專利名稱：千金藤堿及其鹽的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于化學(xué)化工領(lǐng)域，具體地，涉及植物天然生理活性物質(zhì)千金藤堿的提取 分離及其半合成產(chǎn)物鹽酸千金藤堿的制備。
背景技術(shù)：
千金藤堿，又稱為千金藤素、頭花千金藤堿、金線吊烏堿、豆花藤堿。英文名 C印haranthine，音譯名為西法安生?；瘜W(xué)名為6' , 12' -dimethoxy-2, 2‘ -dimethyl-6, 7-[methylenebis(oxy)]0xyacan-than。千金藤堿最早于1934年日本人邁藤平三郎從防己 科植物頭花千金藤(Stephania cepharantha)中發(fā)現(xiàn)，后又從佐佐木千金藤(S. sasakii)、 地不容(S.epigaea)等植物中相繼分離到該化合物。我國尤其是西南地區(qū)，擁有豐富的該 類植物資源。千金藤堿屬天然存在的雙芐基異喹啉型叔胺(bisbenzylisoquinolines. BBI) 生物堿，分子呈堿性，易溶于氯仿、甲醇、乙醇，可溶于苯、丙酮、乙醚；在石油醚微溶，不溶于 水，但可溶于稀酸溶液，并可與苯形成結(jié)合物而不容于丙酮。千金藤堿具有抗菌，解毒，抗 癌，免疫調(diào)節(jié)作用，促進(jìn)網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的作用，調(diào)節(jié)神經(jīng)和血液循環(huán)的作用等廣泛的生理活 性。在日本，將千金藤堿經(jīng)半合成制成鹽酸千金藤堿(C印haranthine hydrochloride)，用 于臨床放療，化療所致白細(xì)胞減少癥。已經(jīng)有大計(jì)量用藥的經(jīng)驗(yàn)而未發(fā)現(xiàn)毒副作用的報(bào)道。 鹽酸千金藤堿具有明顯的治療由環(huán)磷酰胺所致的白細(xì)胞減少及逆轉(zhuǎn)多藥耐藥性的作用。然 而，千金藤堿及其鹽存在分離純化制備過程繁瑣，得率低，純化過程中因?yàn)槭褂帽皆噭?苯含量超標(biāo)等問題，迄今沒有工業(yè)化批量生產(chǎn)的制備工藝。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的旨在提供一種成本低、得率高、純度高、制備過程簡單易行、生產(chǎn)周 期短，易于批量制備和工業(yè)化生產(chǎn)千金藤堿及其鹽的制備方法。為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，本發(fā)明提供了如下的技術(shù)方案千金藤堿及其鹽的制備方法，取防已科植物，烘干、粉碎，用酸水冷浸提取，提取液 經(jīng)堿化，沉淀，過濾沉淀，干燥，得總生物堿提取物；總生物堿提取物經(jīng)甲醇或乙醇或丙酮加 熱回流提取，過濾，濃縮，提取物經(jīng)硅膠柱或氧化鋁柱柱層析分離，用含水甲醇或乙醇或乙 酸乙酯/丙酮梯度洗脫，收集富含千金藤堿的洗脫液，濃縮干燥，得千金藤堿粗品；將千金 藤堿粗品用丙酮/水重結(jié)晶，得純度大于98%的千金藤堿，再進(jìn)一步溶解用鹽酸酸化，得純 度大于98%的鹽酸千金藤堿。所述的植物是防己科(Menispermaceae)千金藤屬(Stephania)植物、防己科木防 己屬(Cocculus)植物、防己科輪環(huán)藤屬(Cyclea)植物、防己科錫生藤屬(Cissampelos)植 物、防己科印度防己屬(Anamirta)植物、或防己科谷樹屬(Chondodendron)植物；使用的植 物部位包括上述植物的根莖、莖、葉、芽、枝、花、果實(shí)、種子或全草。