專利名稱：：新的c-17-雜芳基甾族的cyp17抑制劑/抗雄激素物質(zhì)其合成，體外生物學活性，藥代動力...的制作方法新的C-17-雜芳基甾族的CYP17抑制齊ij/i)tt隹激素物質(zhì)其合成，體外生物學活性，藥代動力學和棚中瘤活性本申請要求申請?zhí)枮镹o.60/657，390，申請日是2005年3月2日的美國臨時申請的申請日為優(yōu)先權(quán)日，它通過弓閱結(jié)合在該文獻當中。美國政府對該發(fā)明有一個已交費的許可證，有權(quán)在限制的情況下，在由國家衛(wèi)生研究院(NIH)授予的授權(quán)號為CA27440的期限內(nèi)，由于合理的原因請求專利權(quán)人許可他人。本發(fā)明提供一種新化學物質(zhì)，尤其是一種甾族的C-17苯并吡咯，嘧啶并吡咯(氮雜苯并吡咯)和二嗪。它也提供一種苯并吡咯，嘧啶荊比咯和二嗪的合成方法。在一個具體實施例中，苯并吡咯或嘧啶并吡咯的合成方、^&括對3|3-乙酸基-17-氯-16-甲^^隹甾-5，16-二烯或它們的對以物和苯并吡咯或嘧啶并吡咯(pyrimidinoazole)親核試劑進行的親核乙烯的"加膝消除"取代反應的步驟。在另一個具體實施例中，合成二嗪的方跑括鈀催化的17-碘雄甾-5，16-二烯，-醇或它們的類似物與三丁基甲錫烷基二嗪進行的交叉偶聯(lián)反應。本發(fā)明的化合物是有效的人CYP17酶的抑制劑，也是有效的野生型和突變型雄激素受體(AR)的拮抗劑。大多數(shù)有效的CYP17抑制劑是3(3-羥基-17-(lH-苯并咪唑-l-基)雄甾-5，16-二烯(5，*斜己名為VN/124-1)，3卩45基-17-(51-嘧啶基)雄甾-5，16-二烯(15)禾Q17-(1H-苯并咪唑-l-基)雄甾4，16-二烯-3-酮(6)，ICso值分別是300、500和915nM?；衔?，6，14和15能有效PM:3H-R1881(甲基三烯甘油酯酮，一種穩(wěn)定的合成雄激素)結(jié)合到突變體和LNCaPAR與野生型AR，但就于后者有2.2至5倍高的結(jié)合能力?；衔?和6也顯示為有效的純化的AR拮抗劑。細胞生長研究表明5和6抑制DHT-刺激的LNCaP和LAPC4前列腺癌細胞的生長，它們的IC5J髓于低掉膽爾等級(SN10UM)。它們的抑制效力比得上康士得，但是顯著高于氟他胺?；衔?和6在鼠體內(nèi)的藥物代謝動力學被研究。根據(jù)化合物5和6經(jīng)皮下給藥，50mg/kg，最高血液濃度是16.82和5.15ng/ml，分別出現(xiàn)在30至60分后，兩化合物都被快速的從血液中清除(最終半衰期分別是44.17和39.93力H中)，二者在8小時點都沒有被檢測到。顯著地，化合物5fflil轉(zhuǎn)化成的代謝產(chǎn)物經(jīng)i^^證實為H-(lH-苯并咪唑-l-基)雄甾4，16-二烯-3-酮。當進行體內(nèi)測試時，化合物5被證明能非常有效地抑制雄激素一j繊型LAPC4人類前列腺癌異種移植物的生長，但是化合物6是無效的。與對照組相比，化合物5(50mg/kg/每天兩次)產(chǎn)生的是平均最終腫瘤數(shù)量M^、93.8%(P=0.00065)，它顯然也比睪丸切除術(shù)更有效。眾所周知，這是第一個抗一激素試劑的實例(一種雄激素合成抑制劑(CYP17抑制劑)/抗雄激素)，在抑制雄激素一依賴型前列腺癌生長方面明顯比睪丸切除術(shù)更有效?？紤]到這些讓人印象深亥啲抗癌特性，化合物5和其它這些化合物可以用于治療人前列腺癌。前列腺癌(PCA)是世界范圍內(nèi)最常見的惡性腫瘤和與年齡相關(guān)的引起癌癥死亡的原因。除了肺癌之外，PCA是最常見的勞性癌癥形式，并且在美國男性中是第二位引起死亡的原因。在美國辨(2004)，預計纟賄230,000新的前列腺癌患者被檢測出，并且將有大約23,000男性死于該病(Jemal等,CancerStatistics,2004.C4Ca"ce/^a/".，2004，5《8-29)。在1992至1999年間，PCA的年平均發(fā)生率在非裔美洲的男性中是59%，高于高加索男性，并且年平均死亡率是高力卩索男性的兩倍以上(AmericanCancerSociety-CancerFactsandFigures2003)。雄激素在PCA的發(fā)生、生長和變化中起到重要的作用(McConnell，J.D.,"Physiologicalbasisofendocrinetherapyforprostaticcancer，，,tyh/.C7/".7VbW/Jm.,1991,M:l-13)。關(guān)于這一點，最重要的兩種雄激素是睪丸激素(T)和二氫睪酮(DKT)。睪丸合成了大約90%的丁，其余部分(10%)由腎上腺合成。M31主要存在于前列腺的甾族化合物5oc-還原酶，T進一步轉(zhuǎn)換為效力更強的的DHT拮抗齊U(Bruchovskyetal,"Theconversionoftestosteroneto5oc-androstan-17P-ol-3-onebyratprostate&Wvoandvz'加""5w/.CTzem.，1968,243,2012-2021)。Huggins等于1941介紹了去除雄激素作為用來治療改進的和轉(zhuǎn)移的PCA(Huggines等"Studiesonprostaticcancer:2.Theeffectsofcastrationonadvancedcarcinomaoftheprostategland."^rA.5i/②,1941,^,209-212)。然后，去除lt激素治療顯示出對PCA患者體內(nèi)多個部位產(chǎn)生了良好的效果(Denmeade等"Ahistoryofprostatecancertreatment.'Wb/wre翻G3"cer，2002,2:389-396)。睪丸切除術(shù)(外科或內(nèi)科M31GnRH激動劑)仍然是大多數(shù)前列腺癌患者的通常治療選擇。通過內(nèi)科和外科睪丸切除術(shù)能減少或清除睪丸產(chǎn)生的雄激素產(chǎn)物，但是能影響腎上腺中雄激素的合成。一些研究已經(jīng)報道了一種睪丸切除^SI抗雄激素物質(zhì)的齢治療方法，用來抑制腎上腺激素的活性，育翊顯延長PCA患者的存活時間(Crawford等,"Acontrolledtrialofleuprolidewithandwithoutflutamentinprotaticcarcinoma",A^EhgL/M^/"1989,W/，419424;Crawford等,"TreatmentofnewlydiagnosedstateD2prostatecancerwithleuprolideandflutamideorleuprolidealone,PhaseIII:inteiBroupstudy0036",J.Urol.,1992,"7:417A;和Denis,L.,"Roleofmaximalandrogenblockadeinadvancedprostatecancer">Pmstote，1994,5f5"w/7;7/v)，17s-22s)。在Mohler和colleagues最近的標志性文章中(Mohler等,"Theandrogenaxisinrecurrentprostatecancer",C7z'".C朋cerTfe.，2004,10,440448)清楚的證明T和DHT產(chǎn)生在復發(fā)的PCA組織中，在足夠的水平上激活雄激素受體。另外，用同系PCA異種移樹莫型的微點陣基型，Sawyer與其同事共同(Chen等，"Moleculardeterminantsofresistancetoantiandrogentherapy."Ato.Med,2004,10,33-39)發(fā)現(xiàn)，伴隨iftt隹激素治療抗藥性的發(fā)展，雄激素受體mRNA的適當增加是唯一與其相一致的變化。在睪丸、腎上腺和其4tMa織中，有效且特異的抑帝嫩激素合成的化合物或許對治療PCA更為有效(Niar,VC.O.;Brodie，A.M.H./'Inhibitorsof17a-hydroxylase-Ci，-lyase(CYP17):Potentialagentsforthetreatmentofprostatecancer",Q^re/^尸/wrm.Des^7z，1999,5:163-180)。在睪丸和腎上腺中，T生物合成的最后一步包括兩個關(guān)鍵反應，這兩個反應是連續(xù)的并且都被一個單一的謝崔化，細胞色素P450賴化酶17a-羥化酶-/17,20畫裂解瞰CYP17)(Hall，P.E.,"CytochromeP450aiscc:oneenzymewithtwoactions:Hydroxylaseandlyase'V51teraW5z'oc/em.Afo/ec.5/o/，799/,4ft527-532)。酮康咪，作為一種抗真菌劑并且依靠抑制P450酶，成為一種M的CYP17抑制齊U，并且在臨床上己經(jīng)!鵬用于PCA的治療(Trachtenberg等,"Ketoconazole:Anovelandrapidtreatmentforadvancedprostaticcancer",L^〃夕5m0，152-153)。有報道稱嚴謹?shù)闹委煱才艑τ诩に匾坏挚沟那傲邢侔┗颊吣軌蜓娱L治療效果，(Muscato等,"Optimaldosingofketoconazoleandhydrocrtisoneleadstolongresponsesinhormonerefractoiyprostatecancer"yPrac.J附.^y。c.Cb"c^i^."何,":22(Abstoct))。此夕卜，雖然停用氟他胺廁康咪被發(fā)現(xiàn)在疾病進程中在年老的PCA患者體內(nèi)能保留活性，(Small等,"KetoconazoleretainsactivityinadvancedprostatecancerpatientswithprogressiondespiteflutamidewithdrawaTVf/ra/.,/997，"7,1204-1207)。雖然，現(xiàn)在酮康咪由于肝毒性和其他畐怖用己經(jīng)不再使用，但這提示了更多有效的和可選擇的CYP17抑制劑可能成為對治療該疾病有效的試劑，即便在晚期階段和可能出現(xiàn)激素抵抗的患者中。各種有效的甾族和非甾族CYP17抑制劑已經(jīng)被報道，并且部分在嚙齒動物模型中己經(jīng)顯示出是有效的睪丸素產(chǎn)物的抑制劑(上述的Njar和Brodie)。近肌Jarnian與其同事們公開了對前列腺癌患者最為有效的CYP17抑帝擠啊比特龍對激素的影響(O'Donnell等/'Hormonalimpactofthe17a-hydroxylase/C17,20-laseinhibitorsabirateroneacetate(CB7630)inpatientswithprostatecancer",A乂Ca"cer,2004，卯:2317-2325)。其中一些有效的CYP17抑制劑已經(jīng)顯示出也能抑制5a-還原酶和/或是具有抗腫瘤活性的有效的抗雄激素物質(zhì)(±^的Njar禾QBrodieNjar，禾BLong等,"Antiandrogeniceffectsofnovelandrogensynthesisinhibitorsonhormone-dependentprostatecancer."Qif"cer吼6630-6640)。