專利名稱：新的嘧啶胺衍生物及其用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及新的取代的N-(3-苯甲?；被交?-4-吡啶基-2-嘧啶胺衍生物、它們的制備方法、含有它們的藥物組合物、它們任選地與一種或多種其他藥學活性化合物聯(lián)合用于治療對于抑制蛋白激酶活性有響應的疾病、尤其是腫瘤疾病的用途，以及治療所述疾病的方法。
蛋白激酶(PK)是一種催化細胞蛋白質中特定的絲氨酸、蘇氨酸或酪氨酸殘基的磷酸化作用的酶。底物蛋白質的這些翻譯后修飾充當調節(jié)細胞增殖、活化和/或分化的分子開關。在很多疾病狀態(tài)中已經(jīng)觀察到異常或過度的PK活性，包括良性和惡性增殖性疾病。在很多情況下，已經(jīng)可以通過體外和體內利用PK抑制劑來治療疾病，例如增殖性疾病。
鑒于蛋白激酶抑制劑數(shù)量之大和增殖性及其他PK-相關性疾病種類之多，一直需要提供新的種類的化合物，它們可用作PK抑制劑，因而可用于治療這些PK-相關性疾病。所需要的是新的藥學上有利的PK抑制性化合物。
費城染色體是慢性骨髓性白血病(CML)的標志，它攜帶一種雜合基因，該基因含有bcr基因的N-末端外顯子和c-Abl基因的主要C-末端部分(外顯子2-11)。該基因編碼190kD、210kD或230kD嵌合蛋白之一，這取決于所涉及的是bcr中的三個可供選擇的斷裂點中的哪一個。Bcr-Abl蛋白的Abl-部分含有Abl-酪氨酸激酶，它在野生型c-Abl中被嚴格調節(jié)，但是在Bcr-Abl融合蛋白中被組成活化。這種失調的酪氨酸激酶與多種細胞信號傳導途徑發(fā)生相互作用，引起細胞轉化和失調的細胞增殖(Lugo等，Science247，1079)。
p210 Bcr-Abl在95％的CML患者和大約33％的急性成淋巴細胞白血病(ALL)患者中表達。較小的p190 kD蛋白的表達更經(jīng)常出現(xiàn)在ALL中，但在CML中很少出現(xiàn)，其臨床特征在于顯著的單核細胞增多。230kD融合蛋白與罕見的慢性中性細胞白血病有關，該疾病進展為原始細胞危象的速度很慢。在晚期CML、尤其在ALL中，同源細胞經(jīng)常出現(xiàn)于其中Bcr-Abl蛋白的激酶結構域發(fā)生突變的患者中。所述的突變體包括例如E225V和M351T轉變(Shah等，Cancer Research2，117-225)。
突變的ras致癌基因通常與腫瘤的發(fā)展有關。ras蛋白由三種不同的基因表達，即Neuroblastoma(N)-ras、Harvey(Ha)-ras和Kirsten(K)-ras。K-ras最經(jīng)常在實體瘤中產生突變，例如結腸癌、肺癌和，特別是胰腺癌；N-ras在出血性腫瘤，主要是急性骨髓性白血病中突變(Lyons等，Endocrine-Related Cancer8，219)。已經(jīng)證實ras可以調節(jié)引起細胞轉化的多種途徑，包括，例如通過結合并激活Raf激酶的Raf/MEK途徑。
下面詳細描述的式1的N-(3-苯甲?；被交?-4-吡啶基-2-嘧啶胺衍生物顯示出對蛋白激酶活性的優(yōu)良抑制作用，尤其是對一種或多種酪氨酸激酶的抑制作用，例如Bcr-Abl、突變的Bcr-Abl、c-Abl、Raf、受體酪氨酸激酶PDGF-R、Flt3、VEGF-R、EGF-R和c-Kit，以及兩種或多種這些激酶的組合。具體地講，本發(fā)明的化合物對在抗藥患者中觀察到的Bcr-Abl的某些突變體形式表現(xiàn)出較高的效力。鑒于這些活性，這些化合物能夠用于治療尤其涉及這些激酶的異?；蜻^度活性的疾病，例如用于治療白血病的特殊病例和實體瘤例如結腸癌、肺癌和胰腺癌。
本發(fā)明涉及式1化合物和該化合物的N-氧化物或可藥用鹽， 其中R1代表氫且R2代表NR5R6，或者R1代表NR5R6且R2代表氫；
R3代表低級烷基、氟代烷基、羥基烷基或氨基甲酰基；R4代表氫、低級烷基或鹵素；并且R5和R6彼此獨立地表示氫、低級烷基、羥基-低級烷基、低級烷氧基-低級烷基、低級酰氧基-低級烷基、羧基-低級烷基、低級烷氧基羰基-低級烷基、氨基-低級烷基、低級烷基氨基-低級烷基、二(低級烷基)氨基-低級烷基、N-低級烷基哌啶基、N-低級烷基吡咯烷基或低級?；?，或者R5R6一起表示具有四、五或六個碳原子的亞烷基、具有一個氧和三或四個碳原子的氧雜-低級亞烷基或具有一個氮和三或四個碳原子的氮雜-低級亞烷基，其中氮原子是未取代的或者被低級烷基、羥基-低級烷基或低級烷氧基-低級烷基所取代，并且其中在所有情況下低級亞烷基均可以是部分或完全不飽和的和/或低級亞烷基的碳原子可以被低級烷基、羥基或低級烷氧基取代。
若無另外說明，上下文所用的一般術語優(yōu)選在本文中具有下列含義前綴“低級”表示具有至多且包括最多7個、尤其是至多且包括最多4個碳原子的基團，所述基團是直鏈的或者是具有單個或多個分支的支鏈。
若復數(shù)形式用于化合物、鹽等，其也表示單一的化合物、鹽等。
任何不對稱的碳原子都可能以(R)-、(S)-或(R，S)-構型存在，優(yōu)選(R)-或(S)-構型。這些化合物因而可以以異構體的混合物或者純的異構體存在，優(yōu)選以對映體純的非對映體存在。
本發(fā)明還涉及式1化合物可能的互變異構體。
低級烷基優(yōu)選是這樣的烷基，其含有從1且包括1個、至7且包括7個碳原子，優(yōu)選從1且包括1個、至4且包括4個碳原子，并且是直鏈或支鏈的；優(yōu)選地，低級烷基是丁基，例如正丁基、仲丁基、異丁基、叔丁基，丙基，例如正丙基或異丙基，乙基或甲基。優(yōu)選地，低級烷基是甲基、丙基或叔丁基。
低級?；鶅?yōu)選地是甲酰基或低級烷基羰基，特別是乙酰基。
羥基烷基尤其是羥基-低級烷基，優(yōu)選羥基甲基、2-羥基乙基或2-羥基-2-丙基。
氟代烷基尤其是氟代-低級烷基，優(yōu)選三氟甲基或五氟乙基。
鹵素尤其是氟、氯、溴或碘，尤其是氟、氯或溴。
低級烷氧基尤其是甲氧基、乙氧基、異丙氧基或叔丁氧基。
低級烷氧基羰基尤其是叔丁氧基羰基、異丙氧基羰基、甲氧基羰基或乙氧基羰基。
鹽尤其是式1化合物的可藥用鹽。
所述的鹽可以是例如酸加成鹽，優(yōu)選由具有堿性氮原子的式1化合物與有機或無機酸形成的鹽，尤其是可藥用鹽。適合的無機酸例如是氫鹵酸，例如鹽酸、硫酸或磷酸。適合的有機酸例如是羧酸、膦酸、磺酸或氨基磺酸，例如乙酸、丙酸、辛酸、癸酸、十二烷酸、乙醇酸、乳酸、富馬酸、琥珀酸、己二酸、庚二酸、辛二酸、壬二酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、氨基酸(例如谷氨酸或天冬氨酸)、馬來酸、羥基馬來酸、甲基馬來酸、環(huán)己烷羧酸、金剛烷羧酸、苯甲酸、水楊酸、4-氨基水楊酸、鄰苯二甲酸、苯乙酸、扁桃酸、肉桂酸、甲烷-或乙烷-磺酸、2-羥基乙烷磺酸、乙烷-1，2-二磺酸、苯磺酸、2-萘磺酸、1，5-萘二磺酸、2-、3-或4-甲基苯磺酸、甲基硫酸、乙基硫酸、十二烷基硫酸、N-環(huán)己基氨基磺酸、N-甲基-、N-乙基-或N-丙基-氨基磺酸，或者其他有機質子酸，例如抗壞血酸。
出于分離或純化的目的，也有可能使用藥學上不可接受的鹽，例如苦味酸鹽或高氯酸鹽。就治療用途而言，僅采用可藥用鹽或游離化合物(適用的話為藥物制劑的形式)，它們因此是優(yōu)選的。
鑒于新化合物的游離形式與鹽形式(包括能夠用作中間體的那些鹽，例如用于新化合物的純化或鑒別)之間的密切關系，如果適當?shù)脑?，上下文任何對游離化合物的稱謂均應理解為也表示相應的鹽。
式1化合物及其N-氧化物具有有價值的藥理性質，如上下文所述。
本發(fā)明的化合物作為c-Abl、Bcr-Abl、Raf和VEGF-受體酪氨酸激酶活性抑制劑的功效可以證明如下抗c-Abl蛋白酪氨酸激酶活性試驗。本試驗是按照濾膜結合測定法如下進行的克隆His-標記的c-Abl激酶結構域，在桿狀病毒/Sf9系統(tǒng)中表達，如Bhat等，J Biol Chem.272，16170-5(1997)所述。利用兩步工藝將37kD的蛋白質(c-Abl激酶)經(jīng)過鈷金屬螯合物柱隨后經(jīng)陰離子交換柱純化，得到1-2mg/L的Sf9細胞。在考馬斯藍染色后，經(jīng)SDS-PAGE判斷c-Abl激酶的純度為＞90％。測定劑含有c-Abl激酶(50ng)，20mM Tris-HCl，pH7.5，10mMmgCl2，10μM Na3VO4，1mM DTT和0.06μCi/測定[γ33P]-ATP(5μM ATP)，在1％ DMSO的存在下使用30μg/mLpoly-Ala，Glu，Lys，Tyr-6:2:5:1(Poly-AEKY，Sigma P1152)，總體積為30μL。加入10μL 250mM EDTA終止反應，將30μL反應混合物轉移至預先用甲醇浸泡5分鐘的Immobilon-PVDF膜(Millipore，Bedford，MA，USA)上，用水沖洗，然后用0.5％H3PO4浸泡5分鐘，安裝在未與真空源連接的真空歧管上。點上全部樣本后，連接真空，將各孔用200μL H3PO4沖洗。取下膜，在振蕩器上用0.5％H3PO4洗滌(4次)，用乙醇洗滌一次。將膜在環(huán)境溫度下干燥，安裝在Packard TopCount 96-孔框架上，加入10μL/孔MicroscintTM(Packard)后，進行計數(shù)。
抗Bcr-Abl活性試驗。用p210 Bcr-Abl表達載體pGDp210Bcr/Abl轉染的鼠髓祖代細胞系32Dcl3(32D-bcr/abl)由J.Griffin處獲得(Dana FaberCancer Institue，Bosten，MA，USA)。細胞表達與組成型活性Abl激酶融合的Bcr-Abl蛋白質，并獨立地增殖生長因子。在RPMI 1640(AMIMED)，10％胎牛血清，2mM谷氨酰胺(Gibco)(“完全培養(yǎng)基”)中擴充細胞，通過在冷凍培養(yǎng)基(95％FCS，5％DMSO(SIGMA))中冷凍2×106細胞/小瓶的等分試樣制備工作儲備液。融化后，使用在最大10-12代期間的細胞進行實驗。
就細胞測定而言，將化合物溶于DMSO，用完全培養(yǎng)基稀釋得到起始濃度為10μM，隨后制備在完全培養(yǎng)基中的系列3-倍稀釋液。將含有200’00032D-Bcr/Abl細胞的50μL完全培養(yǎng)基接種在96孔圓底組織培養(yǎng)平板的每孔中。向小孔加入50μL/孔供試化合物的系列3-倍稀釋液，一式三份。使用未經(jīng)處理的細胞作為對照。將化合物與細胞一起在37℃，5％CO2下培育90分鐘，隨后將組織培養(yǎng)平板在1300rpm下離心(Beckman GPR離心機)，通過小心的抽吸除去上清液，注意不要除去任何沉積的細胞。加入150μL溶解緩沖液(50mM Tris/HCl，pH 7.4，150mM氯化鈉，5mM EDTA，1mM EGTA，1％NP-40，2mM原釩酸鈉，1mM PMSF，50μg/mL抑肽酶，80μg/mL亮肽素)使細胞沉積物溶解，立即用于ELISA或者在平板中冷凍在-20℃下備用。在4℃下將黑色ELISA平板(Packard HTRF-96黑色平板)用含50ng來自Upstate的兔多克隆抗-abl-SH3結構域Ab 06-466的50μLPBS/孔預涂敷過夜。用含有0.05％Tween 20(PBST)和0.5％TopBlock(Juro)的200μL/孔PBS洗滌3次后，在室溫下將殘留的蛋白質結合部位用200μL/孔PBST，3％TopBlock封閉4小時，隨后在4℃下與50μL未經(jīng)處理或經(jīng)過化合物處理的細胞溶胞產物(20μg總蛋白/孔)培育3-4小時。洗滌3次后，加入在封閉緩沖液中稀釋至0.2μμg/mL的、用堿性磷酸酶(Zymed)標記的50μL/孔抗-磷酸酪氨酸Ab PY20(AP)，培育過夜(4℃)。就全部培育步驟而言，用平板密封劑(Costar)覆蓋平板。最后，將平板用洗滌緩沖液再洗滌三次，用去離子水洗滌一次，然后加入90μL/孔含有EmeraldII的AP-底物CDPStar RTU。將已用Packard TopSealTM-A平板密封劑密封的平板在室溫下暗處培育45分鐘，通過利用Packard Top Count微量平板閃爍計數(shù)器(Top Count)測量每秒的計數(shù)(CPS)對發(fā)光進行量化。計算未經(jīng)處理的32D-Bcr/Abl細胞溶胞產物所得ELISA-計數(shù)(CPS)與測定背景(全部組分，但是沒有細胞溶胞產物)所得計數(shù)之差，計為100％，它反映存在于這些細胞中的組成型磷酸化Bcr-Abl蛋白。化合物對Bcr-Abl激酶活性的活性以Bcr-Abl磷酸化的減少百分比表示。利用圖形外推從劑量響應曲線測定IC50和IC90值。
抗突變體Bcr-Abl活性試驗化合物對M351T突變體Bcr-Abl激酶活性的活性按照上面的描述進行評價，所不同的是用突變體Bcr-Abl轉染的32Dcl3細胞代替p210 Bcr-Abl。