所述的方法，用濃度為1-2%的酸水溶液冷浸提取3-4次，每次提取時(shí)間為2-5天。所述的方法，酸水溶液包括但不限于鹽酸水溶液、硫酸水溶液、草酸水溶液、冰醋酸水溶液。所述的方法，堿化時(shí)調(diào)pH至9-10。所述的方法，用于堿化的堿包括但不限于氫氧化鈉、氫氧化鉀。所述的方法，加熱回流總生物堿提取物時(shí)使用甲醇或乙醇或丙酮，提取2-3次，每 次2-3小時(shí)。所述的方法，柱層析分離用的填充劑為硅膠或過氧化鋁，包括但不限于硅膠 (100-200目)、硅膠(200-300目)、氧化鋁。所述的方法，氧化鋁柱柱層析的洗脫溶液為含水乙醇或甲醇。所述的方法，硅膠柱柱層析的洗脫溶液為乙酸乙酯/丙酮。所述的方法，用于檢測和指導(dǎo)柱層析的薄層層析法是以10 1的氯仿一甲醇為展 開劑，碘為顯色劑。所述的方法，重結(jié)晶步驟是將千金藤粗品用適量含水丙酮或含水甲醇或乙醇加熱 充分溶解后，室溫或4-10°C低溫下放置過夜，將析出的結(jié)晶或沉淀用水反復(fù)洗滌，或再次進(jìn) 行重結(jié)晶，過濾，干燥。所述的方法，千金藤堿成鹽是將千金藤純品用適量含水丙酮或含水甲醇或乙醇加 熱充分溶解后，緩緩加入鹽酸，邊加邊攪拌，室溫或4-10°C低溫下放置過夜，直到析出結(jié)晶， 將析出的結(jié)晶水反復(fù)洗滌，或再次進(jìn)行重結(jié)晶，過濾，干燥，得純度大于98 %的鹽酸千金藤 堿。所述的方法，千金藤堿成鹽所加鹽酸量按照反應(yīng)機(jī)理確定，公式為鹽酸分子量 36. 5 X 2 X千金藤堿的質(zhì)量/千金藤堿分子量606. 171/鹽酸濃度37 % =所需鹽酸的量，計(jì)
笪弁。所述的方法，鹽酸千金藤堿的干燥方法可采用加熱干燥、冷凍干燥、噴霧干燥或微 波干燥。經(jīng)過上述制備工藝提取分離制備的千金藤堿及其鹽，操作簡單可行，產(chǎn)品收率高， 純度均大于98%，無有機(jī)溶劑的殘留，可直接作為制藥原料。本發(fā)明制備千金藤堿及其鹽的具體步驟如下(1)植物原料去雜、洗凈、烘干、粉碎成粗粉(過20-40目篩)。(2)將該植物粗粉用1-2%酸水(可以是鹽酸或冰醋酸)冷浸提取3-4次，每次提 取時(shí)間為2-5天，過濾、合并濾液，濃縮、回收溶劑。(3)殘留水溶液加氫氧化鈉(NaOH)調(diào)節(jié)提取液的酸堿度，將pH調(diào)至9_10，至生物 堿沉淀析出，過濾，得總生物堿提取物。(4)總生物堿提取用低級醇(可以是甲醇或乙醇)或丙酮加熱回流提取2-3次，每 次提取時(shí)間為2-3小時(shí)，過濾，濃縮。(5)上述提取物用小體積溶劑溶解后緩緩傾入硅膠柱或氧化鋁柱層析柱的上端。 層析柱的柱徑高比為1 20-50。以不同濃度乙酸乙酯/丙酮或低級醇(可以是甲醇或乙 醇)梯度洗脫，以10 1的氯仿一甲醇為展開劑，碘為顯色劑，采用薄層層析法檢測，收集 富含千金藤堿的部位。(6)將千金藤堿粗品用適量丙酮/水加熱溶解后，室溫(或4-10°C低溫)下放置 過夜，析出結(jié)晶或沉淀。將結(jié)晶或沉淀用水反復(fù)洗滌，或再次進(jìn)行重結(jié)晶后，過濾，干燥，得到千金藤堿純品。(7)將千金藤堿純品用適量丙酮或低級醇(可以是甲醇或乙醇)溶解后，按照公式 鹽酸分子量(36. 5)X2X金藤堿的質(zhì)量/606. 171/37%=所需鹽酸的量，緩緩加入鹽酸，邊 加邊攪拌，室溫(或4-10°C低溫)下放置過夜，析出結(jié)晶，用水反復(fù)洗滌，或重結(jié)晶，過濾，干 燥，得到鹽酸千金藤堿純品。(8)千金藤堿純品的干燥，可用加熱干燥、冷凍干燥、噴霧干燥或微波干燥等。(9)千金藤堿的高壓液相色譜(HPLC)定量分析。
