專利名稱:用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的方法和組合物的制作方法
背景技術(shù):
類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎通常被認(rèn)為是一種認(rèn)為與自身反應(yīng)的T細(xì)胞的活性有關(guān)的自身免疫病(參見例如Harris,E.D.,Jr.《新英格蘭藥物雜志》3221277-1289(1990))。盡管在治療方面有所進(jìn)展,但類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎仍然是嚴(yán)重的健康問題。盡管很少會致命,但關(guān)節(jié)炎是發(fā)病、損失工作的時間、喪失生產(chǎn)力以及生活質(zhì)量下降的主要原因。類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎造成了嚴(yán)重的疼痛以及關(guān)節(jié)移動性的喪失,并且可以使得完成甚至很簡單的任務(wù)都變得困難起來。
目前針對類風(fēng)溫性關(guān)節(jié)炎的治療方法和方式包括將諸如乙酰水楊酸(阿斯匹林)、布洛芬、萘普生和其它這類藥劑這樣的非甾類抗炎藥、金化合物、青霉胺、氨甲蝶呤、細(xì)胞毒性劑(例如硫唑嘌呤)、4-氨基喹啉劑和免疫調(diào)制劑給藥。但是,需要能夠抑制或改善諸如發(fā)炎、腫脹、異常的血管再生、骨侵蝕或軟骨侵蝕等癥狀的改進(jìn)的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的療法。優(yōu)選地,這種改進(jìn)的治療方法應(yīng)當(dāng)能夠與其它的治療方法相結(jié)合,應(yīng)當(dāng)迅速奏效以使癥狀消退或穩(wěn)定下來,并且應(yīng)當(dāng)完全被耐受。優(yōu)選地,這種治療方式在易感個體的預(yù)防中也應(yīng)當(dāng)是有用的。
發(fā)明概述本發(fā)明涉及多拉抑制素(Dolastatin)-15衍生物,其制備以及在治療哺乳動物、例如人的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中的應(yīng)用。本發(fā)明的多拉抑制素-15衍生物為通式Ⅰ的化合物R1R2N-CHX-CO-A-B-D-(E)s-(F)t-(G)u-K(Ⅰ)下面將詳細(xì)地討論通式Ⅰ。在本文中具體地給出了一些通式Ⅰ的化合物的例子。例如,通式Ⅰ的化合物可以是下列物質(zhì),其中R1和R2各為甲基或乙基;X為異丙基、仲丁基或叔丁基;s為1;t和u各為0;A為纈氨?;?、異亮氨?;?-叔丁基甘氨酰基;B為N-甲基纈氨?;?-異亮氨?;?-叔丁基甘氨?;?;D為噻唑烷基-羰基、3,4-脫氫脯氨酰基或脯氨?;?;E為脯氨?;?、噻唑烷基-4-羰基、高脯氨?;?、羥脯氨酰基或3,4-脫氫脯氨酰基;并且K為具有通式R5-N-R6的取代的氨基部分,其中R5為氫或C1-C4烷氧基,且R6為一價基團(tuán),諸如(1)-或(2)-金剛烷基;具有v=1的(CH2)v-苯基;α,α-二甲基芐基;C1-C12直鏈或支鏈羥烷基,諸如又稱作3-羥基-1,1-二甲基丙基的-C(CH3)2-CH2-CH2-OH;C3-C10環(huán)烷基,諸如二環(huán)[3.3.0]辛-1-基、1-甲基環(huán)戊基或1-甲基環(huán)己基;或C1-C12直鏈或支鏈烷基,諸如-C(CH3)3,又稱作叔丁基;
又稱作1,1-二甲基丙基;
又稱作1-甲基-1-乙基丙基;
又稱作(S)-或(R)-1-甲基-2,2-二甲基-丙基;
又稱作(S)-或(R)-1-乙基-2-甲基丙基;
又稱作1-異丙基-2-甲基-丙基;或-C(CH3)2-CH-(CH3)2,又稱作1,1-二甲基-2-甲基丙基;-CH(CH3)2,又稱作異丙基;-CH(CH3)CH2CH3,又稱作仲丁基[(S)或(R)];或-CH(CH3)CH(CH3)2,又稱作1,2-二甲基丙基。
本發(fā)明還涉及用于治療哺乳動物、例如人中的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的方法,其中使用了一種或多種本文所述的多拉抑制素-15衍生物。在本發(fā)明的方法中,將一種或多種多拉抑制素-15衍生物以治療有效的量單獨地或在藥理可接受的載體中進(jìn)行給藥,以便治療患有類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎或者對該病易感的哺乳動物中的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
在本發(fā)明的另一方面中,將一種或多種多拉抑制素-15衍生物與一種或多種其它的抗關(guān)節(jié)炎藥物聯(lián)合向患有類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎或者對該病易感的哺乳動物給藥。
在一個具體的實施方案中,將兩種或多種多拉抑制素-15衍生物單獨地或者與一種或多種其它的抗關(guān)節(jié)炎藥物聯(lián)合向患有類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎或者對該病易感的哺乳動物給藥。兩種或多種多拉抑制素-15衍生物的給藥或者多拉抑制素-15衍生物與一種或多種其它抗關(guān)節(jié)炎藥聯(lián)合給藥增強(qiáng)了對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的治療。例如,這種聯(lián)合提供了更強(qiáng)的抑制作用或更少的副作用,和/或能使得將更低劑量的已知抗關(guān)節(jié)炎藥給藥以便產(chǎn)生與更高劑量所產(chǎn)生的同樣的效果成為可能。其它的抗關(guān)節(jié)炎藥可以是、但不限于一種或多種下列物質(zhì)(1)非甾類抗炎劑,諸如乙酰水楊酸(阿斯匹林)、布洛芬或萘普生;(2)有機(jī)金的衍生物,諸如硫代蘋果酸金鈉、金硫葡糖或金諾芬;(3)D-青霉胺;(4)4-氨基喹啉劑,諸如羥氯喹;(5)硫唑嘌呤;(6)氨甲蝶呤;(7)環(huán)孢菌素;(8)血管生成抑制劑,諸如AGM-1470(Ingber等人,《自然》348(1990)555);(9)抗T細(xì)胞的單克隆抗體;(10)抗粘著分子的單克隆抗體;(11)抗細(xì)胞因子和生長因子的單克隆抗體;(12)腫瘤壞死因子受體(TNFR)-IgG;(13)IL-1受體拮抗劑;以及(14)ICE抑制劑。
本發(fā)明的另一個主題為包括單一或與一種或多種其它的抗關(guān)節(jié)炎藥聯(lián)合的一種或多種通式Ⅰ的多拉抑制素-15衍生物的藥物組合物。該藥物組合物可以選擇性地包括藥物可接受的載體、稀釋劑或者協(xié)助加工的化合物,例如粘合劑、填充劑和防腐劑。
附圖的簡要描述
圖1描繪了作為具有通式Ⅰ的結(jié)構(gòu)式的多拉抑制素-15衍生物例子的化合物?。А?br>
圖2是一幅表明平均關(guān)節(jié)炎得分隨著用Ⅱ型膠原免疫接種后的天數(shù)變化的曲線圖,其中針對的是用鹽水(對照)、地塞米松(標(biāo)準(zhǔn)療法)和圖1中的化合物ⅱ治療的小鼠。治療開始于免疫接種后第26天并截止于免疫接種后第35天。
圖3是一幅表明平均關(guān)節(jié)炎得分隨著用Ⅱ型膠原免疫接種后的天數(shù)變化的曲線圖,其中針對的是用載體(對照)、地塞米松(標(biāo)準(zhǔn)療法)和圖1中的化合物ⅱ治療的小鼠。治療開始于免疫接種后第48天并且持續(xù)21天。
圖4是一幅表明對用載體、地塞米松(標(biāo)準(zhǔn)療法)和圖1的化合物ⅱ治療的小鼠通過組織病理學(xué)分析測得的滑膜炎和軟骨損傷程度的曲線圖。在用Ⅱ型膠原免疫接種后第48天時開始治療小鼠,并且治療持續(xù)21天。在免疫接種后第71天時進(jìn)行尸體剖檢。
發(fā)明詳述本發(fā)明涉及在治療哺乳動物的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中有用的多拉抑制素-15衍生物。正如以下進(jìn)一步描述的那樣,本發(fā)明的多拉抑制素-15衍生物是具有通式Ⅰ所示結(jié)構(gòu)的化合物。將該化合物以治療有效量進(jìn)行給藥。正如本文所使用的,術(shù)語“治療有效量”是指足以引起所希望的生物學(xué)響應(yīng)的量。在本發(fā)明中,治療所希望的生物學(xué)響應(yīng)為對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的抑制。正如本文所使用的,“抑制”包括任何或者所有的下列情況(1)改善已有的癥狀;(2)預(yù)防或減緩癥狀的發(fā)展;(3)預(yù)防或推遲在易感的被試者中所述疾病的開始或出現(xiàn),即預(yù)防。一般與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎有關(guān)的癥狀包括、但不限于發(fā)炎、腫脹、異常的血管再生、骨侵蝕和軟骨侵蝕。當(dāng)把治療有效量的通式Ⅰ的多拉抑制素-15衍生物的化合物給藥時,抑制了一種或多種所述的癥狀。通式Ⅰ的化合物從印度洋海兔Dolabella auricularia中已經(jīng)分離出許多作為細(xì)胞生長抑制劑的具有顯著活性的短肽(Bai等人,《生物化學(xué)藥理學(xué)》401859-1864(1990);Beckwith等人,《國家癌癥學(xué)會雜志》85483-488(1993)及其中所引用的參考文獻(xiàn))。這些短肽包括多拉抑制素s1-10(頒發(fā)給Pettit等人的美國專利4,816,444)和多拉抑制素-15(歐洲專利申請398558)。例如,多拉抑制素-15顯著地抑制了國家癌癥學(xué)會的P388淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞系的生長,而這正是抗各種類型的人類惡性腫瘤的功效的強(qiáng)烈的預(yù)言者。但是,這種化合物僅以痕量存在于海兔中并且難于分離、其合成非常昂貴并且具有在水中溶解度差的缺點。
通式Ⅰ的化合物是多拉抑制素-15的衍生物。令人感到驚奇的是,已經(jīng)確定通式Ⅰ的化合物在用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的方法中是有用的。如本文中以及在有關(guān)的于1995年6月7日提交的共同未決的申請U.S.S.N.08/472,453中所述,可以合成在本發(fā)明的方法中所用的通式Ⅰ的多拉抑制素-15的衍生物,其中所述申請的教導(dǎo)是以其全文插入本文的。
正如在有關(guān)的于1995年6月7日提交的共同未決的申請U.S.S.N.08/472,453中所述,通式Ⅰ的多拉抑制素-15的衍生物通常包括L-氨基酸,但它們還可以含有一個或多個D-氨基酸。通式Ⅰ的化合物還可以與生理上相容的酸一起呈鹽的形式存在,所述的酸諸如、但卻不限于鹽酸、檸檬酸、酒石酸、乳酸、磷酸、甲磺酸、醋酸、甲酸、馬來酸、富馬酸、蘋果酸、琥珀酸、丙二酸、硫酸、L-谷氨酸、L-天冬氨酸、丙酮酸、粘酸、苯甲酸、葡糖醛酸、草酸、抗壞血酸和乙酰甘氨酸。
對于本發(fā)明來說,術(shù)語“一價基團(tuán)”意思是指能夠與第二個中性分子碎片形成一個共價鍵的電中性的分子碎片。一價基團(tuán)包括氫原子、烷基(例如甲基、乙基、丙基和叔丁基)、環(huán)烷基、羥烷基、金剛烷基、鹵原子(例如氟、氯和溴原子)、芳基(例如苯基、芐基和萘基)以及烷氧基(例如甲氧基和乙氧基)。在相鄰的σ-鍵合的原子上的兩個一價基團(tuán)還可以在該相鄰的原子之間形成一個pi鍵。例如,通過一個聚亞甲基單元還可以將兩個一價基團(tuán)連接在一起以形成一個環(huán)狀結(jié)構(gòu)。例如,其中R和R’為一價基團(tuán)的單元-N(R)R’可以與氮原子一起形成雜環(huán)。此外,與同一原子相連的兩個一價基團(tuán)也可以形成一個二價基團(tuán),諸如亞烷基(例如亞丙基)或氧原子。
更具體地講,對通式Ⅰ的化合物而言R1為烷基、諸如C1-C3;環(huán)烷基、諸如環(huán)丙基;烷基磺?;?、諸如C1-C3;氟代烷基、諸如氟代乙基、二氟代乙基、氟代異丙基;可以被烷基、諸如甲基取代的氨基磺?;?;R2為氫;烷基、諸如C1-C3;氟代烷基、諸如氟代乙基、二氟代乙基、氟代異丙基;環(huán)烷基、諸如環(huán)丙基;R1-N-R2合起來可以是吡咯烷基或哌啶子基殘基;A 為纈氨?;?、異亮氨?;?、亮氨酰基、別異亮氨?;?,2-二甲基甘氨?;?-環(huán)丙基甘氨?;?、2-環(huán)戊基甘氨?;?-叔丁基丙氨?;?、2-叔丁基甘氨?;?、3-環(huán)己基丙氨酰基、2-乙基甘氨酰基、2-環(huán)己基甘氨?;⒄涟滨;蛘i氨?;鶜埢籅 為N-烷基-纈氨?;?、-正纈氨酰基、-亮氨?;?、-異亮氨?;?、-2-叔丁基甘氨酰基、-3-叔丁基丙氨?;ⅲ?-乙基甘氨?;?、-2-環(huán)丙基甘氨酰基、-2-環(huán)戊基甘氨酰基、正亮氨酰基或-2-環(huán)己基甘氨?;鶜埢渲蠳-烷基優(yōu)選N-甲基或N-乙基;D 為脯氨?;⒏吒滨;?、羥脯氨酰基、3,4-脫氫脯氨?;?、4-氟代脯氨?;?-甲基脯氨?;?-甲基脯氨?;?、5-甲基脯氨?;?、氮雜環(huán)丁烷-2-羰基、3,3-二甲基脯氨?;?,4-二氟代脯氨酰基、噁唑烷-4-羰基或噻唑烷-4-羰基殘基;E 為脯氨?;⒏吒滨;?、羥脯氨?;?、3,4-脫氫脯氨?;?-氟代脯氨酰基、3-甲基脯氨酰基、4-甲基脯氨?;?-甲基脯氨?;?、氮雜環(huán)丁烷-2-羰基、3,3-二甲基脯氨?;?,4-二氟代脯氨?;?、噁唑烷-4-羰基或噻唑烷-4-羰基殘基;F和G 獨立地選自由脯氨?;⒏吒滨;⒘u脯氨?;⑧邕蛲榛?-羰基、1-氨基戊基-1-羰基、纈氨?;?、2-叔丁基甘氨酰基、異亮氨?;?、亮氨?;?、3-環(huán)己基丙氨酰基、苯丙氨?;?、N-甲基苯丙氨酰基、四氫異喹啉基-2-組氨?;?-氨基吲哚基-1-羰基、3-吡啶基丙氨?;?-環(huán)己基甘氨?;?、正亮氨?;?、正纈氨酰基、新戊基甘氨?;⑸滨;⒏拾滨;?,2-二甲基甘氨?;?、丙氨酰基、β-丙氨?;?-萘基丙氨?;鶜埢M成的組中;X 為氫、烷基(諸如C1-C5)、環(huán)烷基(諸如C3-C7)、-CH2-環(huán)己基或芳烷基(諸如芐基或苯乙基);s,t和u獨立地為0或1;并且K 為羥基、烷氧基(諸如C1-C4)、苯氧基、芐氧基或者取代的或未取代的氨基部分。
