專利名稱：：馬先蒿木脂素類化合物、制備方法及應用的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及一種馬先蒿木脂素類化合物、制備方法及應用，屬于天然植物提取
技術領域：
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背景技術：
：近年來，自由基清除剤及抗氧化劑在食品氧化變質中的作用越來越受到人們的關注?？寡趸瘎┲饕譃閮深?，一類是天然物質，如維生素E、維生素C、維生素A、黃酮類化合物等，其特點為低毒、低活性、不穩(wěn)定。另一類為合成抗氧化劑，如叔丁基對羥基茴香醚(butylatedhydroxyanlsol,簡稱BHA)、二丁基羥基甲苯(butylatedhydroxytolune,簡稱BHT)等，活性高、且穩(wěn)定，目前被廣泛用于食品中。但由于其具有潛在的毒性和致癌作用越來越受到人們的排斥，因此尋找低毒、高效的天然抗氧化劑就成為一種必然趨勢。馬先蒿屬植物資源豐富，藥用種類繁多，有的種類在民間應用歷史悠久。從馬先蒿屬植物中已分離出環(huán)烯醚萜、黃酮、苯丙素類化合物。其中苯丙素類化合物顯示出較強的抗氧化、抗腫瘤等生物活性?，F有技術中沒有馬先篙提取物抗氧化活性和抗運動疲勞活性方面的報道。
發(fā)明內容本發(fā)明目的是提供一種從天然植物馬先蒿提取的具有抗氧化活性的提取物、從提取物分離的化合物及其立體異構體作為活性成分，用于制備天然抗氧化剤和抗運動疲勞藥物方面的應用。本發(fā)明的目的是這樣實現的這種馬先蒿木脂素類化合物包括從密穗馬先蒿植物提取的馬先篙正丁醇提取物、馬先蒿乙酸乙酯提取物或從馬先蒿正丁醇提取物分離得到的馬先蒿木脂素甲Dens化口化osldeA化合物(1)及立體異構體(+)-1solar1s1res1no"l3a-0-/-D-glucopyranos化e化合物(2),化合物(1、2)的結構如式1和式2所示。所述馬先蒿木脂素類化合物的制備方法，按照如下步驟制備A、樣品粉碎將11Kg密穗馬先蒿(/^aj7a/^r&(/6y7575X7/(^Franch)干樣用植物粉碎機粉碎至40-80目；B、提取以3倍于馬先蒿粉碎物重量的95%乙醇為溶劑，將粉碎好的樣品在50。C恒溫條件下熱提取3次，第1次4小時，第2次與第3次均為3小時，紗布過濾，合并濾液得到提取液；C、脫脂將提取液減壓濃縮得到的1.1kg浸膏溶于5L水中，用3X5L石油醚處理水相，分層后，分液除去石油醚部分，剩余為脫脂后的水相部分；D、馬先蒿正丁醇提取物的制備將脫脂后的水相部分用3x5L正丁醇萃取，回收后減壓濃縮至干，得正丁醇提取物。所述馬先蒿木脂素類化合物的制備方法，化合物(1)馬先蒿木脂素甲Dens"isp"icosldeA和化合物(2)(+)-1solar1s化es1no13a-0-/-D-glucopyranoslde的制備是將步驟D得到的正丁醇提取物用200-300目柱層析硅膠拌樣后，均勻地將拌樣硅膠裝于上層，用氯仿-甲醇梯度洗脫,條件(vol:VOl)為100:0;95:5;90:10;80:20;70:30;在氯仿-甲醇80:20洗脫段得的組分用半制備型高效液相色譜迸一步分離，色譜柱Zorbax0DS-C18柱，250畫x4.6mm，5〃m;流動相甲醇水為1:4;收集保留時間16mln和21mln時的兩個組分，減壓濃縮分別得到化合物Denslsp化osldeA(10mg)和化合物(+)-1SolarisIreslnol3a-0-"-D-glucopyranos1cle(25mg)。所述馬先篙木脂素類化合物的制備方法，馬先蒿乙酸乙酯提取物的制備是將步驟D提取正丁醇部分后的水相部分用3x5L乙酸乙酯萃取，回收后減壓濃縮至干，得乙酸乙酯提取物。