c-Raf-1蛋白激酶試驗通過用GST-c-Raf-1重組桿狀病毒和產生活性c-Raf-1激酶所需的v-Src和v-Ras重組桿狀病毒對Sf21細胞進行三重轉染獲得重組c-Raf-1蛋白(Williams等，PNAS 1992；892922-6)。需要活性Ras(v-Ras)來使c-Raf-1聚集到細胞膜，并且需要v-Src來磷酸化c-Raf-1以使其完全激活。將細胞以2.5×107細胞的密度接種在150mm的盤子中，然后在室溫下1小時以使細胞粘附在150mm的盤子上。抽吸培養(yǎng)液(含有10％FBS的SF900II)，然后分別以MOI為3.0、2.5和2.5加入重組的桿狀病毒GST-c-Raf-1、v-Ras和v-Src，總體積為4-5mL。將細胞在室溫下培育1小時，然后加入15mL培養(yǎng)液。將被感染的細胞在27℃下培育48-72小時。將感染的Sf21細胞刮下并收集在50mL的試管中，然后在4℃及1100g下在Sorvall離心機中離心10分鐘。將細胞團用冰冷的PBS洗滌一次，然后用0.6mL溶解緩沖液/2.5×107細胞進行溶解。在冰上放置10分鐘(不定時地用吸管抽吸)后完成細胞的完全溶解。將細胞溶胞產物在4℃及14,500g下在帶有SS-34轉子的Sorvall離心機中離心10分鐘，然后將上清液轉移到新試管中并在-80℃下貯存。將c-Raf-1用100μL填充的谷胱甘肽-瓊脂糖4B珠粒(其在冰冷的PBS中平衡)/2.5×107細胞從細胞溶胞產物中純化。將GST-c-Raf-1在4℃下在搖動下與珠粒結合1小時。將與珠粒結合的GST-c-Raf-1轉移到柱子中。將柱子用溶解緩沖液洗滌一次，然后用冰冷的Tris緩沖鹽水洗滌兩次。加入冰冷的洗脫緩沖液，然后停止柱子內的流動以使得游離的谷胱甘肽破壞GST-c-Raf-1與谷胱甘肽瓊脂糖珠粒之間的相互作用。將級分(1mL)收集在預先冷卻的試管中。每個試管均含有10％甘油(終濃度)以保持在冷凍融化循環(huán)過程中的激酶活性。將GST-c-Raf-1激酶蛋白的純化級分貯存在-80℃下。
用IκB作為c-Raf-1激酶的底物。IκB在細菌中以His-標記的蛋白BL21的形式表達。使含有IκB質粒的LysS細菌在LB培養(yǎng)基中生長至OD600為0.6，然后在37℃下用IPTG(終濃度為1mM)誘導表達IκB3小時，然后通過在超聲緩沖液[50mM Tris pH 8.0，1mM DTT，1mM EDTA]中超聲處理(超聲3次，每次1分鐘)使細菌溶解，然后在10,000g下離心15分鐘。將上清液與硫酸銨混合以得到終濃度為30％。將該混合物在4℃下?lián)u動15分鐘，然后在10,000g下離心15分鐘。將沉積物重新懸浮在含有10mM BSA的結合緩沖液(Novagen)中。將該溶液涂覆到Ni-瓊脂糖(Novagen)上并且按照Novagen手冊進行洗滌。用洗脫緩沖液(0.4M咪唑，0.2M NaCl，8mM Tris pH 7.9)將IκB從柱子中洗脫。將含有蛋白的級分在50mM Tris pH 8，1mM DTT中進行透析。
c-Raf-1蛋白激酶的活性在含或者不含抑制劑的條件下通過測定[γ33P]ATP中的33P結合進入IκB來進行測定。試驗在96孔板中在室溫下進行60分鐘。它含有(總體積為30μL)c-Raf-1激酶(400ng)、25mM Tris·HCl，pH 7.5、5mMmgCl2、5mM MnCl2、10μM Na3VO4、1mM DTT和0.3μCi/測定[γ33P]-ATP(10μM ATP)，在1％DMSO的存在下使用600ng IκB。加入10μL 250mM EDTA終止反應，將30μL反應混合物轉移到預先用甲醇浸泡5分鐘的Immobilon-PVDF膜(Millipore，Bedford，MA，USA)上，用水沖洗，然后用0.5％H3PO4浸泡5分鐘，安裝在未與真空源連接的真空歧管上。點上全部樣本后，連接真空，將各孔用200μL0.5％H3PO4沖洗。取下膜，在振蕩器上用0.5％H3PO4洗滌(4次)，用乙醇洗滌一次。將膜在室溫下干燥，安裝在Packard TopCount 96-孔框架中，加入10μL/孔MicroscintTM(Packard)后，進行計數(shù)。
抗VEGF-受體酪氨酸激酶活性試驗。本試驗是用Flt-1 VEGF-受體酪氨酸激酶進行的。詳細工藝如下將30μL激酶在20mM Tris·HCl pH 7.5，3mM二氯化錳(MnCl2)，3mM氯化鎂(MgCl2)，10μM釩酸鈉，0.25mg/mL聚乙二醇(PEG)20000，1mM二硫蘇糖醇中的溶液(10ng Flt-1的激酶結構域，Shibuya等，Oncogene5，519-24)與3μg/μL poly(Glu，Tyr)4:1(Sigma，Buchs，瑞士)，8μM[33P]-ATP(0.2μCi)，1％DMSO和0至100μM供試化合物一起在室溫下培育10分鐘。然后加入10μL 0.25M乙二胺四乙酸(EDTA)pH 7終止反應。利用多通道分配器(LAB SYSTEMS，USA)，將20μL等分試樣通過Gibco-BRL微量滴定過濾歧管上樣到PVDF(＝聚二氟乙烯)Immobilon P膜(Millipore，Bedford，USA)上，連接真空。完全除去液體后，將膜在含有0.5％磷酸(H3PO4)的水浴中洗滌4次，然后用乙醇洗滌一次，每次培育10分鐘，同時振蕩，然后安裝在Hewlett Packard TopCount歧管中，加入10μL Microscint(β-閃爍計數(shù)器液體)后測量放射性。利用至少四種濃度(通常為0.01、0.1、1.0和10μmol)的各化合物抑制百分比的線性回歸分析測定IC50值?？梢园l(fā)現(xiàn)式1化合物的IC50值在1至10’000nM的范圍內，優(yōu)選在1至100nM的范圍內。
利用另一種體外細胞實驗可以證實對VEGF-誘導的KDR-受體自磷酸化的抑制作用在6孔細胞培養(yǎng)平板中，將永久性表達人VEGF受體(KDR)的轉染CHO細胞接種在含有10％胎牛血清(FCS)的完全培養(yǎng)基中，在37℃和5％CO2下培育，直至它們顯示約80％的融合。然后將供試化合物用培養(yǎng)基(沒有FCS，含有0.1％牛血清白蛋白)稀釋，加入到細胞中(對照包含培養(yǎng)基，沒有供試化合物)。在37℃下培育2小時后，加入重組VEGF(最終的VEGF濃度為20ng/mL)。在37℃下培育另外5分鐘后，將細胞用冰冷的PBS(磷酸鹽緩沖鹽水)洗滌2次，立即溶解在100μL溶解緩沖液/孔中。然后將溶胞產物離心，以除去細胞核，并利用商業(yè)化蛋白質測定法(BIORAD)測定上清液的蛋白質濃度。溶胞產物然后可以立即使用或者(如果必要的話)貯存在-20℃下。
進行夾心ELISA，以測量KDR-受體磷酸化將KDR的單克隆抗體(例如Mab 1495.12.14)固定在黑色ELISA平板(OptiPlateTMHTRF-96，Packard)上。然后洗滌平板，將剩余的游離蛋白質結合部位用含1％BSA的PBS溶液飽和。然后在這些平板中將細胞溶胞產物(20μg蛋白質/孔)在4℃下與抗-磷酸酪氨酸抗體一起培育過夜，所述抗體與堿性磷酸酶偶聯(lián)(PY20AP，Transduction Laboratories)。再次洗滌平板，然后利用發(fā)光AP底物(CDP-Star，即用型，含有Emerald II；TROPIX)證實抗-磷酸酪氨酸抗體與所捕獲的磷酸化受體的結合。在Packard Top Count微量平板閃爍計數(shù)器(Top Count)中測量發(fā)光。陽性對照(用VEGF刺激)與陰性對照(不用VEGF刺激)的信號之差相當于VEGF-誘導的KDR-受體磷酸化(＝100％)。以對VEGF-誘導的KDR-受體磷酸化的抑制％計算供試物質的活性，其中誘發(fā)一半最大抑制作用的物質濃度被定義為ED50(抑制50％的有效劑量)。式1化合物的ED50值優(yōu)選地在0.25nM至1000nM的范圍內，優(yōu)選0.25至250nM。
式1化合物或其N-氧化物也在不同程度上抑制其他參與由營養(yǎng)因子(trophic factor)介導的信號傳導的酪氨酸激酶，例如Raf、Bcr-Abl和Abl激酶；Arg；Src家族的激酶，尤其是c-Src激酶、Lck和Fyn；EGF家族的激酶，例如c-erbB2激酶(HER-2)、c-erbB3激酶、c-erbB4激酶；胰島素樣生長因子受體激酶(IGF-1激酶)，尤其是PDGF-受體酪氨酸激酶家族的成員，例如PDGF-受體激酶、CSF-1-受體激酶、Kit-受體激酶和VEGF-受體激酶；和絲氨酸/蘇氨酸激酶，它們全都在哺乳動物細胞、包括人類細胞的生長調節(jié)和轉化中發(fā)揮作用。
對c-erbB2酪氨酸激酶(HER-2)的抑制作用例如可以利用已知工藝按照與EGF-R蛋白激酶抑制作用相同的方式進行測量。
在這些研究的基礎上，本發(fā)明的式1化合物顯示出治療功效，尤其是對依賴于蛋白激酶的疾病、特別是增殖性疾病顯示出治療功效。
在它們作為VEGF-受體酪氨酸激酶活性抑制劑的功效基礎上，式1化合物主要抑制血管的生長，因而可例如有效對抗大量與失調性血管生成有關的疾病，尤其是由眼新血管形成所導致的疾病，尤其是視網(wǎng)膜病，例如糖尿病性視網(wǎng)膜病或老年黃斑變性，牛皮癬，成血管細胞瘤，例如血管瘤，腎小球膜細胞增殖障礙，例如慢性或急性腎疾病，例如糖尿病性腎病，惡性腎硬化，血栓形成性微血管病綜合征或移植排斥，或者尤其是炎性腎疾病，例如腎小球性腎炎，尤其是腎小球膜增殖性腎小球性腎炎，溶血性尿毒癥綜合征，糖尿病性腎病，高血壓性腎硬化，動脈粥樣化，動脈再狹窄，自身免疫疾病，糖尿病，子宮內膜異位，慢性哮喘，尤其是腫瘤疾病(實體瘤，以及白血病和其他“液體腫瘤”，尤其是表達c-kit、KDR、Flt-1或Flt-3的那些)，尤其是例如乳腺癌、結腸癌、肺癌(尤其是小細胞肺癌)、前列腺癌或卡波濟氏肉瘤。式1化合物(或其N-氧化物)抑制腫瘤的生長，尤其適合于防止腫瘤的轉移性擴散和微轉移瘤的生長。
式1化合物可以單獨或者與一種或多種其他治療劑聯(lián)合給藥，可能的聯(lián)合療法采取固定組合或者本發(fā)明化合物與一種或多種其他治療劑交錯給藥或者彼此獨立給藥的方式，或者采取固定組合和一種或多種其他治療劑聯(lián)合給藥的方式。此外，式1化合物還可以與化療、放療、免疫療法、手術干預或它們的組合聯(lián)合給藥，尤其是用于腫瘤療法，例如白血病療法。在其他治療策略背景下，長期療法和輔助療法同樣是可能的，如上所述。其他可能的治療是維持患者在腫瘤消退后的狀態(tài)的療法，或者甚至是化學預防性療法，例如對于面臨危險的患者。
就可能的組合而言，治療劑尤其是一種或多種抗增殖的、細胞抑制性或細胞毒性化合物，例如一種或幾種選自但不限于如下的化療劑多胺生物合成抑制劑、蛋白激酶抑制劑、尤其是絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶例如蛋白激酶C的抑制劑，或酪氨酸蛋白激酶例如EGF受體酪氨酸激酶例如PKI166、VEGF受體酪氨酸激酶例如PTK787或PDGF受體酪氨酸激酶例如STI571的抑制劑、細胞因子、負性生長調節(jié)劑、例如TGF-β或IFN-β、芳化酶抑制劑，例如來曲唑或阿那曲唑(anastrozole)、SH2結構域與磷酸化的蛋白質相互作用的抑制劑、抗雌激素、拓撲異構酶I抑制劑，例如伊立替康(irinotecan)、拓撲異構酶II抑制劑、微管活化劑，例如紫杉醇、海綿內酯(discodermolide)或埃坡霉素、烷化劑、抗腫瘤抗代謝物，例如，吉西他濱或卡培他濱(capecitabine)，鉑化合物，例如卡鉑或順鉑、抗血管生成化合物、戈那瑞林激動劑、抗雄激素、二膦酸類，例如AREDIA或ZOMETA，和曲妥珠單抗(trastuzumab)。對于組合而言，優(yōu)選的治療劑尤其選自伊達比星、阿糖胞苷、干擾素、羥基脲和bisulfan。用代碼、通用名或商標名表示的活性劑的結構可以參見標準概要“The Merck Index”的現(xiàn)行版本或者選自數(shù)據(jù)庫例如Patents International(例如IMS WorldPublications)。在本文中將其相應的內容引入作為參考。
本發(fā)明的化合物不僅可用于人類的(預防性，優(yōu)選治療性)治療，而且可用于其他溫血動物的治療，例如商業(yè)上有用的動物，例如嚙齒動物，例如小鼠、兔或大鼠，或者豚鼠。該化合物也可以用作上述試驗系統(tǒng)中的參照標準，以便與其他化合物比較。
總的來講，本發(fā)明還涉及式1化合物或其N-氧化物體外或體內抑制酪氨酸激酶活性的用途。
關于下文提到的優(yōu)選的式1化合物及其N-氧化物，可以合理地使用來自上文提到的一般定義的取代基定義，例如用更具體的定義或者尤其用優(yōu)選的定義代替更一般性的定義。
確切而言，本發(fā)明涉及式1化合物和該化合物的N-氧化物或可藥用鹽，其中R1代表氫且R2代表NR5R6，或者R1代表NR5R6且R2代表氫；R3代表低級烷基、氟代烷基、羥基烷基或氨基甲?；?；R4代表低級烷基；并且R5和R6彼此獨立地表示氫、低級烷基、羥基-低級烷基、低級烷氧基-低級烷基、低級酰氧基-低級烷基、羧基-低級烷基、低級烷氧基羰基-低級烷基、氨基-低級烷基、低級烷基氨基-低級烷基、二(低級烷基)氨基-低級烷基、N-低級烷基哌啶基、N-低級烷基吡咯烷基或低級?；蛘逺5R6一起表示具有四、五或六個碳原子的亞烷基、具有一個氧和三或四個碳原子的氧雜-低級亞烷基或具有一個氮和三或四個碳原子的氮雜-低級亞烷基，其中氮原子是未取代的或者被低級烷基、羥基-低級烷基或低級烷氧基-低級烷基所取代，并且其中在所有情況下低級亞烷基均可以是部分或完全不飽和的和/或低級亞烷基的碳原子可以被低級烷基、羥基或低級烷氧基取代。
