一種人用狂犬病疫苗及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種人用狂犬病疫苗及其制備方法，特別涉及含有復(fù)合佐劑的人用狂 犬病疫苗及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 狂犬病是一種自然疫原性疾病，地理分布廣泛，除南極州與大洋州外，全世界各大 洲均有流行。中國屬于狂犬病高發(fā)國家之一，目前居世界第二位。造成人狂犬病發(fā)病的主 要原因是公眾養(yǎng)犬量增加，而公眾對狂犬病的危害認(rèn)識不足，被犬咬傷者未采取正確的傷 口處理和疫苗接種等措施也是狂犬病發(fā)病的重要因素。
[0003] 抗狂犬病免疫接種是早期免疫預(yù)防醫(yī)學(xué)史中的成功范例之一。早在19世紀(jì)80年 代巴斯德開創(chuàng)疫苗使用到現(xiàn)在，已發(fā)展了五代疫苗，早期為神經(jīng)組織來源疫苗，第二代為禽 胚培養(yǎng)疫苗，第三代為細(xì)胞培養(yǎng)疫苗，第四代為亞單位疫苗及精制疫苗，以及正在發(fā)展的新 一代基因工程疫苗。
[0004] 疫苗佐劑在疫苗的研發(fā)中具有重要的作用。由于現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)和基因工程 技術(shù)及免疫學(xué)的應(yīng)用，人工合成肽段、純化的重組抗原亞單位和質(zhì)粒D等新型疫苗的研宄 已取得了初步成果。盡管這些疫苗有很多優(yōu)越性，然而這些疫苗普遍存在免疫原性弱，難 以誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生有效免疫應(yīng)答等不足。而傳統(tǒng)的滅活疫苗雖然具備了制作工藝簡單的特 點(diǎn)，但仍存在滅活過程中有可能改變有效的抗原決定簇，產(chǎn)生的免疫應(yīng)答維持時(shí)間不長，且 需要多次免疫等問題。因此需要添加佐劑以增強(qiáng)機(jī)體對新型疫苗和滅活疫苗的免疫應(yīng)答。
[0005] CN1824302A公開了新型人用狂犬疫苗的制備方法及用途，其基本特征在于將市售 的無佐劑的人用狂犬疫苗吸附于納米鋁佐劑上，所生成的新型人用狂犬疫苗，新型人用狂 犬疫苗所采用的納米鋁佐劑的顆粒直徑為1 一 999納米，成分為氫氧化鋁化合物。納米鋁 佐劑增加10 - 20倍地吸附人用狂犬疫苗，具有明顯的"爆釋"效應(yīng)。
[0006] 此外，現(xiàn)有技術(shù)中還公開了使用其他類型復(fù)合佐劑，但這些狂犬病疫苗免疫應(yīng)答 時(shí)間較長，而且免疫持久水平也較低，接種后不能及時(shí)產(chǎn)生有效保護(hù)水平的中和抗體，致使 不能快速治療疾病。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 針對現(xiàn)有技術(shù)不足，本發(fā)明提供一種人用狂犬病疫苗及其制備方法，特別涉及含 有復(fù)合佐劑的人用狂犬病疫苗及其制備方法。
[0008] 為達(dá)到上述發(fā)明目的，本發(fā)明可采用以下任何一個技術(shù)方案：
[0009] 本發(fā)明一方面提供一種人用狂犬病疫苗，其特征在于：含有狂犬病毒滅活疫苗原 料和復(fù)合佐劑，其中復(fù)合佐劑由氫氧化鋅膠體、膽固醇、甘露寡糖和Tween-80組成；每劑量 所述的狂犬病毒滅活疫苗原料使用氫氧化鋅膠體〇. l-l〇mg，膽固醇10-1000 yg，甘露寡糖 10-1000 u g? Tween-80 10-1000 u g〇
[0010] 每劑量所述的狂犬病毒滅活疫苗原料優(yōu)選使用氫氧化鋅膠體l-l〇mg，更優(yōu)選 l-5mg〇
[0011] 每劑量所述的狂犬病毒滅活疫苗原料優(yōu)選使用膽固醇50-500 yg，更優(yōu)選 100-300 y g ;甘露寡糖優(yōu)選 50-500 y g，更優(yōu)選 100-300 y g ;Tween-8050-500 y g，更優(yōu)選 100-300 u g〇
[0012] 本發(fā)明還提供了一種制備人用狂犬病疫苗的方法，其特征在于所述方法包括如下 步驟：
