專(zhuān)利名稱：酶水解－超臨界co的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及到一種將酶水解和超臨界CO2流體萃取技術(shù)結(jié)合提取穿山龍中薯蕷皂甙元的方法，屬于天然植物有效成分的提取方法技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
薯蕷皂甙元屬異螺旋甾烯烷的衍生物，分子式為C27H42O3，相對(duì)分子量為414.64，是制藥工業(yè)中合成甾體避孕藥的重要原料，也是甾體激素類(lèi)藥物中間體醋酸妊娠雙烯醇酮的原料，由它可合成可的松、強(qiáng)的松、炔諾酮、膚輕松、地塞米松等各類(lèi)甾體激素類(lèi)藥物，是目前倍受關(guān)注的天然化合物之一。
傳統(tǒng)的薯蕷皂甙元提取分離技術(shù)是馬敬中等利用酸水解和索氏提取法從穿山龍中提取粗品，通過(guò)乙醇或丙酮多次重結(jié)晶純化。這種方法提取時(shí)間長(zhǎng)、有機(jī)溶劑消耗量大，污染嚴(yán)重，提取率低。而超臨界流體萃取法實(shí)驗(yàn)操作方便，提取時(shí)間短，提取率高，產(chǎn)物無(wú)溶劑殘留。1995年，英國(guó)曼徹斯特大學(xué)藥學(xué)系Ben Liu等以氯仿為夾帶劑提取薯蕷皂甙元，其萃取壓力為21.39MPa、萃取溫度為44℃、萃取時(shí)間為70min。王俊等用單因素法采取定了超臨界CO2萃取皂甙元的最佳條件。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種酶水解-超臨界CO2流體萃取穿山龍薯蕷皂甙元的提取方法，以提高提取率。
本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實(shí)現(xiàn)的這種酶水解-超臨界CO2流體萃取穿山龍中薯蕷皂甙元的方法，其特征在于先將穿山龍?jiān)嫌美w維素酶或α-淀粉酶進(jìn)行水解，再用CO2流體對(duì)穿山龍中薯蕷皂甙元進(jìn)行超臨界萃取。
所述的酶水解-超臨界CO2流體萃取穿山龍中薯蕷皂甙元的方法，其特征在于采用如下步驟完成A、將穿山龍飲片原料以每克加入100U纖維素酶或α-淀粉酶計(jì)，在40℃恒溫水浴中對(duì)其進(jìn)行酶解24h；B、將酶解后的穿山龍?jiān)?.0mol/L的硫酸溶液中再水解4.0h，結(jié)束后用無(wú)水碳酸鈉中和烘干備用；C、將烘干后的原料粉碎至40目，加入超臨界流體萃取罐中，打開(kāi)CO2鋼瓶，以乙醇為攜帶劑開(kāi)始萃取，萃取器溫度為50～60℃，萃取壓力為25～35MPa，CO2流量為40～45Kg/h，萃取時(shí)間為2～4h，得到薯蕷皂甙元粗品。
所述的酶水解-超臨界CO2流體萃取穿山龍中薯蕷皂甙元的方法，步驟C所述的CO2氣體經(jīng)過(guò)凈化器I后，進(jìn)入冷凝器液化，然后由柱塞泵加壓再進(jìn)入凈化器II進(jìn)一步液化，通過(guò)管道進(jìn)入萃取器底部，溶有溶質(zhì)的CO2流體由萃取器頂部出來(lái)進(jìn)入分離器，形成回流。
所述的酶水解-超臨界CO2流體萃取穿山龍中薯蕷皂甙元的方法，設(shè)定一級(jí)分離器I的壓力為6MPa，溫度為60℃；二級(jí)分離器II的壓力為6MPa，溫度為45℃。
所述的酶水解-超臨界CO2流體萃取穿山龍中薯預(yù)皂甙元的方法，步驟C所述的攜帶劑是95％的乙醇或無(wú)水乙醇。
本發(fā)明的酶水解-超臨界CO2流體萃取穿山龍中薯蕷皂甙元的方法的技術(shù)進(jìn)步效果表現(xiàn)在1、采用酶水解技術(shù)和超臨界CO2流體萃取薯蕷皂甙元，與單純的超臨界CO2流體萃取相比，所得產(chǎn)物中薯蕷皂甙元的含量大大提高，為后續(xù)產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)提供了保障。
2、本發(fā)明中超臨界CO2萃取簡(jiǎn)化了操作過(guò)程，提取時(shí)間也由原來(lái)的20多個(gè)小時(shí)縮短到3小時(shí)。


圖1是本發(fā)明的超臨界CO2流體萃取部分流程圖具體實(shí)施方式