更確切地，本發(fā)明涉及式1化合物和該化合物的N-氧化物或可藥用鹽，其中R1代表氫且R2代表NR5R6，或者R1代表NR5R6且R2代表氫；R3代表三氟甲基；R4代表甲基；并且R5和R6彼此獨立地表示氫、低級烷基、羥基-低級烷基、低級烷氧基-低級烷基、低級酰氧基-低級烷基、羧基-低級烷基、低級烷氧基羰基-低級烷基、氨基-低級烷基、低級烷基氨基-低級烷基、二(低級烷基)氨基-低級烷基、N-低級烷基哌啶基、N-低級烷基吡咯烷基或乙?；?，或者R5R6一起表示具有四、五或六個碳原子的亞烷基、具有一個氧和三或四個碳原子的氧雜-低級亞烷基或具有一個氮和三或四個碳原子的氮雜-低級亞烷基，其中氮原子是未取代的或者被低級烷基、羥基-低級烷基或低級烷氧基-低級烷基所取代，并且其中在所有情況下低級亞烷基均可以是部分或完全不飽和的和/或低級亞烷基的碳原子可以被低級烷基、羥基或低級烷氧基取代。
更確切地，本發(fā)明涉及式1化合物和該化合物的N-氧化物或可藥用鹽，其中R1代表氫且R2代表NR5R6，或者R1代表NR5R6且R2代表氫；R3代表三氟甲基；R4代表甲基；并且R5和R6彼此獨立地表示氫、低級烷基、羥基-低級烷基、氨基-低級烷基、低級烷基氨基-低級烷基、二(低級烷基)氨基-低級烷基、N-低級烷基哌啶基或低級?；?，或者R5R6一起表示具有四或五個碳原子的亞烷基、具有一個氧和三或四個碳原子的氧雜-低級亞烷基或具有一個氮和三或四個碳原子的氮雜-低級亞烷基，其中氮原子是未取代的或者被低級烷基、羥基-低級烷基或低級烷氧基-低級烷基所取代，并且其中在所有情況下低級亞烷基均可以是部分或完全不飽和的和/或低級亞烷基的碳原子可以被低級烷基取代。
優(yōu)選下面的式1化合物和該化合物的N-氧化物或可藥用鹽，其中R1代表氫且R2代表NR5R6，或者R1代表NR5R6且R2代表氫；R3代表三氟甲基；R4代表甲基；并且R5和R6彼此獨立地表示氫、低級烷基、二(低級烷基)氨基-低級烷基、N-低級烷基哌啶基或低級乙?；?，或者R5R6一起表示具有四或五個碳原子的亞烷基、具有一個氧和四個碳原子的氧雜-低級亞烷基或具有一個氮和三或四個碳原子的氮雜-低級亞烷基，其中氮原子是未取代的或者被低級烷基所取代，并且其中氮雜-低級亞烷基可以是不飽和的和/或氮雜-低級亞烷基的碳原子可以被低級烷基取代。
特別優(yōu)選的是下面的式1化合物和該化合物的N-氧化物或可藥用鹽，其中R1代表氫且R2代表NR5R6，或者R1代表NR5R6且R2代表氫；R3代表三氟甲基；R4代表甲基；并且R5和R6彼此獨立地表示氫、甲基、乙基、2-二甲基氨基乙基、4-甲基-1-哌啶基或乙酰基，或者NR5R6一起表示吡咯烷-1-基、哌啶-1-基、嗎啉-4-基、N-甲基哌嗪-1-基、1H-咪唑基、1H-2-甲基咪唑基、1H-4-甲基咪唑基或1H-2，4-二甲基咪唑基。
特別優(yōu)選的是實施例的化合物。
本發(fā)明尤其涉及式1化合物或者其N-氧化物或可能的互變異構體或者該化合物的可藥用鹽在制備用于治療對于抑制蛋白激酶活性有響應的疾病的藥物組合物中的用途，其中所述的疾病是一種腫瘤疾病。
更具體地講，本發(fā)明涉及式1化合物或者其N-氧化物或可能的互變異構體或者該化合物的可藥用鹽在制備用于治療對于抑制Raf和/或Abl酪氨酸激酶活性有響應的白血病的藥物組合物中的用途。
此外，本發(fā)明還涉及式1化合物或其N-氧化物或可能的互變異構體或者該化合物的可藥用鹽在治療對于抑制蛋白激酶活性有響應的疾病中的用途。
此外，本發(fā)明還提供了治療對于抑制蛋白激酶活性有響應的疾病的方法，該方法包括對需要所述治療的溫血動物施用對抗所述疾病有效量的式1化合物或者其N-氧化物或可藥用鹽，其中各基團和符號具有如上所定義的含義。
本發(fā)明的化合物可以通過雖然迄今尚未應用于本發(fā)明的新化合物但其本身是已知的方法制備，尤其是如下方法，其特征在于，為了合成其中符號R1、R2、R3和R4如式1化合物所定義的式1化合物，將式2的取代的苯甲酸
其中R1、R2和R3如式1化合物所定義，或者其中羧基-COOH為活化形式的衍生物與式3的3-(4-(3-吡啶基)-2-嘧啶氨基)苯胺反應， 其中R4如式1化合物所定義，反應任選地在脫水劑和惰性堿和/或適合的催化劑的存在下，并且任選地在惰性溶劑的存在下進行；其中，如果必要的話，上述起始化合物2和3也可以以其中的官能團是被保護的形式存在和/或以鹽的形式存在，只要存在成鹽基團并且以鹽形式反應是可能的；除去式1化合物的被保護衍生物中的任何保護基團；并且如果需要的話，將所得式1化合物轉化為另一種式1化合物或其N-氧化物，將游離的式1化合物轉化為鹽，將得到的式1化合物的鹽轉化為游離化合物或另一種鹽，和/或將式1的異構體化合物的混合物分離為單個的異構體。
其中羧基為活化形式的式2化合物的衍生物尤其是一種反應性酯、反應性酸酐或反應性環(huán)狀酰胺。
式2的酸的反應性酯尤其是在酯化基團的連接碳原子上為不飽和的酯，例如乙烯基酯型的酯，例如真正的乙烯基酯(例如可由相應的酯與乙酸乙烯酯的酯基轉移作用而得；活化乙烯基酯法)，氨基甲?；蚁┗?例如可由相應的酸用異噁唑鎓試劑處理而得；1，2-噁唑鎓或Woodward法)或1-低級烷氧基乙烯基酯(例如可由相應的酸用低級烷氧基乙炔處理而得；乙氧基乙炔法)，或者脒基型的酯，例如N，N′-二取代的脒基酯(例如可由相應的酸用適合的N，N′-二取代的碳二亞胺例如N，N′-二環(huán)己基碳二亞胺處理而得；碳二亞胺法)或N，N-二取代的脒基酯(例如可由相應的酸用N，N-二-取代的氨基氰處理而得；氰氨法)，適合的芳基酯，尤其是被吸電子取代基適當取代的苯基酯(例如可由相應的酸用適當取代的苯酚例如4-硝基苯酚、4-甲基磺?；椒?、2，4，5-三氯苯酚、2，3，4，5，6-五氯苯酚或4-苯基重氮苯酚處理而得，反應在縮合劑例如N，N′-二環(huán)己基碳二亞胺的存在下進行；活化芳基酯法)，氰基甲酯(例如可在堿的存在下由相應的酸用氯乙腈處理而得；氰基甲酯法)，硫酯，尤其是未取代或取代的、例如硝基取代的苯硫基酯(例如可由相應的酸用未取代或取代的、例如硝基取代的苯硫酚處理而得，尤其通過酸酐或碳二亞胺法；活化的硫酯法)，氨基或酰氨基酯(例如可由相應的酸用N-羥基-氨基或N-羥基-酰氨基化合物處理而得，例如N-羥基-琥珀酰亞胺、N-羥基-哌啶、N-羥基-鄰苯二甲酰亞胺或1-羥基-苯并三唑，例如通過酸酐或碳二亞胺法；活化的N-羥基酯法)，或者甲硅烷基酯(例如可由相應的酸用甲硅烷基化劑例如六甲基乙硅氮烷處理而得，其易于與羥基而不是氨基反應)。
式2的酸的酸酐可以是該酸的對稱型或者優(yōu)選混合型酸酐，例如與無機酸的酸酐，例如酰鹵，尤其是酰氯(例如可由相應的酸用亞硫酰氯、五氯化磷或草酰氯處理而得；酰氯法)，疊氮化物(例如可由相應的酸酯經(jīng)由相應的酰肼再用亞硝酸處理而得；疊氮化物法)，與碳酸半衍生物例如相應的酯，例如碳酸低級烷基半酯的酸酐(例如可由相應的酸用鹵代甲酸、例如氯甲酸的低級烷基酯處理或者用1-低級烷氧基羰基-2-低級烷氧基-1，2-二氫喹啉例如1-低級烷氧基羰基-2-乙氧基-1，2-二氫喹啉處理而得；混合的O-烷基碳酸酐法)或與二鹵化、尤其是二氯化磷酸的酸酐(例如可由相應的酸用磷酰氯處理而得；磷酰氯法)；或者與有機酸的酸酐，例如與下列酸的混合型酸酐有機羧酸(例如可由相應的酸用未取代或取代的低級烷烴-或苯基烷烴-羧酸酰鹵處理而得，例如苯基乙酰氯、新戊酰氯或三氟乙酰氯；混合型羧酸酐法)、有機磺酸(例如可由相應的酸的鹽、例如堿金屬鹽用適合的有機磺酸酰鹵，例如低級烷烴-或芳基-、例如甲烷-或對-甲苯-磺酰氯處理而得；混合型磺酸酐法)或有機膦酸(例如可由相應的酸用適合的有機膦酸酐或膦酸氰化物處理而得；混合型膦酸酐法)；和對稱的酸酐(例如可在碳二亞胺或1-二乙氨基丙炔的存在下由相應酸的縮合作用而得；對稱酸酐法)。
適合的環(huán)狀酰胺尤其是與芳香性五元二氮雜環(huán)的酰胺，例如與咪唑類化合物例如咪唑的酰胺(例如可由相應的酸用N，N′-羰基二咪唑處理而得；咪唑酰胺法)，或者與吡唑類化合物，例如3，5-二甲基吡唑的酰胺(例如可由酰肼用乙酰丙酮處理而得；吡唑酰胺法)。
其中羧基為活化形式的式2的酸的衍生物優(yōu)選地是就地生成的。例如，在適合的N，N-二取代的碳二亞胺例如N，N′-二環(huán)己基碳二亞胺的存在下，使式2的酸與式3的胺的混合物反應，可以就地生成N，N′-二-取代的脒基酯。例如，在適合的堿、優(yōu)選叔胺，例如三乙胺或二甲氨基吡啶的存在下，通過與丙基膦酸酐或氰基膦酸二乙酯反應，可以就地生成式2的酸與有機膦酸的反應性混合酸酐。
反應可以按照本身已知的方式進行，反應條件尤其依賴于式2羧酸的羧基是否和如何被活化，反應通常在適合的溶劑或稀釋劑或其混合物的存在下，如果必要的話在一種縮合劑的存在下(例如當參與反應的羧基為酸酐形式時，所述縮合劑也可以是一種酸結合劑)，在冷卻或加熱下，例如溫度從大約-30℃至大約+150℃，尤其是大約0℃至+100℃，優(yōu)選從室溫(約+20℃)至+70℃，在開放或封閉的反應容器中和/或在惰性氣氛中，例如氮氣氛中進行。慣用的縮合劑例如有碳二亞胺，例如N，N′-二乙基-、N，N′-二丙基-、N，N′-二環(huán)己基-或N-乙基-N′-(3-二甲氨基丙基)-碳二亞胺；適合的羰基化合物例如羰基二咪唑；1，2-噁唑鎓化合物例如2-乙基-5-苯基-1，2-噁唑鎓3’-磺酸鹽和2-叔丁基-5-甲基-異噁唑鎓高氯酸鹽；或者適合的酰基氨基化合物，例如2-乙氧基-1-乙氧羰基-1，2-二氫喹啉。慣用的酸結合縮合劑例如有堿金屬碳酸鹽或碳酸氫鹽，例如鈉或鉀的碳酸鹽或碳酸氫鹽(習慣上與硫酸鹽一起使用)；或者有機堿，例如慣用的吡啶或三乙胺，或者位阻性三-低級烷基胺，例如N，N-二異丙基-N-乙基-胺。
在優(yōu)選的變化方式中，在適合的溶劑例如N，N-二甲基甲酰胺中，在丙基膦酸酐或氰基膦酸二乙酯和三乙胺的存在下，在1至48小時之間，在0℃至大約50℃之間、優(yōu)選在室溫下，使式2的羧酸與式3的胺反應。
如果式2或3化合物中的一個或多個其他官能團，例如羧基、羥基或氨基是保護的形式或需要保護時(因為它們不應當參與反應)，則這些基團可以是通常用于合成酰胺、特別是肽化合物、頭孢菌素和青霉素以及核酸衍生物和糖的那些基團。
保護基團可以已經(jīng)存在于前體中，并且應當保護所涉及的官能團不發(fā)生所不希望的副反應，例如?；⒚鸦?、酯化、氧化、溶劑分解和相似的反應。保護基團的一個特征是它們本身容易被除去，也就是不會發(fā)生所不需要的副反應，通?？赏ㄟ^溶劑分解、還原、光解或者酶活性、例如在類似于生理條件的條件下除去，并且它們不存在于終產物中。專業(yè)人員知道或者能夠容易地確定哪些保護基團適合于上下文提到的反應。
將所述官能團用所述的基團保護、保護基團本身和它們的脫除反應例如描述在如上文所引用的肽合成標準參考書中，以及關于保護基團的專著例如J.F.W.McOmie，″Protective Groups in Organic Chemistry″，Plenum Press，London and New York 1973，″Methoden der organischenChemie″(有機化學方法)，Houben-Weyl，第4版，15/I卷，Georg ThiemeVerlag，Stuttgart 1974，以及T.W.greene，″Protective Groups in OrganicSynthesis″，Wiley，New York。
在根據(jù)需要進行的另外的方法步驟中，起始化合物中不應當參與反應的官能團可以以未保護的形式存在，或者可以被保護起來，例如通過上文在“保護基團”中提到的一種或多種保護基團進行保護。然后按照其中所述的方法之一完全或部分除去保護基團。
具有成鹽基團的式1化合物的鹽可以按照本身已知的方式制備。式1化合物的酸加成鹽因而可以通過用酸或適合的陰離子交換試劑處理來得到。
鹽通常能夠轉化為游離化合物，例如用適合的堿性試劑處理，例如堿金屬碳酸鹽、堿金屬碳酸氫鹽或堿金屬氫氧化物，通常為碳酸鉀或氫氧化鈉。
通過適合的分離方法，立體異構體混合物、例如非對映體混合物可以按照本身已知的方式分離為它們相應的異構體。非對映體混合物例如可以通過分級結晶、色譜、溶劑分布和相似工藝分離為它們的單個非對映體。這種分離可以發(fā)生在起始化合物的水平或者式1化合物本身。對映體可以通過形成非對映體鹽來分離，例如與對映體純的手性酸生成鹽，或者通過使用具有手性配體的色譜底物的色譜法，例如HPLC。
其中在基團R1或R2中的氫與氮或氧原子連接的式1化合物可以轉化為其中的氫被低級烷基代替的各種化合物，該轉化可以例如在惰性溶劑中，優(yōu)選在貴金屬催化劑，尤其是分散形式的催化劑，例如銅，或貴金屬鹽，例如氯化亞銅(I)或硫酸銅(II)的存在下，例如與重氮低級烷基化合物尤其是重氮甲烷反應來進行。與低級烷基鹵化物反應也是可能的，或者與其他攜帶離去基團的低級烷烴反應，例如被強有機磺酸酯化的低級烷基醇，所述磺酸可以是例如低級烷基磺酸(其任選地被鹵素例如氟取代)；芳族磺酸，例如未取代或取代的苯磺酸，所述取代基優(yōu)選選自低級烷基，例如甲基，鹵素，例如溴，和/或硝基，例如被甲磺酸或對-甲苯磺酸酯化。烷基化在將酰胺烷基化的常規(guī)條件下進行，尤其是在水溶液中和/或在極性溶劑(通常為醇，例如甲醇、乙醇、異丙醇或乙二醇，或者極性非質子溶劑，例如四氫呋喃、二噁烷或二甲基甲酰胺)的存在下，酌情在酸性或堿性催化劑的存在下，一般在約0℃至相應反應混合物的沸點溫度下，優(yōu)選在20℃至回流溫度之間的溫度下進行，如果必要的話在加壓下，例如在密封的試管中，和/或在惰性氣氛下，通常為氮或氬氣氛下進行。
應當強調的是，與本章提到的轉化作用相類似的反應也可以發(fā)生在適當?shù)闹虚g體水平。
