專利名稱：：二果糖二酐Ⅲ晶體的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及高效制備二果糖二酐III(DifructosedianhydrideIII)(以下稱為DFAIII)晶體的方法。本發(fā)明即使在循環(huán)式DFAIII的制備中也無需使其結(jié)晶率降低，作為DFAIII的工業(yè)化制備方法非常優(yōu)異。
背景技術(shù)：
：DFAIII是促進(jìn)以鈣為代表的礦物質(zhì)吸收或具有利尿效果、通便改善效果的功能性低聚糖，是兩個(gè)果糖的還原末端互相與其中一個(gè)還原末端以外的羥基結(jié)合而成的環(huán)狀二糖類(二-D-呋喃果糖-2’，12，3’-二酐)，對水的溶解度高，顯示為蔗糖的90～95％，但其甜味度為蔗糖的52％左右。還是耐熱或酸的物質(zhì)。關(guān)于DFAIII的制備方法，有人提出了下述DFAIII的制備方法使屬于產(chǎn)脲節(jié)桿菌(Arthrobacterureafaciens)的細(xì)菌或其生成的酶與菊粉和/或含菊粉的植物萃取液作用，生成DFAIII含有液，將該DFAIII含有液過活性碳柱，吸附DFAIII，然后用乙醇洗脫，回收DFAIII較多的組分，蒸發(fā)干燥固化(例如參照專利文獻(xiàn)1)。還有人提出了下述DFAIII的制備方法將菊粉和/或含有菊粉的植物萃取液過填充了固定于固定材料上的的菊粉果糖轉(zhuǎn)移酶的柱子，生成DFAIII含有液，經(jīng)過離子交換樹脂、活性碳等純化步驟，將該含有液生成含DFAIII的糖漿或蒸發(fā)干燥固化物(例如參照專利文獻(xiàn)2)。還有如下記載使菊粉酶II與菊粉作用，可工業(yè)化生產(chǎn)高純度的DFAIII(例如參照專利文獻(xiàn)3)。但是，這些文獻(xiàn)中對于獲得結(jié)晶DFAIII則完全沒有記載，關(guān)于高效工業(yè)化生產(chǎn)DFAIII晶體等的報(bào)告例子也完全未知。專利文獻(xiàn)1日本特公昭56-26400號公報(bào)專利文獻(xiàn)2日本特開平1-285195號公報(bào)專利文獻(xiàn)3日本特開平11-43438號公報(bào)發(fā)明所要解決的課題近年來，伴隨著對DFAIII有效用途的開發(fā)，人們對DFAIII的需求日益增加。在用于醫(yī)藥用途時(shí)，當(dāng)然在飲料食品用途中使用時(shí)也一樣，人們希望有除去了DFAIII以外的糖和各種雜質(zhì)的高純度DFAIII晶體，特別是希望能夠建立由含有DFAIII的液體中更有效地獲得DFAIII晶體的方法，以及結(jié)晶DFAIII的工業(yè)化制備方法。解決課題的方法本發(fā)明針對上述技術(shù)的現(xiàn)狀，其目的在于開發(fā)制備DFAIII晶體的方法，特別是工業(yè)化高效的制備方法。因此本發(fā)明人等開發(fā)了晶體DFAIII的下述制備方法將含有DFAIII的溶液進(jìn)行清洗、過濾，然后將其濃縮，進(jìn)行粗結(jié)晶，分離粗晶糖漿，將所得粗晶溶解，將其清洗、過濾，然后濃縮，結(jié)晶，分離晶體糖漿，制備成品晶體。為了更進(jìn)一步提高效率以及工業(yè)化，在上述中，將分離的粗晶糖漿和/或晶體糖漿再次返回結(jié)晶步驟，構(gòu)建循環(huán)體系，連續(xù)地實(shí)施DFAIII晶體的制備，此時(shí)，DFAIII的結(jié)晶率隨著時(shí)間的延長而降低，難以制備DFAIII晶體，特別是工業(yè)化生產(chǎn)上實(shí)際上無法進(jìn)行，這是首次遭遇了這樣重大的問題。本發(fā)明人等為了解決上述新發(fā)現(xiàn)的重大缺陷，對于DFAIII結(jié)晶率降低的原因從各方面進(jìn)行了徹底的研究。含有DFAIII的溶液中包含DFAIII以外的物質(zhì)。它們是在由菊苣等植物中萃取菊粉時(shí)來自菊苣的物質(zhì)，或者來自在由砂糖通過酶合成生成菊粉時(shí)所合成的物質(zhì)，或者是在由菊粉生成DFAIII的酶反應(yīng)時(shí)菊粉的酶分解產(chǎn)物等。另外，含有DFAIII的溶液在制備晶體DFAIII的過程中，溶液滯留時(shí)間長，另外溶液的濃縮過程中長時(shí)間暴露在高溫等嚴(yán)酷的條件下，因此在這些條件下，DFAIII含有液的組成可能由于變性而產(chǎn)生其它新的物質(zhì)。上述各種物質(zhì)都會(huì)對DFAIII的結(jié)晶產(chǎn)生影響。另外，在DFAIII的純化、結(jié)晶步驟中，存在DFAIII含有液的循環(huán)，因此上述生成的DFAIII以外的新型物質(zhì)得以蓄積。作為DFAIII原料之一的菊粉是1個(gè)葡萄糖上連接了多個(gè)果糖而成的多糖類，使分解轉(zhuǎn)移酶與該菊粉作用時(shí)，生成DFAIII作為主要成分，還生成四糖類(G-F-F-F)或五糖類(G-F-F-F-F)的低聚果糖作為其它副產(chǎn)物。上述四糖類、五糖類不耐熱等，在濃縮等需要高溫的步驟中發(fā)生變化，分解為分子量更小的糖或最終分解為有機(jī)酸等。結(jié)果，DFAIII含有液的pH下降，特別是將制備步驟制成循環(huán)體系時(shí)，了解到該分解在DFAIII清洗、結(jié)晶步驟中進(jìn)一步加速。另外，由菊粉生成DFAIII的酶反應(yīng)步驟是在60℃左右的較溫和的條件下進(jìn)行的，但是酶反應(yīng)初期的pH是中性區(qū)域(6～7)，但反應(yīng)結(jié)束時(shí)的pH降低至4左右。因此，由酶反應(yīng)法得到的DFAIII酶合成液的pH通常為5以下，到達(dá)后面的DFAIII結(jié)晶步驟時(shí)，這成為四糖類、五糖類分解的原因之一。即，在向DFAIII結(jié)晶步驟進(jìn)展時(shí)，DFAIII以外的物質(zhì)大多是來自糖類，混雜存在單醣的葡萄糖、果糖，二糖的蔗糖，三糖、四糖以上(低聚果糖)的物質(zhì)，有機(jī)酸等。另外，如上所述，DFAIII是難以發(fā)生熱或酸解的物質(zhì)。鑒于上述情況，本發(fā)明人等針對含有DFAIII的溶液中的各種物質(zhì)對制備DFAIII晶體時(shí)的影響情況進(jìn)行了深入調(diào)查研究。結(jié)果令人吃驚地發(fā)現(xiàn)含有DFAIII的溶液的pH、以及混雜其中的糖類、特別是果糖或蔗糖對于DFAIII的結(jié)晶有很大影響，這是首次發(fā)現(xiàn)。