對發(fā)明背景的進一步說明記載在U.S.專利號5,994,335;6,200,965;禾口6,444,683中。劍門已經(jīng)發(fā)現(xiàn)一系列有效的CYP17抑制劑/抗雄激素物質(zhì)，n-苯并吡咯，17-嘧啶荊比咯和17-二嗪(參見，例如實施例1和2，例如化合物的制備，如下面戶;M倉,類似也應用于其他結(jié)構(gòu)的化合物)。促使制備這些C-17雜環(huán)甾族的原因是基于我們希望合并苯并咪唑、苯并三唑、嘧啶并吡咯和二嗪的半族，稱為"年寺另U子結(jié)構(gòu)"(Nicolaou等，，TSTaturalproduct-likecombinatoriallibrariesbasedonprivilegedstructures.1.Generalprinciplesandsolid-phasesynthesisofbenzopyrans""^m.aem.5bc.,2000，7",9939-9953。"特別子結(jié)構(gòu)"，lt休語最初是被Evans等引進(JMo/.C/挪.，1988，W,2235-2246)用來描述能與多種不相關(guān)的分子目標結(jié)合的結(jié)構(gòu)式)在新分子中。這些支架，尤其是苯并咪唑支架，在藥物化學領域一直受到廣泛的關(guān)注，是因為它們具有的各種不同類別的生物學活性，并且這也是多種藥物有效的本質(zhì)原因(，的Nicolaou等)。本發(fā)明的C-17-雜芳雜甾族化合物具有如下的賦I:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>其中-ABC環(huán)結(jié)構(gòu)是甾族化合物或它們的類似物的A,B和C環(huán)部分，它們可以被任意取代；-16，17j體的二鍵;^又鍵，或當化合物是17-(舊-苯并咪唑-1-萄雄甾-3-酮時，它為單鍵；并且-X可以被苯并咪唑、苯并三唑、嘧啶并咪唑(pyrimidinoimidazole)(嘌呤)、嘧啶并三唑或二1#[壬選取代；苯并咪唑、苯并三唑和嘧啶并咪唑基團通過5-元環(huán)上的一個氮原子結(jié)合到甾族化合物歹戔基上；并且，二嗪基團通過二嗪環(huán)上的一個碳原子結(jié)合到甾族化合物歹上。這些化合物的藥學上可接受的鹽也被涵蓋在本發(fā)明范圍內(nèi)。ABC環(huán)結(jié)構(gòu)的可選擇的取代基包括一種或多種烷基和鹵化烷基(雌C^);烯基和卣化烯基(雌d》包括雙鍵直驗接到環(huán)結(jié)構(gòu)上；鹵素；錢;氨基亞烷基；羥基亞氨萄hydroxyimino);和羥基。進一步任選的是，ABC環(huán)結(jié)構(gòu)上相鄰碳原子上的氫取代基可能被去除并且被相鄰碳原子之間的另外的鍵所代替，導致的結(jié)果是環(huán)結(jié)構(gòu)上的碳原子之間是雙鍵連接。ABC環(huán)結(jié)構(gòu)的選擇性取代是在環(huán)結(jié)構(gòu)的10和/或13位置的甲團。對苯并咪唑、苯并三唑、嘧啶并咪唑、嘧啶并三唑或二嗪結(jié)構(gòu)的可選擇取代基包括鹵素，氨基，氨基亞烷基，羥基，-SH，-S-烷基，^S和劍七烷基(優(yōu)選C^)。這些可選擇的取代割^:于苯并咪唑、苯并三唑，嘧啶并咪唑、嘧啶并三唑或二嗪結(jié)構(gòu)的環(huán)碳原子上。苯并咪唑、苯并三唑、嘧咬并咪唑、嘧啶并三唑或二嗪結(jié)構(gòu)分別為如下的結(jié)構(gòu)式<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula>嘧啶并三唑其中*指^§接甾族化合物離的4體。其中一個優(yōu)選的具體實施例中，ABC環(huán)結(jié)構(gòu)的C環(huán)除了烷基，尤其是甲基外沒有其它取代，取代發(fā)生在與D環(huán)共用的碳上，該碳與連接到C-17雜芳基的取代鄰近，例如13-位。在另一個優(yōu)選的具體實施例中，ABC環(huán)結(jié)構(gòu)的A，B，C環(huán)以3p-羥基-雄甾-5,16-二烯或3-竊-雄甾-5,16-二烯為基礎，具有一個常規(guī)的結(jié)構(gòu)。但是在另一個具體實施例中，A和B環(huán)是以下結(jié)構(gòu)1一25中的任何一種結(jié)構(gòu)苯并咪唑苯并三唑啼啶并咪唑<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>下面歹咄了1-25中含有AB環(huán)，C和D環(huán)是常規(guī)的，其中X是苯并咪唑的化合物的化學名稱。類似的化合物也被考慮過，其中X是苯并三唑、嘧啶并咪唑、嘧啶并三唑、吡嗪或嘧啶?；衔飈:3|3-羥基-3"-甲基-17-(lH-苯并咪唑-l-基)-雄甾-5，16-二烯化合物2:3P-氟隱17陽(m隱苯并咪唑-l-基)-雄甾畫5,16-二烯化合物3:3(3-氯-17-(lH-苯并咪唑-l-基)-雄甾-5,16-二烯化合物4:3|3-溴-17-(1H-苯并咪唑-l-基)-雄甾-5,16-二烯化合物5:3(3-恥17-(lH-苯并咪唑-l-基)-雄甾-5，16-二烯化合物6:3卩-錢-17-(lH-苯并咪唑-l-基)-雄甾-5，16-二烯化合物7:17-(1H-苯并咪唑-l-基)-雄甾-3，5，16-三烯化合物8:17-(lH-苯并咪唑-l-基)-雄甾-2，4,16-三烯化合物9:17-(lH-苯并咪唑-l-基)-3-亞甲基雄甾-5,16-三烯化合物10:17-(m-苯并咪唑-l-基)-3-亞甲基雄甾4,16-三烯化合物11:3,3-二氟-17-(lH-苯并咪唑-l-基)-雄甾-5,16-二烯化合物12:3,3-二氟-17-(lH-苯并咪唑-l-基)-雄甾4,16-二烯化合物13:17-(lH-苯并咪唑-l-基)-3-亞甲基雄甾-2，4,16-三烯化合物14:17-(m-苯并咪唑-l-基)-3-亞甲基雄甾-2，4，6，16-四烯化合物15:3,3-二氟-17-(1H-苯并咪唑畫1-基)-雄甾畫2，4，16-三烯化合物16:3，3-二氟-17-(lH-苯并咪唑-l-基)-雄甾-2，4，6，16-四烯化合物17:3,遂亞^^-17-OH-苯并咪唑-l-基)-雄甾-5,16-二烯化合物18:3-|遂亞錢-17-(lH-苯并咪唑-l-基)-雄甾4,16-二烯化合物19:3-羥基亞氨基-17-(1H-苯并咪唑-l-基)-雄甾-2，4，16-三烯化合物20:3畫羥基亞氨基-17-(1H-苯并咪唑-l隱基)陽雄甾-2，4，6，16-四烯化合物21:3-羥基-17-(lH-苯并咪唑-l-基)-雌甾-1，3，5(10),16-四烯化合物22:3-氟-17-(lH-苯并咪唑-l-基)-雌甾-1,3,5(10),16-四烯化合物23:3-氯-17-(lH-苯并咪唑-l-基)-雌甾-1,3,5(10),16-四烯化合物24:3-溴-17-(lH-苯并咪唑-l-基)-雌甾-1,3,5(10)，16-四烯化合物25:3-石秦17-(lH-苯并咪唑-l-基)-雌甾-1,3,5(10),16-四烯對雜芳彰不，X的可選擇取代的實施例展現(xiàn)在下面結(jié)構(gòu)26—40中，其中X是苯并咪唑。其中X被苯并三唑、嘧啶并咪唑、嘧啶并三唑、吡嗪或嘧啶取代的類4以化合物也被考慮過。對雜芳基環(huán)，另一個X的可選,代的實施例展現(xiàn)在下面結(jié)構(gòu)41_46中，其中X被C-17-,苯并咪唑(例如，嘧啶并咪唑或嘌呤)取代。其中X被嘧啶并咪唑、苯并三唑、嘧啶并三唑、吡嗪或嘧啶取代的類似化合物也被考慮過。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula>下面的結(jié)構(gòu)M5，M6，M9和M10是特別優(yōu)選的化合物。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula>與CYP17和甾族5a-還原酶相比，這些化合物的抑制活性，對雄激素受體的結(jié)合和轉(zhuǎn)活，和它們對兩種人類前列腺癌細胞LNCaP和LAPC-4的抑制增殖作用已經(jīng)被研究?；衔?和6的藥動學指標用大鼠實驗得出，對人類LAP04前列腺癌的體內(nèi)抗癌活性也用大鼠實驗得出。相對于現(xiàn)有技術(shù)，這里描述的所有化合物，除了化合物15，都是具有新穎性的(Haidar等,"NovelsteroidalpyrimidylofP45017(17a-hydroxylase/C17-20-lyase)"Ac/.<formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula>/%a，.M^O^m.,2001，B《373-374;和Haidar等，"Effectsofnovel17a-hydroxylase/C17，20-lyase(P45017,CYP17)inhibitorsonandrogenbiosynthesisinvitroandinvivo'ViStera/d5/ocAem.Afo/ec.5z.o/.,2003,(^，555-562)。新的n-苯并吡咯禾口n-二嗪的制M別在流程i和2中被描述。這些方法可以被對班也應用于這里描述的其他的衍生物中。劍門合成17-苯并吡咯、3P-乙酸基-17-氯-16-甲酉勉隹甾-5，16-)%)#(2)中重要的中間體，由先前描述的常規(guī)步驟從(1)中獲得(Njar等,'Wucleophilicvinylic"addition-elimination"substitutionreactionof3P-acetoaxy-17-chloro-16-formylandosta-5，16-diene:Anovelandgeneralrouteto17-substituted-Z\16-steroids.Partl.Synthesisofnovel17-azolyl-Z\16-steroids:inhibitorsof17a-hydroxylase/17-20-lyase(P45017a)'Woo/^Ma/.CA綴Z欲,1996,6，2777-2782;和'TSfovel17-azolylsteroids;potentinhibitorsofcytochromeP45017a-hydroxylase/17,20-lyase(P450na):Potentialagentsforthetreatmentofprostatecancer",/Mecf.Oiem.,1998,W，902-912)。用苯并咪唑在DMF中存在K2C03的情況下，在大約80"處理2得到想得至啲相近產(chǎn)率的3P-乙酸基-17-lH-苯并咪唑3。化合物3用10y。鈀活t，在苯基氰中回流平穩(wěn)的去甲酰化得到93%產(chǎn)率的化，4，從它的水解得至嚅要的3p-!遂17-苯并咪唑5。5的改良的沃氏氧化提供了相應的A"-氧的類似物,6。