專利名稱：：小化膿性鏈球菌抗原及其用途的制作方法小化膿性鏈球菌抗原及其用途本發(fā)明涉及一種肽，其由SEQIDNOS:1-7中任意的化膿性鏈球菌0.AF0ge/7e^的一種抗原或其功能活性變體構(gòu)成，任選地還由下述構(gòu)成其他氨基酸殘基；編碼這些氨基酸殘基的核酸；包含所述肽或所述核酸的藥物組合物，特別是疫苗；特異性結(jié)合所述抗原的抗體或其功能活性片段；產(chǎn)生所述抗體的雜交瘤細(xì)胞系；產(chǎn)生所述抗體的方法；包含所述抗體的藥物組合物；所述肽或所述核酸在制備用于免疫或治療受試者的藥物中的用途；所述抗體或其功能片段在制備用于治療感染的藥物中的用途；診斷化膿性鏈球菌感染的方法；識(shí)別能夠結(jié)合所述肽的配體的方法；以及所迷肽在分離和/或純化和/或識(shí)別肽的相互作用伙伴中的用途?；撔枣溓蚓?，也稱為A族鏈球菌(GAS),是一種重要的革蘭氏陽(yáng)性細(xì)胞外的細(xì)菌性病原體并通常感染人類。GAS定殖于喉部或皮膚并造成許多化膿性感染和非化膿性后遺癥。其主要是一種兒童疾病并在人體內(nèi)引起包括細(xì)菌性咽炎、猩紅熱、膿皰病和膿毒癥在內(nèi)的多種感染。幾十年的流行病學(xué)研究認(rèn)識(shí)到截然不同的喉部和皮膚菌林，其中某些血清型經(jīng)常分別與喉部或皮膚感染相關(guān)(Cunningham,M.(2000).ClinMicrobiolRev13:470-511)。已發(fā)現(xiàn)GAS造成最近在美國(guó)復(fù)蘇的鏈球菌中毒性休克綜合征相關(guān)的壞死性筋膜炎(Cone,L.，etal.(1987).NewEnglJMed317:146-9;Stevens,D.(1992).ClinInfectDis14:2-11)并已將其描述為侵入皮膚和軟組織而導(dǎo)致組織或肢部破壞的"肉食，，細(xì)菌。幾種鏈球菌感染繼發(fā)后遺癥發(fā)生感染后的人體內(nèi)，如急性風(fēng)濕熱、急性腎小球腎炎和反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎。急性風(fēng)濕熱和風(fēng)濕性心臟病是其中最嚴(yán)重的自身免疫后遺癥并已在全球范圍導(dǎo)致兒童殘疾和死亡?；撔枣溓蚓惨饑?yán)重的急性疾病如猩紅熱和壞死性筋膜炎，并已將其8與圖雷特綜合征(Tourette，ssyndrome)、抽搐及運(yùn)動(dòng)和注意力紊亂聯(lián)系在一起。A族鏈球菌是喉嚨痛和咽炎的最常見(jiàn)細(xì)菌性原因并占普通醫(yī)療的全部門(mén)診的至少16%，是季節(jié)依賴性的(Hope-Simpson,R.(1981).JHyg(Lond)87:109-29)。其主要感染在5-15歲之間的學(xué)齡期兒童(Cunningham,同上)。在擁擠條件下例如學(xué)校內(nèi)，所有年齡段都對(duì)所述生物的傳播易感。雖然不認(rèn)為GAS是正常群落，但是咽部攜帶A族鏈球菌可存在并不伴有臨床癥狀。A族鏈球菌可通過(guò)基于其碳水化合物的血清型分型的蘭斯菲爾德分類分類方案加以區(qū)分，或基于通過(guò)將細(xì)菌與鹽酸煮沸而提取的一種表面蛋白將其歸類于M蛋白血清型。上述方法已導(dǎo)致鑒定了超過(guò)80種血清型，其也可通過(guò)分子手段分型(emmgene)。分子定型已鑒定了超過(guò)150種個(gè)體emm類型?；撔枣溓蚓哪承㎝蛋白血清型主要與咽炎和風(fēng)濕熱相關(guān)，但是其他似乎主要引起膿皮病和急性腎小球腎炎(Cunningham,同上)。C族和G族鏈球菌也涉及引起咽炎和偶發(fā)地中毒性休克，其必須在喉部培養(yǎng)之后力口以區(qū)分(Hope-Simpson,同上；Bisno，A.,etal.(1987).InfectImmun55:753-7)。目前，僅能通過(guò)抗生素療法治療鏈球菌感染。然而，通過(guò)抗生素治療中有25-30%表現(xiàn)復(fù)發(fā)病癥和/或生物躲避在粘膜分泌物中。目前沒(méi)有有效避免鏈球菌感染的預(yù)防性治療(疫苗)。因此，仍需要有效的治療來(lái)預(yù)防或改善鏈球菌感染。疫苗不僅可預(yù)防鏈球菌感染，而且更特異性地預(yù)防或改善在宿主組織內(nèi)的定殖，從而減少咽炎和其他化膿性感染的發(fā)生率。消除非化膿性后遺癥如風(fēng)濕熱、急性腎小球腎炎、膿毒癥、中毒性休克和壞死性筋膜炎是減少急性感染發(fā)生率和攜帶該生物體的直接結(jié)果。能夠?qū)ζ渌溓蚓憩F(xiàn)交叉保護(hù)的疫苗也用于預(yù)防或改善由所有其他P-溶血性鏈球菌物種(即A、B、C和G族)引起的感染。疫苗可包含多種不同的抗原?？乖膶?shí)例為滅活的或減毒的生物，9此生物/組織的亞部分、蛋白、或其最簡(jiǎn)單形式——肽?？乖部梢砸蕴腔鞍谆螂牡男问奖幻庖呦到y(tǒng)識(shí)別，并也是或包含多糖或脂質(zhì)。由于例如細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CTL)識(shí)別與主要組織相容性復(fù)合體(MHC)相結(jié)合的通常8-11氨基酸長(zhǎng)的短肽的形式的抗原，因此可使用短肽。B細(xì)胞即可識(shí)別短到4-5個(gè)氨基酸的線性表位，也可識(shí)別三維結(jié)構(gòu)(構(gòu)象性表位)。在一些情況下，佐劑可用于維持抗原特異性免疫應(yīng)答。主要地，佐劑作用于所謂的抗原呈遞細(xì)胞(APCs)，但不受限于其作用方式。此細(xì)胞通常首先遭遇抗原，然后將加工過(guò)的或修飾過(guò)的抗原呈遞給免疫效應(yīng)細(xì)胞。也可涉及中間細(xì)胞類型。在生產(chǎn)性免疫應(yīng)答中，僅激活具有適當(dāng)特異性的效應(yīng)細(xì)胞。佐劑也可在局部保留抗原并同時(shí)注射其為免疫系統(tǒng)的刺激劑局部和/或全身發(fā)揮作用。開(kāi)發(fā)A族鏈球菌疫苗的方法已主要聚焦于化膿性鏈球菌的細(xì)胞表面M蛋白(Bessen，D.，etal.(1988).InfectImmun56:2666-2672;Bronze,M.，etal.(1988).JImmunol141:2767-2770)。既然存在超過(guò)80種不同M血清型的化膿性鏈球菌并且新的血清型不斷出現(xiàn)(Fischetti，V.(1989).ClinMicrobiolRev2:285—314)，那么接種數(shù)量有限的血清型特異性的M蛋白或M蛋白衍生肽不可能有效保護(hù)免于所有其他M血清型。而且，已經(jīng)顯示M蛋白的保守區(qū)包含對(duì)人心臟組織具有免疫交叉反應(yīng)性的氨基酸序列，其被認(rèn)為是風(fēng)濕熱相關(guān)的心臟瓣膜損傷的原因(Fenderson，P.，etal.(1989).JImmunol142:2475-2481)。在疫苗開(kāi)發(fā)中考慮其他蛋白，如紅斑毒素、鏈球菌致熱外毒素A和鏈球菌致熱外毒素B(Lee，P.K.(1989).JClinMicrobiol27:1890-2)。對(duì)這些毒素的免疫可能預(yù)防鏈霉素中毒性休克的致死性癥狀，但其不能預(yù)防A族鏈霉素的定殖。上述蛋白在作為潛在疫苗及其許多另外的候選物的抗原中的用途(Ji，Y.，etal.(1997).InfectI隱n65:2080-2087;G畫(huà)an，10C.，etal.(1999).JInfectDis179:901-6)主要產(chǎn)生自基于鑒定的便宜性或可用性機(jī)會(huì)的選擇。需要鑒定針對(duì)化膿性鏈球菌的有效的、相關(guān)的抗原。WO2004/078907描述了一種用于鑒定、分離和生產(chǎn)來(lái)自化膿性鏈球菌的超免疫血清反應(yīng)性抗原的方法。本文所述的抗原集中于本申請(qǐng)中所示的具有保護(hù)性的區(qū)域。獲得保護(hù)的合適的抗原大小基于不同因素(如保護(hù)性表位的類型(例如，構(gòu)象性相對(duì)于線性))以及提供一定水平保護(hù)作用的保護(hù)性表位的數(shù)量而變化。包含不能提供有效保護(hù)作用的大抗原對(duì)于免疫是不利的。首先，提供更小的抗原易生產(chǎn)于重組形式蛋白。通常認(rèn)為更大蛋白更難生產(chǎn)?？梢愿?jīng)濟(jì)的方式生產(chǎn)更小的蛋白，從而節(jié)省開(kāi)支，特別是對(duì)于醫(yī)療保健系統(tǒng)。其二，減小用于免疫的抗原性蛋白的大小可產(chǎn)生更安全的產(chǎn)物。需要去除抗原性蛋白中的多余的序列，因?yàn)檫@減少了誘導(dǎo)能引起與人體組織有交叉作用的抗體的機(jī)率。其三，用于免疫的蛋白可包含多于一種抗原，這些抗原針對(duì)同一種疾病或不同種疾病，從而獲得更有效的免疫或針對(duì)幾種疾病的免疫。然而，如果單個(gè)抗原都太大，組合進(jìn)一個(gè)蛋白就不可行了。于是，本發(fā)明的一個(gè)問(wèn)題就是為開(kāi)發(fā)藥物如抗化膿性鏈球菌感染的疫苗(特別是較小蛋白)提供備選的方式。令人驚訝的是，通過(guò)由SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6或SEQIDNO:7的化膿性鏈球菌的一種抗原或SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6或SEQIDNO:7的化膿性鏈球菌的一種抗原的功能活性變體組成的肽解決了此目標(biāo)。這些肽稱為抗原性肽。在本說(shuō)明書(shū)的表l中描述了SEQIDNOS:l-7的序列的特征。在附加的序列數(shù)據(jù)中公開(kāi)了相關(guān)的氨基酸序列。已表明SEQIDNOS:l-7的肽針對(duì)膿毒癥和/或致死性模型中的化膿性鏈球菌誘導(dǎo)免疫應(yīng)答和/或表現(xiàn)出保護(hù)作用(參見(jiàn)實(shí)施例1)。功能活性變體是通過(guò)改變?nèi)鏸i下定義的抗原的序列而獲得，并且其特征為具有類似于作為其來(lái)源的序列SEQIDNOS:1-7中的任意的抗原所顯示的生物活性，包括針對(duì)例如膿毒癥和/或致死性模型中的化膿性鏈球菌誘導(dǎo)免疫應(yīng)答和/或表現(xiàn)出保護(hù)作用的能力。本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的肽由如下構(gòu)成序列為SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6或SEQIDNO:7的化膿性鏈球菌的抗原或序列為SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6或SEQIDNO:7的化膿性鏈球菌的抗原的功能活性變體；以及a.如果抗原為SEQIDNO:1，1-350個(gè)附加氨基酸殘基，優(yōu)選地1-200，更優(yōu)選地1-150，甚至更優(yōu)選地最多1-100，還更優(yōu)選地最多1-50，最優(yōu)選地l、2、3、4、5、10、15、20或25個(gè)附加氨基酸殘基；或b.如果抗原為SEQIDNO:2，1-200個(gè)附加氨基酸殘基，優(yōu)選地1-150，更優(yōu)選地1-100，甚至更優(yōu)選地最多1-50,還更優(yōu)選地最多1-25，最優(yōu)選地1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個(gè)附加氨基酸殘基；或c.如果抗原為SEQIDNO:3，1-100個(gè)附加氨基酸殘基，優(yōu)選地l-75，更優(yōu)選地1-50，甚至更優(yōu)選地最多1-25,還更優(yōu)選地最多I-IO，最優(yōu)選地l、2、3、4或5個(gè)附加氨基酸殘基；或d.如果抗原為SEQIDNO:4,1-150個(gè)附加氨基酸殘基，優(yōu)選地1-100，更優(yōu)選地1-75，甚至更優(yōu)選地最多1-50，還更優(yōu)選地最多1-25,最優(yōu)選地1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個(gè)附加氨基酸殘基；或e.如果抗原為SEQIDNO:5，1-450個(gè)附加氨基酸殘基，優(yōu)選地1-300，更優(yōu)選地1-150，甚至更優(yōu)選地最多1-100，還更優(yōu)選地最多1-50，最優(yōu)選地l、2、3、4、5、10、20、30或40個(gè)附加氨基酸殘基；或f.如果抗原為SEQIDNO:6或SEQIDNO:7,1-250個(gè)附加氨基酸殘基，優(yōu)選地1-200,更優(yōu)選地1-150，甚至更優(yōu)選地最多1-100，還更優(yōu)選地最多1-50，最優(yōu)選地l、2、3、4、5、10、15、20或25個(gè)附加氨基酸殘基?；撔枣溓蚓目乖梢允巧鲜鋈我饪乖簿褪荢EQIDNOS:1、2、3、4、5、6或7的任意或其功能活性變體所定義的，其中所述功能活性變體如下文所定義?？乖蚱涔δ芑钚宰凅w可添加與所述肽異源的或同源的至少一個(gè)附加氨基酸殘基。同源性是指與衍生出所述抗原的化膿性鏈球菌蛋白氨基酸序列相同的任意氨基酸或氨基酸序列，其中序列SEQIDNO:1-7衍生自下列蛋白序列衍生自蛋白(如在WO2004/078907中或其附加序列數(shù)據(jù)中所示)SEQIDNO1Spy0269SEQIDNO2Spy0292SEQIDNO3Spy0292SEQIDNO4Spy0416SEQIDNOSpy0416SEQIDNO6Spy0"6SEQIDNO7Spy0872一個(gè)實(shí)施方案中，具有一個(gè)或多個(gè)附加氨基酸殘基的抗體或其功能活性變體(參見(jiàn)上面，特別是在項(xiàng)(a)-(f)所述)進(jìn)一步包含與所述抗原異源的至少一個(gè)氨基酸殘基。"異源性氨基酸"或"與抗體或蛋白異源的氨基酸"的特征是指與化膿性鏈球菌(特別是不同于化膿性鏈球菌SF370(血清型Ml))的任何天然蛋白中毗鄰于所述抗原或蛋白的氨基酸不同的任意氨基酸。因此，本發(fā)明的包括至少一個(gè)異源13性氨基酸的蛋白是指不同于化膿性鏈球菌的任意天然蛋白或其片斷的蛋白，尤其不同于化膿性鏈球菌SF37Q(血清型Ml)。衍生本發(fā)明抗原的蛋白及其序列的參考羅列如上。在某些實(shí)施方案中，所述肽由抗原、任選地至少一個(gè)如上定義的附加氨基酸殘基和含標(biāo)記蛋白的至少一個(gè)附加的異源性氨基酸序列組成。如上定義的附加序列或氨基酸殘基由氨基酸殘基構(gòu)成，所述氨基酸殘基可以是任意氨基酸，其可以是L-和/或D-氨基酸，天然的或其他的。優(yōu)選地，所述氨基酸是任意天然氨基酸如丙氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、異亮氨酸、賴氨酸、亮氨酸、曱硫氨酸、天冬酰胺、脯氨酸、谷氨酸、精氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、纈氨酸、色氨酸或絡(luò)氨酸。然而，所述氨基酸殘基也可以是修飾的或不常見(jiàn)的氨基酸。其實(shí)例為2-氨基己二酸、3-氨基己二酸、P-丙氨酸、2-氨基丁酸、4-氨基丁酸、6-氨基己酸、2-氨基庚酸、2-氨基異丁酸、3-氨基異丁酸、2-氨基庚二酸、2，4-二氨基丁酸、鎖鏈素、2，2，-二氨基庚二酸、2,3-二氨基丙酸、N-乙基甘氨酸、N-乙基天冬氨酸、羥基賴氨酸、別-羥基賴氨酸、3-羥基脯氨酸、4-羥基脯氨酸、異連鎖素、別-異亮氨酸、N-曱基甘氨酸、N-曱基異亮氨酸、6-N-甲基賴氨酸、N-曱基纈氨酸、正纈氨酸、正亮氨酸或鳥(niǎo)氨酸。另外，所述氨基酸可作為修飾(如翻譯后修飾)的對(duì)象。修飾的實(shí)例包括乙?；?、酰胺化、阻斷、曱酰化、-羥基谷氨酸羥基化、糖基化、甲基化、磷酸化和硫化。如果所述肽中存在一個(gè)附加或異源的氨基酸殘基，那么氨基酸殘基可彼此相同或不同。所述抗原性肽可在C端、N端、或C和N端添加側(cè)翼氨基酸殘基。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述肽在不同的實(shí)施方案中是如上面所述的，并包含與SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6或SEQIDNO:7的l壬意抗原基14本上相同的區(qū)域，但不同于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6或SEQIDNO:7中任意的抗原，因?yàn)槠溲苌曰撔枣溓蚓煌逍偷耐葱蛄?，特別是其中所述血清型為M2、M3、M4、M5、M6、Mll、M12、M14、M19、M22、M24、M25、M28、M44、M49、M57、M59、M60、M61、M76、M83、M84、M87、M89或M118，尤其是化膿性鏈球菌SF370。因此，本發(fā)明也涉及不同化膿性鏈球菌分離林的抗原?？苫诒疚墓_(kāi)的核酸序列和氨基酸序列輕易地鑒定和分離這些同源物。通過(guò)例如序列比對(duì)鑒定不同血清型的同源抗原。所述同源抗原序列可通過(guò)一個(gè)或多個(gè)氨基酸的替換、刪除和/或增加而不同于SEQIDNO:1-7的任意序列的抗原。優(yōu)選地，所述同源抗源序列具有所附氨基酸序列列表定義的任意同源變體的序列。不同血清型的同源序列的實(shí)例在所附序列數(shù)據(jù)中詳細(xì)描述。特別是，與本發(fā)明各個(gè)多肽同源的序列如下列出<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>目前已區(qū)分出超過(guò)150emm類型而分型是根據(jù)emm基因5，末端的可變區(qū)(參見(jiàn)例如Vitali，L.，etal.(2002)J.Clin.Microbiol40:679-681)。因此可針對(duì)每一種emm類型確定同源抗原的存在。另外，正如針對(duì)s/c基因所描述的那樣(HoeN.，etal.(2001)J.Inf.Dis.183:"3-9))可能確定出在不同e隨類型中的特定抗原的變異性。不同M血清型對(duì)其引發(fā)的疾病的影響在近期的綜述中進(jìn)行了總結(jié)(Cunningham,同上)。特別是，可區(qū)分兩組血清型1)引起咽炎和猩紅熱的血清型(例如M類型1、3、5、6、14、18、19、24)2)引起膿皮病和鏈球菌皮膚感染的血清型(例如M類型2、49、57、59、60、61)這可作為基礎(chǔ)以鑒定一種抗原在作為疫苗或一般作為藥物靶向特定疾病的用途中的相關(guān)性。來(lái)自例如疾病控制和預(yù)防中心(CDC)主頁(yè)(http://www.cdc.gov/ncidod/biotech/strep/emmtypes.htm)的信息提供了一個(gè)表示不同emm類型的相關(guān)度的樹(shù)形圖。其他相關(guān)參考文獻(xiàn)為Vitalietal.，同上(分子emm分型方法)，Enrightetal.，InfectionandImmunity69:2416-2427.(2001)(備選的分子分型方法(MLST))，Hoeetal.,同上(許多不同血清型中一種抗原O/c)的變體的實(shí)例)和Cunningham,同上(對(duì)GAS發(fā)病機(jī)制的綜述)。全部emm類型在公共數(shù)據(jù)庫(kù)中已完整列出并可獲得(例如，通過(guò)CDC)。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述變體是片段。此片段的特征在于通過(guò)一個(gè)或多個(gè)氨基酸刪除從上面定義的抗原衍生而來(lái)。刪除可在C端、N端和/或中間。優(yōu)選地通過(guò)最多10、20、30、40、50、60、80、100、150或2GQ個(gè)氨基酸缺失，更優(yōu)選地通過(guò)最多10、20、30、40或50個(gè)氨基酸缺失，甚至更優(yōu)選地通過(guò)最多5、10或15個(gè)氨基酸缺失，還更優(yōu)選地最多5或10個(gè)氨基酸缺失，最優(yōu)選地l、2、3、4或5個(gè)氨基酸缺失獲得所述片段。本發(fā)明的功能活性片段的特征在于具有類似于完整抗原所顯示的生物活性，包括針對(duì)膿毒癥和/或致死性模型中的化膿性鏈球菌誘導(dǎo)免疫應(yīng)答和/或表現(xiàn)出保護(hù)作用的能力。如果片段的活性等于無(wú)序列變化的抗原活性的至少10%，優(yōu)選地至少25%,更優(yōu)選地至少50%,甚至更優(yōu)選地至少70%,還更優(yōu)選地至少80%，特別是至少90%，尤其是至少95%,最優(yōu)選地至少99%，那16么抗原的片段在本發(fā)明中是具有功能活性的?？稍O(shè)計(jì)或獲得任意所需長(zhǎng)度的這類片段，包括長(zhǎng)度小至50-80個(gè)氨基酸。所述功能活性片段特征也在于其他結(jié)構(gòu)屬性。因此，在本發(fā)明一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述功能活性片段由至少60%、優(yōu)選地至少70%、更優(yōu)選地至少80%、還更優(yōu)選地至少90%、甚至更優(yōu)選地至少95%、最優(yōu)選地99%的任意SEQIDN0S:1-7的抗原的氨基酸構(gòu)成。如上所定義的功能活性片段可通過(guò)一個(gè)或多個(gè)氨基酸刪除從肽衍生而來(lái)。所述刪除可以是C末端、N末端和/或中間。本發(fā)明另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案涉及在之前實(shí)施方案中的如上所定義的肽，其中所述抗原是任意SEQIDN0S:l-7的抗原的功能活性變體，并且其中所述變體與任意SEQIDN0S:1-7的抗原具有至少50%的序列一致性。在一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述功能活性變體與任意SEQIDN0S:1-7的抗原具有至少60%，優(yōu)選地至少70%,更優(yōu)選地至少80%,還更優(yōu)選地至少90%，甚至更優(yōu)選地至少95%,最優(yōu)選地至少99%的序列一致性。序列一致性的百分比可通過(guò)例如序列比對(duì)來(lái)確定。用于比較的序列比對(duì)的方法是本領(lǐng)域所熟知的。例如在SmithandWaterman,Adv.Appl.Math.2:482，1981或PearsonandLipman，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.85:2444-2448，1988中已描述了多種的程序和比對(duì)算法?？蓮亩鄠€(gè)來(lái)源獲得NCBI基本局部比對(duì)搜索工具(BLAST)(Altschuletal.，J.Mol.Biol.215:403-410，1990)，包括國(guó)家生物技術(shù)信息中心(NCBI，Bethesda，MD)及因特網(wǎng)，用于序列分析程序blastp、blastn、blastx、tblastn和tblastx相關(guān)的應(yīng)用。通過(guò)使用NCBIBlast2.0，其缺口blastp設(shè)為默i人參數(shù)來(lái)對(duì)任意SEQIDNOS:1-7序列的抗原的變體進(jìn)行一般地表征。為了比較含至少35個(gè)氨基酸的氨基酸序列，使用默認(rèn)BLOSUM62矩陣設(shè)為默認(rèn)參數(shù)(缺口存在值為11，且每殘基缺口值為1)來(lái)應(yīng)用Blast2的序列功能。當(dāng)比對(duì)短肽(小于35個(gè)氨基酸左右)時(shí)，使用PAM30矩陣設(shè)為默認(rèn)參數(shù)17(開(kāi)放缺口9，延長(zhǎng)缺口1罰分)的Blast2序列功能來(lái)實(shí)施比對(duì)。位于Maryland,Bethesda的國(guó)家生物技術(shù)信息中心維護(hù)的網(wǎng)站上描述了用于確定此類小窗口(如15個(gè)氨基酸或更少)的序列一致性的方法(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/)。通過(guò)抗原上的序列變化荻得抗原的功能活性變體，其中具有序列變化的抗原保持了未變化的抗原的功能，例如具有類似于完整抗原顯示的生物活性，其中包括針對(duì)例如膿毒癥和/或致死性模型中的化膿性鏈球菌誘導(dǎo)免疫應(yīng)答和/或表現(xiàn)出保護(hù)作用的能力。