膽酸作為活性成分在制備治療細(xì)粒棘球蚴病藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及膽酸的藥學(xué)應(yīng)用，屬于藥物化學(xué)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]細(xì)粒棘球蝴病(echinococcosis)又稱囊性包蟲病(cysticechinococcosis,CE)，是由細(xì)粒棘球蝴絳蟲(Echinococcus granulosus，Eg)的中絳期幼蟲所致的一種嚴(yán)重危害人民健康和畜牧業(yè)發(fā)展的人獸共患寄生蟲病。該病呈全球性分布，在我國(guó)主要流行于新疆、青海、內(nèi)蒙古、西藏等畜牧業(yè)發(fā)達(dá)的省區(qū)。囊性包蟲病主要影響肝臟，也可以在肺中發(fā)展。目前，針對(duì)于該病的治療主要是外科手術(shù)的方法，即肝包蟲外膜內(nèi)外囊完整切除術(shù)。近年來所采用的肝包蟲外膜內(nèi)外囊完整摘除術(shù)盡管能大大降低包蟲病的復(fù)發(fā)率，最大程度地減少手術(shù)對(duì)肝實(shí)質(zhì)的損傷，但當(dāng)包蟲囊腫體積較大或貼近重要臟器或管道(肝門或膽管)時(shí)，則需要選擇開放式外膜內(nèi)外囊完整摘除術(shù)。此種術(shù)式可能會(huì)有頭節(jié)的外漏和殘留，術(shù)中和術(shù)后需要藥物輔助治療預(yù)防包蟲復(fù)發(fā)。因此總體來看，術(shù)中頭節(jié)外溢及頭節(jié)的處理不當(dāng)是手術(shù)治療囊性包蟲病存在的難以克服的缺陷。
[0003]針對(duì)上述問題，本領(lǐng)域嘗試在體外采用高濃度酸性(HCl)和堿性溶液(KOH)，臨床常用的局部化療藥物有20%高滲鹽水，但對(duì)周圍正常肝組織有一定的破壞作用；本領(lǐng)域也曾有研究發(fā)現(xiàn)膽汁可以抑制包蟲囊腫的發(fā)育，但是膽汁成分復(fù)雜，作用目標(biāo)多，藥學(xué)效果多變，例如膽汁、膽汁酸在肝臟和血液中滯留會(huì)產(chǎn)生多種毒性作用，包括細(xì)胞毒作用及急、慢性毒性作用，造成肝損傷及全身多系統(tǒng)、多器官損害，最終導(dǎo)致肝硬化、肝功能衰竭和死亡；也曾有研究發(fā)現(xiàn)膽汁酸對(duì)胰腺腺泡細(xì)胞形成損傷等。
[0004]因此，獲得一種作用確切、療效明確、能有效防治細(xì)粒棘球蝴病的藥物依舊是本領(lǐng)域亟待解決的課題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]在申請(qǐng)人的長(zhǎng)期研究過程中，驚喜地發(fā)現(xiàn)膽酸(CA)作為膽汁成分之一可以有效抑制和殺滅原頭節(jié)的生長(zhǎng)，從而可應(yīng)用于細(xì)粒棘球蝴病的臨床治療。
[0006]在本發(fā)明中，膽酸(CA)即3α，7α，12α三羥基-5 β膽烷酸，一種固醇，是人類四種主要膽汁酸中含量最豐富的一種，從它衍生的甘氨膽酸和?；悄懰崾侨祟惖闹饕懼?。肝分泌到膽汁中的膽汁鹽(膽汁酸的鈉鹽)是強(qiáng)有力的乳化劑。膽酸是油脂乳化劑，在腸中幫助油脂的水解和吸收。某些膽酸還有鎮(zhèn)痙、健胃、降低血液中膽留醇含量等作用。
[0007]首先，本發(fā)明公開了膽酸作為活性成分在制備治療細(xì)粒棘球蝴病藥物中的應(yīng)用。
[0008]上述的藥物，既可以是單純的活性成分原料，還可以是將膽酸作為活性成分與其他輔料做成的各種制劑，例如常見的片劑、膠囊、滴丸、輸液、凍干粉針等，對(duì)于藥物劑型及其相應(yīng)輔料的選擇，本領(lǐng)域技術(shù)人員可根據(jù)需要進(jìn)行調(diào)整。
[0009]上述的細(xì)粒棘球蝴病，既可以是動(dòng)物體上的，也可以是人體上的，根據(jù)該癥的臨床發(fā)病部位，通常指的是囊性肝包蟲病。
[0010]因此，本發(fā)明還公開了膽酸作為活性成分在制備治療囊性肝包蟲病藥物中的應(yīng)用。
