一種從紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)的紫杉醇粗品中純化紫杉醇的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種從紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)的紫杉醇粗品中純化紫杉醇的方法,屬化合物純化領(lǐng)域。本發(fā)明采用結(jié)晶析出法和正相柱層析法相結(jié)合的方法純化紫杉醇。首先,將紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)的紫杉醇粗品溶解在極性較大的有機(jī)溶媒中,然后逐滴加入反向有機(jī)溶媒,得到純度85.0%以上的紫杉醇。然后再采用柱層析法進(jìn)一步分離純化紫杉醇,固定相為200目~300目硅膠,流動(dòng)相為二氯甲烷和乙酸乙酯或正己烷和丙酮的二元梯度混合溶劑。兩種方法相結(jié)合,解決以往分離方法中不能有效分離紫杉醇與三尖杉寧堿的不足,同時(shí)又可以去除難以分離的未知物雜質(zhì),最終可得到符合美國(guó)藥典USP標(biāo)準(zhǔn)的紫杉醇原料藥。該方法重復(fù)性好、工藝合理、操作簡(jiǎn)單、綠色安全。
【專利說(shuō)明】一種從紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)的紫杉醇粗品中純化紫杉醇的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及紫杉醇的純化方法,具體涉及一種從紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)的紫杉醇粗品去除難以分離的三尖杉寧堿和未知雜質(zhì)物純化得到符合美國(guó)藥典USP標(biāo)準(zhǔn)的紫杉醇原料藥的制備方法,屬化合物純化領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]紫杉醇是從紅豆杉屬植物中分離提取的一種具有紫杉烷二萜骨架的新型抗癌藥物,也是目前所了解的唯一一種可促進(jìn)微管聚合和穩(wěn)定已聚合微管的藥物。它對(duì)大多數(shù)實(shí)體腫瘤有強(qiáng)力抑制作用,而對(duì)正常細(xì)胞基本無(wú)影響,尤其對(duì)晚期卵巢癌、乳腺癌、非小細(xì)胞肺癌和卡波濟(jì)氏肉瘤的療效確切、副作用較小。隨著研究的進(jìn)一步深入,紫杉醇類藥物的抗癌作用得到更加廣泛的應(yīng)用,現(xiàn)已成為一線抗癌藥物和廣譜的抗腫瘤藥物。
[0003]作為紫杉醇主要來(lái)源的紅豆杉類植物屬于珍稀物種,在我國(guó)被列為國(guó)家一級(jí)保護(hù)植物;并且紫杉醇在紅豆杉樹(shù)皮中含量極低,只約占0.01%。
[0004]所以雖然抗癌藥物紫杉醇已在臨床上廣泛應(yīng)用,但受原料紅豆杉類植物稀有短缺的制約,遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足市場(chǎng)對(duì)紫杉醇的需求,目前藥源不足已成為限制紫杉醇在臨床中大量應(yīng)用的瓶頸。
[0005]近20年來(lái),為了解決紅豆杉資源稀有短缺與紫杉醇需求量日益增加的矛盾問(wèn)題,人們主要從以下幾個(gè)方面進(jìn)行了紫杉醇原料的研究:化學(xué)全合成、化學(xué)半合成、人工栽培、微生物真菌發(fā)酵和紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)等方法。其中紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)法由于具有不破壞自然資源、不受自然條件限制、可在生物反應(yīng)器中進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng),同時(shí)該方法還可生產(chǎn)出前體及其他有抗癌活性化合物等優(yōu)點(diǎn)。因此,`紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)紫杉醇是當(dāng)前解決紫杉醇藥源問(wèn)題很有前景的方法。
