專利名稱：從曼地亞紅豆杉枝葉中同時(shí)提取紫杉醇和10-dabⅲ的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從植物枝葉中分離提取天然有機(jī)化合物的方法，具體地說(shuō)是一種從曼地亞紅豆杉枝葉中同時(shí)提取紫杉醇和10-DAB III的方法。
背景技術(shù)：
紫杉醇和10-DAB III (10-去乙?；涂ㄍII)均是從紅豆杉中分離出的天然有機(jī)化合物。紫杉醇是一種四環(huán)二萜的化合物，是一種治療進(jìn)行性卵巢癌、乳腺癌、白血病及其它癌癥的天然藥物，同時(shí)也是唯一促進(jìn)微管蛋白凝聚并不可逆解聚的天然新型抗腫瘤特效藥。10-DAB III是紫杉醇的前體物。我國(guó)自1984年起就開(kāi)始了紅豆杉和紫杉醇制備的研究工作，最早是從西藏的喜馬拉雅密葉紅豆杉中提取得到紫杉醇，并得到抗癌活性與紫杉醇相當(dāng)?shù)男律飰A三類杉寧堿，此外還有10-去乙?；仙即?、10-去乙?；馍紝帀A、 Iq-羥基巴卡丁 III和IB-羥基巴卡I III等，均有抗癌活性。但是在紅豆杉中分離得到的許多紫杉烷類二萜類化合物和生物堿中，活性最強(qiáng)的是紫杉醇。但是，該化合物在紅豆杉植物中含量極低，大約在0.001%-0.076%之間，并且提取困難。長(zhǎng)期以來(lái)較為常用的從紫杉屬植物中提取制備紫杉醇方法，其工藝路線一般為浸出(或超聲波或微波提取)——脫脂——萃取得到粗提物——2-3次工業(yè)色譜分離——結(jié)晶——溴化——正相色譜分離—— 重結(jié)晶得到產(chǎn)品，并在此基礎(chǔ)上發(fā)展了許多改進(jìn)工藝。但是，這些現(xiàn)有工藝均存在一個(gè)缺陷，即一次提取只能得到一個(gè)產(chǎn)品，如得到紫杉醇或者得到10-DAB III后，通過(guò)半合成的方法得到紫杉醇。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的發(fā)明一種簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確地從曼地亞紅豆杉枝葉中同時(shí)提取紫杉醇和10-DAB III的方法。本發(fā)明的目的可通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)(1)將曼地亞紅豆杉枝葉50°C烘干干燥后，粉碎成80目——120目的粉末，每5克干粉用80mL-120mL毫升甲醇進(jìn)行提取，重復(fù)三次，過(guò)濾，合并3次的甲醇提取液；(2)將甲醇提取液減壓濃縮，用正己烷萃取除雜后，再用二氯甲烷萃取，最后合并二氯甲烷萃取液，二氯甲烷部分就是含有紫杉醇和10-DAB III的溶液；( 將二氯甲烷萃取液減壓濃縮后，用色譜級(jí)的甲醇定溶，并進(jìn)行HPLC含量測(cè)定。本發(fā)明利用曼地亞紅豆杉的枝葉資源，既提取紫杉醇，又提取10-DABIII，提高了提取速度，而且也提高了提取效果，方法簡(jiǎn)單可靠。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例，對(duì)發(fā)明作進(jìn)一步描述。試驗(yàn)所用材料曼地亞紅豆杉的枝葉，50°C烘干樣品，粉碎成100目的粉末。
試驗(yàn)用試劑分析純甲醇、正己烷，二氯甲烷，(天津市永大化學(xué)試劑開(kāi)發(fā)中心)， 色譜純甲醇和乙腈，水為超純水。試驗(yàn)用儀器KS_600E I型超聲波清洗機(jī)由(寧波海曙科生超聲設(shè)備有限公司)， Buchi R-210旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，HPLC檢測(cè)使用Waters M87雙波長(zhǎng)檢測(cè)器，Waters 515泵，77251 進(jìn)樣閥，HS 2000色譜數(shù)據(jù)處理軟件，Milli-Q超純水儀。HPLC色譜條件symmetry C 18 反相柱，250mmX4. 6mm粒度5μπι，柱溫30°C，流動(dòng)相甲醇水=65 35，乙腈水= 30 70，流速0. 8mL · mirT1 ；柱溫 30°C ；檢測(cè)波長(zhǎng) UV :227nm 禾口 234nm ；進(jìn)樣體積:10μ L。實(shí)施例一采集曼地亞紅豆杉枝葉后，置于50°C烘箱內(nèi)烘干，粉碎成100目的干粉，稱取5g， 加入IOOmL甲醇，超聲處理40min，靜置過(guò)濾，濾渣再以IOOmL的甲醇超聲40min，如此重復(fù) 3次，合并3次的甲醇提取液，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中，50°C水浴，-0. 09Mpa的真空下，減壓回收甲