2與苯并三唑的反應在DMF中存在K2C03的情況下，在大約80"C條件下發(fā)生，得到想得到的極高產(chǎn)率的3P-乙酸基17-苯并-lH-l,2,3-三唑7b，與2H-1,2,3-三唑異構(gòu)體7a—共約有5%產(chǎn)率。這兩種異構(gòu)體易于ffli!5敏棚熒光l提析(FCC)分離并且易于通過它們各自的質(zhì)子核磁共振光譜鑒定。因此，對稱的2H-l,2，3-三唑7a的四芳香核表現(xiàn)為兩對在57.43，7.45，7.88和7.90的耦合，而非對稱的m-l,2,3-三唑7b的四芳香核表現(xiàn)為在57.46(2H)以及57.57(1H)和8.15(1H)的耦合的多重譜線。另外，7a中的16-CHO質(zhì)子顯著的移到氐磁場至S10.66，相比而言，7b中的在59.59。7b在原位去甲酰化生成Rh(l,3-二(聯(lián)苯JHS)丙輸2+Cl催化劑[Rh(dppp)2+Cr]在回流二甲苯中得到化合物8，并且接著水解3p-乙酸基團，以90%的產(chǎn)率獲得目標產(chǎn)物33-羥基-17-(苯并-111-1，2,3-三唑-l-蜀雄甾-5，16-二烯(9)。9的氧化掛共高產(chǎn)率的10。17-二嗪的合成，(17-二嗪14和17-嘧啶15)從易于獲得的脫氫^^隹甾酮(11,流程2)開始，皿換淑目應的17腙12，M7K合肼和硫MS井處理，具體記載在現(xiàn)有技術(shù)Potter等，Aconvenient^lai^e-scalesynthesisofabirateroneacetate[3|3-acetoxy-17(3-pyridyl)androsta-5,16-diene],apotentialnewdrugforthetreatmentofprostatecancer.Og.Prac./脫，1997,29,123-128中。在1,1,3,3-四甲基胍存在的條件下，12用碘酒處理，以極高產(chǎn)率生成乙烯基17-碘化物13。鈀催化交叉耦合反應(Choshi等，"TotalsynthesisofGrossularines-land'2.'VC^.Oem"1995,^5899-5904)13與(2-三丁基甲錫^S)吡嗪或者(5-三丁基甲錫縫)嘧啶分別生成33-羥基-17-(2-吡唑基)-雄甾-5,16-二烯(14,15%),和3P-羥基-17-(5-嘧啶萄-雄甾-5,16-二烯(15，10%)。這兩個交叉耦合反應的低產(chǎn)率可能是由于甲錫烷基二氮苯試劑在所用的反應^i牛下不穩(wěn)定。目標化合物的結(jié)構(gòu)，14和15易于fflil它們的質(zhì)子核磁鄉(xiāng)光譜鑒定17-吡嗪部分的三個非等價的質(zhì)子等分于14顯示為三個在亂35、8.48和8.70的單峰，而17-嘧啶的三個質(zhì)子等分于15，兩個等價質(zhì)子顯示為在S8.73的單峰并且一個質(zhì)子顯示為在59.07的單峰。itWh14和15的17-二嗪基團顯示出對它們各自的16-烯族質(zhì)子化學位移的不同影響，鑒于前體么16-17-碘化物13的16-質(zhì)子14中的16-H顯示為在的單峰，相比較13中的16-H(56.14)l頓著的去屏蔽；15中的16-H顯示在S6.11,類似于13。如上所述，化合物15之前已經(jīng)被Haidar等公開，然而，它M—種不同于此的步驟合成。該新穎化合物的4餓性樣品，如同下面的內(nèi)容中戶雜細描述的，MT泛用于體內(nèi)和體外試驗。本發(fā)明還涉及治療前列腺癌或前列腺增生的方法，包括對于需要治療的目標患者纟好本發(fā)明有效量的化合物治療的方法。術(shù)語"治療"被習慣性地應用，例如，以對抗、緩解、減輕、解除、改善與前列腺病相關(guān)聯(lián)的一種或多種癥狀等為目的，對目標患者進行治療或護理。可以被治療的前列腺疾病包括，例如前列腺增生(BPH)和前列&鶴(例如前列腺腺癌)。特殊的齊[]量濃度和給藥頻率的改變^#、于多種因素，包刮寺殊活性化合物的活性，它的代謝作用的穩(wěn)定性以及反應長度、排泄率、給藥方式和時間、患者的年齡、體重、自狀況、性別、食欲等等，以及前列腺癌或增生的嚴重程度。任意有效量的化合物可以被給藥，例如，從每日約lmg至約500mg，更特殊的在每日約50mg至約150mg。該化合物可以M31任意有效途徑以任意形式被給藥，給藥途徑包括例如，經(jīng)口的、腸道外的、腸內(nèi)的、臓莫內(nèi)的、表皮的，經(jīng)皮的(例如使用任意規(guī)范的貼劑)、經(jīng)眼的、經(jīng)鼻的、局部的、非經(jīng)口的、例如懸浮顆粒的、噴霧的、吸入的、皮下的、靜脈的、肌內(nèi)的、口腔含化的、舌下的、1J湯的、陰道的、動脈的，以及鞘內(nèi)的給藥途徑，等等。本發(fā)明組合物可以被單3蟲給藥，或者與任何其它原料，活性或非活性的，例如與生理學上可接受的載體^fij備適宜的制藥組分。在此弓閱的所有應用，專利和出版物完全公開，和2005年3月2日申請的美國臨時申請No.60/657,3906，均在ltbMM弓l用結(jié)合。即使沒有進一步的詳盡闡述，可以相信一個本領域熟練技術(shù)人員可以ffiil前面的記載完整地實現(xiàn)本發(fā)明。因此，下列的特殊具體實施例，僅作為對說明書技術(shù)方案的解釋，而且任何情況下都不以任意方式成為對公開的其它方式的限制。在上述的和下面的例子中，除了特別指出的以外，所有未標示的的纟鵬都以攝氏度設定，所有部分禾陌分比都按重影十。實施例生物學研究CYP17抑制研究CYP17抑制配位測定依照我們先前公開的步驟完成，其中完整的細胞色素P450cl7-，E.colif細作酶源(Grigoiyev等，"CytochromeP450cl7-expressingEscherichiacoliasafirst-stepscreeningsystemfor17[alpha]-hydroxylase-C17,20-lyaseinhibitors",爿"a/.歷oc/em.;1999,2(57'319-330;禾口"Effectsofnew17a-hydroxylase/C17,20-lyaseinhibitorsonLNCaPprostatecancercellgrowthinvitroandinvivo",5kJC朋cer，1999,622-630。該化合物的ic"i;人齊糧突娘曲線確定并在表i中列出。酮康唑，阿比特龍的iC5o值(臨床i離中的一種CYP17抑制劑(，的OTDonnell),圖表l)禾口3^蘿§S-17-(lH-咪唑_l_基)雄甾_5,16-二烯(VN/85-1,化合物16,圖表l,被認為是最有效的CYP17抑制劑(上述的Njar等，Cwre"ZD^gn，1999，5:163-180;和J".MW.CAem.，1998,4/,902-912.)都在相同的測定系統(tǒng)中確定。新17-雜環(huán)中的一些顯示有效的CYP17抑制且ICso值300-915nM。苯并咪唑5和6的效力是苯并咪唑9和10的4-到6-倍多。結(jié)果顯示17-雜環(huán)的電子性能影響抑制活性。進一步，化合物的A5-3卜醇功能性，5和9比具有相應的類似物A4-3-酮的功能性的6和10的效力分別至少高3倍多。這些結(jié)果與劍門先前的單一的17-吡咯CYP17抑制劑的結(jié)果大不相同。這一系列抑制劑中，^-3e-醇唑類和相應的A4一3-酮類似物(戰(zhàn)的Njar等,J.Med.Chem.,1998,41,902-912)之間的抑制效能沒有顯著區(qū)別。合理的說明是大量的苯并唑類在酶的活性部位的結(jié)合是不同的，例如在3-位部分的相互作用對于結(jié)合是重要的。底物或抑帝鵬己體與一些P450細胞色素類的亞紅素成分的結(jié)合可^^紫夕卜差光i普進《亍石開究(JefcoatC.R.,"MeasurementofsubstrateandinhibitorbindingtomicrosomalcytochromeP450byopticaldifferencespectroscopy",Mef/iocfe五打g;腳/'1978，52，258-279)。該途徑按照下述的劍門先前公開的標準步驟擴展(Njar等,Mo/.CAem.丄欲，1996,6,2777-2782;和/MdCAem.,1998,902-912)?；衔?和9分別引起型n差示光譜，J際甾體氮(N-3of苯并咪唑或苯并三唑環(huán))至CYP17的血紅素鐵的酉己位，通過形成低-自旋鐵。與5和9的酶復合體的索雷最大量的峰位(426nM)，與氮配體與CYP系統(tǒng)的結(jié)合的有效數(shù)據(jù)一致，并且還與我們和其它的17-唑基CYP17抑制劑的結(jié)果一致(Njar等》/oog.Mo/.CAem.Le".，1996，6,2777-2782;和JMW.C7^m.，1998，41,902畫912)。苯并唑氮與CYP17的血紅素鐵的反應顯示在17-位的大量耐受性，因為5和9之間的親和力等同于17-咪唑基團與較小的空間需要的16之間的親合力。在測試的兩個17-二嗪中，IC5Q值500nM的17-嘧啶15與17-批嗪翻安14(IC5()=3810nM)相比約是8倍多的效力。當與苯并吡唑一起，結(jié)果顯示17-雜環(huán)的電子性能影響抑制活性。最后，以同樣的測定方法評價酮康唑和阿比特龍的ICso值(表l)。一系列化合物中效力最強的化合物，17-苯并咪唑5，分別在CYP17抑制中顯示分別皿這些化合物大約4和大約3倍，盡管其效力低于16。人5a-還原酶同工酶1型和2型的體外抑制作用在先前發(fā)現(xiàn)一些CYP17抑制劑倉,抑制人5a-還原酶同工酶的基礎上，我們簡要的刑介了新的CYP17抑制劑系列?；衔?、6、9、10抑制活性和作為對照的非那司提被決定禾傭DU-145細胞系(人1型酶)和人BPH組織勻漿(人2型酶)人勻漿，如Hartmann等所述，"Synthesisandevaluationof2'-substituted4-(4'-carboxy-or4'-carboxymethylbenzylidene)-N-acylpiperidines:Highlypotentandinvivoactivesteroid5[alpha]陽reductasetype2inhibitors",乂Mo/.O^m.,2002,45,3406-3417.表1中列舉了一些化合物在10,濃度下的IC5o值或抑制百分率。僅化合物6對1型禾口2型酶均顯示有效的抑制(分別ICf770和480nM)，盡管比非那司提少幾倍的效力(分別IC5()=60和2nM)。LNCaP和PC-3AR雄激素受體結(jié)合測定:因為我們在先的證明一些CYP17抑制劑是對于突變體和野生型AR(Long等，Gregoriyev等andNjar等JMa/.Ozem.,1998,仏902-912,上述)有效的抗雄激素物質(zhì)，它與評價一系列CYP17抑制劑與這些受體結(jié)合的能力有關(guān)。AR競爭^ffl在雄激素-敏感LNCaP細胞中fei己的R1881([3H]-R1881)決定，，突變體AR，和雄激素-無依賴的PC-3細胞用野生型AR(指定PC-3AR)固定轉(zhuǎn)染?；衔?、6、14和15，在毫微摩爾濃度范圍，與齊糧1繊方式(附圖中未示)中ARs的兩個類型的結(jié)合禾斜己的R18S1有效競爭?