[0006]廣東某藥業(yè)有限公司利用紅豆杉細(xì)胞大量培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)紫杉醇的研究已經(jīng)進(jìn)行了一段時(shí)間,目前已經(jīng)進(jìn)入到中試放大階段。所以從紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)紫杉醇粗品中純化得到符合美國(guó)藥典USP標(biāo)準(zhǔn)的紫杉醇原料藥的制備方法的研究和應(yīng)用顯得尤為重要。廣東某藥業(yè)有限公司采用紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)的紫杉醇,其生產(chǎn)過(guò)包括生物因素、物理因素、化學(xué)因素等多個(gè)影響因素,在紫杉醇提純過(guò)程中含有一些未知物非常難以除去。任何一個(gè)影響因素都會(huì)關(guān)系到紫杉醇的生產(chǎn)效率,同時(shí)也會(huì)影響到三尖杉寧堿和未知雜質(zhì)物的含量。而且作為臨床使用的藥品,要求其純度很高,美國(guó)藥典USP標(biāo)準(zhǔn)的紫杉醇原料藥要求其未知雜質(zhì)不超過(guò)0.1%,歐洲藥典EP標(biāo)準(zhǔn)則要求不超過(guò)0.05%。
[0007]另一方面,紫杉醇資源珍貴、價(jià)格高昂,分離的純度和收率成為制備紫杉醇原料藥成本的關(guān)鍵因素。基于上述因素,從利用紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)的紫杉醇粗品中純化得到符合美國(guó)藥典USP標(biāo)準(zhǔn)的紫杉醇原料藥的制備方法以及新型的純化工藝已成為紫杉醇研究中的焦點(diǎn)問(wèn)題。而對(duì)紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)的紫杉醇粗品進(jìn)行純化,有效分離難以去除的一些未知物,最后得到符合美國(guó)藥典USP標(biāo)準(zhǔn)的紫杉醇原料藥的制備方法目前未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。
目前常用的純化紫杉醇與紫杉醇類似化合物的方法主要有柱層析法、結(jié)晶析出法、薄層色譜法、膠束動(dòng)電色譜法、膜分離法、樹(shù)脂吸附分離法、化學(xué)反應(yīng)法等。但是,能夠真正適用于今后大規(guī)模生產(chǎn)的僅有柱層析法和結(jié)晶析出法兩種,其他方法都只局限于實(shí)驗(yàn)室研究。
[0008]有關(guān)紫杉醇純化的專利申請(qǐng)有多項(xiàng):如中國(guó)專利CN 1611496A“一種利用高壓液相色譜制備高純度紫杉醇的方法”;中國(guó)專利CN 03135916.7 “從紫杉醇粗產(chǎn)品純化紫杉醇的方法”;中國(guó)專利CN200610117672.6 “一種高純度紫杉醇化合物的制備方法”;中國(guó)專利CN201310251956.4“一種從紫杉醇浸膏純化紫杉醇的方法”;中國(guó)專利CN 200480009790.4“從天然原料分離和提純紫杉醇的改進(jìn)方法”;中國(guó)專利CN200610047378.2“一種高效純化紫杉醇的方法”等?,F(xiàn)有紫杉醇純化方法的不足之處主要在于:目前各種純化紫杉醇的方法尚不能夠有效完全地從紫杉醇粗品分離去除三尖杉寧堿和未知雜質(zhì)物;包括正相柱法和反相柱法的柱層析法及結(jié)晶析出法均存在一定的缺陷。