從紅豆杉中分離紫杉醇的一種方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種從紅豆杉分離純化出高純度的紫杉醇的方法。本發(fā)明采用半制備型高效液相色譜分離純化系統(tǒng)，以反相C18為填料，以水和乙腈的混合物為流動相。采用本發(fā)明從紅豆杉中分離出紫杉醇，操作簡單，實驗步驟少，成本低，周期短，純度可達95.0%以上。
【專利說明】從紅豆杉中分離紫杉醇的一種方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種紫杉醇的制備方法，特別是從紅豆杉中分離紫杉醇的制備方法?！颈尘凹夹g(shù)】
[0002]紫杉醇是紅豆杉屬植物中的一種復(fù)雜的次生代謝產(chǎn)物，也是目前所了解的惟一一種可以促進微管聚合和穩(wěn)定已聚合微管的藥物。通過I1-1II臨床研究，紫杉醇主要適用于卵巢癌和乳腺癌，對肺癌、大腸癌、黑色素瘤、頭頸部癌、淋巴瘤、腦瘤也都有一定療效。天然紅豆杉樹的紫杉醇一般分布于樹皮中，整株利用率低。曼地亞紅豆杉則是植株各部分均含有紫杉醇，枝葉含量達0.03%以上，根系部分可達0.06%，全株用于提取紫杉醇，植株利用率高，其深度加工后綜合經(jīng)濟價值更高。
[0003]專利96120678.0公開了一種從西藏紅豆杉提取紫杉醇的方法，特別是提取紫杉醇粗產(chǎn)品的方法，它包括:原料粉碎、滲浸、減壓濃縮、提取，其中，經(jīng)減壓濃縮得到的深綠色浸膏經(jīng)水稀釋后，以石灰水調(diào)pH值7.5 — 8.0，沉淀過濾，濾液以溶劑提取，減壓濃縮干燥得到含紫杉醇干膏(粗品)。專利200580023414.5公開了從含有紫杉醇的植物中獲得紫杉醇的方法。首先是從含有紫杉醇的植物中獲得植物材料，然后從植物材料中提取紫杉醇，接著用一系列柱色譜分離步驟將紫杉醇從紫杉醇提取液中分離出來以獲得至少一種含有紫杉醇的餾分。將從最后色譜步驟中獲得的餾分中的紫杉醇結(jié)晶出來。專利200810086379.7涉及一種南方紅豆杉中紫杉醇生物酶解法提取工藝，其特征是以南方紅豆杉枝葉為原料，以類酵母菌的D426為酶解微生物，在32-36°C條件下進行酶解，再經(jīng)過瞬間冷凍、高速分離、噴霧干燥，得到高含量紫杉醇。這些方法步驟都比較繁瑣，提取效率低。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供從紅豆杉中分離純化紫杉醇的方法。
`[0005]本發(fā)明為實現(xiàn)上述發(fā)明目的采用的技術(shù)方案如下:(I)將紅豆杉的葉子用清水洗凈，然后用粉碎機粉碎，然后加入有機試劑，超聲波萃取20分鐘，離心，取上清夜，沉淀物復(fù)加入有機試劑，重復(fù)5次，合并上清液；(2)將上清液旋干，然后用有機試劑溶解，然后采用半制備高效液相色譜分離純化系統(tǒng)，以水和乙腈的混合物為流動相，色譜柱填料為反相C18填料，填料粒度10um，系統(tǒng)溫度為25~50°C。
[0006]本發(fā)明具有以下技術(shù)效果:本發(fā)明采用半制備型高效液相色譜系統(tǒng)，制備出高純度的紫杉醇，工藝簡單，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，可回收利用，無污染，實現(xiàn)清潔生產(chǎn)。
[0007]【具體實施方式】:
實施例1
(1)取50g紅豆杉的葉子，用清水洗凈，然后用粉碎機粉碎，然后加入有機試劑，超聲波萃取20分鐘，離心，取上清夜，沉淀物復(fù)加入乙醇，重復(fù)5次，合并上清液；
(2)將上清液旋干，然后用乙腈溶解，然后采用半制備高效液相色譜分離純化系統(tǒng)，以水和乙腈的混合物為流動相，0~50min，水/乙腈=50/50，51~80minjJC /乙腈=40/60，色譜柱填料為反相C18填料，填料粒度10um，系統(tǒng)溫度為25~50°C。
[0008]采用的紫外光度檢測器的檢測波長為227nm，收集紫杉醇，經(jīng)HPLC分析純度≥95.5%。
[0009]實施例2
(1)取150g紅豆杉的葉子，用清水洗凈，然后用粉碎機粉碎，然后加入有機試劑，超聲波萃取20分鐘，離心，取上清夜，沉淀物復(fù)加入乙酸乙酯，重復(fù)5次，合并上清液；
(2)將上清液旋干，然后用乙腈溶解，然后采用半制備高效液相色譜分離純化系統(tǒng)，以水和乙腈的混合物為流動相0~50min，水/乙腈=50/50，51~80minjJC /乙腈=40/60，色譜柱填料為反相C18填料，填料粒度10um，系統(tǒng)溫度為25~50℃。
[0010]采用的紫外光度檢測器的檢測波長為227nm，收集紫杉醇，經(jīng)HPLC分析純度≥95.8%。
[0011]實施例3
(1)取300g紅豆杉的葉子，用清水洗凈，然后用粉碎機粉碎，然后加入有機試劑，超聲波萃取20分鐘，離心，取上清夜，沉淀物復(fù)加入乙醇，重復(fù)5次，合并上清液；
(2)將上清液旋干,然后用甲醇溶解,然后采用半制備高效液相色譜分離純化系統(tǒng)，以水和乙腈的混合物為流動相，0~50min，水/乙腈=50/50，51~80minjJC /乙腈=40/60，色譜柱填料為反相C18填料，填料粒度10um，系統(tǒng)溫度為25~50℃。
[0012]采用的紫外光度檢測器的檢測波長為227nm，收集紫杉醇，經(jīng)HPLC分析純度≥ 95.5%。
【權(quán)利要求】
1.一種從紅豆杉分離純化出紫杉醇的方法，其步驟如下:(1)將紅豆杉的葉子用清水洗凈，然后用粉碎機粉碎，然后加入有機試劑，超聲波萃取20分鐘，離心，取上清夜，沉淀物復(fù)加入有機試劑，重復(fù)5次，合并上清液；(2)將上清液旋干，然后用有機試劑溶解，然后采用半制備高效液相色譜分離純化系統(tǒng)，以水和乙腈的混合物為流動相，色譜柱填料為反相C18填料，填料粒度10um，系統(tǒng)溫度為25~50°C。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是:所述的步驟(1)中的有機試劑優(yōu)選乙醇、乙酸乙酯。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是:所述的步驟(2)中的有機試劑優(yōu)選乙腈、甲醇。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是:所述的步驟(2)中的流動相的洗脫方式是梯度洗脫。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是所述的步驟(2)中的系統(tǒng)的最適宜的操作溫度為30°C。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是所述的步驟(2)中流動相水和乙腈的比例為O~50min,水 / 乙腈= 50/50, 51 ~80min,水 / 乙腈=40/60。
【文檔編號】C07D305/14GK103788031SQ201210426019
【公開日】2014年5月14日 申請日期:2012年10月31日 優(yōu)先權(quán)日:2012年10月31日
【發(fā)明者】王瑊, 王亞輝, 張大兵 申請人:江蘇漢邦科技有限公司