因此，本發(fā)明人等針對本發(fā)明人等首次發(fā)現(xiàn)的上述對DFAIII結(jié)晶有特別影響的因素從各方面進(jìn)行了深入研究。即，本發(fā)明人等著眼于DFAIII以外的上述物質(zhì)進(jìn)行各種研究，結(jié)果最新發(fā)現(xiàn)在DFAIII清洗、濃縮、結(jié)晶步驟中，含有DFAIII的全部溶液的pH(玻璃電極法)保持和/或調(diào)節(jié)為5以上、優(yōu)選pH5～8、進(jìn)一步優(yōu)選pH6～8，則可以抑制在DFAIII結(jié)晶的一系列步驟中易分解物質(zhì)的分解，可以將向其它物質(zhì)的變化阻止在最小限度。另外，通過在(粗)晶體母液的pH為5以上、優(yōu)選pH6～8下使DFAIII結(jié)晶，不會(huì)使結(jié)晶率降低，可保持升高。糖的結(jié)晶率根據(jù)結(jié)晶母液的pH變化，這不僅在DFAIII中，對于其它糖類來說也是未知的，是一個(gè)全新的認(rèn)識(shí)。在DFAIII制備中，各步驟中的溶液的pH保持并調(diào)節(jié)為上述范圍的方法是盡可能地在70℃以下對步驟中的溶液進(jìn)行管理，這樣較有效果，另外，還可以添加堿劑來主動(dòng)地調(diào)節(jié)pH。所使用的堿劑例如有氫氧化鈉(苛性鈉)或氫氧化鉀(苛性鉀)、碳酸鈉(堿石灰)等。另外，通過色譜，同時(shí)除去各步驟溶液中的有機(jī)酸等酸性物質(zhì)和DFAIII以外的糖類，由此可以同時(shí)實(shí)現(xiàn)步驟溶液的DFAIII純度的提高和防止pH降低。除上述以外的方法還可以是將含有酸性物質(zhì)的DFAIII含有液過陰離子交換樹脂，酸性物質(zhì)通過離子交換被吸附，可以除去酸性物質(zhì)。最先發(fā)現(xiàn)含有DFAIII的結(jié)晶母液中所含的果糖、蔗糖是特別阻礙DFAIII結(jié)晶的因素。果糖的含量為結(jié)晶母液固體成分的5％以下、優(yōu)選1％以下，則可在DFAIII結(jié)晶時(shí)提高結(jié)晶率。并且，結(jié)晶母液pH為5～7時(shí)，如果相對于結(jié)晶終點(diǎn)溫度下的溶解度的過飽和度(本發(fā)明中稱為過飽和度S)在4.4以上，則在任意純度的含DFAIII結(jié)晶母液中都可見糖膏的流動(dòng)性顯著降低，難以進(jìn)行分蜜操作。而過飽和度S為4.1以下的條件下，糖膏具有適度的流動(dòng)性，可使分蜜操作無阻礙地實(shí)施。由此可知，結(jié)晶母液pH為5以上的DFAIII工業(yè)化結(jié)晶制備條件是以結(jié)晶終點(diǎn)溫度為基準(zhǔn)的過飽和度S在4.1以下。過飽和度S低于1.3，則結(jié)晶率為20％以下，從結(jié)晶率的角度考慮，優(yōu)選過飽和度為1.3以上、4.1以下，進(jìn)一步優(yōu)選1.5以上、4.1以下，更進(jìn)一步優(yōu)選2.3以上、4.1以下。本發(fā)明中使用的“固體成分濃度”是由通過干燥法除去溶液中的水分后殘留的固體成分的重量計(jì)算的溶液中的固體成分比例(％w/w)，在實(shí)際的制備步驟管理中，可以以簡便方法的R-Bx(折射白利糖度)的數(shù)值代替。本發(fā)明基于這些有用的全新認(rèn)識(shí)進(jìn)行進(jìn)一步研究、探討，結(jié)果終于得以完成。附圖簡述圖1表示DFAIII晶體的制備流程的一個(gè)例子，該流程包含含有DFAIII溶液的純化、結(jié)晶步驟。圖2表示通過色譜處理進(jìn)行純化的流程的一個(gè)例子。圖3表示粗結(jié)晶步驟中母液的組成和結(jié)晶率。圖中，-■-表示DFAIII固體成分純度(％)、-●-表示DFAIII結(jié)晶率(％)、-□-表示低聚果糖的固體成分純度(％)、-◇-表示蔗糖的固體成分純度(％)、-△-表示果糖的固體成分純度(％)，-○-表示pH。圖4、5、6中，上述符號均表示相同含義。圖4表示結(jié)晶步驟中母液的組成和結(jié)晶率。圖5表示通過添加苛性鈉使純化、結(jié)晶步驟的pH保持5以上時(shí)的粗結(jié)晶母液的組成和結(jié)晶率。圖6表示通過添加苛性鈉使純化、結(jié)晶步驟的pH保持5以上時(shí)的結(jié)晶母液的組成和結(jié)晶率。圖7表示向DFAIII溶液中添加蔗糖、果糖溶液時(shí)DFAIII結(jié)晶率的變化。圖8表示含有DFAIII的溶液中存在的低聚果糖、蔗糖、果糖對于DFAIII結(jié)晶率的影響(1)。圖中，F(xiàn)OS表示低聚果糖，Suc表示蔗糖，F(xiàn)ru表示果糖，Blank表示對照。圖9表示含有DFAIII的溶液中存在的蔗糖(Suc)、果糖(Fru)、蔗糖和果糖的總量(Suc+Fru)對于DFAIII結(jié)晶率的影響(2)。圖10表示含有DFAIII的溶液中存在的有機(jī)酸鹽(乙酸鈉+甲酸鈉)對于DFAIII結(jié)晶率的影響。圖11表示含有DFAIII的溶液的pH對于DFAIII結(jié)晶率的影響(1)。圖12表示含有DFAIII的溶液的pH對于DFAIII結(jié)晶率的影響(2)。圖13表示粗結(jié)晶母液的pH對于DFAIII結(jié)晶率的影響。圖14表示DFAIII的溶解度和溶解度的近似曲線。圖中，○表示DFAIII的溶解度(實(shí)測值)，-表示DFAIII溶解度的近似曲線。以下詳述本發(fā)明。本發(fā)明是將含有DFAIII的液體純化，無需降低結(jié)晶率即可高效率、工業(yè)化生產(chǎn)高純度的DFAIII晶體，這種情況下，首次著眼于含有DFAIII的液體的pH的重要性，進(jìn)行進(jìn)一步研究，結(jié)果首先了解到必須是pH為5以上，根據(jù)這些有用的新認(rèn)識(shí)進(jìn)一步進(jìn)行研究、探討，終于完成了本發(fā)明。即，本發(fā)明的重要特征是在純化含有DFAIII的液體、制備DFAIII晶體時(shí)，使含有DFAIII的液體的pH為5以上。以往，對于DFAIII從未進(jìn)行工業(yè)化結(jié)晶，因此完全未著眼于pH的研究，在對DFAIII工業(yè)化結(jié)晶的相關(guān)研究過程中，本發(fā)明人等首次著眼于pH對DFAIII結(jié)晶的影響，因此是全新的認(rèn)識(shí)。