專利名稱：：新的噠嗪化合物及其用途的制作方法新的噠噪化合物及其用途
背景技術：
：丙型肝炎病毒是屬于黃熱病毒科的一種有包膜、單鏈、正義RNA病毒。HCV主要在肝臟的肝細胞內復制。循環(huán)的HCV顆粒與肝細胞表面的受體結合，隨后進入該細胞。一旦進入到肝細胞中，HCV利用細胞內所必需的結構完成其本身的復制。Lindenbach，B.Nature.436(7053):932-8(2005)。翻譯HCV基因組產生了一個約3011個氨基酸的單蛋白。然后，這個"多聚蛋白"通過病毒和細胞蛋白酶進行蛋白水解并產生三個結構(與病毒體有關的)蛋白和七個非結構(NS)蛋白。HCV編碼兩個蛋白酶，即NS2半胱氨酸自身蛋白酶和NS3-4A絲氨酸蛋白酶。然后，所述NS蛋白動員病毒基因組進入到RNA復制復合物中，該復合物與重排的細胞質膜有關。經由病毒RM依賴的NS5B的RM聚合酶發(fā)生RNA復制，該聚合酶產生負鏈RNA的中間體。然后，所述負鏈RNA作為模板用于產生新的正鏈病毒基因組。新生的基因組隨后被翻譯，進一步復制，或在新病毒顆粒中包裝。新病毒顆?？赡艹鲅窟M入分泌途徑中，并在細胞表面釋放。HCV具有在被感染的個體中每天產生大約一萬億個顆粒的高速率的復制。由于缺少HCVRNA聚合酶的校對，HCV還具有特別高的突變率，即一個可以幫助它躲避宿主免疫應答的因素?；谠贖CV分離物間的基因差異，將丙型肝炎病毒的種類分為在每一個基因型中含有若干亞型的六個基因型(1-6)。所述亞型基于它們的基因多樣性進一步分解為準種。HCV基因型的優(yōu)勢和分布在全世界變化。例如，在北美基因型la占據優(yōu)勢，隨后是lb、2a、2b和3a。在歐洲，基因型lb是占據優(yōu)勢的，隨后是2a、2b、2c和3a。而發(fā)現(xiàn)在非洲幾乎全部為基因型4和5?；蛐驮谂R床上對于確定基于干擾6素治療的潛在應答以及該治療所需時間方面是至關重要的。基因型1和4與其它基因型(2、3、5和6)相比，對基于干擾素的治療應答較低。用于基因型l和4的標準的基于干擾素治療的持續(xù)時間是48周，而用于基因型2和3的治療在24周內結束。世界衛(wèi)生組織估計在全世界范圍內有1.7-2億人(全世界人口的3。/。)為慢性HCV感染者。大約75%的這些個體為在血漿中可檢測到HCVRNA的慢性感染。這些慢性載體處于發(fā)展為肝硬化和/或肝癌的風險之中。在一項7-16年隨訪研究中，7-16%的患者發(fā)展為肝硬化、0.7-1.3%發(fā)展為肝細胞癌并且1.3-3.7%的患者死于與肝臟有關的疾病。目前，可應用的僅有的可選治療為單獨或與利巴韋林組合使用干擾素ot-2(或它的聚乙二醇形式)。但是，僅在約40%的患者中發(fā)現(xiàn)持續(xù)應答，并且所述治療與嚴重的副作用有關。因此，存在著對有效的和選擇性的HCV抑制劑的迫切需求。相關公開包括美國專利(專利號4,914，108;4，988，707;4，990,518;5,137，896;5，208，242;5，227，384;5，302，601;5，374，638;5，405，964;5，438，063;5，486，525;6，479，508);美國專利公開(公開號:US2003/0108862Al)、加拿大專利(專利號2423800Al)、德國專利(專利號:4211474Al、4236026、4309969、4318813)、歐洲專利(專利號:EP0138552A2、EP0706795A2、EP1132381Al)、英國專利(專利號2158440A)、PCT專利公開(公開號:W000/20416、W000/39127、W000/40583、W003/007945Al、W003/010140A2、W003/010141A2、W093/02080、W093/14072、W096/11192、W096/12703、W099/27929、PCT-US2004/43112、PCT-BE2003/000117、PCT-US2005/26606)、Akamatsu，etal."NewEfficientRouteforSolid-PhaseSynthesisofBenzimidazoleDerivatives"，4:475-483，/.C麵.C纖，2002.BaginskiSGetal.，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.2000Jul5;97(14):7981-6.Cleveetal.，"DerivatedesImidazo[4，5-b]-undImidazo[4.5-c]pyridins，，，747:158-171，，藩丄/冊M層^濯細C麗/"，1971、Kiyama，etal.，"SynthesisandEvaluationofNovelNonpeptideAngiotensinIIReceptorAntagonists:Imidazo[4，5-c]pyridineDerivativeswithanAromaticSubstituent"，43(3):450-60，C顏M層纖Z，1995、Mederskietal.，"SynthesisandStructuralAssignmentofSomeN-substitutedImidazopyridineDerivatives"，48(48):10549-58，7"扁薦/層，1992、Yutilovetal.，23(1):56-9，f證酒-層船7W77C愿A7/房細Z，1989。此外，請參考W005/063744。存在著對具有所需的抗HCV治療和/或預防特性的化合物的需求，該特性包括高效力、高度選擇性和高口服生物利用度(適合每天給藥一次或兩次)、低毒性(包括在hERG膜片鉗測定中的可取的表現(xiàn)、無肺通透性水腫、對QT間期沒有影響)、對谷胱甘肽加合物的形成有微小或沒有代謝激活作用、無基因毒性的跡象、無代謝更新和低血漿清除率、對抗HCV基因型(特別是la和lb、2、3和4)的廣鐠效力、有效對抗HCV耐藥性突變(與臨床試驗中的其它非核苷NS5B抑制劑的耐藥圖譜的有限的重疊)以及與其它HCV治療劑例如干擾素和利巴韋林的相容性。所述安全性特征允許至少l年時間段的慢性給藥。發(fā)明概述根據實現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，提供具有式(1)的化合物以及它的鹽和溶劑化物。IUPAC:5-({6-[2，4-雙(三氟甲基)苯基]噠溱-3-基}曱基)-2-(2-氟苯基)-5^咪唑并[4,5-c]吡啶。CAS:5F咪唑并[4，5-c]吡啶,5-[[6-[2，4-雙(三氟甲基)苯基]噠嗪-3-基]-2-(2-氟苯基)?