(kāi)發(fā)項(xiàng)目中約Ξ分之一均與蛋白激酶相 關(guān)。
[0003] 蛋白激酶抑制劑(protein kinase inhibitor,ΡΚΙ)可用于多種疾病的治療，其中 ATP-競(jìng)爭(zhēng)性蛋白激酶抑制劑研究得最多，運(yùn)類(lèi)抑制劑已被研究和開(kāi)發(fā)成為治療多種復(fù)雜性 疾病的新藥。目前ATP-競(jìng)爭(zhēng)性蛋白激酶抑制的研究主要集中在新骨架類(lèi)型先導(dǎo)化合物的設(shè) 計(jì)和發(fā)現(xiàn)，W及選擇性抑制劑和多祀點(diǎn)抑制劑開(kāi)發(fā)等方面。目前，計(jì)算機(jī)輔助藥物設(shè)計(jì) (computer-aided drug design,CADD)作為藥物研發(fā)中的重要技術(shù)和工具，被應(yīng)用于蛋白 激酶抑制劑的研究中，推動(dòng)了運(yùn)一研究領(lǐng)域的長(zhǎng)足發(fā)展。定量構(gòu)效關(guān)系、分子對(duì)接、藥效團(tuán)、 同源模建和分子動(dòng)力學(xué)模擬等多種分子模擬方法，W及量子化學(xué)等多種CADD方法均被應(yīng)用 于蛋白激酶抑制劑的設(shè)計(jì)和發(fā)現(xiàn)。
[0004] 因此，通過(guò)運(yùn)用計(jì)算機(jī)輔助的藥物設(shè)計(jì)技術(shù)，對(duì)蛋白激酶結(jié)構(gòu)與功能進(jìn)行模擬研 究，在充分了解祀標(biāo)活性口袋Ξ維結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上，對(duì)小分子抑制劑提出合理的結(jié)構(gòu)修飾，研 發(fā)出高效專(zhuān)一的蛋白激酶抑制劑具有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[000引本發(fā)明的目的是提供虛擬篩選化合物在制備激酶抑制劑中的新用途，W及提供一 種藥物。
[0006] 具體地，本發(fā)明提供一種虛擬篩選化合物在制備激酶抑制劑中的應(yīng)用，該虛擬篩 選化合物為具有式I、式II、式III或式IV所示結(jié)構(gòu)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、醋、溶 劑合物；
[0007]
[0008] 其中，Ri和R2不同，且關(guān)
；4、Rs和Rs各自獨(dú)立地為H、Ci-C3的 烷基、或芳基;R3和R?各自獨(dú)立地為H、Ci-C3的烷基、或共同形成飽和或不飽和的五元控環(huán)或 六元控環(huán)；
[00川優(yōu)選地，式I中，R4、Rs和R6各自獨(dú)立地為Η或C1-C3的烷基;或者，R4和R6之一為芳基， 其余兩個(gè)基團(tuán)為Η。
[0012]進(jìn)一步優(yōu)選地，式I所示的化合物為W下式V、式VI、式νΠ 或式VIII所示的化合物；
[0013]
[0014] 本發(fā)明中所述虛擬篩選是從Molpo;rt(5*109)和Vitas-M( 1.2*109)化合物庫(kù)進(jìn)行 SVM篩選，篩選具有W下確定祀點(diǎn)的化合物:皿R2、VEGFR2、FGFR1、B-raf或SRC。因此，本發(fā)明 中所述激酶優(yōu)選為肥R2、VEGFR2、FGFR1、B-raf或SRC。
[0015] 本發(fā)明還提供一種藥物，該藥物能夠預(yù)防和/或治療激酶介導(dǎo)的疾病，該藥物的活 性組分為具有式I、式II、式ΠΙ或式IV所示結(jié)構(gòu)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、醋、溶劑 合物。所述具有式I、式II、式III或式IV所示結(jié)構(gòu)的化合物的限定與上述相同，在此不再寶 述。
[0016] 本發(fā)明中，所述激酶介導(dǎo)的疾病選自W下疾病中的至少一種：屯、血管疾病、炎癥、 乳腺癌、肝癌、膜腺癌、肺癌、腦癌、卵巢癌、子宮癌、睪丸癌、皮膚癌、胃癌、鼻咽癌、結(jié)腸癌、 膀脫癌和直腸癌。優(yōu)選為乳腺癌、肝癌、肺癌和膀脫癌中的至少一種。
