專利名稱：擬莖點(diǎn)霉十元環(huán)內(nèi)酯類化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從一株擬莖點(diǎn)霉屬印楝植物內(nèi)生真菌的次級(jí)代謝產(chǎn)物中分 離到一種新的十元環(huán)內(nèi)酯類化合物。
植物內(nèi)生真菌是一大類未被開發(fā)的生物資源，能產(chǎn)生結(jié)構(gòu)新穎、類型多樣的 活性次生代謝產(chǎn)物，尤其是從溫帶和熱帶植物中尋找內(nèi)生真菌，己成為國(guó)內(nèi)外 的研究熱點(diǎn)之一。印楝(血3必rac力teiWi^A. Juss)為熱帶樹種，在醫(yī)藥和農(nóng)藥
上均有很高的應(yīng)用價(jià)值。印度研究人員從生長(zhǎng)在印度的印楝植物中分離和鑒定
了內(nèi)生真菌(Rajagopal K et al, C"rre"t 5We'"ce, 2000, 78， 13,75; Mahesh B et al, ft/rre"t 5W朋ce， 2005, 88, 218; Verma VC et aI ，，約？ro6/a/Aco/(拔乂 2007, 54, 119)， 但未涉及到活性次級(jí)代謝產(chǎn)物。
從采集自云南省元江縣的印楝植物莖皮部位分離到內(nèi)生真菌，其中一株菌 YM 311483鑒定為擬莖點(diǎn)霉屬。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道已從一種炭角菌屬真菌iy^Ws 卿y"Wejr中分離到兩個(gè)十元環(huán)內(nèi)酯Multiplolides A禾n B (Boonphong S, et al， ./.,VW.斤M, 2001,似，965)以及從一株擬莖點(diǎn)霉屬的喜樹內(nèi)生真菌中分離到 四個(gè)十元環(huán)內(nèi)酉旨(Tan Q et al,免h . 6M瓜4"a, 2007,灘1811)。
本發(fā)明的目的是從一株擬莖點(diǎn)霉屬印楝植物內(nèi)生真菌YM 311483的發(fā)酵產(chǎn)物 中分離出新的擬莖點(diǎn)霉十元環(huán)內(nèi)酯類化合物。
本發(fā)明所述的擬莖點(diǎn)霉十元環(huán)內(nèi)酯類化合物命名為7 cHVc e t o xy-multiplolide A，分子式為C12H1606，結(jié)構(gòu)式為
本發(fā)明利用色譜分離技術(shù)從一株擬莖點(diǎn)霉屬(州o膨/^is sp.)的印楝
背景技術(shù)：

發(fā)明內(nèi)容
3"幼心rac力te /力必ca)植物內(nèi)生真菌YM 311483的發(fā)酵提取物中分離得到一種新 的十元環(huán)內(nèi)酯類化合物7cHVcetoxy-咖ltiplolide A。通過體外抗菌試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)本 發(fā)明所述的化合物具有較廣的抗菌作用，具有較強(qiáng)的藥用價(jià)值從而實(shí)現(xiàn)了本發(fā) 明的目的。
本發(fā)明所述的擬莖點(diǎn)霉十元環(huán)內(nèi)酯類化合物外觀為無色結(jié)晶，分子式C12Hw06， 高分辨質(zhì)譜ESI-MS: 279.0893 [M+Na] VH和13C核磁共振譜數(shù)據(jù)見表1 。 表1 7crAcetoxy-multiplolide A的'FI和"C核磁共振譜數(shù)據(jù)*
position
2167.5s
33.66d, 4.555.3d
43.77m54.6d
55.58d, 15. 6119.0d
65.93dd, 2. 1， 15. 6130.2d
75.63m75.1d
84.15dd, 2. 1, 8. 267.9d
92.25線3.2,8. 1， 15.936.4t