；衔?l)在用于HCV感染的治療和預防的方法中是有用的，該方法包括給予受試者治療或預防劑量的所述化合物(1)。另一個實施方案包括所述化合物(1)在生產用于在哺乳動物(更具體的是人類)的HCV感染的預防或治療藥物中的用途。本發(fā)明的另一個實施方案是用于制備式U)的化合物的方法，該方法包括(a)在溶劑存在下，使5-[6-氯-噠溱-3基甲基]-2-(2-氟-苯基)-511-咪唑并[4,5-c]吡啶與2，4-雙(三氟甲基)苯基硼酸反應，所述溶劑具有結構R^R20(R40)aR3，其中R1、R2、113和114各自獨立地選自CI-C6烷基并且a是0或1，以及(b)回收化合物(1)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>(1)在另一個用于生產化合物(1)的實施方案中，提供了方法，該方法包括提供中間體(2)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>使2，4-雙(三氟甲基)苯基硼酸與3-氯-6-甲基噠溱偶合以產生化合物(2a)，使化合物(2a)經氯化劑處理產生烷化劑(3)cf3(3)并且使用該烷化劑(3)在堿性條件下使中間體(2)烷基化而生成化合物(1)。所迷烷化劑(3)是新的，并且是本發(fā)明的一部分，具有曱基取代基而不是氯甲基，或代替氯的溴、氟或碘的同樣的化合物是本發(fā)明的一部分。本發(fā)明的另一個實施方案涉及式(1)化合物的藥物組合物，該組10合物包括至少一種藥學上可接受的賦形劑。在一個實施方案中，所述式(1)化合物經有機酸配制，并且任選地配制成藥物劑型，例如膠嚢。在另一個實施方案中，所述化合物(l)是微粉化的形式，并配制為混懸液。所述化合物(1)或本發(fā)明的藥物組合物是在丙型肝炎的治療和預防中使用。簡圖概述圖l描述了通過實施例lb的方法由結晶形式的化合物(1)的標準品獲得的X射線粉末衍射圖語。圖2描述了通過實施例la的方法由非結晶形式的化合物(1)的實驗第6批獲得的X射線粉末衍射圖鐠。圖3表明通過實施例lb的方法由結晶形式的化合物(1)的標準品，以rc/min掃描獲得的DSC熱分析圖。圖4顯示通過實施例la的方法由非結晶形式的化合物(1)的實驗笫6批，以5'C/rain掃描獲得的DSC熱分析圖。發(fā)明詳述本發(fā)明的治療化合物通過任何本領域公知的方式，即經口、鼻內、皮下、肌內、真皮內、靜脈內、動脈內、非腸道或通過插管以治療有效量，即HCV抑制的量或HCV復制抑制的量給予受試哺乳動物(包括人類)。認為所述量是確保達到約100nM的血漿水平，調整的EC90蛋白的3倍的量。對于人類而言，這通常期望通過約0.5-約5mg/kg體重，典型為O.7-約2.2mg/kg體重，更常見為約1.2mg/kg體重的口服給藥實現(xiàn)。本發(fā)明的化合物的最佳劑量將取決于本領域技術人員所公知的諸多因素，其包括所給予的制劑中該化合物的生物利用度、在受試者中該化合物的代謝和分布、受試者的禁食或進食狀態(tài)、在所述制劑中載體和賦形劑的選擇以及其它因素。合適的劑量典型地在臨床前或臨床調整中確定，并且是在本領域普通技術人員的能力范圍之內。本發(fā)明的化合物在治療上的有效量任選地分為若千亞單位/天或以每天或超過一天的間隔給予，這取決于感染的性質、患者的總體情況和本發(fā)明化合物的劑型。通常，所述化合物每天給予兩次。本發(fā)明的化合物與其它有效對抗HCV感染的藥劑一起協(xié)同使用。它們任選地在治療過程中單獨地給予或與化合物(1)在單元劑型，例如片劑、iv溶液或膠囊中組合給予。所述其它藥劑包括，例如干擾素ot、利巴韋林和/或屬于EP1162196、W003/010141、W003/007945、W000/204425和/或W003/010140(和它們母案內其它提交的申請)公開的化合物。與本發(fā)明的化合物在治療期間一起給藥的其它的藥劑包括目前在臨床試驗中的化合物，特別是HCV蛋白酶抑制劑，例如VX-950(VertexPharmaceuticals)、SCH5030347(ScheringPlough)和BILN-2061(BoehringerIngelheim)、核苷HCV抑制劑，例如塑83、NM107(兩者Idenix和Novartis)和R1626(Hoffmann-LaRoche)、以及非核苷HCV抑制劑，包括HCV-086和-796(兩者ViroPharma和Wyeth)。補充的抗病毒藥還是以常規(guī)量使用，盡管如果本發(fā)明的化合物和補充化合物的效力是疊加的，那么活性藥劑各自的量任選地相應減少，并且如果藥劑是協(xié)同作用更是這樣相應減少。但是，通常，所述藥劑在單元組合的組合物中以它們的常用活性量使用。只要它們是化學上相容的并且預期通過相同的途徑給予。那么共同給予的藥劑通常與本發(fā)明的化合物配制成為單元組合物。如果不相容，那么它們任選地以包含單獨的容器或隔室中的該兩種藥劑的醫(yī)藥試劑盒或包裝的形式提供。本發(fā)明的化合物可作為游離堿或鹽提供。所述鹽典型地通過有機酸和/或無機酸與游離堿的酸加成制備。實例包括(l)無機酸，例如氫鹵酸，例如鹽酸或氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸和氨基磺酸；或(2)有機酸，例如乙酸、丙酸、羥基乙酸、苯曱酸、2-幾基丙酸、2-氧代丙酸、乳酸、富馬酸、酒石酸、丙酮酸、馬來酸、丙二酸、蘋果酸、水楊酸(例如2-羥基苯甲酸)、對氨基水楊酸、羥乙基磺酸、乳糖酸、琥珀酸、草酸和檸檬酸；有機磺酸，例如，甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、對甲苯磺酸、Cl-C6烷基磺酸、苯磧酸、對甲苯磺酸、以及環(huán)己基氨基磺酸。典型的鹽是鹽酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、甲磺酸鹽、苯磺酸鹽、乙磺酸鹽、磷酸鹽、草酸鹽、馬來酸鹽、琥珀酸鹽、檸檬酸鹽、丙二酸鹽和/或富馬酸鹽。本發(fā)明的范圍內還包括含有一種或多種氨基酸、典型為天然存在的氨基酸，例如在蛋白中發(fā)現(xiàn)的一種氨基酸與本發(fā)明的化合物的鹽。除非所述鹽作為制備所述化合物的中間體使用，因此與毒性無關，否則酸性抗衡離子理想地是在生理學上無害和無毒的或其它藥學上可接受的。通常地，化合物(l)作為游離堿給予，但是合適的鹽包括曱磺酸鹽(甲磺酸)和鹽酸鹽。本發(fā)明的化合物包括與本發(fā)明的化合物或它們的鹽形成的溶劑化物，例如水合物、乙醇化物等。本發(fā)明的藥物化合物任選地由常規(guī)的藥物載體和賦形劑配制，所迷藥物載體和賦形劑根據通常習慣選擇。