這種序列變化可包括但不限于保守性替換、刪除、突變和插入。功能活性變體的這些特征可以像例如在實(shí)施例1中詳述的進(jìn)行評(píng)估。在本發(fā)明的上下文中，變體特定地具有類似于無(wú)變化抗原顯示的生物活性，其中包括針對(duì)膿毒癥和/或致死性模型中的化膿性鏈球菌誘導(dǎo)免疫應(yīng)答和/或表現(xiàn)出保護(hù)作用的能力，如果變體的活性等于無(wú)變化抗原活性的至少10%，優(yōu)選地至少25%,更優(yōu)選地至少50%，甚至更優(yōu)選地至少70%，還更優(yōu)選地至少80%,特別是至少90%，尤其是至少95%,最優(yōu)選地至少99%。術(shù)語(yǔ)"功能活性變體"包括天然等位基因變體，以及突變或任意其他非天然變體。如本領(lǐng)域所知，等位基因變體是(多)肽的一種變化形式，其特征為具有在基本上不會(huì)改變多肽生物學(xué)功能的一個(gè)或多個(gè)氨基酸的替換、刪除或增加。"生物學(xué)功能"是指多肽在其所天然發(fā)生的細(xì)胞中的功能，即使此功能對(duì)于細(xì)胞的生長(zhǎng)或存活不是必需的。例如，孔蛋白的生物學(xué)功能是允許存在于細(xì)胞外介質(zhì)中的化合物進(jìn)入細(xì)胞。生物學(xué)功能與抗原性功能不同。一個(gè)多肽可具有一種以上的生物學(xué)功能。生物界任意物種中，等位基因變異是常見(jiàn)情況。例如，任意細(xì)菌物種，例如化膿性鏈球菌，通過(guò)以微小的等位基因變異區(qū)分彼此的不同的菌林(由克隆化繁殖為特征)來(lái)表示。其實(shí)，在不同菌株中行使相同生物學(xué)功能的多肽具有的氨基酸序列在每個(gè)菌種中可以是不同的。這種等位基因變異同樣地反映在多核苷酸水平上。18等位基因變異在化膿性鏈球菌種屬中十分常見(jiàn)。這種等位基因變異也是通過(guò)上述emm分型對(duì)A族鏈球菌進(jìn)行分子分型的基礎(chǔ)(參見(jiàn)例如Facklam，R.etal.(1999)EmergInfectDis.5:247-53或http://www.cdc.gov/ncidod/biotech/strep/emmtypes.htm)。而且，如s/c這樣的基因接受等位基因變異(HoeN.，etal.(2001)J.Inf.Dis.183:633-9)。然而，具有大等位基因變異的蛋白一般不適于作為疫苗的候選物，因?yàn)槊庖卟荒芊烙械木ǖ母腥?，或其他免疫可能誘導(dǎo)疫苗不能涵蓋的新等位基因變異的出現(xiàn)。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，通過(guò)氨基酸交換、刪除或插入衍生自抗原功能活性變體或片段也可保留，或更優(yōu)選地增強(qiáng)其活性(如上定義)。而且，這些肽也涵蓋能觸發(fā)相同的或優(yōu)選地增強(qiáng)的T細(xì)胞響應(yīng)的表位。這些表位被稱為"變態(tài)的"。其具有對(duì)MHC/HLA分子的類似的或優(yōu)選地更強(qiáng)的親和力，并具有以類似的或優(yōu)選地更強(qiáng)的方式刺激針對(duì)原始表位的T細(xì)胞受體(TCR)的能力。變態(tài)表位可通過(guò)合理設(shè)計(jì)而獲得，也就是考慮各個(gè)殘基對(duì)于結(jié)合MHC/HLA的貢獻(xiàn)，正如例如在(Rammensee,H.etal.，1999，Immunogenetics.50:213-219)所述的，并結(jié)合可能與TCR相互作用的殘基的系統(tǒng)交換和用針對(duì)原始表位的T細(xì)胞檢測(cè)所得序列。這種設(shè)計(jì)對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員無(wú)需進(jìn)行太多實(shí)驗(yàn)。在本發(fā)明另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，與任意SEQIDNOS:1-7的抗原具有至少50%的序列同源性，與任意SEQIDN0S:1-7的抗原具有特別是至少60%,優(yōu)選地至少70%,更優(yōu)選地至少80%，還更優(yōu)選地至少90%，甚至更優(yōu)選地至少95%，最優(yōu)選地99%序列同源性的任意SEQIDN0S:1-7的抗原的功能活性變體是通過(guò)保守性替換衍生自任意序列SEQIDN0S:1-7的抗原。保守性替換是發(fā)生在側(cè)鏈和化學(xué)性質(zhì)相關(guān)的氨基酸家族內(nèi)的替換。這種家族的實(shí)例是具有堿性側(cè)鏈、具有酸性側(cè)鏈、具有非極性脂肪族側(cè)鏈、具有非極性芳香族側(cè)鏈、具有不帶電極性側(cè)鏈、具有小側(cè)鏈、具有大側(cè)鏈等等的氨基酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，肽包含一個(gè)保守性替換。在另一個(gè)實(shí)施方案中，肽包含兩個(gè)或更少的保守性替換。在另一個(gè)實(shí)施方案中，肽包含三個(gè)或更少的保守性替換。保守性氨基酸替換的實(shí)例包括，但不限于下列原始?xì)埢Ｊ匦蕴鎿QAlaSerArgLysAsnGin;HisAspGluCysSerGinAsnGluAspHisAsn;GinlieValLeulie;ValLysArg;Glr^AsnMetLeujliePheMet;Leu;TyrSerThrThrSerTrpTyrTyrTrpjPheVallie;Leu通過(guò)一個(gè)或多個(gè)氨基酸替換、刪除和/或插入獲得的本發(fā)明肽的合適變體的實(shí)例可由表5-7和9中的提高的數(shù)據(jù)中衍生而來(lái)。具體而言，表5-7和9列出與化膿性鏈球菌SF370相比，在特定位點(diǎn)上的天然發(fā)生的氨基酸變化(替換、插入、刪除)。關(guān)于具有SEQIDNO:1(也就是，如上所定義地，特別是如上述項(xiàng)(a)-(f)中所定義地由其組成或包含其)的肽的變體，本發(fā)明20的變體可通過(guò)一個(gè)或多個(gè)表5中所示的變化而不同于具有SEQIDNO:1的肽。關(guān)于具有SEQIDNO:2(也就是，如上所定義地，特別是如上述項(xiàng)(a)-(f)中所定義地由其組成或包含其)的肽的變體，本發(fā)明的變體可通過(guò)一個(gè)或多個(gè)表6中所示的變化而不同于具有SEQIDNO:2的肽。關(guān)于具有SEQIDNO:3(也就是，如上所定義地，特別是如上述項(xiàng)(a)-(f)中所定義地由其組成或包含其)的肽的變體，本發(fā)明的變體可通過(guò)一個(gè)或多個(gè)表6中所示的變化而不同于具有SEQIDNO:3的肽。關(guān)于具有SEQIDNO:4(也就是，如上所定義地，特別是如上述項(xiàng)(a)-(f)中所定義地由其組成或包含其)的肽的變體，本發(fā)明的變體可通過(guò)一個(gè)或多個(gè)表7中所示的變化而不同于具有SEQIDNO:4的肽。關(guān)于具有SEQIDNO:5(也就是，如上所定義地，特別是如上述項(xiàng)(a)-(f)中所定義地由其組成或包含其)的肽的變體，本發(fā)明的變體可通過(guò)一個(gè)或多個(gè)表7中所示的變化而不同于具有SEQIDNO:5的肽。關(guān)于具有SEQIDNO:6(也就是，如上所定義地，特別是如上述項(xiàng)(a)-(f)中所定義地由其組成或包含其)的肽的變體，本發(fā)明的變體可通過(guò)一個(gè)或多個(gè)表7中所示的變化而不同于具有SEQIDNO:6的肽。關(guān)于具有SEQIDNO:7(也就是，如上所定義地，特別是如上述項(xiàng)(a)-(f)中所定義地由其組成或包含其)的肽的變體，本發(fā)明的變體可通過(guò)一個(gè)或多個(gè)表9中所示的變化而不同于具有SEQIDNO:7的肽。應(yīng)該理解是通過(guò)依照表5-7和9的一個(gè)或多個(gè)序列變化，從本發(fā)明的肽得到的變體是優(yōu)選的。本發(fā)明的另一方面描述了含有與SEQIDNO:1、2、3、4、5、621或7的至少一個(gè)具有至少95%序列一致性的氨基酸序列的肽。在不同的實(shí)施方案中，所述肽包含如下區(qū)域、由該區(qū)域組成或本質(zhì)上由該區(qū)域組成，所述區(qū)域與SEQIDNO:1、2、3、4、5、6或7具有至少95%、至少97%或至少99%同一性，或者通過(guò)0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個(gè)氨基酸變化而不同。在一個(gè)實(shí)施方案中，術(shù)語(yǔ)"由…組成"如上述項(xiàng)(a)-(f)中所定義。優(yōu)選地，所述肽不含有全長(zhǎng)的天然的Spy0269、Spy0292、Spy0416A(氨基酸33-867)或Spy0872。SEQIDN0:1、2、3、4、5、6或7提供了用于產(chǎn)生保護(hù)性免疫響應(yīng)的核心序列。SEQIDNO:1提供了來(lái)自Spy0269的37-488位氨基酸的氨基酸核心。SEQIDNO:2提供了來(lái)自Spy0292的23-184位氨基酸的氨基酸核心。SEQIDNO:3提供了來(lái)自Spy0292的23-300位氨基酸的氨基酸核心，其為含SEQIDNO:2所提供的Spy0292的23-184的更短核心序列的更長(zhǎng)序列。令人驚訝地，如圖1所述，更短片段Spy0292-1(SEQIDNO:2)較之于更長(zhǎng)片段Spy0292-3(SEQIDNO:3)在小鼠模型中表現(xiàn)出甚至更強(qiáng)的保護(hù)作用。如上所述，更小的肽一般優(yōu)于更大的肽，因?yàn)楦〉碾目赏ㄟ^(guò)更經(jīng)濟(jì)的方式生產(chǎn)，它們降低誘導(dǎo)能引起與人體組織交叉反應(yīng)的抗體的可能性，并且它們有利于制備包含超過(guò)一種抗原的組合疫苗。SEQIDNO:4、5和6提供了具不同活性的不同的Spy0416A核心序列。SEQIDNO:5提供了Spy0416A的148-458位氨基酸的共同核心，并具有最低的活性。SEQIDNO:6提供了含有Spy0416A的72-558位氨基酸的核心序列，其具有比更短的核心更高的活性。SEQIDNO:4提供了含有Spy0416的34-677位氨基酸的氨基酸核心，并具有比148-458核心更強(qiáng)的活性。根據(jù)本文所提供的指導(dǎo)，考慮SEQIDNOs:1-7中所提供的核心序列來(lái)設(shè)計(jì)不同肽。這些指導(dǎo)包括含U)內(nèi)部變化；(2)在氨基端和/或羧基端的附加的氨基酸基團(tuán)；和/或(3)本文所述的附加修飾的結(jié)構(gòu)上相關(guān)的肽。對(duì)于結(jié)構(gòu)上相關(guān)的肽，每個(gè)氨基酸變化是獨(dú)立地添加、替換或刪22除。在另一個(gè)實(shí)施方案中，氨基末端是甲硫氨酸。甲硫氨酸的存在對(duì)重組表達(dá)有用。在某些情況下，甲硫氨酸最初作為翻譯的產(chǎn)物存在而隨后被剪切。上文，特別是在功能活性變體的描述中提供了附加的實(shí)例和實(shí)施方案，其中包括可適用于結(jié)構(gòu)上相關(guān)的肽(如功能變體)的更廣泛的實(shí)施方案和一些進(jìn)一步的描述。本發(fā)明的另一個(gè)主題中，上述肽包含或由至少2個(gè)，優(yōu)選地至少3個(gè)，更優(yōu)選地至少4個(gè)上述抗原組成。如果由相同全長(zhǎng)序列(例如Spy0292或Spy0416H汙生的2個(gè)或更多的肽組合成一個(gè)肽，這些序列優(yōu)選地不重疊。在一個(gè)實(shí)施方案中，術(shù)語(yǔ)"由…組成"可如上述項(xiàng)(a)-(f)中所定義。在本發(fā)明另一個(gè)實(shí)施方案中，如上定義的肽可通過(guò)一種或多種不同的化學(xué)技術(shù)進(jìn)行修飾以產(chǎn)生具有與被修飾的肽基本上相同活性的衍生物(如上述對(duì)片段和變體的定義)，并任選地具有其他所需屬性。例如，C末端或側(cè)鏈上的蛋白的羧酸基團(tuán)可以以藥物學(xué)可接受的陽(yáng)離子鹽形式提供，或酯化形成酯，或轉(zhuǎn)化成氨化物。氨基末端或側(cè)鏈的肽的氨基基團(tuán)可以是藥物學(xué)可接受的酸合成鹽的形式，如HC1、HBr、乙酸、苯曱酸、甲苯磺酸、順丁烯二酸、酒石酸和其他有機(jī)酸，或轉(zhuǎn)化為氨化物。使用熟知的技術(shù)可將肽側(cè)鏈的羥基轉(zhuǎn)化為烷氧基或酯。肽側(cè)鏈的苯或酚環(huán)可替換為或多個(gè)囟素原子，如氟、氯、溴或碘，或替換為烷基、烷氧基、羧酸及其酯，或此羧酸的氨化物。硫醇可通過(guò)多種熟知的保護(hù)基團(tuán)的任意一種進(jìn)行保護(hù)，如乙酰胺基團(tuán)。本發(fā)明的肽可與外表面蛋白或其他蛋白或其他蛋白的抗原組合。在這種組合中，抗原可以是融合蛋白的形式。本發(fā)明的抗原任選地與從其他微生物有機(jī)體衍生而來(lái)的選擇的肽或蛋白融合。例如，本發(fā)明的抗原或多肽可在其N末端或C末端上融合來(lái)自另一個(gè)病原體的多肽或順序地融合上多于一個(gè)多肽。用于此目的的肽包括現(xiàn)有技術(shù)所鑒定的多肽。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，將本發(fā)明的肽融合至表位標(biāo)簽，所述表位標(biāo)簽提供了抗標(biāo)簽底物任選的結(jié)合的表位。表位標(biāo)簽一般置于肽的氨基端或羧基端，但可以在生物學(xué)活性允許的情況下作為內(nèi)部插入或替換而并入?？墒褂玫孜?，如抗所述肽的抗體檢測(cè)這種肽的表位標(biāo)簽形式的存在。同時(shí)，提供表位標(biāo)簽使得肽可通過(guò)使用抗標(biāo)簽抗體或結(jié)合所述表位標(biāo)簽的其他類型的親和基質(zhì)的親和純化容易地純化所述肽。不同的標(biāo)簽多肽及其各自的抗體是本領(lǐng)域熟知的。實(shí)例包括多聚-組氨酸(poly-his)、多聚-組氨酸-甘氨酸(poly-his-gly)標(biāo)簽、HA標(biāo)簽多肽、c-myc標(biāo)簽、Strep標(biāo)簽和FLAG標(biāo)簽。融合也可包括融合或偶聯(lián)除氨基酸以外、但包括脂質(zhì)和碳水化合物的基序的本發(fā)明的肽或抗原。而且，本發(fā)明的抗原可與現(xiàn)有技術(shù)所苗試劑組合使用。此類蛋白可用于預(yù)防、治療和診斷由廣譜鏈球菌分離林引起的疾病。構(gòu)建這些融合蛋白用于本發(fā)明的方法和組合物中。這些融合蛋白或多亞基蛋白可重組生產(chǎn)或化學(xué)合成?？赏ㄟ^(guò)多種常規(guī)技術(shù)中的任意種制備本發(fā)明的肽?？苫瘜W(xué)合成所需的肽。備選途徑包括通過(guò)酶消化來(lái)產(chǎn)生已知肽的片段，例如，通過(guò)使用已知可在由特定氨基酸殘基限定的位點(diǎn)剪切蛋白的酶處理蛋白，或通過(guò)用合適的限制性酶消化DNA、表達(dá)消化后的DNA并分離所需片段。另一個(gè)合適的技術(shù)包括通過(guò)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)分離和擴(kuò)增編碼所需肽片段的DM。使用限定DNA片段所需重點(diǎn)的寡核苦酸作為PCR中的5，和3，引物。在具有已知序列的DNA以及蛋白上預(yù)定位點(diǎn)制造突變(如刪除、插入和替換)的技術(shù)是眾所周知的。本領(lǐng)域技術(shù)人員使用常規(guī)技術(shù)，如PCR，可容易地使用本文所提供的抗原和肽來(lái)鑒定和分離其他類似蛋白。根據(jù)本文所提供的信息，這些方法是常規(guī)的而不需要過(guò)多的實(shí)驗(yàn)。例如，使用寡核苷酸介導(dǎo)的位點(diǎn)定向誘變(Carteretal.，Nucl.AcidsRes.，13:4431(1985);Zolleretal.，Nucl.AcidsRes.10:6487(1987))、盒式i秀變(Wellsetal.，Gene,34:315(1985))、限制性選擇諸變(Wellsetal.，Philos.Trans.R.Soc.LondonSerA，317:415(1986))、PCR誘變或其他已知技術(shù)的24變化用于克隆DNA以產(chǎn)生本發(fā)明肽。本發(fā)明另一個(gè)主題涉及編碼本發(fā)明肽也就是上面定義的任意肽的核酸，或與其互補(bǔ)的核酸。本發(fā)明的核酸分子可以是RNA的形式，如mRNA或cRNA，或者DNA的形式，包括例如cDNA和基因組DNA，例如通過(guò)克隆獲得或化學(xué)合成技術(shù)或通過(guò)兩者組合產(chǎn)生。DNA可以是雙鏈或單鏈。單鏈DNA可以是編碼鏈，也就是已知的正義鏈，或?yàn)榉蔷幋a鏈，也稱為反義鏈。本文使用的核酸分子此外也指單鏈和雙鏈DNA，單鏈和雙鏈RNA混合的DNA，和單鏈和雙鏈區(qū)混合的RNA，包含DNA和RNA的雜交分子，所述雜交分子可為單鏈、或更常見(jiàn)地雙鏈、或單鏈和雙鏈區(qū)的混合。核酸分子可為化膿性鏈球菌中天然核酸的片段，特別是在化膿性鏈球菌血清型M1、M2、M3、M4、M5、M6、Mll、M12、M14、M19、M22、M24、M25、M28、M44、M49、M57、M59、M60、M61、M76、M83、M84、M87、M89或M118,尤其是化膿性鏈球菌SF370。優(yōu)選地，所述核酸具有SEQIDNOS:11-17的任意序列所定義的序列或所附核酸序列數(shù)據(jù)列表中所標(biāo)識(shí)的任意同源性變體的序列。不同的血清型的同源性序列的實(shí)例如下列出全長(zhǎng)核酸序列卿IDNO)本發(fā)明的核酸(SEQIDNO)同源核酸序列(SEQIDNOS)13311134to14314412145to15414413155to16416514166to17516515176to18516516186to19519617197to206所述核酸也包括基因編碼兼并性結(jié)果的序列。存在20個(gè)天然氨基酸，其中大多數(shù)由多于一個(gè)密碼子指定。所以，本發(fā)明包括產(chǎn)生如上定義的肽的所有核苷酸序列。25多個(gè)修飾的堿基。此類核酸也可包含例如在核糖-磷酸骨架上的修飾來(lái)增加該類分子在生理環(huán)境中的穩(wěn)定性和半衰期。因此，具有為穩(wěn)定性或其他原因而被修飾的骨架的DNA或RNA即為具有本文所預(yù)期特性的"核酸分子"。而且，包含稀有堿基或修飾過(guò)的堿基的DNA或RNA是本發(fā)明文中的核酸分子，僅列舉兩個(gè)實(shí)例稀有堿基的如次黃嘌呤，修飾過(guò)的堿基如tritylated堿基。應(yīng)該理解，為實(shí)現(xiàn)許多有用的目的而對(duì)DNA和RM進(jìn)行的大量不同的修飾是本領(lǐng)域技術(shù)人員所已知的。本文所用的術(shù)語(yǔ)核酸分子包括核酸分子的化學(xué)地、酶地或代謝地修飾的形式，也包括病毒和細(xì)胞(其中包括單細(xì)胞和多細(xì)胞)的特征性MA和RNA的化學(xué)形式，等等。例如，可進(jìn)行不影響所述核酸編碼的多肽的核苷酸替換，因而編碼如上所定義的抗原或其片段或功能活性變體的任意核酸分子都包含在本發(fā)明內(nèi)。而且，任意編碼本發(fā)明抗原或其片段或功能活性變體的核酸分子可使用標(biāo)準(zhǔn)的技術(shù)(如標(biāo)準(zhǔn)克隆技術(shù))功能地連接至任意所需的調(diào)節(jié)序列，無(wú)論是化膿性鏈球菌的調(diào)節(jié)序列或異源的調(diào)節(jié)序列、異源的引導(dǎo)序列、異源的標(biāo)記序列或異源編碼以產(chǎn)生融合蛋白的序列。本發(fā)明核酸最初在體外或在培養(yǎng)的細(xì)胞中形成，一般通過(guò)核酸內(nèi)切酶和/或核酸外切酶和/或聚合酶和/或連接酶和/或重組酶或其他為本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法來(lái)進(jìn)行核酸處理以產(chǎn)生所述的核酸。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述核酸位于載體中。栽體可另外包括允許其在宿主細(xì)胞內(nèi)復(fù)制的核酸序列，如復(fù)制啟動(dòng)子、一個(gè)或多個(gè)所需基因和/或選擇性標(biāo)記基因和本領(lǐng)域已知的其他遺傳元件，如指導(dǎo)所編碼的蛋白的轉(zhuǎn)錄、翻譯和/或分泌的調(diào)控元件。載體可用于轉(zhuǎn)導(dǎo)、轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染細(xì)胞，從而導(dǎo)致細(xì)胞表達(dá)除細(xì)胞天然的那些以外的插入的核酸和/或蛋白。質(zhì)?？蛇x性地包括輔助實(shí)現(xiàn)所述核酸進(jìn)入細(xì)胞的材料，如病毒顆粒、脂質(zhì)體、蛋白包衣等等。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)分子生物學(xué)技術(shù)用于蛋白表達(dá)的眾多類型的適合的表達(dá)載體是本領(lǐng)域已知的。這些載體選自常規(guī)的載體類型，包括昆蟲(chóng)，例如桿狀病毒表達(dá)，或酵母、真26菌、細(xì)菌或病毒表達(dá)系統(tǒng)。本領(lǐng)域已知的眾多類型中的其他適合的表達(dá)質(zhì)粒也可用于本目的。用于獲得此類表達(dá)載體的方法是眾所周知的(參見(jiàn)例i口Sambrooketal，MolecularCloning.ALaboratoryManual,2ndedition,ColdSpringHarborLaboratory,NewYork(1989))。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述栽體是病毒載體。病毒栽體包括，但不限于逆轉(zhuǎn)錄病毒載體和腺病毒載體。用于通過(guò)此方法轉(zhuǎn)染的合適的宿主細(xì)胞或細(xì)胞系包括細(xì)菌細(xì)胞。例如生物
技術(shù)領(lǐng)域：
