一種球蟲佐劑及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及免疫技術(shù)領(lǐng)域，具體的涉及一種球蟲佐劑及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 佐劑不僅是弱毒疫苗的重要組成成分，對(duì)增強(qiáng)滅活疫苗與新型基因工程疫苗的免 疫效果亦發(fā)揮著不可替代的作用。
[0003]隨著人們對(duì)免疫反應(yīng)尤其是先天性免疫的認(rèn)識(shí)的加深，佐劑研宄已從憑經(jīng)驗(yàn)反復(fù) 試驗(yàn)轉(zhuǎn)向更為理性。如弗氏完全佐劑（CFA)含有滅活的分枝桿菌（卡介苗）成份，是典型 的促進(jìn)機(jī)體產(chǎn)生體液免疫和細(xì)胞免疫應(yīng)答的佐劑，可誘導(dǎo)產(chǎn)生Thl型細(xì)胞因子，促進(jìn)IgG的 產(chǎn)生，抑制IgM的產(chǎn)生，從而抑制免疫耐受的產(chǎn)生，推遲超敏反應(yīng)，增加移植排斥，促進(jìn)抗腫 瘤作用。MPL(單磷酸脂質(zhì)A)是沙門氏菌（Salmonella Minnesote)LPS的衍生物，可激活 TLR4受體，誘導(dǎo)Thl型細(xì)胞免疫應(yīng)答，并且可以活化CTLs細(xì)胞。由MPL和鋁構(gòu)成的AS04佐 劑已經(jīng)被批準(zhǔn)用于人HPV和HBV疫苗中。相比于鋁佐劑，AS04能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生更早和更長(zhǎng)久 的體液免疫應(yīng)答。目前還有很多Toll樣受體激動(dòng)劑被開發(fā)成佐劑，包括poly (I:C)、GLA、 鞭毛蛋白、鳥苷類似物、CpG DNA等。
[0004] 球蟲含有6000余種蛋白質(zhì)、多種脂類和糖類等大分子物質(zhì)，其抗原組分是弗氏佐 劑中卡介苗組分的幾十倍，相比于細(xì)菌，球蟲具有激發(fā)機(jī)體更多模式識(shí)別受體（PRRs)的潛 能。有研宄表明球蟲可以通過調(diào)節(jié)先天性免疫和適應(yīng)性免疫應(yīng)答，增強(qiáng)機(jī)體對(duì)其他病原微 生物的免疫應(yīng)答。而且球蟲的宿主具有專一性，不會(huì)跨種間傳播，因而其生物安全性較高。
[0005]因此有必要開發(fā)一種基于球蟲復(fù)雜的抗原組分的佐劑，從而為提升疫苗的免疫效 果提供新的途徑。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的在于提供一種可以誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生更有效的保護(hù)性體液免疫和細(xì)胞 免疫應(yīng)答的免疫佐劑。
[0007]為達(dá)到以上目的，本發(fā)明提供了一種球蟲佐劑，所述球蟲佐劑包括頂復(fù)門真球蟲 目原蟲和/或其提取物。
[0008]可選的，所述頂復(fù)門真球蟲目原蟲選自艾美耳球蟲、弓形蟲、隱孢子蟲和瘧原蟲中 的至少一種。
[0009]可選的，所述提取物為頂復(fù)門球蟲卵囊提取物。
[0010]可選的，所述提取物選自頂復(fù)門球蟲的DNA、RNA、脂類、糖類及蛋白質(zhì)中的至少一 種。
[0011] 本發(fā)明還提供了所述球蟲佐劑在制備針對(duì)病原體的疫苗中的應(yīng)用。
[0012] 可選的，所述疫苗為禽用疫苗、至少兩種禽用疫苗的聯(lián)苗、牛用疫苗、至少兩種牛 用疫苗的聯(lián)苗、豬用疫苗、至少兩種豬用疫苗的聯(lián)苗、羊用疫苗、至少兩種羊用疫苗的聯(lián)苗、 人用疫苗或至少兩種人用疫苗的聯(lián)苗。
[0013] 可選的，所述禽用疫苗包括禽流感酶活疫苗、雞新城疫滅活疫苗、雞減蛋綜合癥滅 活疫苗和雞傳染性法氏囊活疫苗；
[0014] 所述豬用疫苗包括豬藍(lán)耳病弱毒活疫苗、豬口蹄疫滅活疫苗、豬偽狂犬滅活疫苗、 豬喘氣病弱毒菌苗、豬鏈球菌雙價(jià)滅活菌苗、副豬嗜血桿菌滅活疫苗、牛傳染性鼻氣管炎滅 活疫苗、支原體滅活疫苗；
[0015] 所述牛用疫苗包括?？谔阋?型滅活疫苗、牛傳染性胸膜肺炎弱毒苗、牛巴氏桿 菌病油乳劑疫苗、牛傳染性鼻氣管炎弱毒疫苗、牛沙門氏菌滅活苗；
[0016] 所述羊用疫苗包括羔羊大腸桿菌疫苗、羔羊大腸桿菌疫苗、氫氧化鋁菌羔羊痢疾 苗、羊痘雞胚化弱毒疫苗、II號(hào)炭疽菌苗、口瘡弱毒細(xì)胞凍干苗；
[0017] 所述人用疫苗包括乙肝疫苗、卡介苗、麻瘆疫苗、脊髓灰質(zhì)炎疫苗。
[0018] 本發(fā)明還提供了所述球蟲佐劑在制備抗腫瘤疫苗中的應(yīng)用。
[0019] 本發(fā)明還提供了所述球蟲佐劑在制備免疫調(diào)節(jié)復(fù)合物中的應(yīng)用。