1.40dd， 2. 7， 15. 9
105.33m68.5d
111.36d， 6.718.1q
0Ac2.16s21.2q
171.,2s
*氫譜和碳譜數(shù)據(jù)都是以四甲基硅烷(TMS)為內(nèi)標(biāo)在500/125 MHz的核磁共 振儀上測(cè)定，溶于氘代氯仿，化學(xué)位移以PPm為單位，偶合常數(shù)/以Hz為單位。
根據(jù)高分辨ESI-MS和13C麗R (DEPT)譜，推出化合物的分子式為C12PU)6, 其分子量比multiplolide A大42質(zhì)量單位。紅外光譜在3522 era'及l(fā)723 cm-'處有 強(qiáng)吸收峰，表明化合物中存在羥基和酯基。'H和，(DEPT)剛R譜顯示以下信號(hào) 一個(gè)乙酰基[Sh2.16， Sc21.2(q)， l 1.2(s)]、 一個(gè)甲基雙峰(SH L 36, d ,/= 6 7 Hz)、 一個(gè)雙鍵[S,, 5.58(d，/= 15.6 Hz),5.93(dd,/= 2.1,15.6 Hz),Sc 119. 0(d), 130. 2(d)], 四個(gè)被氧化的次甲基[SH 3. 66 (d, 4. 5 Hz) ， Sc 55. 3 (d); S 3. 77 (m), Sc 54. 6 (d); S 5. 63 (m), Sc 75. 1 (d); SH 4. 15 (dd, 2. 1， 8. 2 Hz) ， Sc 67. 9 (d)]、 一個(gè)不等價(jià)的亞甲基:SH 2. 25 (ddd, /=3. 2， 8. 1, 15. 9 Hz) ， 1. 40 (dd, / = 2. 7， 15. 9 Hz), Sc 36. 4 (t)]、 一個(gè)酉旨基(Sc 167. 5)。通 過比較發(fā)現(xiàn)該化合物的W NMR和"C NMR譜與multiplolide A相似,但是化合物中 多了一個(gè)乙?；MBC譜顯示位于S,, 2. 16的甲基質(zhì)子及H-7(SH 5.63)與酯基碳(Sc 171.2)相關(guān)，表明乙酰基位于C-7上。位于C-3與C-4之間的環(huán)氧構(gòu)型經(jīng)X-晶體 衍射分析，確定為^取向。根據(jù)本發(fā)明所述化合物的一維和二維核磁實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)， 包括HMQC、 HMBC、 'H-'H COSY及N0ESY實(shí)驗(yàn)以及化合物手性中心的立體構(gòu)型，推斷 出化合物的結(jié)構(gòu)式，并命名化合物為7crAcetoxy-multiplolide A,系統(tǒng)化學(xué)名 禾爾為(4疋6《75", 8》—6-hydroxy-4-methy]—2—oxo—3, 11—dioxabicyclo[S. 1. 0]undec-8—en— 7-yl acetate。
本發(fā)明所述化合物的抗菌活性測(cè)定結(jié)果
采用濾紙片擴(kuò)散法(Barry AL et al， J. Clin. Microbiol., 1979, 10, 885) 測(cè)定對(duì)七種植物致病真菌，黑曲霉(Aspergillus niger)，灰葡萄孢(Botrytis cinerea), 燕麥鐮孢 (Fusarium avenaceum), 串珠鐮孢 (Fusarium moniliforme)， 玉蜀黍長(zhǎng)蠕孢(Helminthospori函 mayclis)， 島青霉 (Penicillium islandicum)，小長(zhǎng)喙霉(Ophiostoma minus)的最小抑制濃度 (MIC)值。結(jié)果顯示，化合物7^Acetoxy-multiplolide A抗小長(zhǎng)喙霉和灰葡萄 孢的MIC值為62. 5 pg/ml，抗黑曲霉的MIC值為125 |ig/ml，抗串珠鐮孢和玉蜀 黍長(zhǎng)蠕孢的MIC值為250 pg/ml，抗島青霉的MIC值為500 (ag/ml，