正相柱層析法往往需要引入氧化反應(yīng),通過(guò)改變?nèi)馍紝帀A的化學(xué)結(jié)構(gòu),以增加三尖杉寧堿與紫杉醇的分離度,而且要多次過(guò)柱,同時(shí)對(duì)未知雜質(zhì)物的去除也滿足不了要求。重要的是,繁瑣的操作步驟降低了紫杉醇的收率,增加了生產(chǎn)成本,雖能得到較純的紫杉醇,但改變了三尖杉寧堿結(jié)構(gòu),只能被當(dāng)做廢料丟棄,既浪費(fèi)資源又污染環(huán)境。反相柱層析法雖然不用改變分離對(duì)象的化學(xué)結(jié)構(gòu),但在實(shí)際應(yīng)用中該方法需要使用特制且價(jià)格昂貴的的反相柱硅膠,大大增加了分離紫杉醇的生產(chǎn)成本,限制了其廣泛應(yīng)用。 結(jié)晶析出法使得紫杉醇收率低,損失大,無(wú)疑也增加了分離紫杉醇的生產(chǎn)成本,而且該法也不能完全有效的分離去除和紫杉醇結(jié)構(gòu)非常相似的紫杉烷類化合物-三尖杉寧堿及一定量難以去除的一些未知物。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0009]本發(fā)明目的在于以紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)的紫杉醇粗品為原料,提供一種分離純化方法,得到符合美國(guó)藥典USP標(biāo)準(zhǔn)的紫杉醇原料藥,滿足提高紫杉醇收率、降低成本及適合工業(yè)化生產(chǎn)的實(shí)際需求。
[0010]為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的,技術(shù)方案如下:采用結(jié)晶析出法和正相柱層析法相結(jié)合的方法分離紫杉醇;首先,將紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)的紫杉醇粗品溶解在極性較大的有機(jī)溶媒中,使紫杉與有機(jī)溶媒質(zhì)量體積比在0.04-0.10 g /mL,然后逐滴加入反向有機(jī)溶媒,得到提純的紫杉醇;然后再采用正相柱層析法進(jìn)一步分離紫杉醇:固定相為200目~300目硅膠,流動(dòng)相為二氯甲烷和乙酸乙酯或正己烷和丙酮的二元梯度混合溶劑。所述的極性較大的有機(jī)溶媒選丁醇、丙醇、丙酮、乙酸乙酯、乙酸丁脂或二氯甲烷;所述的反向有機(jī)溶媒為戊烷、異戊烷、正己烷、環(huán)己烷、異辛烷或石油醚。
[0011]滴加反向有機(jī)溶媒,初始時(shí)反向有機(jī)溶媒:有機(jī)溶媒的體積比=(10-30):(90-70),最終時(shí)反向有機(jī)溶媒:有機(jī)溶媒體積比=(80-60):(20-40)。
[0012]采用正相柱層析法分離紫杉醇時(shí)流動(dòng)相采用二氯甲烷:乙酸乙酯體積比分別為3:1、2:1及1:1的二元梯度洗脫體系;或采用正己烷:丙酮體積比分別為4:1、3:1及2:1的二元梯度洗脫體系。
[0013]根據(jù)調(diào)整Rf值,流動(dòng)相二氯甲烷和乙酸乙酯或正己烷和丙酮的混合溶劑回收循環(huán)使用。
[0014]本發(fā)明創(chuàng)新點(diǎn)在于:采用結(jié)晶析出法和正相柱層析法相結(jié)合的方法分離紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)紫杉醇粗品中難以分離去除的三尖杉寧堿和未知物,最后得到符合美國(guó)藥典USP標(biāo)準(zhǔn)的紫杉醇原料藥。本發(fā)明重復(fù)性好、工藝合理、成本低、操作簡(jiǎn)單、綠色安全,既可滿足提高紫杉醇收率、降低生產(chǎn)成本的要求,又能滿足適合工業(yè)化生產(chǎn)的實(shí)際需求,且三尖杉寧堿不被氧化,可以再利用,具有良好的應(yīng)用前景。
【專利附圖】
【附圖說(shuō)明】
[0015]圖1為本發(fā)明實(shí)施例1純化后紫杉醇的HPLC圖譜;
圖2為本發(fā)明實(shí)施例2純化后紫杉醇的HPLC圖譜;