具體實(shí)施例方式下面以本發(fā)明的實(shí)施例來進(jìn)一步說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但本發(fā)明的內(nèi)容并不 局限于此。實(shí)施例1 從地不容植物(Stephaniaiipigaea)中提取分離純化制備千金藤堿及鹽酸千金藤 堿。(1)250. OKg地不容根莖去雜、洗凈、烘干、粉碎成粗粉(過20-40目篩)；(2)上述粗粉用1-2%鹽酸水溶液，冷浸提取34次，每次提取時(shí)間為4天，過濾、合 并濾液，濃縮、回收溶劑；(3)殘留水溶液加氫氧化鈉(NaOH)，將pH調(diào)至9，至生物堿沉淀析出，過濾，得總生 物堿提取物52. OKg ；(4)總生物堿提取用乙醇加熱回流提取2次，每次提取時(shí)間為3小時(shí)，過濾，濃縮， 得千金藤堿總堿1. 30Kg ；(5)上述提取物用小體積乙酸乙酯溶解后緩緩傾入硅膠柱(100-200目)的上端。 層析柱的柱徑高比為1 20。以乙酸乙酯/丙酮(20 1-1 1)梯度洗脫，以10 1的 氯仿一甲醇為展開劑，碘為顯色劑，薄層層析法檢測，收集富含千金藤堿的部位，得千金藤 堿粗堿980. Og ；(6)將千金藤堿粗品用丙酮(1450mL)加熱溶解后，待燒杯中溶液冷卻后，緩緩加 入30ml蒸餾水，邊加邊攪拌。室溫放置約2天，直到結(jié)晶出現(xiàn)。過濾結(jié)晶，放置干燥。最終 得到千金藤堿443. Og ；(7)用高壓液相色譜(HPLC)分析，千金藤堿的含量為98. 14% ；(8)將上述千金藤堿純品加入SOOmL丙酮于70°C水浴溶解，待溶液冷卻后，緩緩加 入鹽酸144mL，邊加邊攪拌。室溫放置約1天，直到結(jié)晶完全析出。過濾結(jié)晶，得到鹽酸千金 藤堿 578. Og ；(9)將上述鹽酸千金藤堿加入1200mL的甲醇，置于70°C水浴中溶解。室溫放置， 直到結(jié)晶出現(xiàn)。過濾結(jié)晶，得到白色鹽酸千金藤堿476g;(10)加熱干燥，得鹽酸千金藤堿，純度大于98%。實(shí)施例2 從地不容植物(Stephaniaiipigaea)中提取分離純化制備千金藤堿及鹽酸千金藤 堿(l)20Kg地不容根莖去雜、洗凈、烘干、粉碎成粗粉(過20-40目篩)；
(2)上述粗粉用1-2%醋酸水溶液，冷浸提取4次，每次提取時(shí)間為5天，過濾、合 并濾液，濃縮、回收溶劑；(3)殘留水溶液加氫氧化鉀(KOH)，將pH調(diào)至9，至生物堿沉淀析出，過濾，得總生 物堿提取物4. 9Kg ；(4)總生物堿提取用乙醇加熱回流提取2次，每次提取時(shí)間為2小時(shí)，過濾，濃縮， 得千金藤堿總堿127g ；(5)上述提取物用小體積甲醇溶解后緩緩傾入氧化鋁層析柱的上端。層析柱的柱 徑高比為1 35。以含水甲醇梯度洗脫，以10 1的氯仿一甲醇為展開劑，碘為顯色劑，薄 層層析法檢測，收集富含千金藤堿的部位，得千金藤堿粗堿98. Og ；(6)將千金藤堿粗品用丙酮(140mL)加熱溶解后，待燒杯中溶液冷卻后，緩緩加入 5. OmL蒸餾水，邊加邊攪拌。室溫放置約1天，直到結(jié)晶出現(xiàn)。過濾結(jié)晶，放置千燥。最終得 到千金藤堿45. 9g ；(7)用高壓液相色譜(HPLC)分析，千金藤堿的含量為98. 40%。(8)將上述千金藤堿純品加入IOOmL丙酮于70°C水浴溶解，待溶液冷卻后，緩緩加 入鹽酸13. 