所述馬先蒿木脂素類化合物作為制備抗氧化和抗運動疲勞藥物活性組分的應用，其特征在于按常規(guī)制劑方法，以馬先蒿正丁醇提取物、馬先蒿乙酸乙酯提取物、馬先篙木脂素甲DenslsplcosldeA化合物(1)或立體異構體(+)-lsolar1s化es"ino13a-0-D-glucopyranoslde化合物(2)其中一種或幾種為l份計作為活性組分，加入l-99份口服制剤輔料制成濃縮丸、片剤、膠囊剤、顆粒剤或口服液。所述馬先篙木脂素類化合物作為制備抗氧化和抗運動疲勞功能食品活性組分的應用，其特征在于按常規(guī)飲料生產方法，以馬先篙正丁醇提取物、馬先蒿乙酸乙酯提取物、馬先蒿木脂素甲Densls口化os化eA化合物(1)或立體異構體(+)-i'solan's1「es1nol3a-0-/-D-glucopyranoslde化合物(2)其中一種或幾種為1份廿作為活性組分，加入10-90份飲料組合物成分制成包裝飲料。所述馬先蒿木脂素類化合物作為制備自由基清除劑及抗氧化劑化妝品活性組分的應用，其特征在于按化妝品生產方法，以馬先蒿正丁醇提取物、馬先蒿乙酸乙酯提取物、馬先蒿木脂素甲DenslsplcosldeA化合物(1)或立體異構體(+)-化olar1s1res1no]3a-0-"-D'glucopyranoslde化合物(2)其中一種或幾種為l份廿作為活性組分，加入l-90份化妝品功能成分制成化妝品。本發(fā)明提供的馬先蒿木脂素類化合物在清除自由基活性研究動物試驗(詳見附件)中表明，馬先蒿木脂素甲Dens化plcosldeA和(+)-化o化r化1res1no13-a-0-/-Dg"lucopyranos1cle具有很強的抗氧化活性，比對照藥劑BHA強；以它為活性成分的密穗馬先蒿乙酸乙酯和正丁醇提取物也具有很強的抗氧化活性和體內抗運動疲勞活性，有在開發(fā)新的天然抗氧化剤和抗運動疲勞藥物中作為活性組分應用的廣闊前景。圖1本發(fā)明化合物1和化合物2清除自由基活性實驗圖1中可以看出對照組叔丁基對羥基茴香醚(butylatedhydroxyanlsol,BHA)與化合物1和化合物2的DPPH自由基清除活性與其濃度的關系,叔丁基對羥基茴香醚與化合物1和2的SC5o值分別為20.53、10.77和8.02mmol/L,可信限分別為96.04%,93.64%和96.09%。圖2是本發(fā)明馬先蒿粗提物的清除自由基活性實驗圖2中可以看出對照組叔丁基對羥基茴香醚(butylatedhydroxyan化ol,BHA)與馬先篙的乙酸乙脂萃取物、正丁醇萃取物的DPPH自由基清除活性與其濃度的關系，乙酸乙脂萃取物、正丁醇萃取物的DPPH自由基清除活性SCs。值分別為11.00、14.45mnol/L,可信限分別為97.95%和98.09%。具體實施方式實施例1(1)樣品粉碎將11kg密穗馬先蒿(/^力'0/7^7'5汰ys/幼/oFranch)干樣用植物粉碎機粉碎至40-80目；(2)提取以3倍于馬先蒿粉碎物重量的95%乙醇為溶剤，將粉碎好的樣品在50。C恒溫條件下熱提取3次，第1次4小時，第2次與第3次均為3小時，紗布過濾，合并濾液得到提取液；(3)脫脂將提取液減壓濃縮得到的為樣品重量的10%浸膏(1.1kg)溶于5L水中，用3x5L石油醚處理水相，分層后，分液除去石油醚部分，剩余為脫脂后的水相部分；(4)密穗馬先篙正丁醇提取物的制備將脫脂后的水相部分用3x5L正丁醇萃取，回收后減壓濃縮至干，稱重得正丁醇提取物200g。經過活性測試，該組分具有抗氧化活性和抗運動疲勞活性。(5)密穗馬先蒿乙酸乙酯提取物的制備將提取正丁醇部分后的水相部分用3X5L乙酸乙酯萃取，回收后減壓濃縮至干，稱重得乙酸乙酯提取物52g。經過活性測試，該組分具有抗氧化活性和抗運動疲勞活性。