此外,通式Ⅰ的化合物可以與生理上耐受的酸一起呈其鹽的形式存在。
本發(fā)明化合物的一個小類包括其中的R1-N-R2為吡咯烷基或哌啶基殘基的通式Ⅰ的化合物。
本發(fā)明化合物的另一個小類包括其中的K為通式R5-N-R6的氨基部分的通式Ⅰ的化合物,其中R5為氫、或羥基、或C1-7烷氧基、或芐氧基、或苯氧基或C1-12直鏈或支鏈羥烷基(諸如3-羥基-1,1-二甲基丙基)、或C1-7直鏈或支鏈烷基(其可以被一個或多個氟原子取代)、或C3-10-環(huán)烷基(諸如二環(huán)[3.3.O]辛-1-基、1-甲基環(huán)戊基或1-甲基環(huán)己基);或芐基(它可以被多達(dá)3個取代基所取代,而所述取代基可以獨立地為CF3、硝基、C1-7烷基磺?;?、C1-4烷氧基、苯氧基、芐氧基、鹵素、C1-4-烷基、氰基、羥基、N(CH3)2、COOMe、COOEt、COOiPr或COONH2);為氫、或C1-12直鏈或支鏈烷基(它可以被一個或多個氟原子所取代)、或C1-12直鏈或支鏈羥烷基(諸如3-羥基-1,1-二甲基丙基)、或C3-10-環(huán)烷基(諸如二環(huán)[3.3.0]辛-1-基、或1-甲基環(huán)戊基或1-甲基環(huán)己基);或者-(CH2)v-C3-7-環(huán)烷基(v=0,1,2或3)、或去甲麻黃堿基、或去甲偽麻黃堿基、或喹啉基、或吡唑基、或-CH2-苯并咪唑基、或(1)-金剛烷基、或(2)-金剛烷基、-CH2-金剛烷基、或α-甲基-芐基、或α-二甲基芐基、或-(CH2)v-苯基(v=0,1,2或3;它可以被多達(dá)2個取代基所取代,而所述取代基可以獨立地為CF3、硝基、C1-7烷基磺酰基、C1-4烷氧基、苯氧基、芐氧基、鹵素、可以形成環(huán)狀系統(tǒng)的C1-4-烷基、氰基、羥基、N(CH3)2、COOMe、COOEt、COOiPr或COONH2)、或-(CH2)m-萘基(m=0或1);或-(CH2)w-二苯甲基(w=0,1或2);或聯(lián)苯基或吡啶甲基或苯并噻唑基或苯并異噻唑基或苯并吡唑基或苯并噁唑基或-(CH2)m-芴基(m=0或1);或嘧啶基或-(CH2)m-2,3-二氫化茚基(m=0或1);或-(CH2CH2O)y-CH3(y=0,1,2,3,4或5)或-(CH2CH2O)y-CH2CH3(y=0,1,2,3,4或5)、或NH-C6H5(它可以被多達(dá)2個取代基所取代,而所述取代基可以獨立地為CF3、硝基、C1-7烷基磺?;1-4烷氧基、鹵素、可以形成環(huán)狀系統(tǒng)的C1-4烷基、氰基、羥基、COOMe、COOEt、COOiPr或COONH2)、或-NCH3-C6H5或-NH-CH2-C6H5或-NCH3-CH2-C6H5或可以被多達(dá)2個取代基取代的5元雜芳基,而所述的取代基可以獨立地為CF3、硝基、硫甲基、硫乙基、C3-6-環(huán)烷基、-CH2-COOEt、與雜環(huán)形成二環(huán)系的C3-4-亞烷基、苯基;或者-CHR7-5元雜芳基(它可以被多達(dá)2個取代基取代,而所述取代基可以獨立地為CF3、硝基、氰基、鹵素、COOMe、COOEt、COOiPr、CONH2、C1-4-烷基、C1-4-烷氧基、苯基、芐基、萘基、或C1-7-烷基磺酰基[R7=氫、直鏈或支鏈的C1-5烷基、芐基;或R7和R5一起形成基團(tuán)-(CH2)3-或-(CH2)4-])。
該小類包括通式Ⅰ的化合物,其中s、t和u獨立地為0或1;R1、R2和X為低級烷基,A為低級烷基氨基酸、B為N-低級烷基化的低級烷基氨基酸;D、E、F、G和K如前面所定義的那樣。考慮到前面的內(nèi)容,三組所述的化合物從而可以由下面的通式Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ來描述R1R2N-CXH-CO-A-B-Pro-Pro-F-G-KⅡR1R2N-CXH-CO-A-B-Pro-Pro-F-K ⅢR1R2N-CXH-CO-A-B-Pro-Pro-K Ⅳ-CHR7-5元雜芳基例如可以由下列殘基之一來表示
-NR5CHR7-5元雜芳基例如可以由下列殘基表示
5-元雜芳基例如可以由下列殘基表示
在本發(fā)明化合物的另一個小類中,R5-N-R6可以共同形成選自由下列結(jié)構(gòu)組成的組中的結(jié)構(gòu)
本發(fā)明化合物的再一個小類例如包括其中的s、t和u為1并且K為羥基、烷氧基、苯氧基或芐氧基部分的通式Ⅰ的化合物。
本發(fā)明化合物的再一個小類例如包括其中的s和t為1、u為0并且K為羥基、烷氧基、苯氧基或芐氧基部分的通式Ⅰ的化合物。
本發(fā)明化合物的另一個小類例如包括其中的s為1、t和u為0并且K為羥基、烷氧基、苯氧基或芐氧基部分的通式Ⅰ的化合物。
在具體的實施方案中,通式Ⅰ的化合物是這樣的一種化合物,其中R1和R2各為甲基或乙基;X為異丙基、仲丁基或叔丁基;s為1;t和u各為0;A為纈氨酰基、異亮氨?;?-叔丁基甘氨?;籅為N-甲基纈氨?;?、1-異亮氨酰基或2-叔丁基甘氨?;?;D為脯氨?;?、噻唑烷基-4-羰基或3,4-脫氫脯氨?;籈為脯氨?;⑧邕蛲榛?-羰基、高脯氨酰基、3,4-脫氫脯氨?;蛄u脯氨?;?;并且K為具有通式R5-N-R6的取代的或未取代的氨基部分。
在進(jìn)一步的實施方案中,多拉抑制素-15衍生物是這樣的一種通式Ⅰ的化合物,其中R1和R2各為甲基或乙基;X為異丙基、仲丁基或叔丁基;s為1;t和u各為0;A為纈氨?;?、異亮氨?;?-叔丁基甘氨酰基;B為N-甲基纈氨酰基、1-異亮氨?;?-叔丁基甘氨酰基;D為脯氨酰基、噻唑烷基-4-羰基或3,4-脫氫脯氨?;?;E為脯氨?;⑧邕蛲榛?-羰基、高脯氨?;?、3,4-脫氫脯氨?;蛄u脯氨?;?;并且K為具有通式R5-N-R6的取代的氨基部分,其中R5為氫或C1-C4烷氧基,并且R6為例如由下列一價基團(tuán)表示的C1-C12直鏈或支鏈烷基或C1-C12直鏈或支鏈羥烷基-C(CH3)2-CH2-CH2-OH,又稱作3-羥基-1,1-二甲基丙基;-C(CH3)3,又稱作叔丁基;
又稱作1,1-二甲基丙基;
又稱作1-甲基-1-乙基丙基;
又稱作(S)-或(R)-1-甲基-2,2-二甲基丙基;
又稱作(S)-或(R)-1-乙基-2-甲基丙基;
又稱作1-異丙基-2-甲基丁基;或-C(CH3)2-CH(CH3)2又稱作1,1-二甲基-2-甲基丙基;-CH(CH3)2,又稱作異丙基;-CH(CH3)CH2CH3,又稱作(S)-或(R)-仲丁基-CH(CH3)CH(CH3)2,又稱作1,2-二甲基丙基在另一個實施方案中,本發(fā)明的多拉抑制素-15衍生物是這樣的一種通式Ⅰ的化合物,其中R1和R2各為甲基或乙基;X為異丙基、仲丁基或叔丁基;s為1;t和u各為0;A為纈氨?;?、異亮氨?;?-叔丁基甘氨?;?;B為N-甲基纈氨?;?、1-異亮氨酰基或2-叔丁基甘氨?;?;D為脯氨?;⑧邕蛲榛?-羰基、3,4-脫氫脯氨?;?;E為脯氨?;?、噻唑烷基-4-羰基、高脯氨酰基、3,4-脫氫脯氨?;蛄u脯氨酰基;并且K為具有通式R5-N-R6的取代的氨基部分,其中R5為氫或C1-C4烷氧基,并且R6為一價基團(tuán),諸如C3-C10環(huán)烷基(例如環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基或1-甲基環(huán)戊基、或1-甲基環(huán)己基或二環(huán)[3.3.0]辛-1-基);(1)-或(2)-金剛烷基;具有v=1的(CH2)v-苯基或α,α-二甲基芐基。
在進(jìn)一步的實施方案中,本發(fā)明的多拉抑制素-15衍生物是這樣的一種通式Ⅰ的化合物,其中R1和R2各為甲基;X為異丙基;s為1;t和u各為0;A為纈氨?;?;B為N-甲基纈氨?;?;D為脯氨酰基;E為脯氨酰基;并且K為具有通式R5-N-R6的取代的氨基部分,其中R5為氫并且R6為叔丁基。該化合物對應(yīng)著圖1中所描述的化合物ⅱ。在實施例3和4中描述了通式Ⅰ的化合物ⅱ的使用結(jié)果,并以圖形的方式示于圖2、3和4中。
可以將本發(fā)明的多拉抑制素-15衍生物選擇性地在藥物可接受的載體中進(jìn)行給藥。藥物可接受的載體是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員眾所周知的。載體的選擇將部分由通式Ⅰ的具體化合物以及由用于多拉抑制素-15衍生物給藥的具體方法來確定。
本發(fā)明的又一個主題為包括單獨地或者與一種或多種其它的抗關(guān)節(jié)炎藥物(諸如本文所述的那些藥物)聯(lián)合的一種或多種通式Ⅰ的多拉抑制素-15衍生物的藥物組合物。該藥物組合物可以選擇性地包括藥物可接受的載體、稀釋劑或協(xié)助加工的化合物,例如粘合劑、填充劑和防腐劑。
另一方面,本發(fā)明包括一種使用通式Ⅰ的多拉抑制素-15衍生物來治療哺乳動物中的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的方法。對本發(fā)明來說,短語“治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的方法”和“抑制類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎”可以相互交換使用。正如本文所使用的那樣,術(shù)語“抑制”包括下列情況的任意一種或全部(1)改善已有的癥狀;(2)預(yù)防或減緩癥狀的發(fā)展;(3)預(yù)防或推遲在易感的被試者中所述疾病的開始或出現(xiàn),即預(yù)防。
本發(fā)明的治療方法包括將治療有效量的通式Ⅰ的一種或多種化合物給藥??梢詫⑼ㄊ舰竦幕衔飭为毜鼗蛘吲c適合所希望的給藥途徑的藥物接受的載體或稀釋劑聯(lián)合給藥??梢酝ㄟ^對藥品而言是常規(guī)的任何方式給藥,其中包括口服和非腸道的方式(諸如皮下、靜脈、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、鼻腔或直腸的途徑)。所述的藥物組合物還可以包含其它的治療活性成分。
在本發(fā)明的另一方面,在患有類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎或者對其易感的哺乳動物中,將一種或多種多拉抑制素-15衍生物單獨地或者與一種或多種其它抗關(guān)節(jié)炎藥聯(lián)合給藥。將一種或多種多拉抑制素-15衍生物與一種或多種其它的抗關(guān)節(jié)炎藥聯(lián)合給藥促進(jìn)了對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的治療。例如,聯(lián)合提供了更強(qiáng)的抑制作用或者更少的副作用,和/或可以使得將更低劑量的已知抗關(guān)節(jié)炎藥給藥以產(chǎn)生相同的效果成為可能。所述的其它的抗關(guān)節(jié)炎藥可以是、但并不限于下列物質(zhì)(1)非甾類抗炎劑,諸如乙酰水楊酸(阿斯匹林)、布洛芬或萘普生;(2)有機(jī)金的衍生物,諸如硫代蘋果酸金鈉、金硫葡糖或金諾芬;(3)D-青霉胺;(4)4-氨基喹啉劑,諸如羥氯喹;(5)硫唑嘌呤;(6)氨甲蝶呤;(7)環(huán)孢菌素;(8)血管生成抑制劑,諸如AGM-1470(Ingber等人,《自然》348(1990)555);(9)抗T細(xì)胞的單克隆抗體;(10)抗粘著分子的單克隆抗體;(11)抗細(xì)胞因子和生長因子的單克隆抗體;(12)腫瘤壞死因子受體(TNFR)-IgG;(13)IL-1受體拮抗劑;以及ICE抑制劑。
在一個具體的實施方案中,將至少兩種或多種多拉抑制素-15衍生物單獨地或者與一種或多種其它抗關(guān)節(jié)炎藥聯(lián)合向患有類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎或?qū)ζ湟赘械牟溉閯游锝o藥。
正如本文所述,向哺乳動物(比如人)給藥的劑量包括治療有效量的通式Ⅰ的化合物??梢允褂霉姆椒☉{經(jīng)驗確定劑量,并且該劑量將取決于許多因素,諸如所用具體化合物的生物活性、作用機(jī)理、毒性分布;給藥方式;接受者的年齡、健康狀況和體重;癥狀的自然持續(xù)時間和程度;治療的頻率;其它治療的給藥;以及所希望的效果。
通式Ⅰ化合物的典型的日常劑量為口服時每千克體重為大約1至大約100毫克、通過非腸道給藥時每千克體重為大約1至大約100毫克。
本發(fā)明的多拉抑制素-15衍生物可以以常規(guī)的固態(tài)或液態(tài)藥物的形式給藥,例如未包衣的或(膜)包衣的片劑、膠囊、粉劑、顆粒劑、栓劑或溶液。這些藥劑是以常規(guī)方式生產(chǎn)的。針對這一目的,可以將所述活性物質(zhì)與常規(guī)的藥物助劑一起加工,諸如片劑粘合劑、填充劑、防腐劑、片劑崩解劑、流動調(diào)節(jié)劑、增塑劑、濕潤劑、分散劑、乳化劑、溶劑、緩釋組合物、抗氧化劑和/或推進(jìn)劑氣體(參見H.Sücker等人《藥物技術(shù)》Thieme-Verlag,Stuttgart,1978)。以這種方式獲得的給藥形式通常含有按重量計約為1至約為90%的活性物質(zhì)。