；衔?、6、14和15，IC5o值分別為384、242、336和374nM(表l)，與野生型AR相對，是比臨床上使用的抗雄激素物質(zhì)，氟{29至45倍多效力(IC5G=10,985nM)。如表1所示，對5和6的突變體AR的親合力比得Jl^康士得的，一種普遍使用的抗雄激素物質(zhì)，但是另一方面優(yōu)于氟懶安。然而，氟懶安的生物活勝要從一種代謝產(chǎn)物中衍生，是羥基氟懶安，這是一種更有效力的AR拮抗劑。LNCaP突變體AR-mediated轉(zhuǎn)錄的試齊啲影響其次，我們期待不管化合物5和6是作為AR激動劑還是拮抗劑。一項雄激素調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄激活的研究，在LNCaP細BOTprobasin熒光素酶信息瞬時轉(zhuǎn)染構(gòu)建AARZ-Luc(熒光素酶活性測定)(Kim等,"SynergismofcytoplasmickinasesinIL6-inducedligand-independentactivationofandrogenreceptorinprostatecancercells",Ozcogewe,2004,23:1838-1844;禾口Zhang等，"ASmallcompositeprobasinpromoterconfershighlevelsofprostate-specificgeneexpressionthroughregulationbyandrogensandglucocorticoidsM的andVivo",五w/ocn'"o/ogy,2000，4698-4710)。化合物5，6或者康士得各自在0.1和lO.Oum對熒光素酶活性都沒有影響，然而熒光素酶的，在用1.0nmDKTT處理18h之后，增強大約99.6倍(圖1)。此外，熒光素酶的，包^M31對l.OnmDHT暴露通過5、6和康士得以濃度相關(guān)方式和以相類似的方式M^、，(圖表l)。同時，這些結(jié)果顯示化合物5和6類1臓士得不支配AR對抗或部分對抗活性，并可以被認為是強的，織啲雄激素拮抗齊廿。雖然劍門沒有用PC-3AR/LU細胞檢測化合物，其^iM生型的AR，可能的是它們還可以以相類似的形式運轉(zhuǎn)。劍門先前戶標的一些CYP17抑帝擠U比起與氟^Xt特相比更可與康士得相比較(Long等.，如上戶，)，以及這些新化合物可能的情況。普遍的，劍門提出的新穎的化合物與兩種AR類型都強烈的相互作用，指示該化合物可以被用于野生型或突變的AR，的腫瘤病人^J文大AR，的病人的治療。苯并唑，LNCaP和LAPC4前列腺癌細胞體外生長的影響檢測了化合物5和6對1nMDHT激活的突變LNCaP細胞的抑制增殖的能力。該濃度的DHT誘導LNCaP細胞增殖相比載體-治療細胞是大約2倍(圖2A)。如圖2A中戶;M，化合物5和6以齊糧的形式分別抑制DKT-誘導的LNCaP細胞增殖,IC5o值分別為6.0和l、M?？凳?，斟細作陽t頓照，并腿示類似的DHT-誘導LNCaP細胞增殖抑制作用(圖2A，IC5o=8.6|liM)。用10nMDHT處理雄激素敏感的LAPC4前列腺細胞系，令人驚訝的是并沒有顯著的誘導細胞增殖(圖2B)。其它研究M報道了LAPC4細!M友t激素的應答沒有在LNCaP細胞中實測至lj的顯著(Thompson等,"AndrogenantagonistactivitybytheantioxidantmoietyofvitaminE，2，2,5,7，8陽pentamethyl-6-chromanolinhumanprostatecarcinomacells",M/ec.Ca"erT7era"2003,二797-803)。然而，化合物5，6和康士f將自顯示了禾口對LNCaP細胞一樣的對該細胞系的劑量j繊性抑制(圖2B)。LAPC4細胞增殖的抑制效力的大小)1,是6>5〉針得，ICso值分別為1.0、3.2和10yM。這些結(jié)果表明5和6可以被用來阻斷在DHT刺激細胞增殖的活性，這與上述它們結(jié)合的雄激素受體和激活性質(zhì)相關(guān)?；衔?和6屬于己知最有效的抗雄激素物質(zhì)。5和6的藥代動力學以及5的代謝作用:這兩個前導化合物5和6在雄性SCID小鼠中藥代動力學性質(zhì)按照劍門針對其它CYP17抑制劑最新描述的步驟被研究o(Nnane等,"Pharmacokineticprofileof3[beta]-hydroxy-17-(lH-123-triazol-l-yl)androsta-5,16"diene(VN/87-1),apotentandrogensynthesisinhibitorinmice",J.SteroidBiochem.Molec.Biol,2001,71，145-152;禾卩Handratta等，"PotentCYP17inhibitors:improvedsyntheses,pharmacokineticsandanti-tumoractivityintheLNCaPhumanprostatecancermodel",J^eraW歷oc/^m.Mo/ec.及o/,2004,92,155-165.)。結(jié)果在表2和圖3-5中相誠。反禾目HPLC中，5[滯留時間(rt)=21.6女H中]從內(nèi)標物(16,rt=11.5併中)，代謝產(chǎn)物(11=17.3^H中)和其它內(nèi)源性化合物(圖3)較好溶角tt小鼠血漿中分鐘5H中。5衍生的標準曲線是線性的和可再現(xiàn)的(資料沒有顯示)，組間和組內(nèi)測定差異性少于10%并且測出限度為100ng/ml。HPLC測定用于確認并監(jiān)測小鼠血漿中的5。皮下給藥之后，減退期的5的血漿濃度按指數(shù)規(guī)律的，平均半衰期為大約44.17分鐘并且消除速率常數(shù)為56.5分鐘.1?；衔?從體循環(huán)的清除率為1986.14ml/h/kg并且給藥后6h未檢測出。如表2中所示，非區(qū)劃的藥代動力學參數(shù)的計算以5皮下給藥之后的血漿濃度曲線為根據(jù)。5給雄性SOD小鼠皮下給藥(50和100mg/kg)之后的血漿濃度-時間曲線在圖4中顯示。5皮下給藥之后，小鼠中檢測至啲血漿濃度達到峰谷水平30.0辦中后齊糧。隨著給藥劑量從50變至100mg/kg，化合物5在皮下位置有很好的吸收并且在皮下給藥之后的血漿濃度的曲線下面積與時間曲線的曲線下面積相比成比例增長。此外，消除半衰期，和平均滯留時間隨著5的劑量從50增長到100mg/kg相對恒定(表1)。這些結(jié)果顯示5的藥代動力學曲線是非劑量依賴的。圖5顯示在體內(nèi)藥代動力學研究中有效量的極性代謝物[滯留時間，17.3分沐見圖3]由5形成并在血漿中存在。代謝產(chǎn)物的最大量為67.72%，給藥后約2h獲得。該代謝產(chǎn)物顯示與化合物6相同的滯留時間。該代謝產(chǎn)物逸驗性的經(jīng)LC-MS鑒定；它的^^量(m/z391=M+的與3-氧-A"6-四氫化化合物5(即17-(lH-苯并咪唑-l-萄雄甾-3-,的結(jié)構(gòu)一致。代謝產(chǎn)物可以由5經(jīng)由30-OH—3-Ml化，接著通過A5和A6雙鍵的還原(還原酶)形成。在緊密相關(guān)的甾體17-咪唑的雄性小鼠中，一種類似的代謝產(chǎn)物被在先鑒定(由30-OH—3-氧氧化作用，接著A5雙鍵的異構(gòu)化形成)，(Handmtta等等，±3^)。一種5的主對戈謝產(chǎn)物，即17-(lH-苯并咪唑-l-萄雄甾-3-酮，可以從轉(zhuǎn)雄甾酮合成；參見淑呈3。它還預期具有類似的活性。小鼠中的6的體內(nèi)藥代動力學和化合物5不同，原因是相對低的最大濃度和明顯更高的消除速率(圖4和表2)。另外，劍門在血漿中不能檢測出招可化合物6的新陳代謝，與劍門對化合物5的觀察相反。5禾口6對在SCID小鼠中的LAPC4移植生長的影響在令人深刻的復雜的體外生物活性的基礎上，即CYP17的有效抑制作用，強抗增殖前列腺癌細胞活性和itt隹激素活性，5和6選擇用于在雄激素-LAPC4人前列腺癌移植模型的體內(nèi)抗癌抗菌素功效的研究。在第一實驗中，化合物5和6SCID小鼠中公認的LAPC4前列腺癌的生長的影響被確定，并且按照參照的處理方法閹割。指定的荷瘤小鼠(n-5/組)接受單或雙劑量的5或6(0.15mmol/kg每日一次或者0.15mmol/kg每日兩次)。每周測劃中瘤體積并且與接受載體的或閹割的對照組的小鼠進行比較。閹割導劍中瘤^f只與對照組相比有55%的^^(圖6)。給藥50.15mmol/kg每日一次和0.15mmol/kg每日兩次致使最終腫瘤1^只平均值分別M^41%和86.5%，與載體治療對照動物的腫瘤相比(圖6)。與5治療的小鼠的極好的腫瘤生長抑制相反，與對照組相比，用化合物6治療的小鼠在低劑量顯g效或者甚至顯示對腫瘤生長的刺激作用(圖6)。6在體內(nèi)沒有抑制LAPC4腫瘤生長的效果尤其令人失望，因為該化，在體外抑制PCA細胞生長非常有效，而且是一種強有效的織啲抗雄激素物廁參見圖1)。5和6在體內(nèi)抗癌效力有非常顯著的差異，這不能輕易的歸于兩個化合物的藥代動力學性質(zhì)的差異。這兩個近似的相關(guān)化合物的體內(nèi)抗癌效力有顯著區(qū)別的根本的原因現(xiàn)在還M知的。然而，可以歸于6在動物體內(nèi)被轉(zhuǎn)化為可能是強雄激素受體促效齊啲代謝產(chǎn)物從而刺激腫瘤生長。在研究當中，所有的小鼠每周稱一次重。所有治療組的體重增長微小，與對照組觀察到的增長類似。觀察所有的小鼠表現(xiàn)出健康并且沒有不良反應顯示該化合物沒有顯著毒性。第二個體內(nèi)實驗檢測5抑制SCID小鼠內(nèi)生長的LAPC4前列腺癌細胞生長的能力，以及16(表圖1)，先前經(jīng)鑒定有效的CYP17抑制齊0/抗雄激素物質(zhì)(Gregoriyev等和Njar等,JCAem.,1998,W,902-912,±^)并且按照參考的處理方法閹割。實驗中，治療開始于小鼠用激素，LAPC4細胞皮下接禾中的當天并且被閹割或者每天兩次皮下注入5或16。圖7顯示出經(jīng)過21周治療后在腫瘤的發(fā)生和尺寸方面不同的治療效果。除了用16治療組(0.15mmol/kg每天兩次)在治療11周形成明顯可測量的腫瘤,所有其它的組在治療10周形成明顯可測量的腫瘤。對照小鼠治療14周以上當小鼠因為大腫瘤被處死時腫瘤體積總計增加8倍。因此，在治療14周，其它組的腫瘤體積與對照組的小鼠相比。閹害U過的小鼠的腫瘤體積增長只有4.1倍(與對照組相比M^、約50%)，并且在小鼠用16治療后觀察到接近3.7倍的增長(與對照組相比M^、53.8%)。用5治療(0.15mmol/kg每天兩次)的小鼠，腫瘤體積僅增長0.5倍，表示與對照小鼠相比有93.8%的^^1>(P=0.00065)。在16周，發(fā)現(xiàn)化，5治療動物的平均腫瘤體積低于在10周當形成可測量的腫瘤時的平均腫瘤體積(幾乎是可忽略的和休眠的程度)。ith^卜，5引M腫瘤的顯著的抑制作用，與16或閹害啲相比，分另偽P-0.005和0.05。一般而言，對照組、閹割組和化合物16組治療的小鼠的腫瘤增"^fflil，而5治療的小鼠的腫瘤增長非常緩擾并且呈現(xiàn)一種雙相模式(圖7)?