本文所述的全部方法步驟都可以在已知的反應條件下進行，優(yōu)選具體提到的那些條件，其中，可以不存在或者通常存在溶劑或稀釋劑，優(yōu)選例如對所用試劑而言是惰性的并且能夠溶解它們的溶劑或稀釋劑；可以不存在或存在催化劑、縮合劑或中和劑，例如離子交換劑，通常為陽離子交換劑，例如H+型的陽離子交換劑，這取決于反應和/或反應物的類型；在低溫、常溫或高溫下進行，例如在-100℃至約190℃的范圍內，優(yōu)選約-80℃至約150℃，例如-80至-60℃、室溫、-20至40℃或所用溶劑的沸點；在大氣壓下或在密封容器中，酌情在壓力下，和/或在惰性氣氛中，例如在氬或氮氣氛下進行。
鹽可以存在于所有起始化合物和中間體中，如果它們含有成鹽基團的話。鹽也可以存在于這類化合物的反應期間，只要反應不會因此而被干擾。
在所有反應階段，可以將所存在的異構體混合物分離為它們單個的異構體，例如非對映體或對映體，或者分離為異構體的任意混合物，例如外消旋體或非對映體混合物。
本發(fā)明還涉及如下的方法形式，其中，以可在任意階段作為中間體得到的化合物作為原料并進行剩余的步驟；或者在任意階段暫停該過程；或者在反應條件下生成原料；或者使用原料的反應性衍生物或鹽的形式；或者生成可通過本發(fā)明的方法獲得的化合物并就地加工所述化合物。在優(yōu)選的實施方式中，采用可以生成上述優(yōu)選的化合物，特別是尤其優(yōu)選的、主要優(yōu)選的和/或首優(yōu)的化合物的原料。
在優(yōu)選的實施方式中，式1化合物是按照或者類似于如實施例所定義的方法和方法步驟進行制備的。
式1化合物、包括它們的鹽，也可以以水合物的形式得到，或者它們的晶體例如可以包含用于結晶的溶劑(以溶劑化物存在)。
本發(fā)明還涉及治療對于抑制蛋白激酶活性有響應的腫瘤疾病的方法，該方法包括對需要所述治療的溫血動物施用對抗所述疾病有效量的式1化合物或者其N-氧化物或可藥用鹽，其中各基團和符號具有如上式1所定義的含義。
確切而言，本發(fā)明涉及治療對于抑制Raf和/或Abl酪氨酸激酶活性有響應的白血病的方法，該方法包括對需要所述治療的溫血動物施用對抗所述白血病有效量的式1化合物或者其N-氧化物或可藥用鹽，其中各基團和符號具有如上式1所定義的含義。
本發(fā)明還涉及藥物組合物，它包含式1化合物或其N-氧化物作為活性成分，尤其能夠用于治療前面提到的疾病。用于對溫血動物、尤其是人類腸內給藥，例如鼻、口腔、直腸或者尤其是口服給藥，和胃腸外給藥，例如靜脈內、肌內或皮下給藥的組合物尤其是優(yōu)選的。組合物包含單獨的活性成分，或者優(yōu)選還包含藥學上可接受的載體?；钚猿煞值膭┝恳蕾囉谒委煹募膊『臀锓N、其年齡、體重與個體條件、個體藥動學數(shù)據(jù)和給藥的方式。
本發(fā)明尤其涉及包含式1化合物、其互變異構體、N-氧化物或可藥用鹽或者水合物或溶劑化物和至少一種藥學上可接受的載體的藥物組合物。
本發(fā)明還涉及用在人或動物體的預防性或者尤其是治療性處置方法中的藥物組合物，其制備方法(尤其是用于治療腫瘤的組合物)，以及治療腫瘤疾病、尤其是上文提到的那些疾病的方法。
本發(fā)明還涉及式1化合物或其N-氧化物用于制備藥物制劑的方法和用途，所述制劑包含式1化合物或其N-氧化物作為活性組分(活性成分)。
在優(yōu)選的實施方式中，藥物制劑適合于對溫血動物給藥，尤其是人類或商業(yè)上有用的哺乳動物，所述動物患有對于抑制Abl酪氨酸激酶有響應的疾病，例如慢性骨髓性白血病(CML)、急性成淋巴細胞白血病(ALL)等，所述制劑包含有效量的用于抑制Bcr-Abl融合蛋白以及抑制突變的Bcr-Abl融合蛋白例如E255K、E225V、F317L或M351T突變的Bcr-Abl的式1化合物或其N-氧化物或者其可藥用鹽(如果存在成鹽基團的話)，以及至少一種可藥用載體。在優(yōu)選的實施方式中，式1化合物或其N-氧化物可用于治療對STI571治療有抗藥性的白血病。式1化合物或其N-氧化物尤其可用于克服對STI571治療的抵抗性。對STI571治療有抗藥性的白血病患者已記載于許多出版物例如Susan Brandford等(Blood.2002年5月1日；99(9)3472-5)、Christophe Barthe等或Andreas Hochhaus等(Science.2001年9月21日；293(5538)2163)中。優(yōu)選地，術語“抗藥性”是指STI571抑制各種功能性Abl激酶結構域的IC50高于抑制天然的人Abl激酶結構域的IC50，即，高于約0.025μM，優(yōu)選高于約0.15μM，更優(yōu)選高于約0.25μM，最優(yōu)選高于約5μM。
在另一種優(yōu)選的實施方式中，藥物制劑適合于對溫血動物給藥，尤其是人類或商業(yè)上有用的哺乳動物，所述動物患有對于抑制Raf激酶有響應的疾病，例如急性骨髓性白血病或實體瘤例如結腸、肺或胰腺腫瘤，所述制劑包含有效量的可以抑制Raf激酶的式1化合物或其N-氧化物或其可藥用鹽(如果存在成鹽基團的話)，以及至少一種可藥用載體。
用于溫血動物、尤其是人類或商業(yè)上有用的哺乳動物的腫瘤與其他增殖性疾病的預防性或者尤其是治療性處置的藥物組合物同樣是優(yōu)選的，其中，所述的動物需要這類治療、尤其是患有所述的疾病，并且所述組合物包含對所述疾病預防或者尤其是治療有效量的新的式1化合物或其N-氧化物作為活性成分。
藥物組合物包含大約1％至大約95％活性成分，單劑給藥形式在優(yōu)選的實施方式中包含大約20％至大約90％活性成分，不是單劑類型的形式在優(yōu)選的實施方式中包含大約5％至大約20％活性成分。單元劑型例如有包衣與未包衣片、安瓿劑、小瓶劑、栓劑或膠囊劑。其它的劑型例如有軟膏劑、霜劑、糊劑、泡沫劑、酊劑、唇膏劑、滴劑、噴霧劑、分散體等。實例為含有約0.05g至約1.0g活性成分的膠囊劑。
本發(fā)明的藥物組合物是按照本身已知的方式制備的，例如通過常規(guī)的混合、造粒、包衣、溶解或凍干過程進行制備。
優(yōu)選使用活性成分的溶液，以及混懸液或分散體，尤其是等滲的水溶液、分散體或混懸液，在例如包含單獨的活性成分或者還含有載體例如甘露醇的凍干組合物的情況下，它們可以在使用前制備。該藥物組合物可以被滅菌和/或可以包含賦形劑，例如防腐劑、穩(wěn)定劑、濕潤劑和/或乳化劑、增溶劑、調節(jié)滲透壓的鹽和/或緩沖劑，并且按照本身已知的方式制備，例如通過常規(guī)的溶解和凍干過程進行制備。所述溶液或混懸液可以包含增粘劑，通常是羧基甲基纖維素鈉、羧基甲基纖維素、葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮或明膠或增溶劑，例如Tween 80[聚氧乙烯(20)脫水山梨醇單油酸酯；ICI Americas，Inc，USA的商標]。
在油中的混懸液包含慣用于注射目的的植物油、合成或半合成油作為油性組分。就此而言，可以具體提到液體脂肪酸酯，它含有具有8至22、尤其是12至22個碳原子的長鏈脂肪酸作為酸組分，例如月桂酸、十三酸、肉豆蔻酸、十五酸、棕櫚酸、十七酸、硬脂酸、花生酸、二十二碳酸或相應的不飽和酸例如油酸、反油酸、芥酸、順蕪酸或亞油酸，如果需要的話，還可以加入抗氧化劑例如維生素E、β-胡蘿卜素或3，5-二-叔丁基-4-羥基甲苯。這些脂肪酸酯的醇組分最多具有6個碳原子，可以是一元醇或多元醇，例如一元醇、二元醇或三元醇，例如甲醇、乙醇、丙醇、丁醇或戊醇或其異構體，尤其是乙二醇和甘油。因此，作為脂肪酸酯可以提到下面這些油酸乙酯、肉豆蔻酸異丙酯、棕櫚酸異丙酯、″Labrafil M 2375″(聚氧乙烯甘油三油酸酯，Gattefossé，Paris)、″Labrafil M 1944 CS″(通過杏仁油的醇解所制備的不飽和的聚乙二醇化的甘油酯，其由甘油酯和聚乙二醇酯組成，Gattefossé，法國)、″Labrasol″(通過TCM的醇解所制備的飽和的聚乙二醇化的甘油酯，其由甘油酯和聚乙二醇酯組成，Gattefossé，法國)和/或″Miglyol 812″(鏈長為C8至C12的飽和脂肪酸的甘油三酯，Hüls AG，德國)，尤其是植物油例如棉籽油、杏仁油、橄欖油、蓖麻油、芝麻油、豆油，更尤其是花生油。
注射制劑的生產通常在無菌條件下進行，將其填充到例如安瓿或小瓶中然后將容器密封的過程也在無菌條件下進行。
口服給藥用藥物組合物例如可以這樣獲得，將活性成分與一種或多種固體載體混合，如果需要的話將所得混合物造粒，加工該混合物或顆粒(如果需要或必要的話，加入另外的賦形劑)形成片劑或片芯。
適合的載體尤其是填充劑，例如糖、例如乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇、纖維素制品和/或磷酸鈣例如磷酸三鈣或磷酸氫鈣和粘合劑，例如淀粉、例如玉米淀粉、小麥淀粉、大米淀粉或馬鈴薯淀粉、甲基纖維素、羥基丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯烷酮，和/或崩解劑(如果需要的話)，例如以上提到的淀粉以及羧甲基淀粉、交聯(lián)的聚乙烯吡咯烷酮、海藻酸或其鹽例如藻酸鈉。另外的賦形劑尤其是流動調節(jié)劑和潤滑劑，例如硅酸、滑石、硬脂酸或其鹽例如硬脂酸鎂或硬脂酸鈣和/或聚乙二醇或其衍生物。
片芯可以帶有適宜的、任選為腸溶性的包衣，包衣可以使用濃糖溶液，其中可以包含阿拉伯膠、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇和/或二氧化鈦，或者使用在適宜有機溶劑或溶劑混合物中的包衣溶液，或者就腸溶包衣制備而言，使用適宜的纖維素制品的溶液，例如乙?；w維素鄰苯二甲酸酯或羥丙甲基纖維素鄰苯二甲酸酯。染料或顏料可以加入到片劑或片劑包衣中，例如作為鑒別目的，或者指示活性成分的不同劑量。
口服給藥用藥物組合物還包括由明膠組成的硬膠囊劑，和由明膠和增塑劑例如甘油或山梨醇組成的軟密封膠囊劑。硬膠囊劑可以含有顆粒形式的活性成分，例如與填充劑例如玉米淀粉、粘合劑和/或助流劑例如滑石或硬脂酸鎂和可選的穩(wěn)定劑的混合物。在軟膠囊劑中，優(yōu)選將活性成分溶解或懸浮在適宜的液體賦形劑例如脂肪油、石蠟油或液體聚乙二醇或乙二醇或丙二醇的脂肪酸酯中，還可以向其中加入穩(wěn)定劑和例如聚氧乙烯脫水山梨醇的脂肪酸酯型的洗滌劑。
適合于直腸給藥的藥物組合物例如有栓劑，其由活性成分與栓劑基質組成。栓劑基質例如有天然或合成的甘油三酯、鏈烷烴類、聚乙二醇或高級烷醇類。
就胃腸外給藥而言，活性成分的水溶性形式、例如水溶性鹽的水溶液或者含有增粘劑，例如羧甲基纖維素鈉、山梨糖醇和/或葡聚糖和(如果需要的話)穩(wěn)定劑的水性注射混懸液是尤其適合的?；钚猿煞?、任選地與賦形劑一起，還可以是凍干產物的形式，可以在胃腸外給藥之前通過加入適宜的溶劑制成溶液。
用于例如胃腸外給藥的溶液也可以用作輸注溶液。
優(yōu)選的防腐劑例如有抗氧化劑，例如抗壞血酸，或者殺微生物劑，例如山梨酸或苯甲酸。
本發(fā)明同樣涉及治療上文提到的病理學狀況之一的過程或方法，尤其是對于抑制酪氨酸激酶有響應的疾病，尤其是相應的腫瘤疾病。式1化合物或其N-氧化物可以原樣給藥或者尤其以藥物組合物的形式對需要所述治療的溫血動物、例如人進行預防性或治療性給藥，優(yōu)選給藥量可有效對抗所述疾病。在體重約70kg的個體的情況下，每日給藥劑量為大約0.05g至大約5g、優(yōu)選大約0.25g至大約1.5g本發(fā)明的化合物。
本發(fā)明尤其還涉及式1化合物或其N-氧化物或者其可藥用鹽、尤其是被認為是優(yōu)選的式1化合物或其可藥用鹽本身或者含有至少一種可藥用載體的藥物制劑用于上文提到的一種或多種疾病、優(yōu)選對抑制蛋白激酶有響應的疾病、尤其是腫瘤疾病，更尤其是對于抑制Abl酪氨酸激酶有響應的白血病或對于抑制Raf激酶有響應的腫瘤的治療性和預防性處置的用途。
用在每種情況中的優(yōu)選劑量、組合物和藥物制劑(藥物)的制備如上所述。
新的原料和/或中間體以及其制備方法同樣是本發(fā)明的主題。在優(yōu)選的實施方式中，選擇可以獲得優(yōu)選化合物的原料和反應條件。
式2和3的原料是已知的、商業(yè)上可得到的或者可以類似于或按照本領域已知的方法合成。
下列實施例起到闡述發(fā)明的目的，并不限制發(fā)明的范圍。
實施例實施例14-二乙基氨基-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]苯基]-3-(三氟甲基)-苯甲酰胺將含有約50％丙基膦酸酐的N，N-二甲基甲酰胺溶液(Fluka，Buchs，瑞士；1.14mL，約1.8mmol)加入到攪拌中的4-甲基-N-[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]-1，3-苯二胺(277.3mg，1mmol)、4-二乙基氨基-3-(三氟甲基)-苯甲酸(261.3mg，1mmol)和三乙基胺(1.33mL，9.6mmol)在3mL N，N-二甲基甲酰胺的混合物中。在室溫下攪拌24小時后，將混合物用半飽和碳酸氫鈉水溶液處理，用乙酸乙酯萃取三次。將合并的有機萃取液干燥(Na2SO4)并在減壓下蒸除溶劑。將粗產物通過硅膠柱色譜純化，用二氯甲烷/甲醇洗脫。將純級分合并，蒸發(fā)，將殘余物用丙酮結晶得到白色固體狀標題化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)0.96(t，6H)；2.23(s，3H)；3.02(q，4H)；7.23(d，1H)；7.44(d，1H)；7.48(dd，1H)；7.51-7.54(m，1H)；7.66(d，1H)；8.06(d，1H)；8.21(dd，1H)；8.24(m，1H)；8.48(dt，1H)；8.52(d，1H)；8.68(dd，1H)；9.0(s，1H)；9.28(d，1H)；10.34(s，1H)。