熟知的用作宿主細(xì)胞的犬應(yīng)一f霧的不同菌林。在本方法中可使用枯草芽孢桿菌(及w6〃/")、假單胞菌屬(戶se"^范o/as)、鏈酶菌屬(57re/^o/z/ces)的不同菌林和其他桿菌等等。為本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的酵母細(xì)胞的許多菌林也可用作表達(dá)本發(fā)明肽的宿主細(xì)胞。其他真菌細(xì)胞或昆蟲(chóng)細(xì)胞如草地貪夜蛾(i^ot/o/^era尸/7^/'/7e^rs，(Sf9)細(xì)胞也可用作表達(dá)系統(tǒng)。備選地，可使用哺乳動(dòng)物細(xì)胞如人293細(xì)胞、中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(CH0)、猴C0S-1細(xì)胞系或源自Swiss、BALB/c或NIH小鼠的鼠3T3細(xì)胞。還有其他合適的宿主細(xì)胞，以及轉(zhuǎn)染、培養(yǎng)、擴(kuò)增、篩選、生產(chǎn)和純化的方法是本領(lǐng)域已知的。可通過(guò)在合適的宿主細(xì)胞中表達(dá)本發(fā)明的核酸來(lái)生產(chǎn)本發(fā)明的肽?？赏ㄟ^(guò)常規(guī)方法如電穿孔將至少一種表達(dá)載體轉(zhuǎn)染到宿主細(xì)胞，所述表達(dá)載體包含在轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)序列控制下的本發(fā)明的核酸。隨后將轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞培養(yǎng)于許可所述蛋白表達(dá)的條件下。可通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的適合的方式從所迷細(xì)胞中(或者如果是細(xì)胞外表達(dá)則從培養(yǎng)基中)回收、分離和任選地純化表達(dá)的蛋白。例如，在細(xì)胞裂解之后將所述蛋白以溶解的形式分離，或使用已知技術(shù)如在鹽酸胍中提取。如需要，本發(fā)明的肽或片段可作為融合蛋白產(chǎn)生。此融合蛋白如上所迷。備選地，例如，希望產(chǎn)生融合蛋白以增強(qiáng)該蛋白在所選宿主細(xì)胞中的表達(dá)或促進(jìn)純化?？墒褂枚喾N常規(guī)方法的任意種來(lái)進(jìn)一步純化包含本發(fā)明肽和抗原的分子，所述方法包括但不限于液相層析如普通或反向使用HPLC、FPLC等等；親和層析(如使用無(wú)機(jī)配體或27單克隆抗體)；分子篩層析；固相金屬螯合層析；凝膠電泳等等。本領(lǐng)域技術(shù)人員可不脫離本發(fā)明的范圍來(lái)選擇最適合的分離和純化技術(shù)。此類純化提供了基本上不含微生物的其他蛋白的或非蛋白的物質(zhì)的抗原。本發(fā)明另一個(gè)主題是藥物組合物，特別是疫苗，其包含(i)根據(jù)發(fā)明的至少一種肽，和/或(ii)至少一種肽，其包括或由任意SEQIDNO:8、SEQIDNO:9或SEQIDNO:10中的序列組成或其功能活性變體，和(iii)任選地一種藥物學(xué)可接受的栽體或賦形劑。(ii)中的肽的變體可如(i)中的肽來(lái)定義和獲得(參見(jiàn)上文對(duì)本發(fā)明肽的描述)。SEQIDNO:8或10優(yōu)選的變化在表8和9中分別列出。(i)和(U)中的肽稱為本發(fā)明的藥物肽。至于(ii)中的肽，首次顯示了這些蛋白能夠提供針對(duì)致死性化膿性鏈球菌攻擊的保護(hù)(參見(jiàn)實(shí)施例1)，尤其是在生理上高度相關(guān)的鼻內(nèi)攻擊模型中。特別是，蛋白Spy0895(SEQIDNO:9)尤其具有作為疫苗候選的希望，因?yàn)槠湓诒?所列的全部三個(gè)模型中提供了針對(duì)A族鏈球菌感染的保護(hù)。本發(fā)明藥物肽可用于免疫或治療具有化膿性鏈球菌感染引起的疾病的人和/或動(dòng)物的方法中。因此，所述藥物肽可用在藥物組合物中。本發(fā)明的藥物組合物可進(jìn)一步包含藥物學(xué)可接受載體和/或賦形劑。用于本發(fā)明的藥物學(xué)可接受栽體和/或賦形劑為常規(guī)的并包括緩沖液、穩(wěn)定齊寸、稀釋劑、防腐齊寸和增'溶劑。Remington'sPharmaceuticalSciences,byE.W.Martin,MackPublishingCo.，Easton，PA，15thEdition(1975)，描述了適于本文所公開(kāi)的(多)肽的藥物遞送的組合物和制劑。一般來(lái)說(shuō)，栽體或賦形劑的屬性依賴于所使用的特定的施用模式。例如，非腸道制劑通常包括可注射的液體，其包括藥物學(xué)和生理學(xué)可接受的液體，如水、生理鹽水、平衡鹽溶液、水溶葡聚糖、甘油等作為介質(zhì)。對(duì)于固體組合物(例如粉末、丸劑、片劑或膠嚢形式)，常規(guī)的無(wú)毒固體載體可包括例如，藥物級(jí)的甘露醇、乳糖、淀粉或硬脂酸酶。除了生物中性載體，施用的藥物組合物包含少量無(wú)毒的輔助物質(zhì)，如潤(rùn)濕或乳化劑、防腐劑及pH緩沖劑等等，例如醋酸鈉或山梨醇單月桂酸酯。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述藥物組合物進(jìn)一步包括免疫刺激物，如佐劑。佐劑可根據(jù)施用方法來(lái)選取并可包括礦物油基的佐劑，如弗氏完全或不完全佐劑、Montanide不完全Seppic佐劑如ISA、水包油乳化佐劑如Ribi佐劑體統(tǒng)、含胞壁酰二肽的syntax佐劑制劑、IC31TM(Intercell;包含肽基序KLK[WO02/32451]和寡核苷酸[WO01/93905]的合成佐劑)、或鋁鹽佐劑。優(yōu)選地，佐劑為礦物油基的佐劑，最優(yōu)選ISA206(SEPPIC，Paris,France)。在其他實(shí)施方案中，免疫刺激物選自聚陽(yáng)離子聚合物，特別氏聚陽(yáng)離子肽，如聚精氨酸；免疫刺激脫氧核苷酸(ODN)，特別是01igo(dIdC);含至少兩個(gè)LysLeuLys基序的肽，特別是KLKLLLLLKLK(SEQIDNO:55);神經(jīng)活性化合物，特別是人生長(zhǎng)激素；明礬；佐劑或其組合。在其他實(shí)施方案中，所述組合物是聚陽(yáng)離子聚合物和免疫刺激性脫氧核苷酸，或是含至少兩個(gè)LysLeuLys基序的肽和免疫刺激性脫氧核苷酸。還有另一個(gè)實(shí)施方案中，聚陽(yáng)離子聚合物為聚陽(yáng)離子肽。用于本發(fā)明的術(shù)語(yǔ)"01igo(dIdC)"意為以磷酸二酯為骨架的含有13個(gè)脫氧(次黃噤呤-胞嘧啶)基序的單鏈DNA分子，也可用術(shù)語(yǔ)[oligo-d(IC)J限定。確切的序列為5，-dIdCdIdCdIdCdIdCdIdCdIdCdIdCdIdCdIdCdIdCdIdCdIdCdIdC-3'。01igo(dIdC)13可通過(guò)術(shù)語(yǔ)(oligo-dIC26);oligo-dIC26—mer;oligo-deoxyIC，26-mer;oroligo-dIC，26-mer來(lái)限定，如在W001/93903和W001/93905中所規(guī)定的。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述免疫刺激物是至少一種免疫刺激性核酸。免疫刺激性核酸為例如中性的或人工的含有CpG的核酸、在確定的堿基上下文中含有非甲基化胞嘧啶-鳥(niǎo)嘌呤二核苷酸(CpG)的來(lái)自非脊推動(dòng)物或以短寡核苷酸(ODN)形式的短片段核酸(如在WO96/02555所描述)。備選地，如在WO01/93903中所描述的基于次黃嘌呤和胞嘧啶的核酸，或含有脫氧次黃嘌呤和/或脫氧尿嘧啶殘基的脫氧核酸(在W001/93905和W002/095027所述)可優(yōu)選地用作本發(fā)明的免疫刺激性核酸。優(yōu)選地，不同免疫刺激性核酸的混合物可用于本發(fā)明中。另外，上述聚陽(yáng)離子化合物可與任意如上所述免疫刺激性核酸組合。優(yōu)選地，這些組合物根據(jù)W001/93905、WO02/32451、WO01/54720、01/93903、W002/13857、W002/095027和WO03/047602所述。另外或備選地，此藥物或疫苗組合物包括神經(jīng)活性化合物。優(yōu)選地，神經(jīng)活性化合物是人生長(zhǎng)因子，例如在WO01/24822中所述。另外優(yōu)選地，所述神經(jīng)活性化合物可與如上定義的任意聚陽(yáng)離子化合物和/或免疫刺激性核酸組合。所述組合物可用于例如受試者的免疫或治療。所述藥物組合物包含至少一種本發(fā)明的藥物肽；然而也可包含混合物(也就是，簡(jiǎn)單混合物)，其含有任選地與其他病原體的不同的抗原性蛋白或肽混合的本發(fā)明的不同藥物肽(包括片段和其他變體)。這些肽、多肽、蛋白或其片段或變體的這種混合物可用于例如產(chǎn)生所需的針對(duì)廣i普鏈球菌分離林的抗體。本發(fā)明的藥物肽也以藥物學(xué)可接受的鹽的形式使用。能與本發(fā)明肽形成鹽的適合的酸或堿為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知，并包括無(wú)機(jī)的和有機(jī)的酸及無(wú)機(jī)的和有機(jī)的堿。本發(fā)明另一個(gè)的主題是一種含有選自如下的核酸的藥物組合物(i)本發(fā)明的核酸和/或與其互補(bǔ)的核酸，和/或(ii)編碼所述肽的核酸，所述肽包括或由任意SEQIDNO:8、SEQIDNO:9或SEQIDNO:10的序列構(gòu)成，尤其是任意SEQIDNO:18、SEQIDNO:19或SEQIDNO:20的DNA序列，或其功能活性變體或與其互補(bǔ)的核酸或?qū)?yīng)的RM序列，以及(iU)任選地藥物學(xué)可接受的載體或賦形劑。(ii)中的核酸的變體可如(i)中的核酸來(lái)定義并獲得(參見(jiàn)本發(fā)明核酸的如上描述)。(i)和(ii)中的核酸稱為本發(fā)明藥物核酸。30所述藥物核酸序列，單獨(dú)地或與編碼抗原或抗體或針對(duì)其他病原微生物的其他核酸序列組合，進(jìn)一步用作藥物組合物的組分。所述組合物可用于免疫或治療對(duì)化膿性鏈球菌感染易感或具有由化膿性鏈球菌感染引起的疾病的人和/或動(dòng)物，尤其是化膿性鏈球菌血清型Ml、M2、M3、M4、M5、M6、Mll、M12、M14、M19、M22、M24、M25、M28、M44、M49、M57、M59、M60、M61、M76、M83、M84、M87、M89或M118，特別是化膿性鏈球菌SF370。藥物學(xué)可接受的栽體或賦形的定義如上。另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物核酸，單獨(dú)地或與編碼來(lái)自其他病原微生物的抗原或抗體核酸序列組合，進(jìn)一步使用在針對(duì)積極誘導(dǎo)受試者針對(duì)病原體的保護(hù)性免疫應(yīng)答的組合物中。本發(fā)明的這些組分可用于在人和/或動(dòng)物體內(nèi)誘導(dǎo)針對(duì)化膿性鏈球菌感染的保護(hù)性免疫應(yīng)答的方法中，尤其是化膿性鏈球菌血清型Ml、M2、M3、M4、M5、M6、Mll、M12、M14、M19、M22、M24、M25、M28、M44、M49、M57、M59、M60、M61、M76、M83、M84、M87、M89或M118，特別是化膿性鏈球菌SF370。對(duì)于用于制備治療組合物或疫苗組合物，本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的核酸遞送組合物和方法是有用的。本發(fā)明的藥物核酸可作為DNA序列用在本發(fā)明的方法中或本文所述的組合物中，即可作為棵露DNA施用，也可與藥物學(xué)可接受載體相結(jié)合，并提供抗原、肽或多肽的體內(nèi)表達(dá)。所謂的"棵露DM"可用于在患者中體內(nèi)表達(dá)本發(fā)明的抗原、肽或多肽(參見(jiàn)例如，J.Cohen,Science,259:1691-1692，其描述了"棵露DNA"的相似用途)。例如，與調(diào)節(jié)序列相連的"棵露DNA"可治療性地施用或作為疫苗組合物的一部分例如通過(guò)注射施用。備選地，核酸，特別是編碼本發(fā)明抗原或肽的根據(jù)本發(fā)明的藥物核酸或與其互補(bǔ)的核酸可用于藥物組合物中，例如以在體內(nèi)表達(dá)本發(fā)明的抗原或(藥物)肽來(lái)誘導(dǎo)抗體。本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案涉及一種藥物組合物，其中根據(jù)本發(fā)明的藥物核酸包含在載體和/或細(xì)胞中。在本發(fā)明文中適合的載體和細(xì)胞描述如上。載體尤其用作DNA疫苗。本領(lǐng)域技術(shù)人員可容易地選擇31用于遞送的合適載體。用于體內(nèi)基因遞送的示例性載體可從多種學(xué)術(shù)和商業(yè)資源容易地獲得，并包括，例如腺病毒相關(guān)病毒(InternationalpatentapplicationNo.PCT/US91/03440)、腺病毒載體(M.Kayetal，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,91:2353(1994);S.Ishibashietal，J.Clin.Invest.,92:883(1993))或其他病毒載體，例如不同的痘病毒、牛痘等等。重組病毒載體，如反轉(zhuǎn)錄病毒或腺病毒，對(duì)于整合外源DM進(jìn)入細(xì)胞染色體是優(yōu)選的。本發(fā)明另一個(gè)主題涉及特異性結(jié)合本發(fā)明的抗原的抗體或其功能活性片段。本發(fā)明包括例如，單克隆和多克隆抗體、嵌合抗體、單鏈抗體和人源化的抗體，以及Fab片段，或Fab表達(dá)庫(kù)的產(chǎn)物。雖然化膿性鏈球菌的感染主要是兒童疾病并導(dǎo)致不嚴(yán)重的疾病，如細(xì)菌性咽炎和膿皰病，GAS也造成鏈球菌中毒性休克綜合征相關(guān)的壞死性筋膜炎(Cone，L.，etal.(1987).NewEnglJMed317:146-9;Stevens,D.(1992).ClinInfectDis14:2-11)以及幾種鏈球菌繼發(fā)后遺癥如急性風(fēng)濕熱、急性腎小球腎炎和反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎。提供靶向化膿性鏈球菌的抗原性蛋白并具有協(xié)助治療感染或同時(shí)消除病原體和疾病的潛力的單克隆或多克隆抗體十分有益。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述抗體是單克隆、多克隆、嵌合或人源化的抗體或其功能活性片段。在本發(fā)明另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述功能活性片段包括Fab片段?？赏ㄟ^(guò)將抗原、片段或其變體直接注射進(jìn)動(dòng)物或通過(guò)對(duì)動(dòng)物，優(yōu)選地非人類的動(dòng)物，施用抗原、片段或其變體獲得針對(duì)本發(fā)明的抗原、片段或其變體產(chǎn)生的抗體。所獲得的抗體于是結(jié)合所述抗原、片段或變體。這些抗體可進(jìn)而用于從表達(dá)反應(yīng)性抗原、片段或其變體的組織中分離反應(yīng)性抗原、片段或其變體。對(duì)于制備單克隆抗體，可使用任意本領(lǐng)域已知的技術(shù)，其提供通過(guò)連續(xù)的細(xì)胞系培養(yǎng)例如雜交瘤細(xì)胞系而產(chǎn)生的抗體。用于生產(chǎn)單鏈抗體的所述技術(shù)(U.S.PatentNo.4，946，778)適應(yīng)于生產(chǎn)針對(duì)根據(jù)本發(fā)明的抗原、片段或其變體的單鏈抗體。另外，32可使用轉(zhuǎn)基因小鼠或其他生物體(如其他哺乳動(dòng)物)用于表達(dá)根據(jù)本發(fā)明的針對(duì)抗原、片段或其變體的人源化的抗體。此外，本發(fā)明的另一個(gè)主題涉及產(chǎn)生本發(fā)明抗體的雜交瘤細(xì)胞系。通過(guò)熟知的常規(guī)技術(shù)產(chǎn)生表達(dá)所需單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞系。通過(guò)將正常激活的、生產(chǎn)抗體的B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合產(chǎn)生所述雜交瘤細(xì)胞。在本發(fā)明中，所述雜交瘤細(xì)胞能夠產(chǎn)生特異性結(jié)合本發(fā)明抗原的抗體。類似地，可通過(guò)將已知的重組技術(shù)應(yīng)用于針對(duì)這些抗體開(kāi)發(fā)的單克隆或多克隆抗體來(lái)產(chǎn)生所需的高滴度抗體(參見(jiàn)例如，PCTPatentApplicationNo.PCT/GB85/00392;BritishPatentApplicationPublicationNo.GB2188638A;Amitetal.，Science,233:747-753(1986);Queenetal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,86:10029-10033(1989);PCTPatentApplicationNo.WO90/07861;Riechmannetal.，Nature,332:323-327(1988);Huseetal.，Science,246:1275-1281(1988))。本發(fā)明也提供產(chǎn)生根據(jù)本發(fā)明的抗體的方法，其特征在于下列步驟(a)將有效量的根據(jù)本發(fā)明的肽施用于動(dòng)物；和(b)從所述動(dòng)物中分離由響應(yīng)步驟(a)的施用的動(dòng)物產(chǎn)生的抗體。本發(fā)明的另一個(gè)主題涉及產(chǎn)生根據(jù)本發(fā)明的抗體的方法，其特征在于下列步驟(a)使B細(xì)胞接觸有效量的根據(jù)本發(fā)明的肽；(b)將步驟(a)中的B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合以獲得雜交瘤細(xì)胞；和(c)分離由所述培養(yǎng)的雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生的抗體。更具體地，所述抗體的產(chǎn)生是通過(guò)向動(dòng)物施用本發(fā)明的肽而在非人類動(dòng)物體內(nèi)激發(fā)免疫應(yīng)答，從所述動(dòng)物中移取含抗體的體液，并通過(guò)對(duì)所述含抗體的體液實(shí)施進(jìn)一步純化步驟而產(chǎn)生抗體。備選地，抗體的產(chǎn)生是通過(guò)向所述動(dòng)物施用本發(fā)明所限定的抗原、片段或其變體33而在非人類動(dòng)物體內(nèi)激發(fā)免疫應(yīng)答，從所述動(dòng)物中移取脾臟或脾細(xì)胞和/或產(chǎn)生所述脾臟或脾細(xì)胞的雜交瘤細(xì)胞，篩選和克隆特異性針對(duì)所述抗體、片段或其變體的雜交瘤細(xì)胞，并通過(guò)培養(yǎng)所述克隆的雜交瘤細(xì)胞來(lái)產(chǎn)生所述抗體。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，對(duì)根據(jù)本發(fā)明方法產(chǎn)生的抗體進(jìn)行了另外的純化。純化方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。所述抗原可用在用于預(yù)防或治療感染的方法中。因此，本發(fā)明另一個(gè)主題還涉及藥物組合物，特別是疫苗，其包含本發(fā)明的抗體。所述藥物組合物可包含如上詳述的其他組分。所述組合物可進(jìn)一步包含增強(qiáng)其刺激T細(xì)胞的能力的物質(zhì)。這些包括如WO01/78767所述的T輔助細(xì)胞表位、脂質(zhì)或脂質(zhì)體或優(yōu)選的修飾。增強(qiáng)表位的T細(xì)胞刺激能力的另一途徑是其制劑含有例如象白介素-2，-7，-12，-18，I和II類干擾素(IFN),特別是IFN-y，GM-CSF，TNF-ot，flt3-配體及其他的細(xì)胞因子或趨化因子的免疫刺激物質(zhì)。本發(fā)明進(jìn)一步的主題涉及包含本發(fā)明藥物肽、或本發(fā)明藥物核酸、或本發(fā)明抗體或其功能片段的藥物組合物，用來(lái)免疫受試者抵抗感染或治療具有感染的受試者，其中所述感染優(yōu)選地是化膿性鏈球菌感染。在本發(fā)明的另一個(gè)方面，本發(fā)明藥物肽、或本發(fā)明藥物核酸、或本發(fā)明抗體或其功能片段用在制備用于免疫受試者抵抗感染或治療具有感染的受試者的藥物，其中所述感染優(yōu)選地是化膿性鏈球菌感染，更優(yōu)選化膿性鏈球菌血清型Ml、M2、M3、M4、M5、M6、Mll、M12、M14、M19、M22、M24、M25、M28、M44、M49、M57、M59、M60、M61、M76、M83、M84、M87、M89或M118，特別是化膿性鏈球菌SF370的感染。備選地，本發(fā)明的藥物肽或藥物核酸或者本發(fā)明抗體或其功能片段用在免疫或治療有此需要的受試者的方法中，其中將有效量的本發(fā)明的藥物肽或藥物核酸或者本發(fā)明抗體或其功能片段施用于受試者。對(duì)受試者進(jìn)行免疫以預(yù)防感染，尤其是化膿性鏈球菌感染，或?qū)κ茉囌哌M(jìn)行治療來(lái)改善或治愈感染，尤其是化膿性鏈球菌感染。施用的有效量的確定是本領(lǐng)域技術(shù)人員了解的。示例性量在下文提及。本發(fā)明的藥物肽或藥物核酸一般用來(lái)誘導(dǎo)受試者的免疫應(yīng)答。用于免疫的疫苗可施用至對(duì)化膿性鏈球菌的感染易感的受試者，優(yōu)選地哺乳動(dòng)物，及還更優(yōu)選地人類。施用的可能模式包括經(jīng)口、鼻內(nèi)、肌肉內(nèi)、淋巴結(jié)內(nèi)、皮內(nèi)、腹腔內(nèi)、皮下、及其組合，但最優(yōu)選地為肌肉內(nèi)注射。肌肉內(nèi)施用的劑量體積優(yōu)選地是高至約5mL,例如0.3mL-3mL,lmL-3mL,約0.5-lmL，或約2mL。一次劑量中含抗原的蛋白質(zhì)的量應(yīng)足以賦予有效的免疫，以降低例如化膿性鏈球菌感染造成的發(fā)展出臨床癥狀的風(fēng)險(xiǎn)。在不同的實(shí)施方案中，蛋白的單位劑量應(yīng)為高至5pg蛋白/kg體重，約0.2-3iag，約0.3-1.5^tg，約0.4-0.8pg，或約O.6pg。在備選的實(shí)施方案中，蛋白的單位劑量可為高至約6pg蛋白/kg體重，約0.05-5pg，約0.1-4pg。在不同的實(shí)施方案中，所述劑量施用1-3次，例如間隔為l-3周。每一劑量中蛋白的典型量為約lfig-約lmg，更優(yōu)選地約5pg-約500jiig，還更優(yōu)選地約lOjng-約250j^g，而最優(yōu)選地約25^ig-約lOOjng。本發(fā)明的另一個(gè)方法中，本發(fā)明的抗體或其功能片段用在制備用于治療感染的藥物，優(yōu)選地化膿性鏈球菌感染，更優(yōu)選地為化膿性鏈球菌血清型Ml、M2、M3、M4、M5、M6、Mll、M12、M14、M19、M"、M24、M25、M28、M44、M49、M57、M59、M60、M61、M76、M83、M84、M87、M89或M118，特別是化膿性鏈球菌SF37Q的感染。備選地，本發(fā)明抗體用在治療由此需要的受試者的方法中，其中將有效量的本發(fā)明抗體施用于受試者。對(duì)受試者進(jìn)行治療以改善或治愈感染，特別是化膿性鏈球菌感染。施用的有效量的確定為本領(lǐng)域技術(shù)人員了解的。所述治療包括將有效量的本發(fā)明的抗體施用于受試者，優(yōu)選地是哺乳動(dòng)物，更優(yōu)選地是人。因此，針對(duì)本發(fā)明抗原、片段或其變體的抗體可用于抑制和/或治療感染，尤其是細(xì)菌感染和特別是由化膿性鏈球菌引起的感染，特別是化膿性鏈球菌血清型Ml、M2、M3、M4、M5、M6、Mll、M12、M14、M19、M22、M24、M25、M28、M44、M49、M57、M59、M60、M61、M76、M83、M84、M87、M89或M118，特別是化膿性鏈球菌SF370。本領(lǐng)域技術(shù)人員可確定這些量。優(yōu)選地，非腸道施用35這種組合物，優(yōu)選肌肉內(nèi)或皮下。然而，其也可經(jīng)制備以通過(guò)任何其他合適的途徑施用，包括經(jīng)口或局部施用。選擇遞送途徑和這種治療組合物的劑量是為本領(lǐng)域技術(shù)人員所了解的。在本發(fā)明中的治療是指治療性處理和防病或預(yù)防性方法，其中目標(biāo)為預(yù)防或減緩(減輕)靶向的病理病況或紊亂。需要治療的包括已紊亂的。本發(fā)明的另一個(gè)主題涉及診斷化膿性鏈球菌感染的方法，其包括步驟(a)將從受試者獲得的樣品與根據(jù)本發(fā)明的肽相接觸；和(b)檢測(cè)所述樣品中抗化膿性鏈球菌的抗體的存在。本發(fā)明的肽可用于檢測(cè)化膿性鏈球菌，特別是化膿性鏈球菌血清型M1、M2、M3、M4、M5、M6、Mll、M12、M14、M19、M22、M24、M25、M28、M44、M49、M57、M59、M60、M61、M76、M83、M84、M87、M89或M118,特別是化膿性鏈球菌SF370。優(yōu)選地，這種檢測(cè)是用于診斷，更優(yōu)選地用于診斷疾病，最優(yōu)選地用于診斷化膿性鏈球菌感染。所述肽或多肽可用于檢測(cè)化膿性鏈球菌特異性的抗體或其片段的存在，例如在從受試者獲得的樣品中。所述樣品可以是例如血液樣品?；蛘呤褂帽景l(fā)明的抗體檢測(cè)化膿性鏈球菌特異性抗體的存在。由此，診斷化膿性鏈球菌感染的備選方法包括步驟(a)將從受試者獲得的樣品與根據(jù)本發(fā)明的抗體相接觸；和(b)檢測(cè)所述樣品中化膿性鏈球菌的存在。本發(fā)明也涉及診斷分析，如用于檢測(cè)細(xì)胞和組織或體液中本發(fā)明的肽或抗體的水平的定量和診斷分析，包括確定正常和異常水平?？捎脕?lái)確定從宿主而來(lái)的樣品中的肽或抗體的水平的分析技術(shù)是為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的。