換言之，本發(fā)明是在DFAIII結(jié)晶的工業(yè)化研究中首次將問題集中于該處，可以說技術(shù)課題本身是全新的，如此看來當(dāng)然其解決方法也是新型的。即，本發(fā)明包含以下內(nèi)容。1.二果糖二酐III(DFAIII)晶體的制備方法，其特征在于含有二果糖二酐III(DFAIII)的溶液的pH為5以上。2.上述1的DFAIII晶體的制備方法，其特征在于通過堿劑添加法、色譜法、陰離子交換樹脂法等至少一種方法調(diào)節(jié)并保持含有DFAIII的溶液的pH。3.上述1和2的DFAIII晶體的制備方法，其特征在于含有DFAIII的溶液是使果糖基轉(zhuǎn)移酶與菊粉作用，將所得液體進(jìn)行清洗、過濾而得到的溶液。4.上述3的DFAIII晶體的制備方法，其特征在于菊粉的果糖聚合度為10～60，多糖的固體成分純度為70％以上。5.上述1～4中任一項(xiàng)的DFAIII晶體的制備方法，其特征在于在由DFAIII粗液經(jīng)過粗結(jié)晶至產(chǎn)品結(jié)晶的將含有DFAIII的溶液清洗、過濾，然后濃縮、結(jié)晶的步驟(純化、結(jié)晶步驟)中，至少一種含有DFAIII的溶液的pH為5以上。6.上述5的DFAIII晶體的制備方法，其特征在于將純化、結(jié)晶步驟在循環(huán)體系中進(jìn)行。7.上述1～6中任一項(xiàng)的DFAIII晶體的制備方法，其特征在于相對于在結(jié)晶母液或粗結(jié)晶母液冷卻結(jié)晶的終點(diǎn)溫度下的溶解度，過飽和度為1.3～4.1。8.DFAIII晶體的制備方法，其特征在于含有DFAIII的結(jié)晶母液或粗結(jié)晶母液中的果糖含量按照固體成分重量計(jì)算為5％以下。9.上述8中的DFAIII晶體的制備方法，其特征在于作為使果糖含量按照固體成分重量計(jì)算為5％以下的方法，是使用色譜法、酵母處理法的任意一種以上的方法，除去低聚果糖和/或果糖。10.DFAIII晶體，該DFAIII晶體通過上述1～9中任一項(xiàng)的方法制備。本發(fā)明是將含有DFAIII的溶液純化、高效率地工業(yè)化生產(chǎn)高純度的DFAIII晶體，此時(shí)的重要特征之一是對于含有DFAIII的溶液，至少一種、優(yōu)選全部該溶液的pH為5以上。實(shí)施本發(fā)明時(shí)，在DFAIII晶體的制備步驟(其一個(gè)例子是如圖1所示)中，對含有DFAIII的溶液的至少一種或全部溶液可以實(shí)施結(jié)晶，使pH為5以上。DFAIII晶體的制備方法可參照圖示了其一個(gè)例子的圖1進(jìn)行說明。含有DFAIII的溶液的原料是使果糖基轉(zhuǎn)移酶與菊粉或菊粉含有液作用而得到的DFAIII合成液，除此之外也包括DFAIII化學(xué)合成液的全部。作為原料之一的菊粉是一個(gè)葡萄糖上連接多個(gè)果糖而得到的果糖聚合物。以該菊粉作為原料，使其與生成DFAIII的酶、廣義上是指果糖基轉(zhuǎn)移酶，優(yōu)選菊粉果糖轉(zhuǎn)移酶(IFT)作用。生成IFT的微生物如下所示。其并非用于限定的例子如下所示節(jié)桿菌(Arthrobactersp.)、產(chǎn)脲節(jié)桿菌IFO12140(ArthrobacterureafaciensIFO12140)、球形節(jié)桿菌IFO12137(ArthrobacterglobiformisIFO12137)、滋養(yǎng)節(jié)桿菌IFO12139(ArthrobacterpascensIFO12139)、芽孢桿菌(Bacillussp.)、馬克斯克魯維氏酵母變種馬克斯(Kluyveromycesmarxianusvar.marxianus)、鏈霉菌(Streptomycessp.)、腸桿菌(Enterobactersp.)。使用來自這些微生物的酶時(shí)，除分離純化的酶之外，也可以使用粗純化酶、微生物培養(yǎng)物、該微生物的處理物(培養(yǎng)上清、分離菌體、菌體破碎物等)。將DFAIII晶體用于食品用途時(shí)，可以使用果糖基轉(zhuǎn)移酶、特別是IFT作為酶，除上述來自微生物的酶之外，以FERMBP-8296國際保藏于獨(dú)立行政法人產(chǎn)業(yè)技術(shù)綜合研究所特許生物寄托中心的節(jié)桿菌AHU1753(Arthrobactersp.AHU1753)菌株，其IFT生產(chǎn)能力優(yōu)異，因此該菌株的酶可優(yōu)選采用。例如，將來自上述節(jié)桿菌AHU1753菌株(FERMBP-8296)的菊粉果糖轉(zhuǎn)移酶(解聚)(IFT)的粗制酶、純化酶、酶含有物等以酶5000單位/kg菊粉在60℃下攪拌24小時(shí)、作用，使之水化、轉(zhuǎn)移，生成含有DFAIII的酶反應(yīng)溶液。使酶失活，可以得到DFAIII合成液。另外，通過化學(xué)合成也可以得到DFAIII化學(xué)合成液。上述所得的DFAIII酶合成或化學(xué)合成液可以分別單獨(dú)或者與含有DFAIII的其它溶液等混合，制成DFAIII粗液。接下來進(jìn)行DFAIII粗液的清洗過濾。清洗過濾是指DFAIII粗液的活性碳處理和固液分離處理?；钚蕴继幚硎窍駾FAIII粗液中少量添加粉末活性碳，可以根據(jù)需要進(jìn)行加熱和/或攪拌，使DFAIII以外的雜質(zhì)吸附于活性碳上的處理。粉末活性碳的平均粒徑為15～50μm，優(yōu)選25～45μm，進(jìn)一步優(yōu)選約35μm；最大粒徑為200μm以下，優(yōu)選170μm以下，進(jìn)一步優(yōu)選150μm以下，例如可使用147μm以下的粉末活性碳。其添加量相對于固體成分為5％以下，優(yōu)選0.1～3％，可進(jìn)一步優(yōu)選0.5～1.5％，這可以根據(jù)DFAIII粗液的組成適當(dāng)確定。固液分離處理可適當(dāng)利用Hi-FloSupercell(和光純藥制備)或硅藻土過濾等使用過濾助劑的過濾(例如通過陶瓷過濾機(jī)進(jìn)行的過濾可使用日本ポ-ル(株)制備的PR-12型)、膜濾器(MF)過濾、連續(xù)離心法、分子篩法、反滲透膜法、以及根據(jù)情況的超濾(UF)膜的至少其中一種。固液分離可以通過常壓、加壓或減壓的至少一種方式實(shí)施。具體來說，例如向IFT酶失活液中以固體成分的1％的比例添加太合活性碳S(TaikoActiveCharcoalS)(二村化學(xué)工業(yè)制備平均粒徑約為35μm、147μm以下)，在60℃攪拌10分鐘。