片劑包含賦形劑、助流劑、填充劑、粘合劑等。水性制劑以無菌形式制備，當預定除口服方式遞送時，通常該水性制劑是等滲的。所述制劑任選地包括賦形劑，例如那些在"HandbookofPharmaceuticalExcipients，，(2005)中所敘述的，以及包括抗壞血酸和其它抗氧化劑，螯合劑例如EDTA，碳水化合物例如糊精、羥烷基纖維素、羥烷基甲基纖維素和/或有機酸例如油酸或硬脂酸。如在本文所使用的術語"藥學上可接受的載體，，指為了促進活性成分的制備和/或向治療位點施用或傳播而與活性成分共同配制的任何材料或物質。在本發(fā)明的組合物中所使用的合適的藥物載體對于本領域的技術人員而言是公知的。它們包括添加劑，例如濕潤劑、分散劑、粘合劑、乳化劑、溶劑、助流劑、包被劑、抗菌劑和抗真菌劑(例如苯酚、山梨酸、氯丁醇)、以及等滲劑(例如糖或氯化鈉)，條件為同樣是符合制藥習慣，即它們對哺乳動物無毒性。本發(fā)明的藥物組合物以任何公知的方式，例如通過均勻混合、包衣和/或在一步或多步過程中研磨活性成分，與所選的載體材料，以及在合適時，和其它添加劑，例如表面活性劑一起制備。包含配制成微球型(通常具有約l-10gm的直徑)的本發(fā)明化合物的所述組合物作為控釋或緩釋制劑是有用的。在一個任選制劑中，將化合物(l)磨碎為細分形式，典型為平均粒徑在任一點在約l-20微米之內。實施例lb的產物是結晶針狀物，并且表現(xiàn)出多種結晶粒度，典型為約25-40微米。任選地，這在Jetmill-00中以約60-80psi微粉化而獲得約3-4孩￡米的顆粒，并且該顆粒具有約7-8平方米/g的表面積。但是，原結晶粒度從一批到另一批是變化的，并且微粉化的程度只是選擇的問題。因此，將微粉化的化合物(1)僅定義為經歷微粉化過程的結晶或非結晶的化合物(1),例如本文中所描述的一個實例。所得到顆粒的粒徑和表面積均不是至關重要的。所述微粉化的化合物(1)任選地借助于如下文進一步所描述的懸浮劑、乳化劑和/或表面活性劑在水溶液中懸浮。典型地，藥物制劑是化合物(1)的溶解形式，該化合物(1)在合適的溶劑或增溶劑或其組合中溶解。在有機溶劑中溶解的化合物(1)作為用于制備結晶的化合物(1)的中間體是有用的，但是典型地它在用于治療或預防給藥的藥學上可接受的賦形劑中溶解。用于藥物制劑的化合物(1)的適合的溶液包括水，以及各種有機酸(典型為C4-C24)通常為脂肪酸，像癸酸、油酸、月桂酸、癸酸、棕櫚酸和/或豆蔻酸。所述脂肪酸任選地為飽和或非飽和的或其混合物。此外，使用聚乙二醇(PEGs)和/或短、中或長鏈甘油酯、甘油二酯或甘油三酯補充或代替所述有機酸。聚乙二醇化的短、中或長鏈脂肪酸還任選地以同樣的方式使用。最常見的有機酸是其酸性與羧基基團-COOH有關的羧酸。包含基團0S03H的磺酸是在本文中所使用的相對較強的酸。總而言之，所述酸期望包含脂溶性結構域。一元羧酸或二元羧酸是合適的。適合的表面活性劑任選地與任意本發(fā)明的制劑(任何一種或多種下述藥劑，典型為它們中的任意一種)一起使用。所述藥劑作為利泄劑或乳化劑還是公知的，并且在本發(fā)明的藥物組合物中是有用的。它們是具有合適乳化、分散和/或潤濕性質的非離子、陽離子和/陰離子14材料。適合的陰離子表面活性劑包括水溶性皂類和水溶性合成表面活性劑。所述適合的皂類是堿或堿土金屬鹽、高級脂肪酸(C!。-C22)的未取代的或取代的銨鹽，例如油酸或硬脂酸的鈉鹽或鉀鹽、或由椰子油或動物油中獲得的天然脂肪酸混合物的鈉鹽或鉀鹽。所述合成的表面活性劑包括聚丙烯酸的鈉鹽和鈣鹽；脂肪酸磺酸鹽或硫酸鹽；磺化苯并咪唑的衍生物和烷基芳基磺酸鹽。所述脂肪酸磺酸鹽或硫酸鹽通常是以堿或堿土金屬鹽、未取代的銨鹽或被具有8-22個碳原子的烷基或酰基取代的銨鹽的形式存在，例如木素磺酸的鈉鹽和鈣鹽或十二烷基磺酸的鈉鹽和鈣鹽、或由天然脂肪酸中獲得的脂肪醇硫酸鹽的混合物、硫酸酯或磺酸酯的堿或堿土金屬鹽(例如，十二烷基硫酸鈉)和脂肪醇/環(huán)氧乙烷加合物的磺酸堿或堿土金屬鹽。適合的所述磺化苯并咪唑的衍生物優(yōu)選地包含8-22個碳原子。所述烷基芳基磺酸鹽的實例是十二烷基苯磺酸或二丁基萘磺酸或萘磺酸/甲醛縮合產物的鈉鹽、鈣鹽或醇銨鹽。還合適的是對應的磷酸鹽，例如磷酸酯的鹽和對壬基苯酚與乙烯和/或環(huán)氧丙烷的加合物的鹽，或磷脂。適合于這種目的的所述磷脂是天然(來源于動物或植物細胞)磷酯、或腦磷脂或卵磷脂類型的合成的磷脂，例如磷脂酰乙醇胺、礴脂酰絲氨酸、磷脂酰甘油、溶血卵磷脂、心磷脂、二辛基磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰膽堿和它們的混合物。含這類藥劑的水性乳化劑在本發(fā)明的范圍之內。適合的非離子表面活性劑包括在分子中含有至少12個碳原子的烷基酚、脂肪醇、脂肪酸、脂肪胺或脂肪酰胺的聚乙氧基化和聚丙氧基化衍生物、烷基芳烴磺酸鹽和二烷基磺基琥珀酸鹽，例如脂肪醇和脂環(huán)醇的聚乙二醇醚衍生物、飽和的和未飽和的脂肪酸和烷基酚的聚乙二醇醚衍生物，該衍生物優(yōu)選地在(脂肪的)烴部分中包含3-10個乙二醇醚基團和8_20個碳原子，以及在烷基酚的烷基部分中包含6-18碳原子。適合的非離子表面活性劑還是聚環(huán)氧乙烷與在烴鏈中含有l(wèi)-10個碳原子的聚丙二醇、乙二胺基聚丙二醇的水溶性加合物，該加合物含有20-250個乙二醇醚基團和/或10-100個丙二醇醚基團。這類化合物通常含1-5個乙二醇單元/丙二醇單元。非離子表面活性劑的代表性實例是壬基苯酚-聚乙氧基乙醇、蓖麻油聚二醇醚、聚環(huán)氧丙烷/聚環(huán)氧乙烷加合物、三丁基苯氧基聚乙氧基乙醇、聚乙二醇和辛基苯氧基聚乙氧基乙醇。聚乙烯失水山梨醇(例如聚氧乙烯失水山梨醇三油酸酯)、甘油、失水山梨醇、蔗糖以及季戊四醇的脂肪酸酯也是非離子表面活性劑。適合的陽離子表面活性劑包括季銨鹽，特別是具有4個烴基任選地被閨素、苯基、取代的苯基或羥基取代的卣化物；例如包含作為至少一種C8-C22烷基(例如鯨蠟基、月桂基、棕櫚基、肉豆蔻基和油烯基)的N取代基和作為其它取代基、未取代的或卣化的低級烷基、苯基和/或羥基-低級烷基的季銨鹽。適用于本發(fā)明目的的表面活性劑的更具體的描述在"McCutcheon，sDetergentsandEmulsifiersAnnual，，(MCPublishingCrop.，Ridgewood，NewJersey,1981)，"Tensid-Taschenbucw",2nded.(HanserVerlag，Vienna,1981)and"EncyclopaediaofSurfactants,"(ChemicalPublishingCo.