(6)化合物l密穗馬先蒿木脂素甲DenslsWcoslcleA和異構體化合物2(+)-1solar"is1res1no"l3a-0-/-Dgluco。yranos1de的制備方法將上述正丁醇提取物用柱層析硅膠(200-300目)拌樣，后均勻地將拌樣硅膠裝于上層，用氯仿-甲醇梯度洗脫(100:0,95:5,90:10，80:20,70:30;VO"I:VO，)。在氯仿-甲醇洗脫段(80:20)得到的組分用半制備型高效液相色譜，色譜柱:Zorbax0DS-C18柱(250畫x4.6國，5〃m);流動相甲醇水=1:4進一步分離，收集保留時間16mln和21mln時的兩個組分，減壓濃縮分別得到化合物lDenslsplcosldeA10mg和化合物2(+)-lso，arlslreslnol3a-0-/-D-glucopyranoslde25mg。分離出的化合物l(Dens1stD化os1deA)和化合物2(+)-1solaiMs1res1no"l3a0/Dgluco口yranoslde,其化學結構式為上述化合物l和2的結構是基于它的質譜和核磁共振等波譜數據而確定?；衔?的分子量為522,無色白色粉末，分子式為C26hk0u。20^-155.7°(c0.15,CHs0H)，易溶于甲醇。MeOH紫外光譜數據UV、axnmGog￡):206(4.74).紅外光譜數據IRi/maxcnr1:3419，2926,1610,1513，1430,1266,1077，1033.質譜數據FAB—MSm/z(%):521[M-H]—;HR-TOF-MSm/z:[M-H]—521.2021,calcd521.2022.化合物2的分子量為522，無色白色粉末，分子式為C26H』u。20^-45.7。(c0.74，CH30H)，易溶于甲醇。紅外光譜數據IRvmaxcm-1:3410,2900,1600，1505,1440,1250，1060，1020.質譜數據FAB—MSm/Z(%):521[M-H]'[M—H]—521.2018,calcd521.2022.二維核磁共振(2D-NMR)相關點如下結構式HR-TOF-MSm/z:核磁共振數據見表4;表4本發(fā)明化合物1和2的核磁共振波譜數據OH-，13C-,R,CD30D,《1nppm,JInHz)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>(7)制劑:按化合物1、化合物2和賦形劑重量比1:1:1的比例加入藥學可接受的輔料，制粒壓片。實施例2:(1)將干燥的密穗馬先篙根、莖、葉及果實粉碎，過40目篩；(2)用3倍于馬先蒿粉碎物重量的乙醇溶劑，在回流條件下提取，提取溫度7080°C，提取時間6小時;(3)用真空濃縮的方法，將溶劑提取物濃縮至干，將提取液減壓濃縮得到的樣品重量的IOOZ浸膏溶于水中，先用石油醚脫脂，繼而按照實施例l的方法以乙酸乙酯和正丁醇萃取，回收至干，得乙酸乙酯和正丁醇部分；(4)稱取密穗馬先篙乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物各50g，與10g流動促迸剤-微粉硅膠，20g填充剤-藥用乳糖，10g增溶剤-聚乙烯醇和2ml分散劑-吐溫80充分混合均勻，進行微粉化處理，使成固體固溶體極細粉后，加入25g助崩劑-交聯羧甲基纖維素鈉和35g粘合劑-微晶纖維素制成濕潤制剤，最后將5ml表面活性劑-聚山梨脂80溶于濕潤制剤中制粒，干燥壓片，得到天然的抗氧化剤和抗運動疲勞藥物片劑。上述實施例還可以將馬先篙乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物分別加入壓片輔料制粒壓片。上述實施例1或2中制劑方法可以按常規(guī)的制備工藝，例如，范碧亭《中藥藥劑學》(上?？