將該攪拌結(jié)束的液體用硅藻土(昭和化學(xué)工業(yè)制備的ラジォライト700)進(jìn)行過濾。即，在陶瓷制的筒(日本ポ-ル(株)制備的PR-12型陶瓷管)的外面預(yù)涂上述硅藻土，使含有活性碳的反應(yīng)液加壓通過筒外，進(jìn)行加壓過濾，由筒內(nèi)回收濾液。經(jīng)過DFAIII含有液(粗液)的清洗過濾處理得到的濾液可按照常規(guī)方法濃縮。例如可通過砂糖等的制備中使用中央循環(huán)管蒸發(fā)器進(jìn)行濃縮(例如在60～80℃、120mmHg以下)，得到濃縮液。濃縮液可以濃縮至固體成分濃度為60～85％，例如77％左右。本發(fā)明中，由上述DFAIII酶合成液或化學(xué)合成液得到的DFAIII粗液在經(jīng)過清洗、過濾，再到濃縮的步驟期間，優(yōu)選保持pH為5以上。例如可添加氫氧化鈉，調(diào)節(jié)至pH5以上。將上述所得的濃縮液-母液、即粗結(jié)晶母液(約60℃)轉(zhuǎn)移到結(jié)晶機(jī)中，通過冷卻或煮糖方式生成DFAIII晶體，得到粗晶。此時(shí)，將DFAIII晶體用乳缽等粉碎，將其分散于醇等中，以此作為晶種，將該晶種以適當(dāng)量、適當(dāng)?shù)臅r(shí)機(jī)添加到母液中，進(jìn)行育晶。晶種法有フルシ-デイング和シヨツクシ-ディング兩種方法。フルシ-デイング方法中，通過使晶種量相對于結(jié)晶母液中或粗結(jié)晶母液中DFAIII量為1％以上，可以使DFAIII晶體的粒度分布向小的一方偏移。而冷卻結(jié)晶方法中，上述兩種方法的晶種溫度越低則DFAIII結(jié)晶粒度越小。冷卻結(jié)晶時(shí)的溫度梯度最初小、然后增大，這可以使結(jié)晶粒度的偏差減小。結(jié)晶機(jī)優(yōu)選使用帶循環(huán)方式和/或攪拌方式的機(jī)器。析出晶體后的粗結(jié)晶母液通過分離機(jī)(3000rpm、1200G)分離成DFAIII粗晶和粗晶糖漿。DFAIII粗晶再用熱水溶解，制成DFAIII純化液，經(jīng)過清洗、過濾步驟進(jìn)行濃縮，通過與粗晶同樣的方法進(jìn)行結(jié)晶，得到成品晶體。所得晶體無臭、是位于中性區(qū)域的無色透明的八面體晶體，熔點(diǎn)163.7℃，旋光度[α]D134.5。如本發(fā)明所述，在將各步驟的液體的pH保持并調(diào)節(jié)至5以上時(shí)，在上述流程中分離的粗晶糖漿和/或晶體糖漿根據(jù)需要返回到晶體制造體系中，通過這樣的循環(huán)體系，可實(shí)現(xiàn)DFAIII回收率的進(jìn)一步提高。而如果制成不進(jìn)行各步驟溶液的pH保持、調(diào)節(jié)的循環(huán)體系，則步驟溶液中單糖(特別是果糖)或蔗糖等DFAIII結(jié)晶抑制物質(zhì)顯著增加并蓄積，另外結(jié)晶母液的pH顯著降低，因此DFA結(jié)晶步驟的結(jié)晶率降低，最差的情況是陷入不能結(jié)晶的狀況。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)通過將各步驟溶液的pH保持并調(diào)節(jié)至5以上，可以抑制作為DFAIII結(jié)晶抑制因素的單糖或蔗糖、或者酸性物質(zhì)(有機(jī)酸等)的生成。并且，除了添加堿劑的方法之外，還可通過將含有上述抑制物質(zhì)的步驟溶液進(jìn)行色譜分離法或酵母處理來除去上述抑制物質(zhì)，純化DFAIII，使其結(jié)晶。即，將在DFAIII純化結(jié)晶的全部步驟(圖1)中生成的各種生成物作為色譜處理原液(固體成分濃度40～75％)，將其進(jìn)行色譜處理，可以純化含有DFAIII的溶液，使其結(jié)晶。該通過色譜處理進(jìn)行的純化流程的一個(gè)例子如圖2所示。色譜處理原液(固體成分濃度40～75％)進(jìn)行色譜處理，分離DFAIII組分。具有與上述再溶解液(DFAIII液)同樣的純化度的富含DFAIII的組分可以作為DFAIII純化液，通過將其清洗、過濾、濃縮、結(jié)晶制備成品晶體(途徑A)，或者可以將其直接結(jié)晶(途徑B)。還可以與富含DFAIII的組分不同，對于DFAIII含量低的非富含DFAIII的組分，將其返回至制備流程(圖1所示的由DFAIII含有液至DFAIII成品的全部純化步驟)的適當(dāng)位置(途徑C)。并且，含有低聚果糖、果糖等單糖、以及酸性物質(zhì)等、只含有極少量DFAIII的非DFAIII組分可以用作飼料的原料或廢棄。色譜分離法中，其分離可采用固定床方式(單一途徑方式)、連續(xù)方式(模擬移動(dòng)床方式)、半連續(xù)方式(固定床方式與連續(xù)方式的組合)。該裝置的填充離子交換樹脂可使用色譜用的Na型、K型、Ca型等強(qiáng)酸性離子交換樹脂。該樹脂可使用均勻粒徑的苯乙烯二乙烯基苯系樹脂等。由離子交換樹脂的制造商銷售各種色譜用樹脂，只要是可應(yīng)用于糖液的均可使用。色譜處理適合用于晶體母液的DFAIII純度低時(shí)提高其純度。酵母處理可以使DFAIII含有液與酵母接觸，也可以將兩者混合，可以根據(jù)需要攪拌進(jìn)行溫育，還可以一邊通入氣體一邊進(jìn)行培養(yǎng)。酵母可以適當(dāng)采用面包酵母、清酒酵母、啤酒酵母、葡萄酒酵母等各種酵母，也可以充分使用干酵母、壓榨酵母等各種市售商品。根據(jù)酵母的不同，低聚果糖、蔗糖、單糖類被分解，或者被攝入到菌體內(nèi)，因此酵母處理主要是用于將低聚果糖、蔗糖和/或單糖類排除到體系外。本發(fā)明還可對DFAIII純度低于60％的DFAIII含有液(結(jié)晶母液)進(jìn)行工業(yè)化結(jié)晶。本發(fā)明中，為了提高DFAIII純度低于60％的DFAIII含有液的純化度，將DFAIII含有液通過用酵母處理、清洗過濾處理或色譜處理的至少一種方法處理，可以使DFAIII含有液的DFAIII純度大幅提高。本發(fā)明中的主要術(shù)語可參照圖1所示的DFAIII晶體的制備流程如下定義。(菊粉)菊粉是指來自植物或來自酶合成物的菊粉以及菊粉含有液，例如是指菊芋、牛蒡、菊苣等的植物萃取液、以及使菊粉合成酶與蔗糖作用而得到的含有合成菊粉的液體、或者將這些液體進(jìn)行清洗、過濾所得的液體，還指將上述各液體進(jìn)行干燥固化或者結(jié)晶得到的含菊粉的粉末。作為含有DFAIII的溶液的原料之一的菊粉，通過使用果糖聚合度為10～60、多糖換算成固體成分的純度為70％以上、優(yōu)選80％以上的菊粉，可以高效地生成DFAIII。