，NewYork,1981)中出現(xiàn)。本發(fā)明的化合物可通過適合于待治療病癥的任何途徑，例如經口、直腸、鼻、局部(包括眼、頰和舌下)、陰道和非腸道(包括皮下、肌內、靜脈內、真皮內、硬膜內和硬膜外)給予。優(yōu)選的給藥途徑可隨著例如接受者的病癥變化，但是通常為口服。用于口服的本發(fā)明化合物的制劑通常作為獨立的單位，例如膠嚢、扁囊劑或片劑，其中每一個單位含有預定量的活性成分；作為粉末或顆粒形式；在水性液體或非水性液體中作為溶液或懸浮液；或作為水包油液體乳劑或油包水液體乳劑存在。本發(fā)明的化合物任選地作為丸劑、藥糖劑或糊劑存在。片劑通過任選地與一種或多種助劑一起壓制或模壓制備。壓制的片劑通過在適合的設備中將本發(fā)明的化合物在自由流動的形式，例如粉末或顆粒，并任選地與粘合劑、潤滑劑、惰性稀釋劑、防腐劑、表面活性劑和/或分散劑壓制制備而成。模壓的片劑典型地通過在適合的設備中模壓經惰性稀釋劑潤濕的粉末狀所述化合物制備而成。所述片劑可任選地涂覆包衣或帶條紋，并可配制成能提供其中的活性成分緩釋或控釋。所述制劑任選地作為局部軟貪劑或霜劑施用，該軟骨劑或霜劑包含一定量，例如0.075-20%w/w(包括在0.1%w/w，例如0.6%w/w、0.7。/。w/w等的增量中，活性成分的范圍為0.1-20%)，優(yōu)選為0.2-15%w/w，并且最優(yōu)選為0.5-10%w/w的活性成分。當在軟骨劑中配制時，所述化合物與石蠟基質或水可混溶性軟骨劑基質一起使用?？蛇x地，所述化合物在霜劑中與水包油霜劑基質一起配制。如果需要，所述霜劑基質的水相可包括，例如至少30%w/w的多元醇，即具有兩個或更多個羥基的醇，例如丙二醇、1，3-丁二醇、甘露醇、山梨醇、甘油和聚乙二醇(包括PEG400)和其混合物。局部制劑可優(yōu)選包含經皮膚或其他感染區(qū)域提高活性成分吸收或滲透的化合物。這類皮膚滲透增強劑的實例包括二甲基亞砜和相關類似物。本發(fā)明的乳劑的油相由公知的成分以公知的方式構成。雖然所述相可僅包含乳化劑(另外稱作利渴劑)，但是優(yōu)選其包含至少一種乳化劑與脂肪、或油、或脂肪和油兩者的混合物。任意地，包含了親水乳化劑以及作為穩(wěn)定劑的親脂乳化劑。還優(yōu)選包含油和脂肪?？傊?，含有或不含穩(wěn)定劑的乳化劑組成了所謂的乳化蠟，并且該乳化蠟以及油和脂肪組成了所謂的乳化軟骨基質，該基質形成霜劑的油狀分散相。用于制劑的合適的油或脂肪的選擇是基于能達到所需化妝品的性質。因此，霜劑任選地是非油膩的、非染色的且可洗滌的產品，該產品具有避免其從試管或容器中滲漏的合適稠度?？梢允褂弥辨溁蛑ф?、一元或二元烷基酯，例如二異己二酸酯、硬脂酸異十六烷酯、椰子脂肪酸的丙二醇二酯、肉豆蔻酸異丙脂、油酸癸酯、棕櫚酸異丙脂、硬脂酸丁酯、棕櫚酸2-乙基己基酯或已知如CrodamolCAP的支鏈酯的混和物，最后三種酯是優(yōu)選的酯。這些酯可以單獨或組合使用，這取決于所需要的性質?？蛇x地，可使用高熔點脂，例如白色軟石蠟和/或液體石蠟或其它礦物油。適用于局部向眼睛給藥的制劑還包括滴眼劑，其中活性成分在合成分的水溶液中溶解或懸浮。所述活性成分任選地以這種制劑，即0.5-20%，優(yōu)選地0.5-10%，特別是約1.5%w/w的濃度存在。適用于在口腔中局部給藥的制劑包括在調味基質，通常為蔗糖和金合歡膠或黃蓍膠中包含活性成分的錠劑；在惰性基質，例如明膠和甘油、或蔗糖和金合歡膠中包含活性成分的軟錠劑；以及在合適的液體栽體中包含活性成分的漱口劑。適用于直腸給藥的制劑可作為含有合適基質的栓劑存在，該基質包含例如可可脂或水楊酸酯。適用于鼻內給藥且其中載體為固體的制劑包括具有粒徑，例如范圍為20-500微米(包括粒徑在20-500微米間的5微米的增量，例如30微米、35微米等)的粗糙粉末，該制劑通過氣霧劑或粉末吸入器給予，該制劑的許多實例是可用的。其中載體是液體并作為鼻用噴霧劑或鼻用滴劑給藥的合適制劑包括活性成分的水性溶液或油性溶液。適用于陰道給藥的制劑可作為包含除活性成分外還含有本領域公知的合適載體的陰道栓劑、棉塞、霜劑、凝膠劑、糊劑、泡沫劑或噴霧劑的形式存在。適用于非腸道給藥的制劑包括水性和非水性無菌注射溶液，該溶液可含有抗氧化劑、緩沖液、抑菌劑以及使得所述制劑與目標接受者的血液等滲的溶質；和水性和非水性無菌懸浮劑，其可包括懸浮劑和增稠劑。所述制劑以單位劑量或多劑量容器，例如密封的安瓿和小瓶存在，并且可在冷凍干燥(凍干)條件下儲存，該條件使得在即將使用之前僅需要添加無菌液體載體，例如注射用水。臨時注射溶液和懸浮液可由先前描述類型的無菌粉末、顆粒以及片劑制備。本發(fā)明的化合物任選地配制成控釋組合物，其中該化合物的釋放得到了控制和調節(jié)，使得給藥頻率降低或改善了本發(fā)明化合物的藥代動力學或毒理學特征。所迷控釋組合物根據公知的方法制備，許多所述方法涉及所述活性化合物與一種或多種下述聚合物栽體的一起配制，如聚酯、聚氨基酸、聚乙烯吡咯烷酮、乙烯-醋酸乙烯酯共聚物、18甲基纖維素、羧甲基纖維素和/或硫酸魚精蛋白。藥物釋放的速率和作用持續(xù)時間任選地通過向聚合物，例如水凝膠、聚乳酸、羧甲基纖維素、聚甲基丙烯酸甲酯和其它上述聚合物的顆粒，例如微膠嚢中加入活性成分控制。膠體藥物遞送系統(tǒng)，例如脂質體、微球、微乳液、納米微粒、納米膠嚢等也是適合的。取決于給藥途徑、藥物組合物，例如片劑需要保護性包衣。本發(fā)明通過參考下述實施例更易充分理解，但該實施例僅作為說明，并不限制如所要求保護的本發(fā)明的范圍。實施例la;-({6-[2，4-雙(三氟甲基)苯基]噠嗪-3-基}甲基)-2-(2-,苯基)-5if"咪唑并[4，5-c]吡啶的合成在本方法中，發(fā)現(xiàn)二甲氧基乙烷或它的相關溶劑特別地優(yōu)于常規(guī)溶劑DMF,所述二甲氧基乙烷或它的相關溶劑均具有通式R^R2()(R40)aR3,其中R1，R2，R3和R4各自獨立地選自C「C6烷基，并且a為0或1。典型地，R1，R2，R3和R4各自獨立地為C「C2烷基，并且通常a為0。d-C6烷基包括具有1-6個碳原子的完全飽和的伯、仲或叔烴基，由此非限制性地包括甲基、乙基、丙基、丁基等。步驟1'三氯異氛尿酸化合物分子量量毫摩爾當量SM128.565g38.91TCCA232.413.62g15,60.4CHC13130ml19<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>向核心(如文獻中所描述的在DMF中獲得)(二甲基甲酰胺)的溶液中加入NaOH。然后將用于本步驟中的SM(由步驟1獲得)溶解在DMF(20ral)中，并緩慢加入至上述溶液中。