；衔?是最有效的試劑，并且比閹割在抑制腫瘤生長方面顯著更有效。有趣的是雖然在CYP17的抑制方面，16比5多6倍效力，但是后者顯示出出眾的體內(nèi)抗癌活性。該I腺的理由現(xiàn)在是未知的，但是可以部分歸功于5的較好的藥代動力和或藥效特性。為觀啶是否"休眠的"化合物5治療的前列腺腫瘤(參見圖7，16周)育,在5小劑量的時候生長，從16至19周給藥劑量減少至0.15mmol/kg每周三次(劑量^1>78.6%)，并且每周測劃中瘤1^只。治療階段其間，M^、化合物齊糧，腫瘤恢復生長(圖7)。在^H周間期之后，重新用常用量藥物治療，腫瘤生長緩慢并達到一個穩(wěn)定水平。這些資料顯示該治療的細胞生長抑制性以及推斷出需要連續(xù)給藥才可實^K癌作用的。在實驗的最后，確定5在5治療的小鼠的腫瘤和器官中的濃度水平。用HPLC測定以最鄉(xiāng)狩懂(圖7記載)給藥lh后的5^中瘤，睪丸和肝臟中的濃度7jC平。有趣的是，只艦組織里檢測到少量湘對于5的~15%)的代謝產(chǎn)物。該代謝產(chǎn)物有與血漿中觀啶到的代謝產(chǎn)物(見上)相同的滯留時間。檢測到5的最高濃度的組織是皮下腫瘤，達39.0±8，4^ig/mg。肝臟和睪丸中的濃度更低但是可檢測到。腫瘤中5的濃度7JC平t:t^L漿中測定的濃度7jC平明顯更高，這可能是化合物在i，階段積聚的結(jié)果。因此，5對腫瘤生長的抑制作用可能鄉(xiāng)辦畢，部分腫瘤移植中有更高濃度，可以產(chǎn)前列腺癌細胞直接的細胞毒素的湖胞抑制作用。應該說明的是有證明提示酮康唑(一種普通的CYP17抑制劑)對前列腺癌細胞可能有直接的細胞毒性作用。33另外，睪丸中積聚的5會,抑制動物體內(nèi)睪丸素合成。雖然已經(jīng)確定了LAPC4是雄激素-^#、的，這些細胞能轉(zhuǎn)變蹈^t激素-依賴的，并且照這樣代表了一個模仿病人發(fā)展前列腺癌的合適的模型(Chen等等,JJ^禾口Kline等,"ProgressionofmetastatichumanprostatecancertoandrogenindependenceinimmunodeficientSCIDmice."Ato.Me"1997,3，402~408)。如圖7中所示，謝門能復制這些J嫁。此外，我們的結(jié)果顯示用16治療或者閹割在一定時期內(nèi)可有效的抑制腫瘤生長(雄激素-依賴期)，但是自腫瘤生^fii!之后無效，正如未處理的對照小鼠(可能由于處于雄激素-非{^月)。采用5治療的小鼠的腫瘤生長在整個治療期間有力的被抑制。這顯示5可會樹非雄激素^^型前列腺癌有效。然而，用該化合物治療使LAPC4腫瘤能夠在更長的時期內(nèi)保持雄激素{，并且因it瀏抗雄激素療法有反應，這也是合理的。最近的研究清楚的表明增Si周節(jié)和涉及AR的在進展的和復發(fā)的PCA方面(Mohler等，和Chen等，戰(zhàn)的)有新的以雄激素受體作為開發(fā)治療PCA的藥物的一個目標產(chǎn)品的興趣(Tindall等，"Symposiumonandrogenactioninprostatecancer",C朋cer/fe.,2004，似，7178-7180)。因為它有效的特性，5可以是極好的替代品。結(jié)論資料補充了謝門的早期對A16甾劍七合物C17取j堪^i布與產(chǎn)生有效的AR拮抗劑一樣產(chǎn)頓CYP17有效地抑制齊啲認識。17-苯并咪唑5和6顯示與CYP17血紅素鐵同等，可能一部分原因是它們的,制活性?；?和6顯示幾乎均等的對CYP17抑制的體外活性，AR對抗性，和前列腺癌細胞生長抑制性。令人驚訝的，化合物的抗癌活性截然不同，如5顯著抑制LAPC4腫瘤移植生長，而相反的，6(0.15mmol/kg每日兩次)〈目中瘤生長。本研究Jlf共了令人矚目的證據(jù)，5魏人前列劂中瘤生長有效的抑制劑并且比閹害iJ顯著更有效。CYP17抑制柳^U隹激素物質(zhì)的第一個實施例證實在體內(nèi)對抗前列腺癌腫瘤的抗癌抗腫瘤活性在一定范圍內(nèi)比閹割更加有效得多。這齡人影響深亥啲生物活性使5成為進一步研制治療人前列月7鶴的潛在藥物的重要備選?；衔?優(yōu)良的抗癌活性，它包括一個苯并咪唑基團使得苯并咪唑成為雌的基團。然而，如上述的5的類似物預期具有相關(guān)活性并且包含在本發(fā)明內(nèi)。實驗部分化學常規(guī)步驟和技術(shù)與先前公開技斜目同(Njar等/MMa凱，1998，仏902-912)。用CHCV溶液，以PerkinElmer1600FTIR光譜儀記錄紅外光譜。高5^辛質(zhì)譜(HRMS)用3-TeslaFinniganFTMS-2000FT質(zhì)i普儀，ESI型(俄亥俄州大學，化學系)。作為精制主要目標化合物的標準，我們提供了高分辨率的質(zhì)譜數(shù)據(jù)和HPLC層析魏f際化合物的均一性。低^f,率質(zhì)譜(LRMS)用FinneganLCR-MS測定。熔點(mp)用FischerJohns熔點裝置確定并且未校正。脫氫^l隹甾酮和脫氫^l隹甾酮醋離購買自Aldrich，Milwaukee,WI。5-三丁基甲錫垸基嘧啶和2-三丁基甲錫烷基B比嗪購買自FrontierScientific,Inc.,Logan，UT。3P-乙酸基-17-氯-16-甲^fe隹甾-5,16-二烯(2):該化合物由先前戶腿的3趴乙酸基雄甾-5-烯-17-酮(l)制備，提供所述的光譜分析數(shù)據(jù)(Njar等，CAem.,1998，^,902-912)。3P-乙酸基-17-(lH-苯并咪唑-基)-16-甲酰雄甾-5,16-二烯(3):在^7KDMF(20mL)中，在約80°C，攪拌3P-乙酸基-17-氯-16-甲酰雄甾-5,16-二烯(2，2.5g，6.65mmol)，苯并咪唑(2.35g，19.9mmol),和K2C03(2.76g,23.9mmol)的混合物，累計1.5h。冷卻至室溫后，反應混合物倒入冰水(250mL)中并過濾沉淀，用水沖洗，千》對尋至訴腺的白色固體(約2.9g)。用FCC[石油i^EtOAc/Et3N(6:4:0.3)]精制得到2.7g(88.7%)精制的化合物3:熔點227-230。C;紅夕卜(CHC13)3691,3024,2951,2359，1725,1670,1604,1491，1452,1375,1253,1032,897,852,818,700,657,618,576,565,550,529,511,476cm";NMR(300MHz，CDC13)S1.07(s,6H，18-和19-CH3)，2.04(s,3H,3P-OCH3),4.60(叫1H,3a—H)，5.43(brs,1H,6陽H),7.35(br.s，2H，芳香方務Hs)，7.85(s，1H,芳香方務H),7.98(s,lH,芳香方務H),7.98(s,1H,21-H)和9.59(s，1H,16-CHO)。HRMS計481.2462(C^I^C^Nz.Na4),發(fā)現(xiàn)481.2454。3卜乙酸基-17-(lH-苯并咪唑-l-基)雄甾-5，16-二烯(4):3卜乙酸基-17-(lH-苯并咪唑-1-基)-16-甲酰雄甾-5,16-二烯(3,2.04g,4.45mmol)用^7夂氰與10mL)溶解，在吸附10%鈀的活性炭(1.02g,即3重量的50%)的存在下回流5小時。7轉(zhuǎn)卩至室溫之后，催化劑用硅1墊濾除。濾液蒸發(fā)千燥，賺用FCC[石油醚/EtOAc/Et3N(7.5:3:0.5)]純化得到1.41g(73.8%)純的化合物4:熔點159-16CTC:紅外(CHCB)3687,2947,2854,2358,2340,1725,1633,1609,1557,1489,1454,1373,1291，1253,1195,1136，1031,985，910,839,735,665，590,544，533,513，502,488cm";&NMR(300MHz，CDC13)S1.02(s,3H,18-CH3),1.07(s，3H,19-CH3),2.04(s,3H,3P-OCH3),4.62(叫l(wèi)t^3a-H)，5.43(brs，1H,6-H),5.98(s，lH，16-H),7.30(叫2H，芳香方^Hs),7.49(s，1H,芳香方^H),7.81(s，1H,芳香膝H)，和7.95(s,lH,2'-H),HRMS計453.2512(C^HMC^Na"),發(fā)現(xiàn)453.2511。3P-羥基-17-(恥苯并咪唑-1-基)雄甾-5,16-雙烯(5):醋酸鹽4(Ug3.02mmol)溶解于甲醇(20mL)中，在惰'M:氣中，并用10%甲醇KOH溶解處理(8mL)。在室溫攪拌混合物1.5小時，并且然后在約40。CMffi濃縮至10mL。將溶液倒入冰水(300mL),并過濾得到的白色沉淀，用水沖洗并干燥。用EtOAc/MeOH結(jié)晶得到5(1.10g,94°/。)，熔點189-19CTC;紅夕卜(CHC13)2934,2339,1609，1490，1453，1291，1040,837,808，705，663,608，578,550,517cm";'HNMR(300MHz,CDC13)S1.02(s，3H,18-CH3),1.07(s,3H,19-CH3),3.55機1H，3a-H),5.41(brs，lH,6-H),5,99(s，1H，16陽H)，7.302H,芳族的陽Hs),7.54(s,1H,芳族的-H)，7.80(s,1H，芳族的-H),和7.96(s，1H,2'-H)。HRMS計411.2407(C26H32ON2.Na,，發(fā)現(xiàn)411.2396。17-(lH-苯并咪唑-l-基)雄甾4,16-雙烯-3-酮(6):從化合物5(660mg,1.70mmol)，1-甲基4-哌啶酮(2.5mL)，和甲苯(40mL)的混合物蒸餾出約lOmL。然后加入異丙醇鋁(521mg，2.55mmol)，在氬氣中回流混合物4小時。冷卻之后，混合物用EtOAc(50mL)稀釋，接連用5%含水NaHC03(x3)和^7K(x2)沖洗，并T#(Na2S04)。將溶液鄉(xiāng)千燥，然后粗制品用FCC[CH2Cl2/EtOH(25:l)]純化得到化合物6(544mg,82%):熔點201-204。C;紅夕卜(CHC13)2946，2858,1622，1611,1490,1453，1376,1291,1270，1228，1189,893，850,837,722，662，615,568,553，537，519cm";!HNMR(300MHz，CDC13)S1.04(s,3H,18-CH3),1.24(s，3H,19-CH3),5.78(s,1H，4-H),5.99(s,1H,16-H),731(w2H,芳香方務Hs),7.48(m,1&芳香族-H)，7.81(s,lH，芳香族-H)，和7.95(s,1H,2'-H)。HRMS計409.2250(C26H3()ON2.Na,，發(fā)現(xiàn)409.2250。