[0011]根據(jù)需要，可使用不同濃度的膽酸，一般來說，為了有效的殺滅病原，牛膽酸的濃度不低于500 y mol/Lo
[0012]針對(duì)常見的原頭節(jié)生長(zhǎng)密度，優(yōu)選的，膽酸的濃度為2000-3000 ymol/L。
[0013]優(yōu)選的，連續(xù)用藥時(shí)間不低于9天。
[0014]在上述濃度下，對(duì)細(xì)粒棘球蝴原頭節(jié)具有比較理想的抑制和殺滅效果。
[0015]在此基礎(chǔ)上，本發(fā)明還公開了膽酸作為細(xì)粒棘球蝴原頭節(jié)抑制劑的應(yīng)用。
[0016]本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，在多種實(shí)驗(yàn)環(huán)境下，尤其是動(dòng)物離體實(shí)驗(yàn)情況下，為了防止由于動(dòng)物體內(nèi)的細(xì)粒棘球蝴原頭節(jié)在體外的生長(zhǎng)和頭節(jié)外溢，需要加入必要的抑制劑，例如20%高滲鹽水等。
[0017]與上述類似，膽酸的濃度不低于500 y mol/L,優(yōu)選的，膽酸的濃度為2000-3000 ymol/Lo
【附圖說明】
[0018]圖1為膽酸對(duì)細(xì)粒棘球蝴原頭節(jié)形態(tài)的影響，其中，A :對(duì)照組原頭節(jié)；B:500 ymol/L CA作用 9d 的原頭節(jié)；C :1000 y mol/L CA作用 9d 的原頭節(jié)；D :2000 ymol/L CA作用9d的原頭節(jié)；E :3000 y mol/L CA作用9d的原頭節(jié)。
[0019]圖2為不同濃度的膽酸對(duì)細(xì)粒棘球蝴原頭節(jié)活力的影響。
[0020]圖3為膽酸對(duì)細(xì)粒棘球蝴原頭節(jié)表面超微結(jié)構(gòu)的影響，其中，A :對(duì)照組原頭節(jié)；B、C :3000 v- mol/L膽酸作用5d原頭節(jié)。
[0021 ] 圖4為膽酸對(duì)細(xì)粒棘球蝴原頭節(jié)內(nèi)部超微結(jié)構(gòu)的影響，其中，A :對(duì)照組原頭節(jié)；B、C :3000 v- mol/L膽酸作用5d原頭節(jié)。
【具體實(shí)施方式】
[0022]為了說明膽酸（CA)的應(yīng)用效果，申請(qǐng)人進(jìn)行了體外實(shí)驗(yàn)說明膽酸對(duì)細(xì)粒棘球蝴原頭節(jié)的殺滅效果。
[0023]實(shí)驗(yàn)1 :CA體外作用于細(xì)粒棘球蝴原頭節(jié)的效果
[0024]取新鮮的自然感染細(xì)粒棘球蝴的綿羊肝臟，清潔羊肝表面，用75%酒精消毒表面，無菌條件下抽取含原頭節(jié)的囊液，移入無菌瓶中。用PBS(PH = 7. 2)清洗原頭節(jié)3次至澄清，用0. 1%伊紅染液做染色排斥實(shí)驗(yàn)，98%以上拒染。肉眼觀察原頭節(jié)呈細(xì)白沙樣均勻顆粒，活性好的原頭節(jié)沉降速率快，活性不好的或者死亡的原頭節(jié)沉降速率相對(duì)比較慢。
[0025]倒置顯微鏡下觀察原頭節(jié)蟲體呈內(nèi)陷型，散在密布，蟲體結(jié)構(gòu)飽滿，呈橢圓形，結(jié)構(gòu)清晰完整，鈣顆粒清亮而明顯。然后將原頭節(jié)分裝至含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中（青霉素100U/mL，鏈霉素100U/mL)，置37°C、5% C02培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。
[0026]實(shí)驗(yàn)分組：DMS0對(duì)照組、500 y mol/L CA 組、1000 y mol/L CA 組、2000 y mol/L CA組、3000 iimol/L CA組。取六孔板，每孔設(shè)5mL體系，按以上分組，配好相應(yīng)的培養(yǎng)液。
[0027]將在體外培養(yǎng)5天后的細(xì)粒棘球蝴原頭節(jié)用PBS (pH = 7