一種含LncRNA的藥物組合物及其用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
:
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)藥生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種內(nèi)源性長(zhǎng)鏈非編碼RNA的新藥及其用途，特別是一種含LncRNA的藥物組合物及其用途。
【背景技術(shù)】
:
[0002]心血管疾病主要包括高血壓、冠心病和充血性心力衰竭等，心血管疾病是人類健康的頭號(hào)殺手，全世界范圍內(nèi)每年有一千七百萬(wàn)人死于心血管疾病，其死亡率已接近所有癌癥死亡率的總和。隨著人民生活水平日益提高和飲食結(jié)構(gòu)的改變，心血管疾病死亡率呈明顯上升趨勢(shì)，已超過(guò)癌癥成為第一大致死原因，預(yù)防和治療心血管疾病仍然是醫(yī)學(xué)與生物學(xué)的重大任務(wù)。心肌肥大是指組織水平上心肌組織的增厚和細(xì)胞水平上心肌細(xì)胞體積的增大的總稱，是由于心肌細(xì)胞體積增大而導(dǎo)致心臟體積增大所發(fā)生的一種疾病。該病是由一些生理和病理因素的共同刺激而發(fā)生的，是許多心血管疾病的綜合性表現(xiàn)；心肌肥大是心肌病的一種，是心肌細(xì)胞針對(duì)于血液動(dòng)力學(xué)增加的一種應(yīng)答反應(yīng)，多種情況可引起人體內(nèi)血液動(dòng)力的增加，如高血壓，心臟瓣膜疾病。長(zhǎng)期的超負(fù)荷血液動(dòng)力刺激會(huì)引起以心肌細(xì)胞體積增大為特征的心肌細(xì)胞重塑過(guò)程，就是心肌肥大?，F(xiàn)在一般認(rèn)為存在兩種情況的心肌肥大，一種是正常的生理性肥大，比如出生后伴隨著發(fā)育發(fā)生的心肌肥大，還有體育鍛煉引起的心肌肥大；另外一種是病理性心肌肥大，其早期特征是室壁和室間隔增厚，心肌收縮功能增強(qiáng)，因此被視為代償性肥大，如果病情一直未得到緩解，心肌肥大后期會(huì)發(fā)生心室壁間質(zhì)纖維化、心肌細(xì)胞收縮功能失調(diào)以及能量代謝，基因表達(dá)和電生理特征的異常，最終導(dǎo)致心臟功能衰竭。鑒于心肌肥大的發(fā)生是一個(gè)進(jìn)行性不可逆過(guò)程，而且最終會(huì)引起心力衰竭，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)已經(jīng)把它作為心臟發(fā)生臨床病變的一個(gè)里程碑式的心肌形態(tài)變化，認(rèn)為它是導(dǎo)致心臟疾病和心臟猝死的一個(gè)危險(xiǎn)因素。
[0003]通常，LncRNA是指大于200個(gè)核苷酸的非編碼RNA，與其他非編碼RNA相比較，LncRNA具有類型多、作用模式多和數(shù)量多的特點(diǎn)；LncRNA可以通過(guò)改變?nèi)旧|(zhì)的結(jié)構(gòu)來(lái)調(diào)節(jié)基因的表達(dá)，也可以通過(guò)順式或反式方法來(lái)沉默或激活一個(gè)基因或一個(gè)基因家族，甚至整條染色體。由于LncRNA功能很廣泛，所以LncRNA與心臟疾病的關(guān)系已經(jīng)引起了人們的重視?，F(xiàn)在LncRNA在心臟中的表達(dá)調(diào)控以及功能尚且不為人們所知，我們想對(duì)這類在心臟中表達(dá)的LncRNA進(jìn)行表達(dá)調(diào)控以及功能的研宄，從而加深人們對(duì)心肌肥大等相關(guān)心臟疾病的了解，提供新的藥物作用靶點(diǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

:
[0004]本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，提供一種含LncRNA核苷酸序列的藥物組合物及其用途，本發(fā)明確定或發(fā)現(xiàn)調(diào)控心肌細(xì)胞肥大的在心臟中表達(dá)的LncRNA，進(jìn)一步確定其在心臟疾病中的作用，并將其應(yīng)用于防治這些心臟疾病的藥物。
[0005]為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明涉及的LncRNA核苷酸序列如下列SEQ ID NO:1所示:
[0006]SEQ ID NO:1:
[0007]TTTTTTTTTATTTATTTATTTTTTGGTTATTTCTGACTAGTACTTGAATTACCCTCATTGGATTATTCATTGGTTACTATGATAGTATTGATCAATGTAATATACTGATTACTATTATAACCCATAATTATTATTCATGGTTAGTATATATAATATTTATATTGTATTTGACACATATGTCAAATGATATAATTTTTTGTAGTACATTAAGTATGCTTAGGAGAATTTTAAAAGAGGTGAGAAGATTTATCAAAAGGAGGCATCCATTATCTCTCCTGAGATTTGCAACCACCGTTTTAGTGGATTTTTGCTGTTGCTGGCAAAGAAGAACTAATCTCTTTGAGGTATCACGTTACAAAAATGCAAACATTGGGTAAGTACAGAAGGCAAACTGCCTCTGTTCTATGAGAAATAGTTTTAATGATGACACGGATTTGAAATCCAAACCTGTGAGTTTGAGTCATGTGTCCCTCACTGTTGGTATCAACTTTTAACTTAGAATCATCTGGAAAATGAGTGACAATTGAGGAATATTCTAGACAAAGTTGTCTGTGAGTATTTCTGTAGGATTGTCTTGACTGTTAGTTGATTTAGCCCCTTGTTGGCAGCAGAATTCCTTAGCAGAGATCCTAAACTCTGCAAGATAGGAGAAATCTAGCTGAGAGAAACAAGCAAGCAGCCTGGTCCAGTTGTTTCTCTCTGCTCTTAACTGTGATATCATATAACTAGCTACTTGAGTGTGTGCCTTTCCTTCCCCACTTGATAGAATATTGTAGGACCATGAAAAGCAGCTTGTTTTCTGGTCAAGCTAGATTTAAACCCTGGAAACCCAGCAGGTGTTTCTACAAGGGACAGAGGCCTGTTTGCCATCCTACCAGACACAAGGCTTACGATGCTCCAGCTCCATAATTCTGTTACCATCAGTCATGTAGGGCAAACCGCCCCCTCCCCACCCAAGCCCCTGGTATTCTGTCTGGACTCCACCCCCACAGTAACCTGGCAACAGCTAGGCAAGCTCCTCCCCACAGTTATTTGGCAATAGCCAGATAGGCACAGCCCACTATAAAAGGGGTTGTTTGTCCCCTCCTCCCTCTCTTACTCTCTTGTTCTTACTCTCTTACTCTTGCCTCTTGCTCCCTTGCCCCCTTTCTCTCCACATTCCTTTTCCCCCATCTCTCCACATGGCCATGGCCAGCCTCTACTTCCATACTCTCTCCCTCTCTTTGCCTTTCTACAATAAATGTCTTAAAACCATTTGCCCCTTTTCATCGGGATCCACAGTGCTGGAGCAACGGTGCAGGTCTTCCTCTAAGGAGCCCCTCTTTGCCAGAAGGTCTCCCAGCCCTTCCAGTCACAGCTGTCAGCCAAACCAAGCCAAGCCCACCACCAGAGCAAGCTTAGGACTCTCCTCCCCATGGGAACCTGTCAGAGTTCCCCCCTCCTGCTCTTTTCCCTTAGGTCCTGGGCCAGAGCCCACCTGTGGGCCCCTATTCTGTTCCCTGCTCTTCTGTGGCATACAGAAGCATCAGGGATATCCAAGAGCCCGAGAACCTGTCATCCTCGGTCTCGGTGCAGGTCCTGGGACCCTGAACCAATTCCAGTAGTTCCCCGGAGACCTCAGACTGTGCTTCCCCACACCCAAAGCAGGGTGCTGTGGCTTCTCACAGCCTGACACCCACCTGGCGCCTGTGTGGGGTCCACACAGTCAGACTTCCTTCATACAGCCTCGCTTAGGAGCCCGAACCCTGGGACAGACATGGGACTCCATTTTAACCCACAGAATATAACCTGGAATTTAAGATGAATACACCCTTTCTTTCACTATGTTAATTTTTTTTTTTTGGTTTTTGTTTGCTTGTTTATTTGTTTAGGATATTTTATTTCAGCAAAAGTAATGAAACTAGGACACTGGATCACAAACATCAGTATGTTAACCATCACACCTAAAACATTACTGGAAAACTGTGCACATCTCTTTTTACAGGGTAACTTAATAAGTATTCACAAACATTCTTAGTGCTCATCAAATACTCAGAAATTGCATGTGTCAAGAAGTCAAATAACACAATAATTTCTACAGATTAATGATTCTTGTAATTTCTTGTAATTGTAAAATAAAATAATTTTTATTTTATTTTCTTTTGAAATCATTTTGTACAATGATAAAAAGACAAGCAGGTAGACTTTTGATTCATTCTGAATGGCTTAATAGTAAGTGATTAAAGAAGAGAATCCATATTGACTCCAATATTAAGTATATTAAAGCATCTTAAAGTCCCAATTAAATACACAGTTGTATTCCTTTTTTTTTTTCAGAAAAAAAAGTAGAGGTAACCTTTACCTATTAAAGTCCATGTTTAATATAACATCTGAATATGTTTCTATGAATGAGTAAGATGTCTTTGGATTATTCAGTACTCATATCTCTGAAGACCTGAAGTGTTCATACTGACTTTTCTACTTTTTCTCAGCTATCAACAATATAATTTTGACTGTTTACAGAACAGATTTCCTGTATGTGGTTGTAAAAGAAACACATTTGTTGCATTATGCTTATAGAAAAATAAACAACATACTTC ;其重組病毒的制備以小鼠基因組為模板，PCR擴(kuò)增得到LncRNA序列，亞克隆連入Amb1n公司的pSi lencer Adeno LO-CMVj7I病毒載體系統(tǒng)，構(gòu)建LncRNA過(guò)表達(dá)病毒；所述PCR的引物序列為:
[0008]上游引物:5，-ATTTTTTGGTTATTTCTGACTAGTAC-3，，
[0009]下游引物:5，-GAAGTATGTTGTTTATTTTTCTATAA-3，。
[0010]本發(fā)明采用常規(guī)工藝配成藥物組合物，包括感染滴度為116PFU過(guò)表達(dá)LncRNA載體、病毒或輔料，所述載體為膽固醇、納米顆?；蛑|(zhì)體；病毒載體為腺病毒載體、慢病毒載體、逆轉(zhuǎn)錄病毒載體中的一種或多種；所述輔料為甘露醇、磷酸鹽緩沖液、生理鹽水中的一種或多種；
[0011]藥物劑型為口服制劑、注射制劑、片劑、干粉劑型中的一種或多種，優(yōu)選的為注射用小水針劑或注射用凍干粉針。
[0012]本發(fā)明的LncRNA藥物組合物，通過(guò)口服或注射用于預(yù)防和治療心肌肥厚、心肌纖維化、冠心病和心衰。
[0013]本發(fā)明涉及的藥物組合物在肥大的心肌細(xì)胞和心臟肥厚中表達(dá)顯著下調(diào)，對(duì)心肌肥厚和心肌纖維化具有保護(hù)作用，在細(xì)胞水平通過(guò)感染LncRNA發(fā)現(xiàn)，它能夠抑制肥大刺激因子所誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞肥大，包括肥大指標(biāo)如細(xì)胞表面積及蛋白/DNA的比值與刺激組相比都有明顯的降低；在動(dòng)物水平通過(guò)注射外源LncRNA腺病毒能夠抑制肥大模型的肥大效應(yīng)包括心臟體重比、邊緣區(qū)的心肌細(xì)胞橫截面積(WGA染色)和心肌纖維化(Masson染色)都有明顯的降低，同時(shí)心功能也有明顯的改善。
[0014]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，其藥物組合物配方合理，藥理可靠，制作工藝簡(jiǎn)單，治療效果明顯，應(yīng)用范圍廣，使用環(huán)境友好。
【附圖說(shuō)明】
:
[0015]圖1為經(jīng)心臟肥大刺激因子Ang II (血管緊張素)誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞肥大過(guò)程中LncRNA表達(dá)水平的變化；
[0016]圖2為經(jīng)LncRNA感染的原代細(xì)胞進(jìn)行Ang II處理，在細(xì)胞水平上對(duì)Ang II所誘導(dǎo)的肥大的抑制情況；
[0017]圖3為小鼠靜脈注射Ang II腺病毒能抑制Ang II所誘導(dǎo)的肥大模型的檢測(cè)結(jié)果示意圖。
【具體實(shí)施方式】
:
[0018]下面通過(guò)具體實(shí)施例并結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明作出進(jìn)一步闡述。
[0019]實(shí)施例1、
[0020]LncRNA過(guò)表達(dá)腺病毒載體及陰性對(duì)照腺病毒構(gòu)建，本實(shí)施例以小鼠基因組為模板，PCR擴(kuò)增得到LncRNA序列，亞克隆連入Amb1n公司的pSi lencer Adeno 1.0-CMV