此類分析方法包括放射性免疫分析、竟?fàn)幗Y(jié)合分析、WesternBlot分析和ELISA分析。其中，ELISAs經(jīng)常是優(yōu)選的。ELISA分析首先.包括制備特異性針對(duì)所述肽尤其是所述抗原的抗體，優(yōu)選地是單克隆抗體。另外，一般制備結(jié)合所述單克隆抗體的報(bào)告抗36體。將報(bào)告抗體連接至可檢測(cè)試劑如放射性的、熒光的或酶活的試劑，如辣根過(guò)氧化物酶。本發(fā)明的肽或抗體可用于陣列或與之相關(guān)聯(lián)。更優(yōu)選地，將至少一種本發(fā)明的肽或抗體固定于支持物上。所述支持物通常包含多種不同的抗原或其片段，由此通過(guò)使用一種或幾種本發(fā)明的肽或抗體產(chǎn)生多樣性。這種陣列以及任何陣列的特征屬性一般是在所述支持物或其表面上獨(dú)特的或預(yù)定的區(qū)域或位置上固定獨(dú)特的多肽。因?yàn)榇巳我獾幕钚裕陉嚵械莫?dú)特的位置或區(qū)域可與具體的多肽相關(guān)聯(lián)。固定于支持物上的本發(fā)明的不同的肽或抗體的數(shù)量范圍在少至10-幾千個(gè)本發(fā)明的不同的肽或抗體。制造這樣的陣列是本領(lǐng)域技術(shù)人員所知的，并且例如在USpatent5,744,309中有所描述。所述陣列優(yōu)選地包括具有至少一個(gè)第一表面的，平面的、多孔的或非多孔的固相支持物。優(yōu)選的支持物材料為玻璃或纖維素等等。本發(fā)明中也包括將此陣列用于本文所述的診斷性應(yīng)用中。除了本發(fā)明的肽或抗體，根據(jù)本發(fā)明的核酸分子也可用于如上所述的陣列的制備中。本發(fā)明的另一個(gè)方面涉及鑒定能結(jié)合根據(jù)本發(fā)明的肽的配體的方法，其包括(a)提供包含所述肽的測(cè)試系統(tǒng)，(b)將所述測(cè)試系統(tǒng)與測(cè)試化合物相接，和(c)檢測(cè)響應(yīng)所述測(cè)試化合物與所述肽結(jié)合到而產(chǎn)生的信號(hào)。更優(yōu)選地，通過(guò)在允許候選配體與所述肽結(jié)合的條件下，將分離的或固定化的本發(fā)明的肽與所述候選配體相接觸進(jìn)行所述方法，其中所述測(cè)試系統(tǒng)包括能夠提供響應(yīng)候選配體與所述肽結(jié)合而產(chǎn)生的檢測(cè)信號(hào)的組分；和檢測(cè)響應(yīng)配體與所述肽結(jié)合而產(chǎn)生的信號(hào)的存在或不存在。所述配體可以是激動(dòng)劑或拮抗劑。檢測(cè)配體結(jié)合的測(cè)試系統(tǒng)是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，并包括例如利用標(biāo)記配體的結(jié)合分析，所述標(biāo)記配體如放射性配體、焚光標(biāo)記配體或酶標(biāo)記配體。所述測(cè)試化合物是任何檢測(cè)化合，即可是天然的也可是化學(xué)合成的。天然測(cè)試化合物特別包括抗體，尤其是表現(xiàn)出與本發(fā)明抗體相似性的抗體。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，以化學(xué)化合物庫(kù)的形式提供所述測(cè)試化合物?；瘜W(xué)化合物庫(kù)包括大量化學(xué)化合物，并由包括化學(xué)合成分子和天然產(chǎn)物的任何復(fù)合來(lái)源集合而成，或通過(guò)組合的化學(xué)技術(shù)產(chǎn)生。它們特別適用于高通量篩選。它們可由具有特別結(jié)構(gòu)的化學(xué)化合物或特別的生物如植物的化合物組成。鑒定配體的方法也包括如下步驟(a)提供根據(jù)本發(fā)明的肽，(b)提供所述肽的相互作用伴侶，特別是根據(jù)本發(fā)明的抗體，(c)允許所述肽與所述相互作用伴侶相互作用，從而形成相互作用復(fù)合物，(d)提供測(cè)試化合物，相互作用，和(f)確定所述測(cè)試化合物是否抑制或減少所述肽與所述相互作用伴侶的相互作用反應(yīng)性。鑒定的配體可用于例如抑制由鏈球菌感染引起的疾病，特別是化膿性鏈球菌，并因此可配制到藥物組合物中。在最后一個(gè)方面中，根據(jù)本發(fā)明的肽用于分離和/或純化和/或鑒定所述肽的配體，其中可如上詳述或如本領(lǐng)域技術(shù)人員所知地進(jìn)行分離和/或純化和/或鑒定所述配體。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，使用親和裝置。所述親和裝置包括至少一種支持材料和附著在所述支持材料上的任何根據(jù)本發(fā)明的肽。因?yàn)楦鶕?jù)本發(fā)明的肽對(duì)于其靶細(xì)胞、或耙分子、或其相互作用伴侶的特異性，只要到達(dá)結(jié)合條件所述肽可以從應(yīng)用到所述支持材料上的任何類型的樣品中選擇性地移取其相互作用伴侶。所述樣品可以是生物的或醫(yī)療的樣品，包括但不限于，發(fā)酵液、細(xì)胞碎片、細(xì)胞制備物、組織制備物、器官制備物、血液、尿液、淋巴液、液體等等。所述肽以共價(jià)或非共價(jià)的方式附著到基質(zhì)上。38適合的支持材料是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，并可選自纖維素、硅、玻璃、鋁、順磁性珠子、淀粉和葡聚糖。通過(guò)下列圖、實(shí)例和序列數(shù)據(jù)進(jìn)一步示例說(shuō)明本發(fā)明，從中可獲得進(jìn)一步的屬性、實(shí)施方案和優(yōu)點(diǎn)。應(yīng)當(dāng)理解所示的本文的實(shí)施例作為本公開(kāi)的例證而非本公開(kāi)的局限。圖1顯示在一種小鼠致命性模型中，通過(guò)用所選的化膿性鏈球菌抗原和亞構(gòu)建體進(jìn)行主動(dòng)免疫實(shí)現(xiàn)了保護(hù)。圖2顯示在一種小鼠致命性模型中，通過(guò)用所選的化膿性鏈球菌抗原和亞構(gòu)建體進(jìn)行主動(dòng)免疫實(shí)現(xiàn)了保護(hù)。圖3顯示在一種小鼠致命性模型中，通過(guò)用所選的化膿性鏈球菌抗原和亞構(gòu)建體進(jìn)行主動(dòng)免疫實(shí)現(xiàn)了保護(hù)。圖4顯示在一種小鼠致命性模型中，通過(guò)用所選的化膿性鏈球菌抗原和亞構(gòu)建體進(jìn)行主動(dòng)免疫實(shí)現(xiàn)了保護(hù)。表1顯示在小鼠感染模型中，就保護(hù)進(jìn)行評(píng)估的化膿性鏈球菌的重組蛋白及其片段。表2顯示用于克隆編碼化膿性鏈球菌的抗原性蛋白及其片段的基因的寡核苷酸。表3顯示用于基因保守性研究的化膿性鏈球菌菌林。表4顯示用于化膿性鏈球菌基因的PCR和測(cè)序的寡核苷酸。表5顯示來(lái)自化膿性鏈球菌菌林的Spy0269的可變的氨基酸位點(diǎn)。表6顯示來(lái)自化膿性鏈球菌菌林的Spy0292的可變的氨基酸位點(diǎn)。表7顯示來(lái)自化膿性鏈球菌菌林的Spy0416的可變的氨基酸位點(diǎn)。表8顯示來(lái)自化膿性鏈球菌菌林的Spy0488的可變的氨基酸位點(diǎn)。表9顯示來(lái)自化膿性鏈球菌菌林的Spy0872的可變的氨基酸位點(diǎn)。39表10顯示來(lái)自化膿性鏈球菌菌抹的Spy08"的可變的氨基酸位點(diǎn)。表11顯示來(lái)自化膿性鏈球菌菌林的Spyl536的可變的氨基酸位點(diǎn)。表12顯示來(lái)自化膿性鏈球菌菌林的Spyl666的可變的氨基酸位點(diǎn)。附圖圖1:在一種小鼠致命性模型中，通過(guò)用所選的化膿性鏈球菌抗原和亞構(gòu)建體進(jìn)行主動(dòng)免疫實(shí)現(xiàn)的保護(hù)。使用從emm類型1的化膿性鏈球菌菌林(SF370)克隆得到的重組抗原皮下免疫CD-1小鼠(每組IO只小鼠)，并用MA-A20(emm類型23)菌抹進(jìn)行攻擊。在攻擊后的14天內(nèi)監(jiān)控存活率。小鼠皮下免疫50jag重組蛋白輔以佐劑CFA/IFA。(A)Spy0292及其亞構(gòu)建體Spy0292-l和Spy0292-3;Spy0488;(B)Spy0872及其亞構(gòu)建體Spy0872-2。用108cfu的化膿性鏈球菌MA-A20鼻內(nèi)攻擊麻醉的小鼠。佐劑對(duì)照小鼠作為陰性對(duì)照，而Ml(Spy2018)作為陽(yáng)性對(duì)照。存活小鼠的數(shù)量繪制為總小鼠的百分比。圖2:在一種小鼠致命性模型中，通過(guò)用所選的化膿性鏈球菌抗原和亞構(gòu)建體進(jìn)行主動(dòng)免疫實(shí)現(xiàn)的保護(hù)。使用從emm類型1的化膿性鏈球菌菌株(SF370)克隆得到的重組抗原皮下免疫CD-1小鼠(每組IO只小鼠)，并用MA-A20(emm類型23)菌林進(jìn)行攻擊。在攻擊后的14天內(nèi)監(jiān)控存活率。小鼠皮下免疫50pg重組蛋白輔以佐劑CFA/IFA。(A)Spy0269及其亞構(gòu)建體Spy0269-l;(B)Spy0416A及3個(gè)亞構(gòu)建體(Spy0416A-l、Spy0416A-6和Spy0416A-7)以及Spy0416B。用108cfu的化膿性鏈球菌MA-A20鼻內(nèi)攻擊麻醉的小鼠。佐劑對(duì)照小鼠作為陰性對(duì)照，而Ml蛋白(Spy2018)作為陽(yáng)性對(duì)照。存活小鼠的數(shù)量繪制為總小鼠的百分比。圖3:在一種小鼠致命性模型中，通過(guò)用所選的化膿性鏈球菌抗原和亞構(gòu)建體進(jìn)行主動(dòng)免疫實(shí)現(xiàn)的保護(hù)。使用從e隨類型1的化膿性鏈球菌菌林(SF370)克隆得到的重組抗原皮下免疫CD-1小鼠(每組IO只小鼠)，并用MA-A20(e隱類型23)菌林進(jìn)行攻擊。在攻擊后的14天內(nèi)監(jiān)控存活率。小鼠皮下免疫50pg重組蛋白輔以氫氧化鋁。(A)Spyl727、Spy0269-l、Spy0872-2和Spy0416A-l;(B)Spyl666、Spyl536、Spy0895和Spy0292-1。用108cfu的化膿性鏈球菌MA-A20鼻內(nèi)攻擊麻醉的小鼠。佐劑對(duì)照小鼠作為陰性對(duì)照，而M1(Spy2018)作為陽(yáng)性對(duì)照。存活小鼠的數(shù)量繪制為總小鼠的百分比。圖4:在一種小鼠致命性模型中，通過(guò)用所選的化膿性鏈球菌抗原進(jìn)行主動(dòng)免疫實(shí)現(xiàn)的保護(hù)。使用從一種emm類型1的化膿性鏈球菌菌林(SF370)克隆得到的重組抗原皮下免疫BALB/c小鼠(每組10只小鼠)，并用(A)MA-A20(emm類型23)菌林或(B)MA-A147(emm類型11/106)菌林進(jìn)行攻擊。在攻擊后的14天內(nèi)監(jiān)控存活情況。小鼠皮下免疫30-50jug重組蛋白輔以IC3T。(A)Spyl536和Spy0895;(B)Spyl727和Spyl536。用106cfu的化膿性鏈球菌MA-A20或108cfu化膿性鏈球菌MA-A147鼻內(nèi)攻擊麻醉的小鼠。佐劑對(duì)照小鼠作為陰性對(duì)照，而M1(Spy2018)作為陽(yáng)性對(duì)照。存活小鼠的數(shù)量繪制為總小鼠的百分比。實(shí)施例實(shí)施例1:A族鏈球菌抗原及其片段在鼻內(nèi)攻擊模型中誘導(dǎo)防護(hù)性免疫應(yīng)答抵抗致死性膿毒癥。重逸單義承霧f冷發(fā)和4這差湖/"W^^^1￡登從化膿性鏈球菌SF370(血清M1)的基因組DNA中，用基因特異性引物(見(jiàn)表2)通過(guò)PCR擴(kuò)增目的基因/DNA片段(見(jiàn)表l)。除了基因特異部分，所述引物具有限制性酶切位點(diǎn)協(xié)助定向克隆擴(kuò)增的41PCR產(chǎn)物。所述引物的基因退火(特異性)部分在15-30個(gè)堿基長(zhǎng)度范圍內(nèi)。用合適的限制性酶消化所得PCR產(chǎn)物并將其克隆進(jìn)pET28b(+)載體中(Novagen)從而獲得帶His標(biāo)簽的蛋白。包括所選抗原的全長(zhǎng)和片段的構(gòu)建體在表1中列出。一旦確定重組栽體含有目的基因，感染用作表達(dá)宿主的大腸桿菌BL21sta^細(xì)胞(Invitrogen)。蛋^襲這#趟化.'將含有重組載體的大腸桿菌BL21star細(xì)胞在所需培養(yǎng)體積中培養(yǎng)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。一旦達(dá)到0D6fl。nm值0.6，便用0.5mMIPTG(異丙基-(3-D-硫代半乳糖苷)在37°C誘導(dǎo)3小時(shí)。離心收集細(xì)胞，通過(guò)凍融裂解，和其后用BugBuster(Novagen)破碎的組合裂解細(xì)胞。通過(guò)離心將裂解物分離成可溶級(jí)分(上清)和不可溶級(jí)分(沉淀團(tuán)粒)。根據(jù)所述蛋白的位置采取不同的純化策略。A)如果帶His標(biāo)簽的蛋白在可溶級(jí)分中，可通過(guò)將上清結(jié)合到Ni-Sepharose珠子(Ni-Sepharose6FastFlow,GEHealthcare)來(lái)進(jìn)行蛋白純化。由于所表達(dá)蛋白的C端存在6組氨酸(6xHIS)，它結(jié)合到Ni-Sepharose而其他雜質(zhì)蛋白可通過(guò)洗滌緩沖液從柱子上洗去。用含有500mM的咪唑20mMNaH2P04，0.5mMNaCl，pH7.4緩沖液洗脫蛋白。濃縮洗脫物，用Bradford蛋白濃度法分析洗脫物并通過(guò)SDS-PAGE和Westernblot核實(shí)。B)如果蛋白存在于不可溶級(jí)分中，用含8M脲的合適的緩沖液溶解團(tuán)粒并使用與上述相同的材料和步驟在變性條件(在含8M脲的緩沖液中)下，將其應(yīng)用在Ni-NTA柱子上。雜質(zhì)蛋白可通過(guò)不含脲的洗滌緩沖液從柱子上洗去。當(dāng)?shù)鞍坠潭ㄓ贜i-NTA基質(zhì)上時(shí)，進(jìn)行帶His標(biāo)簽的蛋白的再折疊。在復(fù)性后，通過(guò)加入500mM咪唑洗脫蛋白。透析洗脫物來(lái)去除痕量的脲，并且如果體積大則進(jìn)行濃縮，通過(guò)SDS-PAGE核實(shí)并通過(guò)布氏法測(cè)量。42使用CD-l或BALB/c雌性小鼠(6-8周)。^絲^發(fā)r途徑入將緩沖在PBS中的50jag重組蛋白皮下注射到CD-1小鼠中(體積為lOOjnL)，輔以完全弗氏佐劑(CFA，終濃度50%)、氫氧化鋁(ALUM，終濃度P/。)或IC3T(終濃度在PBS中100nmol的L-KLKLLLLLKLK(SEQIDNO:55)、4nmol寡脫氧核苷酸ODNla(dldC)13)(IntercellAG,Vienna,Austria)。用相同量的蛋白和佐劑(除了CFA用不完全弗氏佐劑(IFA)做加強(qiáng)免疫；終濃度50%)在第14天和第28天對(duì)動(dòng)物進(jìn)行兩次加強(qiáng)免疫。已發(fā)表的(Daleetal.，J.Immunol.151:2188(1993))保護(hù)性的M1或M23蛋白抗原用作陽(yáng)性對(duì)照，而僅用佐劑免疫的小鼠作為陰性對(duì)照。在第35天，通過(guò)ELISA用各自的重組蛋白測(cè)定抗體滴度。^動(dòng)義瘦6^力途徑人'將緩沖在？83中的30-50重組蛋白皮下注射到BALB/c小鼠中(體積為20pL)，輔以IC31(終濃度在PBS中10nmol的L-KLKLLLLLKLK(SEQIDNO:55)，0.4nmol寡居脫氧核苷酸0DNla(dIdC)13)(Intercel1AG，Vienna,Austria)。用相同量的蛋白和佐劑在第7天、第14天和第28天對(duì)動(dòng)物進(jìn)行三次加強(qiáng)免疫。已發(fā)表的保護(hù)性的M1或M23蛋白抗原用作陽(yáng)性對(duì)照，而僅用佐劑免疫的小鼠作為陰性對(duì)照。在第35天通過(guò)ELISA用各自的重組蛋白測(cè)定抗體滴度。細(xì)蘿攻擊使用新培養(yǎng)的化膿性鏈球菌菌林MA-A20或MA-A147。化膿性鏈球菌菌林各自的過(guò)夜(o/n)培養(yǎng)物中取lmL細(xì)菌懸液加入到50mLTHY培養(yǎng)基中。測(cè)定光密度直到細(xì)菌懸液到達(dá)ODw值在O.4-0.6之間。使用各自所建的生長(zhǎng)曲線來(lái)確定細(xì)菌計(jì)數(shù)。離心細(xì)菌細(xì)胞并用PBS調(diào)節(jié)以獲得所需的cfu計(jì)數(shù)。為了確定細(xì)菌接種物中存在的活細(xì)胞數(shù)量，通過(guò)血瓊脂平板涂板來(lái)確定cfus。將(20juL)將106-1Q8cfus鼻內(nèi)應(yīng)用于個(gè)別43的麻醉的小鼠。通過(guò)菌血癥/膿毒癥模型測(cè)定免疫產(chǎn)生的保護(hù)，其中攻擊后的2-3周內(nèi)對(duì)存活率進(jìn)行跟蹤并且存活率用占動(dòng)物總數(shù)量的百分比表示(10只小鼠/組)。潛^鑒定A族鏈球菌抗原和/或其片段在鼻內(nèi)小鼠膿毒癥/致死性模型中表現(xiàn)出保護(hù)。因?yàn)轭A(yù)防性疫苗在人體的靶適應(yīng)癥為咽炎，據(jù)認(rèn)為用于評(píng)估候選抗原的鼻內(nèi)攻擊模型比靜脈內(nèi)或腹腔內(nèi)模型更具在生理上相關(guān)性，先前對(duì)此已有描述(Guzmanetal.，J,Inf.Dis.179:901(1999);Stalhammar-Carl函lmetal.，Mol.Microbiol.33:208(1999))。因此在都通過(guò)鼻內(nèi)途徑應(yīng)用細(xì)菌攻擊的三個(gè)不同的模型中對(duì)保護(hù)進(jìn)行評(píng)估。在鼻內(nèi)攻擊模型中觀察到對(duì)9個(gè)不同的蛋白的保護(hù)，其中一些以全長(zhǎng)重組蛋白的片段進(jìn)行測(cè)試。因?yàn)榭规溓蚓舻谋Ｗo(hù)由抗體介導(dǎo)，所以使用CFA/IFA作為佐劑行最初的免疫以獲得很高水平的抗體。隨后，也用Alum和IC31作為佐劑來(lái)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，因?yàn)檫@些佐劑適合用于人體并對(duì)于預(yù)防人體的鏈球菌感染的疫苗是優(yōu)先的選擇。如圖1所述實(shí)驗(yàn)中可見(jiàn)，片段Spy0292-1與全長(zhǎng)Spy0292蛋白一樣發(fā)揮保護(hù)作用，而Spy0292-3表現(xiàn)更低水平的防護(hù)。這清楚地說(shuō)明了對(duì)保護(hù)有用的區(qū)域位于包含Spy0292-1蛋白的序列中.蛋白Spy0269(Spy0269-l也觀察到好的保護(hù))，Spy0416(Spy0416A-l、Spy0416A-6和Spy0416A-7也觀察到好的保護(hù))，以及Spy0872(.Spy0872-2也觀察到好的保護(hù))得到了類似的結(jié)果。對(duì)于蛋白Spy0488、Spy0895和Spyl727，使用全長(zhǎng)重組蛋白(表1)，因?yàn)槭状巫C明這些蛋白能夠提供抵抗化膿性鏈球菌感染的保護(hù)。特別是蛋白Spy0895有希望成為疫苗候選物，因?yàn)樗诒?列出的全部三種模型中都提供了抵抗A族鏈球菌感染的保護(hù)。之前已表明Spyl536和Spyl666在靜脈內(nèi)攻擊模型中提供保護(hù)(WO2004/078907)，但重要的是現(xiàn)在表明它們?cè)谏砩细嚓P(guān)的鼻內(nèi)44攻擊模型中也提供了保護(hù)。在全部三種GAS感染的模型中，SpylH6最為一貫性地提供顯著的保護(hù)。除了Spy0895和Spyl536這兩種抗原，幾種抗原在至少兩中模型中顯示出了保護(hù)Spy0269-1、Spy0292-l、Spy0416A-l、Spy0872-2、Spyl666和Spyl727。重要的是，幾種抗原表現(xiàn)的保護(hù)水平與陽(yáng)性對(duì)照蛋白Ml所觀察到的水平一樣高(例如Spy0416A-l、Spy0488、Spy0895;表l)。這些數(shù)據(jù)清楚的證明了所選蛋白是疫苗開(kāi)發(fā)有希望的候選物。另外，已顯示蛋白Spy0269、Spy0292、Spy0416和Spy0872具有對(duì)保護(hù)不重要的氨基酸序列，因?yàn)閬喥蜗啾扔谌L(zhǎng)重組蛋白能夠提供相同或甚至更高水平的保護(hù)。表l:在小鼠感染模型中就保護(hù)進(jìn)行評(píng)估的化膿性鏈球菌的重組蛋白及其片段。<table>tableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table>1長(zhǎng)度，僅對(duì)化膿性鏈球菌基因特異序列計(jì)算氨基酸和堿基。2計(jì)算的分子量包括從載體衍生的氨基酸和His6標(biāo)簽。3保護(hù)基于如下所示動(dòng)物模型A用CFA/IFA做佐劑進(jìn)行皮下(s.c)免疫，用化膿性鏈球菌A20進(jìn)行鼻內(nèi)(i.n)攻擊。B用ALUM做佐劑進(jìn)行皮下免疫，用化膿性鏈球菌A20進(jìn)行鼻內(nèi)攻擊。C用1c3r或一種粘膜佐劑進(jìn)行鼻內(nèi)免疫，并用化膿性鏈球菌A20或A147進(jìn)行鼻內(nèi)攻擊。括號(hào)表示在各自的模型中，陰性對(duì)照(PBS+只有佐劑)和陽(yáng)性對(duì)照(M蛋白)的保護(hù)。如果在多于一種模型中顯示保護(hù)，顯示第一個(gè)列出的模式的保護(hù)數(shù)據(jù)。表2:用于克隆編碼化膿性鏈球菌的抗原性蛋白及其片段的基因的寡核苷酸。ORF-蛋白質(zhì)粒名稱引物'名稱限制性酶SPy0269pET28b-SPy0269TAGTAGCCATGGGCGATGATAGAGCCTCAGGASEQIDNO:21TAGTAGGCGGCCGCCTTAGATTCCTTACGGAACCTSEQIDNO:22210-2129210-2196NcolNotlSPy0269-1pET28b-SPy0269-lTAGTAGCCATGGGCGATGATAGAGCCTCAGGASEQIDNO:23TAGTAGGCGGCCGCAACAGGCGCATTAGGGSEQIDNO:24210-2129210-2719NcolNotlSPy0292pET28b-SPy0292TAGTAGCCATGGGCGAAGAGTATTCGGTAACTGCSEQIDNO:25TAGTAGGCGGCCGCTAAAGAGGTATTGACATACCTSEQIDNO:26210-2131210-2197NcolNotlSPy0292-lpET28b-SPy0292-lTAGTAGCCATGGGCGAAGAGTATTCGGTAACTGCSEQIDNO:27TAGTAGGCGGCCGCGCAAAAACAATTTTCATCATCSEQIDNO:28210-2131210-2954NcolNotlSPy0292-3pET28b-SPy0292-3TAGTAGCCATGGGCGAAGAGTATTCGGTAACTGCSEQIDNO:29TAGTAGGCGGCCGCTTCAATTAACTGGACTTTTTGSEQIDNO:30210-2131210-2956NcolNotlSPy0416ApET28b-SPy0416ATAGTAGGAATTCGGCAGATGAGCTAAGCACAATGSEQIDNO:31TAGTAGCTCGAGCTCTGAACCAAGAGTGACAAGSEQIDNO:32210-2246210-2247EcoRIXholSPy0416A-lpET28b-SPy0416A-lTAGTAGGAATTCGGCAGATGAGCTAAGCACAATGSEQIDNO:33TAGTAGCTCGAGTGCCCCTTGCTGACGCGGTGSEQ舊NO:34210-2246210-2663EcoRIXholSPy0416A-6pET28b-SPy0416A-6TAGTAGGAATTCGGCAGTTATTGACACAGGGSEQIDNO:35TAGTAGCTCGAGTAGGCTATCTTTTATGTC210-2715210-2717EcoRIXhol46<table>tableseeoriginaldocumentpage47</column></row><table>1引物，黑體字母表示基因特異性序列，帶下劃線的字母表示限制性酶切位點(diǎn)，正常字體的字母表示克隆必需序列但不存在與用于表達(dá)的最終栽體構(gòu)造中。