專利名稱：一種穿山龍中薯蕷皂甙元的純化方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及到一種將酶水解和超臨界CO2流體萃取技術(shù)結(jié)合提取穿山龍中薯蕷皂甙元并純化的方法，尤其適用于醫(yī)藥中間體的制備，屬于天然植物有效成分的提取方法技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
薯蕷皂甙元屬異螺旋甾烯烷的衍生物，分子式為C27H42O3，相對(duì)分子量為414.64，是制藥工業(yè)中合成甾體避孕藥的重要原料，也是甾體激素類藥物中間體醋酸妊娠雙烯醇酮的原料，由它可合成可的松、強(qiáng)的松、炔諾酮、膚輕松、地塞米松等各類甾體激素類藥物，是目前倍受關(guān)注的天然化合物之一。
傳統(tǒng)的薯蕷皂甙元提取分離技術(shù)是馬敬中等利用酸水解和索氏提取法從穿山龍中提取粗品，通過(guò)乙醇或丙酮多次重結(jié)晶純化。這種方法提取時(shí)間長(zhǎng)、有機(jī)溶劑消耗量大，污染嚴(yán)重，提取率低。而超臨界流體萃取法操作方便，提取時(shí)間短，提取率高，產(chǎn)物無(wú)溶劑殘留，是近年來(lái)被大量采用的植物有效部位提取方式。薯蕷皂甙元的純化方法通常選用硅膠柱層析分離(一般用CHCl3-CH3OH-H2O系統(tǒng))，有時(shí)結(jié)合凝膠Sephadex LH-20柱層析、大孔樹(shù)脂柱層析或DC-CC法進(jìn)行分離。但是這種方法均比較復(fù)雜，溶劑消耗量大，成本較高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種在穿山龍飲片中用CO2流體萃取薯蕷皂甙元，再結(jié)合三氧化二鋁柱層析的純化方法，以提高有效成分的純度。
本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實(shí)現(xiàn)的這種穿山龍中薯蕷皂甙元的純化方法，其特征在于先將穿山龍?jiān)嫌昧蛩徇M(jìn)行水解，再用CO2流體對(duì)穿山龍中薯蕷皂甙元進(jìn)行超臨界萃取，將得到的粗品用三氧化二鋁柱層析純化。
所述的穿山龍中薯蕷皂甙元的純化方法，采用如下步驟完成A、將穿山龍飲片原料粉碎至10目，以1∶10的料液比在2.0mol/L的硫酸溶液中水解4.0h，用無(wú)水碳酸鈉中和烘干備用；B、將烘干后的原料粉碎至40目，加入超臨界流體萃取罐中，打開(kāi)CO2鋼瓶，以乙醇為攜帶劑開(kāi)始萃取，萃取器溫度為50～60℃，萃取壓力為25～35MPa，CO2流量為40～45Kg/h，萃取時(shí)間為2～4h，得到薯蕷皂甙元粗品；C、采用三氧化二鋁作為層析柱的固定相，氯仿或甲醇為流動(dòng)相及洗脫液，干法裝柱，將步驟B得到薯蕷皂甙元粗品進(jìn)行柱層析純化。
所述的穿山龍中薯蕷皂甙元的純化方法中一種延伸技術(shù)方案是先將穿山龍飲片原料以每克加入100U纖維素酶或α-淀粉酶計(jì)，在40℃恒溫水浴中對(duì)其進(jìn)行酶解24h，再進(jìn)行硫酸水解處理。
所述的穿山龍中薯蕷皂甙元的純化方法，步驟B所述的CO2氣體經(jīng)過(guò)凈化器I后，進(jìn)入冷凝器液化，然后由柱塞泵加壓再進(jìn)入凈化器II進(jìn)一步液化，通過(guò)管道進(jìn)入萃取器底部，溶有溶質(zhì)的CO2流體由萃取器頂部出來(lái)進(jìn)入分離器，形成回流。
所述的穿山龍中薯蕷皂甙元的純化方法，設(shè)定一級(jí)分離器I的壓力為6MPa，溫度為60℃；二級(jí)分離器II的壓力為6MPa，溫度為45℃。
所述的穿山龍中薯蕷皂甙元的純化方法，步驟B所述的攜帶劑是95％的乙醇或無(wú)水乙醇。
所述的穿山龍中薯蕷皂甙元的純化方法，步驟C層析柱三氧化二鋁和薯蕷皂甙元的粗品重量比為20∶1。
所述的穿山龍中薯蕷皂甙元的純化方法，步驟C層析柱加入洗脫液與薯蕷皂甙元粗品的重量比為500-1000∶1。
所述的穿山龍中薯蕷皂甙元的純化方法，步驟C三氧化二鋁柱層析純化方法包括A、將三氧化二鋁在200℃的烘箱中活化4小時(shí)，干法裝入層析柱中；B、將薯蕷皂甙元粗品溶于氯仿中，制成樣品溶液；C、先用氯仿洗脫液通柱，再加入樣品溶液；D、用氯仿洗脫，控制流速為2mL/min，每20mL洗脫液取樣一次，在160～300mL收集薯蕷皂甙元純品。