實施例1.14-二乙基氨基-3-(三氟甲基)-芐腈將4-溴-3-(三氟甲基)-芐腈(Yonezawa等，Synthetic Communications(1996)，26，1575-1578；6.0g，24mmol)、二乙基胺(8.3mL，80mmol)和25mLN，N-二甲基乙酰胺的混合物在緊密封閉的容器中于135℃下攪拌16小時。冷卻后，將反應混合物用半飽和碳酸氫鈉水溶液處理，用乙酸乙酯萃取三次。將合并的有機萃取液干燥(Na2SO4)并減壓蒸除溶劑。將粗產物通過硅膠柱色譜純化，用己烷/乙酸乙酯洗脫得到橙色油狀標題化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)0.96(t，6H)；3.08(q，4H)；7.61(d，1H)；8.04(dd，1H)；8.16(d，1H)。
實施例1.24-二乙基氨基-3-(三氟甲基)-苯甲酸將4-二乙基氨基-3-(三氟甲基)-芐腈(1.21g，5mmol)、12mL乙酸和8mL發(fā)煙鹽酸(37％)的混合物在95℃下振蕩20小時。冷卻后，將反應混合物在減壓下蒸發(fā)至干。將固體殘余物溶于溫熱的半飽和碳酸鈉水溶液，并且通過滴加2M鹽酸將pH調節(jié)至約5-6。濾出所形成的沉淀物，用水洗滌，然后真空干燥得到白色固體。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)0.94(t，δH)；3.02(q，4H)；7.58(d，1H)；8.11-8.16(m，2H)；13.35(br.，1H)。
實施例2N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]苯基]-4-(1-吡咯烷基)-3-(三氟甲基)-苯甲酰胺標題化合物用實施例1中所述的類似方法制得，使用4-甲基-N-[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]-1，3-苯二胺和4-(1-吡咯烷基)-3-(三氟甲基)-苯甲酸作為原料。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)1.91-1.96(m，4H)；2.22(s，3H)；3.38-3.46(m，4H)；7.06(d，1H)；7.20(d，1H)；7.43(d，1H)；7.48(dd，1H)；7.50-7.54(m，1H)；8.05-8.07(m，2H)；8.24(d，1H)；8.48(dt，1H)；8.51(d，1H)；8.68(dd，1H)；8.97(s，1H)；9.28(m，1H)；10.08(s，1H)。
實施例2.14-(1-吡咯烷基)-3-(三氟甲基)-芐腈標題化合物用實施例1.1中所述的類似方法制得，使用4-溴-3-(三氟甲基)-芐腈和吡咯烷(Fluka，Buchs，瑞士)，反應溫度為95℃。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)1.90-1.96(m，4H)；3.39-3.47(m，4H)；7.03(d，1H)；7.75(dd，1H)；7.99(d，1H)。
實施例2.24-(1-吡咯烷基)-3-(三氟甲基)-苯甲酸標題化合物用實施例1.2中所述的類似方法制得，使用4-(1-吡咯烷基)-3-(三氟甲基)-芐腈。將粗產物用二氯甲烷/甲醇結晶。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)1.90-1.97(m，4H)；3.38-3.45(m，4H)；7.01(d，1H)；7.90(dd，1H)；8.10(d，1H)；12.65(br.，1H)。
實施例3N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]苯基]-4-(4-嗎啉基)-3-(三氟甲基)-苯甲酰胺標題化合物用實施例1中所述的類似方法制得，用4-甲基-N-[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]-1，3-苯二胺和4-(4-嗎啉基)-3-(三氟甲基)-苯甲酸作為原料。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)2.23(s，3H)；2.96(m，4H)；3.74(m，4H)；7.23(d，1H)；7.44(d，1H)；7.48(dd，1H)；7.52(ddd，1H)；7.66(d，1H)；8.07(d，1H)；8.23-8.25(m，2H)；8.48(dt，1H)；8.52(d，1H)；8.69(dd，1H)；8.99(s，1H)；9.28(m，1H)；10.34(s，1H)。
實施例3.14-(4-嗎啉基)-3-(三氟甲基)-芐腈標題化合物用實施例1.1中所述的類似方法制得，使用4-溴-3-(三氟甲基)-芐腈和嗎啉(Fluka，Buchs，瑞士)，反應溫度為95℃。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)3.00(m，4H)；3.72(m，4H)；7.60(d，1H)；8.09(dd，1H)；8.19(d，1H)。
實施例3.24-(4-嗎啉基)-3-(三氟甲基)-苯甲酸標題化合物用實施例1.2中所述的類似方法制得，使用4-(4-嗎啉基)-3-(三氟甲基)-芐腈。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)2.92-3.01(m，4H)；3.68-3.76(m，4H)；7.58(d，1H)；8.12-8.19(m，2H)；13.25(br.，1H)。
實施例4N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]苯基]-4-(1-哌啶基)-3-(三氟甲基)-苯甲酰胺標題化合物用實施例1中所述的類似方法制得，使用4-甲基-N-[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基)-1，3-苯二胺和4-(1-哌啶基)-3-(三氟甲基)-苯甲酸作為原料。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)1.51-1.70(m，6H)；2.23(s，3H)；2.89-2.95(m，4H)；7.22(d，1H)；7.44(d，1H)；7.48(dd，1H)；7.52(ddd，1H)；7.57(d，1H)；8.06(d，1H)；8.18-8.23(m，2H)；8.48(dt，1H)；8.51(d，1H)；8.68(dd，1H)；8.99(s，1H)；9.28(d，1H)；10.30(s，1H)。
實施例4.14-(1-哌啶基)-3-(三氟甲基)-芐腈標題化合物用實施例1.1中所述的類似方法制得，使用4-溴-3-(三氟甲基)-芐腈和哌啶(Fluka，Buchs，瑞士)，反應溫度為95℃。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)1.51-1.59(m，2H)；1.59-1.68(m，4H)；2.93-3.00(m，4H)；7.51(d，1H)；8.03(dd，1H)；8.14(d，1H)。
實施例4.24-(1-哌啶基)-3-(三氟甲基)-苯甲酸標題化合物用實施例1.2中所述的類似方法制得，使用4-(1-哌啶基)-3-(三氟甲基)-芐腈。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)1.51-1.59(m，2H)；1.59-1.69(m，4H)；2.89-2.97(m，4H)；7.49(m，1H)；8.10-8.15(m，2H)；13.19(br.，1H)。
實施例54-(4-甲基-1-哌嗪基)-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]苯基]-3-(三氟甲基)-苯甲酰胺標題化合物用實施例1中所述的類似方法制得，使用4-甲基-N-[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]-1，3-苯二胺和4-(4-甲基-1-哌嗪基)-3-(三氟甲基)-苯甲酸作為原料。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)2.23(s，3H)；2.39-2.48(br.s，3H)；2.63-2.85(br.，4H)；3.00-3.09(br.m，4H)；7.23(d，1H)；7.44(d，1H)；7.49(dd，1H)；7.52(ddd，1H)；7.64(d，1H)；8.07(d，1H)；8.23-8.25(m，2H)；8.48(dt，1H)；8.52(d，1H)；8.69(dd，1H)；9.0(s，1H)；9.28(m，1H)；10.35(s，1H)。
實施例5.14-(4-甲基-1-哌嗪基)-3-(三氟甲基)-苯甲酸將4-溴-3-(三氟甲基)-芐腈(Yonezawa等，Synthetic Communications(1996)26，1575-8；2.47g，12mmol)、1-甲基哌嗪(Fluka，Buchs，瑞士，5.33mL，48mmol)和15mL N，N-二甲基乙酰胺的混合物在緊密封閉的容器中于95℃下攪拌14小時。冷卻后，將反應混合物在減壓下蒸發(fā)至干，將殘余物用半飽和的碳酸鈉水溶液處理并用乙酸乙酯萃取。將合并的萃取液干燥(Na2SO4)并減壓蒸除溶劑。將粗產物通過硅膠柱色譜純化，用二氯甲烷/甲醇洗脫得到淺黃色油狀的4-(4-甲基-1-哌嗪基)-3-(三氟甲基)-芐腈。
將由30mL二噁烷、15mL水和11.25mL 2M氫氧化鈉水溶液組成的混合物加入到4-(4-甲基-1-哌嗪基)-3-(三氟甲基)-芐腈中，然后將反應混合物在95℃下振蕩16小時。冷卻后，將混合物蒸發(fā)。將形成的殘余物用水處理，將pH用1M鹽酸調節(jié)至約5-6并減壓蒸除溶劑。將殘余物用熱甲醇處理，濾出不溶的鹽，然后蒸發(fā)濾液得到粗品標題化合物，其不經(jīng)進一步純化即可用于隨后的步驟。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)2.28(s，3H)；2.50-2.58(m，4H)；2.94-3.02(m，4H)；7.52(m，1H)；8.11-8.17(m，2H)；13.19(br.，1H)。
實施例64-(1H-咪唑-1-基)-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]苯基]-3-(三氟甲基)-苯甲酰胺標題化合物用實施例1中所述的類似方法制得，使用4-甲基-N-[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]-1，3-苯二胺和4-(1H-咪唑-1-基)-3-(三氟甲基)-苯甲酸作為原料。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)2.25(s，3H)；7.12-7.15(m，1H)；7.26(d，1H)；7.43-7.55(m，4H)；7.78(d，1H)；7.91(s，1H)；8.12(br.1H)；8.38-8.42(m，1H)；8.46-8.54(m，3H)；8.67-8.70(m，1H)；9.01(s，1H)；9.27-9.30(m，1H)；10.57(br.s，1H)。
實施例6.14-(1H-咪唑-1-基)-3-(三氟甲基)-芐腈標題化合物用實施例1.1中所述的類似方法制得，使用4-氯-3-(三氟甲基)-芐腈(Lancaster Synthesis，GmbH)和咪唑(Fluka，Buchs，瑞士)，反應溫度為110℃。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)7.13(m，1H)；7.47(s，1H)；7.85(d，1H)；7.91(s，1H)；8.37(dd，1H)；8.57(m，1H)。
實施例6.24-(1H-咪唑-1-基)-3-(三氟甲基)-苯甲酸將4-(1H-咪唑-1-基)-3-(三氟甲基)-芐腈(1.99g，8.4mmol)、12mL乙酸和6mL 12M鹽酸(37％)的混合物在95℃下振蕩16小時。冷卻后，將反應混合物在減壓下蒸發(fā)。將形成的殘余物溶于水，通過滴加1M氫氧化鈉溶液將pH調節(jié)至約5-6。濾出沉淀物，用水洗滌，然后真空干燥得到固體狀標題化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)7.13(s，1H)；7.47(s，1H)；7.75(d，1H)；7.91(s，1H)；8.31-8.39(m，2H)；13.84(br.，1H)。
實施例74-(2-甲基-1H-咪唑-1-基)-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]苯基]-3-(三氟甲基)-苯甲酰胺標題化合物用實施例1中所述的類似方法制得，使用4-甲基-N-[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]-1，3-苯二胺和4-(2-甲基-1H-咪唑-1-基)-3-(三氟甲基)-苯甲酸作為原料。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)2.09(s，3H)；2.26(s，3H)；6.96(d，1H)；7.24-7.28(m，2H)；7.45(d，1H)；7.50-7.55(m，2H)；7.78(d，1H)；8.12(d，1H)；8.40(m，1H)；8.46-8.51(m，2H)；8.53(d，1H)；8.69(dd，1H)；9.03(s，1H)；9.30(d，1H)；10.59(s，1H)。