圖3為本發(fā)明實(shí)施例3純化后紫杉醇的HPLC圖譜;
圖4為中國(guó)藥品生物制品檢定所含量99.6%紫杉醇對(duì)照品的HPLC圖譜。
【具體實(shí)施方式】
[0016]為對(duì)本發(fā)明進(jìn)行更好地說(shuō)明,舉實(shí)施例如下:
實(shí)施例1
在150 mL的單口燒瓶中,加入紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)的紫杉醇粗品(廣東某藥業(yè)有限公司生產(chǎn)提供,其中紫杉醇含量63.0 %,三尖杉寧堿和未知物分別為1.74 %和3.56 %)
1.20 g,然后加入極性較大的有機(jī)溶媒-分析純丙醇18.9 mL,使紫杉醇質(zhì)量g/丙醇體積mL=0.04 g/mL,充分?jǐn)嚢柚敝镣耆芙鈽悠?,然后向該體系中慢慢滴加反向有機(jī)溶媒-分析純戊烷2.10 mL,使戊烷:丙醇=10:90 (體積比),充分?jǐn)嚢?0 min ;然后再逐滴加入戊烷
2.63 mL,使戊烷:丙醇=20:80 (體積比),充分?jǐn)嚢?0 min ;10.0 %遞增速率逐漸提高戊烷的體積含量,慢慢滴加,直至單口燒瓶中的溶液出現(xiàn)絮狀物,充分?jǐn)嚢?.5 h以上;而后仍然10.0 %遞增速率逐漸提高戊烷的體積含量,慢慢滴加后充分?jǐn)嚢?0 min,直至戊烷:丙醇=60:40 (體積比)。最后,采用G4砂芯漏斗過(guò)濾,真空40-°C干燥后得到純度為85.1 %紫杉醇樣品0.74 g,收率為83.3 %。
[0017]然后以0.74 g純度為85.1 %的紫杉醇樣品為原料進(jìn)行正相柱層析:原料用少量二氯甲烷溶解以備濕法上樣;固定相為200目~300目硅膠,硅膠與原料質(zhì)量比為100:1 ;流動(dòng)相采用二氯甲烷:乙酸乙酯=3:1、2:1、1:1 (體積比)二元梯度洗脫體系;采用二氯甲烷濕法裝柱,然后上樣,最后用配好的流動(dòng)相進(jìn)行沖柱洗脫。二氯甲烷:乙酸乙酯=3:1(體積比)流動(dòng)相沖2.1個(gè)柱體積后,開(kāi)始有三尖杉寧堿流出,經(jīng)0.5個(gè)柱體積后,為單一紫杉醇流出,然后換為二氯甲烷:乙酸乙酯=2:1 (體積比)流動(dòng)相,經(jīng)4.9個(gè)柱體積后紫杉醇可被完全分離出來(lái),最后使用二氯甲烷:乙酸乙酯=1:1 (體積比)流動(dòng)相洗脫1.6個(gè)柱體積以去除未知雜質(zhì)物。一次洗脫后純度98.9 %的紫杉醇占80.7 %,進(jìn)一步結(jié)晶提純;其他紫杉醇流出液合并得到純度96.2 %紫杉醇占19.3 %,與紫杉醇粗品結(jié)晶后的較純樣品合并上柱分離。最后進(jìn)一步結(jié)晶提純的樣品在P2O5存在條件下真空40-°C干燥48 h,經(jīng)檢測(cè)獲得符合美國(guó)藥典USP標(biāo)準(zhǔn)的紫杉醇原料藥。(分離提純過(guò)程用HPLC進(jìn)行監(jiān)測(cè)分析。)
樣品分析結(jié)果見(jiàn)表1,其H PLC圖譜見(jiàn)圖1所示,其他技術(shù)指標(biāo)經(jīng)檢測(cè)也均符合美國(guó)藥典USP標(biāo)準(zhǔn)。[0018]實(shí)施例2
在100 mL的單口燒瓶中,加入紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)的紫杉醇粗品(廣東某藥業(yè)有限公司生產(chǎn)提供,其中紫杉醇含量65.0 %,三尖杉寧堿和未知物含量分別為1.80 %和3.51 %)