反應在攪拌下進行3hr，并經水稀釋，EtOAc提取。有機層經Na2S04干燥。除去溶劑，產物經DCM(二氯曱烷)重結晶。產量為5.7g。步驟3200780025590.1說明書第15/33頁在60'C向可商購的原料(SM)于CHCl3的溶液中加入三氯異氰尿酸(TCCA)。然后，攪拌該溶液1.5hr，冷卻并經HiFlo-Celite過濾。將該濾液濃縮并在真空下千燥。產量為5.037g。步驟2<formula>formulaseeoriginaldocumentpage21</formula><table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>化合物A溶解在二甲氧基乙烷(DME)中。向該溶液加入2，4-雙(三氟甲基)苯基硼酸和2NNa2C03水溶液。向所得的兩相混和物加入Pd(PPh3)4，然后該反應在80。C加熱72hr。將所述反應冷卻至室溫，經硅藻土(Celite)過濾，并經EtOAc洗涂該硅藻土。所述濾液在真空下濃縮。在6gSi02上使用MeOH/CH2C12洗脫所述化合物以純化殘余物。由此所獲得的所述化合物被PPh3(0)污染。使用Q-5%MeOH/CH2Cl2在1%階梯下在lmmChromatotron盤上再純化所述產物。合并純化部分并在真空下濃縮，然后在高真空中干燥12hr。獲得11.8mg不含PPh3污染的化合物(1)的游離堿。:HNMR(300MHz，CD30D)6.20(s，2)7.32(m，3)7.52(m，1)7.78(d,1)7.89(d，1)7.95(s，2)8.15(m，3)8.35(d，1)9.12(s，1)LC/MSM+H=518實施例lb5-({6-[2,4-雙(三氟曱基)苯基]噠嗪-3-基}曱基)-2-(2-,苯基)-5^-咪唑并[4，5-c]吡咬的合成本實施例涉及使用下述方案制備化合物(1)的其它方法,方案1、,NH2、NH23,4n二氨基吡啶H02C'2-氟苯曱酸.NH2、NH23，4-二氨基吡啶MW=109.13-氣苯甲酸MW=140.111)甲磧酸2)五氣化二確3)100C，4-6hr4)H20,NH4OH核心MW=213.2將甲磺酸加入到含2-氟苯甲酸的反應器中，該反應器可保持T《50。C的有效冷卻。然后，將3，4-二氨基吡啶分批加入到該冷卻的漿液中，并保持T《35。C。然后，將反應器的內容物加熱至50。C。五氧化二磷在單次裝填中加入。然后所述反應在90-110。C進行至少3小時。從所述反應取樣用于通過HPLC分析反應是否完成。所述反應冷卻至環(huán)境溫度，并緩慢分批加入水以淬滅反應。然后經水稀釋所述反應。通過過濾除去不溶物。經氫氧化銨將濾液的pH校正到5.5-5.8。使所述反應在環(huán)境溫度自身結晶和?；s4小時。然后，經氬氧化銨將pH校正到8.0-9.3。所述漿液在環(huán)境溫度保持至少2小時。通過過濾分離固體，并用水洗滌，隨后用IPE洗滌。濕濾塊在真空下不超過60°C干燥，直到殘留的水<1%。干燥產物為核心(2)。材料簡述分子量重量比率摩爾比率3，4-二氨基吡啶109.131.01.02-氟苯甲酸140.111.41.1甲磺酸96.17.08.0五氧化二磷141.941.31.0水18.0240---異丙醚102.175.0---氫氧化銨35.09~10---23方案la將化合物(2a)于1，2-二氯乙烷的溶液加熱至40-45。C。加入三氯異氰尿酸，然后將混和物加熱至60-70°C保持至少2小時。對反應取樣用于通過HPLC分析是否該反應結束。所述反應冷卻至環(huán)境溫度。加入硅藻土吸收不溶物，然后通過過濾除去固體。濾液經0.5N氫氧化鈉溶液洗滌。有機層濃縮至最低攪拌體積，并用DMF替換。加入核心(2)和10%氫氧化鈉水溶液。反應在環(huán)境溫度攪拌至少8小時。對反應取樣用于通過HPLC分析是否該反應結束。向該反應再加入10%裝量的10%氫氧化鈉溶液。然后，將該反應置入水中以分離粗產物。?；辽?個小時，分離固體，然后經水和異丙醚洗滌。加入醋酸乙酯并回流(內部T=70-77。C)1-5個小時以溶解產物，然后經4-8小時緩慢冷卻至18-23°C。在18-23°C攪動反應器內容物8-20小時，通過過濾收集固體，并經醋酸乙酯漂洗。低熔(即DSC約220。C)非結晶化合物(1)排出。所述非結晶化合物(1)通過在1-5個小時的回流(內部T-70-77。C)加熱溶解在醋酸乙酯中。通過共沸除水(經醋酸乙酯含水量的上限約為重量的0.6%;在約重量的0.9%的水時，非結晶物質再沉淀，并且不能獲得結晶)使含水量控制在約0.2%。將反應器內容物經4-8小時緩慢冷卻至18-23。C，然后在18-23。C攪拌8-20小時，并通過過濾收集固體。經醋酸乙酯漂洗所述固體，在真空中不超過60。C干燥以獲得干燥結晶化合物(1)。材料概述分子量重量比率摩爾比率3-氯-6-曱基噠溱128.561,01.02，4雙(三氟曱基)苯基硼酸257.934.02.0X-Phos476.720.180.05醋酸鈀224.490.040.0251,2-二曱氧基乙烷90.1216.7---碳酸鐘138.212.152.0水18.027.8---碘化銅190.450.0370.025硅藻土---0.25---庚烷100.222.4---核磁共振CH-、"C-和19F-NMR)光i普化合物(1)的核磁共振(NMR)光鐠與預期結構相符。使用VarianUnityInova-400FT-NMR光譜儀檢測了化合物(1)在DMSO-d6中的13C、，和^-NMR光譜。所述光譜在下表中顯示。使用2D相關實驗(COSY，HSQC，HMBC和HSQCTOCSY)建立NMR的化學位移歸屬。化合物(l)參照標準品的'H-和"C-NMR化學位移歸屬原子5C/ppm(而0-《)5F/ppm(DMSO-cO5H/ppm(而0-《)1A140.162A128.32(qa，=32Hz)3A123.61,ra8.24(m,1H)4A130.27(q，=34Hz)5A129.54(q,=3Hz)8.22(m,1H)6A133.367.88(m，1H)7A123.20(q,/ff=273Hz)-56,4b8A123.02(q,A=275Hz)-62.0bIB158.762B128.168.01(d,1H，/=8.4Hz)3B126.207.95(d，1H，/=8.8Hz)25<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>a.分裂情形、s:單峰、d:雙峰、q:四重峰、m:多重峰b.互換信號差示掃描量熱法在氮氣環(huán)境下，使用差示掃描量熱(DSC)裝置(DSC2010，由TAInstrumentsCorporation制造)，^!