實施例7.14-(2-甲基-1H-咪唑-1-基)-3-(三氟甲基)-芐腈標題化合物用實施例1.1中所述的類似方法制得，使用4-氯-3-(三氟甲基)-芐腈(Lancaster Synthesis，GmbH)和2-甲基-咪唑(Fluka，Buchs，瑞士)，在145℃下反應38小時。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)2.06(s，3H)；6.95(m，1H)；7.25(m，1H)；7.86(d，1H)；8.39(dd，1H)；8.58(m，1H)。
實施例7.24-(2-甲基-1H-咪唑-1-基)-3-(三氟甲基)-苯甲酸將4-(2-甲基-1H-咪唑-1-基)-3-(三氟甲基)-芐腈(1.01g，4mmol)、6mL乙酸和3mL 12M鹽酸(37％)的混合物在95℃下振蕩16小時。冷卻后，將反應混合物在減壓下蒸發(fā)至干。將形成的殘余物與甲苯一起蒸發(fā)兩次，溶于水，然后通過滴加1M氫氧化鈉溶液將pH調節(jié)至約5-6。將水相用正丁醇萃取兩次，將有機相蒸發(fā)得到米色固體狀標題化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)2.06(s，3H)；6.98(d，1H)；7.28(br.，1H)；7.75(m，1H)；8.34-8.38(m，2H)。
實施例84-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]苯基]-3-(三氟甲基)-苯甲酰胺標題化合物用實施例1中所述的類似方法制得，使用4-甲基-N-[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]-1，3-苯二胺和4-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-3-(三氟甲基)-苯甲酸作為原料。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)2.19(s，3H)；2.25(s，3H)；7.16(s，1H)；7.26(d，1H)；7.45(d，1H)；7.49-7.56(m，2H)；7.72-7.77(m，2H)；8.12(br，1H)；8.38(br.d，1H)；8.45-8.51(m，2H)；8.53(d，1H)；8.69(dd，1H)；9.01(s，1H)；9.29(m，1H)；10.55(s，1H)。
實施例8.14-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-3-(三氟甲基)-芐腈標題化合物用實施例1.1中所述的類似方法制得，使用4-氯-3-(三氟甲基)芐腈(Lancaster Synthesis，GmbH)和4(5)-甲基-咪唑(Fluka，Buchs，瑞士)，在145℃下反應14小時。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)2.17(s，3H)；7.16(br.s，1H)；7.76(br.s，1H)；7.81(d，1H)；8.34(dd，1H)；8.53-8.57(m，1H)。
實施例8.24-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-3-(三氟甲基)-苯甲酸將4-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-3-(三氟甲基)-芐腈(1.01g，4mmol)、6mL乙酸和3mL 12M鹽酸(37％)的混合物在95℃下振蕩16小時。冷卻后，將反應混合物在減壓下蒸發(fā)至干。將形成的殘余物與甲苯一起蒸發(fā)兩次，溶于水，然后通過滴加1M氫氧化鈉溶液將pH調節(jié)至約5-6。將水相用乙酸乙酯萃取兩次。將有機相干燥(Na2SO4)，蒸發(fā)得到淺黃色固體狀標題化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)2.18(s，3H)；7.16(br.s，1H)；7.69-7.77(m，2H)；8.30-8.37(m，2H)。
實施例94-(2，4-二甲基-1H-咪唑-1-基)-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]苯基]-3-(三氟甲基)-苯甲酰胺標題化合物用實施例1中所述的類似方法制得，使用4-甲基-N-[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]-1，3-苯二胺和4-(2，4-二甲基-1H-咪唑-1-基)-3-(三氟甲基)-苯甲酸作為原料。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)2.03(s，3H)；2.11(s，3H)；2.25(s，3H)；6.94(s，1H)；7.26(d，1H)；7.45(d，1H)；7.49-7.55(m，2H)；7.74(d，1H)；8.11(d，1H)；8.38(dd，1H)；8.45(d，1H)；8.49(dt，1H)；8.53(d，1H)；8.69(dd，1H)；9.02(s，1H)；9.29(d，1H)；10.57(s，1H)。
實施例9.14-(2，4-二甲基-1H-咪唑-1-基)-3-(三氟甲基)-芐腈標題化合物用實施例1.1中所述的類似方法制得，使用4-氯-3-(三氟甲基)-芐腈(Lancaster Synthesis，GmbH)和2，4-二甲基-咪唑(Trans WorldChemicals)，在145℃下反應20小時。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)2.01(s，3H)；2.09(s，3H)；6.93(s，1H)；7.81(d，1H)；8.36(dd，1H)；8.54(d，1H)。
實施例9.24-(2，4-二甲基-1H-咪唑-1-基)-3-(三氟甲基)-苯甲酸將由11mL二噁烷、5.5mL水和4.9mL 2M氫氧化鈉水溶液組成的混合物加入到4-(2，4-甲基-1H-咪唑-1-基)-3-(三氟甲基)-芐腈(0.65g，2.45mmol)中并將反應混合物在95℃下振蕩16小時。冷卻后，將混合物在減壓下蒸發(fā)至干。將形成的殘余物用水處理，將pH用2M鹽酸調節(jié)至約5-6，然后將水相用正丁醇萃取兩次。將合并的有機萃取液蒸發(fā)得到固體狀標題化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)2.14(s，3H)；2.18(s，3H)；7.18(br.s，1H)；7.81(d，1H)；8.31-8.44(m，2H)。
實施例103-(1H-咪唑-1-基)-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]苯基]-5-(三氟甲基)-苯甲酰胺標題化合物用實施例1中所述的類似方法制得，使用4-甲基-N-[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]-1，3-苯二胺和3-(1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)-苯甲酸作為原料。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)2.26(s，3H)；7.19(s，1H)；7.27(d，1H)；7.45(d，1H)；7.49-7.56(m，2H)；8.02(br，1H)；8.11(br.s，1H)；8.21(s，1H)；8.30(s，1H)；8.45-8.54(m，4H)；8.69(dd，1H)；9.01(s，1H)；9.30(m，1H)；10.50(br.s，1H)。
實施例10.13-(1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)-芐腈標題化合物用實施例1.1中所述的類似方法制得，使用3-氟-5-(三氟甲基)-芐腈(Lancaster Synthesis，GmbH)和咪唑(Fluka，Buchs，瑞士)，在110℃下反應24小時。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)7.17(s，1H)；8.03(m，1H)；8.32(s，1H)；8.46(br.s，1H)；8.54(d，1H)；8.62(m，1H)。
實施例10.23-(1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)-苯甲酸標題化合物用實施例6.2中所述的類似方法制得，使用3-(1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)-芐腈。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)7.17(s，1H)；8.03(s，1H)；8.12(s，1H)；8.35(s，1H)；8.41(s，1H)；8.53(s，1H)；13.90(br.，1H)。
實施例113-(2-甲基-1H-咪唑-1-基)-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]苯基]-5-(三氟甲基)-苯甲酰胺標題化合物用實施例1中所述的類似方法制得，使用4-甲基-N-[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]-1，3-苯二胺和3-(2-甲基-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)-苯甲酸作為原料。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)2.25(s，3H)；2.37(s，3H)；6.99(d，1H)；7.26(d，1H)；7.45(d，1H)；7.49-7.54(m，3H)；8.10-8.15(m，2H)；8.35(m，2H)；8.48(dt，1H)；8.53(d，1H)；8.68(dd，1H)；9.01(s，1H)；9.29(m，1H)；10.49(s，1H)。
實施例11.13-(2-甲基-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)-芐腈標題化合物用實施例1.1中所述的類似方法制得，使用3-氟-5-(三氟甲基)-芐腈(Lancaster Synthesis，GmbH)和2-甲基-咪唑(Fluka，Buchs，瑞士)，在145℃下反應24小時。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)2.36(s，3H)；6.97(d，1H)；7.48(d，1H)；8.26(br.s，1H)；8.41(m，1H)；8.46(br.s，1H)。
實施例11.23-(2-甲基-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)-苯甲酸標題化合物用實施例9.2中所述的類似方法制得，使用3-(2-甲基-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)-芐腈。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)2.33(s，3H)；6.97(d，1H)；7.48(d，1H)；8.10(br.，1H)；8.15(br.，1H)；8.22(br.，1H)。
實施例123-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]苯基]-5-(三氟甲基)-苯甲酰胺標題化合物用實施例1中所述的類似方法制得，使用4-甲基-N-[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]-1，3-苯二胺和3-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)-苯甲酸作為原料。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)2.20(s，3H)；2.26(s，3H)；7.27(d，1H)；7.45(d，1H)；7.49-7.56(m，2H)；7.72(s，1H)；8.12(br.，1H)；8.18(s，1H)；8.25(s，1H)；8.39-8.55(m，4H)；8.69(m，1H)；9.01(s，1H)；9.31(m，1H)；10.48(s，1H)。
實施例12.13-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)-芐腈標題化合物用實施例1.1中所述的類似方法制得，使用3-氟-5-(三氟甲基)-芐腈(Lancaster Synthesis，GmbH)和4(5)-甲基-咪唑(Fluka，Buchs，瑞士)，在145℃下反應24小時。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)2.18(s，3H)；7.74(m，1H)；8.27(br.s，1H)；8.39(br.s，1H)；8.43(d，1H)；8.56(br.s，1H)。