2mL，邊加邊攪拌。室溫放置約1天，直到結(jié)晶完全析出。過濾結(jié)晶，得到鹽酸千 金藤堿56. 3g ；(9)將上述鹽酸千金藤堿加入125mL的甲醇，置于70°C水浴中溶解。室溫放置，直 到結(jié)晶出現(xiàn)。過濾結(jié)晶，得白色鹽酸千金藤堿46. 2g ；(10)加熱干燥，得鹽酸千金藤堿，純度大于98%。實(shí)施例3 從植物頭花千金藤(S. c印harantha)中提取分離純化制備千金藤堿及鹽酸千金 藤堿(1) 100. OKg頭花千金藤去雜、洗凈、烘干、粉碎成粗粉(過20-40目篩)；(2)上述粗粉用1-2%鹽酸水溶液，冷浸提取3次，每次提取時(shí)間為2天，過濾、合 并濾液，濃縮、回收溶劑；(3)殘留水溶液加氫氧化鈉(NaOH)，將pH調(diào)至10，至生物堿沉淀析出，過濾，得總 生物堿提取物18. 6Kg。(4)總生物堿提取用乙醇加熱回流提取3次，每次提取時(shí)間為2. 5小時(shí)，過濾，濃 縮，得千金藤堿總堿680g;(5)上述提取物用小體積乙酸乙酯溶解后緩緩傾入硅膠柱(100-200目)的上端。 層析柱的柱徑高比為1 20。以乙酸乙酯/丙酮(20 1-1 1)梯度洗脫，以10 1的 氯仿一甲醇為展開劑，碘為顯色劑，薄層層析法檢測，收集富含千金藤堿的部位，得千金藤 堿粗堿478. Og ；(6)將千金藤堿粗品用丙酮(1450mL)加熱溶解后，待燒杯中溶液冷卻后，緩緩加 入30ml蒸餾水，邊加邊攪拌。室溫放置約2天，直到結(jié)晶出現(xiàn)。過濾結(jié)晶，放置干燥。最終 得到千金藤堿221. 5g;(7)用高壓液相色譜(HPLC)分析，千金藤堿的含量為98. 71% ；(8)將上述千金藤堿純品加入400mL丙酮于70°C水浴溶解，待溶液冷卻后，緩緩加 入鹽酸72mL，邊加邊攪拌。室溫放置約1天，直到結(jié)晶完全析出。過濾結(jié)晶，得到鹽酸千金藤堿 187. Og ；(9)將上述鹽酸千金藤堿加入600mL的甲醇，置于70°C水浴中溶解。室溫放置，直 到結(jié)晶出現(xiàn)。過濾結(jié)晶，得到白色鹽酸千金藤堿169g ；(10)加熱干燥，得鹽酸千金藤堿，純度大于98%。實(shí)施例4 從植物佐佐木千金藤(S. sasakii)中提取分離純化制備千金藤堿及鹽酸千金藤 堿(1)80. OKg頭花千金藤去雜、洗凈、烘干、粉碎成粗粉(過20-40目篩)；(2)上述粗粉用1-2%鹽酸水溶液，冷浸提取3次，每次提取時(shí)間為3天，過濾、合 并濾液，濃縮、回收溶劑；(3)殘留水溶液加氫氧化鈉(NaOH)，將pH調(diào)至9，至生物堿沉淀析出，過濾，得總生 物堿提取物13. 6Kg ；(4)總生物堿提取用乙醇加熱回流提取3次，每次提取時(shí)間為2小時(shí)，過濾，濃縮， 得千金藤堿總堿560g ；(5)上述提取物用小體積乙酸乙酯溶解后緩緩傾入硅膠柱(100-200目)的上端。 層析柱的柱徑高比為1 20。以乙酸乙酯/丙酮(20 1-1 1)梯度洗脫，以10 1的 氯仿一甲醇為展開劑，碘為顯色劑，薄層層析法檢測，收集富含千金藤堿的部位，得千金藤 堿粗堿389. Og ；(6)將千金藤堿粗品用丙酮(1450mL)加熱溶解后，待燒杯中溶液冷卻后，緩緩加 入30ml蒸餾水，邊加邊攪拌。室溫放置約2天，直到結(jié)晶出現(xiàn)。過濾結(jié)晶，放置干燥。最終 得到千金藤堿219. 5g；(7)用高壓液相色譜(HPLC)分析，千金藤堿的含量為98. 89% ；(8)將上述千金藤堿純品加入350mL丙酮于70°C水浴溶解，待溶液冷卻后，緩緩加 入鹽酸68mL，邊加邊攪拌。室溫放置約1天，直到結(jié)晶完全析出。