[0013] (1)將葡萄糖酸鋅和氫氧化鈉分別配制成水溶液，在無菌條件下，將氫氧化鈉溶液 緩慢滴加入葡萄糖酸鋅溶液中，充分?jǐn)嚢瑁玫綒溲趸\膠體，備用；
[0014] (2)將膽固醇和甘露寡糖分別配制成溶液，備用；
[0015] (3)將氫氧化鋅膠體、膽固醇溶液、甘露寡糖溶液、Tween-80以及狂犬病毒滅活疫 苗原料混合，振蕩混勻，制成人用狂犬病疫苗。
[0016] 膽固醇又稱膽留醇。一種環(huán)戊烷多氫菲的衍生物。其廣泛存在于動物體內(nèi)，尤以 腦及神經(jīng)組織中最為豐富，在腎、脾、皮膚、肝和膽汁中含量也高。其溶解性與脂肪類似，不 溶于水，易溶于乙醚、氯仿等溶劑。膽固醇是動物組織細(xì)胞所不可缺少的重要物質(zhì)，它不僅 參與形成細(xì)胞膜，而且是合成膽汁酸，維生素D以及留體激素的原料。
[0017] 甘露寡糖又稱為甘露低聚糖，是從酵母培養(yǎng)細(xì)胞壁中提取的一類新型抗原活性物 質(zhì)，廣泛存在于魔芋粉、瓜兒豆膠、田菁膠及多種微生物細(xì)胞壁內(nèi)。由于它不僅具有低熱、穩(wěn) 定、安全無毒等良好的理化性質(zhì)，還具有保護(hù)腸道和提高免疫力等作用。
[0018] Tween-80為失水山梨醇單油酸酯聚氧乙烯醚。由失水山梨醇單油酸酯與環(huán)氧乙烷 聚合而成，是一種非離子型表面活性劑。
[0019] 狂犬病毒滅活疫苗原料為市售產(chǎn)品。
[0020] 本發(fā)明通過優(yōu)化復(fù)合佐劑和制備工藝，與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下有益效果：
[0021] 1、使用復(fù)合佐劑，大大提高免疫應(yīng)答時(shí)間，快速產(chǎn)生中和；
[0022] 2、使用復(fù)合佐劑，免疫持續(xù)時(shí)間較長；
[0023] 3、制備工藝簡單，所需設(shè)備易得，大大降低工業(yè)生產(chǎn)成本，得到的狂犬病疫苗的穩(wěn) 定性也大大提尚。
【具體實(shí)施方式】
[0024] 下面結(jié)合具體實(shí)施例來對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步說明，但并不將本發(fā)明局限于這些具 體實(shí)施方式。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該認(rèn)識到，本發(fā)明涵蓋了權(quán)利要求書范圍內(nèi)所可能包括的 所有備選方案、改進(jìn)方案和等效方案。
[0025] 實(shí)施例1
[0026] 人用狂犬病疫苗由下列成分組成：每劑量所述的狂犬病毒滅活疫苗原料使用氫氧 化鋅 〇?lmg，膽固醇 10 yg，甘露寡糖 10 yg，Tween-8010 ygo
[0027] 制備方法：將葡萄糖酸鋅加入無菌雙蒸水中，充分?jǐn)嚢枞芙?，得葡萄糖酸鋅溶液。 將氫氧化鈉加入無菌雙蒸水中，充分?jǐn)嚢枞芙?，得氫氧化鈉溶液。在無菌條件下，分別用封 閉式薄膜過濾器將葡萄糖酸鋅溶液和氫氧化鈉溶液過濾除菌后備用。中速攪拌下，將氫氧 化鈉溶液緩慢滴加入葡萄糖酸鋅溶液中，充分?jǐn)嚢瑁玫綒溲趸\膠體，備用；
[0028] 將膽固醇和甘露寡糖分別加入到無菌雙蒸水中，充分?jǐn)嚢枞芙?，并在無菌間中用 無菌濾膜過濾器除菌，得到膽固醇和甘露寡糖溶液。
[0029] 將上述制備的氫氧化鋅膠體、膽固醇水溶液、甘露寡糖水溶液、Tween-80以及狂犬 病毒滅活疫苗原料混合，振蕩混勻，制成人用狂犬病疫苗。
[0030] 實(shí)施例2
[0031] 人用狂犬病疫苗由下列成分組成：每劑量所述的狂犬病毒滅活疫苗原料使用氫氧 化鋅 lmg，膽固醇 100 y g，甘露寡糖 100 y g，Tween-80100 y g〇
[0032] 制備方法：與實(shí)施例1相同。
[0033] 實(shí)施例3
[0034] 人用狂犬病疫苗由下列成分組成：每劑量所述的狂犬病毒滅活疫苗原料使用氫氧 化鋅 2mg，膽固醇 300 y g，甘露寡糖 300 y g，Tween-80300 y g〇
[0035] 制備方法：與實(shí)施例1相同。
[0036] 實(shí)施例4