使用該DFAIII含有液制備DFAIII晶體，可以高效地制備。(DFAIII酶合成或化學(xué)合成液)DFAIII酶合成或化學(xué)合成液是指使酶與上述菊粉反應(yīng)，生成含有DFAIII的溶液，并根據(jù)需要使酶失活所得的溶液或DFAIII的化學(xué)合成液。(DFAIII粗液)DFAIII粗液是指含有上述DFAIII酶合成或化學(xué)合成液本身、將通過結(jié)晶步驟(粗結(jié)晶、結(jié)晶)結(jié)晶的母液固液分離所得到的粗晶糖漿、晶體糖漿、色譜分離處理液DFAIII組分的至少一種或多種的液體，也指在DFAIII酶合成或化學(xué)合成液中混合粗晶糖漿、晶體糖漿、色譜分離處理液、色譜分離得到的DFAIII組分的至少一種而得到的液體。(粗結(jié)晶母液)粗結(jié)晶母液是指將上述DFAIII粗液根據(jù)需要用活性碳、離子交換樹脂、色譜、酵母等進(jìn)行清洗處理，然后通過過濾等固液分離(即清洗、過濾)得到稀薄液體。將該稀薄液體或上述DFAIII粗液用效用蒸發(fā)器(効用缶)等濃縮裝置濃縮成適當(dāng)濃度所得。(DFAIII純化液)DFAIII純化液是指含有將粗結(jié)晶得到的粗晶用水(熱水)溶解成適當(dāng)濃度所得的溶解液或通過色譜分離得到的DFAIII組分的至少一種的溶液。(結(jié)晶母液)結(jié)晶母液是指將上述DFAIII純化液根據(jù)需要進(jìn)行活性碳、離子交換樹脂、酵母等的清洗處理，然后通過過濾等固液分離(即清洗、過濾)得到稀薄液體。該稀薄液體、或上述DFAIII純化液、晶體糖漿、DFAIII組分的至少一種通過效用蒸發(fā)器等濃縮裝置濃縮成適當(dāng)濃度。如上所述，含有DFAIII的粗結(jié)晶母液、結(jié)晶母液是為了進(jìn)行DFAIII結(jié)晶而專門供給冷卻方式和/或蒸發(fā)方式等結(jié)晶機(jī)等的含DFAIII的溶液。(DFAIII的純化、結(jié)晶步驟)DFAIII的純化、結(jié)晶步驟是將由DFAIII粗液經(jīng)過粗結(jié)晶至產(chǎn)品結(jié)晶的全部的含有DFAIII的溶液進(jìn)行清洗、過濾、然后濃縮、結(jié)晶的步驟。(含有DFAIII的溶液)含有DFAIII的溶液是指在DFAIII晶體制備流程中生成的含有DFAIII的溶液的全部，例如包含DFAIII粗液、粗結(jié)晶母液、結(jié)晶母液、粗晶糖漿、晶體糖漿、DFAIII純化液、色譜分離處理液、色譜分離得到的DFAIII組分(DFAIII色譜組分)的至少一種。為了實(shí)施本發(fā)明，必須使含有DFAIII的溶液的pH為5以上。隨著進(jìn)行DFAIII的結(jié)晶，pH降低，結(jié)晶率降低，這是本發(fā)明人等首次發(fā)現(xiàn)的。pH為5以上即可，優(yōu)選區(qū)域是5～8，進(jìn)一步優(yōu)選6～8。當(dāng)然也可以是更高的pH，但是用于進(jìn)行pH調(diào)節(jié)的苛性鈉、苛性鉀等堿的量增多，造成浪費(fèi)，成本增高，在操作安全性方面也會(huì)出現(xiàn)問題。含有DFAIII的溶液必須是上述定義的溶液的至少一種、優(yōu)選其全部都是pH為5以上。另外，在包含DFAIII純化、結(jié)晶步驟的DFAIII晶體制備步驟中，進(jìn)一步優(yōu)選傳送管道內(nèi)的pH也為5以上。如上所述，本發(fā)明中，為了提高DFAIII結(jié)晶率，必須使含有DFAIII的溶液的pH為5以上，進(jìn)一步研究的結(jié)果首次發(fā)現(xiàn)蔗糖和果糖的存在使DFAIII的結(jié)晶率降低，這是完全未意想到的新發(fā)現(xiàn)，還發(fā)現(xiàn)通過使結(jié)晶母液的果糖含有換算成固體成分為5％以下、優(yōu)選1％以下，可以使DFAIII的結(jié)晶率提高。并且首次確認(rèn)了上述糖的抑制也可以通過使pH為5以上來實(shí)現(xiàn)。同時(shí)滿足含有DFAIII的溶液的pH為5以上、且粗結(jié)晶母液、結(jié)晶母液的果糖換算成固體成分的含量為5％以下的條件，則可以判斷DFAIII結(jié)晶最大并協(xié)同性地提高。發(fā)明效果含有DFAIII的溶液的pH為5以上、粗結(jié)晶母液、結(jié)晶母液的果糖含有5％重量以下，則可以使DFAIII工業(yè)化、高效地結(jié)晶，進(jìn)行制備。以下通過實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)說明本發(fā)明。但本發(fā)明并不只受實(shí)施例的限定。實(shí)施例1使用試驗(yàn)車間，按照圖1所示的流程的一部分，通過循環(huán)方式進(jìn)行DFAIII晶體的制備試驗(yàn)。本試驗(yàn)中使用的含有DFAIII的溶液的糖類的值采用高效液相色譜的組成分析值。(1)酶反應(yīng)步驟一天的處理量是向100kg市售的菊粉(ォラフティ-公司、商品名ラフイテリンHP)的溶解液中添加節(jié)桿菌AHU1753(Arthrobactersp.AHU1753)菌株培養(yǎng)酶液(酶效價(jià)約50萬U)，在60℃下反應(yīng)12小時(shí)，得到DFAIII酶合成液。(2)脫色、清洗步驟。作為脫色處理，向DFAIII酶合成液中添加換算成固體成分為0.5％的活性碳(二村化學(xué)、商品名太合活性碳KW50)，在80℃下溫育30分鐘，然后進(jìn)行硅藻土過濾。(3)粗結(jié)晶步驟將DFAIII酶合成液的脫色液濃縮至固體成分濃度為76％，將其作為粗結(jié)晶母液，在50℃向其中添加晶種，用12小時(shí)冷卻至10℃，生成DFAIII粗晶。該粗晶母液(也稱為粗晶糖膏)進(jìn)行離心，分離成粗晶和粗晶糖漿。(4)純化結(jié)晶步驟將粗晶重新溶解，濃縮至固體成分濃度為75％，將其作為結(jié)晶母液，在50℃下向其中添加晶種，用12小時(shí)冷卻至10℃，生成晶體。將該晶體糖膏進(jìn)行離心，分離成晶體和晶體糖漿。(5)循環(huán)步驟為了提高DFAIII的回收率，將粗晶糖漿的五成與酶反應(yīng)結(jié)束后的液體混合，其余用作飼料用原料。另外，晶體糖漿的五成返回至粗結(jié)晶步驟的濃縮罐中，其余的五成返回至結(jié)晶步驟的濃縮罐中。