茖W出版社1997年12月第1版)記載的制剤工藝，制成藥剤學可接受的任意常規(guī)剤型，例如片剤、顆粒劑、膠嚢、口含片、濃縮丸、滴丸等。為使所述剤型能夠實現，需在制備這些劑型吋加入藥學可接受的輔料，例如填充剤、崩解劑、潤滑剤、助懸剤、粘合剤、甜味剤、矯味劑、防腐劑、基質等。填充劑包括淀粉、預膠化淀粉、乳糖、甘露醇、甲殼素、微晶纖維素、蔗糖等；崩解劑包括淀粉、預膠化淀粉、微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉、交聯聚乙烯吡咯烷酮、低取代羥丙纖維素、交聯羧甲基纖維素鈉等；潤滑劑包括硬脂酸鎂、十二烷基硫酸鈉、滑石粉、二氧化硅等；助懸剤包括聚乙烯吡咯烷酮、微晶纖維素、蔗糖、瓊脂、羥丙基甲基纖維素等；粘合剤包括，淀粉漿、聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基甲基纖維素等；甜味剤包括糖精鈉、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等；矯味劑包括甜味剤及各種香精；防腐剤包括尼泊金類、苯甲酸、苯甲酸鈉、山梨酸及其鹽類、苯扎溴銨、醋酸氯乙定、桉葉油等；基質包括PEG6000，PEG4000,蟲蠟等。實施例3:按照實施例2得到的馬先蒿乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物占飲料的比例為5-50%,其它添加剤和液體成分余量混合制成保健飲料。保健飲料為固體包裝形式時包括如下重量比例的馬先蒿乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物的環(huán)糊精吸附物10-50%,其它添加剤余量混合。保健飲料為液體包裝形式時，液體成分包括水、奶、果汁其中一種或幾種。保健飲料中可包括1_30%的風味劑茶粉、可可粉、咖啡粉、奶粉、椰子粉、花生粉、核桃粉、杏仁粉、芝麻、水果粉其中一種或幾種。保健飲料中還可包括O.l-lO站勺甜味剤蔗糖、葡萄糖、麥芽四糖、木糖醇、山梨醇、阿斯巴甜其中一種或幾種。實施例4:按照實施例1或2得到的馬先蒿正丁醇提取物、馬先蒿乙酸乙酯提取物、馬先蒿木脂素甲Denslsp化osldeA化合物(1)或立體異構體(+)-1solar1s1res1no"l3a-0-/-D-glucopyranoslde化合物(2)其中一種或幾種為1份計作為活性組分，加入1-90份化妝品功能成分制成化妝口本發(fā)明列舉的實施例旨在更迸一步地闡明這種馬先篙木脂素類化合物、制備方法及在相關產業(yè)上的應用方向，而不對本發(fā)明的保護范圍構成任何限制。權利要求1、馬先蒿木脂素類化合物，其特征在于所述的馬先蒿木脂素類化合物包括從密穗馬先蒿植物提取的馬先蒿正丁醇提取物、馬先蒿乙酸乙酯提取物或從馬先蒿正丁醇提取物分離得到的馬先蒿木脂素甲DensispicosideA化合物(1)及立體異構體(+)-isolarisiresinol3a-O-β-D-glucopyranoside化合物(2)，化合物(1、2)的結構如式1和式2所示。2、根據權利要求1所述馬先篙木脂素類化合物的制備方法，其特征在于按照如下步驟制備A、樣品粉碎將11kg密穗馬先蒿(/^a/7'oy7w/s虎/7s/sp/cdFranch)干樣用植物粉碎機粉碎至40-80目；B、提取以3倍于馬先蒿粉碎物重量95%乙醇為溶剤，將粉碎好的樣品在50。C恒溫條件下熱提取3次，第1次4小時，第2次與第3次均為3小時，紗布過濾，合并濾液得到提取液；C、脫脂將提取液減壓濃縮得到的1.1kg浸膏溶于5L水中，用3x5L石油醚處理水相，分層后，分液除去石油醚部分，剩余為脫脂后的水相部分；D、馬先蒿正丁醇提取物的制備將脫脂后的水相部分用3X5L正丁醇萃取，回收后減壓濃縮至干，得正丁醇提取物。