第一引物總是指正義寡核苷酸，而第二引物是指與用于擴(kuò)增的編碼基因相關(guān)的反義寡核苷酸。實(shí)施例2:A族鏈球菌抗原及其變體。^球蘿差^逸W賴4將5mLTodd-HewittBroth培養(yǎng)基與來(lái)自冷凍穿刺的個(gè)別化膿性鏈球菌菌林(表3中所列出的)孵育并在37。C無(wú)振蕩培養(yǎng)過(guò)夜。通過(guò)在biofugefresco(Haereus)中13，000rpm離心5分鐘，收集4mL的培養(yǎng)物并去除上清。根據(jù)WizardGenomicDMPurificationKit(Promega)的操作規(guī)程，將DM從細(xì)菌細(xì)胞團(tuán)粒中分離。DM團(tuán)粒最終空氣干燥并溶于70piddH20。^應(yīng)'/i^碌,差^的尸CT和y^/y為、浙為了確定來(lái)自不同化膿性鏈球菌菌抹的抗原序列，使用目的基因的特異性引物進(jìn)行PCR。表3中顯示了用于這些分析的化膿性鏈球菌菌林。用作PCR引物的寡核苷酸序列針對(duì)所選抗原設(shè)計(jì)，從而能夠擴(kuò)增完整基因。通過(guò)專用的引物，使用PCR產(chǎn)物作為模板進(jìn)行測(cè)序。表4中列出所述寡核苷酸序列。如上所述制備全部化膿性鏈球菌菌林的基因組DNA。在25一反應(yīng)體系中進(jìn)行PCR，其中根據(jù)生產(chǎn)商的說(shuō)明書(shū)(Invitrogen,TheNetherlands)使用Taq聚合酶(1U)、200nMdNTPs、10pMol每個(gè)寡核苷酸及試劑盒。按照標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)行30個(gè)循環(huán)(lx:5min.95°C，30x:30sec.95°C，30sec.56°C，120sec.72。C,lx4min.72。C),除非必須為個(gè)別引物對(duì)調(diào)整條件。使用表IO中所列的寡核苷酸對(duì)PCR樣品進(jìn)行測(cè)序。測(cè)序在Agowa(Germany)進(jìn)行。表3:用于本研究的化膿性鏈球菌臨床分離林。No.菌林來(lái)源的國(guó)家血清型1Schmitz1/94荷蘭12Schmitz1/12葡萄牙13Schmitz1/5葡萄牙14Schmitz2/14德國(guó)15Schmitz1/74英國(guó)36Schmitz1/35西班牙7Schmitz1/41法國(guó)38畫(huà)78未知3.19Schmitz1/17葡萄牙410Schmitz1/156瑞士411Schmitz1/22西班牙44812RDN60未知513Schmitz1/174奧地利614Schmitz1/97比利時(shí)615Schmitz1/29西班牙916Schmitz1/92荷蘭1117SchmUz1/39西班牙1218Schmitz1/248波蘭1219Schmitz1/59英國(guó)1220RDN02未知1921Schmitz1/76英國(guó)2222Schmitz1/177奧地利2223Schmitz1/43法國(guó)2224Schmitz2/32德國(guó)2225RDN136未知22.226Schmitz1/136德國(guó)2527Schmitz1/56法國(guó)2828Schmitz1/108比利時(shí)2829Schmitz1/85荷蘭2830Schmitz2/50德國(guó)2831Schmitz1/194意大利4432Schmitz1/234土耳其4433Schmitz1/103比利時(shí)4434Schmitz1/253波蘭4935Schmitz1/141德國(guó)4936Schmitz1/123德國(guó)4937Schmitz2/30「德國(guó)66或9038Schmitz1/144德國(guó)7639Schmitz1/99比利時(shí)7840國(guó)120未知8141Schmitz1/142德國(guó)8342Schmitz1/176奧地利8343Schmitz1/25西班牙8344■75未知8545Schmitz2/46德國(guó)8946SchmUz2/9德國(guó)9047Schmitz2/23德國(guó)9048畫(huà)116未知9449Schmitz1/55法國(guó)11849<table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table>表4:用于序列保守性分析的寡核苷酸。顯示了ORF和蛋白名稱、引物相對(duì)于基因的方向、序列、相對(duì)于基因的位置。寡核苷酸同時(shí)用于基因或基因片段的PCR擴(kuò)增和隨后的序列分析。<table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table>210-4587反義CCAGCACGAATTAGATCATCTAG2362111至2134Spy0985210-4768210-4771正義反義CTGAAGAGCGCCAAACAACT237TCGAAGAAGTAACCTTTGATTAATGT238-63至-43864至890Spyl536210-4772210-4775正義反義GCTCTAGTCGTGTGAGAGAGCT"239TGTCTATCTGGTTCAACCGTTTT240-90至-661089至1112Spyl666210-4780210-4783正義反義GTGGCTAAGTCAGTGCTTGCT241AAGTTTTTATTCGTTTTTGCAAGG242-80至-591055至1079Spyl727210-4776210-4779正義反義GATCATTGACTAAGTAGCCTAAAACAA243CCAAAAACGTCATGCCAAC244-76至-49879至898趁^摩^鏈承|戎#w差^保按照方法中所述對(duì)9個(gè)所選基因進(jìn)行PCR和測(cè)序。表3顯示用于測(cè)序的菌林，而表4列出用于PCR和測(cè)序分析的寡核苷酸?！沸蛄衼?lái)自所有51個(gè)菌林。相比于來(lái)自化膿性鏈球菌SF370的Spy0269的序列，氨基酸的序列一致性水平在98.7%-100%的范圍。表5列出相比于來(lái)自化膿性鏈球菌SF370的Spy0269,顯示獨(dú)特氨基酸的所有36個(gè)氨基酸位點(diǎn)。表5:Spy0269的基因保守性。、各個(gè)化膿性鏈球菌菌抹的任意測(cè)序基因中，各個(gè)位點(diǎn)上觀測(cè)到的氨基酸。SF370比對(duì)位置SF370基AA變化1AA變化2具有各個(gè)變具有各個(gè)變基因中因中的氨化'的菌株化2的菌林的位置基酸3030VISchml—142，Schml一177，Schml-43，,756868DESchml-76，Schral—92,Schml—142,Schml—176,51<table>tableseeoriginaldocumentpage52</column></row><table>Schrn2—23，Schm2-30307307AGSchml-92482482HRSchml—17,Schml—56,Schml—76，Schml-92,Schml-142,Schml_253,Schml-108,Schml-141,Schml-174,Schml-176,Schml—177,Schml—25,Schml-43,Schml-59,Schml-97，SchmU9，Schml一123，SchmL136,Schm2_14，Schm2—32，Schm2—46,Schm2—50,RDN60,畫(huà)02,畫(huà)136,RDN120,薩116485485NKSchml-39，Schml—55，SchmU8，Schml-156,Schml—248，Schml—3，Schml—22,Schml-29,Schm2-23，53Schm2-30，畫(huà)75537537GSSchml—76，Schml一92,Schml-142,Schml-176,Schml—177，Schml-25,Schml—43,Schm2—32,RDN136577577QESchml—39，Schml—76,Schml-92,Schml_142,Schml—141,Schml_156,Schml—174,Schml_176,Schml—177,Schml-248，Schml一22，Schml—25,Schml-29，Schml—43,Schm2-32,Schm2-50,R廳O，RDN136602602GRSchm2—46605605RKSchml—174610610AVSchml_74，Schml-76，Schml—35，Schml-176，Schml—25，Schml-41,Schm2—9，Schm2—32,54RDN136,RDN78636636MSchml—74,Schml—76,Schml-35,Schml—176,Schml-25，Schml_41,Schm2-9,Schm2-32,濯136，RDN78640640EKSchml—74,Schml—76，Schml-35，Schml—176,Schml-25,Schml-41,Schm2—9,Schm2—32，薩136，RDN78641641AVSchml-56,Schml-108650650VESchm2—9666666FSchml-22700700ATSchml_17,Schml—39，Schml-55,Schml—56，Schml—253,Schml—68，Schml-108,Schml—156，Schml一248，Schml-3,Schml—22,Schml—29,Schml_59,55Schml-97，Schml—123,Schml—136,Schm2_23,Schm2_30,■02，RDN120,RDN116703703AVSchm2-50，RDN60710710SGSchml—17,Schml—59，Schml_97733733EGSchml_56,Schml—108750750APSchml—22752752PSSchtnl一55，Schml_74，Schml_76，Schml_92，Schml—142，Schml-144,Schml一194，Schml_35，Schml—68,Schral-176，Schml—177,Schml_234,SchmlJ,Schtnl-25，Schml—41，Schml_43，Schml—99，Schml_103，Schm2—9,Schm2-14,Schm2-23,Schm2一30，Schm2—32，56<table>tableseeoriginaldocumentpage57</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage58</column></row><table>S一，耕/"、浙序列來(lái)自所有51個(gè)菌林。相比于來(lái)自化膿性鏈球菌SF370的Spy0292的序列，氨基酸的序列一致性水平在97.3%-100%的范圍。表6列出相比于來(lái)自化膿性鏈球菌SF370的Spy0292的，顯示獨(dú)特氨基酸的所有36個(gè)氨基酸位點(diǎn)。表6:Spy0292基因保守性。、各個(gè)化膿性鏈球菌菌林的任意測(cè)序基因中，各個(gè)位點(diǎn)上觀測(cè)到的氨基酸2，在各個(gè)位點(diǎn)觀察到的第二個(gè)可能的氨基酸。3,在各個(gè)位點(diǎn)觀察到的第三個(gè)可能的氨基酸。SF370基因中的位置比對(duì)位置SF370基因中的氨基酸AA變化1AA變化2AA變化3具有各個(gè)變化'的菌林具有各個(gè)變化2的菌林具有各個(gè)變化3的菌抹2121SNSchml_1363232AVRD脂4545EKRDN604848ATSchtnl一56，Schml—108，Schml_855050EK麗755757VISchm2一505858STSchm2-506565MSchml一141，Schml_156,Schml—1746868KQNSchm2_30Schm2一508888YDSchm2—308989EDSchm2-309393NYSchm2_509595TSSchm2J9696IMSchm2-30101101LPSchm2-30121121NISchm2一5059122122STSchm2一50128128APSRDN60R,O137137KNSchm2—30141141KEQSchml_17Schm2—50147147RwISchml-17Schm2-50■60148148QSchm2-30,RDN60152152SFRDN120154154ATSchml—55,Schml—68,Schml_3,Schml-29，Schm2一23，Schm2一30165165HR畫(huà)O188188FSchml一174189189APSchml一174190190IVSchml-253,Schtnl-123214214ADSchml一39，Schml—55,Schml一56，Schml—76，Schml—92，Schml—142,Schml-144,Schml一108，Schml_141,Schml匿156,Schml—174,Schml-176，Schml匿177,Schml—234,Schral畫(huà)248，SchmL25,Schml—43，Schml-59,60Schral—85，Schml—99，Schml_103，Schm2_32，Schm2_46，Schm2-50，顧60，RDN02,RDN136,RDN120240240VISchml-92,RDN120266266ISchml—144,Schml_234,Schml-103309309YSSchml—17,Schml_39，Schml_55，Schml—56，Schml一74，Schml—76,Schml_92，Schml一142，Schml—144,Schml—35，Schml—68，Schml_108,Schml一141，Schml一156，Schml_174,Schml_176，Schml_177,Schml一234，Schml_248，Schml—3,Schml-22，Schml-25，Schml-29,Schml-41,61Schml-43，Schml一59，Schml—85,Schml-97,Schml_99,Schtnl—103,Schml—136，Schm2-9,Schm2—23,Schm2—30，Schm2-32，Schm2—46,Schtn2-50，薩60，RDN02,RDN136,RDN78,RDN120，■75，RDN116314314PsSchml-17,Schml—22,Schml-97351351ApSchml-177371371GASchml—234386386QHSchml—2345^。"f財(cái)/"、浙序列來(lái)自除Schmitz1/74之外的所有50個(gè)菌株。相比于來(lái)自化膿性鏈球菌SF370的Spy0416的序列，氨基酸的序列一致性水平在98.1%-100%的范圍。表7列出相比于來(lái)自化膿性鏈球菌SF370的Spy0416，顯示獨(dú)特氨基酸的所有103個(gè)位點(diǎn)。此外基因顯示在31位之后插入2個(gè)氨基酸，以及在所示位點(diǎn)的幾處氨基酸刪除(例如菌林Schmitz1/17和Schmitz1/39)。表7:Spy0416基因保守性。、各個(gè)化膿性鏈球菌菌林的任意測(cè)62序基因中，各個(gè)位點(diǎn)上觀測(cè)到的氨基酸2，在各個(gè)位點(diǎn)觀察到的第二個(gè)可能的氨基酸。刪除或插入是指相對(duì)于化膿性鏈球菌SF370的Spy0416的丟失的或增加的氨基酸。SF370基因比對(duì)SF370基因中AA變化1AA變化2具有各個(gè)變具有各個(gè)變中的位置位置的氨基酸化'的菌株化2的菌林2121IVSchml-99,Schm2-462727VMSchml-17,Schml-39，Schml—55,Schml—56,Schml—76,Schml—142,Schml-253，Schml-35，Schml-68,Schml-108,Schml—141,Schml_156,Schml一174，Schml-176,Schml—177,Schml一248，Schml-3，Schml—22,Schml—25,Schml—29,Schml-41,Schml—43,Schml-59，Schml—85'Schml—97,Schml—99,Schml—123，Schml-136,Schm2-9，Schtn2—14，Schm2—23,63Schm2一30，Schm2一32，Schm2—46,Schm2—50，R廳O，RDN136，RDN78,國(guó)120,RDN75,■1162929TMSchml—17，Schml一39,Schml—76,Schml一142，Schml一35,Schml一141，Schml—156，Schml一174，Schml一176,Schml—177,Schml-248，Schml—22,Schml-25,Schml—41,Schml一43，Schml—59，Schml-97,Schml-136，Schtn2-9,Schm2—14，■136,RDN78,國(guó)75插入32TSchml—17,Schml—39,Schml—76,Schml—142，Schml_35，Schral一141，64<table>tableseeoriginaldocumentpage65</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage66</column></row><table>Schml—41，Schml畫(huà)43，Schml-59，Schml一85,Schml-97,Schml—99，Schml-103，Schml—123,Schml-136,Schm2-9，Schm2-14,Schm2-23，Schm2—30,Schm2-32，Schm2_46,Schm2一50,RDN136,國(guó)78，薩1164951ATSchml一39，Schml-76,Schml一142，Schml—35,Schml_176，Schml_177,Schml-248,Schml—25,Schml-41,Schml—43,Schml-59,Schm2一9，Schm2—14，Schrn2—32，,60,廳136，,785456QPSchml-55，Schml—68，Schtnl-3，67<table>tableseeoriginaldocumentpage68</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage69</column></row><table>Schm2一327476IVSchml-55，Schml一253，Schml-68,Schml-3,Schml-29,Schml-99,Schml—123,Schml一136，Schrn2—23,Schm2_30，Schm2—467678PSchml-17,Schml—55,Schtnl—56,Schml_92,Schml-144,Schml—194，Schml—253，Schml—68,Schml-108,Schml-141,Schml—156,Schml_174，Schml一234'Schml—3，Schml—22,Schml—29,Schml-85，Schml一97，Schml_99，Schml—123,Schml—136,Schm2一23，Schm2一30,Schm2-46,Schrn2—50,R,O'RDN02,70RDN1167779KESchml-55，Schml一253，Schml—68,Schml一3，Schral-29，Schml一99,Schml—123，Schml」36，Schm2_23,Schm2-30，Schm2-467880TISchml-56，Schml—108,Schral-85，Schm2-508587SPSchml—17,Schml_39，Schml-55，Schml—56，Schml-76，Schml-92，Schml-142,Schml—253,Schml-35，Schml-68，Schml—108,Schml_176，Schml_177,Schml—248，Schml—3,Schml-22，Schml—25,Schml—29，Schml_41，Schml-43,Schml_59，Schml—85，Schml—97，71<table>tableseeoriginaldocumentpage72</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage73</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage74</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage75</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage76</column></row><table>Schml—99,Schml—103,Schml-123,Schml-136,Schm2-9，Schm2—14,Schm2—23'Schm2_30,Schtn2-32,Schm2-46,Schm2一50,RDN02,RDN136,RDN78,■120，RDN75,RDN116428430TASchml—142429431VASchml—17，Schml—22,Schml畫(huà)97431433EGSchml-253,Schral—123434436NSRDN116449451VFSchml_177453455DNSchml—142,Schml-35，Schml_141,Schml_174，Schml_176，Schml-177,Schml_248，Schtnl—25,Schml-41,Schml_43,Schml-59，Schml_97,Schml-123,Schml_136,77<table>tableseeoriginaldocumentpage78</column></row><table>Schml-123519521PSSchml—253，Schml-123530532ASSchml-141，Schml—156，Schml—174535537IVRDN120547549AVSchml-35,Schml-41,Schm2—9553555GTRDN116560562EVRDN02,RDN116630632VI畫(huà)75668670TMRDN116689691GDSchml-39，Schml—248，Schml-59，Schm2-14706708IVRDN02723725DASchml—39,Schml-55，Schml—56,Schral-92，Schml-144,Schml-194，Schral—253，Schml—35，SchmU8，Schml—108，Schml—141，Schml—156,Schml畫(huà)174，Schml—234,Schml-248，Schml—3,Schml一29，Schml畫(huà)41，Schml-59，79<table>tableseeoriginaldocumentpage80</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage81</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage82</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage83</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage84</column></row><table>Schml—142Schml-144Schml—253Schml一12XSchml-35,Schml_68,Schml—108Schml_141Schml—156Schnil-174Schml_176Schml_177Schml_234Schml-248Schml—3，Schml—5,Schml—22,Schml—25,Schml—29,Schml一41，Schml_43，Schml_59,Schml—85，Schml_97，Schml-99，Schml—103Schml一123Schml_136Schm2—9，Schm2—14,Schm2一23，Schm2—30,Schm2_32，Schm2一46,Schrn2—50，RDN60,RDN02,畫(huà)136，顧78，85<table>tableseeoriginaldocumentpage86</column></row><table>Schml-3,Schml—22,Schml-25，Schml一29，Schml_41,Schml一43，Schml-59，Schml一85，Schml-97,Schml