(6)結(jié)晶率的計(jì)算本實(shí)施例的粗晶和晶體的結(jié)晶率計(jì)算按下式進(jìn)行。結(jié)晶率(％)＝(P/Q)×100式中，各符號表示以下內(nèi)容。PM-NQ(100-N)M/100M(粗)結(jié)晶母液的DFAIII純度N(粗)晶體糖漿的DFAIII純度(7)制備試驗(yàn)按照上述(1)～(5)的步驟進(jìn)行制備操作，由開始試驗(yàn)的第4天開始進(jìn)行粗結(jié)晶步驟，由試驗(yàn)的第7天開始結(jié)晶步驟。粗結(jié)晶步驟的概要(母液組成和結(jié)晶率)如圖3所示。粗結(jié)晶率由試驗(yàn)第10天開始降低，第13天為30％以下，因此粗晶糖漿的返回由五成減至三成。但是，結(jié)晶率在這之后繼續(xù)下降，第17天下降至10％。粗結(jié)晶母液的DFAIII純度在試驗(yàn)期間中大致接近80％，沒有大的變動(dòng)。而雜質(zhì)組成中，隨著試驗(yàn)的進(jìn)展，低聚果糖減少，可能是其分解產(chǎn)物的果糖增加。另外，粗結(jié)晶母液的pH由開始時(shí)的5.1緩慢下降，降低至4左右。純化結(jié)晶步驟的概要如圖4所示。期間，糖的組成未見大的變化，但結(jié)晶率在試驗(yàn)期間逐漸降低。結(jié)晶母液的pH在開始時(shí)為4.8，緩慢降低至4左右。實(shí)施例2由實(shí)施例1可知，通過循環(huán)方式制備DFAIII，則結(jié)晶率緩慢降低。此時(shí)結(jié)晶母液的pH降低，低聚果糖的分解也加速，由此顯示可能與結(jié)晶率的降低有關(guān)。因此，本實(shí)施例的制備試驗(yàn)中，向酶反應(yīng)結(jié)束后的液體、粗結(jié)晶母液(濃縮前的液體)以及粗晶再溶解液中添加苛性鈉，以防止各步驟溶液的pH的降低。除此之外按照與實(shí)施例1同樣的方法進(jìn)行。粗結(jié)晶步驟、結(jié)晶步驟的概要如圖5、6所示。通過添加苛性鈉，各結(jié)晶母液的pH分別在5.1～5.6、5.4～5.7的范圍內(nèi)變動(dòng)，低聚果糖的分解也得到抑制。各結(jié)晶率也可保持高水準(zhǔn)。實(shí)施例3DFAIII本身是比其它糖類更耐熱、酸的物質(zhì)。在圖1所示的DFAIII工業(yè)化制備方法中，制備步驟中的溶液的pH低，則DFAIII以外的雜質(zhì)分解，產(chǎn)生其它物質(zhì)，另外，結(jié)晶中使用的DFAIII含有液要循環(huán)使用，因此不僅pH逐漸降低，DFAIII以外的其它物質(zhì)也蓄積。實(shí)際上，在實(shí)施例1的試驗(yàn)制備中，步驟溶液的pH緩慢降低，低聚果糖的比例降低，果糖蓄積。因此，本發(fā)明人等為了驗(yàn)證pH(3～7)和熱(70、80℃)下實(shí)施例1中制備的酶反應(yīng)結(jié)束后的液體的糖組成如何變化，實(shí)施了模擬試驗(yàn)(tabletest)。結(jié)果，在70℃、pH5以上的條件下，經(jīng)過24小時(shí)后幾乎未見所含糖類的組成變化，制成pH4，則經(jīng)過8小時(shí)時(shí)，可見四糖類以上的糖類分解和果糖的增加，在pH3下，該傾向進(jìn)一步增強(qiáng)。另外，在70℃下觀察的各pH條件下上述糖組成的變化如果換成80℃下，則進(jìn)一步加速。80℃、pH5以上的條件下，前12小時(shí)均與70℃同樣，幾乎沒有變化，但經(jīng)過24小時(shí)時(shí)，可見四糖類以上的糖類分解和果糖的增加傾向。本發(fā)明人等為了研究在實(shí)施例1中pH降低至4時(shí)粗結(jié)晶母液中的酸性物質(zhì)，了解到有機(jī)酸(乳酸或乙酸、甲酸等)以30～40mg/100g試樣的濃度含有。并且在模擬試驗(yàn)中，果糖水溶液在80℃環(huán)境下長時(shí)間放置，則有機(jī)酸緩慢增加，pH降低。因此，基于實(shí)施例1～3的分析值的結(jié)果，變動(dòng)大的低聚果糖、有機(jī)酸、果糖、蔗糖、pH對結(jié)晶率有怎樣的影響，進(jìn)一步在實(shí)施例4～7中進(jìn)行了模擬試驗(yàn)。實(shí)施例4～7中采用的結(jié)晶率的計(jì)算按下式進(jìn)行。結(jié)晶率(％)＝A/B×100式中的各符號如下表示。A由結(jié)晶得到的DFAIII晶體重量(g)B結(jié)晶母液中DFAIII含量(g)實(shí)施例4(純度99.9％DFAIII水溶液中添加蔗糖、果糖溶液時(shí)的結(jié)晶率)向300g制備成71％固體成分濃度的DFAIII溶液中分別添加3g、15g、30g(換算成固體成分的蔗糖(果糖)量為1.0、4.8、9.1％)固體成分濃度為71％的蔗糖溶液或固體成分濃度為71％的果糖溶液，與未添加的一起進(jìn)行結(jié)晶。此時(shí)的育晶溫度最高為10℃。添加30g蔗糖(果糖)溶液的試驗(yàn)中，在50℃接種晶種時(shí)，接種的晶體溶解，因此在45℃下再次進(jìn)行接種。該試驗(yàn)結(jié)果如圖7所示。將結(jié)晶所使用的母液的固體成分濃度和DFAIII的量統(tǒng)一，增加蔗糖、果糖的添加量，測定生成的晶體量，結(jié)果兩者均是伴隨著添加量的增加，DFAIII的晶體生成量減少。實(shí)施例5(混雜于DFAIII含有液中的雜質(zhì)對晶體生成的影響)(1)將母液的固體成分濃度和DFAIII的量統(tǒng)一，進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果，伴隨著蔗糖、果糖添加量的增加，DFAIII的晶體生成量減少，但該結(jié)果也可能是單純地由于DFAIII純度降低而引起的，因此，下面對于所混雜的雜質(zhì)的不同對晶體生成的影響進(jìn)行試驗(yàn)。向300g制備成固體成分濃度為71％的DFAIII溶液中分別添加30g固體成分濃度為71％的低聚果糖(明治制果制備メイォリゴP四糖類、三糖類、二糖類、果糖含量分別換算成固體成分為65.2％、32.8％、1.2％、0.8％的混合物)溶液、蔗糖溶液、果糖溶液(換算成固體成分為9.1％)，與未添加的同時(shí)進(jìn)行結(jié)晶。此時(shí)的育晶溫度最高為10℃，接種溫度為45℃。該試驗(yàn)結(jié)果如圖8所示。由圖8可見，與只存在低聚果糖作為雜質(zhì)的情況相比，將低聚果糖置換成蔗糖、果糖的情況下，生成的DFAIII晶體的量減少，即使是相同的DFAIII純度，低聚果糖分解生成蔗糖、果糖，則DFAIII的結(jié)晶受到抑制。