如果將多于一種的多拉抑制素-15衍生物給藥的話,可以將它們同時(一齊)或者分次(依次)給藥,只要將它們以適合于產(chǎn)生所希望的治療效果的這樣一個順序和間隔給藥即可。如果將兩種或多種多拉抑制素-15衍生物同時給藥的話,可以將它們單獨地(以單個的衍生物)或者以物理結(jié)合的形式(以混合物或結(jié)合物)給藥。同樣的是當(dāng)將一種或多種多拉抑制素-15衍生物與一種或多種其它的抗關(guān)節(jié)炎藥一起給藥時的情況??梢詫⑺鼈兺瑫r或依次地、并且獨立地或者以結(jié)合物或混合物的形式給藥。包括一種或多種多拉抑制素-15衍生物的或者包括一種或多種多拉抑制素-15衍生物和一種或多種其它的抗關(guān)節(jié)炎藥的藥物組合物也是本發(fā)明的主題。
以上詳細(xì)地描述了通式Ⅰ的化合物。在一個具體的實施方案中,本發(fā)明的方法使用了這樣的一種通式Ⅰ的多拉抑制素-15衍生物,其中R1和R2各為甲基或乙基;X為異丙基、仲丁基或叔丁基;s為1;t和u各為0;A為纈氨酰基、異亮氨?;?-叔丁基甘氨?;?;B為N-甲基纈氨?;?、1-異亮氨?;?-叔丁基甘氨?;?;D為脯氨?;?、噻唑烷基-4-羰基或3,4-脫氫脯氨?;籈為脯氨?;⑧邕蛲榛?-羰基、高脯氨?;?,4-脫氫脯氨?;蛄u脯氨?;?;并且K為具有通式R5-N-R6的取代的或未取代的氨基部分。
在進(jìn)一步的實施方案中,本發(fā)明的方法使用了這樣的一種通式Ⅰ的多拉抑制素-15衍生物,其中R1和R2各為甲基或乙基;X為異丙基、仲丁基或叔丁基;s為1;t和u各為0;A為纈氨?;惲涟滨;?-叔丁基甘氨酰基;B為N-甲基纈氨?;?-異亮氨?;?-叔丁基甘氨?;?;D為脯氨?;⑧邕蛲榛?-羰基或3,4-脫氫脯氨酰基;E為脯氨?;?、噻唑烷基-4-羰基、高脯氨?;?,4-脫氫脯氨酰基或羥脯氨?;徊⑶襅為具有通式R5-N-R6的取代的氨基部分,其中R5為氫或C1-C4烷氧基,并且R6為例如由下列一價基團(tuán)表示的C1-C12直鏈或支鏈烷基或C1-C12直鏈或支鏈羥烷基-C(CH3)2-CH2-CH2-OH,又稱作3-羥基-1,1-二甲基丙基;-C(CH3)3,又稱作叔丁基;
又稱作1,1-二甲基丙基;
又稱作1-甲基-1-乙基丙基;
又稱作(S)-或(R)-1-甲基-2,2-二甲基丙基;
又稱作(S)-或(R)-1-乙基-2-甲基丙基;
又稱作1-異丙基-2-甲基丁基;或-C(CH3)2-CH(CH3)2又稱作1,1-二甲基-2-甲基丙基;-CH(CH3)2,又稱作異丙基;-CH(CH3)CH2CH3,又稱作(S)-或(R)-仲丁基-CH(CH3)CH(CH3)2,又稱作1,2-二甲基丙基在另一個實施方案中,本發(fā)明的方法使用了這樣的一種通式Ⅰ的化合物,其中R1和R2各為甲基或乙基;X為異丙基、仲丁基或叔丁基;s為1;t和u各為0;A為纈氨?;?、異亮氨酰基或2-叔丁基甘氨?;?;B為N-甲基纈氨?;?、1-異亮氨?;?-叔丁基甘氨?;?;D為脯氨?;?、噻唑烷基-4-羰基、3,4-脫氫脯氨酰基;E為脯氨?;?、噻烷基-4-羰基、高脯氨?;?,4-脫氫脯氨?;蛄u脯氨?;?;并且K為具有通式R5-N-R6的取代的氨基部分,其中R5為氫或C1-C4烷氧基,并且R6為一價基團(tuán),諸如C3-C10環(huán)烷基(例如環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、1-甲基環(huán)戊基、1-甲基環(huán)己基或二環(huán)[3.3.0]辛-1-基);(1)-或(2)-金剛烷基;具有v=1的(CH2)v-苯基或α,α-二甲基芐基。
在進(jìn)一步的實施方案中,本發(fā)明的方法使用了這樣的一種通式Ⅰ的多拉抑制素-15衍生物,其中R1和R2各為甲基;X為異丙基;s為1;t和u各為0;A為纈氨?;籅為N-甲基纈氨?;?;D為脯氨?;籈為脯氨?;徊⑶襅為具有通式R5-N-R6的取代的氨基部分,其中R5為氫并且R6為叔丁基。該化合物對應(yīng)于圖1中所描述的化合物ⅱ。在實施例3和4中描述了化合物ⅱ在治療類風(fēng)溫性關(guān)節(jié)炎中的使用,其結(jié)果示于圖2、3和4中。合成方法通過公知的肽合成的方法可以制備出通式Ⅰ的化合物,諸如那些在本文中以及在1995年6月7日提交的美國專利申請系列號為08/470,453中所述的方法,這些教導(dǎo)插入本文僅供參考。從單個氨基酸順序地或者通過連接合適的小的肽片段可以裝配出肽。在順序裝配中,肽鏈從C-末端開始以每個步驟一個氨基酸的數(shù)目逐步延伸。在片段偶聯(lián)的過程中,不同長度的片段可以相互連接,并且通過從氨基酸的順序裝配或者通過更短的肽的片段偶聯(lián)也可以獲得所述的片段。
在順序裝配和片段偶聯(lián)中,都必須通過形成酰胺鍵來連接所述的單元,而這可以通過各種酶促和化學(xué)的方法來實現(xiàn)。本文所述的用于形成肽的酰胺鍵的方法同樣適合于非肽的酰胺鍵的形成。
用于形成酰胺鍵的化學(xué)方法在關(guān)于肽化學(xué)的標(biāo)準(zhǔn)的參考文獻(xiàn)中進(jìn)行了詳細(xì)的描述,其中包括Muller的《有機(jī)化學(xué)的方法》第)XV/2冊,1-364,Thieme Verlag,Stuttgart,(1974);Stewart與Young的《固相肽合成》31-34和71-82,Pierce化學(xué)公司,Rockford,IL(1984);Bodansky等人的《肽合成》85-128,John Wiley&Sons,紐約(1976);《肽合成的實踐》M.Bodansky,A.Bodansky,Springer-Verlag,1994以及在肽化學(xué)中其它的權(quán)威著作。優(yōu)選的方法包括疊氮化物法、對稱的與混合的酸酐法、使用原位生成的或預(yù)制的活性酯、使用氨基酸的尿烷保護(hù)的N-羧酸酐以及使用偶聯(lián)劑形成酰胺鍵,所述偶聯(lián)劑諸如二環(huán)己基碳化二亞胺(DCC)、二異丙基碳化二亞胺(DIC)、1-乙氧羰基-2-乙氧基-1,2-二氫喹啉(EEDQ)、新戊酰氯、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亞胺鹽酸化物(EDCI)、正丙烷-膦酸酐(PPA)、N,N-雙(2-氧代-3-噁唑烷基)酰氨基磷酰氯(BOP-Cl)、溴代-三-吡咯烷磷六氟磷酸鹽(PyBrop)、二苯磷酰疊氮化物(DPPA)、Castro’s試劑(BOP,PyBop)、O-苯并三唑基-N,N,N’,N’-四甲基脲鹽(HBTU)、O-氮雜苯并三唑-N,N,N’,N’-四甲基脲鹽(TATU)、二乙基磷酰氰(DEPCN)、2,5-二苯基-2,3-二氫-3-氧代-4-羥基噻吩二氧化物(Steglich’s試劑;HOTDO)以及1,1’-羰基二咪唑(CDI)。偶聯(lián)劑可以單獨地或者與添加劑結(jié)合使用,所述添加劑諸如N,N-二甲基-4-氨基吡啶(DMAP)、N-羥基-苯并三唑(HOBt)、N-羥基苯并三嗪(HOOBt)、N-羥基琥珀酰亞胺(HOSu)或2-羥基吡啶。
盡管在酶促肽合成中保護(hù)基的使用通常不是必須的,但是不參與酰胺鍵形成的反應(yīng)基的可逆的保護(hù)對化學(xué)合成中的兩種反應(yīng)物而言都是必須的。通常用于化學(xué)肽合成的三種常規(guī)的保護(hù)基技術(shù)為芐氧羰基(Z)、叔丁氧羰基(Boc)和9-芴基甲氧羰基(Fmoc)技術(shù)。在各種情況下確定的是在鏈延伸單元的α-氨基上的保護(hù)基。Muller的《有機(jī)化學(xué)的方法》第ⅹⅴ/1卷,第20-906頁,Thieme Verlag,Stuttgart(1974)提供了對氨基酸保護(hù)基的詳細(xì)的綜述。
可以在溶液中、在懸浮液中或者通過類似于Merrifield在《美國化學(xué)協(xié)會雜志》85(1963)2149中所述的方法使用于裝配肽鏈的單元反應(yīng)。在一種方法中,采用Z、Boc或Fmoc保護(hù)基技術(shù),其中Merrifield技術(shù)中的反應(yīng)物之一結(jié)合到不溶的聚合物載體(下文中也稱作樹脂)上來順序地或者通過片段偶聯(lián)裝配成肽。這通常需要采用Boc或Fmoc保護(hù)基技術(shù)在聚合物載體上順序地裝配肽,其間伴隨著不斷延長的肽鏈在C末端共價地結(jié)合到不溶的樹脂顆粒上。這一步驟使得通過過濾可以除去試劑和副產(chǎn)物,從而消除了對重結(jié)晶中間體的需要。
可以將受到保護(hù)的氨基酸連接到任何合適的聚合物上,其中所述聚合物必須不溶于所用的溶劑并且具有允許過濾的穩(wěn)定的物理形式。該聚合物必須含有可以將第一個受到保護(hù)的氨基酸共價地連接于其上的官能團(tuán)。很多的聚合物都適于這一目的,例如纖維素、聚乙烯醇、聚甲基丙烯酸酯、磺化聚苯乙烯、氯甲基化苯乙烯/二乙烯基苯共聚物(Merrifield樹脂)、4-甲基二苯甲胺樹脂(MBHA-樹脂)、苯乙酰氨甲基樹脂(Pam-樹脂)、對-芐氧基-芐基-醇-樹脂、二苯甲基-胺-樹脂(BHA-樹脂)、4-(羥甲基)-苯甲?;跫谆瓨渲?、Breipohl等人的樹脂(《四面體通訊》28(1987)565;由BACHEM提供)、4-(2,4-二甲氧苯基氨甲基)苯氧樹脂(由Novabiochem提供)或o-氯代三苯甲基-樹脂(由Biohellas提供)。
適合于肽合成的溶劑包括在反應(yīng)條件下呈惰性的任何溶劑,例如,水、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基亞砜(DMSO)、乙腈、二氯甲烷(DCM)、1,4-二噁烷、四氫呋喃(THF)、N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)以及這些溶劑的混合物。
可以在合適的惰性有機(jī)溶劑中進(jìn)行在聚合物載體上的肽合成,在所述溶劑中所用的氨基酸衍生物和起始物質(zhì)是可溶的。由于其樹脂溶脹性,特別有用的溶劑例如有DMF、DCM、NMP、乙腈、DMSO及其混合物。
在合成之后,從聚合物載體上移走(通常稱作切割)肽。實現(xiàn)該切割的條件是肽合成的現(xiàn)有技術(shù)中眾所周知的并且該條件部分地取決于所用樹脂的類型。最常用的切割反應(yīng)是酸或鈀催化的,例如酸催化的切割是在液態(tài)無水的氟化氫、無水的三氟甲磺酸、稀釋的或濃縮的三氟醋酸以及醋酸/二氯甲烷/三氟乙醇的混合物中進(jìn)行的。鈀催化的切割可以在有諸如嗎啉之類的弱堿存在下在THF或THF-DCM混合物中進(jìn)行。在這些條件下還切下某些保護(hù)基。
在某些衍生化反應(yīng)之前,也可能必須對肽進(jìn)行部分去保護(hù)。例如,通過將合適的N,N-二烷基氨基酸偶聯(lián)到在溶液中或聚合物載體上的肽、或者通過在含有NaCNBH3和合適的醛的DMF/1%醋酸中使與樹脂結(jié)合的肽發(fā)生還原性烷基化作用或者通過在有醛或酮和Pd/C存在下使溶液中的肽氫化,可以制備出在N-末端二烷基化的肽。
本文所公開的各種非天然存在的氨基酸以及各種非氨基酸部分可以從商業(yè)來源獲得或者可以使用本領(lǐng)域公知的方法從商購可得的物質(zhì)合成出來。例如,根據(jù)E.Wuensch,Huben Weyl的《有機(jī)化學(xué)的方法》第XV/1卷,第306頁,Thieme Verlag,Stuttgart(1974)及其中所引用的文獻(xiàn),可以制備出帶有R1和R2部分的氨基酸結(jié)構(gòu)單元。通過將合適的內(nèi)酰胺橋接的二肽單元(R.Freidinger,《有機(jī)化學(xué)雜志》(1982)104-109)摻入所述肽鏈中,可以制備出具有γ-或δ-內(nèi)酰胺橋的肽。通過將合適的二肽單元(P.Jouin等人《四面體通訊》(1992)第2087-2810頁;P.Wipf等人《四面體通訊》(1992)第907-910頁;W.R.Tully《藥物化學(xué)雜志》(1991)第2060-2065頁;U.Schmidt等人《合成》(1987)第233-236頁)摻入所述肽鏈中,可以制備出包含二肽結(jié)構(gòu)單元的帶有噻唑基、噁唑基、噻唑啉基或噁唑啉基的肽。
下面的步驟意欲說明用于制備通式Ⅰ的化合物的方法。當(dāng)氨基酸適用時,采用公知的三字母代碼縮寫氨基酸。所用的其它的含義為Me2Val=N,N-二甲基纈氨酸、MeVal=N-甲基纈氨酸、TFA=三氟醋酸、Ac=醋酸、Bu=丁基、Et=乙基、Me=甲基、Bzl=芐基、Nal=3-萘基丙氨酸、Cha=3-環(huán)己基丙氨酸、Npg=新戊基甘氨酸、Abu=2-氨基丁?;?、Dab=2,4-二氨基丁?;?、iPr=異丙基。
一般的合成步驟Ⅰ.本發(fā)明通式Ⅰ的化合物或者通過采用如上所述標(biāo)準(zhǔn)的Z-和Boc-方法的傳統(tǒng)的溶液合成或者在由應(yīng)用生物系統(tǒng)公司提供的全自動431A型合成儀上通過標(biāo)準(zhǔn)的固相合成方法來合成。針對Boc和Fmoc保護(hù)基技術(shù)而言,所述設(shè)備采用了不同的合成循環(huán)。
在固相合成的情況下,N,N-二烷基-五肽或六肽的酸從固相載體中釋放出來并進(jìn)一步與溶液中相應(yīng)的C-末端胺偶聯(lián)。BOP-Cl和PyBrop用作用于在N-甲基氨基酸之后偶聯(lián)氨基酸的試劑。反應(yīng)時間相應(yīng)地延長了。對N-末端的還原性烷基化作用而言,將肽-樹脂在N末端去保護(hù),然后使其與溶于DMF/1%醋酸的并添加有3當(dāng)量NaCNBH3的摩爾數(shù)過量了3倍的醛或酮反應(yīng)。在反應(yīng)完成后(陰性Kaiser測試),用水、異丙醇、DMF和二氯甲烷洗滌樹脂數(shù)次。