實施例12.23-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)-苯甲酸標題化合物用實施例9.2中所述的類似方法制得，使用3-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)-芐腈。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)2.27(s，3H)；8.00(s，1H)；8.18(s，1H)；8.40(m)；8.47(br.，1H)。
實施例13N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]苯基]-3-(4-嗎啉基)-5-(三氟甲基)-苯甲酰胺標題化合物用實施例1中所述的類似方法制得，使用4-甲基-N-[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]-1，3-苯二胺和3-(4-嗎啉基)-5-(三氟甲基)-苯甲酸作為原料。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)2.24(s，3H)；3.28-3.32(m，4H)；3.75-3.79(m，4H)；7.23(d，1H)；7.39(br.，1H)；7.44(d，1H)；7.48(dd，1H)；7.51(ddd，1H)；7.65(br.，1H)；7.73(br.，1H)；8.07(d，1H)；8.47(dt，1H)；8.52(d，1H)；8.68(dd，1H)；8.98(s，1H)；9.29(m，1H)；10.32(s，1H)。
實施例13.13-(4-嗎啉基)-5-(三氟甲基)-芐腈標題化合物用實施例1.1中所述的類似方法制得，使用3-氟-5-(三氟甲基)-芐腈(Lancaster Synthesis，GmbH)和嗎啉(Fluka，Buchs，瑞士)，在105℃下反應14小時。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)3.25-3.35(m，4H)；3.69-3.77(m，4H)；7.49(br.s，1H)；7.56(br.s，1H)；7.66(br.s，1H)。
實施例13.23-(4-嗎啉基)-5-(三氟甲基)-苯甲酸標題化合物用實施例7.2中所述的類似方法制得，使用3-(4-嗎啉基)-5-(三氟甲基)-芐腈。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)3.20-3.28(m，4H)；3.69-3.77(m，4H)；7.21(br.s，1H)；7.33(br.s，1H)；7.43(br.s，1H)。
實施例143-(4-甲基-1-哌嗪基)-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]苯基]-5-(三氟甲基)-苯甲酰胺標題化合物用實施例1中所述的類似方法制得，使用4-甲基-N-[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]-1，3-苯二胺和3-(4-甲基-1-哌嗪基)-5-(三氟甲基)-苯甲酸作為原料。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ).2.24(s，6H)；2.46-2.50(m，4H)；3.30-3.36(m，4H)；7.24(d，1H)；7.37(br.s，1H)；7.44(d，1H)；7.49(dd，1H)；7.52(dd，1H)；7.62(br.s，1H)；7.72(br.s，1H)；8.08(d，1H)；8.47(dt，1H)；8.52(d，1H)；8.70(dd，1H)；8.99(s，1H)；9.30(d，1H)；10.31(s，1H)。
實施例14.13-(4-甲基-1-哌嗪基)-5-(三氟甲基)-芐腈標題化合物用實施例1.1中所述的類似方法制得，使用3-氟-5-(三氟甲基)-芐腈(Lancaster Synthesis，GmbH)和1-甲基哌嗪(Fluka，Buchs，瑞士)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ).2.22(s，3H)；2.41-2.46(m，4H)；3.31-3.37(m，4H)；7.48(br.s，1H)；7.52(br.s，1H)；7.65(br.s，1H)。
實施例14.23-(4-甲基-1-哌嗪基)-5-(三氟甲基)-苯甲酸將由50mL二噁烷、25mL水和18.75mL 2M氫氧化鈉水溶液組成的混合物加入到3-(4-甲基-1-哌嗪基)-5-(三氟甲基)-芐腈(2.69g，10mmol)中并將反應混合物在95℃下振蕩16小時。冷卻后，將混合物在減壓下蒸發(fā)至干。將形成的殘余物用水處理，將pH用2M鹽酸調節(jié)至約5-6。濾出沉淀物，將濾液用正丁醇萃取兩次。將合并的有機萃取液蒸發(fā)得到固體狀標題化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)2.41(s，3H)；2.69-2.76(m，4H)；3.37-3.42(m，4H)；7.45(br.s，1H)；7.55(br.s，1H)；7.70(br.s，1H)。
實施例154-[[2-(二甲基氨基)乙基]甲基氨基]-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]苯基]-3-(三氟甲基)-苯甲酰胺標題化合物用實施例1中所述的類似方法制得，使用4-甲基-N-[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]-1，3-苯二胺和4-[[2-(二甲基氨基)乙基]甲基氨基]-3-(三氟甲基)-苯甲酸作為原料。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)2.10(s，6H)；2.23(s，3H)；2.35(m，2H)；2.78(s，3H)；3.14(m，2H)；7.22(d，1H)；7.43(d，1H)；7.48(dd，1H)；7.51(ddd，1H)；7.59(d，1H)；8.07(d，1H)；8.16-8.23(m，2H)；8.48(dt，1H)；8.51(d，1H)；8.68(dd，1H)；8.99(s，1H)；9.28(m，1H)；10.28(s，1H)。
實施例15.14-[[2-(二甲基氨基)乙基]甲基氨基]-3-(三氟甲基)-芐腈標題化合物用實施例1.1中所述的類似方法制得，使用4-氯-3-(三氟甲基)-芐腈(Lancaster Synthesis，GmbH)和N，N，N′-三甲基-1，2-乙二胺(Fluka，Buchs，瑞士)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)2.09(s，6H)；2.38(t，2H)；2.86(s，3H)；3.24(t，2H)；7.45(d，1H)；7.94(dd，1H)；8.09(d，1H)。
實施例15.24-[[2-(二甲基氨基)乙基]甲基氨基]-3-(三氟甲基)-苯甲酸將由25mL二噁烷、12.5mL水和9.4mL 2M氫氧化鈉水溶液組成的混合物加入到4-[[2-(二甲基氨基)乙基]甲基氨基]-3-(三氟甲基)-芐腈(1.35g，5mmol)中并將反應混合物在95℃下振蕩16小時。冷卻后，將混合物在減壓下蒸發(fā)至干。將形成的殘余物用水處理，將pH用1M鹽酸調節(jié)至約5并將混合物在減壓下蒸發(fā)至干。將固體殘余物用甲醇處理，將懸浮液過濾，蒸發(fā)濾液得到標題化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)2.57(s，6H)；2.76(s，3H)；2.96(m，2H)；3.38(m，2H)；7.62(d，1H)；8.11-8.16(m，2H)。
實施例164-[甲基-(1-甲基-4-哌啶基)氨基]-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]苯基]-3-(三氟甲基)-苯甲酰胺標題化合物用實施例1中所述的類似方法制得，使用4-甲基-N-[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]-1，3-苯二胺和4-[甲基(1-甲基-4-哌啶基)氨基]-5-(三氟甲基)-苯甲酸作為原料。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)1.46-1.57(m，2H)；1.62-1.68(m，2H)1.79-1.88(m，2H)；2.13(s，3H)；2.23(s，3H)；2.64(s，3H)；2.73-2.80(m，2H)；2.87-2.97(m，1H)；7.22(d，1H)；7.43(d，1H)；7.48(dd，1H)；7.51(ddd，1H)；7.66(d，1H)；8.06(d，1H)；8.17-8.24(m，2H)；8.48(dt，1H)；8.51(d，1H)；8.68(dd，1H)；8.99(s，1H)；9.28(m，1H)；10.32(s，1H)。
實施例16.14-[甲基-(1-甲基-4-哌啶基)氨基]-3-(三氟甲基)-苯甲酸標題化合物用實施例5.1中所述的類似方法制得，使用4-氯-3-(三氟甲基)-芐腈(Lancaster Synthesis，GmbH)和1-甲基-4-(甲基氨基)-哌啶(Aldrich，Buchs，瑞士)。隨后按照實施例5.1的描述在二噁烷和水的混合物中用氫氧化鈉進行腈的水解。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)1.77-1.86(m，4H)；2.54(s，3H)；2.63(s，3H)；2.65-2.74(m)；3.13-3.23(m)；7.63(d，1H)；8.12-8.17(m，2H)。
實施例173-乙基氨基-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]苯基]-5-(三氟甲基)-苯甲酰胺標題化合物用實施例1中所述的類似方法制得，使用4-甲基-N-[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]-1，3-苯二胺和3-乙基氨基-5-(三氟甲基)-苯甲酸作為原料。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)1.19(t，3H)；2.23(s，3H)；3.14(m，2H)；6.36(t，1H)；6.98(br.s，1H)；7.22(d，1H)；7.32(br.s，1H)；7.37(br.s，1H)；7.43(d，1H)；7.48(dd，1H)；7.51(dd，1H)；8.06(d，1H)；8.48(dt，1H)；8.51(d，1H)；8.68(dd，1H)；9.00(s，1H)；9.28(m，1H)；10.25(s，1H)。
實施例17.13-乙基氨基-5-(三氟甲基)-苯甲酸甲酯將3-氨基-5-(三氟甲基)-苯甲酸甲酯(J.Med.Chem.(1969)12，299-303；4.23g，19.3mmol)、碳酸鉀(8.0g，57.9mmol)和碘乙烷(3.12mL，38.6mmol)的混合物在20mL N，N-二甲基甲酰胺中于65℃下在緊密封閉的容器中攪拌14小時。冷卻后，將反應混合物過濾并將濾液在減壓下蒸發(fā)至干。將殘余物用水處理，用乙酸乙酯萃取三次。將合并的萃取液干燥(Na2SO4)并減壓蒸除溶劑。將形成的殘余物通過硅膠柱色譜純化，用己烷/二氯甲烷(1∶1)洗脫。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)1.18(t，3H)；3.10(m，2H)；3.85(s，3H)；6.46(t，1H)；7.02(br.1H)；7.29(br.s，1H)；7.37(br.，1H)。
實施例17.23-乙基氨基-5-(三氟甲基)-苯甲酸將3-乙基氨基-5-(三氟甲基)-苯甲酸甲酯(1.38g，5.6mmol)、5.5mL 1M氫氧化鈉水溶液在12mL乙醇中的混合物在70℃下振蕩4小時。冷卻后，將混合物在減壓下蒸發(fā)至干。將形成的殘余物溶于水，將pH用1M鹽酸調節(jié)至5。濾出沉淀物，用水洗滌，然后真空干燥得到標題化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)1.18(t，3H)；3.10(m，2H)；6.39(m，1H)；6.99(br.s，1H)；7.29(br.s，1H)；7.36(br.s，1H)；13.15(br.，1H)。