上述的穿山龍中薯蕷皂甙元的純化方法，純化步驟B將薯蕷皂甙元粗品溶于甲醇中制成樣品溶液，純化步驟C先用甲醇通柱，再加入樣品溶液；純化步驟D用甲醇洗脫，在200～300mL收集薯蕷皂甙元純品。
本發(fā)明的穿山龍中薯蕷皂甙元的純化方法的技術(shù)進(jìn)步效果表現(xiàn)在
1、所得產(chǎn)物中薯蕷皂甙元的含量大大提高，為后續(xù)產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)提供了保障；2、本發(fā)明中超臨界CO2萃取簡(jiǎn)化了操作過(guò)程，提取時(shí)間也由原來(lái)的20多個(gè)小時(shí)縮短到3小時(shí)；3、本發(fā)明提供的三氧化二鋁柱層析洗脫的薯蕷皂甙元純度高，薯蕷皂甙元的損失少，使用的洗脫劑量少，節(jié)約成本，操作簡(jiǎn)便；4、使薯蕷皂甙元的生產(chǎn)和純化合為一體，有益于這種醫(yī)藥中間體的工業(yè)化。


圖1是本發(fā)明的超臨界CO2流體萃取部分流程圖具體實(shí)施方式
實(shí)施例1(1)穿山龍飲片的水解將穿山龍飲片粉碎至10目，置于圓底燒瓶中，在2.0mol/L的硫酸溶液中水解，結(jié)束后用無(wú)水碳酸鈉中和烘干備用；(2)超臨界CO2流體萃取薯蕷皂甙元將烘干后的粉末粉碎至40目加入超臨界流體萃取罐中，工藝流程如圖1所示打開(kāi)CO2鋼瓶，氣體經(jīng)過(guò)凈化器I后，進(jìn)入冷凝器液化，然后由柱塞泵加壓再進(jìn)入凈化器I I進(jìn)一步液化，通過(guò)管道進(jìn)入萃取器底部，設(shè)定分離器I的壓力為6MPa，溫度為60℃；二級(jí)分離器II的壓力為6MPa，溫度為45℃；萃取器溫度55℃，萃取壓力35MPa，CO2流量為40～45Kg/h，萃取時(shí)間為3h，95％乙醇為攜帶劑，萃取3小時(shí)后由分離釜中取樣，得到薯蕷皂甙元粗品，粗品純度54.64％；其提取率為2.23％。
(3)薯蕷皂甙元粗品的純化稱取三氧化二鋁70g，在200℃的烘箱中活化4小時(shí)，干法裝入20×40cm垂直放置的層析柱中，準(zhǔn)確稱取薯蕷皂甙元粗品0.35g溶于氯仿中，先用氯仿通柱，再加入樣品溶液，用氯仿洗脫，控制流速為2mL/min。每20mL氯仿溶液取樣一次，在160～300mL可得到純度98％的薯蕷皂甙元純品。其回收率可達(dá)95％以上。
實(shí)施例2(1)穿山龍飲片的水解每克穿山龍飲片加入100U纖維素酶，在40℃恒溫水浴中對(duì)其進(jìn)行酶解24h；將酶解后的穿山龍?jiān)?.0mol/L的硫酸溶液中水解4.0h，結(jié)束后用無(wú)水碳酸鈉中和烘干備用；(2)超臨界CO2流體萃取薯蕷皂甙元過(guò)程同實(shí)施例1，其提取率為2.43％，相對(duì)未經(jīng)酶水解處理的穿山龍飲片提高0.2％。
(3)薯蕷皂甙元的純化稱取三氧化二鋁70g，在200℃的烘箱中活化4小時(shí)，干法裝入20×40cm垂直放置的層析柱中，準(zhǔn)確稱取薯蕷皂甙元粗品0.35g溶于甲醇中，先用甲醇通柱，再加入樣品溶液，用甲醇洗脫，控制流速為2mL/min。每20mL甲醇溶液取樣一次，在200～300mL可得到純度98％的薯蕷皂甙元純品。其回收率可達(dá)90％以上。
實(shí)施例3(1)穿山龍飲片的水解每克穿山龍飲片原料加入100Uα-淀粉酶，在40℃恒溫水浴中對(duì)其進(jìn)行酶解24h；(2)超臨界CO2流體萃取薯蕷皂甙元以無(wú)水乙醇作攜帶劑，過(guò)程同實(shí)施例1，其提取率為2.66％，相對(duì)未經(jīng)酶水解處理的穿山龍飲片提高0.43％。
(3)薯蕷皂甙元的純化過(guò)程同實(shí)施例1本發(fā)明的超臨界CO2流體萃取設(shè)備選自江蘇南通華安超臨界萃取有限公司，纖維素酶產(chǎn)于何氏璧生物技術(shù)有限公司，α-淀粉酶產(chǎn)于北京雙旋微生物培養(yǎng)基制品廠。
本發(fā)明列舉的實(shí)施例旨在進(jìn)一步地闡述工藝方法，而不對(duì)本發(fā)明的范圍構(gòu)成任何限制。本發(fā)明實(shí)例得到的產(chǎn)品和經(jīng)由本發(fā)明權(quán)利要求書(shū)1-10所述的方法均可得到薯蕷皂甙元純化產(chǎn)品。