在溶液合成中,對于在N-甲基氨基酸之后偶聯(lián)氨基酸而言,分別使用Boc-保護(hù)的氨基酸NCAs(N-叔丁氧羰基-氨基酸-N-羧酸酐)、Z-保護(hù)的氨基酸NCAs(N-芐氧羰基-氨基酸-N-羧酸酐)或者使用新戊酰氯作為縮合劑是最為有利的。N-末端的還原性烷基化作用例如可以通過使用NaCNBH3或氫氣、Pd/C使N-末端去保護(hù)的肽或氨基酸與相應(yīng)的醛或酮反應(yīng)來實現(xiàn)。
a)針對Boc保護(hù)基技術(shù)的合成循環(huán)1. 30%三氟醋酸的DCM溶液 1×3分鐘2. 50%三氟醋酸的DCM溶液 1×1分鐘3. DCM洗滌4. 5%二異丙基乙胺的DCM溶液 5×1分鐘5. 5%二異丙基乙胺的NMP溶液 1×1分鐘6. NMP洗滌5×1分鐘7. 加入預(yù)活化的保護(hù)的氨基酸(DCC和1當(dāng)量HOBt的NMP/DCM溶液);肽偶聯(lián)(第一部分) 1×30分鐘
8. 向反應(yīng)混合物中加入DMSO直到它含有20%(體積)的DMSO;肽偶聯(lián)(第二部分) 1×16分鐘9. 向反應(yīng)混合物中加入3.8當(dāng)量的二異丙基乙胺;肽偶聯(lián)(第三部分) 1×7分鐘10.DCM洗滌3×1分鐘11.如果轉(zhuǎn)化不完全的話,重復(fù)偶聯(lián)(返回第6步)12.10%的乙酐、5%二異丙基乙胺的DCM溶液 1×2分鐘13.10%乙酐的DCM溶液 1×4分鐘14.DCM洗滌4×1分鐘15.返回第1步。
BOP-Cl和PyBrop用作用于在N-甲基氨基酸之后偶聯(lián)氨基酸的試劑。反應(yīng)時間相應(yīng)地延長了。在溶液合成中,對這種類型的偶聯(lián)而言,分別使用Boc-保護(hù)的氨基酸NCAs(N-叔丁氧羰基-氨基酸-N-羧酸酐)或Z-保護(hù)的氨基酸NCAs是最為有利的。
b)針對Fmoc保護(hù)基技術(shù)的合成循環(huán)1. DMF洗滌1×1分鐘2. 20%哌啶的DMF溶液 1×4分鐘3. 20%哌啶的DMF溶液 1×16分鐘4. DMF洗滌5×1分鐘5. 加入預(yù)活化的保護(hù)的氨基酸(由1當(dāng)量TBTU和5當(dāng)量DIPEA的DMF溶液活化); 1×61分鐘肽偶聯(lián)6. DMF洗滌3×1分鐘7. 如果轉(zhuǎn)化不完全的話,重復(fù)偶聯(lián)(返回第
5步)8. 10%乙酐的DMF溶液 1×8分鐘9. DMF洗滌3×1分鐘10.返回第2步。
BOP-Cl和PyBrop用作用于在N-甲基氨基酸之后偶聯(lián)氨基酸的試劑。該反應(yīng)的時間相應(yīng)地延長了。
Ⅱ.N-末端的還原性烷基化作用將以上在Ⅰa或Ⅰb中制得的肽-樹脂去掉N-末端的保護(hù)(Ⅰb中的第2-4步或者Ⅰa中的第1-6步),然后使其與溶于DMF/1%醋酸的并添加有3當(dāng)量NaCNBH3的摩爾數(shù)過量了3倍的醛或酮反應(yīng)。在反應(yīng)完成后(陰性Kaiser測試),用水、異丙醇、DMF和二氯甲烷洗滌樹脂數(shù)次。
Ⅲ.如Ⅰa與Ⅱ中得到的肽-樹脂的加工在減壓下干燥肽-樹脂并且將其轉(zhuǎn)移到TEFLON HF裝置(由PENINSULA提供)的反應(yīng)容器中。加入清除劑,例如茴香醚(1ml/g樹脂),并且在含有色氨酸的肽的情況下加入硫醇以除去吲哚甲酰基、例如乙基二硫醇(0.5ml/g樹脂),然后在用液氮冷卻的同時,在氟化氫(10 ml/g樹脂)中縮合。使該混合物加溫至0℃并且在該溫度下攪拌45分鐘。然后在減壓下除去氟化氫,并用醋酸乙酯洗滌剩余物以便除去剩余的清除劑。用30%的醋酸提取肽并進(jìn)行過濾,并將濾液凍干。
Ⅳ.如Ⅰb與Ⅱ中得到的肽-樹脂的加工在減壓下干燥肽-樹脂,然后使其經(jīng)歷取決于氨基酸組成的下列切割步驟之一(Wade,Tregear,Howard Florey Fmoc工場手冊,Melbourne 1985)。
切割條件TFA清除劑反應(yīng)時間1.95%5%的水1.5小時2.95%5%的乙硫醇/茴香 1.5小時醚(1∶3)
將在合適的TFA混合物中的肽-樹脂的懸浮物在室溫下攪拌所述的一段時間,然后過濾掉樹脂并用TFA和DCM洗滌。濃縮濾液和洗液,并且通過加入乙醚使肽沉淀。在冰浴中冷卻后,過濾出沉淀,在30%的醋酸中溶解該沉淀并將其凍干。
Ⅴ.當(dāng)使用o-氯代三苯甲基-樹脂(由Biohellas提供)時,在室溫下攪拌在醋酸/三氟乙醇/二氯甲烷混合物(1∶1∶3)中的肽-樹脂的懸浮物1小時。然后用空吸過濾掉樹脂,并用切割溶液徹底地洗滌。將合并的濾液在真空下濃縮并用水處理。通過過濾或離心取出沉淀的固體,用乙醚洗滌并在減壓下干燥。
Ⅵ.肽的純化和鑒定通過凝膠層析(SEPHADEX G-10,G-15/10%HOAc,SEPHADEXLH2O/MeOH)、中壓層析(固定相HD-SIL C-18,20-45微米,100埃;流動相具有A=0.1%TFA/MeOH、B=0.1%TFA/水的梯度)或者制備HPLC(固定相水δ-Pak C-18,15微米,100埃;流動相具有A=0.1% TFA/MeOH、B=0.1%TFA/水的梯度)進(jìn)行純化。
通過分析HPLC(固定相100 2.1mm VYDAC C-18,51,300埃;流動相用0.1%TFA緩沖的乙腈-水的梯度,40℃)測定得到的產(chǎn)物的純度。
通過氨基酸分析和快原子轟擊質(zhì)譜進(jìn)行鑒定。
具體的合成步驟實施例1A∶N,N-二甲基-Val-Val-N-甲基-Val-Pro-Pro-Val-Phe-NH2使相應(yīng)于批量大小為0.84mmol的1.98g Fmoc-RINK-樹脂(換算為0.46mmol/g)如以上Ⅰb中所述與1.26mmol的以下各物質(zhì)反應(yīng)Fnoc-Phe-OHFmoc-Val-OHFmoc-Pro-OHFmoc-Pro-OH
Fmoc-N-甲基-Val-OHFmoc-Val-OHFmoc-Val-OH以PyBrop作偶聯(lián)劑偶聯(lián)上N-甲基氨基酸之后的氨基酸。在完成了重復(fù)的合成循環(huán)后,肽-樹脂進(jìn)行N-末端的去保護(hù)(Ⅰb中的第2-4步),并進(jìn)一步如Ⅱ中所述使其與甲醛的水溶液反應(yīng),然后在減壓下干燥。將得到的樹脂如Ⅳ中所述進(jìn)行TFA切割。通過凝膠過濾(SEPHADEX-LH-2O)純化粗產(chǎn)物(590mg)。產(chǎn)量為295mg。實施例1A實施例1也可以通過傳統(tǒng)的溶液相方法來制備。在下面的段落中描述了N,N-二甲基-Val-Val-N-甲基-Val-Pro-Pro-Val-Phe-NH2及其有關(guān)的中間體的合成。
a)Z-MeVal-Pro-OMe將66.25 g(250mmol)的Z-MeVal-OH溶解在250ml無水二氯甲烷中。在加入36.41ml(262.5mmol)三乙胺后,將反應(yīng)混合物冷卻到-25℃并加入32.37ml(262.5mmol)的新戊酰氯。在攪拌2.5小時之后,將溶于250ml二氯甲烷并在0℃下用36.41 ml(262.5mmol)三乙胺中和的41.89g(250mmol)的H-Pro-OMe-HCl加入反應(yīng)混合物中。在-25℃下繼續(xù)攪拌2小時并在室溫下過夜。用二氯甲烷稀釋反應(yīng)混合物,并用飽和的NaHCO3水溶液(3X)、水(1X)、5%的檸檬酸(3X)和飽和的NaCl溶液徹底地洗滌。通過硫酸鈉干燥有機(jī)相、將其過濾并蒸發(fā)至干。用石油醚攪拌殘留物(91.24g)過夜并進(jìn)行過濾。得到62.3g產(chǎn)物。
b)H-MeVal-Pro-OMe將48.9g(130mmol)的Z-MeVal-Pro-OMe溶解于490ml甲醇中。在加入10.9ml(130mmol)濃鹽酸和2.43g 10%的鈀/炭后,使反應(yīng)混合物氫化。過濾并蒸發(fā)至干,生產(chǎn)出36.43g的產(chǎn)物。
c)Z-Val-MeVal-Pro-OMe
在40℃下,將18.1g(65mmo1)的H-MeVal-Pro-OMe、21.6 g(78mmol)的Z-Val-N-羧酸酐和22.8ml(130mmol)的二異丙基乙胺在110ml的DMF中攪拌2天。在蒸發(fā)出DMF之后,加入二氯甲烷,并用飽和的NaHCO3水溶液(3X)、水(1X)、5%的檸檬酸(3X)和飽和的NaCl溶液洗滌有機(jī)相。通過硫酸鈉干燥有機(jī)相、將其過濾并蒸發(fā)至干。得到為粘性油狀物的產(chǎn)物(29.3g)。
d)H-Val-MeVal-Pro-OMe將29.3g(61.6 mmol)的Z-Val-MeVal-Pro-OMe溶解于230ml的甲醇中。在加入1.15g 10%的鈀/炭后,使反應(yīng)混合物氫化。
過濾并蒸發(fā)至干,生產(chǎn)出21.96g的產(chǎn)物。
e)Z-Val-Val-MeVal-Pro-OMe將15.29g(61mmol)的Z-Val-OH和21.96g(61mmol)的H-Val-MeVal-Pro-OMe溶解于610ml的二氯甲烷中并冷卻到0℃。在加入8.16ml(73.2mmol)N-甲基嗎啉、2.77g(20.3mmol)HOBt和11.74g(61mmol)EDCI之后,將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜,用二氯甲烷稀釋反應(yīng)混合物并用飽和的NaHCO3水溶液(3X)、水(1X)、5%的檸檬酸(3X)和飽和的NaCl溶液徹底地洗滌。通過硫酸鈉干燥有機(jī)相,過濾并蒸發(fā)至干以生產(chǎn)出31.96g的產(chǎn)物。
f)Z-Val-Val-MeVal-Pro-OH將31.96g(57mmol)的Z-Val-Val-MeVal-Pro-OMe溶解于250ml的甲醇中。加入102.6ml的1N的LiOH溶液,并在室溫下攪拌混合物過夜。在加入500ml水后,用醋酸乙酯洗滌水相三次。
通過硫酸鈉干燥有機(jī)相,過濾并蒸發(fā)至干,生產(chǎn)出30.62g為白色固體的所希望的產(chǎn)物。
g)Z-Val-Val-MeVal-Pro-Pro-Val-Phe-NH2將25g(43.3mmol)的Z-Val-Val-MeVal-Pro-OH和15.59g(43.3mmol)的H-Pro-Val-Phe-NH2懸浮在430ml無水二氯甲烷中。在冷卻到0℃后,加入5.81ml(52mmol)的N-甲基嗎啉、1.97g(15mmol)的HOBt和8.33g(43.3mmol)的EDCI,并在室溫下攪拌該反應(yīng)混合物過夜。蒸發(fā)掉溶劑,將殘留物溶解在640ml的二氯甲烷中,并用飽和的NaHCO3水溶液(4X)、水(1X)、5%的檸檬酸(3X)和飽和的NaCl溶液徹底地洗滌。通過硫酸鈉干燥有機(jī)相,過濾并蒸發(fā)至于以生產(chǎn)出33.04g的產(chǎn)物。在硅膠柱上通過層析法用20%的甲醇/己烷分離粗產(chǎn)物。得到18.32g所希望的產(chǎn)物。
h) N,N-二甲基-Val-Val-MeVal-Pro-Pro-Val-Phe-NH2將18.32g的Z-Val-Val-MeVal-Pro-Pro-Val-Phe-NH2溶解于80ml的甲醇中。在氮氣氣氛下加入O.4g 10%的鈀/炭,并在室溫下使反應(yīng)混合物氫化4小時。在加入6.22ml(81.24mmol)37%的甲醛水溶液后,繼續(xù)氫化5小時。過濾和蒸發(fā)溶劑得到了15.6g的粗產(chǎn)物。通過將所述的肽溶解于水中、調(diào)節(jié)pH為2并用醋酸乙酯萃取水相三次來實現(xiàn)進(jìn)一步的純化。然后將水相調(diào)節(jié)到pH為8-9并用醋酸乙酯萃取四次。用水洗滌有機(jī)相并通過硫酸鈉干燥、過濾并蒸發(fā)以生產(chǎn)出11.3g為白色粉末的純化的產(chǎn)物。通過快原子轟擊質(zhì)譜鑒定該化合物([M+H]+=797)。實施例2AN,N-二甲基-Val-Val-NMe-Val-Pro-{1-[噻唑-(2)-基]-2-苯基}-乙酰胺使相應(yīng)于批量大小為3mmol的4.11g的Fmoc-Pro-對-烷氧基芐基-醇-樹脂(換算為0.73mmol/g)如Ⅰb中所述與4.5mmol的以下各物質(zhì)反應(yīng)Fmoc-N-MeVal-OHFmoc-Val-OHFmoc-Val-OH在這種情況下,隨著反應(yīng)時間的增加使N-甲基氨基酸之后的氨基酸與采用PyBrop或Bop-Cl的雙重偶聯(lián)劑反應(yīng)。在合成結(jié)束后,肽-樹脂進(jìn)行N-末端去保護(hù)(Ⅰb中的第2-4步),并且如Ⅱ中所述使其與甲醛水溶液進(jìn)一步反應(yīng),然后在減壓下干燥。將以這種方式得到的樹脂進(jìn)行如Ⅳ中所述的TFA切割。把粗產(chǎn)物(750mg)直接用于接下來的偶聯(lián)。在室溫下,隨著192微升DIPEA的DMF溶液的加入,使100mg的該化合物與45mg的(S)-2-[1-氨基-2-苯乙基]噻唑以及230mg的PyBop反應(yīng)2天。通過凝膠層析(SEPHADEX LH-20,甲醇)純化反應(yīng)混合物,并合并所述產(chǎn)物的級分。得到83mg的產(chǎn)物。實施例1BMe2Val-Val-MeVal-Pro-Pro-NHCH(CH3)2a)Z-MeVal-Pro-OMe將66.25g(250mmol)的Z-MeVal-OH溶解在250ml無水二氯甲烷中。在加入36.41 ml(262.5mmol)三乙胺后,將反應(yīng)混合物冷卻到-25℃并加入32.27ml(262.5mmol)的新戊酰氯。在攪拌2.5小時之后,將溶于250ml二氯甲烷并在0℃下用36.41ml(262.5mmol)三乙胺中和的41.89g(250mmol)的H-Pro-OMe×HCl加入反應(yīng)混合物中。在-25℃下繼續(xù)攪拌2小時并在室溫下過夜。用二氯甲烷稀釋反應(yīng)混合物,并用飽和的NaHCO3水溶液(3X)、水(1X)、5%的檸檬酸(3X)和飽和的NaCl溶液徹底地洗滌。通過硫酸鈉干燥有機(jī)相、將其過濾并蒸發(fā)至干。用石油醚攪拌殘留物(91.24g)過夜并進(jìn)行過濾。得到62.3g產(chǎn)物。