尋才艮據實施例la(實一臉第6糸匕)和lb(剩余的樣品)的方法制備的化合物(1)樣品用于檢測，樣品重5土lmg，溫度增加速率rc/min、5'C/min或10。C/min，開放的鋁盤，銦標準品作為參照。測定焓、外推起始溫度、在所獲得的DSC曲線上的吸熱峰的最高溫度。有代表性的化合物(1)的批量DSC結果在表1中總結。當通過實施例lb方法所產生化合物(1)的結晶形式經受以l'C/min的DSC掃描時，所述吸熱峰的焓為約81J/g±lJ/g，并且所述外推起始溫度為233.2。C。C±2.0。C。所述吸熱峰的最高溫度為233.9。C±3.0。C。表1化合物(1)批量所獲得的實例DSC值<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>注釋所有。C,除焓以外**第6批報道的5。C/min掃描X射線粉末衍射通過方法la和lb制備的樣品在公認的條件下分析，該樣品僅在分析前經藥刀混和。所述藥品固定在鋁單元上，使用X射線粉末衍射儀(XRD-6000，ShimadzuLabX，由ShimadzuCorporation制造，X射線光源Cu-Kotl射線、管電壓35kV，管電流40mA、掃描速率(2。/min)、持續(xù)掃描方式、取樣間距(0.02°)、掃描范圍(4-35°)、|3軸旋轉(60rpm)。通過實施例lb的方法所獲得的非微粉化、針狀(ascicular)化合物(1)的結晶具有X射線粉末衍射圖鐠，該圖傳在通過X射線粉末衍射儀檢測的13.46、15.59、16.90、17.48、23.05和30.15的衍射角26(。)處具有特征衍射峰(圖1)。由于優(yōu)選的取向和粒徑，因此注意到所述實施例中所測試的化合物(1)的非微粉化的"高熔化，，的23S。C熔化物的針狀(ascicular)結晶形式顯示了一些作用。因此，認為圖l僅僅是示范性的，其原因是變化的晶粒度和取向將改變其在所述圖譜中的峰強度。此外，在上述衍射角26(。)的衍射峰峰值由于測量裝置或測量條件等可顯示出輕微的測量誤差。典型地，測量誤差通常在約土O.3的范圍之內。ShimadzuXRD-6000的規(guī)格說明書為土0.04。此外，由于產物和實驗波動因此預料到在峰所在位置的一些波動，所以認為它們是近似的。通過根據實施例la的方法(或在再漿液化步驟之前的方法lb)所制備的產物組成的化合物(1)的220'C"低熔化"固態(tài)形式產生與非結晶物質一致的X射線粉末衍射圖譜。方法lb的所述產物是基本上不含非結晶化合物的結晶化合物(1)。它在差示掃描量熱(DSC)曲線上在約235。C顯示出吸熱開始。它顯示出約81J/g(42KJ/mole)±lJ/g的熔化熱(DHf)。如上所述，通過在基本上無水的結晶溶劑中再漿液化反應物產生基本上不含非結晶化合物(1)的結晶化合物(1)。結晶溶劑是所述化合物(1)能在其中溶解的任何溶劑或共溶劑混合物。適合的溶劑包括醋酸異丙酯/醋酸乙酯的共溶劑或單獨的醋酸乙酯。將基本上無水的溶劑定義為含有足夠少量水的溶劑，以使根據方法lb的產物化合物(1)組合物含有結晶化合物(1)和在產物組合物中的化合物(1)的所有形式中低于約40%，通常低于約30、20、10、5、3、2或1%重量的化合物(1)的任何其它形式(包括非結晶化合物(1))?？傊旧蠠o水的溶劑含低于約0.5-0.6%重量的作為水的結晶溶劑，盡管所述允許的水量基于方法的目的會有所變化。例如，如果允許所需產物含有更多比例的非結晶化合物(1)，那么可存在更多的水。所允許的水量的確定和選擇完全在本領域技術人員的范圍之內，并取決于包括溶劑的性質和特性、存在清除水的藥劑、反應溫度和其它條件等諸多因素。化合物(l)通過實施例lb典型地顯示出0.7微克/ml、5.8的pKa、2.8的logP的固有溶解度；并且?guī)缀纹骄鶖?shù)(3批)pH溶解度特征是在pH2為458微克/ral，并在pH7.3為0.7微克/ml。幾何平均數(shù)溶解度(3批)在模擬腸液中(禁食pH6.4,0.75mM卵磷脂、3mM?；悄懰徕c、270mOsmol;進食pH5.0，3.75mM卵磷脂、15mM?；悄懰徕c、635m0smo1)為19.1毫克/ml(禁食)和122毫克/ml(進食)。測量參數(shù)在批與批間有變化，因此認為除了分子量之外所有上述的參數(shù)是近似的。經酸滴定顯示，與含鹽酸鹽(約0.6mg/ml)或鹽酸鹽(約0.5mg/ml)28抗衡離子的溶解度相比，含甲磺酸鹽(>20mg/ml)抗衡離子的溶解度更高。實施例2化合物(l)的制劑根據重量/重量基準，制備化合物(1)制劑以達到10。/。w/w有效。為了制備12kg溶液，化合物(l)膠嚢(20rag和40mg)的示范性定量組合物在下表中列出?；衔?1)膠嚢(20mg和40mg)的定量組合物成分%w/w膠囊單位劑型(mg/單位)官方參考功能20mg40mg化合物(1)10.0020.0復0無有效成分油酸84.55169.1338.2國家處方集溶劑聚山梨酯805.0010.020.0國家處方集表面活性劑丁基羥基曱苯(BHT)0,100.20.4國家處方集抗氧化劑丁基羥基苯甲醚(BHA)0.350.71.4國家處方集抗氧化劑膠囊密封溶液a乙醇純凈水___b___b___b—b美國藥典美國藥典膠嚢封閉劑膠囊殼，號碼0Licaps白色不透明N/A1/個1/個無膠囊殼總計100.00200.0憎.0a組合物是乙醇水溶液(1:1w/w)b在膠囊密封過程中除去。.容器12kg不銹鋼.下述物質按順序稱重0.012kg丁基羥基甲苯(O.10%)0.035kg丁基羥基苯甲醚(0.35%)291.2kg化合物(l)游離堿(10%).稱量0.6kg聚山梨酯80(5%)10.153kg油酸(相當于84.55g(84.55%))化合物(1)膠嚢(20mg或40mg)通過一系列單元的加工步驟制備?；旌匣衔?l)原料藥、油酸、聚山梨酯80、丁基羥基甲苯(BHT)和丁基羥基苯甲醚(BHA)直到成為溶液。將該溶液注入到2片硬明膠膠囊中。隨后，用含水醇溶液將封閉的膠嚢密封，所述含水醇在密封過程中揮發(fā)。在包裝前，在密封的膠囊上進行真空泄漏實驗。備選制劑式(1)化合物任選地與下述藥劑配制成溶解形式脂肪酸(短鏈、中鏈和長鏈的飽和以及不飽和)，典型為CrC22。典型的脂肪酸為月桂酸、癸酸或油酸。.醇類，例如乙醇、苯甲醇、丙三醇、聚乙二醇200、聚乙二醇300、聚乙二醇400。.表面活性劑，包括離子和非離子表面活性劑。非離子表面活性劑的實例為聚氧乙烯脫水山梨醇脂肪酸酯、山梨糖醇脂肪酸酯、聚氧乙烯蓖麻油衍生物、聚氧乙烯甘油羥基硬脂酸酯、聚乙二醇60、氬化蓖麻油和/或環(huán)氧乙烷和環(huán)氧丙烷的嵌段共聚物。.抗氧化劑，例如丁基羥基苯甲醚(BHA)、丁基羥基甲苯(BHT)、維生素E和/或用于化學穩(wěn)定性的維生素EPEGIOOO琥珀酸酯。.黏性誘導劑(二氧化硅、聚乙二醇、二氧化鈦等)。以及上述混合物。在軟質彈性明膠或硬質明膠或羥丙基甲基纖維素膠嚢中進行包嚢。液體制劑(溶液或包入膠嚢的溶液)提供了改善的口服生物利用度。膠嚢填充軟質彈性明膠膠嚢的組合物和制劑是本領域所公知的。所述組合物典型地包含30-50%重量的明膠、10-40%的增塑劑或增塑劑與約可以是明膠、山梨醇或山梨醇衍生物、丙二醇等或其組合。使用多種方法用于生產和填充所述軟質彈性明膠膠囊，例如旋轉、套筒(liner)或accogel設備等。硬質膠嚢或HPMC膠囊可從Capsugel公司(Greenwood,S.C.)或其它供應商處購買。膠嚢可經人工或膠嚢填充機填充。制劑制備一般而言，本發(fā)明的組合物可以下述方式制備。使用架空混合器(overheadmixer)(混合罐經氮氣凈化)在合適尺寸的容器中混合成分。藥學上可接受的脂肪酸和藥學上可接受的抗氧化劑在室溫下混合。(如果需要將溶液加熱到適宜的溫度，例如就月桂酸而言加熱到約45。C以使該脂肪酸液化。加入所述式(1)化合物，并攪拌直到其溶解?；旌霞尤胨帉W上可接受的表面活性劑。將適宜重量的所得混合物注入到硬質明膠膠嚢中。其它制劑組合物式(l)化合物8.0PEG40082.8E畫9.2總計100.0式(l)化合物8.0E畫11.0PG7.4Maisine35-136.8CremophorRH4036.8總計100.031式(l)化合物8.0油酸92.0總計100.0式(l)化合物8.0油酸73.6EtOH9.2吐溫209.2總計100.0式(l)化合物8.00%油酸87.40%吐溫804.60%總計100.00%式(l)化合物20.00%油酸80.0%總計100.0%式(l)化合物20.00%油酸76.00%吐溫804.00%總計100.00%式(l)化合物8.00油酸86.47%吐溫804.60%Aerosil2000.92%BHT0.01%總計100.0%式(l)化合物8.00油酸85.55%吐溫804.60%Aerosil2001.84%BHT0.01%總計100.0%式(l)化合物8.00油酸85.55%吐溫804.60%Aerosil2001.84%BHT0.01%總計100.0%式(l)化合物10.00油酸84.55%吐溫805.00%BHA0.35%BHT0.1%總計100.0%實施例2a化合物(l)的微粉化制劑微粉化原料藥(Jetmill-00，在60—80psi;3-4微米平均粒度，約7-8sq.meters/g)與乳糖、微晶纖維素、交聯(lián)羧曱纖維素鈉、十二33烷基硫酸鈉、酒石酸和羥丙基纖維素干混。通過噴灑混合溶液所述混合物?；Ｋ鲱w粒在流化床中干燥。干燥的顆粒經過研磨機篩分，并與另外的微晶纖維素和交聯(lián)羥甲纖維素鈉混合。粉末混合物通過加入硬脂酸鎂潤滑，然后使用旋轉壓片機將其壓制成片劑。隨后，所述片劑包裹薄膜包衣。下表為以40mg化合物(1)，相當于約4rag/kg給藥在犬中所測試的多種制劑的總結。該表說明可溶的化合物(1)制劑的優(yōu)越性能。體內數(shù)據總結劑型方法組成載藥量(%)Cmax(MM)AUC"(MMhr)F(%)RSD(/。)固體粉末填充'PIC500.72.9852可溶性的液體填充癸酸204.8257917月桂酸202.614.34429油酸83.8236727202.1144456257.94212524可溶性的高速剪切A僅SLS200.44.41385SLS&酒石酸200.42.7882SLS&酒石酸200.96.92067流化床ASLS&酒石酸200.34.41477使用微粉化的API對用五肽胃泌素處理的犬給藥以降低胃pH值實施例3化合物(l)的抗病毒活性本發(fā)明的化合物顯示出對抗基因型la和lb的抗HCV復制子活性(在WO05/063744所描述的測定)，極低的細胞毒性(在Huh-7，HepG2和MW細胞中〉50，000nM)，以及高度有利的選擇性指數(shù)。所述化合物基本上對抗基因型2a很少有效。34化合參〃9對拔^cr^西^"和h茇賴f時活#HCV基因型lb(Con-l/l羅eo)和la(H77/neo)復制子細胞與系列稀釋的化合物(1)2，C-甲基腺苷(2，CMeA)或IFNct在不存在或存在40mg/mL人血清白蛋白(HSA)時共同孵育3天。孵育后，在所述處理細胞中復制子RNA的水平經熒光素酶報告子檢測(1b復制子)或實時定量PCR檢測(la復制子)測定，并且使用數(shù)據點計算抑制劑的EC5。(50%有效抑制濃度)值。所述化合物(1)顯示分別以0.6nM和3.6nM的ECs。值抑制基因型lb和基因型la(表A)。在存在人血清白蛋白時，所述化合物(1)的EQ值增加到11nM。表A:化合物(1)對抗HCV基因型la和lb復制子的活性EC5。[nM]a化合物HCVlb-lucneoHCVlb-lucneo40mg/mLHSAHCV-la10.6±0.28113.6±1.42，CMeA175±70250170IFN-oc2IU/mLn.d.n.d.n.d.，沒測到；HSA,人血清白蛋白a由至少4個獨立實驗測定的EC5。平均值和標準誤〃；對^Wr差西^7af賴f和病辜^活^在慢性感染基因型2a病毒的細胞和復制亞基因組2a復制子的細胞中測定化合物(1)對抗HCV基因型2a的抗病毒活性。將化合物(1)或2，CMeA與含有慢性復制HCV基因型2a(J6〃FH-Rluc)病毒或亞基因組復制子的Huh-7細胞在不存在人血清白蛋白下共同培養(yǎng)3天。培養(yǎng)后，使用Promega的焚光素酶檢測和新型時間分辨熒光分析分別測定熒光素酶在含2a病毒細胞中的量和在含2a復制子的細胞中的HCVNS3蛋白酶活性。與復制HCV-lb亞基因組復制子的Huh-7細胞(EC5o=0.0006mM)相比，所述化合物(1)的抗病毒活性在HCV-2a慢性感染的細胞培35養(yǎng)模型(ECs。-2.9juM)和2a亞基因組復制子模型(EC5。=21.9juM)中顯著降低(表2)?？傊?，這些結果表明化合物(l)對抗HCV基因型2a的效力降低可能歸因于在HCV的基因型l和基因型2間的基因型的差異。表B:化合物(1)對抗HCV基因型lb和2a的活性<table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>n.d.，沒測到；HAS，人血清白蛋白a由至少4個獨立實驗測定的ECs。