過濾結(jié)晶，得到鹽酸千金 藤堿 168. Og ；(9)將上述鹽酸千金藤堿加入450mL的甲醇，置于70°C水浴中溶解。室溫放置，直 到結(jié)晶出現(xiàn)。過濾結(jié)晶，得到白色鹽酸千金藤堿146g ；(10)加熱干燥，得鹽酸千金藤堿，純度大于98%。本發(fā)明千金藤堿的薄層層析法(TLC)按以下的方法進(jìn)行儀器與試劑薄層層析用預(yù)制硅膠板H(0. 20-0. 25 μ m,青島海洋化工廠)，所有溶 劑均為分析純，水為超純水。色譜條件及顯色劑的的選擇參考文獻(xiàn)并經(jīng)試驗(yàn)選用10 1的氯仿一甲醇為展開 劑，碘為顯色劑。在此條件下對千金藤堿進(jìn)行檢測，靈敏度高，結(jié)果較為理想。本發(fā)明千金藤堿的高壓液相色譜(HPLC)定量分析按以下的方法進(jìn)行儀器與試劑HPLC儀器為Alliance高效液相色譜儀，自動進(jìn)樣器，PDA二級管陣列 可變波長檢測器。甲醇為色譜純，水為超純水，其余溶劑均為分析純。色譜條件及檢測波長的選擇參考文獻(xiàn)并經(jīng)試驗(yàn)選用SHIMADZUshim-pack CLC-CN(M)柱，5 μ m，4. 6_X 250mm;甲醇-8%氨水(9 1)為流動相。檢測波長為282nm。 柱溫25°C。在此條件下對千金藤堿供試品溶液進(jìn)行測定，結(jié)果較為理想；實(shí)驗(yàn)中理論板數(shù)不低于2000。實(shí)驗(yàn)材料精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥致恒重的千金藤堿對照品10mg，置 IOml量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(每Iml中含千金藤堿1. Omg)。供試品溶液的制備條件選擇精密稱取本品5. Omg，置5ml容量瓶中，加甲醇溶解 并稀釋至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液作為供試品溶液。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)1、線性關(guān)系考察分別精密吸取對照品溶液8、12、16、20、24μ 1按上述色譜條件 測定峰面積，結(jié)果見表1，以峰面積積分值對進(jìn)樣量進(jìn)行回歸處理，千金藤堿在8. 8μ g 26. 4μ g范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系?；貧w方程為Y = 851531. 48X+3415631. 20R2 = 1. 00。表1線性關(guān)系考察結(jié)果 2.精密度試驗(yàn)取同一千金藤堿對照品溶液，按上述色譜條件，連續(xù)測定5次 (進(jìn)樣量 10 μ 1)，測得峰面積積分值分別為 13925269、13440586、13790865、13697470、 13291016、RSD = 1. 90%。3.穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液，按上述色譜條件測定6次，每次間隔約2小 時(shí)，測得峰面積積分值分別為 9387693、9133477、9045518、9143471、9081768、9097646、RSD =1. 34%，表明供試品溶液在12小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。4.