3e-乙酸基-17-氯-16-甲酰雄甾-5,16-二烯(2)和苯并-lH-l,2,3-三唑以及K2C03的反應3P-乙酸基-17-(苯并-2&1，2，3-三唑-2-基)-16-甲酰雄甾-5,16-二烯(7a)和33-乙酸基-17-(苯并-111-1，2，3-三唑-1-基)-16-甲酰雄甾-5，16-二烯(7b):化合物2(2.5g,6.65mmol),苯并三唑(2.35g,19.9mmol)^nK2C03(2.76g，23.9mmol)的混合物在^7KDMF(20mL)中，在80。C攪拌約45辦中。冷卻至室溫之后，將反應混合物倒入冰水(250mL)并將得到的沉淀過濾，用7乂沖洗，并干燥得到粗提的白色固體。用FCC[petEther/EtOAc,(4:l)]fff措先得到次產(chǎn)物3P-乙酸基-17國(苯并-2//-1,2，3陽三唑-2-基)-16-甲^1|甾-5，16-二烯(7^0.3g,9.8%)，熔點248-250。C;紅夕卜(CHC13)3023,2945,2358，1725,1657,1600,1375,1257,1032,728,656，584,564,540,526，506,498cm—1;'HNMR(300MHz,CDC13)S1.11(s，3H,18-CH3),137(s，3H,19-CH3),2.04(s,3H,3P-OCH3),4.62"IH,3a-H)，5.43(brs,1H，6-H),7.43(d,IH,^2.4Hz，芳香族的畫Hs)，7.45(4IH,>2.7Hz，芳香族的-H)，7.88(dJH,>2.7Hz，芳香族的-H)，7.90(4lli>2.4Hz,芳香族的-H)和10.66(s,1H，16-CHO)。HRMS計482.2414(C28H3303N3.Na"，發(fā)現(xiàn)482.2413。采用同樣的溶劑進一步洗脫得到主要產(chǎn)品，3P-乙酸基17-(苯并-1&1,2，3-三唑-1-基)-16-甲酰雄甾-5,16-二烯(7b,2.3g,75.4%);熔點186-188°C;紅外(CHC13)3023，2948,1725，1670,1604,1488,1450,1374,1253,1196,1032,846,824,720,658,619,548,527，504，497cm一'；'HNMR(300MHz,CDC13)S1.07(s，6H,18-和19-CH3),2.04(s,3H,3P-OCH3)，4.60(叫IH,3a-H),5.43(brs,IH,6-H),7.46(叫2H，芳香族的-Hs),7.57(d,1H，J=6.9Hz,芳香族的-H)，8.15(dJH,8.4Hz)，芳香族的隱H),和9.59(s,IH,16-CHO)。HRMS計482.2414(CaHbC^Na",發(fā)現(xiàn)482.2416。3P-乙酸基-17-(苯并-lH-l,2，3-三唑-l-基)雄甾-5,16-二烯(8):二(三苯磷化氫)銠(I)光氣(3(Bmg，0.438mmol)和1,3曙二-(聯(lián)苯JHS)丙烷(394mg，0.954mmol)的混合物在^7jC二甲苯(40mL)中，在8(TC攪拌約15射中，至細微的黃色沉淀物形成。加入化合物7b(1.71g，3.72mmo1)，將混合物回流約18小時，然后。粗制品用FCC[petether/EtOAc/Et3N，(8.9:l:0.1)]純化得到1.2g(74Z7%)純的化合物8;熔點184-186°C。紅外(CHC13)3063，2918,2389,2358,1725,1458，1373，1254，1069,1031,843,809,786,692,646,560,535,528,512,494cm—1;)HNMR(300MHz,CDC13)SU0(s，3H,18-CH3),i.25(s，3H,19-CH3)，2.04(s,3H，3P-OCH3)，4.64IH,3a-H),5.43(brs，IH,6-H)，6.01(s,1H，16-H)，7.40(t，1H，>7.8Hz,芳香族的-H),7.51(t,IH,/=7.8Hz,芳香族的-H)，7.67(4IH,>8.1Hz,芳香族的-H),和8.10(4IH,>8.1Hz,芳香族的-H)。HRMS計454.2465(CwH^Ns-Na4),發(fā)現(xiàn)454.2469。3P隱羥基17-(苯并-lH-l，2,3-三唑-l-蜀雄甾-5,16-二烯(9):遙照化合物5戶腿的方封旦是使用3e-乙酸基17-(苯并-llH-l，2,3-三唑-l-基)雄甾-5，16-二烯(8;700mg,1.62mmol)。從EtOAc/MeOH重結(jié)晶得到目標化合物9(600mg,95%);熔點241-244°C;紅夕卜(CHC13)3603,2937,2859,1609,1488,1451,1373,1287,1243,1069，1040,1007,953，845,805,715,665,618，570,553,517cm_1;'HNMR(300MHz，CDCl3)S1.09(s,3H,18-CH3)，1.24(s,3H，19-CH3)，3.551H，3a鄰,5.41(brs,1H,6-H),6.06(s，lH,16-H)，7.40&1H,^7.8Hz,芳香族的-H)，7.52&1H，>7.8Hz，芳香族的-H),7.67"1H,>8.1Hz，芳香族的-H),和8.10(dJH一8.1Hz,芳香族的-H)。HRMS計412.2359(CssH^ON^Na",發(fā)現(xiàn)412.2365。n-(苯并-lH-l,2，3-三唑-l-基)雄甾4,16-二烯-3-酮(10):遵照化働6戶脫的方法但是使用P-羥基-17-(苯并-1界1,2,3-三唑-1-基)雄甾-5,16-二烯(9;500mg,1.28mmol)。粗制品用FCC[CH2Cl2/EtOH,(50:1)]純化得到目標化合物10(420mg,84.4%);熔點280-283。C;紅夕卜(CHC13)2944，1658,1450,1070,8444,825，721,624，589,564,554，541,521cm-1;!HNMR(300MHz,CDCl3)S1.26(s,3H,18-CH3)，1.27(s,3H，19-CH3)，5.77(s，1H,4-H)，6.01(s,lH,16-H),7.40(t,1H,J=7.8Hz，芳香族的-H),7.52&1H,>7.8Hz，芳香族的-H),7.67(4lg>7.8Hz,芳香族的-H),和8.10(41H，>8.1Hz，芳香族的-H)。HRMS計410.2203(C25H290N3-Na4),發(fā)現(xiàn)410.2185。脫氫^^隹甾酮-17腙(12):脫氫^l隹甾酮(11,3.5g，12.2mmol)溶解于乙醇(60mL);并將得到的溶翻水合敗2.37mL,0.049mol)處理接著用硫翻取7.9mg，0.061mmol)溶角裕0.25mL水中?；旌衔镌谑覝財嚢?2小時并隨后倒入冰水。過濾得到的沉淀物，用水沖洗，并千燥得到目標化合物12的白色晶體；熔點242-244。C(lit.204-206。C);22'HNMR(300MHz,CDC13):S0.76(s,3H,18-CH3),1.05(s，3H，19-CH3),3.74(brs,1H,3-H)和5.35(s,1H,6隱H)。17-碘^fe隹甾-5,16-二烯-3P-斷13):碘(12.16g，.0203mol)在^7jCTHF(144mL)和無水Et2O(72mL)中攪拌溶解，在冰浴中冷卻至0。C并且溶液用1,1,3,3,四甲基胍(6.72mL，6.24g,.054mole)處理?；衔?2(3.0g,9.9腿ol)溶解于THF(81mL)中，一滴滴的加入鵬^g過2小時維持反應反應驗在CTC。然后反應混合物真空濃縮，在冰浴中冷卻，然后在室溫真空干燥得到黃色固體(13，3.65g,92.4%)。熔點169-171°C。(lit.175-176。C),IR(CHCl3)2935,1371，1039，862，843，799,715,665,582，和566cm—1;1HNMR(300MHz,CDC13):S0.76(s,3H,18-CH3)，1.05(s,3H,19-CH3),3.50(brs,1H,3a-H),5.35(s，lH,6-H)和6.14(s,1H,16鄰。3卜羥基17-(2-吡嗪基)-雄甾-5，16-二烯(14):混合物17-碘化雄甾-5，16-二烯-3P-醇(13;0.5g,1.257mmol)溶解于^7K二甲基MH安(DMF,10mL)和四(磷^H苯酯)鈀(Pd(PPh3)4)(71.6mg,0.062mmol)和(2-三丁基甲錫烷基)批嗪(774.6mg，2.099mmol)—起，在120。C加熱20小時。冷卻之后，混^tl用冷7K(50mL)稀釋，并用EtOAc(30mLx3)提取?；旌系腅tOAc提取液用^7jC和水沖洗，干燥Na2S04然后濃縮得到褐色固體。該粗產(chǎn)品用快速柱層析精制[FCC，石油醚/EtOAc/Et3N(3:2:0.15)]得到14(66mg,15%);熔點199-201°C。1HNMR(300MHz,CDC13):30.94(s，3H,18-CH3)，1.08(s，3H,19-CH3)，3.52(brs,lH，3a鄰，5.40(s,1H，6-H),6.77(s，lH,16-H)，8.35(s,lH,吡嗪Sfei安畫H)，8.48(s,ia吡嗪SM安-H),8.70(s,lH，吡嗪SM安-H)。HRMS計350.2358(C23H3oON2)，發(fā)現(xiàn)350.2354。3P-羥基-17-(5-嘧啶基)-雄甾-5，16-二烯(15):如14中所述的13(0.645g,1.623mmol)的反應，但是4頓(5-三甲基甲錫烷基)嘧啶(1.0g，2.710mmol)和(Pd(PPh3)4)(92.88mg，0.0804匪ol)禾Q(5-三甲基甲錫烷基)嘧啶(1.0g，2.710mmol)—起溶解于10mL無水DMF然后接著用[FCC，石油醚/EtOAc/Et3N(3:2:0.15)]精制得到3P-羥基-17-(5-嘧啶)-雄甾-5，16-雙烯15(44mg,10%);熔點231-233°C(lit.240-242°C);191HNMR(300MHz,CDCl3):S1.05(s,3H，18-CH3),1.08(s,3H，19-CH3),3.83(brs，lH,3a-H)，5.39(s,1H,6-H)，7.26(s,1H,16-H),8.73(s,2H,4'-H和6!-H)和9.07(s,1H,2'-H)。HRMS計350.2358(C23H3()ON2)，發(fā)現(xiàn)350.2348。CYP17體外測定該化合物的體外CYP17抑制活性j柳快速醋酸釋放測定(AARA)來評價，利用完整的P450cl7-泰逸五co/Z作為酶源(Grigoiyev,±^)。包括用[21-3司-17a-羥基孕烯醇酮作為底物并且通過大量氖iH己醋酸的形式測量CYP17活性，在底物的C-21側(cè)鏈分裂期間。該種建立的方法的精確度和可靠性與本領域技術(shù)人員使用的HPLC分析方法相當(Grigoryev,±^)。IC5Q{!^超過適當范圍的抑帝陌分比與抑制濃度的關(guān)聯(lián)曲線直接獲得。每一個化合物在五個不同濃度的最小值實驗。測量三份，并且IC5()值^H次實驗的平均值。標準偏差為平均值的+5%。