實(shí)施例1以纖維素酶水解穿山龍飲片超臨界CO2流體萃取薯蕷皂甙元每克穿山龍飲片加入100U纖維素酶，在40℃恒溫水浴中對(duì)其進(jìn)行酶解24h；將酶解后的穿山龍?jiān)?.0mol/L的硫酸溶液中水解4.0h，結(jié)束后用無(wú)水碳酸鈉中和烘干備用；將烘干后的粉末粉碎至40目，加入超臨界流體萃取罐中，工藝流程如圖1所示打開(kāi)CO2鋼瓶，氣體經(jīng)過(guò)凈化器I后，進(jìn)入冷凝器液化，然后由柱塞泵加壓再進(jìn)入凈化器II進(jìn)一步液化，通過(guò)管道進(jìn)入萃取器底部，設(shè)定分離器I的壓力為6MPa，溫度為60℃；二級(jí)分離器II的壓力為6MPa，溫度為45℃；萃取器溫度55℃，萃取壓力35MPa，CO2流量為40～45Kg/h，萃取時(shí)間為3h，95％乙醇為攜帶劑，得到薯蕷皂甙元粗品，其提取率為2.43％，相對(duì)未經(jīng)酶水解處理的穿山龍飲片提高0.2％(原方法提取率2.23％)。
上述粗品還可以三氧化二鋁層析柱純化，氯仿作洗脫劑，將得到的萃取物薯蕷皂甙元粗品進(jìn)一步分離、提純，最后可獲得白色的薯蕷皂甙元的純品。
實(shí)施例2以α-淀粉酶水解穿山龍飲片超臨界CO2流體萃取薯蕷皂甙元每克穿山龍飲片原料加入100Uα-淀粉酶，在40℃恒溫水浴中對(duì)其進(jìn)行酶解24h；以下過(guò)程同實(shí)施例1，其提取率為2.66％，相對(duì)未經(jīng)酶水解處理的穿山龍飲片提高0.43％(原方法提取率2.23％)。
實(shí)施例3以無(wú)水乙醇作攜帶劑超臨界CO2流體萃取薯蕷皂甙元以無(wú)水乙醇作攜帶劑，其它同實(shí)施例1。
本發(fā)明的超臨界CO2流體萃取設(shè)備選自江蘇南通華安超臨界萃取有限公司，纖維素酶產(chǎn)于何氏璧生物技術(shù)有限公司，α-淀粉酶產(chǎn)于北京雙旋微生物培養(yǎng)基制品廠。
本發(fā)明列舉的實(shí)施例旨在進(jìn)一步地闡述工藝方法，而不對(duì)本發(fā)明的范圍構(gòu)成任何限制。本發(fā)明實(shí)例得到的產(chǎn)品和經(jīng)由本發(fā)明權(quán)利要求書(shū)1、2、3、4、5所述的方法均可得到薯蕷皂甙元產(chǎn)品。
權(quán)利要求
1.酶水解-超臨界CO2流體萃取穿山龍中薯蕷皂甙元的方法，其特征在于先將穿山龍?jiān)嫌美w維素酶或α-淀粉酶進(jìn)行水解，再用CO2流體對(duì)穿山龍中薯蕷皂甙元進(jìn)行超臨界萃取。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶水解-超臨界CO2流體萃取穿山龍中薯蕷皂甙元的方法，其特征在于采用如下步驟完成A、將穿山龍飲片原料以每克加入100U纖維素酶或α-淀粉酶計(jì)，在40℃恒溫水浴中對(duì)其進(jìn)行酶解24h；B、將酶解后的穿山龍?jiān)?.0mol/L的硫酸溶液中再水解4.0h，結(jié)束后用無(wú)水碳酸鈉中和烘干備用；C、將烘干后的原料粉碎至40目，加入超臨界流體萃取罐中，打開(kāi)CO2鋼瓶，以乙醇為攜帶劑開(kāi)始萃取，萃取器溫度為50～60℃，萃取壓力為25～35MPa，CO2流量為40～45Kg/h，萃取時(shí)間為2～4h，得到薯蕷皂甙元粗品。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的酶水解-超臨界CO2流體萃取穿山龍中薯蕷皂甙元的方法，其特征在于步驟C所述的CO2氣體經(jīng)過(guò)凈化器I后，進(jìn)入冷凝器液化，然后由柱塞泵加壓再進(jìn)入凈化器II進(jìn)一步液化，通過(guò)管道進(jìn)入萃取器底部，溶有溶質(zhì)的CO2流體由萃取器頂部出來(lái)進(jìn)入分離器，形成回流。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的酶水解-超臨界CO2流體萃取穿山龍中薯蕷皂甙元的方法，其特征在于設(shè)定一級(jí)分離器I的壓力為6MPa，溫度為60℃；二級(jí)分離器II的壓力為6MPa，溫度為45℃。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的酶水解-超臨界CO2流體萃取穿山龍中薯蕷皂甙元的方法，其特征在于步驟C所述的攜帶劑是95％的乙醇或無(wú)水乙醇。
全文摘要
本發(fā)明提供一種酶水解－超臨界CO
文檔編號(hào)C07J71/00GK1786015SQ20051001296
公開(kāi)日2006年6月14日 申請(qǐng)日期2005年11月11日 優(yōu)先權(quán)日2005年11月11日
發(fā)明者魏福祥, 王煥 申請(qǐng)人:河北科技大學(xué)