本發(fā)明所述化合物對(duì)小長(zhǎng)喙霉、灰葡萄孢、黑曲霉、串珠鐮孢、玉蜀黍長(zhǎng) 蠕孢、島青霉均有不同程度的抑制作用，抑菌譜較廣，具有作為制備抗菌藥物 的用途。在農(nóng)業(yè)領(lǐng)域作為植物殺菌、殺蟲劑。也可在人用藥物中作為制備抗菌 類藥物的活性成分。
本發(fā)明所述化合物的獲得方法-
將YM 311483菌株從試管斜面上接種到裝有100 mL PDB液體培養(yǎng)基(馬鈴 薯200 g，葡萄糖20 g，水1000 mL， pH自然)的20只500 mL三角瓶?jī)?nèi)進(jìn)行 種子培養(yǎng)，在28X:搖床恒溫培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速200 r/min。培養(yǎng)4天后將種子培養(yǎng)液 接種到200只500 mL的三角瓶中進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，每瓶裝100 mL PDB液體培養(yǎng) 基，按10%接種量接種，同上培養(yǎng)條件培養(yǎng)6天。
將完成發(fā)酵培養(yǎng)過程的產(chǎn)物經(jīng)過濾，除去菌絲體，收集發(fā)酵液，真空濃縮
5至5L，用5L乙酸乙酯萃取四次，合并萃取液，濃縮得乙酸乙酯提取物，將乙 酸乙酯提取物進(jìn)行常壓硅膠柱層析，以氯仿-丙酮溶劑系統(tǒng)從l: 0到0: l梯度 洗脫，將在TLC (GF254)板上用石油醚-乙酸乙酯(1: 1)溶劑系統(tǒng)展開時(shí)極性 最小的點(diǎn)Rf值約為0.5的組分合并，經(jīng)硅膠柱層析，用石油醚-乙酸乙酯(7: 3)溶劑系統(tǒng)沖洗，再經(jīng)反相硅膠RP-18柱層析，用甲醇-水(3: 7)溶劑系統(tǒng) 沖洗，最后用石油醚-丙酮混合溶劑重結(jié)晶，純化得無色結(jié)晶化合物 7『Acetoxy-multiplolide A為137mg。
本發(fā)明所述化合物的用途
由本發(fā)明所述化合物1.0-35%、常規(guī)助劑(甲苯、二甲苯等芳香溶劑中的任 意一種)1. 0-5. 0%、常用乳化劑(脂肪醇聚氧乙烯基醚、脂肪酸聚氧乙烯基酯、 垸基苯磺酸鈉中的任意一種)1.0-10.0%，加水至1()0%,制成水乳劑制劑。所述 百分比為質(zhì)量百分比。
本水乳劑制劑可作為植物殺菌劑，用于蔬菜、糧食、果樹、藥材等由真菌 引起的植物病害防治劑。
權(quán)利要求
1、擬莖點(diǎn)霉十元環(huán)內(nèi)酯類化合物，其特征在于命名為7α-Acetoxy-multiplolide A，分子式為C12H16O6，結(jié)構(gòu)式為
全文摘要
本發(fā)明涉及一種從一株擬莖點(diǎn)霉屬印楝植物內(nèi)生真菌的次級(jí)代謝產(chǎn)物中分離到一種新的十元環(huán)內(nèi)酯類化合物。本發(fā)明所述的擬莖點(diǎn)霉十元環(huán)內(nèi)酯類化合物命名為7α-Acetoxy-multiplolide A，分子式為C₁₂H₁₆O₆。本發(fā)明所述化合物對(duì)小長(zhǎng)喙霉、灰葡萄孢、黑曲霉、串珠鐮孢、玉蜀黍長(zhǎng)蠕孢、島青霉均有不同程度的抑制作用，抑菌譜較廣，具有作為制備抗菌藥物的用途。在農(nóng)業(yè)領(lǐng)域作為植物殺菌、殺蟲劑。也可在人用藥物中作為制備抗菌類藥物的活性成分。結(jié)構(gòu)式為右式。
文檔編號(hào)C07D493/00GK101468996SQ20071006650
公開日2009年7月1日 申請(qǐng)日期2007年12月28日 優(yōu)先權(quán)日2007年12月28日
發(fā)明者吳少華, 李治瀅, 李紹蘭, 楊麗源, 陳有為 申請(qǐng)人:云南省微生物研究所