1.20g,然后加入極性較大的有機(jī)溶媒-分析純乙酸乙酯11.1 mL,使紫杉醇質(zhì)量g/乙酸乙酯體積mL=0.07 g/mL,充分?jǐn)嚢柚敝镣耆芙鈽悠?,然后向該體系中慢慢滴加反向有機(jī)溶媒-分析純正己烷2.78 mL,使正己烷:乙酸乙酯=20:80 (體積比),充分?jǐn)嚢?0 min ;然后再逐滴加入正己烷1.98 mL,使正己烷:乙酸乙酯=30:70 (體積比),充分?jǐn)嚢?0 min ;10.0%遞增速率逐漸提高正己烷的體積含量,慢慢滴加,直至單口燒瓶中的溶液出現(xiàn)絮狀物,充分?jǐn)嚢?.5 h以上;而后仍然以10.0 %遞增速率逐漸提高正己烷的體積含量,慢慢滴加后充分?jǐn)嚢?0 min,直至正己烷:乙酸乙酯=70:30 (體積比)。最后,采用G4砂芯漏斗過(guò)濾,再經(jīng)真空40-°C干燥12 h后得到純度為85.6 %紫杉醇樣品0.76 g,收率為83.4 %。
[0019]以0.76 g純度為85.6 %的紫杉醇樣品為原料進(jìn)行正相柱層析:原料用少量丙酮溶解以備濕法上樣;固定相為200目~300目硅膠,硅膠與原料質(zhì)量比為100:1 ;流動(dòng)相采用正己烷:丙酮=4:1 ,3:1,2:1 (體積比)二元梯度洗脫體系;采用正己烷濕法裝柱,然后上樣,最后用配好的流動(dòng)相進(jìn)行沖柱洗脫。正己烷:丙酮=4:1 (體積比)流動(dòng)相沖4.30個(gè)柱體積后,開(kāi)始有三尖杉寧堿流出,經(jīng)1.4個(gè)柱體積后,為單一紫杉醇流出,然后換為正己烷:丙酮=3:1 (體積比)流動(dòng)相,經(jīng)6.2個(gè)柱體積后紫杉醇可被完全分離出來(lái),最后使用正己烷:丙酮=2:1 (體積比)流動(dòng)相洗2.3個(gè)柱體積以去除未知雜質(zhì)物。一次洗脫后純度99.2 %的紫杉醇占81.5 %,進(jìn)一步結(jié)晶提純;其他紫杉醇流出液合并得到純度96.4 %紫杉醇占18.5 %,與紫杉醇粗品結(jié)晶后的較純樣品合并上柱分離。最后進(jìn)一步結(jié)晶提純的樣品在P205存在條件下真空40-°C干燥48 h,經(jīng)檢測(cè)可獲得符合美國(guó)藥典USP標(biāo)準(zhǔn)的紫杉醇原料藥。(分離提純過(guò)程用HPLC進(jìn)行監(jiān)測(cè)分析。)
樣品分析結(jié)果見(jiàn)表1,樣品HPLC圖譜見(jiàn)圖2所示,其他技術(shù)指標(biāo)經(jīng)檢測(cè)也均符合美國(guó)藥典USP標(biāo)準(zhǔn)。
[0020]實(shí)施例3
在100 mL的單口燒瓶中,加入紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)的紫杉醇粗品(廣東某藥業(yè)有限公司生產(chǎn)提供,其中紫杉醇含量68.0 %,三尖杉寧堿和未知物含量分別為1.86 %和3.95 %)
1.20g,然后加入極性較大的有機(jī)溶媒-分析純二氯甲烷8.16 mL,使紫杉醇質(zhì)量g/二氯甲烷體積mL=0.10 g/mL,充分?jǐn)嚢柚敝镣耆芙鈽悠?,然后向該體系中慢慢滴加反向有機(jī)溶媒-分析純異辛烷3.50 mL,使異辛烷:二氯甲烷=30:70 (體積比),充分?jǐn)嚢?0 min ;然后再逐滴加入異辛烷1.94 mL,使異辛烷:二氯甲烷=40:60 (體積比),充分?jǐn)嚢?0 min ;10.0%遞增速率逐漸提高異辛烷的體積含量,慢慢滴加,直至單口燒瓶中的溶液出現(xiàn)絮狀物,充分?jǐn)嚢?.5 h以上;而后仍然10.0 %遞增速率逐漸提高異辛烷的體積含量,慢慢滴加后充分?jǐn)嚢?0 min,直至異辛烷:二氯甲烷=80:20 (體積比)。最后,采用G4砂芯漏斗過(guò)濾,再經(jīng)真空40-°C干燥12 h后得到純度為87.5 %紫杉醇樣品0.78 g,收率為84.3 %。