[0037] 人用狂犬病疫苗由下列成分組成：每劑量所述的狂犬病毒滅活疫苗原料使用氫氧 化鋅 〇? 5mg，膽固醇 100 y g，甘露寡糖 500 y g，Tween-80200 y g。
[0038] 制備方法：與實(shí)施例1相同。
[0039] 實(shí)施例5
[0040] 人用狂犬病疫苗由下列成分組成：每劑量所述的狂犬病毒滅活疫苗原料使用氫氧 化鋅5mg，膽固醇800yg，甘露寡糖500yg，Tween-80500yg〇
[0041] 制備方法：與實(shí)施例1相同。
[0042] 免疫試驗(yàn)
[0043] 對本發(fā)明的疫苗免疫情況進(jìn)行試驗(yàn)，設(shè)試驗(yàn)組5組（以實(shí)施例1-5所制備的疫苗） 和對照組2組（生理鹽水對照和以氫氧化鋁為佐劑的疫苗）。隨機(jī)在抽取56只小鼠，分為 7組，每組8只，對小鼠注射疫苗，免疫部位均為小鼠脛骨前肌。小鼠血清中抗-RABVIgG 水平的檢測采用間接ELISA法。分別于初免疫后0. 5、1、2、4、8、12和16周，經(jīng)尾靜脈采血 0. lml，分離血清，以純化滅活的RABV包被96孔板，將各實(shí)驗(yàn)組小鼠血清樣品以初始稀釋度 為1:40進(jìn)行倍比稀釋，詳細(xì)結(jié)果見表1所示：
[0044] 表1:小鼠初免后不同時(shí)間血清抗-RABVIgG水平
[0045]
[0046] 從表1數(shù)據(jù)可知，使用氫氧化鋅膠體、膽固醇、甘露寡糖和Tween-80復(fù)合佐劑的人 用狂犬病疫苗可顯著提高提高免疫應(yīng)答時(shí)間，快速產(chǎn)生中和，而且免疫持續(xù)時(shí)間較長，得到 的狂犬病疫苗的穩(wěn)定性也大大提高。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種人用狂犬病疫苗，其特征在于：含有狂犬病毒滅活疫苗原料和復(fù)合佐劑，其中 復(fù)合佐劑由氫氧化鋅膠體、膽固醇、甘露寡糖和Tween-80組成；每劑量所述的狂犬病毒 滅活疫苗原料使用氫氧化鋅膠體〇. l-l〇mg，膽固醇10-1000 yg，甘露寡糖10-1000 yg， Tween-8010-1000 u g〇2. 如權(quán)利要求1所述的人用狂犬病疫苗，其特征在于每劑量所述的狂犬病毒滅活疫苗 原料使用氫氧化鋅膠體l-l〇mg，優(yōu)選l_5mg。3. 如權(quán)利要求1所述的人用狂犬病疫苗，其特征在于每劑量所述的狂犬病毒滅活疫 苗原料使用膽固醇50-500 y g，優(yōu)選100-300 y g ;甘露寡糖50-500 y g，優(yōu)選100-300 y g ; Tween-8050-500 u g。4. 一種制備如權(quán)利要求1所述人用狂犬病疫苗的方法，其特征在于所述方法包括如下 步驟： (1) 將葡萄糖酸鋅和氫氧化鈉分別配制成溶液，在無菌條件下，將氫氧化鈉溶液緩慢滴 加入葡萄糖酸鋅溶液中，充分?jǐn)嚢?，得到氫氧化鋅膠體，備用； (2) 將膽固醇和甘露寡糖分別配制成溶液，備用； (3) 將氫氧化鋅膠體、膽固醇溶液、甘露寡糖溶液、Tween-80以及狂犬病毒滅活疫苗原 料混合，振蕩混勻，制成人用狂犬病疫苗。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種人用狂犬病疫苗，其特征在于：含有狂犬病毒滅活疫苗原料和復(fù)合佐劑，其中復(fù)合佐劑由氫氧化鋅膠體、膽固醇、甘露寡糖和Tween-80組成；每劑量所述的狂犬病毒滅活疫苗原料使用氫氧化鋅膠體0.1-10mg，膽固醇10-1000μg，甘露寡糖10-1000μg，Tween-8010-1000μg。采用本發(fā)明的復(fù)合佐劑，大大提高免疫應(yīng)答時(shí)間，快速產(chǎn)生中和，免疫持續(xù)時(shí)間較長，而且制備工藝簡單，所需設(shè)備易得，大大降低工業(yè)生產(chǎn)成本，得到的狂犬病疫苗的穩(wěn)定性也大大提高。
【IPC分類】A61P31/14, A61K39/39, A61K39/205
【公開號】CN104940925
【申請?zhí)枴緾N201510422146
【發(fā)明人】胡德東
【申請人】寧波榮安生物藥業(yè)有限公司
【公開日】2015年9月30日
【申請日】2015年7月17日