人5a-還原酶1型和2型測定化^tl和參照的非那司提的抑制活f頓DU145細^^、(用于人1型,和人前列S鬆且織勻漿(BPH組織sffi2型酶)確定，根據(jù)Hartmann禾口colleagues(Picard等,"Synthesisandevduationof2'-substituted4-(4'-carboxy-or4'-carboxymethylbenzylidene)-N-acylpiperidines:Highlypotentandinvivoactivesteroid5a-reductasetype2inhibitors",/MedOiem.,2002,45，3406-3417)所描述的方法。如果更多有效化合物，在濃度10u時確定抑帝陌分比或ICso值。競爭雄激素受體(ar)結(jié)合和熒光素酶的測定AR結(jié)合/競爭測定24-孔多孑L皿的孑L上涂布聚左方繊氨酸(0.05mg/m1)5分種，干燥，滅菌蒸餾水沖洗并干燥2小時。確定R1881與LNCaPAR和野生型AR結(jié)合，LNCaP細胞PC3AR細胞被種植(2-3x105)在24孔多孔培養(yǎng)皿無甾族化合物的i咅養(yǎng)基中，允許粘附。之后的日子，培養(yǎng)皿用清的替換，無甾族化合物RPMI用0.1%BSA補充并且在200倍剩余冷DHT存在或缺失的情況包含fH]R1881(O.Ol-lOnM)，測定非特意性結(jié)合，并用1um曲安奈德使黃體酮和糖iSJ^激素受體飽和。在37"，2小時的培養(yǎng)期之后，細胞用冰冷的DPBS沖洗兩次并溶解于包含0.5%SDS和20%甘油的DPBS中。轉(zhuǎn)移提取液并用閃爍探測器計算細胞相^^射性。分析繊，包括Kd和Bmax測定，ffl31非線性回歸IOTGraphpadPrism軟件。如，確定兩個細|^中要求幾乎飽禾口AR的時間，實驗化合物(0.1nM-10[mu]M)從受條移[3H]R1881(5.0nM)的能力。每一個化，的ICsoM;用GmphpadPrism軟^(GraphPad軟件,SanDiego，CA公司)非線性回歸確定。熒光素酶轉(zhuǎn)活測定轉(zhuǎn)錄激活測定按照戰(zhàn)Kim等人先前描述的實現(xiàn)的，只是經(jīng)過很少的修改。Probasin熒光素酶信息構(gòu)造ARR2-Luc，通過將最小量probasin啟動子ARR2插入PGL3-強化媒介(Promega)的多克隆聯(lián)結(jié)子區(qū)域生成，ARR2由Vanderbilt大學醫(yī)學中心RMatusik博士(五nJocn';w/ogy，2000,"/:46984710)友瞎贊助^{共。pRI^空白(Promega)用作體內(nèi)對照。簡要的，LNCaP細胞在涂布駭方^#、氨酸的24-孔培養(yǎng)皿中生長，用ARR2-Luc在包含5%炭條FBS(Hyclone)的無酚磺酞RPMI1640培養(yǎng)基中轉(zhuǎn)染。24小時轉(zhuǎn)^^后，細胞用茅賴羊的無酚磺酞RPM1640培養(yǎng)基培養(yǎng)18小時，添加或不添加DHT和抑制劑。熒光素酶活性通過使用二元熒光素酶測定系統(tǒng)用三重的測量，根據(jù)制造廠商說明(Promega)。結(jié)果表示對于交叉誘導，治療細胞的相對熒光素酶活性是不同于對照組的。細胞培養(yǎng)和成活力測定LNCaP細胞生長于添加10%FBS和1%青霉素/鏈霉素溶液的RPMI1640培養(yǎng)基中。測定新穎化，對細胞增殖的作用，在實驗的開始之前，細胞轉(zhuǎn)移至無甾族化合物培養(yǎng)基i咅養(yǎng)3天。無甾族化合物培養(yǎng)基由添加5%右旋糖gm衣的無酚紅RPM、炭處1漿和1%青霉素/f連霉素溶液組成。然后艦在24-孔多孔i歸皿中平皿接種細胞(3x104)在24-孔多孔培養(yǎng)皿(Coming公司.Coming,紐約)中進行生長研究。24小時的固定時間之后，培養(yǎng)基l對由空并用含有載體或含指定濃度的DHT(lriM)和化合物(0.1uM-10uM)的無甾族化合物培養(yǎng)基替代。對照L用載俠乙酌處理。該培養(yǎng)基每三天更換并且在第七天將有活力的細胞的數(shù)量用WST-1[4-[3-(4-碘苯基)-2-(4-硝基苯萄-ffl-5-四唑]-1,3-苯二磺麟]測定比較。細胞培養(yǎng)上述時間之后，將10%WST-l溶液添加到針孔并在37t:培養(yǎng)三小時。培養(yǎng)之后，平皿輕度振蕩并用掃描多孑L分光光度計在450nm立刻讀數(shù)。所有的結(jié)果表示三孔的最小值的平均值。額外的對照組只包括培養(yǎng)含細胞。藥代動力學研究AU動物實驗，照巴爾的摩市馬里蘭大學醫(yī)藥學院動物關(guān)愛委員會的指導原貝訴口認可進行。雄性體重M-22gm(8-10周齡)SCID小鼠，獲得自美國NCI,Frederic^MD,維持控制在約25°C，50%相對濕度和12小時見光12小時黑暗的循環(huán)和允許自由攝取食物和水的環(huán)境下。化合物5和6用40%趴環(huán)糊精在水中配制，并單個給小鼠皮下用藥。動物在一直到給藥6小時之后不同的時間被處死并M光照皿(Ayerst,美國紐約州紐約市)麻醉心臟穿刺采血。HPLC分析色譜分離和甾族化合物和適當?shù)膬?nèi)標物的定SM:反相HPLC方法獲得，如先前戶，，在一個WatersNovapakC18柱(3.9x150mm)上用填充了薄膜C18的Waters⑧防護筒防護。簡要地，該研究中使用的HPLC系統(tǒng)包括Watei^M訴俞送系統(tǒng)，Water^控制^(Milford，MA)，與一個Waters717plus自動采樣器和一個在242.7nm操作的Waters⑧996光二極管矩^^測器酉瀏。移動相組分是7K/MeOH/CH3CN(35:35:30,v/v/v+200PLEt3N和0.77gNH4OAc每1000mL移動相)以1.0miy分鐘流速。HPLC分析在室溫下進行并且用Waters⑧i^色譜儀管理f旨完成i^采集和處理。樣品制備:試管包含小鼠血漿(200uL)，5或6和VN/85-l(10uL100yg/mL的內(nèi)標物)，用二乙醚(2x2mLM頓渦旋,器提取3^H中并在3000g離心5分鐘。有機層在溫和的氣流下蒸錢干燥。殘渣溶解于可分量的流動相(IOOtxL)并在HPLC分析之劍頓0.2um特氟綸濾器濾過。校準曲線和HPLC測定的有效:血漿和組織中的5以及血漿中的6的校準曲線通過摻加大量不同的化合物至包含從未處理的動物得到的血漿(200nL)和組織制劑(200uL)的提取斷復制品)構(gòu)成，得到最終濃度為0.1誦100.0yg/ml。還制備適當?shù)目瞻滋崛」懿⑶铱闪康膬?nèi)標物加入旨提取管得到最終濃度5yg/ml。校準i對羊根據(jù)戰(zhàn)的樣品審恪方法?？煞至康脑偕崛∫?0u1注入HPLC系統(tǒng)并且^被分析物與內(nèi)標物的峰面積比率與5或6的濃度對應標繪。該分析的精密度和準確度決定于己知的空白血漿中抑帝躋鵬度的范圍并且通過HPLC過程。該研究鵬重復三次。分析藥代動力學計算根據(jù)前述方法實現(xiàn)。非間隔的藥代動力學計算通過WinNOnlin(ScientificConsulting公司)完成。SigmaStatWindowsversion1.0上的偏差單向分析(ANOVA)用于在95%可信區(qū)間比較不同的治療組。Bonferronipost-hoc測試用作確定顯著性。P值少于0.05被認為具有統(tǒng)計學顯著性意義的。體內(nèi)拋中瘤研究(LAPCM前列腺癌異種移植物)所有動物研究^il照巴爾的摩市馬里蘭大學醫(yī)藥學院動物關(guān)愛委員會的指導原則和認可進行的。雄性重度齢免疫缺陷(SCID)小鼠4-6周齡，購買于國家癌癥助^-Frederick癌癥研究和開發(fā)中心(Fredrick^MD)并飼,無菌環(huán)境中，控制光照和濕度并且允許自由攝取食物和水。小鼠的腫瘤由LAPC4細胞皮下接種(皮下給夠產(chǎn)生，基本上如以前描述的(21)方法。LAPC4細胞在15%FBS加上1%PS和10nmDHT的MEM中生長，直至80%融合。將細胞刮至DPBS中，M離心分離收集，并再懸浮在Matrigel(10mg/ml)中以3x107細5&/11110在小鼠的^側(cè)腹的得同一位置，皮下注入100"1細胞懸液。每周用測徑觀則量腫瘤，并且腫瘤#%口、通過公式4/3兀XrXr"n〈r2)計算。在第一個實驗中，LAPC4腫瘤接種之后允許生長8-10周。5個總腫瘤^f只相當?shù)男∈笠唤M，不管閹割的還是用5和6治療的(0.15mmol/kg每日一次和0.15mmol/kg每日兩次，上午9點和下午5點)。小鼠在甲氧M^i^醉下被閹割。化合物5禾口6以17.2mg/ml配制，在0.3%羥丙基纖維素鹽溶液中，并且小鼠每天接受皮下繼t。對照和閹害啲小鼠只用載體治療。治療4周，每周測量腫瘤，計算腫瘤體積。在治療期的最后，動物在皿麻醉下被處死；腫瘤被切除，稱重并在-8(TC儲存。動物還是每周稱重并監(jiān)測一般麟狀況和由于治療可能產(chǎn)生的毒性征兆。在第二個實驗中，小鼠被灌輸LAPC4細胞并分成四組，每組5只小鼠。對照組和閹割組接受載體治療，而其它兩組接受VN/85-l(0.15mmol/kg每日兩次，上午9點和下午5點)或5(0.15mmol/kg每日兩次，上午9點和下午5點)治療。這些治療在接種LAPC4細胞之后一天開始對照組^^賣治療14周，撫賣19周(對于VN/85-l和閹割組)，5治療組^^賣21周，并且按照上面描述的方法測量和處翻中瘤。腫瘤，肝臟和睪丸中5(VN/124-1)7K平的測量VN/124-1治療組的動物在最后一次VN/124-1給藥之后1周被處死，然后收劇中瘤，肝臟和睪丸并用液氮快速冷凍。組織樣本在磷Kfe緩沖液(pH=7.4,0.5ml/mg組織)中均勻攪拌處理。均勻處理后的組織(200ul)用內(nèi)標物VN/85-l(100"g/mL原液10PL)加料，然后用Et20(2x2mL)渦旋提取3全H中，接著在3000g離心分離5併中。分離Et20提取物并用溫和的氣流蒸錢千燥。殘渣重新溶解于100uLHPLC流動相，過0.2umTeflon過濾器濾過，然后用HPLC分析，如上面描述。前述的實施例可以通過替代本發(fā)明前述實施例中的一般或特殊描述的試劑禾口/或操作斜牛重復相類似的成果。,AiM說明中，本領域熟練技術(shù)人員可以很容易確定本發(fā)明的實質(zhì)要點，不脫離它的精神和范圍，可以得到本發(fā)明的不同的變化和變形以適應不同的用途和情形。表1:CYP17和5a-還原酶活性和雄、激素受體結(jié)合新穎的17-雜芳基化合物。<table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>a我們先前隨了VN/85-l(Njar等，的合成，阿比特龍按照Potter等(Aconvenient,large-scalesynthesisofabirateroneacetate[3[beta]-acetoxy-17(3-pyridyl)androsta-5，16-diene]apotentialnewdrugforthetreatmentofprostatecancer.0②iVep尸rac.1997，W，123-128)戶脫的方^*成?；?0是抑制劑抑制酶活性達50%所需的濃度，分別雙倍CYP17，三倍5a-還原麟qAR結(jié)合。