`[0021]以0.78 g純度為87.5 %的紫杉醇樣品為原料進(jìn)行正相柱層析:原料用少量二氯甲烷溶解以備濕法上樣;固定相為200目~300目硅膠,硅膠與原料質(zhì)量比為100:1 ;流動(dòng)相采用二氯甲烷:乙酸乙酯=3:1 ,2:1,1:1 (體積比)二元梯度洗脫體系;采用二氯甲烷濕法裝柱,然后上樣,最后用配好的流動(dòng)相進(jìn)行沖柱洗脫。二氯甲烷:乙酸乙酯=3:1 (體積比)流動(dòng)相沖2.2個(gè)柱體積后,開(kāi)始有三尖杉寧堿流出,經(jīng)0.6個(gè)柱體積后,為單一紫杉醇流出,然后換為二氯甲烷:乙酸乙酯=2:1 (體積比)流動(dòng)相,經(jīng)5.2個(gè)柱體積后紫杉醇可被完全分離出來(lái),最后使用二氯甲烷:乙酸乙酯=1:1 (體積比)流動(dòng)相洗脫1.7個(gè)柱體積以去除未知雜質(zhì)物。一次洗脫后純度99.5 %的紫杉醇占81.9 %,進(jìn)一步結(jié)晶提純;其他紫杉醇流出液合并得到純度96.8 %紫杉醇占18.1 %,與紫杉醇粗品結(jié)晶后的較純樣品合并上柱分離。最進(jìn)一步結(jié)晶提純的樣品在P2O5條件下真空40-°C干燥48 h,經(jīng)檢測(cè)可獲得符合美國(guó)藥典USP標(biāo)準(zhǔn)的紫杉醇原料藥。(分離提純過(guò)程用HPLC進(jìn)行監(jiān)測(cè)分析。)
樣品分析結(jié)果見(jiàn)表1,樣品HPLC圖譜見(jiàn)圖3所示,其他技術(shù)指標(biāo)經(jīng)檢測(cè)也均符合美國(guó)藥典USP標(biāo)準(zhǔn)。
[0022]圖4為中國(guó)藥品生物制品檢定所含量99.6%紫杉醇對(duì)照品的HPLC放大圖譜,其中未知物0.082%,三尖杉寧堿0.12%,紫杉醇99.80%。
[0023]表1 3個(gè)實(shí)施例樣品分析結(jié)果
【權(quán)利要求】
1.一種從紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)的紫杉醇粗品中純化紫杉醇的方法,其特征在于,采用結(jié)晶析出法和正相柱層析法相結(jié)合的方法分離紫杉醇,首先,將從紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)的紫杉醇粗品溶解在極性較大的有機(jī)溶媒中,使紫杉醇粗品與有機(jī)溶媒質(zhì)量體積比在0.04-0.10 g/mL,然后逐滴加入反向有機(jī)溶媒,得到提純的紫杉醇;然后再采用正相柱層析法進(jìn)一步分離紫杉醇:固定相為200目~300目硅膠,流動(dòng)相為二氯甲烷和乙酸乙酯或正己烷和丙酮的二元梯度混合溶劑; 所述的極性較大的有機(jī)溶媒選丁醇、丙醇、丙酮、乙酸乙酯、乙酸丁脂或二氯甲烷;所述的反向有機(jī)溶媒為戊烷、異戊烷、正己烷、環(huán)己烷、異辛烷或石油醚。
2.如權(quán)利要求1所述的從紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)的紫杉醇粗品中純化紫杉醇的方法,其特征在于,初始時(shí)反向有機(jī)溶媒:有機(jī)溶媒的體積比=(10-30): (90-70),最終時(shí)反向有機(jī)溶媒:有機(jī)溶媒體積比=(60-80): (40-20)。
3.如權(quán)利要求1所述的從紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)的紫杉醇粗品中純化紫杉醇的方法,其特征在于,采用正相柱層析法分離紫杉醇時(shí)流動(dòng)相采用二氯甲烷:乙酸乙酯體積比分別為3:1、2:1及1:1的二元梯度洗脫體系或采用正己烷:丙酮體積比分別為4:1、3:1及2:1的二元梯度洗脫體系。
4.如權(quán)利要求1-3其中之一所述的從紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)的紫杉醇粗品中純化紫杉醇的方法,其特征在于,根據(jù)調(diào)整Rf值,流動(dòng)相二氯甲烷和乙酸乙酯或正己烷和丙酮的混合溶劑回收循環(huán)使用。`
【文檔編號(hào)】C07D305/14GK103819430SQ201410063259
【公開(kāi)日】2014年5月28日 申請(qǐng)日期:2014年2月25日 優(yōu)先權(quán)日:2014年2月25日
【發(fā)明者】趙俊宏, 李文鋒, 樊燕鴿, 薛寶玉, 段顯英 申請(qǐng)人:河南省科學(xué)院化學(xué)研究所有限公司