一種紅豆杉中10-去乙?；仙即嫉谋由V檢測方法
【專利摘要】一種紅豆杉中10-去乙?；仙即嫉谋由V檢測方法，涉及一種檢測方法，具體涉及一種紅豆杉中10-去乙?；仙即嫉谋由V檢測方法，所述方法包括如下步驟：⑴10-去乙?；仙即紝φ掌啡芤褐苽?；⑵樣品溶液制備；⑶薄層色譜檢測。本發(fā)明有益效果是檢測10-去乙?；仙即挤椒ê唵?、實用和經(jīng)濟。
【專利說明】—種紅豆杉中10-去乙酰基紫杉醇的薄層色譜檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種檢測方法，具體涉及一種紅豆杉中10-去乙酰基紫杉醇的薄層色譜檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002]紫杉醇是紅豆杉屬植物中的一種復(fù)雜的次生代謝產(chǎn)物，也是目前所了解的惟一一種可以促進微管聚合和穩(wěn)定已聚合微管的藥物。同位素示蹤表明，紫杉醇只結(jié)合到聚合的微管上，不與未聚合的微管蛋白二聚體反應(yīng)。細(xì)胞接觸紫杉醇后會在細(xì)胞內(nèi)積累大量的微管，這些微管的積累干擾了細(xì)胞的各種功能，特別是使細(xì)胞分裂停止于有絲分裂期，阻斷了細(xì)胞的正常分裂。通過I1-1II臨床研究，紫杉醇主要適用于卵巢癌和乳腺癌，對肺癌、大腸癌、黑色素瘤、頭頸部癌、淋巴瘤、腦瘤也都有一定療效。
[0003]10-去乙?；仙即伎梢酝ㄟ^化學(xué)合成為紫杉醇，所以檢測10-去乙?；仙即?br> 是重要的。
[0004]常規(guī)的10-去乙?；仙即紮z測方法為HPLC檢測，填料為反相填料。流動相為乙腈-水，檢測器是紫外檢測器。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]常規(guī)的HPLC檢測10-去乙?；仙即挤椒ㄒ蟾?
[0006]⑴需要一臺HPLC，一臺HPLC價格通常10萬以上，HPLC價格高，普及率低；
[0007](2) HPLC需要有專業(yè)的人員操作、維護和維修；
[0008](3) HPLC檢測需要大量溶劑，大量溶劑的使用對環(huán)境也造成了極大的污染；
[0009](4) HPLC檢測每次只能檢測一個樣品，檢測時間也長。
[0010]本發(fā)明提供了一種易于操作、能定性半定量和經(jīng)濟的薄層色譜檢測方法，該方法解決HPLC檢測的部分弊端。
[0011]一種紅豆杉中10-去乙?；仙即嫉谋由V檢測方法，所述方法包括如下步驟:
[0012]⑴稱取10-去乙?；仙即?.1?lmg，用Iml有機溶劑溶解，得到10-去乙酰基紫杉醇對照品溶液；
[0013]⑵將紅豆杉原料粉碎，用醇溶液浸提三次，合并三次浸提溶液，濃縮浸提溶液至原體積的1/3?1/2，用等體積有機溶劑I萃取三次，合并三次萃取相，蒸干萃取相，稱取蒸干粉末0.1?lmg，用Iml有機溶劑II溶解，得到樣品溶液；
[0014]⑶吸取步驟⑴和⑵制備的溶液各5?10 μ 1，點在同一硅膠G薄層板上，展開劑是鹵代烴和醇，鹵代烴和醇的體積比是100:10?I,展開,取出，晾干,用5?10%濃硫酸乙醇溶液顯色，用105°C烘干薄層板至斑點顯色。
[0015]所述方法步驟⑴中的有機溶劑優(yōu)選為甲醇、無水乙醇或N，N-甲基甲酰胺，N，N-甲基甲酰胺溶解10-去乙?；仙即既芙舛雀?，甲醇和無水乙醇沸點低。[0016]所述方法步驟⑴紅豆杉原料優(yōu)選為樹皮、枝葉和樹根。
[0017]所述方法步驟⑵醇溶液優(yōu)選為甲醇、無水乙醇、甲醇水溶液或乙醇水溶液。
[0018]所述方法步驟⑵有機溶劑I優(yōu)選為二氯甲烷、三氯甲烷或乙酸乙酯。
[0019]所述方法步驟⑵有機溶劑II優(yōu)選為甲醇、無水乙醇或N，N-二甲基甲酰胺，N，N-二甲基甲酰胺溶解10-去乙?；仙即既芙舛雀撸状己蜔o水乙醇沸點低。
[0020]所述方法步驟⑶鹵代烴優(yōu)選為二氯甲烷或三氯甲烷。
[0021]所述方法步驟⑶醇優(yōu)選為甲醇或無水乙醇。