重現(xiàn)性試驗(yàn)取同一千金藤堿原料，按供試品溶液制備方法制備，按上述液相 色譜條件測定，結(jié)果見表2，證明此方法重現(xiàn)性良好。表2千金藤堿重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果 分別取三個(gè)批號的經(jīng)過上述制備工藝提取分離得到千金藤堿原料按上述方法進(jìn) 行含量測定(見表3)，千金藤堿含量大于98 %。表3千金藤堿含量測定結(jié)果 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的方法具有下述的優(yōu)點(diǎn)1、本發(fā)明是從防己科(Menispermaceae)千金藤屬(St印hania)、木防己屬 (Cocculus)、輪環(huán)藤屬(Cyclea)、錫生藤屬(Cissampelos)、印度防己屬(Anamirta)或谷樹 屬(Chondodendron)植物中的任何一種含千金藤堿的植物或上述植物的根莖、莖、葉、芽、 枝、花、果實(shí)、種子或全草任何一含有千金藤堿的部位中提取千金藤堿；2、本發(fā)明采用酸水為溶劑從植物原料中提取千金藤堿，得率高，成本低；3、本發(fā)明主要用含水低級醇(甲醇或乙醇)，丙酮，少量使用乙酸乙酯為溶劑，成 本低，易于批量化生產(chǎn)；4、本發(fā)明使用的柱層析填充劑為硅膠或氧化鋁，價(jià)格便宜，簡單易行，成本低；5、本發(fā)明采用重結(jié)晶的方法純化制備千金藤堿及其鹽，不僅產(chǎn)品形狀好，顏色白， 純度高，溶劑殘留少，而且簡單易行，成本低；6、本發(fā)明采用薄層層析法作為檢測手段，指導(dǎo)柱層析的分離純化，方法簡單易行， 靈敏，所得產(chǎn)品的得率高，純度高。
權(quán)利要求
千金藤堿及其鹽的制備方法，取防己科植物，烘干、粉碎，用酸水冷浸提取，提取液經(jīng)堿化，沉淀，過濾沉淀，干燥，得總生物堿提取物；總生物堿提取物經(jīng)甲醇或乙醇或丙酮加熱回流提取，過濾，濃縮，提取物經(jīng)硅膠柱或氧化鋁柱柱層析分離，用含水甲醇或乙醇或乙酸乙酯/丙酮梯度洗脫，收集富含千金藤堿的洗脫液，濃縮干燥，得千金藤堿粗品；將千金藤堿粗品用丙酮/水重結(jié)晶，得純度大于98％的千金藤堿，再進(jìn)一步溶解用鹽酸酸化，得純度大于98％的鹽酸千金藤堿。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述的植物是防己科(Menispermaceae) 千金藤屬(St印hania)植物、防己科木防己屬(Cocculus)植物、防己科輪環(huán)藤屬(Cyclea) 植物、防己科錫生藤屬(Cissampelos)植物、防己科印度防己屬(Anamirta)植物、或防己科 谷樹屬(Chondodendron)植物；使用的植物部位包括上述植物的根莖、莖、葉、芽、枝、花、果 實(shí)、種子或全草。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于用濃度為1-2%的酸水溶液冷浸提取3-4 次，每次提取時(shí)間為2-5天。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的方法，其特征在于酸水溶液包括但不限于鹽酸水溶液、硫 酸水溶液、草酸水溶液、冰醋酸水溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于堿化時(shí)調(diào)pH至9-10。