b)H-MeVal-Pro-OMe將48.9g(130mmol)的Z-MeVal-Pro-OMe溶解于490ml甲醇中。在加入10.9ml(130mmol)濃鹽酸和2.43g 10%的鈀/炭后,使反應(yīng)混合物氫化。過濾并蒸發(fā)至干,生產(chǎn)出36.43g的產(chǎn)物。
c)Z-Val-MeVal-Pro-OMe在40℃下,將18.1g(65mmol)的H-MeVal-Pro-OMe、21.6g(78mmol)的Z-Val-N-羧酸酐和22.8ml(130mmol)的二異丙基乙胺在110ml的DMF中攪拌2天。在蒸發(fā)出DMF后,加入二氯甲烷,并用飽和的NaHCO3水溶液(3X)、水(1X)、5%的檸檬酸(3X)和飽和的NaCl溶液洗滌有機(jī)相。通過硫酸鈉干燥有機(jī)相并蒸發(fā)至干。得到為粘性油狀物的產(chǎn)物(29.3g)。
d)H-Val-MeVal-Pro-OMe將29.3g(61.6mmol)的Z-Val-MeVal-Pro-OMe溶解于230ml的甲醇中。在加入1.15g 10%的鈀/炭后,使反應(yīng)混合物氫化。
過濾并蒸發(fā)至干,生產(chǎn)出21.96g的產(chǎn)物。
e)Z-Val-Val-MeVal-Pro-OMe將15.29g(61mmol)的Z-Val-OH和21.96g(6lmmol)的H-Val-MeVal-Pro-OMe溶解于610ml的二氯甲烷中并冷卻到0℃。在加入8.16ml(73.2mmol)N-甲基嗎啉、2.77g(20.3mmol)HOBt和11.74g(61mmol)EDCI之后,將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜,用二氯甲烷進(jìn)行稀釋并用飽和的NaHCO3水溶液(3X)、水(1X)、5%的檸檬酸(3X)和飽和的NaCl溶液徹底地洗滌。通過硫酸鈉干燥有機(jī)相,過濾并蒸發(fā)至干以生產(chǎn)出31.96g的產(chǎn)物。
f)Z-Val-Val-MeVal-Pro-OH將31.96g(57mmol)的Z-Val-Val-MeVal-Pro-OMe溶解于250ml的甲醇中。加入102.6ml的1N的LiOH溶液,并在室溫下攪拌混合物過夜。在加入500ml水后,用醋酸乙酯洗滌水相三次,在0℃下調(diào)節(jié)其pH為2并用醋酸乙酯萃取三次。通過硫酸鈉干燥有機(jī)相,過濾并蒸發(fā)至干,生產(chǎn)出30.62g為白色固體的所希望的產(chǎn)物。
g)Z-Val-Val-MeVal-Pro-Pro-NHCH(CH3)2將2g(3.35mmol)的Z-Val-Val-MeVal-Pro-OH和0.664g(3.35mmol)的H-Pro-NHCH(CH3)2溶解于34ml無水二氯甲烷中。在冷卻到0℃后,加入1.35ml(12.1mmol)的N-甲基嗎啉、O.114g(0.84mmol)的HOBt和0.645g(3.35mmol)的EDCI,并在室溫下攪拌該反應(yīng)混合物過夜。加入80ml二氯甲烷,并用飽和的NaHCO3水溶液(3X)、水(1X)、5%的檸檬酸(3X)和飽和的NaCl溶液(1X)徹底地洗滌有機(jī)相。通過硫酸鈉干燥有機(jī)相,過濾并蒸發(fā)至干以生產(chǎn)出1.96g的產(chǎn)物,所述產(chǎn)物并不進(jìn)一步地純化便用于接下來的反應(yīng)中。
h)Me2Val-Val-MeVal-Pro-Pro-NHCH(CH3)2將1.96g的Z-Val-Val-MeVal-Pro-Pro-NHCH(CH3)2溶解于11ml的甲醇中。在氮氣氣氛下加入0.054g 10%的Pd/C,并在室溫下使反應(yīng)混合物氫化4小時。在加入0.86ml(11.24mmol)37%的甲醛水溶液和0.281g 10%的Pd/C后,繼續(xù)氫化5小時。
過濾并蒸發(fā)溶劑得到了2.77g的粗產(chǎn)物。通過將所述的肽溶解于水中、調(diào)節(jié)pH為2并用醋酸乙酯萃取水相三次來實現(xiàn)進(jìn)一步的純化。然后將水相調(diào)節(jié)到pH為8-9并用二氯甲烷萃取四次。通過硫酸鈉干燥有機(jī)相、過濾并蒸發(fā)以生產(chǎn)出1.37g為白色泡沫的純化的產(chǎn)物。采用中壓液相層析(10分鐘內(nèi)為10-50%的A;320分鐘內(nèi)為50-90%的A)進(jìn)一步純化該化合物。合并含有所述產(chǎn)物的級分、將其凍干并重新溶解在水中,用1N的LiOH調(diào)節(jié)pH為9。在用二氯甲烷萃取后,通過硫酸鈉干燥有機(jī)相,將其過濾并蒸發(fā)至干。
凍干后生產(chǎn)出500mg的純的產(chǎn)物,而所述產(chǎn)物通過快原子轟擊質(zhì)譜進(jìn)行鑒定([M+H]+=593)。實施例2BMe2Val-Val-MeVal-Pro-Pro-NHC(CH3)3a)Z-Val-Val-MeVal-Pro-Pro-NHC(CH3)3將2g(3.35mmol)的Z-Val-Val-MeVal-Pro-OH和0.692g(3.35mmol)的H-Pro-NHC(CH3)3溶解于34ml無水二氯甲烷中。在冷卻到0℃后,加入1.35ml(12.1mmol)的N-甲基嗎啉、0.114g(0.84mmol)的HOBt和0.645g(3.35mmol)的EDCI,并在室溫下攪拌該反應(yīng)混合物過夜。加入80ml二氯甲烷,并用飽和的NaHCO3水溶液(3X)、水(1X)、5%的檸檬酸(3X)和飽和的NaCl溶液(1X)徹底地洗滌有機(jī)相。通過硫酸鈉干燥有機(jī)相,過濾并蒸發(fā)至干以生產(chǎn)出1.8g的產(chǎn)物,所述產(chǎn)物并不進(jìn)一步地純化便用于接下來的反應(yīng)中。
b)Me2Val-Val-MeVal-Pro-Pro-NHC(CH3)3
將1.8g的Z-Val-Val-MeVal-Pro-Pro-NHC(CH3)3溶解于10ml的甲醇中。在氮氣氣氛下加入0.045g 10%的Pd/C,并在室溫下使反應(yīng)混合物氫化4小時。在加入0.86ml(11.24mmol)37%的甲醛水溶液和0.252g 10%的Pd/C后,繼續(xù)氫化5小時。過濾并蒸發(fā)溶劑得到了1.82g的粗產(chǎn)物。采用中壓液相層析(10分鐘內(nèi)為10-50%的A;320分鐘內(nèi)為50-90%的A)進(jìn)一步純化該化合物。合并含有所述產(chǎn)物的級分、將其凍干并重新溶解在水中,用1N的LiOH調(diào)節(jié)pH為9。在用二氯甲烷萃取后,通過硫酸鈉干燥有機(jī)相并蒸發(fā)至干。凍干后生產(chǎn)出547mg的純的產(chǎn)物,而所述產(chǎn)物通過快原子轟擊質(zhì)譜進(jìn)行鑒定([M+H]+=607)。生物活性的評價體內(nèi)法采用稱作膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎(CIA)的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的標(biāo)準(zhǔn)動物模型(例如參見Banerjee等人,《免疫學(xué)雜志》1422237-2243(1989))來測試圖1中命名為化合物ⅱ的通式Ⅰ的多拉抑制素-15衍生物。CIA是一種有用的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的動物模型,該模型可作為探察發(fā)炎的滑膜炎的病因?qū)W以及調(diào)查潛在新的治療措施的體內(nèi)系統(tǒng)。在本發(fā)明中同樣可以使用另一合適的模型,例如在大鼠中佐劑誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎(例如參見Ward等人,《類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎》(1962)5557-564)。
小鼠中的膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎是由皮內(nèi)注射在完全弗氏佐劑中乳化的小雞Ⅱ型膠原誘導(dǎo)的,其中癥狀的開始通常出現(xiàn)在免疫接種后第26天或附近。
一般說來,似乎提供了抑制類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的可接受水平的任何劑量方案都是合適的。采用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員眾所周知的技術(shù)可以確定給藥的任何可接受的方法。此外,如前所述,可以將通式Ⅰ的多拉抑制素-15衍生物與已知在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的治療中有用的其它藥物聯(lián)合給藥。實施例3膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎-預(yù)防模型在所有的實驗中均使用DBA-1小鼠,該小鼠是對膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎易感的小鼠的一個品系(例如參見《The FASEB》22950(1988))。在第0天,用100μg溶于完全弗氏佐劑的小雞Ⅱ型膠原對小鼠進(jìn)行皮內(nèi)免疫接種。
對三個治療組進(jìn)行評價,并且所述小組由鹽水治療的動物(對照)、地塞米松治療的動物(標(biāo)準(zhǔn)療法)和化合物ⅱ治療的動物組成。在免疫接種后第26天、恰好在癥狀開始前對所有的小組開始治療,并且在免疫接種后第35天時結(jié)束治療。將地塞米松以5mg/kg/天的劑量進(jìn)行腹膜內(nèi)注射,將化合物ⅱ以50mg/kg/天的劑量用鹽水作載體通過管飼法口服給藥,并且將鹽水每天一次進(jìn)行口服給藥以作為對照。平均關(guān)節(jié)炎得分通過每天觀察每只爪子來記錄關(guān)節(jié)炎嚴(yán)重的程度。用0-5的整數(shù)尺度來定量地描述每只爪子中紅斑、腫脹、畸形和關(guān)節(jié)僵硬的水平,其中0=正常、而5=最嚴(yán)重。所有四只爪子的總和表示平均的關(guān)節(jié)炎得分,分值為20則為最大值。在圖2中以圖形的方式描繪出結(jié)果。
結(jié)果表明在治療結(jié)束后6天內(nèi),用化合物ⅱ治療的動物沒有一只具有類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的跡象。但是,地塞米松治療的動物在治療結(jié)束后立即顯示出類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的跡象。實施例4膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎-治療模型在所有的實驗中均使用DBA-1小鼠。在第0天,用100μg小雞Ⅱ型膠原對小鼠進(jìn)行皮內(nèi)免疫接種。癥狀的開始出現(xiàn)在免疫接種后大約第35天。
對三個治療組進(jìn)行評價,并且所述小組由載體治療的動物(對照)、地塞米松治療的動物(標(biāo)準(zhǔn)療法)和化合物ⅱ治療的動物組成。在免疫接種后第48天、當(dāng)所有動物的關(guān)節(jié)炎得分已經(jīng)達(dá)到3-4時對所有的小組開始治療。三個小組中小鼠的平均關(guān)節(jié)炎得分在治療開始時是等同的。將所有的動物治療21天。將地塞米松以5mg/kg/天的劑量進(jìn)行腹膜內(nèi)注射,將化合物ⅱ以50mg/kg/天的劑量用鹽水作載體通過管飼法口服給藥,并且將載體通過管飼法單獨給藥(0.25ml)以作為對照。平均關(guān)節(jié)炎得分通過每天給每只爪子評分來記錄關(guān)節(jié)炎嚴(yán)重的程度。用0-5的整數(shù)尺度來定量地描述紅斑、腫脹、畸形和關(guān)節(jié)僵硬的水平,其中0=正常、而5=最嚴(yán)重。所有四只爪子的總和表示平均的關(guān)節(jié)炎得分,其中分值為20為最大值。在圖3中以圖形的方式描繪出結(jié)果。
