一種紫杉醇制劑的提取純化方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及一種紫杉醇制劑的提取純化方法。
【背景技術(shù)】
[0002]紫杉醇是存在于天然植物甜菊葉中的五環(huán)三萜類化合物，具有廣泛的生物活性，且毒性極小，副作用少，成為當(dāng)前國(guó)內(nèi)外研宄開發(fā)的熱點(diǎn)。紫杉醇為白色結(jié)晶體粉末，無臭、無味，難溶于水，易溶于氯仿、丙酮等有機(jī)溶劑。紫杉醇具有獨(dú)特的抗腫瘤作用，紫杉醇主要適用于卵巢癌和乳腺癌，對(duì)肺癌、大腸癌、黑色素瘤、頭頸部癌、淋巴瘤、腦瘤也都有一定療效。
[0003]目前紫杉醇主要從紅豆杉植物中提取，在紅豆杉科植物紅豆杉的干燥根、枝葉以及樹皮中均含有紫杉醇，但是含量較低，約為樹皮干重的0.01 %。紅豆杉是世界上公認(rèn)瀕臨滅絕的天然珍稀抗癌植物，是經(jīng)過了第四紀(jì)冰川遺留下來的古老孑遺樹種，在地球上已有250萬年的歷史，但是自然條件下紅豆杉生長(zhǎng)速度緩慢，再生能力差，因此，提高紅豆杉中紫杉醇的回收率顯得非常必要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種紫杉醇制劑的提取純化方法。
[0005]本發(fā)明通過下述技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)。
[0006]一種紫杉醇制劑的提取純化方法，包括以下步驟:
[0007]步驟一，將紅豆杉枝葉樹皮洗凈，低溫干燥后粉碎，用丙酮-乙酸乙酯混合液進(jìn)行浸提，0-5°C條件下放置8-10小時(shí)，過濾的濾液；
[0008]步驟二，將濾液至于0_5°C條件下進(jìn)行減壓濃縮，得到粗浸膏，將粗浸膏溶于溫水中形成浸膏液，向浸膏液中加入乙酸乙酯進(jìn)行多次萃取，合并萃取液，將萃取液減壓濃縮，得粗提取物；
[0009]步驟三，將粗提取物用三氯甲烷進(jìn)行溶解，加入到已活化的堿性氧化鋁固定相柱中，抽干，先用三氯甲烷淋洗并抽干，然后用三氯甲烷和甲醇的混合淋洗劑淋洗并抽干，再用三氯甲烷和甲醇的混合洗脫劑洗脫，將收集的洗脫液減壓濃縮，得到提取物半成品；
[0010]步驟四，將得到的提取物半成品用乙腈溶解，用高壓液相色譜分離，色譜柱為C18硅膠填料，流動(dòng)相為乙腈和水，而后將分離后含紫杉醇的流動(dòng)相進(jìn)行蒸發(fā)，干燥，得到高純度紫杉醇。
[0011]優(yōu)選的，步驟一中低溫干燥的溫度是50-60°C，粉碎成粉末的大小為50-100目。
[0012]優(yōu)選的，步驟二中溫水的水溫為30_40°C，粗浸膏與溫水的體積比為1:2-2.5。
[0013]優(yōu)選的，步驟二中用于萃取的乙酸乙酯與粗浸膏體積比為1:2.5-3ο
[0014]優(yōu)選的，步驟三種用于溶解粗提取物的三氯甲烷質(zhì)量為粗提取物的10-12倍，粗提取物溶液在堿性氧化鋁固定相柱中的停留時(shí)間為30-40分鐘。
[0015]本發(fā)明具有的優(yōu)點(diǎn)和積極效果是:采用工藝，采用低溫浸提，極大地保護(hù)了紫杉醇，使其在分離過程中不發(fā)生轉(zhuǎn)化，紫杉醇作為一種生物大分子物質(zhì)，受溫度、有機(jī)溶劑、酸、堿等環(huán)境條件的影響，易降解或異構(gòu)生成其它紫杉烷類物質(zhì)；溫度較高時(shí)也會(huì)發(fā)生降解反應(yīng)，生成相應(yīng)的小分子物質(zhì)。用堿性氧化鋁固定相柱層析進(jìn)行提取，可以除去大量的親水性物質(zhì)、脂質(zhì)物質(zhì)，提高紫杉醇的回收率并提高所得紫杉醇的純度。
【具體實(shí)施方式】
[0016]下面通過具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行進(jìn)一步說明。
[0017]實(shí)施例1:
[0018]步驟一，將紅豆杉枝葉樹皮洗凈，500C條件進(jìn)行干燥，干燥后粉碎至50目，用丙酮-乙酸乙酯混合液進(jìn)行浸提，4°C條件下放置8小時(shí)，過濾的濾液。
[0019]步驟二，將濾液至于4°C條件下進(jìn)行減壓濃縮，得到粗浸膏，將粗浸膏溶于30°C水中，粗浸膏與水的體積比為1:2，向水溶后的浸膏液中加入乙酸乙酯進(jìn)行多次萃取，每次加入乙酸乙酯與粗浸膏體積比為1:2.5，合并乙酸乙酯萃取液，將萃取液減壓濃縮，得粗提取物。
[0020]步驟三，將粗提取物用三氯甲烷進(jìn)行溶解，三氯甲烷質(zhì)量為粗提取物的10倍，加入到已活化的堿性氧化鋁固定相柱中，抽干，先用三氯甲烷淋洗并抽干，然后用三氯甲烷和甲醇的混合淋洗劑淋洗并抽干，再用三氯甲烷和甲醇的混合洗脫劑洗脫，提取物溶液在堿性氧化鋁固定相柱中的停留時(shí)間為30分鐘，將收集的洗脫液減壓濃縮，得到提取物半成品;