醇至干。HPLC檢測(cè)甲醇提取液中的紫杉醇和10-DAB III的含量減壓回收甲醇至干后加入ISmL的甲醇和2mL的水，用正己烷萃取色素等脂溶性雜質(zhì)數(shù)次，棄去正己烷溶液后，甲醇液濃縮至干，再用二氯甲烷與水萃取數(shù)次，合并二氯甲烷萃取液，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中40°C水浴，-0. 03Mpa真空度，減壓蒸干二氯甲烷。剩余物用色譜級(jí)甲醇溶解，定溶25mL，HPLC檢測(cè)紫杉醇禾口 10-DAB III 的含量為 0. 177mg · 和 0. 12Img · g-1。實(shí)施例二試驗(yàn)用曼地亞紅豆杉枝葉溶劑浸提的提取液制備采集曼地亞紅豆杉枝葉后，置于50°C烘箱內(nèi)烘干，粉碎成100目的干粉，稱取5g，加入IOOmL甲醇，置于50°C水浴鍋，2h， 過(guò)濾，濾渣再以IOOmL的甲醇水浴池，如此重復(fù)3次，合并3次的甲醇提取液，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中，50°C水浴，-0. 09Mpa的真空下，減壓回收甲醇至干。HPLC檢測(cè)甲醇提取液中的紫杉醇和10-DAB III的含量減壓回收甲醇至干后加入ISmL的甲醇和2mL的水，用正己烷萃取色素等脂溶性雜質(zhì)數(shù)次，棄去正己烷溶液后，甲醇液濃縮至干，再用二氯甲烷與水萃取數(shù)次，合并二氯甲烷萃取液，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中40°C水浴，-0. 03Mpa真空度，減壓蒸干二氯甲烷。剩余物用色譜級(jí)甲醇溶解，定溶25mL，HPLC檢測(cè)紫杉醇和 10-DAB III 的含量為 0. 15Img · g"1 和 0. 097mg · g4。實(shí)施例三試驗(yàn)用曼地亞紅豆杉枝葉索氏提取液制備采集曼地亞紅豆杉枝葉后，置于50°C 烘箱內(nèi)烘干，粉碎成100目的干粉，稱取5g，置于索氏提取器中，加入150mL甲醇，80°C，以每小時(shí)虹吸3次的速度，提取Mi。甲醇溶液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中，50°C水浴，-0. 09Mpa的真空下， 減壓回收甲醇至干。HPLC檢測(cè)甲醇提取液中的紫杉醇和10-DAB III的含量減壓回收甲醇至干后加入ISmL的甲醇和2mL的水，用正己烷萃取色素等脂溶性雜質(zhì)數(shù)次，棄去正己烷溶液后，甲醇液濃縮至干，再用二氯甲烷與水萃取數(shù)次，合并二氯甲烷萃取液，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中40°C水浴，-0. 03Mpa真空度，減壓蒸干二氯甲烷。剩余物用色譜級(jí)甲醇溶解，定溶25mL，HPLC檢測(cè)紫杉醇和 10-DAB III 的含量為 0. 097mg · g"1 和 0. 086mg · g4。
權(quán)利要求
1.從曼地亞紅豆杉枝葉中同時(shí)提取紫杉醇和10-DABIII的方法，其特征在于(1)將曼地亞紅豆杉枝葉50°C烘干干燥后，粉碎成80目-120目的粉末，每5克干粉用 80mL-120mL甲醇進(jìn)行提取，重復(fù)三次，過(guò)濾，合并3次的甲醇提取液；(2)將甲醇提取液減壓濃縮，用正己烷萃取除雜后，再用二氯甲烷萃取，最后合并二氯甲烷萃取液，二氯甲烷部分就是含有紫杉醇和10-DAB III的溶液；(3)將二氯甲烷萃取液減壓濃縮后，用色譜級(jí)的甲醇定溶，并進(jìn)行HPLC含量測(cè)定。
2.根據(jù)權(quán)利1所述的從曼地亞紅豆杉枝葉中提取紫杉醇和10-DABIII的方法，其特征在于上述的用甲醇進(jìn)行提取是采用超聲波提取。
3.根據(jù)權(quán)利1所述的從曼地亞紅豆杉枝葉中提取紫杉醇和10-DABIII的方法，其特征在于上述的用甲醇進(jìn)行提取可以采用常規(guī)的溶劑浸提或者索氏提取。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種從曼地亞紅豆杉枝葉中同時(shí)提取紫杉醇和10-DABIII的方法，分別采用超聲提取、溶劑浸提和索氏提取，提取后的甲醇溶液減壓濃縮至干，用正己烷萃取出去色素等脂溶性雜質(zhì)，再用二氯甲烷萃取得到紫杉醇和10-DABIII的最終提取液，經(jīng)HPLC檢測(cè)其含量；本發(fā)明充分利用不同的提取方法，既提取了紫杉醇，又提取了10-DABIII，提高資源的利用率，具有方法簡(jiǎn)單、快速、高效的特點(diǎn)。
文檔編號(hào)C07D305/14GK102212045SQ20101014592
公開(kāi)日2011年10月12日 申請(qǐng)日期2010年4月8日 優(yōu)先權(quán)日2010年4月8日
發(fā)明者付順華, 史小娟, 張新鳳, 徐志明, 斯金平 申請(qǐng)人:常山曼地亞紅豆杉科技開(kāi)發(fā)有限公司