結(jié)果表明與對照組相比,用化合物ⅱ治療的動物顯示出在平均關(guān)節(jié)炎得分上的明顯的下降(如Mann-Whitney測試測定的,P值小于0.01-0.05)。組織病理學(xué)的結(jié)果將來自各治療組的五只小鼠在免疫接種后第71天進(jìn)行尸體剖檢,并根據(jù)來自每只小鼠的所有四只爪子的關(guān)節(jié)進(jìn)行組織病理學(xué)研究。將有疾患的關(guān)節(jié)的滑膜炎癥和軟骨的損傷分成0-3個等級。結(jié)果示于圖4中。與載體治療的動物相比,用化合物ⅱ和地塞米松的治療明顯地抑制了滑膜炎和軟骨損傷。實施例5佐劑誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎大鼠-預(yù)防模型在第0天,用1.2mg溶于不完全弗氏佐劑的熱滅活的M.Tuberculosis對雄性路易斯大鼠進(jìn)行皮內(nèi)免疫接種。治療組(10只動物/組)由鹽水治療的動物(對照)、1mg/kg/天的氨甲蝶呤治療的動物(標(biāo)準(zhǔn)療法)以及分別用10、5和2.5mg/kg/天的化合物ⅱ治療的三個小組組成。治療開始于免疫接種的當(dāng)天(第0天)并且每隔一天繼續(xù)一次,共給藥12次。所有的治療都是通過管飼法口服給藥的。在第12、16、19和23天時,通過以類似于實施例3和4的方式確定平均的關(guān)節(jié)炎得分來評價所述的動物。在第23天時終止實驗,并且結(jié)果表明化合物ⅱ以依賴于劑量的方式防止了關(guān)節(jié)炎跡象的出現(xiàn)(發(fā)炎的爪子和四肢)。即用10mg/kg的化合物ⅱ治療的動物沒有一只顯示出疾病的跡象(0/10),而在5mg和2.5mg的劑量下分別有2/10的動物和7/10的動物顯示出疾病的跡象。在對照組中,7/10的動物顯示出疾病的跡象。正如預(yù)計的那樣,氨甲蝶呤預(yù)防了關(guān)節(jié)炎。根據(jù)實施例,已經(jīng)制備出并且可以制備出下列化合物3.Xaa Val Xab Pro Xac4.Xaa Val Xab Pro Xad5.Xaa Val Xab Pro Xae6.Xaa Val Xab Pro Xaf7.Xaa Val Xab Pro Xag8.Xaa Val Xab Pro Xah9.Xaa Val Xab Pro Xai10. Xaa Val Xab Pro Xak1i. Xaa Val Xab Pro Xal12. Xaa Val Xab Pro Xam13. Xaa Val Xab Pro Xan14. Xaa Val Xab Pro Xao15. Xaa Val Xab Pro Xap16. Xaa Val Xab Pro Xaq17. Xaa Val Xab Pro Xar18. Xaa Val Xab Pro Xas19. Xaa Val Xab Pro Xat20. Xaa Val Xab Pro Xau21. Xaa Val Xab Pro Xav22. Xaa Val Xab Pro Xaw23. Xaa Val Xab Pro Xax24. Xaa Val Xab Pro Xay25. Xaa Val Xab Pro Xaz26. Xaa Val Xab Pro Xba27. Xaa Val Xab Pro Xbb28. Xaa Val Xbc Pro Xay29. Xaa Val Xab Pro Xbd30. Xaa Val Xab Pro Xbe31. Xaa Val Xab Pro Xbf32. Xaa Val Xab Pro Xbg33. Xaa Val Xab Pro Xbh34. Xaa Val Xab Pro Xbi
35. Xaa Val Xab Pro Xbk36. Xaa Val Xab Pro Xbl37. Xaa Val Xab Pro Xbm38. Xaa Val Xab Pro Xbn39. Xaa Val Xab Pro Xbo40. Xaa Val Xab Pro Xbp41. Xaa Val Xab Pro Xbq42. Xaa Val Xab Pro Xbr43. Xaa Val Xab Pro Xbs44. Xaa Val Xab Pro Xbt45. Xaa Val Xab Pro Xbu46. Xaa Val Xab Pro Xbv47. Xaa Val Xab Pro Xbw48. Xaa Val Xab Pro Xbx49. Xaa Val Xab Pro Xby50. Xaa Val Xab Pro Xbz51. Xaa Val Xab Pro Xca52. Xaa Val Xab Pro Xcb53. Xaa Val Xab Pro Xcc54. Xaa Val Xab Pro Xcd55. Xaa Val Xab Pro Xce56. Xaa Val Xab Pro Xcf57. Xaa Xdf Xab Pro Xay58. Xaa Val Xab Pro Xch59. Xaa Val Xab Pro Xci60. Xaa Val Xab Pro Xck61. Xaa Val Xab Pro Xcl62. Xaa Val Xab Pro Xcm63. Xaa Val Xab Pro Xcn64. Xaa Val Xab Pro Xco65. Xaa Val Xab Pro Xcp66. Xaa Val Xab Pro Xcq67. Xaa Val Xab Pro Xcr68. Xaa Val Xab Pro Xcs69. Xaa Val Xab Pro Xct
70. Xaa Val Xab Pro Xcu71. Xcw Val Xab Pro Xcv72. Xcx Val Xab Pro Xcv73. Xaa Val Xab Pro Pro Xcy74. Xaa Val Xab Pro Pro Xcz75. Xaa Val Xda Pro Xcv76. Xaa Xdb Xab Pro Xcv77. Xdc Val Xab Pro Xcv78. Xaa Ile Xab Pro Xcv79. Xdd Val Xab Pro Xcv80. Xde Val Xab Pro Xcv81. Xaa Xdf Xab Pro Xcv82. Xaa Val Xab Pro Xcg83. Xaa Val Xab Pro Pro Xdg84. Xaa Val Xab Pro Pro Xdh85. Xaa Val Xab Pro Pro Xdi86. Xaa Val Xab Pro Pro Xdk87. Xaa Val Xdl Pro Xcv88. Xde Val Xab Pro Xay89. Xaa Val Xdl Pro Xay90. Xaa Val Xab Pro Xdm91. Xaa Val Xab Pro Xdn92. Xaa Val Xab Pro Xdo93. Xaa Val Xab Pro Xdp94. Xaa Val Xab Pro Xdq95. Xaa Val Xab Pro Pro Xdr96. Xaa Val Xab Pro Xds97. Xaa Val Xbc Pro Xcv98. Xaa Ile Xab Pro Xay99. Xcw Val Xab Pro Xay100. Xaa Val Xbc Pro Xal101. Xaa Val Xdl Pro Xal102. Xaa Xdf Xab Pro Xal103. Xaa Ile Xab Pro Xal104. Xdd Val Xab Pro Xal
105. Xde Val Xab Pro Xal106. Xcx Val Xab Pro Xcy107. Xcw Val Xab Pro Xal108. Xcx Val Xab Pro Xal109. Xcw Val Xab Pro Xav110. Xcx Val Xab Pro Xav111. Xcw Val Xab Pro Xaw112. Xcx Val Xab Pro Xaw113 Xab Val Xab Pro Xay114. Xab Val Xab Pro Xcv115. Xab Val Xab Pro Xal116. Xab Val Xab Pro Xam117. Xab Val Xab Pro Xan118. Xab Val Xab Pro Xao119. Xab Val Xab Pro Xav120. Xab Val Xab Pro Xaw121. Xab Val Xab Pro Xat122. Xab Val Xab Pro Xau123. Xab Val Xab Pro Xbf124. Xab Val Xab Pro Xbm125. Xab Val Xab Pro Xbn126. Xab Val Xab Pro Xbo127. Xab Val Xab Pro Xch128. Xaa Val Xab Pro Xdt129. Xaa Val Xab Pro Xdu130. Xaa Val Xab Pro Xdv131. Xaa Val Xab Pro Xdw132. Xaa Val Xab Pro Xdx133. Xaa Val Xab Pro Xdy134. Xaa Val Xab Pro Xdz135 Xaa Val Xab Pro Xea136. Xaa Val Xab Pro Xeb137. Xaa Val Xab Pro Xec138. Xaa Val Xab Pro Xed139.Xaa Val Xab Pro Xef
140. Xaa Val Xab Pro Xeg141. Xaa Val Xab Pro Xeh142. Xaa Val Xab Pro Xei143. Xaa Val Xab Pro Xek144. Xaa Val Xab Pro Xel145. Xaa Val Xab Pro Xem146. Xaa Val Xab Pro Xen147. Xaa Val Xab Pro Xeo148. Xaa Val Xab Pro Xep149. Xaa Val Xab Pro Xeq150. Xaa Val Xab Pro Xer151. Xaa Val Xab Pro Xcq152. Xaa Val Xab Pro Pro Val Phe153. Xaa Val Xab Pro Xet Val Phe NH2154. Xaa Val Xer Pro Pro Val Phe NH2155. Xaa Val Xbc Pro Pro Val Phe NH2156. Xaa Ile Xab Pro Pro Val Phe NH2157.Xaa Leu Xab Pro Pro Val Phe NH2158. Xde Val Xab Pro Pro Val Phe NH2159. Xdd Val Xab Pro Pro Val Phe NH2160. Xes Val Xab Pro Pro Val Phe NH2161. Xeu Val Xab Pro Pro Val Phe NH2162. Xaa Val Xab Pro Pro Phe Phe NH2163. Xaa Val Xab Pro Pro Val NH2163. Xaa Val Xab Pro Xev165.Xaa Val Xab Pro Pro NH2166. Xaa Val Xab Pro Pro167. Xaa Val Xab Pro Xew168. Xaa Val Xab Xex169 Xdd Val Xab Pro Pro NH2170. Xaa Xdf Xab Pro Pro NH2171. Xaa Val Xab Pro Xey172. Xaa Val Xab Pro Xez173. Xfa Val Xab Pro Pro Val Phe NH2174. Xaa Val Xab Pro Pro Xfb
175. Xaa Val Xab Pro Xfc176. Xaa Val Xab Pro Xfd177. Xaa Val Xab Pro Xfe178. Xaa Val Xab Pro Xff179. Xaa Val Xab Pro Xfg180. Xaa Val Xab Pro Xfh181. Xaa Val Xab Pro Xfi182. Xaa Val Xab Pro Xfj183. Xaa Val Xdl Pro Pro NH2184. Xaa Val Xfk Pro Pro NH3185. Xaa Val Xfl Pro Xfh186. Xaa Val Xfk Pro Xfh187. Xcx Val Xab Pro Xfh188. Xaa Val Xab Pro Pro Xdf Phe NH2189. Xaa Val Xab Pro Pro Leu Phe NH2190. Xaa Val Xab Pro Pro Ile Phe NH2下面列出了所合成的新化合物的MS-鑒定的實施例實施例快速原子轟擊質(zhì)譜的分析3. 5654. 5795. 5936. 6077. 6218. 63511.60712.60713.62114.64915.63516.63517.63518 63519.621
20.62121.63522.63525.63326.64727.66l31.62332.67133.66734.68135.65536.65537.66938.62139.63541.64942.62143.63344.66745.60746.64747.66848.65549.66950.68551.62952.62553.72155.57958.62361.59762.62163.60964.62565.635
66.59167.71568.68569.68570.59171.60772.62174.70675.57976.57977.57978.60779.60780.60781.60782.63783.69284.70685.70686.70687.60790.63592.65993.61794.63695.678128. 671131. 625139. 625151. 637152. 798153. 810154. 812155. 812156. 812
157. 812258. 812159. 811160. 825161. 88l162. 845163. 649164. 737165. 550166. 55l167. 731168. 550169. 566170. 566171. 635172. 704173. 853174. 740175. 619176. 845177. 649178. 691179. 717180. 641181. 579182. 595183. 566184. 566185. 669186. 656187. 669188. 811189. 812190. 812