平均值和標準誤使用CellTiter-Glo發(fā)光細胞活性檢測(Promega)評價化合物(1)在多種細胞類型，包括含HCV復制子的細胞系(Huh-7，SL3和MH4)和含非復制子的細胞系(HepG2，MT4)中的細胞毒性。在最高測定濃度(50)aM)沒有發(fā)現(xiàn)所述化合物在任何細胞系的毒性作用(表C)。這些結果結合所述化合物在HCV-lb和HCV-la復制子中的有效抗病毒活性(EC5。=0.62-3.6nM)，表明其具有高度選擇性指數(shù)(CC5。/EC5。>13，000-80，000)。表C:化合物(1)在含HCV復制子的細胞系中的細胞毒性<table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>3由至少4個獨立實驗測定的ECs。平均值和標準誤b含HCV復制子的細胞系"J與//w逸會4伴,/"^^^w活^聚乙二醇化干擾素-cx(PEG-IFN-ct)與利巴韋林組合代表了目前照顧HCV感染患者的標準。在復制子細胞中進行化合物(1)和IFN-cc的體夕卜組合實驗。使用經Prichard和Shipman改進的MacSynergy模板分析數(shù)據。這些實驗數(shù)據表明在化合物(1)和IFN-oc間存在加合的相互作用。實施例4化合物(1)在HCV基因型l感染的受試者中的l期人類試驗初期的抗病毒、藥代動力學和安全性數(shù)據設計隨機、雙盲、安慰劑對照試驗以評價化合物(1)(上述油酸制劑)在慢性感染HCV基因型1(GT-1)而非肝硬化失代償?shù)氖茉囌咧袉未?在A部分中)和多次(在B部分中)劑量的安全性/耐受性、藥代動力學和抗病毒活性。預期的受試者為年齡18-60歲，未經HCV治療，并且總體健康良好。在完成的A部分中，將含6名受試者的五個連續(xù)同期組群隨機(5:1)接受單次遞增劑量的化合物(1)(40、120、240、240-進食物、或480mg)或安慰劑。在上述B部分，將含12名受試者的四個連續(xù)同期組群隨機(10:2)在8天接受多次遞增劑量的化合物(1)(40mgBID、120mgBID、240mgQD、240mgBID)或安慰劑。在A部分登記的31名受試者平均年齡43.6歲，主要為男性(20/31)，白種人(25/31),并且感染HCV基因型la(24)或lb(6)。中位數(shù)(范圍)的基線HCV病毒裝載量為6.6Log"RMIU/mL(5.2-7.3)?；衔?l)單次劑量是耐受良好的，并且沒有報道嚴重的或限制治療的不良事件(AEs)。最為常見的AE是頭痛。所有AE在嚴重37性方面是輕微的，除了l例中度頭痛。沒有出現(xiàn)3或4級的由治療引起的實驗室異常情況。在同期組群中，中位數(shù)化合物(1)血漿半衰期的范圍從10至15小時。當化合物(1)與高脂食物共同給予時，全身暴露增加約2倍。與體外蛋白結合調整的HCVGT-lb復制子ECs。值相比，在240mg禁食劑量給藥后24小時的化合物(1)平均濃度高出約7倍。在單次劑量暴露后，在24小時觀察到最大抗病毒作用以及在同期組群中中位數(shù)下降范圍為O.46-1.49Log"HCVRNAIU/mL。在單次劑量暴露后，在所有化合物(1)接受者中個體HCVRNA下降的范圍為O.19-2.54log1。IU/mL。這是化合物(1)的抗病毒活性的第一次臨床例證。單次劑量暴露化合物(1)是耐受良好的，并表明其具有有益的PK特性和有效的抗病毒活性。實施例5化合物(1)的抗HCV復制子的活性比得上現(xiàn)有技術(W005/063744)化合物，如式(4)的化合物的活性。(4)意想不到地，化合物(1)比所述式(4)化合物更為有效約330倍。38權利要求1.用于制備式(1)化合物的方法，該方法包括(a)在溶劑存在下，使5-[6-氯-噠嗪-3基甲基]-2-(2-氟-苯基)-5H-咪唑并[4，5-c]吡啶與2，4-雙(三氟甲基)苯基硼酸反應，該溶劑具有結構R1OR2O(R4O)aR3，其中R1、R2、R3和R4各自獨立地選自C1-C6烷基并且a是0或1，以及(b)回收所述化合物(1)。2.權利要求1的方法，其中a是0。3.權利要求2的方法，其中所述溶劑是二甲氧基乙烷。4.權利要求1的方法，其中a是l。5.具有式(1)的化合物以及其鹽和溶劑化物6.權利要求5的化合物，所述化合物作為游離堿。7.權利要求5的化合物，所述化合物是微粉化的。8.權利要求5的化合物，所述化合物作為懸浮液。9.權利要求5的化合物，所述化合物在含水介質中。10.權利要求5的化合物，所述化合物作為溶液。11.權利要求10的化合物，所述化合物在含有C廣Cn脂肪酸的溶液中。12.權利要求11的溶液，其中所述脂肪酸是油酸或月桂酸。13.組合物，所述組合物包括權利要求5的所述化合物和藥學上可接受的賦形劑。14.權利要求13的組合物，其中所述賦形劑是C廣C22脂肪酸。15.權利要求14的組合物，所述組合物為水溶液，其中所述脂肪酸是油酸。16.用于治療或預防HCV感染的方法，所述方法包括給予受試者HCV治療或預防劑量的權利要求5的所述化合物。17.權利要求16的方法，其中所述受試者是人類。18.權利要求17的方法，所迷方法還包括給予所述受試者在治療上有效劑量的用于治療或預防HCV感染的其它藥劑。19.權利要求18的方法，其中所迷藥劑是干擾素。20.權利要求17的方法，其中所述在治療上有效的劑量是約0.5-5.Omg/kgBID。21.權利要求20的方法，其中所述劑量是約0.7-2.2mg/kgBID。22.權利要求5的化合物，所述化合物作為藥物使用。23.權利要求5的化合物在制備用于預防或治療哺乳動物中HCV感染的藥物中的用途。24.權利要求23的用途，其中所述病毒感染是HCV感染。25.權利要求23的用途，其中所迷哺乳動物是人類。26.用于制備化合物(1)的方法，該方法包括提供中間體(2)，使2，4-雙(三氟甲基)苯基硼酸與3-氯-6-甲基噠噪偶合以產生化合物(2a)，(2a)使化合物(2a)經氯化劑處理產生烷化劑(3)ci、CF3(3)以及使用該烷化劑(3)在堿性條件下使中間體(2)烷基化而生成化合物(1)27.式(3)的化合物，(3)其中被曱基而不是氯甲基取代的式(3)的化合物的類似物，以及其中被代替氯的溴、氟或碘取代的式(3)的化合物的類似物。全文摘要提供用于治療或預防丙型肝炎病毒感染的式(I)化合物和它的鹽以及溶劑化物。提供制備和配制化合物(1)的方法。文檔編號C07D403/14GK101484444SQ200780025590公開日2009年7月15日申請日期2007年7月6日優(yōu)先權日2006年7月7日發(fā)明者D·A·歐雷,R·歐利雅,S·S·邦迪,T·C·達爾,V·茲雅,W·C·特賽申請人:吉里德科學公司;K.U.勒芬研究和發(fā)展公司;格哈德·皮爾斯廷格