權(quán)利要求
1.一種穿山龍中薯蕷皂甙元的純化方法，其特征在于先將穿山龍?jiān)嫌昧蛩徇M(jìn)行水解，再用CO2流體對(duì)穿山龍中薯蕷皂甙元進(jìn)行超臨界萃取，將得到的粗品用三氧化二鋁柱層析純化。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的穿山龍中薯蕷皂甙元的純化方法，其特征在于采用如下步驟完成A、將穿山龍飲片原料粉碎至10目，以1∶10的料液比在2.0mol/L的硫酸溶液中水解4.0h，用無(wú)水碳酸鈉中和烘干備用；B、將烘干后的原料粉碎至40目，加入超臨界流體萃取罐中，打開(kāi)CO2鋼瓶，以乙醇為攜帶劑開(kāi)始萃取，萃取器溫度為50～60℃，萃取壓力為25～35MPa，CO2流量為40～45Kg/h，萃取時(shí)間為2～4h，得到薯蕷皂甙元粗品；C、采用三氧化二鋁作為層析柱的固定相，氯仿或甲醇為流動(dòng)相及洗脫液，干法裝柱，將步驟B得到薯蕷皂甙元粗品進(jìn)行柱層析純化。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的穿山龍中薯蕷皂甙元的純化方法，其特征在于先將穿山龍飲片原料以每克加入100U纖維素酶或α-淀粉酶計(jì)，在40℃恒溫水浴中對(duì)其進(jìn)行酶解24h，再進(jìn)行硫酸水解處理。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的穿山龍中薯蕷皂甙元的純化方法，其特征在于步驟B所述的CO2氣體經(jīng)過(guò)凈化器I后，進(jìn)入冷凝器液化，然后由柱塞泵加壓再進(jìn)入凈化器II進(jìn)一步液化，通過(guò)管道進(jìn)入萃取器底部，溶有溶質(zhì)的CO2流體由萃取器頂部出來(lái)進(jìn)入分離器，形成回流。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的穿山龍中薯蕷皂甙元的純化方法，其特征在于設(shè)定一級(jí)分離器I的壓力為6MPa，溫度為60℃；二級(jí)分離器II的壓力為6MPa，溫度為45℃。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的穿山龍中薯蕷皂甙元的純化方法，其特征在于步騾B所述的攜帶劑是95％的乙醇或無(wú)水乙醇。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的穿山龍中薯蕷皂甙元的純化方法，其特征在于步驟C層析柱三氧化二鋁和薯蕷皂甙元的粗品重量比為20∶1。
8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的穿山龍中薯蕷皂甙元的純化方法，其特征在于步驟C層析柱加入洗脫液與薯蕷皂甙元粗品的重量比為500-1000∶1。
9.根據(jù)權(quán)利要求2所述的穿山龍中薯蕷皂甙元的純化方法，其特征在于步驟C三氧化二鋁柱層析純化方法包括A、將三氧化二鋁在200℃的烘箱中活化4小時(shí)，干法裝入層析柱中；B、將薯蕷皂甙元粗品溶于氯仿中，制成樣品溶液；C、先用氯仿洗脫液通柱，再加入樣品溶液；D、用氯仿洗脫，控制流速為2mL/min，每20mL洗脫液取樣一次，在160～300mL收集薯蕷皂甙元純品。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的穿山龍中薯蕷皂甙元的純化方法，其特征在于純化步驟B將薯蕷皂甙元粗品溶于甲醇中制成樣品溶液，純化步驟C先用甲醇通柱，再加入樣品溶液；純化步驟D用甲醇洗脫，在200～300mL收集薯蕷皂甙元純品。
全文摘要
本發(fā)明提供一種穿山龍中薯蕷皂甙元的純化方法，其特征在于先將穿山龍?jiān)嫌昧蛩徇M(jìn)行水解，再用CO
文檔編號(hào)C07J71/00GK1772762SQ20051001296
公開(kāi)日2006年5月17日 申請(qǐng)日期2005年11月11日 優(yōu)先權(quán)日2005年11月11日
發(fā)明者魏福祥, 王煥 申請(qǐng)人:河北科技大學(xué)