在描述通式Ⅰ的化合物中所用的符號具有下列含義XaaN,N-二甲基纈氨酸XabN-甲基纈氨酸
XbcN-甲基-異亮氨酸
Xcc脯氨酸金剛烷基(1)酰胺
XcwN-甲基-N-乙基-纈氨酸XcxN,N-二乙基纈氨酸
XdaN-甲基-2-氨基丁?;鵛db2-氨基丁?;鵛dcN,N-二甲基-2-氨基丁?;鵛ddN,N-二甲基-2-叔丁基甘氨酸XdeN,N-二甲基-異亮氨酸Xdf2-叔丁基甘氨酸
XdlN-甲基-2-叔丁基甘氨酸
XerN-甲基亮氨酸XesN-乙?;璑-甲基纈氨酸Xet2-哌啶酸XeuN,N-二丁基纈氨酸
XfaN,N-二丙基纈氨酸
XfkN-乙基纈氨酸XflN-甲基-3-叔丁基丙氨酸等同的方案本領(lǐng)域普通技術(shù)人員僅僅采用常規(guī)的實驗,便會認(rèn)識到或者能夠確定出許多與本文所述的發(fā)明的具體實施方案等同的方案。這類等同的方案意欲包括在下列權(quán)利要求的范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種用于治療哺乳動物中的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的方法,該方法包括將治療有效量的通式Ⅰ的化合物及其與生理上耐受的酸形成的鹽向所說的哺乳動物給藥R1R2N-CHX-CO-A-B-D-(E)s-(F)t-(G)u-K(Ⅰ)其中R1為烷基、環(huán)烷基、烷基磺?;?、氟代烷基或氨基磺酰基;R2為氫、烷基、氟代烷基或環(huán)烷基;R1-N-R2合起來可以是吡咯烷基或哌啶子基殘基;A 為纈氨?;?、異亮氨酰基、亮氨?;e異亮氨?;?、2,2-二甲基甘氨?;?、2-環(huán)丙基甘氨酰基、2-環(huán)戊基甘氨?;?-叔丁基丙氨?;?-叔丁基甘氨?;?、3-環(huán)己基丙氨酰基、2-乙基甘氨酰基、2-環(huán)己基甘氨酰基、正亮氨?;蛘i氨?;鶜埢籅 為N-烷基-纈氨?;?、-正纈氨?;?、-亮氨?;?、-異亮氨酰基、-2-叔丁基甘氨?;?、-3-叔丁基丙氨酰基、-2-乙基甘氨酰基、-2-環(huán)丙基甘氨酰基、-2-環(huán)戊基甘氨?;?、正亮氨酰基或-2-環(huán)己基甘氨?;鶜埢?;D 為脯氨?;?、高脯氨?;?、羥脯氨?;?、3,4-脫氫脯氨?;?、4-氟代脯氨?;?、3-甲基脯氨?;?、4-甲基脯氨?;?、5-甲基脯氨?;?、氮雜環(huán)丁烷-2-羰基、3,3-二甲基脯氨?;?、4,4-二氟代脯氨酰基、噁唑烷-4-羰基或噻唑烷-4-羰基殘基;E 為脯氨?;?、高脯氨?;⒘u脯氨?;?、3,4-脫氫脯氨?;?、4-氟代脯氨?;?-甲基脯氨?;?-甲基脯氨?;?、5-甲基脯氨?;?、氮雜環(huán)丁烷-2-羰基、3,3-二甲基脯氨?;?,4-二氟代脯氨?;f唑烷-4-羰基或噻唑烷-4-羰基殘基;F和G 獨立地選自由脯氨?;?、高脯氨?;?、羥脯氨?;?、噻唑烷基-4-羰基、1-氨基戊基-1-羰基、纈氨酰基、2-叔丁基甘氨?;?、異亮氨酰基、亮氨?;?、3-環(huán)己基丙氨?;?、苯丙氨?;-甲基苯丙氨?;?、四氫異喹啉基-2-組氨酰基、1-氨基吲哚基-1-羰基、3-吡啶基丙氨?;?、2-環(huán)己基甘氨酰基、正亮氨酰基、正纈氨?;?、新戊基甘氨?;⑸滨;⒏拾滨;?,2-二甲基甘氨?;?、丙氨酰基、β-丙氨?;?-萘基丙氨?;鶜埢M成的組中;X 為氫、烷基、環(huán)烷基、-CH2-環(huán)己基或芳烷基;s,t和u獨立地為0或1;并且K 為羥基、烷氧基、苯氧基、芐氧基或者取代的或未取代的氨基部分。
2.權(quán)利要求1的方法,其中所說的哺乳動物是人。
3.權(quán)利要求2的方法,其中對所述通式Ⅰ的化合物而言,K為具有通式R5-N-R6的取代的氨基部分,其中R5為氫、或羥基、或C1-7烷氧基、或芐氧基、或苯氧基或C1-7直鏈或支鏈烷基(它可以被一個或多個氟原子取代)、或C1-12直鏈或支鏈羥烷基、或C3-10-環(huán)烷基、或芐基(它可以被多達(dá)3個取代基所取代,而所述取代基可以獨立地為CF3、硝基、C1-7烷基磺?;?、C1-4烷氧基、苯氧基、芐氧基、鹵素、C1-4-烷基、氰基、羥基、N(CH3)2、COOMe、COOEt、COOiPr或COONH2);R6為氫、C1-12直鏈或支鏈烷基(它可以被一個或多個氟原子所取代)、或C1-12直鏈或支鏈羥烷基、或C3-10-環(huán)烷基、或-(CH2)v-C3-7-環(huán)烷基(v=0,1,2或3)、或去甲麻黃堿基、或去甲偽麻黃堿基、或喹啉基、或吡唑基、或-CH2-苯并咪唑基、或(1)-金剛烷基或(2)-金剛烷基或-CH2-金剛烷基、或α-甲基-芐基、或α-二甲基芐基、或-(CH2)v-苯基(v=0,1,2或3;它可以被多達(dá)2個取代基所取代,而所述取代基可以獨立地為CF3、硝基、C1-7烷基磺?;1-4烷氧基、苯氧基、芐氧基、鹵素、可以形成環(huán)狀系統(tǒng)的C1-4烷基、氰基、羥基、N(CH3)2、COOMe、COOEt、COOiPr或COONH2)、或-(CH2)m-萘基(m=0或1);或-(CH2)w-二苯甲基(w=0,1或2);或聯(lián)苯基或吡啶甲基或苯并噻唑基或苯并異噻唑基或苯并吡唑基或苯并噁唑基或-(CH2)m-芴基(m=O或1);或嘧啶基或-(CH2)m-2,3-二氫化茚基(m=0或1);或-(CH2CH2O)y-CH3(y=0,1,2,3,4或5)或-(CH2CH2O)y-CH2CH3(y=0,1,2,3,4或5)、或NH-C6H5(它可以被多達(dá)2個取代基所取代,而所述取代基可以獨立地為CF3、硝基、C1-7烷基磺?;1-4烷氧基、鹵素、可以形成環(huán)狀系統(tǒng)的C1-4烷基、氰基、羥基、COOMe、COOEt、COOiPr或COONH2)、或-NCH3-C6H5、或-NH-CH2-C6H5、或-NCH3-CH2-C6H5、或5元雜芳基(它可以被多達(dá)2個取代基所取代,而所述的取代基可以獨立地為CF3、硝基、硫甲基、硫乙基、C3-6-環(huán)烷基、-CH2-COOEt、與雜環(huán)形成二環(huán)系的C3-4-亞烷基)、或苯基、或-CHR7-5元雜芳基(它可以被多達(dá)2個取代基所取代,而所述取代基可以獨立地為CF3、硝基、氰基、鹵素、COOMe、COOEt、COOiPr、CONH2、C1-4-烷基、C1-4-烷氧基、苯基、芐基、萘基、或C1-7-烷基磺酰基[R7=氫、直鏈或支鏈的C1-5烷基、芐基;或R7和R5一起形成基團(tuán)-(CH2)3-或-(CH2)4-])。
4.權(quán)利要求3的方法,其中對所述通式Ⅰ的化合物而言,R1和R2各為甲基或乙基;X為異丙基、仲丁基或叔丁基;s為1;t和u各為0;A為纈氨酰基、2-乙基甘氨酰基、異亮氨?;?-叔丁基甘氨酰基;B為N-甲基纈氨?;?-乙基甘氨?;?、異亮氨?;?-叔丁基甘氨?;?;D為脯氨酰基、4-氟代脯氨?;?、噻唑烷基-4-羰基、或3,4-脫氫脯氨?;籈為脯氨?;?、4-氟代脯氨?;?、噻唑烷基-4-羰基、高脯氨?;?、3,4-脫氫脯氨?;蛄u脯氨?;?;并且K為具有通式R5-N-R6的取代的氨基部分,其中R5為氫或C1-C4烷氧基,且R6為選自由以下組成的一價基團(tuán)的組中的C1-C12直鏈或支鏈烷基-C(CH3)3,又稱作叔丁基;
又稱作1,1-二甲基丙基;
又稱作1-甲基-1-乙基丙基;
又稱作(S)-或(R)-1-甲基-2,2-二甲基-丙基;
又稱作(S)-或(R)-1-乙基-2-甲基丙基;
又稱作1-異丙基-2-甲基-丙基;或-C(CH3)2-CH-(CH3)2,又稱作1,1-二甲基-2-甲基丙基;-CH(CH3)2,又稱作異丙基;-CH(CH3)CH2CH3,又稱作仲丁基[(S)或(R)];或-CH(CH3)CH(CH3)2,又稱作1,2-二甲基丙基。
5.權(quán)利要求4的方法,其中所說的一價基團(tuán)為又稱作叔丁基的-C(CH3)3。
6.權(quán)利要求3的方法,其中對所述通式Ⅰ的化合物而言,R1和R2各為甲基或乙基;X為異丙基、仲丁基或叔丁基;s為1;t和u各為0;A為纈氨?;?-乙基甘氨?;惲涟滨;?-叔丁基甘氨?;籅為N-甲基纈氨?;?、2-乙基甘氨?;?-異亮氨?;?-叔丁基甘氨?;?;D為脯氨?;?、4-氟代脯氨酰基、噻唑烷基-4-羰基或3,4-脫氫脯氨?;?;E為脯氨?;?、4-氟代脯氨酰基、噻唑烷基-4-羰基、高脯氨?;?,4-脫氫脯氨酰基或羥脯氨?;?;并且K為具有通式R5-N-R6的取代的氨基部分,其中R5為氫或C1-C4烷氧基,且R6選自由(CH2)v-苯基(其中v是1)和α,α-二甲基芐基組成的一價基團(tuán)的組中。
7.權(quán)利要求3的方法,其中對所述通式Ⅰ的化合物而言,R1和R2各為甲基或乙基;X為異丙基、仲丁基或叔丁基;s為1;t和u各為0;A為纈氨酰基、2-乙基甘氨酰基、異亮氨?;?-叔丁基甘氨?;?;B為N-甲基纈氨?;?-乙基甘氨?;?-異亮氨?;?-叔丁基甘氨?;籇為脯氨?;?-氟代脯氨?;?、噻唑烷基-4-羰基或3,4-脫氫脯氨?;?;E為脯氨酰基、4-氟代脯氨?;⑧邕蛲榛?-羰基、高脯氨?;?,4-脫氫脯氨酰基或羥脯氨?;?;并且K為具有通式R5-N-R6的取代的氨基部分,其中R5為氫或C1-C4烷氧基,且R6為C1-C12直鏈或支鏈羥烷基。
8.權(quán)利要求7的方法,其中R6為3-羥基-1,1-二甲基丙基。
9.權(quán)利要求3的方法,其中對所述通式Ⅰ的化合物而言,R1和R2各為甲基或乙基;X為異丙基、仲丁基或叔丁基;s為1;t和u各為0;A為纈氨?;?、2-乙基甘氨?;惲涟滨;?-叔丁基甘氨酰基;B為N-甲基纈氨?;?-乙基甘氨酰基、異亮氨?;?-叔丁基甘氨?;?;D為脯氨?;?、4-氟代脯氨?;?、噻唑烷基-4-羰基或3,4-脫氫脯氨?;?;E為脯氨酰基、4-氟代脯氨?;⑧邕蛲榛?-羰基、高脯氨酰基、3,4-脫氫脯氨?;蛄u脯氨酰基;并且K為具有通式R5-N-R6的取代的氨基部分,其中R5為氫或C1-C4烷氧基,且R6為選自由(1)-金剛烷基、(2)-金剛烷基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、1-甲基環(huán)戊基、1-甲基環(huán)己基和[3.3.0]辛-1-基組成的組中的C3-10環(huán)烷基。
10.權(quán)利要求4的方法,其中對所述通式Ⅰ的化合物而言,R1和R2各為甲基;X為異丙基;s為1;t和u各為0;A為纈氨?;籅為N-甲基纈氨?;?;D為脯氨?;籈為脯氨?;?;R5為氫并且R6為叔丁基。
11.權(quán)利要求3的方法,其中對所述通式Ⅰ的化合物而言,R1和R2各為甲基;X為異丙基;s為1;t和u各為0;A為纈氨?;籅為N-甲基纈氨?;?;D為脯氨酰基;E為脯氨酰基;R5為芐基并且R6為氫。
12.一種用于治療哺乳動物中的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的方法,該方法包括將包含下列物質(zhì)的藥物組合物向所說的哺乳動物給藥a)治療有效量的通式Ⅰ的化合物R1R2N-CHX-CO-A-B-D-(E)s-(F)t-(G)u-K(Ⅰ)其中R1為烷基、環(huán)烷基、烷基磺?;?、氟代烷基或氨基磺?;?;R2為氫,烷基、氟代烷基或環(huán)烷基;R1-N-R2合起來可以是吡咯烷基或哌啶子基殘基;A 為纈氨?;?、異亮氨?;?、亮氨酰基、別異亮氨酰基、2,2-二甲基甘氨?;?、2-環(huán)丙基甘氨?;?、2-環(huán)戊基甘氨酰基、3-叔丁基丙氨?;?-叔丁基甘氨?;?-環(huán)己基丙氨?;?-乙基甘氨?;?、2-環(huán)己基甘氨?;?、正亮氨?;蛘i氨酰基殘基;B 為N-烷基-纈氨?;?、-正纈氨?;ⅲ涟滨;?、-異亮氨?;?、-2-叔丁基甘氨?;?、-3-叔丁基丙氨?;ⅲ?-乙基甘氨?;?、-2-環(huán)丙基甘氨?;ⅲ?-環(huán)戊基甘氨?;?、正亮氨?;颍?-環(huán)己基甘氨酰基殘基;D 為脯氨?;⒏吒滨;?、羥脯氨酰基、3,4-脫氫脯氨?;?、4-氟代脯氨酰基、3-甲基脯氨酰基、4-甲基脯氨?;?-甲基脯氨酰基、氮雜環(huán)丁烷-2-羰基、3,3-二甲基脯氨酰基、4,4-二氟代脯氨酰基、噁唑烷-4-羰基或噻唑烷-4-羰基殘基;E 為脯氨?;⒏吒滨;?、羥脯氨?;?、3,4-脫氫脯氨?;?-氟代脯氨?;?-甲基脯氨?;?、4-甲基脯氨?;?-甲基脯氨?;?、氮雜環(huán)丁烷-2-羰基、3,3-二甲基脯氨酰基、4,4-二氟代脯氨?;?、噁唑烷-4-羰基或噻唑烷-4-羰基殘基;F和G獨立地選自由脯氨?;⒏吒滨;?、羥脯氨?;?、噻唑烷基-4-羰基、1-氨基戊基-1-羰基、纈氨?;?、2-叔丁基甘氨酰基、異亮氨酰基、亮氨酰基、3-環(huán)己基丙氨?;?、苯丙氨酰基、N-甲基苯丙氨?;?、四氫異喹啉基-2-組氨酰基、1-氨基吲哚基-1-羰基、3-吡啶基丙氨?;?、2-環(huán)己基甘氨?;?、正亮氨酰基、正纈氨酰基、新戊基甘氨?;⑸滨;?、甘氨酰基、2,2-二甲基甘氨?;?、丙氨?;?、β-丙氨?;?-萘基丙氨酰基殘基所組成的組中;X 為氫、烷基、環(huán)烷基、-CH2-環(huán)己基或芳烷基;s,t和u獨立地為0或1;并且K 為羥基、烷氧基、苯氧基、芐氧基或者取代的或未取代的氨基部分;及其與生理上耐受的酸形成的鹽;以及b)治療有效量的第二種抗關(guān)節(jié)炎藥,所述藥物選自由非甾類抗炎劑、有機(jī)金的衍生物、D-青霉胺、4-氨基喹啉、硫唑嘌呤、氨甲蝶呤、環(huán)孢菌素、血管生成抑制劑、抗T細(xì)胞的單克隆抗體、抗粘著分子的單克隆抗體、抗細(xì)胞因子或生長因子的單克隆抗體、TNFR-IgG、IL-1受體拮抗劑和ICE抑制劑組成的組中。