3、根據權利要求2所述馬先蒿木脂素類化合物的制備方法，其特征在于化合物(1)馬先蒿木脂素甲DenslsplcosldeA和化合物(2)(+)-1so化r1s化es1no13a-0-y5-D-glucopyranos1de的制備是將步驟D得到的正丁醇提取物用200-300目柱層析硅膠拌樣后，均勻地將拌樣硅膠裝于上層，用氯仿-甲醇梯度洗脫，條件(VOl:vol)為100:0;95:5;90:10;80:20;70:30;在氯仿-甲醇80:20洗脫段得的組分用半制備型高效液相色譜進一步分離，色譜柱:Zorbax0DS-C18柱，250畫x4.6nm，5〃m;流動相:甲醇:水為1:4;收集保留時間16mln和21mln時的兩個組分，減壓濃縮分別得到化合物Dens化p化os1deA(10mg)和化合物(+)-1solar"ls1res1no13a-0-/-D-glucopyranos1cle(25mg)。4、根據權利要求2所述馬先蒿木脂素類化合物的制備方法，其特征在于馬先蒿乙酸乙酯提取物的制備是將步驟D提取正丁醇部分后的水相部分用3x5L乙酸乙酯萃取，回收后減壓濃縮至干，得乙酸乙酯提取物。5、根據杈利要求1所述馬先蒿木脂素類化合物作為制備抗氧化和抗運動疲勞藥物活性組分的應用，其特征在于按常規(guī)制劑方法，以馬先蒿正丁醇提取物、馬先蒿乙酸乙酯提取物、馬先蒿木脂素甲Dens化D化oslcleA化合物(1)或立體異構體(+)-化olaiMs1res1no133-0-/-0-9"11^0^「3昍51加化合物(2)其中一種或幾種為l重量份計作為活性組分，加入0.199重量份口服制剤輔料制成濃縮丸、片剤、膠囊剤、顆粒剤或口服液。6、根據權利要求1所述馬先蒿木脂素類化合物作為制備抗氧化和抗運動疲勞功能食品活性組分的應用，其特征在于按常規(guī)飲料生產方法,以馬先蒿正丁醇提取物、馬先蒿乙酸乙酯提取物、馬先蒿木脂素甲Dens化p化osldeA化合物(1)或立體異構體(+)-1solar1s"ires1no13a-0-y5-D-glucopyranosi'de化合物(2)其中一種或幾種為1重量份廿作為活性組分，加入1-90重量份飲料組合物成分制成包裝飲料。7、根據權利要求1所述馬先蒿木脂素類化合物作為制備自由基清除剤及抗氧化剤化妝品活性組分的應用，其特征在于按化妝品生產方法,以馬先蒿正丁醇提取物、馬先蒿乙酸乙酯提取物、馬先蒿木脂素甲DenslsplcosldeA化合物(1)或立體異構體(+)-lsolar化lreslnol3a-0-z-D-g^copyranos1de化合物(2)其中一種或幾種為1重量份廿作為活性組分，加入1-90重量份化妝品功能成分制成化妝品。全文摘要本發(fā)明涉及一種從密穗馬先蒿植物提取的馬先蒿正丁醇提取物、馬先蒿乙酸乙酯提取物或從馬先蒿正丁醇提取物分離得到的馬先蒿木脂素甲DensispicosideA化合物(1)及立體異構體(+)-isolarisiresinol3a-O-β-D-glucopyranoside化合物(2)，本發(fā)明提供的馬先蒿木脂素類化合物在清除自由基活性研究動物試驗中表明，馬先蒿木脂素甲DensispicosideA和(+)-isolarisiresinol3-a-O-β-Dglucopyranoside和以它們?yōu)榛钚猿煞值拿芩腭R先蒿乙酸乙酯和正丁醇提取物也具有很強的抗氧化活性和體內抗運動疲勞活性，在開發(fā)新的天然抗氧化劑和抗運動疲勞藥物中作為活性組分應用有廣闊前景。文檔編號C07H15/18GK101168551SQ20071018525公開日2008年4月30日申請日期2007年11月16日優(yōu)先權日2007年11月16日發(fā)明者唐宏亮,羅都強,褚洪標申請人:河北大學