實施例183-乙?；被?N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]苯基]-5-(三氟甲基)-苯甲酰胺在20℃及氬氣氛下，將氰基膦酸二乙酯(Aldrich，Buchs，瑞士；0.66mL，4.0mmol)加入到攪拌著的4-甲基-N-[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]-1，3-苯二胺(554mg，2.0mmol)、3-乙酰基氨基-5-(三氟甲基)-苯甲酸(495mg，2.0mmol)和三乙基胺(1.12mL，8.0mmol)在10mL N，N-二甲基甲酰胺中的混合物中。在20℃下攪拌18小時后，將混合物用飽和碳酸氫鈉水溶液處理，用乙酸乙酯萃取兩次。將合并的萃取液干燥(MgSO4)，過濾，然后減壓蒸除溶劑得到粗產物。將粗產物通過硅膠柱色譜純化，用二氯甲烷/甲醇/氨水洗脫。合并純級分，減壓蒸除溶劑，然后將殘余物用乙酸乙酯-己烷結晶得到乳白色結晶固體狀標題化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)2.10(s，3H)；2.23(s，3H)；7.22(dd，1H)；7.43(dd，1H)；7.45-7.50(m，1H)；7.51-7.54(m，1H)；7.97(d，1H)；8.04(d，1H)；8.24(dd，1H)；8.28(m，1H)；8.49(dt，1H)；8.50(dd，1H)；8.68(dd，1H)；8.99(s，1H)；9.25(d，1H)；10.43(dd，1H)。
實施例18.13-乙?；被?5-(三氟甲基)-苯甲酸將3-硝基-5-(三氟甲基)苯甲酸(5.10g，20mmol)和乙酸酐(2.1mL，22mmol)在50mL吡啶中的混合物于22℃下攪拌14小時。然后將混合物在減壓下蒸發(fā)至干得到殘余物，將該殘余物用2M鹽酸處理并用乙酸乙酯萃取三次。將合并的萃取液用水洗滌，干燥(MgSO4)，然后減壓蒸除溶劑得到粗產物，將該粗產物通過用乙酸乙酯-己烷重結晶而進行純化得到米色結晶固體狀標題化合物，m.p.194-220℃。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)7.80(d，1H)；8.27(d，1H)；8.35(d，1H)；10.46(s，1H)；13.50(br.s，1H)。
實施例18.23-氨基-5-(三氟甲基)-苯甲酸將3-硝基-5-(三氟甲基)苯甲酸(Lancaster Synthesis，GmbH；11.75g，50mmol)的乙醇(300mL)溶液在常壓及40℃下用阮內鎳(1g)氫化。8小時后吸收計算量的氫氣。然后將混合物過濾，減壓蒸除溶劑得到粗產物，將該粗產物通過用二乙醚-己烷重結晶而進行純化得到米色結晶固體狀標題化合物，m.p.134-139℃。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)5.86(br.s，2H)；7.02(d，1H)；7.24(d，1H)；7.38(d，1H)；13.11(br.s，1H)。
實施例19軟膠囊劑如下制備5000粒軟明膠膠囊，每粒膠囊包含0.05g前述實施例提到的式1化合物之一作為活性成分
將250g粉碎的活性成分懸浮在2L Lauroglykol(丙二醇月桂酸酯，GattefosséS.A.，Saint Priest，法國)中，在濕粉碎機中研磨，得到粒徑為約1至3μm。然后利用膠囊填充機將0.419g混合物裝入軟明膠膠囊中。
實施例20藥動學數(shù)據(jù)將供試式1化合物如下配制用于對來自法國IFACREDO的雌性OF1小鼠給藥先溶于N-甲基-吡咯烷酮(NMP)，再用PEG300稀釋至最終濃度為10％v/v NMP90％v/v PEG300，得到澄清的化合物溶液。調節(jié)濃度以遞送10mL/kg體重的恒定體積。在臨使用前制備化合物。將經(jīng)過配制的化合物通過管飼法經(jīng)口給藥，以提供50mg/kg的劑量。在指定時間點，將小鼠(每次4只)用含3％異氟烷的醫(yī)用氧麻醉，通過心臟穿刺獲得血樣，保存在肝素化試管中(約30IU/mL)。隨后殺死動物，無需從麻醉中恢復。通過離心(10,000g，5分鐘)從血液中制備血漿，立即分析或者冷凍貯存在-70℃下。
向血漿樣本(10-250μL)摻加5μL內標，與200μL0.1M NaOH和500μL氯仿在1.5mL Eppendorf試管中混合，在Eppendorf混合器上劇烈振蕩10分鐘。然后，將混合物離心(10,000xg，3分鐘)，將有機相轉移至第二支Eppendorf試管中，在真空離心機(Speedvac 5301)中蒸發(fā)至干。將干燥殘余物例如溶于250μL含有0.1％甲酸的10％v/v乙腈水溶液。隨后通過例如高壓液相色譜/串連質譜HPLC/MS-MS進行分析，分析采用Agilent 1100系列(Agilent，Palo Alto，CA，USA)HPLC系統(tǒng)，其帶有真空脫氣器、二元泵和恒溫柱室，連接有冷卻自動進樣系統(tǒng)(HTS PAL，CTC Analytics，Zwingen，瑞士)。將樣本(5-15μL)注射到Ultra Phenyl柱(粒徑3μm，50×1mm；Restek，Bellefonte，USA)上，其帶有相同材質的衛(wèi)柱(4×2mm)(Phenomenex，Torrance，USA)。用水平衡并經(jīng)過1分鐘的等待時間后，洗脫樣本，洗脫采用例如用含有0.2％v/v甲酸的0-100％乙腈/水線性梯度，時間為11分鐘，流速為60μL/分鐘。通過例如用100％水重新平衡3分鐘至起始條件為下一份樣本準備柱子。分離在例如40℃的柱溫下進行。將柱洗脫液直接引入例如三階段四極質譜儀(Quattro UltimaTM，Micromass，Manchester，UK)的離子源中，其由MasslynxTM3.5軟件(Micromass，Manchester，UK)控制，采用電子噴射電離陽極模式(ESI+)作為電離技術。在母離子碎裂后，用MS/MS檢測化合物。例如在0.002nmol/L下測定量化限度。利用如上所述加工的血漿中的已知量化合物、包括固定量內標，構建校準曲線。從所選擇的被分析物子離子與其內標產物的峰面積比(縱坐標)對標稱濃度(橫坐標)的圖計算未知樣本的濃度。利用QuanlynxTM，MasslynxTM軟件3.5(Micromass，Manchester，UK)進行回歸分析。
實施例21體外抑制數(shù)據(jù)酶(c-Abl，Bcr-Abl)的體外抑制數(shù)據(jù)表示在下表中。將IC50值(nM)表達為數(shù)值范圍，該范圍包含了單個IC50測量值。被稱為STI571的化合物的相應平均值(±SEM)為170±23nM(c-Abl，IC50；23次測定)和198±7nM(Bcr-Abl，IC50；71次測定)。
權利要求
1.式1化合物和該化合物的N-氧化物或可藥用鹽 其中R1代表氫且R2代表NR5R6，或者R1代表NR5R6且R2代表氫；R3代表低級烷基、氟代烷基、羥基烷基或氨基甲?；?；R4代表氫、低級烷基或鹵素；并且R5和R6彼此獨立地表示氫、低級烷基、羥基-低級烷基、低級烷氧基-低級烷基、低級酰氧基-低級烷基、羧基-低級烷基、低級烷氧基羰基-低級烷基、氨基-低級烷基、低級烷基氨基-低級烷基、二(低級烷基)氨基-低級烷基、N-低級烷基哌啶基、N-低級烷基吡咯烷基或低級?；?，或者R5R6一起表示具有四、五或六個碳原子的亞烷基、具有一個氧和三或四個碳原子的氧雜-低級亞烷基或具有一個氮和三或四個碳原子的氮雜-低級亞烷基，其中氮原子是未取代的或者被低級烷基、羥基-低級烷基或低級烷氧基-低級烷基所取代，并且其中在所有情況下低級亞烷基均可以是部分或完全不飽和的和/或低級亞烷基的碳原子可以被低級烷基、羥基或低級烷氧基取代。
2.根據(jù)權利要求1所述的式1化合物和該化合物的N-氧化物或可藥用鹽，其中R1代表氫且R2代表NR5R6，或者R1代表NR5R6且R2代表氫；R3代表低級烷基、氟代烷基、羥基烷基或氨基甲?；籖4代表低級烷基；并且R5和R6彼此獨立地表示氫、低級烷基、羥基-低級烷基、低級烷氧基-低級烷基、低級酰氧基-低級烷基、羧基-低級烷基、低級烷氧基羰基-低級烷基、氨基-低級烷基、低級烷基氨基-低級烷基、二(低級烷基)氨基-低級烷基、N-低級烷基哌啶基、N-低級烷基吡咯烷基或低級?；?，或者R5R6一起表示具有四、五或六個碳原子的亞烷基、具有一個氧和三或四個碳原子的氧雜-低級亞烷基或具有一個氮和三或四個碳原子的氮雜-低級亞烷基，其中氮原子是未取代的或者被低級烷基、羥基-低級烷基或低級烷氧基-低級烷基所取代，并且其中在所有情況下低級亞烷基均可以是部分或完全不飽和的和/或低級亞烷基的碳原子可以被低級烷基、羥基或低級烷氧基取代。
3.根據(jù)權利要求1所述的式1化合物和該化合物的N-氧化物或可藥用鹽，其中R1代表氫且R2代表NR5R6，或者R1代表NR5R6且R2代表氫；R3代表三氟甲基；R4代表甲基；并且R5和R6彼此獨立地表示氫、低級烷基、羥基-低級烷基、低級烷氧基-低級烷基、低級酰氧基-低級烷基、羧基-低級烷基、低級烷氧基羰基-低級烷基、氨基-低級烷基、低級烷基氨基-低級烷基、二(低級烷基)氨基-低級烷基、N-低級烷基哌啶基、N-低級烷基吡咯烷基或乙酰基，或者R5R6一起表示具有四、五或六個碳原子的亞烷基、具有一個氧和三或四個碳原子的氧雜-低級亞烷基或具有一個氮和三或四個碳原子的氮雜-低級亞烷基，其中氮原子是未取代的或者被低級烷基、羥基-低級烷基或低級烷氧基-低級烷基所取代，并且其中在所有情況下低級亞烷基均可以是部分或完全不飽和的和/或低級亞烷基的碳原子可以被低級烷基、羥基或低級烷氧基取代。
4.根據(jù)權利要求1所述的式1化合物和該化合物的N-氧化物或可藥用鹽，其中R1代表氫且R2代表NR5R6，或者R1代表NR5R6且R2代表氫；R3代表三氟甲基；R4代表甲基；并且R5和R6彼此獨立地表示氫、低級烷基、羥基-低級烷基、氨基-低級烷基、低級烷基氨基-低級烷基、二(低級烷基)氨基-低級烷基、N-低級烷基哌啶基或低級?；蛘逺5R6一起表示具有四或五個碳原子的亞烷基、具有一個氧和三或四個碳原子的氧雜-低級亞烷基或具有一個氮和三或四個碳原子的氮雜-低級亞烷基，其中氮原子是未取代的或者被低級烷基、羥基-低級烷基或低級烷氧基-低級烷基所取代，并且其中在所有情況下低級亞烷基均可以是部分或完全不飽和的和/或低級亞烷基的碳原子可以被低級烷基取代。
5.根據(jù)權利要求1所述的式1化合物和該化合物的N-氧化物或可藥用鹽，其中R1代表氫且R2代表NR5R6，或者R1代表NR5R6且R2代表氫；R3代表三氟甲基；R4代表甲基；并且R5和R6彼此獨立地表示氫、低級烷基、二(低級烷基)氨基-低級烷基、N-低級烷基哌啶基或低級乙?；蛘逺5R6一起表示具有四或五個碳原子的亞烷基、具有一個氧和四個碳原子的氧雜-低級亞烷基或具有一個氮和三或四個碳原子的氮雜-低級亞烷基，其中氮原子是未取代的或者被低級烷基所取代，并且其中氮雜-低級亞烷基可以是不飽和的和/或氮雜-低級亞烷基的碳原子可以被低級烷基取代。
6.根據(jù)權利要求1所述的式1化合物和該化合物的N-氧化物或可藥用鹽，其中R1代表氫且R2代表NR5R6，或者R1代表NR5R6且R2代表氫；R3代表三氟甲基；R4代表甲基；并且R5和R6彼此獨立地表示氫、甲基、乙基、2-二甲基氨基乙基、4-甲基-1-哌啶基或乙酰基，或者NR5R6一起表示吡咯烷-1-基、哌啶-1-基、嗎啉-4-基、N-甲基哌嗪-1-基、1H-咪唑基、1H-2-甲基咪唑基、1H-4-甲基咪唑基或1H-2，4-二甲基咪唑基。
7.合成式1化合物或其N-氧化物或鹽的方法 其中符號R1、R2、R3和R4如權利要求1所定義，其特征在于使式2化合物 其中R1、R2和R3如式1化合物所定義，或者其中羧基-COOH為活化形式的衍生物與式3的胺反應， 其中R4如式1化合物所定義，反應任選地在脫水劑和惰性堿和/或適合的催化劑的存在下，并且任選地在惰性溶劑的存在下進行；其中，如果必要的話，上述起始化合物2和3也可以以其中的官能團是被保護的形式存在和/或以鹽的形式存在，只要存在成鹽基團并且以鹽形式反應是可能的；除去式1化合物的被保護衍生物中的任何保護基團；并且如果需要的話，將所得的式1化合物轉化為另一種式1化合物或其N-氧化物，將游離的式1化合物轉化為鹽，將所得的式1化合物的鹽轉化為游離化合物或另一種鹽，和/或將式1的異構體化合物的混合物分離為單個的異構體。
8.藥物組合物，其包含作為活性成分的權利要求1所述的式1化合物或者其N-氧化物或可藥用鹽以及可藥用載體。
9.權利要求1至6中的任何一項所述的式1化合物或其N-氧化物或可能的互變異構體或者該化合物的可藥用鹽在制備用于治療對于抑制蛋白激酶活性有響應的疾病的藥物組合物中的用途。
10.權利要求1至6中的任何一項所述的式1化合物或其N-氧化物或可能的互變異構體或者該化合物的可藥用鹽在治療對于抑制蛋白激酶活性有響應的疾病中的用途。
11.治療對于抑制蛋白激酶活性有響應的疾病的方法，該方法包括施用權利要求1所述的式1化合物或者其N-氧化物或可藥用鹽。
12.根據(jù)權利要求9至11中的任何一項所述的用途或方法，其中所述的疾病是腫瘤疾病。
13.根據(jù)權利要求9至11中的任何一項所述的用途或方法，其中所述的疾病是對于抑制Raf和/或Abl酪氨酸激酶活性有響應的白血病。
全文摘要
本發(fā)明涉及新的取代的N－(3－苯甲?；被交?－4－吡啶基－2－嘧啶胺衍生物、制備這些化合物的方法、含有它們的藥物組合物、它們任選地與一種或多種其他藥學活性化合物組合用于治療對于抑制蛋白激酶活性有響應的疾病、尤其是腫瘤疾病的用途以及治療所述疾病的方法。
文檔編號C07D401/04GK1684951SQ03823213
公開日2005年10月19日 申請日期2003年9月26日 優(yōu)先權日2002年9月27日
發(fā)明者P·W·曼利, W·布賴滕施泰因, S·雅各布, P·菲雷 申請人:諾瓦提斯公司