13.通式Ⅰ的化合物及其與生理上耐受的酸形成的鹽用于制備治療哺乳動物中的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物的用途,其中通式Ⅰ的化合物為R1R2N-CHX-CO-A-B-D-(E)s-(F)t-(G)u-K(Ⅰ)其中R1為烷基、環(huán)烷基、烷基磺?;?、氟代烷基或氨基磺?;?;R2為氫、烷基、氟代烷基或環(huán)烷基;R1-N-R2合起來可以是吡咯烷基或哌啶子基殘基;A 為纈氨?;?、異亮氨?;?、亮氨酰基、別異亮氨?;?、2,2-二甲基甘氨?;?-環(huán)丙基甘氨?;?、2-環(huán)戊基甘氨?;?、3-叔丁基丙氨?;?、2-叔丁基甘氨?;?、3-環(huán)己基丙氨?;?-乙基甘氨?;?、2-環(huán)己基甘氨?;⒄涟滨;蛘i氨酰基殘基;B 為N-烷基-纈氨?;?、-正纈氨酰基、-亮氨酰基、-異亮氨?;?、-2-叔丁基甘氨酰基、-3-叔丁基丙氨?;ⅲ?-乙基甘氨?;?、-2-環(huán)丙基甘氨酰基、-2-環(huán)戊基甘氨?;?、正亮氨?;颍?-環(huán)己基甘氨?;鶜埢籇 為脯氨?;⒏吒滨;?、羥脯氨酰基、3,4-脫氫脯氨?;?、4-氟代脯氨酰基、3-甲基脯氨?;?、4-甲基脯氨?;?-甲基脯氨?;⒌s環(huán)丁烷-2-羰基、3,3-二甲基脯氨?;?,4-二氟代脯氨酰基、噁唑烷-4-羰基或噻唑烷-4-羰基殘基;E 為脯氨?;?、高脯氨?;⒘u脯氨?;?,4-脫氫脯氨酰基、4-氟代脯氨酰基、3-甲基脯氨?;?-甲基脯氨?;?-甲基脯氨?;?、氮雜環(huán)丁烷-2-羰基、3,3-二甲基脯氨酰基、4,4-二氟代脯氨酰基、噁唑烷-4-羰基或噻唑烷-4-羰基殘基;F和G獨立地選自由脯氨?;⒏吒滨;⒘u脯氨?;?、噻唑烷基-4-羰基、1-氨基戊基-1-羰基、纈氨?;?-叔丁基甘氨?;?、異亮氨酰基、亮氨?;?、3-環(huán)己基丙氨酰基、苯丙氨酰基、N-甲基苯丙氨酰基、四氫異喹啉基-2-組氨酰基、1-氨基吲哚基-1-羰基、3-吡啶基丙氨?;?、2-環(huán)己基甘氨?;?、正亮氨?;⒄i氨?;?、新戊基甘氨?;⑸滨;?、甘氨?;?、2,2-二甲基甘氨?;?、丙氨?;?、β-丙氨?;?-萘基丙氨?;鶜埢M成的組中;X 為氫、烷基、環(huán)烷基、-CH2-環(huán)己基或芳烷基;s,t和u獨立地為0或1;并且K 為羥基、烷氧基、苯氧基、芐氧基或者取代的或未取代的氨基部分。
14.一種用于制備治療哺乳動物中的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的治療組合物的方法,其特征在于把權(quán)利要求13中所限定的通式Ⅰ的化合物用作所說組合物的基本成分。
15.權(quán)利要求13的方法或權(quán)利要求14的方法,其中所說的哺乳動物是人。
16.權(quán)利要求13-15之任一的發(fā)明,其中對所述通式Ⅰ的化合物而言,K為具有通式R5-N-R6的取代的氨基部分,其中R5為氫、或羥基、或C1-7烷氧基、或芐氧基、或苯氧基或C1-7直鏈或支鏈烷基(它可以被一個或多個氟原子取代)、或C1-12直鏈或支鏈羥烷基、或C3-10-環(huán)烷基、或芐基(它可以被多達(dá)3個取代基所取代,而所述取代基可以獨立地為CF3、硝基、C1-7烷基磺酰基、C1-4烷氧基、苯氧基、芐氧基、鹵素、C1-4-烷基、氰基、羥基、N(CH3)2、COOMe、COOEt、COOiPr或COONH2);R6為氫、C1-12直鏈或支鏈烷基(它可以被一個或多個氟原子所取代)、或C1-12直鏈或支鏈羥烷基、或C3-10-環(huán)烷基、或-(CH2)v-C3-7-環(huán)烷基(v=0,1,2或3)、或去甲麻黃堿基、或去甲偽麻黃堿基、或喹啉基、或吡唑基、或-CH2-苯并咪唑基、或(1)-金剛烷基或(2)-金剛烷基或-CH2-金剛烷基、或α-甲基-芐基、或α-二甲基芐基、或-(CH2)v-苯基(v=0,1,2或3;它可以被多達(dá)2個取代基所取代,而所述取代基可以獨立地為CF3、硝基、C1-7烷基磺酰基、C1-4烷氧基、苯氧基、芐氧基、鹵素、可以形成環(huán)狀系統(tǒng)的C1-4-烷基、氰基、羥基、N(CH3)2、COOMe、COOEt、COOiPr或COONH2)、或-(CH2)m-萘基(m=0或1);或-(CH2)w-二苯甲基(w=0,1或2);或聯(lián)苯基或吡啶甲基或苯并噻唑基或苯并異噻唑基或苯并吡唑基或苯并噁唑基或-(CH2)m-芴基(m=0或1);或嘧啶基或-(CH2)m-2,3-二氫化茚基(m=0或1);或-(CH2CH2O)y-CH3(y=0,1,2,3,4或5)或-(CH2CH2O)y-CH2CH3(y=0,1,2,3,4或5)、或NH-C6H5(它可以被多達(dá)2個取代基所取代,而所述取代基可以獨立地為CF3、硝基、C1-7烷基磺?;?、C1-4烷氧基、鹵素、可以形成環(huán)狀系統(tǒng)的C1-4烷基、氰基、羥基、COOMe、COOEt、COOiPr或COONH2)、或-NCH3-C6H5、或-NH-CH2-C6H5、或-NCH3-CH2-C6H5、或5元雜芳基(它可以被多達(dá)2個取代基所取代,而所述的取代基可以獨立地為CF3、硝基、硫甲基、硫乙基、C3-6-環(huán)烷基、-CH2-COOEt、與雜環(huán)形成二環(huán)系的C3-4-亞烷基)、或苯基、或-CHR7-5元雜芳基(它可以被多達(dá)2個取代基所取代,而所述取代基可以獨立地為CF3、硝基、氰基、鹵素、COOMe、COOEt、COOiPr、CONH2、C1-4-烷基、C1-4-烷氧基、苯基、芐基、萘基、或C1-7-烷基磺?;鵞R7=氫、直鏈或支鏈的C1-5烷基、芐基;或R7和R5一起形成基團(tuán)-(CH2)3-或-(CH2)4-])。
17.權(quán)利要求16的發(fā)明,其中對所述通式Ⅰ的化合物而言,R1和R2各為甲基或乙基;X為異丙基、仲丁基或叔丁基;s為1;t和u各為0;A為纈氨酰基、2-乙基甘氨?;?、異亮氨?;?-叔丁基甘氨?;?;B為N-甲基纈氨?;?、2-乙基甘氨?;惲涟滨;?-叔丁基甘氨酰基;D為脯氨?;?、4-氟代脯氨?;⑧邕蛲榛?-羰基、或3,4-脫氫脯氨?;籈為脯氨?;?-氟代脯氨?;?、噻唑烷基-4-羰基、高脯氨酰基、3,4-脫氫脯氨酰基或羥脯氨?;?;并且K為具有通式R5-N-R6的取代的氨基部分,其中R5為氫或C1-C4烷氧基,且R6為選自由以下組成的一價基團(tuán)的組中的C1-C12直鏈或支鏈烷基-C(CH3)3,又稱作叔丁基;
又稱作1,1-二甲基丙基;
又稱作1-甲基-1-乙基丙基;
又稱作(S)-或(R)-1-甲基-2,2-二甲基-丙基;
又稱作(S)-或(R)-1-乙基-2-甲基丙基;
又稱作1-異丙基-2-甲基-丙基;或-C(CH3)2-CH-(CH3)2,又稱作1,1-二甲基-2-甲基丙基;-CH(CH3)2,又稱作異丙基;-CH(CH3)CH2CH3,又稱作仲丁基[(S)或(R)];或-CH(CH3)CH(CH3)2,又稱作1,2-二甲基丙基。
18.權(quán)利要求17的發(fā)明,其中所說的一價基團(tuán)為又稱作叔丁基的-C(CH3)3。
19.權(quán)利要求16的發(fā)明,其中對所述通式Ⅰ的化合物而言,R1和R2各為甲基或乙基;X為異丙基、仲丁基或叔丁基;s為1;t和u各為0;A為纈氨?;?-乙基甘氨?;?、異亮氨?;?-叔丁基甘氨?;?;B為N-甲基纈氨?;?-乙基甘氨?;?、1-異亮氨酰基或2-叔丁基甘氨?;籇為脯氨?;?、4-氟代脯氨酰基、噻唑烷基-4-羰基或3,4-脫氫脯氨?;籈為脯氨?;?-氟代脯氨?;?、噻唑烷基-4-羰基、高脯氨?;?、3,4-脫氫脯氨?;蛄u脯氨?;徊⑶襅為具有通式R5-N-R6的取代的氨基部分,其中R5為氫或C1-C4烷氧基,且R6選自由(CH2)v-苯基(其中v是1)和α,α-二甲基芐基組成的一價基團(tuán)的組中。
20.權(quán)利要求16的發(fā)明,其中對所述通式Ⅰ的化合物而言,R1和R2各為甲基或乙基;X為異丙基、仲丁基或叔丁基;s為1;t和u各為0;A為纈氨?;?、2-乙基甘氨?;?、異亮氨?;?-叔丁基甘氨?;籅為N-甲基纈氨?;?、2-乙基甘氨?;?、1-異亮氨酰基或2-叔丁基甘氨?;?;D為脯氨?;?、4-氟代脯氨?;?、噻唑烷基-4-羰基或3,4-脫氫脯氨酰基;E為脯氨?;?、4-氟代脯氨?;?、噻唑烷基-4-羰基、高脯氨?;?、3,4-脫氫脯氨?;蛄u脯氨酰基;并且K為具有通式R5-N-R6的取代的氨基部分,其中R5為氫或C1-C4烷氧基,且R6為C1-C12直鏈或支鏈羥烷基。
21.權(quán)利要求20的發(fā)明,其中R6為3-羥基-1,1-二甲基丙基。
22.權(quán)利要求16的發(fā)明,其中對所述通式Ⅰ的化合物而言,R1和R2各為甲基或乙基;X為異丙基、仲丁基或叔丁基;s為1;t和u各為0;A為纈氨?;?、2-乙基甘氨?;惲涟滨;?-叔丁基甘氨?;籅為N-甲基纈氨?;?-乙基甘氨?;惲涟滨;?-叔丁基甘氨酰基;D為脯氨酰基、4-氟代脯氨?;?、噻唑烷基-4-羰基或3,4-脫氫脯氨?;?;E為脯氨?;?、4-氟代脯氨?;?、噻唑烷基-4-羰基、高脯氨?;?,4-脫氫脯氨?;蛄u脯氨酰基;并且K為具有通式R5-N-R6的取代的氨基部分,其中R5為氫或C1-C4烷氧基,且R6為選自由(1)-金剛烷基、(2)-金剛烷基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、1-甲基環(huán)戊基、1-甲基環(huán)己基和[3.3.0]辛-1-基組成的組中的C3-10環(huán)烷基。
23.權(quán)利要求17的發(fā)明,其中對所述通式Ⅰ的化合物而言,R1和R2各為甲基;X為異丙基;s為1;t和u各為0;A為纈氨?;?;B為N-甲基纈氨酰基;D為脯氨?;?;E為脯氨酰基;R5為氫并且R6為叔丁基。
24.權(quán)利要求17的發(fā)明,其中對所述通式Ⅰ的化合物而言,R1和R2各為甲基;X為異丙基;s為1;t和u各為0;A為纈氨?;籅為N-甲基纈氨?;?;D為脯氨?;籈為脯氨?;?;R5為芐基并且R6為氫。
25.一種藥物組合物,所述組合物包括a)治療有效量的通式Ⅰ的化合物R1R2N-CHX-CO-A-B-D-(E)s-(F)t-(G)u-K(Ⅰ)其中R1為烷基、環(huán)烷基、烷基磺?;?、氟代烷基或氨基磺酰基;R2為氫、烷基、氟代烷基或環(huán)烷基;R1-N-R2合起來可以是吡咯烷基或哌啶子基殘基;A 為纈氨?;?、異亮氨?;?、亮氨酰基、別異亮氨?;?,2-二甲基甘氨酰基、2-環(huán)丙基甘氨酰基、2-環(huán)戊基甘氨酰基、3-叔丁基丙氨酰基、2-叔丁基甘氨酰基、3-環(huán)己基丙氨酰基、2-乙基甘氨酰基、2-環(huán)己基甘氨酰基、正亮氨?;蛘i氨酰基殘基;B 為N-烷基-纈氨?;?、-正纈氨?;ⅲ涟滨;ⅲ惲涟滨;?、-2-叔丁基甘氨酰基、-3-叔丁基丙氨?;?、-2-乙基甘氨?;ⅲ?-環(huán)丙基甘氨?;?、-2-環(huán)戊基甘氨酰基、正亮氨?;颍?-環(huán)己基甘氨?;鶜埢?;D 為脯氨?;⒏吒滨;⒘u脯氨?;?,4-脫氫脯氨?;?-氟代脯氨?;?-甲基脯氨?;?-甲基脯氨?;?-甲基脯氨?;?、氮雜環(huán)丁烷-2-羰基、3,3-二甲基脯氨?;?、4,4-二氟代脯氨酰基、噁唑烷-4-羰基或噻唑烷-4-羰基殘基;E 為脯氨?;⒏吒滨;⒘u脯氨?;?、3,4-脫氫脯氨酰基、4-氟代脯氨?;?、3-甲基脯氨?;?-甲基脯氨?;?、5-甲基脯氨酰基、氮雜環(huán)丁烷-2-羰基、3,3-二甲基脯氨?;?、4,4-二氟代脯氨?;?、噁唑烷-4-羰基或噻唑烷-4-羰基殘基;F和G 獨立地選自由脯氨?;?、高脯氨?;?、羥脯氨?;?、噻唑烷基-4-羰基、1-氨基戊基-1-羰基、纈氨?;?、2-叔丁基甘氨?;?、異亮氨?;⒘涟滨;?、3-環(huán)己基丙氨酰基、苯丙氨酰基、N-甲基苯丙氨酰基、四氫異喹啉基-2-組氨?;?、1-氨基吲哚基-1-羰基、3-吡啶基丙氨酰基、2-環(huán)己基甘氨?;?、正亮氨?;?、正纈氨酰基、新戊基甘氨酰基、色氨?;?、甘氨?;?、2,2-二甲基甘氨?;?、丙氨酰基、β-丙氨?;?-萘基丙氨?;鶜埢M成的組中;X 為氫、烷基、環(huán)烷基、-CH2-環(huán)己基或芳烷基;s,t和u獨立地為0或1;并且K 為羥基、烷氧基、苯氧基、芐氧基或者取代的或未取代的氨基部分;及其與生理上耐受的酸形成的鹽;以及b)治療有效量的第二種抗關(guān)節(jié)炎藥,所述藥物選自由非甾類抗炎劑、有機(jī)金的衍生物、D-青霉胺、4-氨基喹啉、硫唑嘌呤、氨甲蝶呤、環(huán)孢菌素、血管生成抑制劑、抗T細(xì)胞的單克隆抗體、抗粘著分子的單克隆抗體、抗細(xì)胞因子或生長因子的單克隆抗體、TNFR-IgG、IL-1受體拮抗劑和ICE抑制劑組成的組中。
26.權(quán)利要求25的組合物,其中所述的化合物具有如權(quán)利要求14-24之任一所限定的通式。
27.權(quán)利要求25或26的組合物在治療或預(yù)防中的應(yīng)用,例如在治療哺乳動物(例如人)中的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供了用于在被試者中治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的組合物和方法,其中如本文所定義的一種或多種通式(Ⅰ)的化合物單獨地或者與一種或多種其它的抗關(guān)節(jié)炎藥物聯(lián)合提供了對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的抑制。
文檔編號A61P19/02GK1278734SQ98811034
公開日2001年1月3日 申請日期1998年9月24日 優(yōu)先權(quán)日1997年10月6日
發(fā)明者T·巴爾洛薩里, S·巴耐爾杰, A·豪普特 申請人:巴斯福股份公司