[0020] 相比于傳統(tǒng)的油乳佐劑，本發(fā)明的球蟲佐劑具有嚴(yán)格的宿主特異性（對(duì)非宿主動(dòng) 物的安全性）及激發(fā)宿主免疫應(yīng)答的有效性，可以使疫苗產(chǎn)生的免疫效果提高兩個(gè)抗體滴 度，而且能夠誘導(dǎo)對(duì)預(yù)防病毒及其它胞內(nèi)病原體感染更為有效的Thl型和CTL型細(xì)胞免疫 應(yīng)答。
【附圖說明】
[0021] 圖1為本發(fā)明球蟲佐劑用于雞重組禽流感病毒H5亞型二價(jià)滅活疫苗（Re-4株 +Re-6株）后對(duì)禽流感病毒H5亞型Re-4株及Re-6株血凝抑制抗體效價(jià)的測(cè)試結(jié)果。
[0022] 圖2為本發(fā)明球蟲佐劑用于雞新支流三聯(lián)滅活疫苗后，血清中ND、H9血凝抑制抗 體效價(jià)的測(cè)試結(jié)果。
[0023] 圖3為本發(fā)明球蟲佐劑添加于雞新支流三聯(lián)滅活疫苗（La Sota株+M41株+H9WD 株）后，同時(shí)滴鼻免疫雞傳染性法氏囊病活疫苗（Gumboro D78)檢測(cè)其對(duì)傳染性法氏囊病 活疫苗的免疫增強(qiáng)效果。
[0024] 圖4為本發(fā)明球蟲佐劑用于雞新支減流四聯(lián)滅活疫苗免疫蛋雞后產(chǎn)生的針對(duì)ND、 IB、EDS及H9抗體效價(jià)的測(cè)試結(jié)果。
[0025] 圖5為本發(fā)明球蟲卵囊提取物佐劑用于H7N9病毒滅活疫苗免疫小鼠后血清中的 抗體效價(jià)測(cè)試結(jié)果。
[0026] 圖6為本發(fā)明球蟲卵囊提取物佐劑用于H7N9病毒滅活疫苗免疫小鼠后對(duì)H7N9的 保護(hù)效果。
[0027] 圖7為本發(fā)明球蟲卵囊提取物佐劑用于H7N9病毒滅活疫苗免疫小鼠后激發(fā)機(jī)體 產(chǎn)生的細(xì)胞免疫應(yīng)答水平。
[0028] 圖8為本發(fā)明球蟲卵囊提取物佐劑用于H7N9病毒滅活疫苗免疫小鼠后檢測(cè)其對(duì) 疫苗使用劑量的影響。
【具體實(shí)施方式】
[0029] 下面將通過【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。需要理解的是以下實(shí)施例的給 出僅是為了起到說明的目的，并不是用于對(duì)本發(fā)明的范圍進(jìn)行限制。本領(lǐng)域的技術(shù)人員在 不背離本發(fā)明的宗旨和精神的情況下，可以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行各種修改和替換。
[0030] 本發(fā)明提供了一種球蟲佐劑，所述球蟲佐劑包括頂復(fù)門真球蟲目原蟲和/或其提 取物。
[0031] 其中，所述頂復(fù)門真球蟲目原蟲（apicomplexanparasites)是一類專一性的細(xì)胞 內(nèi)寄生蟲，包括隱孢子蟲、艾美耳球蟲、等孢球蟲、弓形蟲、瘧原蟲等。這類原蟲具有相似的 亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)和保守的入侵機(jī)制。
[0032] 在本發(fā)明的一種【具體實(shí)施方式】中，所述頂復(fù)門真球蟲目原蟲選自艾美耳球蟲 (Eimeriaspp.)、弓形蟲（Toxoplasmagondii)、隱抱子蟲（Cryptosporidiumspp.)和痕原 蟲（Plasmodiumspp.)中的至少一種。
[0033] 其中，艾美耳屬球蟲包括柔嫩艾美耳球蟲（Eimeriatenella)、巨型艾 美耳屬球蟲（Eimeriamaxima)、和緩艾美耳球蟲（Eimeriamitis)、堆型艾美耳 球蟲（Eimeriaacervulina)、斯氏艾美耳球蟲（Eimeriastiedae)、腸艾美耳球蟲 (Eimeriaintestimalis)及無殘艾美耳球蟲（Eimeriairresidua)。優(yōu)選的，當(dāng)所述艾美耳 球蟲為柔嫩艾美耳球蟲、堆型艾美耳球蟲或巨型艾美耳球蟲時(shí)，獲得的免疫佐劑激發(fā)免疫 應(yīng)答的效果更好。
[0034] 其中，弓形蟲包括剛地弓形蟲（T.gondii) 〇
[0035] 其中，隱孢子蟲包括微小隱孢子蟲（C.parvum)。
[0036] 其中，皰原蟲包括惡性皰原蟲（Plasmodiumfalciparum)、間日皰原蟲 (Plasmodiumvivax)、三日痕原蟲（Plasmodiummalariae)和卵形痕原蟲（Plasmodium ovale)，優(yōu)選的，所述瘧原蟲為惡性瘧原蟲。
[0037] 在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述佐劑包括柔嫩艾美耳球蟲（E.tenella)以及剛第 弓形蟲（T.gondii)成分。
[0038] 在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述頂復(fù)門真球蟲原蟲選自由剛第弓形蟲 (T.gondii)、柔嫩艾美耳球蟲（E.tenella)、巨型艾美耳屬球蟲（E.maxima)、和緩艾美