[0017] 根據(jù)本發(fā)明，所述藥物可W制成注射液、片劑、粉劑、顆粒劑、膠囊、口服液、膏劑、 霜?jiǎng)┑榷喾N形式;上述各種劑型的藥物均可W按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)方法制備。所述藥物可 通過(guò)注射、噴射、滴鼻、滴眼、滲透、吸收、物理或化學(xué)介導(dǎo)的方法導(dǎo)入機(jī)體如肌肉、皮內(nèi)、皮 下、靜脈、粘膜組織;或是被其他物質(zhì)混合或包裹后導(dǎo)入機(jī)體。
[0018] 需要的時(shí)候，在上述藥物中還可W加入一種或多種藥學(xué)上可接受的載體;所述載 體包括藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤(rùn)劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面 活性劑、吸附載體、潤(rùn)滑劑等。
[0019] 本發(fā)明的其它特征和優(yōu)點(diǎn)將在隨后的【具體實(shí)施方式】部分予W詳細(xì)說(shuō)明。
【附圖說(shuō)明】
[0020] 通過(guò)結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明示例性實(shí)施方式進(jìn)行更詳細(xì)的描述。
[0021 ] 圖1為50μΜ ATP/ADP轉(zhuǎn)化率標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0022] 圖2為FGFR1激酶滴定曲線(50μΜ ΑΤΡ)。
【具體實(shí)施方式】
[0023] 通過(guò)ADP-Glo?激酶實(shí)驗(yàn)進(jìn)行體外激酶抑制劑實(shí)驗(yàn)，ADP-Glo?激酶實(shí)驗(yàn)原理:在激 酶反應(yīng)過(guò)程中形成的ADP能通過(guò)巧光檢測(cè)，從而知道其激酶活性。首先，ADP-Glo?試劑會(huì)終 止激酶反應(yīng)，殘留的ATP被廢除。反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生的ADP隨即被轉(zhuǎn)化為ATP并且在叫tra-Glo? 雙巧光素酶存在的條件下顯示巧光，通過(guò)巧光分光光度計(jì)即可檢測(cè)。巧光信號(hào)代表激酶反 應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生的ADP濃度及其對(duì)應(yīng)的激酶活性。
[0024] ADP-Glo?激酶實(shí)驗(yàn)由于能夠檢測(cè)化合物對(duì)大范圍激酶的作用，同時(shí)還能檢測(cè)高信 號(hào)背景下低濃度的ADP，因此適用于體外激酶抑制劑實(shí)驗(yàn)。
[0025] 實(shí)施例中所用的ADP-Glo?激酶購(gòu)自Promega公司。
[0026] 1、樣品準(zhǔn)備
[0027] 凍干樣品用一定體積的二甲基亞諷(DMS0)溶解，終濃度為1 Ommo 1 /L，冰箱保存?zhèn)?用。
[002引 2、ATP轉(zhuǎn)化ADP標(biāo)準(zhǔn)曲線制作
[0029] 參照Promega的說(shuō)明，檢測(cè)各種激酶反應(yīng)中的ATP濃度，用于制作各個(gè)激酶的標(biāo)準(zhǔn) 曲線。運(yùn)些曲線代表ATP/ADP的轉(zhuǎn)化率，并且能直觀顯示ADP對(duì)應(yīng)的濃度。因此，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲 線，可W檢測(cè)激酶反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生的ADP。ATP在各個(gè)激酶反應(yīng)中的濃度分別為：1 ΟμΜ化ER2) 和50μM(VEGFR2、FGFRl、B-raf和SRC)。10mMATP和ADP母液加入一定體積的去離子水得到10 X ΑΤΡ (ADP)溶液。不同體積的10 X ΑΤΡ和10 X ADP配成不同濃度的10 X ATP-ADP混