(2)混雜于DFAIII溶液中的雜質(zhì)組成對晶體生成的影響接著，對單獨(dú)存在蔗糖、果糖的情況和混雜兩者時(shí)的影響進(jìn)行調(diào)查。向300g制備成固體成分濃度為71％的DFAIII溶液中分別添加30g固體成分濃度為71％的蔗糖溶液、果糖溶液(換算成固體成分為9.1％)，以及同時(shí)添加15g蔗糖溶液和15g果糖溶液(蔗糖和果糖的合計(jì)換算成固體成分為9.1％)，與未添加的同時(shí)進(jìn)行結(jié)晶。此時(shí)的育晶溫度最高為10℃，接種溫度為45℃。其試驗(yàn)結(jié)果如圖9所示。由圖9可知，即使DFAIII純度相同，與分別添加一半的蔗糖和果相比，單獨(dú)添加時(shí)的抑制程度高。因此，DFAIII結(jié)晶是受到作為雜質(zhì)存在的蔗糖、果糖內(nèi)含量多的一方的影響。但是，實(shí)際制備現(xiàn)場中生成的蔗糖的量不會(huì)高過果糖的量，因此可以認(rèn)為結(jié)晶生成量受果糖的量的影響。由以上可以認(rèn)為，與只存在低聚果糖作為雜質(zhì)的情形相比，存在蔗糖、果糖時(shí)生成的DFAIII晶體的量少，其程度受存在的蔗糖、果糖內(nèi)含量較多的一方的影響。但是，即使是雜質(zhì)的純度相同，向DFAIII溶液中以固體物的形式向添加蔗糖、果糖時(shí)，晶體的生成量比未添加的多，因此即使存在蔗糖、果糖，如果提高母液的濃度，也可以象兩者均不存在時(shí)一樣地回收晶體。(3)混雜于DFAIII溶液中的雜質(zhì)組成對晶體生成的影響對在步驟溶液(工程汁)分析中已確認(rèn)其存在的有機(jī)酸的影響進(jìn)行了調(diào)查。存在于步驟溶液中的經(jīng)確認(rèn)的有機(jī)酸是乳酸、乙酸、甲酸、其它(多種未知峰)，其中對在果糖熱分解中生成的乙酸、甲酸進(jìn)行了試驗(yàn)。步驟溶液的分析結(jié)果顯示，在DFAIII粗液經(jīng)清洗、過濾后的液體濃縮液中檢測出的各有機(jī)酸含量為30～40mg/100g樣品左右，因此有機(jī)酸鹽的添加量分別為0～100mg/100gDFAIII溶液。向300g制備成固體成分濃度為71％的DFAIII溶液中分別添加乙酸鈉和甲酸鈉的溶液，含量分別為10mg+10mg、50mg+50mg、100mg+100mg/100gDFAIII溶液，用純水調(diào)節(jié)固體成分濃度，使包括未添加的液體在內(nèi)其濃度均相同(最終固體成分濃度為70.3％)，然后進(jìn)行結(jié)晶。此時(shí)的育晶溫度最高為10℃，接種溫度為50℃。該試驗(yàn)結(jié)果如圖10所示。由圖10可見，晶體生成量多少有些變動(dòng)，但是有機(jī)酸鹽并未抑制DFAIII的結(jié)晶。此時(shí)，未添加或者分別添加10mg/100g乙酸鈉和甲酸鈉、固體成分濃度為70.3％，這與以往的試驗(yàn)相比濃度稍微稀薄，剛接種后晶體生成緩慢，而分別添加50mg/100g的以及添加100mg/100g的試驗(yàn)中，可見剛接種后晶體迅速生成的現(xiàn)象。在考察該差異是何原因時(shí)，可以認(rèn)為試驗(yàn)中所使用的乙酸鈉和甲酸鈉混合液的pH為8.6，較高，因此后者中添加后母液的pH為7左右，這可能是產(chǎn)生差異的原因。因此，制備步驟中生成有機(jī)酸、步驟溶液的pH改變，這可能會(huì)對DFAIII晶體生成產(chǎn)生一些影響。實(shí)施例6(pH對DFAIII結(jié)晶的影響)(1)為了確認(rèn)結(jié)晶中使用的母液的pH對DFAIII晶體生成的影響，在存在有機(jī)酸鹽(乙酸鈉和甲酸鈉)的狀態(tài)下改變pH，調(diào)查此時(shí)其晶體生成量的變化。向300g制備為固體成分濃度為73％的DFAIII溶液中添加乙酸鈉和甲酸鈉的溶液，制成100mg+100mg/100gDFAIII溶液，用5N鹽酸分別將pH調(diào)節(jié)至7、5、4、3，然后用純水將固體成分濃度調(diào)節(jié)至71％，進(jìn)行結(jié)晶。此時(shí)的育晶溫度最高為25℃，接種溫度為50℃。該試驗(yàn)結(jié)果如圖11所示。由圖11可得到以下結(jié)果生成的晶體量受pH的影響，pH7時(shí)晶體生成量最多，pH4時(shí)為最小值，pH3和pH5是相同程度的晶體生成量。(2)由于該現(xiàn)象只與pH相關(guān)，因此為了驗(yàn)證即使不存在有機(jī)酸鹽也會(huì)發(fā)生上述現(xiàn)象，將DFAIII溶液用鹽酸和苛性鈉調(diào)節(jié)pH，觀察生成的晶體量是否變化。向300g將固體成分濃度調(diào)節(jié)至71.5％的DFAIII溶液用1N鹽酸和1N苛性鈉調(diào)節(jié)成pH7、5、4、3，然后加入純水，將固體成分濃度調(diào)節(jié)至71％，進(jìn)行結(jié)晶。此時(shí)的育晶溫度最高為25℃，接種溫度為50℃。該試驗(yàn)結(jié)果如圖12所示。試驗(yàn)結(jié)果與有機(jī)酸鹽存在時(shí)稍有差異，在pH5下晶體生成量少，但在pH7下晶體生成量最多，pH4下有最小值，這是相同的。為了進(jìn)一步驗(yàn)證該結(jié)果并不根據(jù)無機(jī)鹽的濃度不同而變化，在1％食鹽存在下同樣調(diào)節(jié)pH進(jìn)行結(jié)晶，結(jié)果，與在有機(jī)酸鹽的存在下進(jìn)行pH調(diào)節(jié)、結(jié)晶時(shí)有相同的傾向。由此可認(rèn)為鹽類的存在緩和了pH5下的結(jié)晶抑制作用。(3)采用實(shí)際步驟的粗晶母液，驗(yàn)證上述結(jié)論。將在采集的粗晶母液(DFAIII固體成分純度為75.9％)中析出的晶體完全溶解，然后濃縮至固體成分濃度為76％左右，使用5N鹽酸或5N苛性鈉，將pH調(diào)節(jié)至7、5、4、3，然后加入純水，調(diào)節(jié)至固體成分濃度為75(或73)％，進(jìn)行結(jié)晶。此時(shí)的育晶溫度如下固體成分濃度為75％時(shí)最高為25℃，固體成分濃度為73％時(shí)最高為10℃，接種溫度為50℃(固體成分濃度75％)或45℃(固體成分濃度73％)。該試驗(yàn)結(jié)果如圖13所示?？芍鞴腆w成分濃度中，pH4下DFAIII結(jié)晶率最低。