[0021]步驟四，將得到的提取物半成品用乙腈溶解，用高壓液相色譜分離，色譜柱為C18硅膠填料，流動(dòng)相為乙腈和水，而后將分離后含紫杉醇的流動(dòng)相進(jìn)行蒸發(fā)，干燥，得到高純度紫杉醇。
[0022]實(shí)施例2:
[0023]步驟一，將紅豆杉枝葉樹皮洗凈，60°C條件進(jìn)行干燥，干燥后粉碎至100目，用丙酮-乙酸乙酯混合液進(jìn)行浸提，4°C條件下放置10小時(shí)，過濾的濾液。
[0024]步驟二，將濾液至于4°C條件下進(jìn)行減壓濃縮，得到粗浸膏，將粗浸膏溶于40°C水中，粗浸膏與水的體積比為1:2.5，向水溶后的浸膏液中加入乙酸乙酯進(jìn)行多次萃取，每次加入乙酸乙酯與粗浸膏體積比為1:3，合并乙酸乙酯萃取液，將萃取液減壓濃縮，得粗提取物。
[0025]步驟三，將粗提取物用三氯甲烷進(jìn)行溶解，三氯甲烷質(zhì)量為粗提取物的12倍，加入到已活化的堿性氧化鋁固定相柱中，抽干，先用三氯甲烷淋洗并抽干，然后用三氯甲烷和甲醇的混合淋洗劑淋洗并抽干，再用三氯甲烷和甲醇的混合洗脫劑洗脫，提取物溶液在堿性氧化鋁固定相柱中的停留時(shí)間為40分鐘，將收集的洗脫液減壓濃縮，得到提取物半成品;
[0026]步驟四，將得到的提取物半成品用乙腈溶解，用高壓液相色譜分離，色譜柱為C18硅膠填料，流動(dòng)相為乙腈和水，而后將分離后含紫杉醇的流動(dòng)相進(jìn)行蒸發(fā)，干燥，得到高純度紫杉醇。
[0027]以上對(duì)本發(fā)明做了示例性的描述，應(yīng)該說明的是，在不脫離本發(fā)明的核心的情況下，任何簡(jiǎn)單的變形、修改或者其他本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠不花費(fèi)創(chuàng)造性勞動(dòng)的等同替換均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種紫杉醇制劑的提取純化方法，其特征在于:包括以下步驟: 步驟一，將紅豆杉枝葉樹皮洗凈，低溫干燥后粉碎，用丙酮-乙酸乙酯混合液進(jìn)行浸提，0-5°C條件下放置8-10小時(shí)，過濾得濾液； 步驟二，將所述濾液置于0-5°C條件下進(jìn)行減壓濃縮，得到粗浸膏，將所述粗浸膏溶于溫水中形成浸膏液，向所述浸膏液中加入乙酸乙酯進(jìn)行多次萃取，合并萃取液，將所述萃取液減壓濃縮，得粗提取物； 步驟三，將所述粗提取物用三氯甲烷進(jìn)行溶解，加入到已活化的堿性氧化鋁固定相柱中，抽干，先用三氯甲烷淋洗并抽干，然后用三氯甲烷和甲醇的混合淋洗劑淋洗并抽干，再用三氯甲烷和甲醇的混合洗脫劑洗脫，將收集的洗脫液減壓濃縮，得到提取物半成品； 步驟四，將所述提取物半成品用乙腈溶解，用高壓液相色譜分離，色譜柱為C18硅膠填料，流動(dòng)相為乙腈和水，而后將分離后含紫杉醇的流動(dòng)相進(jìn)行蒸發(fā)，干燥，得到高純度紫杉醇。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的紫杉醇制劑的提取純化方法，其特征在于:所述步驟一中低溫干燥的溫度是50-60°C，粉碎成粉末的大小為50-100目。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的紫杉醇制劑的提取純化方法，其特征在于:所述步驟二中溫水的水溫為30-40°C，所述粗浸膏與所述溫水的體積比為1:2-2.5。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的紫杉醇制劑的提取純化方法，其特征在于:所述步驟二中用于萃取的所述乙酸乙酯與所述粗浸膏體積比為1:2.5-3ο
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的紫杉醇制劑的提取純化方法，其特征在于:所述步驟三種用于溶解所述粗提取物的三氯甲烷質(zhì)量為所述粗提取物的10-12倍，所述粗提取物溶液在所述堿性氧化鋁固定相柱中的停留時(shí)間為30-40分鐘。
【專利摘要】本發(fā)明提供一種紫杉醇制劑的提取純化方法，包括材料低溫粉碎，低溫浸提，溫水除雜，有機(jī)溶劑萃取，高壓液相色譜分離等步驟。本發(fā)明具有的有益效果是：能夠極大地保護(hù)了紫杉醇，使其在分離過程中不發(fā)生轉(zhuǎn)化，除去大量的親水性物質(zhì)、脂質(zhì)物質(zhì)的同時(shí)有效的保護(hù)紫杉醇不被講解，提高紫杉醇的回收率并提高所得紫杉醇的純度。
【IPC分類】C07D305-14
【公開號(hào)】CN104529952
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410840611
【發(fā)明人】季延濱, 李濤
【申請(qǐng)人】芝圣（天津）生物科技有限公司
【公開日】2015年4月22日
【申請(qǐng)日】2014年12月30日