-99，Schml—103,Schml-123,Schml-136,Schm2-9,Schm2—14,Schm2一23,Schm2—30，Schm2—32,Schm2—46，Schm2_50,躍60，薩02,RDN136,■78，RDN120，■75，RDN11615051507EKSchm2-5015161518DGSchml—17,Schml—39，Schml一55，Schml—56,Schml—76,Schml-92，Schml—142,Schml_144,Schml—194,Schml-253,Schml_35，87<table>tableseeoriginaldocumentpage88</column></row><table>1540GDSchml-17,Schml-22,Schml_9715451547STSchm2一5015551557NDSchml畫(huà)35，Schml畫(huà)41，Schm2一9，R而815601562TASchml_17,Schml_144,Schtnl一194,Schml—35,Schml畫(huà)234,Schml—22,Schml-41,Schml_97，Schml—99,Schml-103,Schml-136,Schm2_9,Schm2—32,Schm2-46,RDN7815761578GRSchm2-5015801582DGSchml_144,Schml畫(huà)194,Schml—234,Schml-13615871589VASchml-142,Schml_176，Schml—2515911593NS■7515981600AVSchml-17,Schml—22,Schml-9716051607STSchml—17，Schml_39，Schml_55,Schml-56,89<table>tableseeoriginaldocumentpage90</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage91</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage92</column></row><table>Schml—108，Schml-141，Schml-156,Schml-174,Schml-176,Schml—177,Schml_234,Schml-248,Schml—3，Schml_22，Schml—25,Schml-29,Schml-41，Schml_43，Schml—59，Schml—85,Schml畫(huà)97,Schml—99,Schml—103,Schml—123,Schml_136,Schm2—9，Schm2-23，Schm2—30，Schm2_32,Schm2—46，Schm2_50，RD副，RDN02,RDN136,RDN78,■120,RDN75,RDN116插入2MSchml—39,Schml—55,Schml—56,Schml—74，Schml-76，93<table>tableseeoriginaldocumentpage94</column></row><table>插入RDN75，RDN116Schml—39,Schml—55，Schml—56，Schml—74，Schml-76，Schml—92,Schml—142，Schml-144,Schml-194，Schml—253,Schml一35，Schml—68,Schml一108,Schml—141，Schml一156，Schml-174，Schtnl-176，Schml一177,Schml-234，Schml-248，Schml畫(huà)3,Schml畫(huà)22,Schml—25,Schml—29，Schml-41，Schml一43,Schml—59,Schml—85，Schml-97,Schml—99,Schml—103，Schml—123,Schml—136,Schm2-9，Schm2—23，Schm2—30,Schm2-32，95<table>tableseeoriginaldocumentpage96</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage97</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage98</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage99</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage100</column></row><table>Schml—177,Schml-234,Schml-248，Schml_3,Schml-22,Schml—25，Schml匿29,Schml-41,Schml-43,Schml-59,Schml—85,Schml—97,Schml—99,Schml-103，Schml_123,Schml—136，Schm2—9,Schm2—23，Schtn2—30,Schm2—32，Schm2—46，Schm2—50,國(guó)60，濯02,RDN136，RDN78,RDN120,RDN75,RDN116Schml一39，Schml-55,Schml—56,Schml-74,Schml一76，Schml-92,Schml—142，Schml-144,Schml-194，Schml一253，Schml-35,Schml—68，Schml匿108,101<table>tableseeoriginaldocumentpage102</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage103</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage104</column></row><table>13Schml—194，Schml-253，Schml—35,Schml一68,Schml一108,Schml-141,Schml-156，Schml-174，Schml—176，Schml-177，Schml—234,Schml-248，Schml—3,Schml-22，Schml—25,Schml-29，Schml—41,Schml—43,Schml—59，Schml一85,Schml一97,Schml—99,Schml-103,Schml一123，Schml—136,Schm2一9，Schm2一23,Schm2畫(huà)30,Schm2一32，Schm2一46,Schm2_50，R廳O,R酬2,RDN136,RDN78,RDN120,RDN75,畫(huà)116Schml—39,Schml—55,Schml-56，Schml—74,105<table>tableseeoriginaldocumentpage106</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage107</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage108</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage109</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage110</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage111</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage112</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage113</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage114</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage115</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage116</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage117</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage118</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage119</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage120</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage121</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage122</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage123</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage124</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage125</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage126</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage127</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage128</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage129</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage130</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage131</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage132</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage133</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage134</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage135</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage136</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage137</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage138</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage139</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage140</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage141</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage142</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage143</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage144</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage145</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage146</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage147</column></row><table>特氨基酸的位點(diǎn)。表10:Spy0895基因保守性。、各個(gè)化膿性鏈球菌菌林的任意測(cè)序基因中，各個(gè)位點(diǎn)上觀測(cè)到的氨基酸。<table>tableseeoriginaldocumentpage148</column></row><table>Spyl536的序列氨基酸的序列一致性水平在99.1%一100%的范圍。表11列出相比于來(lái)自化膿性鏈球菌SF370的Spyl536,顯示獨(dú)特氨基酸的所有8個(gè)氨基酸位點(diǎn)。來(lái)自菌株Schmitz2/14的基因另外表現(xiàn)在207位之后插入3個(gè)氨基酸。表ll:Spyl536基因保守性。、各個(gè)化膿性鏈球菌菌林的任意測(cè)序基因中，各個(gè)位點(diǎn)上觀測(cè)到的氨基酸。插入是指相對(duì)于化膿性鏈球菌SF370的Spyl536增加的氨基酸。<table>tableseeoriginaldocumentpage149</column></row><table>粉""序列來(lái)自所有50個(gè)菌株。未確定來(lái)自菌抹RDN120的序列。相比于來(lái)自化膿性鏈球菌SF370的Spyl666的序列，氨基酸的序列一致性水平在98.2%-100%的范圍。表12列出相比于來(lái)自化膿性鏈球菌SF370的Spyl666，顯示獨(dú)特氨基酸的所有18個(gè)氨基酸位點(diǎn)。<table>tableseeoriginaldocumentpage150</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage151</column></row><table>時(shí)序W為、浙在來(lái)自所列出的化膿性鏈球菌菌林的51個(gè)已分析的基因序列中，未發(fā)現(xiàn)氨基酸序列水平的序列變化。氨基酸序列的序列數(shù)據(jù)1.Spy02691.1全長(zhǎng)Spy0269〉Spy0269/SF370(血清型l);SEQIDNO:57PHDKTIIEDSAGASGLIRNDDNMYENIGAFNDVHTVNGIKRGIYDSIKYMLFTDHLHGN1.2抗原性片段Spy0269-l>Spy0269-l/SF370(血清型l);SEQIDNO:1NGIKRGIYDSIKYMLFTDHLHGNTYGHAINFLRVDKHNPNAPV1.3其他化膿性鏈球菌分離林和/或血清型的同源序列>Spy0269-1/Schmitz2/14(血清型l);SEQIDNO:58NGIKRGIYDSIKYMLFTDHLHGNTYGHAINFLRVDKRNPMPV>Spy0269-1/Schmitz1/156(血清型4);SEQIDNO:59NGIKRGIYDSIKYMLFTDHLHGNTYGHAINFLRVDKHNPKAPV>Spy0269-l/Schmitz1/59(血清型12);SEQIDNO:60NGIKRGIYDSIKYMLFTDHLHGNTYGHAINFLRVDKRNPNAPV>Spy0269-1/Schmitz1/177(血清型22);SEQIDNO:61153NGIKRGIYDSinMLFTDHLHGNTYGHAINFLRVDKRNPMPV>Spy0269-1/Schmitz1/43(血清型22);SEQIDNO:62NGIKRGIYDSIKYMLFTDHLHGNTYGHAINFLRVDKRNPNAPV>Spy0269-1/Schmitz1/136(血清型25);SEQIDNO:63NGIKRGIYDSIKYMLFTDHLHGNTYGHAINFLRVDKRNPNAPV〉Spy0269—1/Schmitz1/85(血清型28);SEQIDNO:64NGIKRGIYDSIKYMLFTDHLHGNTYGHAINFLRVDKHNPNAPV〉Spy0269-1/Schmitz2/50(血清型28);SEQIDNO:65NGIKRGIYDSIKYMLFTDHLHGNTYGHAINFLRVDKRNPNAPV〉Spy0269—1/SchmUz1/123(血清型49);SEQIDNO:66NGIKRGIYDSIKYMLFTDHLHGNTYGHAINFLRVDKRNPNAPV>Spy0269-1/Schmitz1/176(血清型83);SEQIDNO:67NGIKRGIYDSIKYMLFTDHLHGNTYGHAINFLRVDKRNPNAPV2.Spy02922.1全長(zhǎng)Spy0292>Spy0292/SF370(血清型l);SEQIDNO:68MIKRLISLVVIALFFAASTVSGEEYSVTAKHAIAVDLESGKVLYEKDAKEVVPVASVSKLLTTYLVYKEVSKGKLNWDSPVTISNYPYELTTNYTISNVPLDKRKYTVKELLSA2.2抗原性片段Spy0292-1>Spy0292-1/SF370(血清型l);SEQIDNO:2EEYSVTAKHAIAVDLESGKVLYEKDAKEVVPVASVSKLLTTYLVYKEVSKGKLNWDSPVTISNYPYELTTNYTISNVPLDKRKYTVKELLSALV濯ANSPAIALAEKIGGTEP2.3其他化膿性鏈球菌分離抹和/或血清型的同源序列156>Spy0292-l/Schmitz1/39(血清型12);SEQIDNO:69EEYSVTAKHAIAVDLESGKVLYEKDAKEVVPVASVSKLLTTYLVYKEVSKGKLNWDSPVTISNYPYELTTNYTISNVPLDKRKYTVKELLSALVVNNANSPAIALAEKIGGTEP>Spy0292-1/Schmitz1/55(血清型118);SEQIDNO:70EEYSVTAKHAIAVDLESGKVLYEKDAKEVVPVASVSKLLTTYLVYKEVSKGKLNWDSPVTISNYPYELTTNYTISNVPLDKRKYTVKELLSALVVNMNSPAIALAEKIGGTEP>Spy0292-1/Schmitz1/56(血清型28);SEQIDNO:71EEYSVTAKHAIAVDLESGKVLYEKDTKEVVVASVSKLLTTYLVYKEVSKGKL麗DSPVTISNYPYELTTNYTISNVPLDKRKYTVKELLSALVVNNANSPAIALAEKIGGTEP>Spy0292-1/Schmitz1/74(血清型3);SEQIDNO:72EEYSVTAKHAIAVDLESGKVLYEKDAKEVVPVASVSKLLTTYLVYKEVSKGKLNWDSPVTISNYPYELTTNYTISNVPLDKRKYTVKELLSALVVNMNSPAIALAEKIGGTEP>Spy0292-1/Schmitz1/76(血清型22);SEQIDNO:73EEYSVTAKHAIAVDLESGKVLYEKDAKEVVPVASVSKLLTTYLVYKEVSKGKLNWDSPVTISNYPYELTTNYTISNVPL證KYTVKELLSALVV腿NSPAIALAEKIGGTEP>Spy0292-1/Schmitz1/92(血清型ll);SEQIDNO:74EEYSVTAKHAIAVDLESGKVLYEKDAKEVVPVASVSKLLTTYLVYKEVSKGKLNWDSPVTISNYPYELTTNYTISNVPLDKRKYTVKELLSALVVNNANSPAIALAEKIGGTEP>Spy0292-1/Schmitz1/94(血清型l);SEQIDNO:75EEYSVTAKHAIAVDLESGKVLYEKDAKEVVPVASVSKLLTmTOEVSKGKL麗DSPVTISNYPYELTTNYTISNVPLDKRKYTVKELLSALVVNNANSPAIALAEKIGGTEP>Spy0292-1/Schmitz1/142(血清型83);SEQIDNO:76EEYSVTAKHAIAVDLESGKVLYEKDAKEVVPVASVSKLLTTYLVYKEVSKGKLNWDSPVTISNYPYELTTNYTISNVPLDKRKYTVKELLSALVVNNANSPAIALAEKIGGTEP〉Spy0292-1/Schmitz1/144(血清型76);SEQIDNO:77EEYSVTAKHAIAVDLESGKVLYEKDAKEVVPVASVSKLLTTYLVYKEVSKGKLNWDSPVTISNYPYELTTNYTISNVPLDKRKYTVKELLSALVVNNANSPAIALAEKIGGTEP>Spy0292-l/Schraitz1/194(血清型44);SEQIDNO:78EEYSVTAKHAIAVDLESGKVLYEKDAKEVVPVASVSKLLTTYLVYKEVSKGKLNWDSPVTISNYPYELTTNYTISNVPLDKRKYTVKELLSALVVNMNSPAIALAEKIGGTEP2.4抗原性片段Spy0292-3>Spy0292-3/SF370(血清型l);SEQIDNO:3EEYSVTAKHAIAVDLESGKVLYEKDAKEVVPVASVSKLLTTYLVYKEVSKGKL冊(cè)DSPVTISNYPYELTTNYTISNVPLDKRKYTVKELLSALVVNNANSPAIALAEKIGGTEP1582.5其他化膿性鏈球菌分離林和/或血清型的同源序列>Spy0292-3/Schmitz1/39(血清型12);SEQIDNO:79EEYSVTAKHAIAVDLESGKVLYEKDAKEVVPVASVSKLLTTYLVYKEVSKGKLNWDSPVTISNYPYELTTNYTISNVPLDKRKYTVKELLSALVVNMNSPAIALAEKIGGTEP>Spy0292-3/Schmitz1/55(血清型118);SEQIDNO:80EEYSVTAKHAIAVDLESGKVLYEKDAKEVVPVASVSKLLTTYLVYKEVSKGKLNWDSPVTISNYPYELTTNYTISNVPLDKRKYTVKELLSALVVNNANSPAIALAEKIGGTEP>Spy0292-3/Schmitz1/56(血清型28);SEQIDNO:81EEYSVTAKHAIAVDLESGKVLYEKDTKEVVPVASVSKLLTTYLVYKEVSKGKLNWDSPVTISNYPYELTTNYTISNVPLDKRKYTVKELLSALVVNNANSPAIALAEKIGGTEP>Spy0292-3/Schmitz1/74(血清型3);SEQIDNO:82EEYSVTAKHAIAVDLESGKVLYEKDAKEVVPVASVSKLLTTYLVYKEVSKGKLNWDSPVTISNYPYELTTNYTISNVPLDKRKYTVKELLSALVVNNANSPAIALAEKIGGTEP159>Spy0292-3/Schmitz1/76(血清型22);SEQIDNO:83EEYSVTAKHAIAVDLESGKVLYEKDAKEVVPVASVSKLLTTYLVYKEVSKGKLNWDSPVTISNYPYELTTNmSNVPLDKRKHTKELLSALVVNNANSPAIALAEKIGGTEP>Spy0292-3/Schmitz1/92(血清型ll);SEQIDNO:84EEYSVTAKHAIAVDLESGKVLYEKDAKEVVPVASVSKLLTTYLVYKEVSKGKLNWDSPVTISNYPYELTTNYTISNVPLDKRKYTVKELLSALVVNMNSPAIALAEKIGGTEP>Spy0292-3/Schmitz1/94(血清型l);SEQIDNO:85EEYSVTAKHAIAVDLESGKVLYEKDAKEVVPVASVSKLLTTYLVYKEVSKGKLNWDSPVTISNYPYELTTNYTISNVPLDKRKYTVKELLSALVVNNANSPAIALAEKIGGTEPKFVDKMKKQLRQWGISDAKVVNSTGLTNHFLGANTYPNTEPDDENCFCATDLAIIARHL>Spy0292-3/Schmitz1/142(血清^83);SEQIDNO:86EEYSVTAKHAIAVDLESGKVLYEKDAKEVVPVASVSKLLTTYLVYKEVSKGKLNWDSPVTISNYPYELTTNYTISNVPLDKRKYTVKELLSALVVNNANSPAIALAEKIGGTEP>Spy0292-3/Schmitz1/144(血清型76);SEQIDNO:87EEYSVTAKHAIAVDLESGKVLYEKDAKEVVPVASVSKLLTTYLVYKEVSKGKLNWDSPVTISNYPYELTTNYTISNVPLDKRKYTVKELLSALVVNMNSPAIALAEKIGGTEP>Spy0292-3/Schmitz1/194(血清型44);SEQIDNO:88EEYSVTAKHAIAVDLESGKVLYEKDAKEVVPVASVSKLLTTYLVYKEVSKGKLNWDSPVTISNYPYELTTNYTISNVPLDKRKYTVKELLSALVVNNANSPAIALAEKIGGTEP3.Spy0416A3.1全長(zhǎng)Spy0416A>Spy0416A/SF370(血清型l);SEQIDNO:89161LLNIDGAVTSGLYVTGKDNYGSISLGNITDTMTFDVTVHNLSNKDKTLRYDTELLTDHVKHFTGLVTLGSE3.2抗原性片段Spy0416A-l>Spy0416A-1/SF370(血清型l);SEQIDNO:43.3其他化膿性鏈球菌分離林和/或血清型的同源序列>Spy0416A-l/Schmitz1/7(血清型4);SEQIDNO:90>Spy0416A—1/Schmitz1/55(血清型118);SEQIDNO:92>Spy0416A-l/Schmitz1/94(血清型l);SEQIDNO:94>Spy0416A-l/Schmitz1/176(血清型83);SEQIDNO:97>Spy0416A-l/Schmitz1/234(血清型44);SEQIDNO:98>Spy0416A-l/Schmitz1/22(血清型4);SEQIDNO:993.4抗原性片段Spy0416A-6>Spy0416A-6/SF370(血清型l);SEQIDNO:5NHGKAIYSESVDFKDIKDSL3.5其他化膿性鏈球菌分離林和/或血清型的同源序列>Spy0416A-6/Schmitz1/7(血清型4);SEQIDNO:100GKAIYSESVDFKDIKDSL>Spy0416A-6/Schmitz1/39(血清型12);SEQIDNO:101NHGKAIYSESVDFKDIKDSL>Spy0416A-6/Schmitz1/55(血清型118);SEQIDNO:102NHGKAIYSESVDFKDIKDSL>Spy0416A-6/Schmitz1/56(血清型28);SEQIDNO:103GKAIYSESVDFKDIKDSL>Spy0416A-6/Schmitz1/94(血清型l);SEQIDNO:104168NHGKAIYSESVDFKDIKDSLSpy0416A-6/Schmitz1/253(血清型49);SEQIDNO:105NHGKAIYSESVDFKDIKDSL〉Spy0416A—6/Schmitz1/174(血清型6);SEQIDNO:106NHGKAIYSESVDFKNIKDSL>Spy0416A-6/Schmitz1/176(血清型83);SEQIDNO:107NHGKAIYSESVDFKNIKDSL>Spy0416A-6/Schmitz1/234(血清型44);SEQIDNO:108NHGKAIYSESVDFKDIKDSL>Spy0416A-6/Schmitz1/22(血清型4);SEQIDNO:109GKAIYSESVDFKDIKDSL3.6抗原性片段Spy0416A-7>Spy0416A-7/SF370(血清型l);SEQIDNO:6EAIEKAKKAGVSVVVAAG腿VYGSDH匿LAT腦YGLVGSPSTGRTPTSVAAINSKWISHEFGKAMSQLNGNGTGS3.7其他化膿性鏈球菌分離抹和/或血清型的同源序列170<formula>formulaseeoriginaldocumentpage171</formula>ISHEFGKAMSQLNGNGTGS>Spy0416A-7/Schmitz1/56(血清型28);SEQIDNO:113IEKAKKAGVSVVVAAGNERVYGSDHDDPLATNPDYGLVGSPSTGRTPTSVAAINSKWVIHEFGKAMSQLNGNGTGS>Spy0416A-7/Schmitz1/94(血清型l);SEQIDNO:114EAIEKAKKAGVSVVVAAGNERVYGSDHDDPLATNPDYGLVGSPSTGRTPTSVAAINSKWISHEFGKAMSQLNGNGTGS>Spy0416A-7/Schmitz1/253(血清型49);SEQIDNO:115EAIEKAKKAGVSVVVAAG腿VYGSD陽(yáng)PLAT腳YGLVGSPSTGRTPTSVAAINSKWISHEFGKAMSQLNGNGTGS>Spy0416A-7/Schmitz1/174(血清型6);SEQIDNO:116EAIEKAKKAGVSVVVAAGNERVYGSDHDDPLATNPDYGLVGSPSTGRTPTSVAAINSKWISHEFGKAMSQLNGNGTGS>Spy0416A-7/Schmitz1/176(血清型83);SEQIDNO:117EAIEKAKKAGVSVVVAAGNERVYGSDHDDPLATNPDYGLVGSPSTGRTPTSVAAINSKWISHEFGKAMSQLNGNGTGS173>Spy0416A-7/Schmitz1/234(血清型44);SEQIDNO:118EAIEKAKKAGVSVVVAAGNERVYGSDHDDPLATNPDYGLVGSPSTGRTPTSVAAINSKWISHEFGKAMSQLNGNGTGS>Spy0416A-7/Schmitz1/22(血清型4);SEQIDNO:119IEKAKKAGVSVVVAAGNERVYGSDHDDPLATNPDYGLVGSPSTGRTPTSVAAINSKWVIHEFGKAMSQLNGNGTGS3.8全長(zhǎng)Spy0416B>Spy0416B/SF370(血清型l);SEQIDNO:56174TFDPETNRFKPEPLKDRGLAGVRKDSVFYLERKDNKPYTVTINDSYKYVSVEDNKTFVEKETLKDNLEMTQSDTGLVTNQAQLAVVHRNQPQSQLTKMNQDFFISPNEDGNKDFVAFKVFYLAKKNGRKFDVTEGKDGITVSDNKVYIPKNPDGSYTISKRDGVTLSDYYYLVEDRAT4.Spy08724.1全長(zhǎng)Spy0872>Spy0872/SF370(血清型l);SEQIDNO:120TLDTDTNDFIKTPSANVVAVAPGIKTENSDIKAIINHANDIVKTVTERKIGTATNSSTIKVYKDNGEEINLTTTYTVVVNDFLYGGGDGFSAFKKAKLIGAINTDTEAFITYITNLEASGKTVNATIKGVKNYVTSNLESSTKVNSAGKHSIISKVFRNRDGNTVSSEVISDLLTSTENTNNSLGKKETTTMNTISSSTLPIT4.2抗原性片段Spy0872-2>Spy0872-2/SF370(血清型l);SEQIDNO:7DGFSAFKKAKLIGAINTDTEAFITYITNLEASGKTVNATIKGVKNYVTSNLESSTKVNSAGKHSIISKVFRNRDGNTVSSEVISDLLTSTENTNNSLGKKETTTNKNTISSSTLPIT4.3其他化膿性鏈球菌分離抹和/或血清型的同源序列〉Spy0872-2/Schmitz1/7(血清型4);SEQIDNO:121DGFSAFKKAKLIGAINTDTEAFITYITNLEASGKTVNATIKGVKNYVTSNLESSTKVNSAGKHSIIIISKVFRNRDGNIVSSEIISDLLTSTENTNNSFGKKEITTNKNTISNSTLPIT>Spy0872-2/Schmitz1/39(血清型12);SEQIDNO:122DGFSAFKKAKLIGAINTDTEAFITYITNLEASGKTVNATIKGVKNYVTSNLESSTKVNSAGKHSIISKVFRNRDGNIVSSEIISDLLTSTENTNNSLGKKETTTNKNTISSSTLPIT>Spy0872-2/Schmitz1/55(血清型118);SEQIDNO:123DGFSAFKKAKLIGAINTDTEAFITYITNLEASGKTVNATIKGVKNYVTSNLESSTKVNSAGKHSIISKVFRNRDGNIVSSEVISDLLTSTENTNNSLGKKETTTNKNTISSSTLPIT>Spy0872-2/Schmitz1/56(血清型28);SEQIDNO:124DGFSAFKKAKLIGAINTDTEAFITYITNLEASGKTVNATIKGVKNYVTSNLESSTKVNSAGKHSIISKVFRNRDGNIVSSEIISDLLTSTENTNNSLGKKETTTNKNTISSSTLPIT>Spy0872-2/Schmitz1/94(血清型l);SEQIDNO:125DGFSAFKKAKLIGAINTDTEAFITYITNLEASGKTVNATIKGVKNYVTSNLESSTKVNSAGKHSIISKVFRNRDGNTVSSEVISDLLTSTENTNNSLGKKETTTNKNTISSSTLPIT>Spy0872-2/Schmitz1/253(血清型49);SEQIDNO:126DGFSAFKKAKLIGAINTDTEAFITYITNLEASGKTVNATIKGVKNYVTSNLESSTKVNSAGKHSIISKVFRNRDGNIVSSEIISDLLTSTENTNNSLGKKETTTNKNTISSSTLPIT>Spy0872-2/Schmitz1/176(血清型83);SEQIDNO:127AGKHSIISKVFRNRDGNIVSSEVISDLLTSTENTNNSFGKKETTTNKNTISNSTLPIT>Spy0872-2/Schmitz1/177(血清型22);SEQIDNO:128DGFSAFKKAKLIGAINTDTEAFITYITNLEASGKTVMTIKGVKNYVTSNLESSTKVNSAGKHSIISKVFRNRDGNIVSSEIISDLLTSTENTNNSLGKKETTTNKNTISSSTLPIT>Spy0872-2/Schmitz1/234(血清型44);SEQIDNO:129DGFSAFKraLIGAI歸TEAFITYITNLEASGKTVNATIKGVOYVTSNLESSTKVNSAGKHSIISKVFRNRDGNIVSSEIISDLLTSTENTNNSLGKKETTTNKNTISSSTLPIT>Spy0872-2/Schmitz1/22(血清型4);SEQIDNO:130DGFSAFKKAKLIGAINTDTEAFITYITNLEASGKTVNATIKGVKNYVTSNLESSTKVNSAGKHSIIIISKVFRNRDGNIVSSEIISDLLTSTENTNNSFGKKEITTNKNTISNSTLPIT5.全長(zhǎng)序列>Spy0488/SF370(血清型1);SEQIDNO:8178DEKEKPASDVKVRPAEVGSWLEPATALPSVEMSAEDRLKS>Spy0895/SF370(血清型1);SEQIDNO:9VIYRREPFYFDDMNAIIKKELSLWRQSIV>Spyl536/SF370(血清型1);SEQIDNO:131TIGKDGEVGDIGGAGLKVVAAAEAGADIFFVPNNPVDKEIKKVNPNAISNYEEAKRAAKRLKTKMKIVPVTT，ALVYLRK>Spyl666/SF370(血清型1);SEQIDNO:132SHSELTANKRAHSAKLRVAKKIRK<formula>formulaseeoriginaldocumentpage180</formula>TGGATCAGCTAGTTACAATAATTATTACAAAGAGCATGCAGATCAAATTATTGCCAAAGCTAGTCCAGGTAATCAATTAAATCAATACCAAGATATTCCAGCAGATCGTAATCGCTTTGTTGATCCCGATAATTTGACACCAGAAGTGCAAAATGAGCTAGCGCAGTTTGCAGCTCACACAAGAATTTGCAAGATTACTTAGTACCAGCTATAAGAAAACTCATGGTAATACAAGACCATCATTTGTCTACGGACAGCCAGGGGTATCAGGGCATTATGGTGTTGGGCCTCATGATAGCAGCTAAAGCAAAACAAGCACAACTCGAAGCTACTCGTGATCAATCATTAGCTAAGCTAGCATCGTTGAAAGCCGCACTGCACCAGACAGAAGCCTTAGCAGAGCAAGCCGCAGCCAGAGTGACAGCACTGGTGGCTAAAAAAGCTCATTTGCAATATCTAAGGGACTTTAAATTGAATCCTAACCGCCTTCAAGTGATACGTGAGCGCATTGATAATACTAAGCAAGATTTGGCTAAAACTACCTCATCTTTGTTAAATGCACAAGAAGCTTTAGCAGCCTTACAAGCTAACCTTAGCTAACGAAAAGGAATATCGCCACTTAGACGAAGATATAGCTACTGTGCCTGATTTGCAAGTAGCTCCACCTCTTACGGGCGTAAAACCGCTATCATATAGTAAGATAGATACTACTCCGCTTGTTCAAGAAATGGTTAAAGAAACGAAACAACTATTAGAAGCTTCAGCAA181GGATTTAGGTTCCGTAAGGAATCTAAGTGA1.2抗原性片段Spy0269-l>Spy0269-1/SF370(血清型l);SEQIDNO:11GATGATAGAGCCTCAGGAGAAACGAAGGCGAGTAATACTCACGACGATAGTTTACCTCAAGATTTAGTGGAACAAGTCAAAACGTCTGAACAAAATATTGCTAAGCTCAATGCTGTGGTTATATTGGATCAGCTAGTTACAATAATTATTACAAAGAGCATGCAGATCAAATTATTGCCAAAGCTAGTCCAGGTAATCAATTAAATCAATACCAAGATATTCCAGCAGATCGTAATCGCTTTGTTGATCCCGATAATT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血清型l);SEQIDNO:15GCAGTTATTGACACAGGGATCGATCCGGCCCATCAAAGCATGCGCATCAGTGATGTATCAACTGCTAAAGTAAAATCAAAAGAAGACATGCTAGCACGCCAAAAAGCCGCCGGTATTAATTATGGGAGTTGGATAAATGATAAAGTTGTTTTTGCACATAATTATGTGGAAAATAGCGATAATATCAAAGAAAATCAATTCGAGGATTTTGATGAGGACTGGGAAAACTTTGAGTTTGATGCAGAGGCAGAGCCAAAAGCCATCAAAAAACACAAGATCTATCGTCCCCAACAGGTATTGTAGCCGGTAATAGCAAAGAAGCCGCTGCTACTGGAGAACGCTTTTTAGGAATTGCACCAGAGGCCCAAGTCATGTTCATGCGTGTTTTTGCCAACGACATCATGGGATCAGCTGAATCACTCTTTATCAAAGCTATCGAAGATGCCGTGGCTTTAGGAGCAGATGTGATCAACCTGAGTCTTGGAACCGCTAATGGGGCACAGCTTAGTGGCAGCAAGCCTCTAATGGCGCGTCTATGGATCTGACCATGATGATCCATTGGCGACAAATCCAGACTATGGTTTGGGTGATTCAACGTCTAATGACGGTCAAAGAATTAGAAAACCGTGCCGATTTAAACCATGGTAAAGCCATCTATTCAGAGTCTGTCGACTTTAAAGACATAAAAGATAGCCTA3.5其他化膿性鏈球菌分離林和/或血清型的同源序列〉Spy0416A-6/Schmitz1/7(血清型4);SEQIDNO:176GCAGTTATTGACACAGGGATCGATCCGGCCCATCAAAGCATGCGCATCAGTGATGTATCAACTGCTAAAGTAAAATCAAAAGAAGACATGCTAGCACGCCAAAAAGCCGCCGGTATTAATTATGGGAGTTGGATAAATGATAAAGTTGTTTTTGCACATAATTATGTGGAAAATAGCGATAATATCAAAGAAAATCAATTCGGGGATTTTGATGAGGACTGGGAAAACTTTGAGTTTGATGCAGAGCCAAAAGCCATCAAAAAAAACAAGATCTATCGTCCCCAATCAACCCTGGACACAAACAGACGATGACACCAAATACGAGTCACACGGTATGCATGTGACAGGTATTGTAGCCGGTAATAGCAAAGAAGCCGCTGCTACTGGAGAACGCTTTTTAGGAATTGCACCAGAGGCCCAAGTCATGTTCATGCGTGTTTTTGCCAACGACGTCATGGGATCAGCTGAATCACTCTTTATCAAAGCTATCGAAGATGCCGTGGCTTTAGGAGCAGATGTGATCAACCTGAGTCTTGGAACCGCTAATGGGGCACAGCTTAGTGGCAGCAAGCCTCTAATGGAAGCAATTGAAAAAGCTAAAAAAGCCGGTGTATCAGTTGTTGTAGCAGCAGGAAATGAGCGCGTCTATGGATCTGACCATGATGATCCATTC-C-CAACAAATCCAGACTATGGTTTC'GTCGC'TT〉Spy0416A-6/Schmitz1/39(血清型12);SEQIDNO:177GCAGTTATTGACACAGGGATCGATCCGGCCCATCAAAGCATGCGCATCAGTGATGTAGCGATAATATCAAAGAAAATCAATTCGAGGATTTTGATGAGGACTGGGAAAACTTTGAGTTTGATGCAGAGGCAGAGCCAAAAGCCATCAAAAAACACAAGATCTATCGTCCCCAATCAACCCAGGCACCGAAAGAAACTGTTATCAAAACAGAAGAAACAGATGGTTCACATGATATTGACTGGACACAAACAGACGATGACACCAAATACGAGTCACACGGTATGCATGTGACAGGTATTGTAGCCGGTAATAGCAAAGAAGCCGCTGCTACTGGAGAACGCTTTTTAGGAATTGCACCAGAGGCCCAAGTCATGTTCATGCGTGTTTTTGCCAACGACGTCATGGGATCAGCTGAATCACTCTTTATCAAAGCTATCGAAGATGCCGTGGCTTTAGGAGCAGATGTGATCAACCTGAGTCTTGGAACCGCTAATGGGGCACAGCTTAGTGGCAGCAAGCCTCTAATGGAAGCAATTGAAAAAGCTAAAAAAGCCGGTGTATCAGTTGTTGTAGCAGCAGGAAATGATCGGTTCTCCCTCAACAGGTCGAACACCAACATCAGTGGCAGCTATAAACAGTAAGTGGGTGATTCAACGTCTAATGACGGTCAAAGAATTAGAAAACCGTGCCGATTTAAACCATGGTAAAGCCATCTaTTCAGAGTCTGTCGActttaaaGACATAAAAGATAGCCTA220<formula>formulaseeoriginaldocumentpage221</formula>TGAGTCTTGGGACCGCTAATGGTGCACAGCTTAGTGGCAGCAAGCCTCTAATGGAAGCAATTGAAAAAGCTAAAAAAGCCGGTGTATCAGTTGTTGTAGCAGCAGGAAATGAGCGCGTCTATGGATCTGACCATGATGATCCATTGGCAACAAATCCAGACTATGGTTTGGTCGGTTCTCCCTCAACAGGTCGAACACCAACATCAGTGGCAGCTATAAACAGTAAGTGGGTGATTCATCTaTTCAGAGTCTGTCGACTTtAAAGACATAAAAGATAGCCTA>Spy0416A-6/Schmitz1/94(血清型l);SEQIDNO:180GCAGTTATTGACACAGGGATCGATCCGGCCCATCAAAGCATGCGCATCAGTGATGTATCAACTGCTAAAGTAAAATCAAAAGAAGACATGCTAGCACGCCAAAAAGCCGCCGGTATTAATTATGGGAGTTGGATAAATGATAAAGTTGTTTTTGCACATAATTATGTGGAAAAATTGCACCAGAGGCCCAAGTCATGTTCATGCGTGTTTTTGCCAACGACATCATGGGATCTCAACCTGAGTCTTGGAACCGCTAATGGGGCACAGCTTAGTGGCAGCAAGCCTCTAATGGCGCGTCTATGGATCTGACCATGATGATCCATTGGCGACAAATCCAGACTATGGTTTGGTAAAGCCATCTATTCAGAGTCTGTCGACTttAAAGACATAAAAGATAGCCTA>Spy0416A-6/Schmitz1/253(血清型49);SEQIDNO:181GCAGTTATTGACACAGGGATCGATCCGGCCCATCAAAGCATGCGCATCAGTGATGTATCAACTGCTAAAGTAAAATCAAAAGAAGACATGCTAGCACGCCAAAAAGCCGCCGGTTCAACCCAGGCACCGAAAGAAACTGTTATCAAAACAGAAGAAACAGATGGTTCACATGATATTGACTGGACACAAACAGACGATGACACCAAATACGAGTCACACGGTATGCATGTGACAGGTATTGTAGCCGGTAATAGCAAAGAAGCCGCTGCTACTGGAGAACGCTTTTTAGGAATTGCACCAGAGGCCCAAGTCATGTTCATGCGTGTTTTTGCCAACGACGTCATGGGATCGAAGCAATTGAAAAAGCTAAAAAAGCCGGTGTATCAGTTGTTGTAGCAGCAGGAAATGATAAAGCCATCTATTCAGAGTCTGTCGACTTTAAAGACATAAAAGATAGCCTA>Spy0416A-6/Schmitz1/174(血清型6);SEQIDNO:182GCAGTTATTGACACAGGGATCGATCCGGCCCATCAAAGCATGCGCATCAGTGATGTATCAACTGCTAAAGTAAAATCAAAAGAAGACATGCTAGCACGCCAAAAAGCCGCCGGTTAGCGATAATATCAAAGAAAATCAATTCGAGGATTTTGATGAGGACTGGGAAAACTTTGAGTTTGATGCAGAGGCAGAGCCAAAAGCCATCAAAAAACACAAGATCTATCGTCCCCAATCAACCCAGGCACCGAAAGAAACTGTTATCAAAACAGAAGAAACAGATGGTTCACATGAATTGCACCAGAGGCCCAAGTCATGTTCATGCGTGTTTTTGCCAACGACGTCATGGGATCTCAACCTGAGTCTTGGAACCGCTAATGGGGCACAGCTTAGTGGCAGCAAGCCTCTAATGGAAGCAATTGAAAAAGCTAAAAAAGCCGGTGTATCAGTTGTTGTAGCAGCAGGAAATGAGCGCGTCTATGGATCTGACCATGATGATCCATTGGCAACAAATCCAGACTATGGTTTGG223GTGATTCAACGTCTAATGACGGTCAAAGAATTAGAAAACCGTGCCGATTTAAACCATGGTAAAGCCATCTaTTCAGAGTCTGTCGACTTTAAAaACATAAAAGATAGCCTA>Spy0416A-6/Schmitz1/176(血清型83);SEQIDNO:183GCAGTTATTGACACAGGGATCGATCCGGCCCATCAAAGCATGCGCATCAGTGATGTATCAACTGCTAAAGTAAAATCAAAAGAAGACATGCTAGCACGCCAAAAAGCCGCCGGTATTAATTATGGGAGTTGGATAAATGATAAAGTTGTTTTTGCACATAATTATGTGGAAAATAGCGATAATATCAAAGAAAATCAATTCGAGGATTTTGATGAGGACTGGGAAAACTTTGGAAGCAATTGAAAAAGCTAAAAAAGCCGGTGTATCAGTTGTTGTAGCAGCAGGAAATGAGCGCGTCTATGGATCTGACCATGATGATCCATTGGCAACAAATCCAGACTATGGTTTGGTCGGTTCTCCCTCAACAGGTCGAACACCAACATCAGTGGCAGCTATAAACAGTAAGTGGGTGATTCAACGTCTAATGACGGTCAAAGAATTAGAAAACCGTGCCGATTTAAACCATGGTAAAGCCATCTATTCAGAGTCTGTCGACTTTAAAAACATAAAAGATAGCCTA>Spy0416A-6/Schmitz1/234(血清型44);SEQIDNO:184GCAGTTATTGACACAGGGATCGATCCGGCCCATCAAAGCATGCGCATCAGTGATGAGTTTGATGCAGATGCAGAGCCAAAAGCCATCAAAAAACACAAGATCTATCGTCCCCAATCAACCCAGGCACCGAAAGAAACTGTTAT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GACCGGACCATCACCTGGGGAGCTGCACAGGCTGTACATTCTTTATGGTGGTGGTGATGGCTTTTCAGCATTTAMAAAGCTAAATTAATCGGAGCTCTCTTCCAATAACA4.2抗原性片段Spy0872-2>Spy0872-2/SF370(血清型l);SEQIDNO:17237TTCAGCATTTAAAAAAGCTAAATTAATCGGAGCTATTAACACAGATACTGAAGCTTTCAACAACAACAAACAAAAATACTATCTCTAGTTCCACTCTTCCAATAACA4.3其他化膿性鏈球菌分離林和/或血清型的同源序列>Spy0872-2/Schmitz1/7(血清型4);SEQIDNO:197GCTATAATAAATCATGCTAATGATATTGTTAAAACAGTTACTGAACGAAAAATCGAAAGAGATAACAACAAAcaAAAATACTATCTCTAATTCCACTCTTCCAATAACA>Spy0872-2/Schmitz1/39(血清型12);SEQIDNO:198GTCGGTAACTTAGTAACAACGGCTCAGCTTACTATTGCTAAGAAAACTTTTCCAACTGTTGACTTTGCTATGACCAATAATGGTGGTATTCGAAGTGACCTAGTTGTCAAAAATGACCGGACCATCACCTGGGGAGCTGCACAGGCTGTACAACCATTTGGTAATATCCTTCAAGTCACACAGTATCATTAGTAAGGTTTTTAGAAATCGTGATGGCAATATAGTGTCTAGTGAAAACAACGACAAACAAAAATACTATCTCTAGTTCCACTCTTCCAATAACA>Spy0872-2/Schmitz1/55(血清型118);SEQIDNO:199GCTATAATAAaTCATGCTAATGATATTGTTAAAACAGTTACTGAACGAAAAATCGTGACTTTGCTATGACCAATAATGGTGGTATTCGAAGTGACCTAGTTGTCAAAAATGACCACTCTGATATCCCCTTCAAGATAGTTAAGGTTTATAAAGACAATGGTGAAGAAATTAACTTAACAACTACTTACACCGTTGTTGTCAACGACTTTCTTTATGGTGGTGGTGATGGCTTACAaCGACAAACAAAAATACTATCTCTAGTTCCACTCTTCCAATAACA>Spy0872-2/Schmitz1/56(血清型28);SEQIDNO:200GCTATAATAAATCATGCTAATGATATTGTTAAAACAGTTACTGAACGAAAAATCGGGACCATCACCTGGGGAGCTGCACAGGCTGTACAACCATTTGGTAATATCCTTCAAGTCACACAGTATCATTAGTAAGGTTTTTAGAAATCGTGATGGCAATATAGTGTCTAGTGAGATCATTTCAGACCTTTTGACTTCTACTGAAAACACTAATAACAGCCTTGGCAAAAAAGAAACAACAACAAACAAAAATACTATCTCTAGTTCCACTCTTCCAATAACA>Spy0872-2/Schmitz1/94(血清型l);SEQIDNO:201GCTATAATAAATCATGCTAATGATATTGTTAAAACAGTTACTGAACGAAAAATCGTGACTTTGCTATGACCAATAATGGTGGTATTCGAAGTGACCTAGTTGTCAAAAATGACCGGACCATCACCTGGGGAGCTGCACAGGCTGTACAACCATTTGGTAATATCCTTCAAGTC240TTCAGCATTTAAAAAAGCTAAATTAATCGGAGCTATTAACACAGATACTGAAGCTTTCAACAACAACAAACAAAAATACTATCTCTAGTTCCACTCTTCCAATAACA>Spy0872-2/Schmitz1/253(血清型49);SEQIDNO:202GCTATAATAAATCATGCTAATGATATTGTTAAAaCAGTTACTGAACGAAAAATCGACAACGACaAACAAAAATACTATCTCTAGTTCCACTCTTCCAATAACA>Spy0872-2/Schmitz1/176(血清型83);SEQIDNO:203GCTATAATAAATCATGCTAATGATATTGTTAAAACAGTTACTGAACGAAAAATCG<formula>formulaseeoriginaldocumentpage242</formula>ACaACGACAAACAAAAATACTATCTCTAGTTCCACTCTTCCAATAACA>Spy0872-2/Schmitz1/234(血清型44);SEQIDNO:205GCTATAATAAATCATGCTAATGATATTGTTAAAACAGTTACTGAACGAAAAATCGTGACTTTGCTATGACCAATAATGGTGGTATTCGAAGTGACCTAGTTGTCAAAAATC-ACCGTTAAAAATTATGTAACTTCAAACCTTGAAAGCTCGACAAAAGTTAATAGTGCTGGTAAACACAGTATCATTAGTAAGGTTTTTAGAAATCGTGATGGCAATATAGTGTCTAGTGAAAACAACGACaAACAAAAATACTATCTCTAGTTCCACTCTTCCAATAACA>Spy0872-2/Schmitz1/22(血清型4);SEQIDNO:206GCTATAATAAATCATGCTAATGATATTGTTAAAACAGTTACTGAACGAAAAATCGGGACCATCACCTGGGAAGCTGCACAGGCTGTACAACCATTTGGTAATATCCTTCAAGTCATTCAAATGACTGGTCAACACATTTACGATGTCCTAAATCAGCAATACGATGAAAACCAGACCTATTTTCTTCAAATGTCAGGTTTAACATACACTTATACAGATAATGATCCTAAGA243TTAACAACTACTTACACCGTTGTTGTCAACGACTTTCTTTATGGTGGTGGTGATGGCTTGTGAAATCATTTCAGACCTTTTGACTTCTACTGAAAACACTAATAACAGCTTTGGCAAAAAAGAGATAACAACAAACAAAAATACTATCTCTAATTCCACTCTTCCAATAACA5.全長(zhǎng)序列>Spy0488/SF370(血清型1);SEQIDNO:18TTGCGGCAGATTCAGTCCATTCGTCTGATAGACGTTTTGGAGTTGGCTTTTGGAGTTGGCTATAAGGAAGAAACAACCTCTCAGTTTTCTTCGGATCAGCCCTCCCAAGTGGTTTTGTATCGAGGTGAGGCTAACACGGTTAGGTTTGCCTATACCAATCAGATGTCTCTGATCTGGTATGGGTCATGTTTATGAGGGCTTTCAAACTTCTGCTAGAGGGATTTTTACGATGTCAGGAGTTCCTGAAAGCACTGTTCCCGTTGCTAACCCTAATGTACAAACCAAATATATAAGGTATTTCAAAGTCATTGATGATATGCATAACACAATGTATAAAGGAACTGTTTTTCTTGTTCAACCGCAAGCTTGGAAATACACCATGAAATCTGTTGATCAGTTACCAGTAGATGACTTGAACCATATTGGCGTTGCTGGTATTGAACGAATGACAACTCTCATTAAAAATGCGGGTGCCCTTTTAACCACAGGAGGTAGTGGGGCTTTCCCAGACAATATTAAAGTATCTACCTCCAGCAGTTTTATGGAAAAAAGGCTCCGTAAAAGAGCCTACTGAAGCCGATCAATCTGTCGGAACACCGACTCCTGGTATTCCTGGTAAATTCAAACGAGACCAGAGCCTTAACGGGAGAAGCCTGCCAGCGATGTTAAGGTAAGACCAGCAGAAGTTGGTAGCTGGCTAGAACCAGCGACAGCTCTTCCTAGTGTTGAAATGAGCGCTGAGGACAGGTTAAAAAGT>Spy0895/SF370(血清型1);SEQIDNO:19ACTAATAATCAAACACTAGACATCCTTTTGGATGTCTATGCTTATAATCACGCCTTTAAAAGAGCGCAGAGAATTGAACCTTGCCTTTCTAGCGGAACATGCAGCAGAGAATCGGACCATTGAAGACCAGTATCACTGTTCATTATGGCTTAACCAATCGCTTGAAGATGAGCAATTCCAAACTTCAAGGCTTATATTTTTGATACAAAC-AATGACCAATATGATACCTGGCCAGTCTCGCAATGTGACGACCAAAAGCTTAGCAGACATGTTGACGTTGACCTCCTTACCTCAGGAAATCAAGGACTTGGTTTTTTTGTTACGACATTTTGAAAAGGCTGTCCGTAATCCTCTGGCTCATTTGATTAAGCCTTTTGATGAAGAGGAACTGCATCGCACCACTCATTTTTTTGGAGACAATCTATTGTC>Spyl536/SF370(血清型1);SEQIDNO:207ATTGAAATGCCTGGAGGCGCTTACGATATTCGGACTGTCTTACAAGTCAATGGCAAAGAAGACAAACGAAAAGGAGCTTACCAGTTTGTTGCAGTGGGCATTAGTCGTGCCAGCCTCGCTCAGCTATTATATGCTTGGCTGACACCGTTTACTGAAATTAGTACAGCAGAAGATACAACAGGCGGATACAGCGATGCTGATTTCCTTCGAATTAATCAATTTTACATGGAAACATCACAAAATGCAGCTATTTATCAAGCTTTATCCTTAGCTGGAAAACCAGTTACATTAGATTATAAAGGCGTATATGTTTTAGACGTAAACAACGAATCTACTTTTAAAGGAACGCTACACTTAGCAGATACTGTAACAGGTGTAAATGGTAAACAGTTTACTAGTTCAGCAGAACGATAATAAGCCTAAAAAAGGAGTTGGCCGTATTATCAAACTGAAAAATGGGAAAAATGGGATTGGCATTGCCTTGACTGATCATACAAGTGTCAATTCAGAAGACACAGTGATCTTTAGTACTAAAGGAGTAGGAGGACCTAGTGCTGGTCTAATGTTTACTCTTGATATATATGATCAAATAACTAAAGAAGATTTACGCAAGGGCCGTACAATTGCAGGTACAGGAACTATTGGAA>Spyl666/SF370(血清型1);SEQIDNO:208ACAAAAGAATTTCATCACGTGACCGTACTCCTTCACGAAACAGTGGACATGCTTGATTGATGGTATCTTATATGACCTTGGTGTTTCCAGCCCGCAATTGGATGAAAGAGAACGAGGGTTTTCTTATAAACAAGATGCTCCATTGGATATGCGCATGGATCGTCAGTCGCTCTGAAGTCAATGATGAATTGGGAGCGGCCGATGAATCTATTCAGGACGCTATGGAATTATTAGCCCTTGATGGTCGTATCTCAGTTATTACCTTCCATTCTCTGGAAGATCGCCTAACCAGGAAA>Spyl727/SF370(血清型1);SEQIDNO:20GTGACAACGACGGAACAAGAACTTACCTTGACTCCCTTACGTGGGAAAAGTGGCACCTATTCTACCTGCCTTAGCAAAAGAACAGATTGCGCCACAGTTACTTTGGGCCAAACG<formula>formulaseeoriginaldocumentpage247</formula>權(quán)利要求1.由如下構(gòu)成的肽SEQIDNO4、SEQIDNO1、SEQIDNO2、SEQIDNO7、SEQIDNO5、SEQIDNO6或SEQIDNO3的化膿性鏈球菌的一個(gè)抗原或者SEQIDNO4、SEQIDNO1、SEQIDNO2、SEQIDNO7、SEQIDNO5、SEQIDNO6或SEQIDNO3的化膿性鏈球菌的一個(gè)抗原的功能活性變體。2.由如下構(gòu)成的肽SEQIDNO:4、SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:7、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6或SEQIDNO:3的化膿性鏈球菌的一個(gè)抗原或者SEQIDNO:4、SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:7、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6或SEQIDNO:3的化膿性鏈球菌的一個(gè)抗原的功能活性變體，以及a)如果所述抗原為SEQIDNO:1,1-350個(gè)附加的氨基酸殘基，優(yōu)選地1-200，更優(yōu)選地1-150,甚至更優(yōu)選地最多1-100，還更優(yōu)選地最多1-50,最優(yōu)選地l、2、3、4、5、10、15、20或25個(gè)附加的氨基酸殘基；或b)如果所述抗原為SEQIDNO:2，1-200個(gè)附加的氨基酸殘基，優(yōu)選地1-150，更優(yōu)選地1-100，甚至更優(yōu)選地最多1-50，還更優(yōu)選地最多1-25,最優(yōu)選地l、2、3、4、5、6、7、8、9或10個(gè)附加的氨基酸殘基，；或c)如果所述抗原為SEQIDNO:3，1-100個(gè)附加的氨基酸殘基，優(yōu)選地l-75，更優(yōu)選地1-50，甚至更優(yōu)選地最多1-25,還更優(yōu)選地最多1-10,最優(yōu)選地l、2、3、4、或5個(gè)附加的氨基酸殘基；或d)如杲所述抗原為SEQIDNO:4，1-15G個(gè)附加的氨基酸殘基，優(yōu)選地1-100，更優(yōu)選地1-75,甚至更優(yōu)選地最多1-50，還更優(yōu)選地最多1-25，最優(yōu)選地l、2、3、4、5、6、7、8、9或10個(gè)附加的氨基酸殘基；或e)如果所述抗原為SEQIDNO:5,1-450個(gè)附加的氨基酸殘基，優(yōu)選地1-300,更優(yōu)選地1-150,甚至更優(yōu)選地最多1-100，還更優(yōu)選地最多1-50，最優(yōu)選地l、2、3、4、5、10、20、30或40個(gè)附加的氨基酸殘基；或f)如果所述抗原為SEQIDNO:6或SEQIDNO:7，1-250個(gè)附加的氨基酸殘基，優(yōu)選地1-2QG，更優(yōu)選地1-15G，甚至更優(yōu)選地最多1-100,還更優(yōu)選地最多1-50,最優(yōu)選地l、2、3、4、5、10、15、20或25個(gè)附加的氨基酸殘基。3.權(quán)利要求1或2中任一項(xiàng)的肽，其還由與所述抗原異源的至少一個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成，優(yōu)選地是包含標(biāo)記蛋白的附加的氨基酸序列。4.權(quán)利要求2或3中任一項(xiàng)的肽，其中所述附加的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基位于所述抗原C端、N端或C端和N端的側(cè)翼。5.權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的肽，其中所述功能活性變體基本上相同于SEQIDNO:4、SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:7、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6或SEQIDNO:3的任意抗原，但不同于SEQIDNO:4、SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:7、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6或SEQIDNO:3的任意抗原在于其衍生自化膿性鏈球菌的不同血清型的同源序列，特別是其中所述血清型為M2、M3、M4、M5、M6、Mll、M12、M14、M19、M22、M24、M25、M28、M44、M49、M57、M59、M60、M61、M76、M83、M84、M87、M89或M118。6.權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)的肽，其中所述功能活性變體為任意SEQIDNOS:1-7的一部分，此部分由任意SEQIDNOS:l-7的抗原的氨基酸的至少60%，優(yōu)選地至少70%,更優(yōu)選地至少80%，還更優(yōu)選地至少90%，甚至更優(yōu)選地至少95%,最優(yōu)選地99%構(gòu)成。7.權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)的肽，其中任意SEQIDNOS:1-7的抗原的所述功能活性變體與任意SEQIDN0S:1-7的抗原具有至少50%的序列一致性，特別是至少60%，優(yōu)選地至少70%,更優(yōu)選的至少80%,還更優(yōu)選的至少90%,甚至更優(yōu)選地至少95%,最優(yōu)選地99%與任意SEQIDN0S:1-7的抗原的序列一致性。8.權(quán)利要求7中的肽，其中所述變體通過(guò)至少一個(gè)保守性氨基酸替換衍生自任意SEQIDN0S:1-7的抗原。9.包含與SEQIDNO:1、2、3、4、5、6或7中至少一種具有至少95%序列一致性的氨基酸序列的肽，其中所述肽不是Spy0269、Spy0292、Spy0416A或Spy0872。10.肽，其特征在于其包含至少2個(gè)，優(yōu)選地至少3個(gè)，更優(yōu)選地至少4個(gè)如權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)所定義的抗原。11.編碼根據(jù)權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)的肽的核酸或與其互補(bǔ)的核酸，特別是SEQIDN0S:11-17的任意序列的DNA序列或?qū)?yīng)的RNA序列。12.權(quán)利要求ll的核酸，其中所述核酸位于載體中。13.藥物組合物，特別是疫苗，其包含(i)至少一種根據(jù)權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)的肽，和/或(ii)至少一種包含或由任意SEQIDNO:8、SEQIDNO:9或SEQIDNO:10的序列或其功能活性變體構(gòu)成的肽，和(iii)任選地藥物學(xué)可接受的載體或賦形劑。14.藥物組合物，其含有(i)根據(jù)權(quán)利要求11的核酸和/或與其互補(bǔ)的核酸，和/或(ii)編碼包含或由任意SEQIDNO:8、SEQIDNO:9或SEQIDNO:IO的序列的肽的核酸，尤其是任意SEQIDNO:18、SEQIDNO:19或SEQIDNO:20的DM序列，或其功能活性變體或與其互補(bǔ)的核酸或?qū)?yīng)的RNA序列，以及(iii)任選地藥物學(xué)可接受的載體或賦形劑。15.權(quán)利要求14的藥物組合物，其中所述核酸包含在栽體和/或細(xì)胞中。16.特異性結(jié)合權(quán)利要求1的抗原的抗體及其功能活性片段。17.權(quán)利要求16的抗體或其功能活性片段，其中所述抗體為單克隆、多克隆、嵌合或人源化的抗體，或其中所述功能活性片段包括Fab片段。18.產(chǎn)生根據(jù)權(quán)利要求16或17的抗體的雜交瘤細(xì)胞系。19.產(chǎn)生根據(jù)權(quán)利要求16或17的抗體的的方法，其特征在于下列步驟(a)將有效量的根據(jù)權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)的肽施用至動(dòng)物；和(b)從所述動(dòng)物中分離由響應(yīng)步驟(a)的施用的動(dòng)物產(chǎn)生的抗體。20.產(chǎn)生根據(jù)權(quán)利要求16或17的抗體的的方法，其特征在于下列步驟(a)使B細(xì)胞接觸有效量的根據(jù)權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)的肽；(b)將步驟(a)中的B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合以獲得雜交瘤細(xì)胞;和(c)分離由所述培養(yǎng)的雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生的抗體。21.權(quán)利要求19或20的方法，其中另外純化所述分離的抗體。22.藥物組合物，特別是疫苗，其包含根據(jù)權(quán)利要求16或17的抗體。23.藥物組合物，其包含如權(quán)利要求13所定義的肽、或如權(quán)利要求14所定義的核酸、或根據(jù)權(quán)利要求16或17的抗體或其功能片段，用于免疫受試者抵抗感染或治療具有感染的受試者，其中所述感染優(yōu)選地是化膿性鏈球菌感染。24.如權(quán)利要求13所定義的肽、或如權(quán)利要求14所定義的核酸、或根據(jù)權(quán)利要求16或17的抗體或其功能片段在制備用于免疫抵抗或治療感染的藥物中的用途，優(yōu)選地是化膿性鏈球菌感染。25.免疫受試者抵抗感染或治療具有感染的受試者的方法，該方法包括(a)向患者施用有效量的如權(quán)利要求13所定義的肽、或如權(quán)利要求14所定義的核酸、或根據(jù)權(quán)利要求16或17的抗體或其功能片段。26.權(quán)利要求25的方法，其中所述感染為化膿性鏈球菌感染。27.診斷化膿性鏈球菌感染的方法，其包括步驟(a)將從受試者獲得的樣品與根據(jù)權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)的肽相接觸；和(b)檢測(cè)所述樣品中抗化膿性鏈球菌的抗體的存在。28.診斷化膿性鏈球菌感染的方法，其包括步驟(a)將從受試者獲得的樣品與根據(jù)權(quán)利要求16或17的抗體接觸；和(b)檢測(cè)所述樣品中化膿性鏈球菌的抗原的存在。29.鑒定能結(jié)合根據(jù)權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)的肽的配體的方法，其包括(a)提供包括所述肽的測(cè)試系統(tǒng)，(b)將所述測(cè)試系統(tǒng)與測(cè)試化合物相接觸，和(c)檢測(cè)響應(yīng)所述測(cè)試化合物與所述肽或功能活性變體結(jié)合而產(chǎn)生的信號(hào)。30.根據(jù)權(quán)利要求l-10中任一項(xiàng)的任意肽用于分離和/或純化和/或鑒定所述肽的相互作用伴侶的用途。全文摘要本發(fā)明涉及由任意SEQIDNOS1-7的化膿性鏈球菌(S.pyogenes)的一個(gè)抗原或其功能活性變體構(gòu)成的肽，任選地進(jìn)一步由下列組成附加氨基酸殘基；對(duì)其編碼的核酸；包含所述肽或所述核酸的藥物組合物，特別是疫苗；特異性結(jié)合所述抗體的抗體或其功能活性片段；產(chǎn)生所述抗體的雜交瘤細(xì)胞系；產(chǎn)生所述抗體的方法；包含所述抗體的藥物組合物；所述抗體或所述核酸在制備用于免疫或治療受試者的藥物中的用途；所述抗體或其功能片段在制備用于治療感染的藥物中的用途；診斷化膿性鏈球菌感染的方法；鑒定能夠結(jié)合所述肽的配體的方法；所述肽在分離和/或純化和/或鑒定所述肽的相互作用伴侶中的用途。文檔編號(hào)C07K16/00GK101490083SQ200780025608公開(kāi)日2009年7月22日申請(qǐng)日期2007年7月6日優(yōu)先權(quán)日2006年7月7日發(fā)明者A·馮加拜因,A·邁因克,B·森,E·納吉,M·舒恩,M·貝格爾申請(qǐng)人:英特塞爾股份公司