實(shí)施例7((粗)結(jié)晶母液pH和過飽和度對DFAIII的影響)為了確定DFAIII結(jié)晶母液相對于作為DFAIII結(jié)晶抑制因素的pH的最佳濃縮度，進(jìn)行以下研究。如圖14所示，首先調(diào)查各溫度下DFAIII的溶解度(飽和固體成分濃度％)，由其實(shí)測值重新計(jì)算下式所示的溶解度曲線近似式(相關(guān)系數(shù)R2＝0.999)。溶解度(飽和固體成分濃度％)Z＝-0.00058X2+0.39X+48.8X溫度(℃)如下式定義純度為P％的DFAIII結(jié)晶母液相對于冷卻結(jié)晶終點(diǎn)溫度X℃下的DFAIII溶解度的過飽和度S，以此作為表示DFAIII結(jié)晶母液的結(jié)晶所需的濃縮度的數(shù)值。過飽和度S＝[Y×P/(100-Y)]/[Z/(100-Z)×100]YDFAIII結(jié)晶母液的固體成分濃度(％)PDFAIII結(jié)晶母液的DFAIII固體成分純度(％)Z溶解度(X冷卻結(jié)晶終點(diǎn)溫度℃)關(guān)于這里定義的過飽和度S對DFAIII結(jié)晶的影響，使用實(shí)際的DFAIII步驟溶液，改變作為結(jié)晶化抑制因素的結(jié)晶母液的pH，進(jìn)行模擬試驗(yàn)。pH的調(diào)節(jié)是向DFAIII步驟溶液中添加5NHCl或5NNaOH進(jìn)行。將它們濃縮至各種濃度，然后將所得各濃縮液作為結(jié)晶母液在50℃下進(jìn)行接種，冷卻至10℃進(jìn)行育晶，過飽和度S按照上式，以冷卻結(jié)晶終點(diǎn)溫度為10℃計(jì)算。結(jié)晶母液pH和過飽和度S的關(guān)系結(jié)果如表1所示。結(jié)晶母pH5～7時(shí)、過飽和度S為4.4以上的條件下，各純度下的含有DFAIII結(jié)晶母液中，其糖膏的流動(dòng)性顯著降低，難以進(jìn)行分蜜操作。而在過飽和度S為4.1以下的條件下，糖膏具有適度的流動(dòng)性，可無阻礙地實(shí)施分蜜操作。由此可知，結(jié)晶母液pH為5以上的DFAIII工業(yè)化晶體制備條件是以結(jié)晶化終點(diǎn)溫度為基準(zhǔn)的過飽和度S在4.1以下。過飽和度S低于1.3則結(jié)晶率為20％以下，因此從結(jié)晶率的角度考慮，優(yōu)選過飽和度為1.3以上、4.1以下，進(jìn)一步優(yōu)選1.5以上、4.1以下，更進(jìn)一步優(yōu)選2.3以上、4.1以下。(表1)各種DFAIII含有液的pH和過飽和度S對結(jié)晶率的影響DFAIII含有液A的冷卻結(jié)晶率(％)DFAIII含有液B的冷卻結(jié)晶率(％)A液的固體成分組成99.5％DFAIII、0.1％灰分、0.4％低聚果糖B液的固體成分組成79.7％DFAIII、0.3％灰分、18.3％低聚果糖、0.2％蔗糖、1.0％果糖表中×表示由于糖膏的流動(dòng)性低，因而分蜜操作困難。保藏號FERMBP-8296保藏標(biāo)記節(jié)桿菌AHU1753(Arthrobactersp.AHU1753)保藏機(jī)構(gòu)名稱獨(dú)立行政法人產(chǎn)業(yè)技術(shù)綜合研究所特許生物寄托中心保藏機(jī)構(gòu)的地址郵編305-8566日本國茨城縣筑波市東1丁目1番地1中央第6保藏日期2003年2月18日權(quán)利要求1.二果糖二酐III(DFAIII)晶體的制備方法，其特征在于含有二果糖二酐III(DFAIII)的溶液的pH為5以上。2.權(quán)利要求1的DFAIII晶體的制備方法，其特征在于通過堿劑添加法、色譜法、陰離子交換樹脂法的至少一種方法調(diào)節(jié)并保持含有DFAIII的溶液的pH。3.權(quán)利要求1和2的DFAIII晶體的制備方法，其特征在于含有DFAIII的溶液是使果糖基轉(zhuǎn)移酶與菊粉作用，將所得液體進(jìn)行清洗、過濾而得到的溶液。4.權(quán)利要求3的DFAIII晶體的制備方法，其特征在于菊粉的果糖聚合度為10～60，多糖的固體成分純度為70％以上。5.權(quán)利要求1～4中任一項(xiàng)的DFAIII晶體的制備方法，其特征在于在由DFAIII粗液經(jīng)過粗結(jié)晶至產(chǎn)品結(jié)晶的將含有DFAIII的溶液清洗、過濾，然后濃縮、結(jié)晶的步驟(純化、結(jié)晶步驟)中，至少一種含有DFAIII的溶液的pH為5以上。6.權(quán)利要求5的DFAIII晶體的制備方法，其特征在于在循環(huán)體系中進(jìn)行純化、結(jié)晶步驟。7.權(quán)利要求1～6中任一項(xiàng)的DFAIII晶體的制備方法，其特征在于相對于結(jié)晶母液或粗結(jié)晶母液在冷卻結(jié)晶的終點(diǎn)溫度下的溶解度，過飽和度為1.3～4.1。8.DFAIII晶體的制備方法，其特征在于含有DFAIII的結(jié)晶母液或粗結(jié)晶母液中的果糖含量按照固體成分重量計(jì)算為5％以下。9.權(quán)利要求8的DFAIII晶體的制備方法，其特征在于作為使果糖含量按照固體成分重量計(jì)算為5％以下的方法，是使用色譜法、酵母處理法的任意一種以上的方法，除去低聚果糖和/或果糖。10.DFAIII晶體，該DFAIII晶體通過權(quán)利要求1～9中任一項(xiàng)的方法制備。全文摘要本發(fā)明涉及二果糖二酐III(difructosedianhydrideIIIDFAIII)晶體的制備方法，其特征在于含有DFAIII，即兩個(gè)分子果糖通過1，2’；2，3’結(jié)合的難消化性二糖類(二－D－呋喃果糖－1，2’；2，3’二酐)的溶液的pH為5以上、優(yōu)選5～8、進(jìn)一步優(yōu)選6～8。根據(jù)本發(fā)明的方法，例如即使在循環(huán)體系中進(jìn)行結(jié)晶，也不會(huì)使結(jié)晶率降低，可工業(yè)化生產(chǎn)DFAIII，此時(shí)，如果(粗)結(jié)晶母液的果糖含量合計(jì)換算成固體成分為5％以下、且果糖含量為5％以下，則效果更高。文檔編號C07H3/00GK101090906SQ200480044728公開日2007年12月19日申請日期2004年12月28日優(yōu)先權(quán)日2004年12月28日發(fā)明者名倉泰三,本莊克也,菊地裕人,高木紀(jì)充,有塚勉申請人:日本甜菜制糖株式會(huì)社