1C5o是50。/。的[3H]R1881從雄激素受,移化合物所需的濃度。d前列腺腫瘤(DU-145)転1型酶；底物5nM[10-3H]雄甾烯二酮。3PH組織酶(2型酶)，125ug蛋白質(zhì)，底物210nM[132e-3H]睪酮。fni=無抑制作用直至10uM.-=不確定。表2:皮下給藥之后5(50和100mg/kg)和6(50mg/kg)的藥代動力學參數(shù)。<table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>值表示為平均值士S.E.，n=5。流程和附圖的簡要說明圖表1:阿比特龍和VN/85-l(16)結(jié)構(gòu)流程1:17-苯并吡％(七合物(5,6,9和IO)的合成。流程2:17-二嗪化，(14和15)的合成。流程3:反雄甾酮的代謝產(chǎn)物，包括VNLG/81的合成。圖l:5，6和康士得在熒光素酶介導的轉(zhuǎn)錄活性的作用S3lLNCaP-ARR2-lu前列腺癌細胞中LNCaP-AR。細胞在用載體給藥的無甾族化合物的培養(yǎng)基中，或者在有或無1nMDHT時集中繁殖5^dt得18小時。然后如"材料和方法"中所述測定細胞的熒光素酶活性。Bars代^H個單獨的實驗中的三排培養(yǎng)孔中平均光單位[每秒計數(shù)(cps)/單位蛋白，即，相對熒光素酶活性]圖2:5，6和te得對(a)LNCaP和(b)LAPC4前列腺癌細胞生長的作用。細胞在平皿培養(yǎng)之前在無甾族化合物培養(yǎng)基中生長。然后根據(jù)"原料和方法"中描述的，三排培養(yǎng)L用5，6賺士得和DHT增加的^fl物相互處理。治療7日后生長抑制百分比(與對照相比)通過WST-I測定確定。結(jié)果顯示掃份執(zhí)行的三個實驗的平均和標準偏差。圖3:5，16(內(nèi)標物)和提取自小鼠血漿的代謝產(chǎn)物的特征HPLC色譜圖。代謝產(chǎn)物16和5的滯留時間分別為1.5,17.3和21.6^H中。圖4:給雄性SCID小鼠^^蟲皮下大丸齊IJ影合藥之后5和6的藥物代謝分布圖。每個數(shù)據(jù)點表示從三個小鼠獲得的平均血漿濃度。標準偏差(未顯示)是平均〖直的±5-8%。圖5:5和給雄性SCID小鼠賴蟲皮下大丸劑量(100mgZkg.bw)給藥的代謝產(chǎn)物5的藥物代謝分布圖。圖6:5，6和睪丸切除的體內(nèi)對雄性SCID小鼠內(nèi)LAPC4前列腺腫瘤的生長的抗癌活性。帶LAPCM腫瘤的物個小鼠纟OT5治療(0.15mmol/kg/每日或0.30mmol/kg/每日)。每周測量月中瘤體積，治療28日之后確定腫瘤^f只的變化百分比。腫瘤體積的標準偏差(未顯示)為平均值的士10-12%。圖7:5，16和睪丸切除的對雄性SCID小鼠內(nèi)LAPC4前列腺月中瘤的生成和生長的影響。3xlO"LAPC"4細胞被皮下注入SCID老鼠的背側(cè)部。一組小鼠被閹割。其它組的小鼠接受載體或5(0.15mmol/kg每日兩次)或16(0.15mmol/kg每日兩次)中的任一者。每日用5或16治療的從細胞1tA^后1日開始。每周測量腫瘤體積，并且在治療16周之后確劍中瘤體積的變化百分比。、足樹照組，閹割組和16相比在14周顯示顯著差別(分別P=O.OOO65,0.05和0.0097)。"5跟閹割和16相比在16周顯示出顯著區(qū)別(分別P-0.047和0.0047)。Wi:減少5的給藥齊懂的期間。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage39</formula>圖表1.阿比特龍和VN/85-l的結(jié)構(gòu)式<formula>formulaseeoriginaldocumentpage40</formula>流程l.(i)POCIrDMF，CHCl3,Ar,回流;(ii)苯并咪唑，K2C03,DMF,Ar,80°C;(iii)10%Pd活個頓，PhCN,回流;(iv)10。/。甲醇KOH，Ar，室溫.；(v)Al(i-PiO)3，l-甲基-4-哌啶酮，甲苯，回流；(vi)苯并-lH-l，2,3-三唑，K2C03，DMF,Ar，80°C;(vii)(PPh3)2RhCOCL-Ph2(CH2)3PPh2，二甲苯,Ar,回流。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage41</formula>流程3:反式雄甾酮的代謝產(chǎn)物，包括VNLG/81的合成<formula>formulaseeoriginaldocumentpage42</formula>*流程中，reflux代表"回流"；hour代表小時；hydrate4樣"7夂合物"；Pyridine代表吡啶；Benzonitrile代表"芐腈"；Ethanol代表乙醇；Methanol代表甲醇。權(quán)利要求1、一種結(jié)構(gòu)式I的C-17雜芳基甾族化合物其中-ABC環(huán)結(jié)構(gòu)是甾族化合物或它的類似物的A，B和C環(huán)部分，它們可被任意取代；-在16，17位置的鍵是雙鍵或者，當化合物是17-(1H-苯并咪唑-1-基)雄甾-3-酮時，該鍵是單鍵；并且-X是任選的取代苯并咪唑，苯并三唑，嘧啶并咪唑，嘧啶并三唑或二嗪；苯并咪唑，苯并三唑，和嘧啶并咪唑基團通過在5元環(huán)上的一個氮原子與甾族化合物殘基鍵合；并且，二嗪基團通過二嗪環(huán)上的一個碳原子與甾族化合物殘基鍵合；化合物3，3-二氟-17-(1H-)-苯并咪唑-1-基)雄甾-2，4，16-三烯除外；或者這些化合物之一的藥學上可接受的鹽。2.權(quán)利要求1所述的C-17雜芳基甾族化合物，其中-ABC環(huán)結(jié)構(gòu)的任意取代基選自一種或多種的烷基和卣代的烷基；烯基和卣代的烯基；卣素；氨基；,亞'^S;羥基亞;以及羥基；-任意的，ABC環(huán)結(jié)構(gòu)的鄰位碳原子上的氫取代M31鄰位碳原子之間的附加鍵轉(zhuǎn)移并替換形成這些環(huán)結(jié)構(gòu)中的碳原子之間的雙鍵；并且-任意取代苯并咪唑，苯并三唑，嘧啶并咪唑，嘧啶并三唑或二嗪結(jié)構(gòu)的基團選自鹵氣錢，錢亞烷基，羥基，-SH,-S-烷基，烷基和劍"^S;這些取代基在苯并咪唑，苯并三唑，嘧啶并咪唑，嘧啶并三唑或二嗪結(jié)構(gòu)的環(huán)碳原子上的任意取代。3.權(quán)利要求1所述的C-17雜芳基甾族化合物，其中苯并咪唑，苯并三唑，嘧啶并咪唑，嘧啶并三唑或二嗪結(jié)構(gòu)分別為下列結(jié)構(gòu)式:嘧啶并三唑其中*表示聯(lián)接到甾族化合物歹錢上的點。4.權(quán)利要求1所述的C-17雜芳基甾族化合物，其中ABC環(huán)結(jié)構(gòu)有一個用烷基，特別的甲基，在與D環(huán)共用的碳上取代的C環(huán)結(jié)構(gòu)，該碳與聯(lián)接至IJC-17雜芳基的取代相鄰。5.權(quán)利要求1所述的C-17雜芳基甾族化合物，其中ABC環(huán)結(jié)構(gòu)的ABC環(huán)有一個基于30羥基-雄甾-5,16-二烯或3-氧-雄甾-5,16-二烯或此類結(jié)構(gòu)的結(jié)構(gòu)，其中AB環(huán)是下列結(jié)構(gòu)1-25中的一種的基本結(jié)稱苯并咪唑苯并三唑嘧啶并咪唑<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>6.一種權(quán)利要求1所述的C-17雜芳基甾族化合物，其中X選自這樣的由下列結(jié)構(gòu)之一組成的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>7.—種權(quán)禾腰求1戶鵬的C-17雜芳基甾族化合物，是一種有下歹i照構(gòu)M5，M6,M9和M10之一的化合物M5M6M9lv'108.—種權(quán)利要求1戶腿的C-17雜芳基甾族化合物，是下列化合物之一:3P-羥基-3a-甲基-17-(1//-苯并咪唑-1-基)-雄甾-5,16-二烯，3P-氟-17-(1界苯并咪唑-1-基)-雄甾-5,16-二烯，3P-氯-17-(1/7-苯并咪唑-1-基)-雄甾-5,16-二烯，3P-溴-17-(1//-苯并咪唑-1-蜀-雄甾-5，16-二烯，3p-石霧n-(1//-苯并咪唑-1-基)-雄甾-5,16-二烯，3P-氨基17-(1//-苯并咪唑-1-基)-雄甾-5,16-二烯，17-(1//-苯并咪唑-1-基)-雄甾-3,5,16-三烯，17-(1//-苯并咪唑-1-基)-雄甾-2,4,16-三烯，17-(1界苯并咪唑-l-蜀-3-甲基烯雄甾-5，16-三烯，17-(1界苯并咪唑-1-萄-3-甲基烯雄甾4，16-三烯，3,3-二氟-17-(1界苯并咪唑-1-基)-雄甾-5,16-二烯，3，3-二氟-17-(1//-苯并咪唑-1-基)-雄甾4,16-二烯，17-(1//-苯并咪唑-1-基)-3-甲基烯雄甾-2,4,16-三烯，17-(1//-苯并咪唑-1-萄-3-甲基烯雄甾-2,4,6,16-四烯，3-羥基亞氨基-17-(1//-苯并咪唑-1-基)-雄甾-5,16-二烯，3-羥基亞氨基-17-(1//-苯并咪唑-1-基)-雄甾4，16-二烯，3-羥基亞氨基-17-(1界苯并咪唑-1-基)-雄甾-2,4,16-三烯，3-羥基亞氨基-17-(1界苯并咪唑-1-萄-雄甾-2,4.6，16-二烯，3-羥基-17-(1//-苯并咪唑-1-基)-雌甾-1，3,5(10),16-四烯，3-氟-17-(1//-苯并咪唑小基)-雌甾-1，3,5(10),16-四烯，3-氯-17-(1//-苯并咪唑-1-基)-雌甾-1,3，5(10),16-四烯，3-溴-17-(l界苯并咪唑-l-基)-雌甾-l，3,5(10),16-四烯，3-碘-17-(1//-苯并咪唑-1-基)-雌甾-1,3，5(10),16-四烯，或者3,3-二氟-17-(1界苯并咪唑-1-基)-雄甾-2,4,16-三烯。9.一種根據(jù)需要治療患者前列腺癌的方法，包括根據(jù)患者的需要，給患者按有效量的權(quán)禾腰求l-8中任一;鵬的化合物或者這對七合物之一的藥學上可接受的鹽給藥。10.權(quán)利要求l-8中任一所述的化合物或者這些化合物之一的藥學上可接受的鹽在帝恪治療前列腺癌的的藥物中的用途。全文摘要描述了甾族C-17苯并吡咯，嘧啶并吡咯(氮雜苯并吡咯)和二嗪類。也描述了它們的合成方法，包括3β-乙酸基-17-氯-16-甲酰雄甾-5，16-二烯或它的類似物和苯并吡咯或嘧啶并吡咯親核基團的親核乙烯“加成-消除”取代反應的步驟，也包括鈀催化的17-碘代雄甾-5，16-二烯-3β-醇或它們的類似物與三丁基甲錫烷基二嗪進行的交叉偶聯(lián)反應。該組合物是有效的人CYP17酶的抑制劑，也是有效的野生型和突變型雄激素受體(AR)的拮抗劑。該組合物用于治療人前列腺癌。文檔編號C07J43/00GK101155823SQ200680006463公開日2008年4月2日申請日期2006年3月2日優(yōu)先權(quán)日2005年3月2日發(fā)明者A·布羅迪,V·恩雅申請人:馬里蘭州立大學