[0022]本發(fā)明有益效果是:
[0023]⑴10-去乙?；仙即紮z測方法簡單、實用和經(jīng)濟。
[0024]⑵一次檢測可以同時檢測多個樣品。
[0025]⑶檢測結(jié)果可以定性和半定量。
【具體實施方式】
[0026]下述非限制性實施例可以使本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員更全面地理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。
[0027]實施例1
[0028]一種紅豆杉中10-去乙?；仙即嫉谋由V檢測方法，所述方法包括如下步驟:
[0029]⑴稱取10-去乙?；仙即紭?biāo)準(zhǔn)品0.5mg,用Iml甲醇超聲溶解，得到10-去乙?；仙即紝φ掌啡芤?，濃度0.5mg/ml，作為定性和半定量的標(biāo)準(zhǔn)；
[0030]⑵將紅豆杉樹皮、枝葉和樹根粉碎，粉碎后用無水乙醇浸提三次，合并三次浸提溶液，減壓蒸餾法濃縮浸提溶液，真空度0.8MPa，水浴溫度55°C，濃縮至原體積的1/3，用等體積二氯甲烷萃取濃縮液三次，合并三次萃取相，減壓蒸餾法蒸干萃取相，真空度0.4MPa，水浴溫度35°C，稱取蒸干粉末0.5mg，用Iml甲醇超聲溶解，得到樣品溶液；
[0031]⑶用玻璃點樣毛細(xì)管吸取步驟⑴和⑵制備的溶液各10 μ 1，點在同一硅膠G薄層板、距板底Icm處同一水平線上，展開劑是三氯甲烷和無水乙醇，三氯甲烷和無水乙醇的體積比是100:5，平衡5?lOmin，展開，展開至距板頂Icm處取出，取出，用熱風(fēng)吹干，用10%濃硫酸乙醇溶液顯色，用105°C烘干薄層板至斑點顯色。
【權(quán)利要求】
1.一種紅豆杉中10-去乙?；仙即嫉谋由V檢測方法，所述方法包括如下步驟: ⑴稱取10-去乙?；仙即?.1?lmg，用Iml有機溶劑溶解，得到10-去乙?；仙即紝φ掌啡芤海? ⑵將紅豆杉原料粉碎，用醇溶液浸提三次，合并三次浸提溶液，濃縮浸提溶液至原體積的1/3?1/2，用等體積有機溶劑I萃取三次，合并三次萃取相，蒸干萃取相，稱取蒸干粉末0.1?lmg，用Iml有機溶劑II溶解，得到樣品溶液； ⑶吸取步驟⑴和⑵制備的溶液各5?10 μ 1，點在同一硅膠G薄層板上，展開劑是鹵代烴和醇，鹵代烴和醇的體積比是100:10?I,展開,取出，晾干,用5?10%濃硫酸乙醇溶液顯色，用105°C烘干薄層板至斑點顯色。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:所述方法步驟⑴有機溶劑是甲醇、無水乙醇或N，N-二甲基甲酰胺。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:所述方法步驟⑴紅豆杉原料是樹皮、枝葉和樹根。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:所述方法步驟⑵醇溶液是甲醇、無水乙醇、甲醇水溶液或乙醇水溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:所述方法步驟⑵有機溶劑I是二氯甲烷、三氯甲烷或乙酸乙酯。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:所述方法步驟⑵有機溶劑II是甲醇、無水乙醇或N，N-二甲基甲酰胺。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:所述方法步驟⑶鹵代烴是二氯甲烷或三氯甲烷。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:所述方法步驟⑶醇是甲醇或無水乙醇。
【文檔編號】G01N30/90GK103808851SQ201210460618
【公開日】2014年5月21日 申請日期:2012年11月15日 優(yōu)先權(quán)日:2012年11月15日
【發(fā)明者】劉勝遠 申請人:劉勝遠