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于用于堿化的堿包括但不限于氫氧化鈉、氫 氧化鉀。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于加熱回流總生物堿提取物時(shí)使用甲醇或乙 醇或丙酮，提取2-3次，每次2-3小時(shí)。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于柱層析分離用的填充劑為硅膠或過氧化 鋁，包括但不限于硅膠(100-200目)、硅膠(200-300目)、氧化鋁。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于氧化鋁柱柱層析的洗脫溶液為含水乙醇或 甲醇。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于硅膠柱柱層析的洗脫溶液為乙酸乙酯/丙酮。
11.根據(jù)權(quán)利1所述的方法，用于檢測和指導(dǎo)柱層析的薄層層析法是以10 1的氯 仿一甲醇為展開劑，碘為顯色劑。
12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，重結(jié)晶步驟是將千金藤粗品用適量含水丙酮或含水 甲醇或乙醇加熱充分溶解后，室溫或4-10°C低溫下放置過夜，將析出的結(jié)晶或沉淀用水反 復(fù)洗滌，或再次進(jìn)行重結(jié)晶，過濾，干燥。
13.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，千金藤堿成鹽是將千金藤純品用適量含水丙酮或含 水甲醇或乙醇加熱充分溶解后，緩緩加入鹽酸，邊加邊攪拌，室溫或4-10°C低溫下放置過 夜，直到析出結(jié)晶，將析出的結(jié)晶水反復(fù)洗滌，或再次進(jìn)行重結(jié)晶，過濾，干燥，得純度大于 98%的鹽酸千金藤堿。
14.根據(jù)權(quán)利要求1或13所述的方法，千金藤堿成鹽所加鹽酸量按照反應(yīng)機(jī)理確定，公 式為鹽酸分子量36. 5 X 2 X千金藤堿的質(zhì)量/千金藤堿分子量606. 171/鹽酸濃度37% = 所需鹽酸的量，計(jì)算。
15.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于鹽酸千金藤堿的干燥方法可采用加熱干燥、冷凍干燥、噴霧干燥或微波干燥。
全文摘要
提供一種從植物中提取分離純化制備千金藤堿及其鹽的新方法。植物防己科原料的酸水提取液經(jīng)過堿化，沉淀，過濾，得到總生物堿提取物；總生物堿提取物用低級醇或丙酮回流提取，過濾，濃縮，乙醇提取物經(jīng)柱層析純化，得到千金藤粗堿；千金藤粗堿進(jìn)一步重結(jié)晶，得到純度大于98％的千金藤堿；千金藤堿溶解酸化，得到鹽酸千金藤堿，純度大于98％。該方法所得鹽酸千金藤堿色澤好，純度高，無有機(jī)溶劑殘留，不需要反復(fù)柱層析，制備過程簡單安全易行，成本較低，生產(chǎn)周期短，易于批量制備和工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號C07D491/22GK101891750SQ20101016441
公開日2010年11月24日 申請日期2010年5月6日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月6日
發(fā)明者張瀟元, 張穎君, 曾恕芬, 朱宏濤, 楊崇仁, 王東, 許敏, 陳江 申請人:中國科學(xué)院昆明植物研究所